CN116327946A - Prrx1在制备糖尿病肾病防治药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种PRRX1在制备糖尿病肾病防治药物中的应用，证实了PRRX1在DN肾小管细胞EMT及肾脏纤维化中的重要作用，而下调PRRX1可明显改善肾小管EMT，抑制肾脏纤维化。因此，PRRX1可以作为分子靶点用于制备防治DN的药物，为DN防治药物的研发提供了新的思路。

Description

PRRX1在制备糖尿病肾病防治药物中的应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种PRRX1在制备糖尿病肾病防治药物中的应用。
背景技术
近年来，随着糖尿病患者人数的增加，糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，DN)的患病人数也逐年上升，糖尿病肾病作为糖尿病严重的慢性并发症，是引起终末期肾病(End-stage renal disease，ESRD)的重要原因。有研究报道，DN已经成为西方发达国家终末期肾病及肾脏替代治疗的首要原因，成为我国继发性肾小球疾病后的第二大原因，其导致患者的死亡及伤残，严重威胁着人民的身体健康。因此，研究糖尿病肾病的发生发展，探寻能够抑制或延缓糖尿病肾病病理进程的作用靶点意义重大。
PRRX1是同源异型框蛋白家族的一员，定位于细胞核内。Prrx1是一种高度保守的同源异型框基因转录因子，通过同源异型结构域的螺旋结构与DNA结合，从而影响基因的激活或抑制，参与细胞分化以及组织器官的发育。近年来研究表明，转录因子在细胞增殖和分化，细胞凋亡和炎症等许多生理和病理过程中发挥重要作用，成为研究的热点。越来越多的研究证实转录因子在DN的发生发展中发挥了关键作用，例如，转录因子YY1(Yin Yang 1，YY1)在高糖情况下表达升高，促进肾小管上皮细胞转分化造成肾小管纤维化；转录因子ATF4(Activated transcription factor，ATF4)可通过抑制细胞自噬进而导致肾脏纤维化。因此，糖尿病肾病肾损伤相关的转录对于制备相关防治药物具有重要意义。对DN的早期诊断、分子靶向药物的研发，治疗手段的改善，患者生存率的提高有着深远的意义。
发明内容
本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种PRRX1在制备糖尿病肾病防治药物中的应用，例如，作为药物靶点在制备抗糖尿病肾病防治药物中的应用。
本发明的第二个目的是提供PRRX1敲低腺相关病毒在制备糖尿病肾病防治药物中的应用。
本发明的第三个目的是提供一种诊断试剂，该诊断试剂以上述PRRX1敲低腺相关病毒为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的载体。
本发明的技术方案如下：
PRRX1在制备糖尿病肾病防治药物中的应用，PRRX1的序列为SEQ ID NO.1，具体如下所示：ATGGCGGAGC CGAGCGGCTC GCCCGTGCAC GTCCAGCTTC
CCCAGCAGGC GGCCCCGGTG ACAGCGGCGG CGGCGGCGGC CCCGGCGGCC GCGACAGCAGCGCCGGCCCC GGCAGCTCCC GCGGCCCCGG CCCCGGCCCC GGCCCCGGCG GCACAGGCTG TCGGCTGGCCCATCTGCAGG GACGCGTACG AGCTGCAGGA GGTTATCGGC AGTGGAGCTA CTGCTGTGGT TCAGGCAGCCCTATGCAAAC CCAGGCAAGA ACGTGTAGCA ATAAAACGGA TCAACTTGGA AAAATGCCAG ACCAGTATGGATGAACTATT AAAAGAAATT CAAGCCATGA GTCAGTGCAG CCATCCCAAC GTAGTGACCT ATTACACCTCTTTTGTGGTC AAAGATGAAC TTTGGCTGGT CATGAAATTA CTAAGTGGAG GTTCAATGTT GGATATCATAAAATACATTG TCAACCGAGG AGAACACAAG AATGGAGTTC TGGAAGAGGC AATAATAGCA ACAATTCTTAAAGAGGTTTT GGAAGGCTTA GACTATCTAC ACAGAAACGG TCAGATTCAC AGGGATTTGA AAGCTGGTAATATTCTTCTG GGTGAGGATG GTTCAGTACA AATAGCAGAT TTTGGGGTAA GTGCGTTCCT AGCAACAGGGGGTGATGTTA CCCGAAATAA AGTAAGAAAA ACATTCGTTG GCACCCCATG TTGGATGGCT CCTGAAGTCATGGAACAGGT GAGAGGCTAT GACTTCAAGG CTGACATGTG GAGTTTTGGA ATAACTGCCA TTGAATTAGCAACAGGAGCA GCGCCTTATC ACAAATATCC TCCCATGAAA GTGTTAATGT TGACTTTGCA AAATGATCCACCCACTTTGG AAACAGGGGT AGAGGATAAA GAAATGATGA AAAAGTACGG CAAGTCCTTT AGAAAATTACTTTCACTGTG TCTTCAGAAA GATCCTTCCA AAAGGCCCAC AGCAGCAGAA CTTTTAAAAT GCAAATTCTTCCAGAAAGCC AAGAACAGAG AGTACCTGAT TGAGAAGCTG CTTACAAGAA CACCAGACAT AGCCCAAAGAGCCAAAAAGG TAAGAAGAGT TCCTGGGTCA AGTGGTCACC TTCATAAAAC CGAAGACGGG GACTGGGAGTGGAGTGACGA CGAGATGGAT GAGAAGAGCG AAGAAGGGAA AGCAGCTTTT TCTCAGGAAA AGTCACGAAGAGTAAAAGAA GAAAATCCAG AGATTGCAGT GAGTGCCAGC ACCATCCCCG AACAAATACA GTCCCTCTCTGTGCACGACT CTCAGGGCCC ACCCAATGCT AATGAAGACT ACAGAGAAGC TTCTTCTTGT GCCGTGAACCTCGTTTTGAG ATTAAGAAAC TCCAGAAAGG AACTTAATGA CATACGATTT GAGTTTACTC CAGGAAGAGATACAGCAGAT GGTGTATCTC AGGAGCTCTT CTCTGCTGGC TTGGTGGATG GTCACGATGT AGTTATAGTGGCTGCTAATT TACAGAAGAT TGTAGATGAT CCCAAAGCTT TAAAAACATT GACATTTAAG TTGGCTTCTGGCTGTGATGG GTCGGAGATT CCTGATGAAG TGAAGCTGAT TGGGTTTGCT CAGTTGAGTG TCAGC。
在一种优选方案中，PRRX1作为药物靶点在制备抗糖尿病肾病防治药物中的应用。
PRRX1用于制备糖尿病肾病防治药物时，药物可以制成固体制剂或者液体制剂。进一步地，在本发明提供的技术方案的基础上，药物可以制成注射剂、口服液、颗粒剂、粉剂、片剂或胶囊剂。
在一种优选方案中，PRRX1以腺相关病毒(AAV)作为载体，制备PRRX1敲低腺相关病毒(pAAV-U6-shRNA-PRRX1-CMV bGlobin-eGFP-3Flag，简称为pAAV-PRRX1)。
本发明还提供PRRX1敲低腺相关病毒在制备糖尿病肾病防治药物中的应用。在一种优选方案中，本发明提及的PRRX1敲低腺相关病毒(pAAV-U6-shRNA-PRRX1-CMV bGlobin-eGFP-3Flag，简称为pAAV-PRRX1)，制备方法包括如下步骤：
1)质粒构建：①载体线性化：以质粒PT-2743(pAAV-U6-shRNA-PRRX1-CMVbGlobin-eGFP-3Flag)为骨架进行改造，采用BsmB I酶切，获得线性化的载体片段。②目的片段获取：将基因合成质粒pUC57-2733用BsmBI酶切，获得目的基因PRRX1。③骨架和目的基因连接：将线性化载体与片段混合，在T4连接酶作用下，实现片段与载体的连接。④转化大肠杆菌Trans1-T1，挑取单克隆，并通过PCR检测、酶切和测序鉴定出阳性克隆。
2)腺相关病毒包装：将Lentity-Easy Pacaging Mix和GFP Control Plasmid(或PRRX1腺相关病毒载体质粒)共转染AAV293包装细胞中，包装腺相关病毒，扩增收集病毒，采用超速离心的浓缩纯合发生得到高浓度的腺相关病毒保存液，测定病毒滴度；将空载体和腺相关病毒载体按照上述步骤共转染AAV293细胞，包装阴性对照腺相关病毒。
本发明通过qRT-PCR、Western Blot及免疫学方法验证。结果发现：PRRX1在糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达明显升高，表明PRRX1上调与DN的形成有关。在体外实验中，在人源肾小管上皮细胞转染PRRX1过表达病毒，结果发现：上调PRRX1诱导肾小管EMT过程。在肾小管上皮细胞敲低PRRX1，结果发现：敲低PRRX1可改善高糖诱导的EMT过程。进一步地，在小鼠肾脏特异性转染PRRX1过表达病毒，结果发现：PRRX1异常高表达可促进肾脏纤维化。接下来，又在糖尿病肾病小鼠肾脏特异性敲低PRRX1，结果发现：敲低PRRX1可抑制糖尿病肾病小鼠的肾脏纤维化过程。从而从正反两方面明确PRRX1在DN肾小管细胞EMT及肾脏纤维化过程中的作用，为DN防治药物的研发提供了新的思路。
本发明还提供一种诊断试剂，该诊断试剂以上述PRRX1敲低腺相关病毒为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的载体。其中，药学上可接受的辅料在整个制剂技术发展过程中起到关键的作用，许多制剂中辅料占到大部分，因而很大程度上辅料的性质决定了制剂的性质。优良的辅料可以增强主药的稳定性，延长药剂的有效期；可以调控主药在体内外的释放速度；可以改变药物在体内的吸收，增加生物利用度，对具体的辅料类型不作限定。
采用本发明的技术方案，优势如下:
本发明证实了PRRX1在DN肾小管细胞EMT及肾脏纤维化中的重要作用，而下调PRRX1可明显改善肾小管EMT，抑制肾脏纤维化。因此，PRRX1可以作为分子靶点用于制备防治DN的药物，为DN防治药物的研发提供了新的思路。
附图说明
图1是PRRX1过表达对正常HK-2细胞EMT的影响；其中，图1中(a)为Western blot检测HK-2细胞中EMT指标的表达情况；图1中(b)为qPCR检测HK-2细胞中EMT相关指标的相对mRNA水平；图1中(c)为为免荧光检测细胞中Vimentin、E-cadherin的表达情况；
图2是PRRX1敲低对高糖诱导的HK-2细胞EMT的影响；其中，图2中(a)为Westernblot检测HK-2细胞中EMT指标的表达情况；图2中(b)为qPCR检测HK-2细胞中EMT相关指标的相对mRNA水平；图2中(c)为免荧光检测细胞中Vimentin、E-cadherin的表达情况；NG：正常组(5.56mmol/L)、OV：正常载体对照组(NG+Veh)、OE：PRRX1过表达组(NG+PRRX1-OE)、HG：高糖组(30mmol/L)、HKV：高糖载体对照组(HG+Veh)、HKD：PRRX1高糖敲低组(HG+PRRX1-KD)；数值以mean±SEM表示，n＝3，*P<0.05，**P<0.01，与NG相比，#P<0.05，##P<0.01，与HKV相比；
图3是PRRX1过表达对db/m小鼠肾小管上皮细胞EMT的影响；其中，图3中(a)为Western blot、qPCR检测小鼠肾脏中PRRX1的表达情况；图3中(b)为小鼠肾脏电镜图；图3中(c)为qPCR检测小鼠肾脏中EMT相关指标的相对mRNA水平；图3中(d)为Western blot检测小鼠肾脏中EMT相关指标的蛋白表达情况；
图4是PRRX1过表达对db/m小鼠肾脏纤维化的的影响；其中，图4中(a)为Masson、天狼星红染色观察肾小管中胶原沉积情况；图4中(b)为免疫组化观察小鼠肾小球中ColⅣ和Fibronectin表达情况；图4中(c)为Masson、天狼星红染色统计图；图4中(d)为免疫组化ColⅣ和Fibronectin统计图；图4中(e)为qPCR检测小鼠肾脏中Fibronectin的表达情况；图4中(f)为qPCR检测小鼠肾脏中ColⅣ的表达情况；
图5是PRRX1敲低对db/db小鼠肾小管上皮细胞EMT的影响；其中，图5中(a)为Western blot、qPCR检测小鼠肾脏中PRRX1的表达情况；图5中(b)为小鼠肾脏电镜图；图5中(c)为qPCR检测小鼠肾脏中EMT相关指标的相对mRNA水平；图5中(d)为Western blot检测小鼠肾脏中EMT相关指标的蛋白表达情况；
图6是PRRX1敲低对db/db小鼠肾脏纤维化的影响；其中，图6中(a)为Masson、天狼星红染色观察肾小管中胶原沉积情况；图6中(b)为免疫组化观察小鼠肾小球中ColⅣ和Fibronectin表达情况；图6中(c)为Masson、天狼星红染色统计图；图6中(d)为免疫组化ColⅣ和Fibronectin统计图；图6中(e)为qPCR检测小鼠肾脏中Fibronectin的表达情况；图6中(f)为qPCR检测小鼠肾脏中ColⅣ的表达情况；db/m：正常对照组、db/m+veh：过表达空载体组、db/m+PRRX1-OE：PRRX1过表达组、db/db+veh：db/db空载体组，db/db+PRRX1-KD：PRRX1敲低db/db组，数值以mean±SEM表示，n＝6，**P<0.01，与db/m相比，#P<0.05，##P<0.01，与db/db+veh相比。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1PRRX1对肾小管上皮细胞EMT的影响
1、细胞培养
HK-2细胞以含10％胎牛血清和1％P/S的培养基DMEM在37℃、5％CO2、相对湿度为90％的培养箱中培养。2-3天换液1次，使用0.25％含EDTA的胰蛋白酶常规消化传代。
2、AAV-PRRX1-shRNA和PRRX1过表达腺相关病毒的构建
用于过表达和敲低PRRX1表达的腺相关病毒购自上海吉凯基因有限公司。
具体流程：
质粒构建：①载体线性化：以质粒PT-2743(pAAV-U6-shRNA-PRRX1-CMV bGlobin-eGFP-3Flag)为骨架进行改造，采用BsmB I酶切，获得线性化的载体片段。②目的片段获取：将基因合成质粒pUC57-2733用BsmBI酶切，获得目的基因PRRX1。③骨架和目的基因连接：将线性化载体与片段混合，在T4连接酶作用下，实现片段与载体的连接。④转化大肠杆菌Trans1-T1，挑取单克隆，并通过PCR检测、酶切和测序鉴定出阳性克隆。
腺相关病毒包装：将Lentity-Easy Pacaging Mix和GFP Control Plasmid(或PRRX1腺相关病毒载体质粒)共转染AAV293包装细胞中，包装腺相关病毒，扩增收集病毒，采用超速离心的浓缩纯合发生得到高浓度的腺相关病毒保存液，测定病毒滴度；将空载体和腺相关病毒载体按照上述步骤共转染AAV293细胞，包装阴性对照腺相关病毒。
3、细胞转染
为了证实PRRX1在肾小管病变中的作用，我们使用HK-2细胞进行了体外实验。在PRRX1过表达实验中，将NG培养的HK-2细胞分为两组：(1)OV组，细胞转染对照腺相关病毒载体；(2)OE组，细胞转染PRRX1过表达腺相关病毒。
我们使用PRRX1敲低腺相关病毒构建了PRRX1基因敲除细胞模型。具体来说，用HG培养的HK-2细胞也分为两组：(1)HKV组，细胞转染对照腺相关病毒载体；(2)HKD组，细胞转染PRRX1shRNA腺相关病毒。细胞转染48小时后，进行本发明实施例后续的实验。
4、荧光定量PCR
为了检测PRRX1对HK-2细胞EMT的影响，本发明使用Trizol法提取细胞中的总RNA，进行荧光定量PCR检测。
5、Western印迹分析
在裂解缓冲液中收集肾皮质和细胞中的总蛋白，并通过双软骨素酸蛋白测定法(BCA蛋白测定试剂盒，皮尔斯热科学公司，罗克福德，IL，美国)进行测定。根据制造商的说明。用SDS-PAGE分离等量的蛋白质，转移到用1％牛血清白蛋白在37℃下饱和的硝化纤维素膜上1h。使用的一抗如下：β-actin(美国，1：10000)、E-钙粘蛋白(生物世界，中国，1:400)、波形蛋白(亲和力，中国，1:1000)、PRRX-1(美国，1:5000)，条带的灰度由奥德赛仪器(美国基因公司)进行定量，并与β-actin内部控制进行归一化。
6、免疫荧光
制备好的细胞爬片用甲醇于-20℃固定20min后0.1％ Triton穿透10min，5％ BSA封闭15min后加入一抗4摄氏度孵育过夜，使用的一抗如下：E-钙粘蛋白(生物世界，中国，1:200)、波形蛋白(亲和力，中国，1:500)。第二天复温，洗去一抗，加荧光标记的二抗，避光孵育1h；最后DAPI染细胞核2min封片，倒置显微镜观察HK-2细胞中目的蛋白的分布以及表达情况。
7、统计分析
数据以Mean±SEM表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，两两比较采用LSD检验或Dunnett’s T3检验。检验水准α＝0.05，P<0.05认为差异有统计学意义。
8、实验结果
(1)PRRX1过表达对正常HK-2细胞EMT的促进作用
由于HK-2细胞EMT在DN形成发挥重要作用，为进一步阐明PRRX1对HK-2细胞EMT的影响，于是我们在正常HK-2细胞中过表达PRRX1，采用Western blot、qPCR检测EMT相关指标Vimentin、E-cadherin的表达情况。如图2所示，与OV组相比，PRRX1过表达组Vimentin的蛋白及mRNA水平显著升高，E-cadherin的蛋白及mRNA水平显著降低，表明PRRX1能够促进间充质细胞标志物表达，减少上皮细胞表型，参与HK-2细胞EMT的调控。采用免疫荧光法观察Vimentin、E-cadherin的表达，验证HK-2细胞的EMT情况。结果显示，与OV组相比，PRRX1过表达组HK-2细胞中Vimentin表达显著升高，E-cadherin表达显著降低。图1证明过表达PRRX1能够促进正常HK-2细胞EMT。
(2)PRRX1敲低对高糖诱导的HK-2细胞EMT的抑制作用
为进一步探究PRRX1对HK-2细胞EMT的影响，于是我们在高糖诱导的HK-2细胞中敲低PRRX1，采用Western blot、qPCR检测EMT相关指标的表达情况。结果发现，与HKV组相比，PRRX1敲低组Vimentin的蛋白及mRNA水平显著降低，E-cadherin的蛋白及mRNA水平显著上升(图2)，表明敲低PRRX1能够减少间充质细胞标志物表达，增加上皮细胞表型。进一步采用免疫荧光法观察Vimentin、E-cadherin的表达，验证HK-2细胞的EMT情况。结果显示，与HKV组相比，PRRX1敲低组HK-2细胞中Vimentin表达显著降低，E-cadherin表达显著升高。图2证明敲低PRRX1能够抑制高糖诱导的HK-2细胞EMT。
实施例2PRRX1对小鼠肾脏纤维化的影响
1、动物饲养
小鼠均购于北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于徐州医科大学实验动物中心SPF级动物房中，给予充足的饲料和水，保持环境恒温恒湿。
2、过表达及敲低PRRX1腺相关病毒的构建
用于过表达和敲低PRRX1表达的腺相关病毒购自上海吉凯基因有限公司。
具体流程：
质粒构建：同实施例1。
腺相关病毒包装：同实施例1。
3、动物模型构建
为了证实PRRX1在小鼠肾脏纤维化中的作用，我们使用肾实质注射腺相关病毒构建在体模型。在PRRX1特异性过表达实验中，将饲养的db/m小鼠分为两组：(1)db/m+veh组，肾实质注射对照腺相关病毒载体；(2)db/m-PRRX1+OE组，肾实质注射PRRX1过表达腺相关病毒。
我们使用PRRX1敲低腺相关病毒构建了PRRX1肾脏特异性敲除动物模型。具体来说，将db/db小鼠也分为两组：(1)db/db+veh组，特异性转染对照腺相关病毒载体；(2)db/db-PRRX1+KD组，肾实质注射PRRX1shRNA腺相关病毒。腺相关病毒感染后，继续喂养4周后处死，摘取两侧肾脏并去包膜，于4％多聚甲醛固定
4、荧光定量PCR
为了检测PRRX1对小鼠肾脏纤维化的影响，本发明使用Trizol法提取组织中的总RNA，进行荧光定量PCR检测。
5、Western印迹分析
在裂解缓冲液中收集肾皮质和细胞中的总蛋白，并通过双软骨素酸蛋白测定法(BCA蛋白测定试剂盒，皮尔斯热科学公司，罗克福德，IL，美国)进行测定。根据制造商的说明。用SDS-PAGE分离等量的蛋白质，转移到用1％牛血清白蛋白在37℃下饱和的硝化纤维素膜上1h。使用的一抗如下：β-actin(美国，1：10000)、ZO-1(美国，1:1000)、E-钙粘蛋白(生物世界，中国，1:400)、波形蛋白(亲和力，中国，1:1000)、α-SMA(亲和力，中国，1:1000)、PRRX-1(美国，1:5000)，条带的灰度由奥德赛仪器(美国基因公司)进行定量，并与β-actin内部控制进行归一化。
6、肾组织病理检测
石蜡包埋的肾组织的4μm切片用于免疫组化，在65℃干燥30分钟后，将切片置于二甲苯中脱蜡2次，每次10分钟，依次用100％乙醇(I)、100％乙醇(II)、95％乙醇、90％乙醇、80％乙醇和去离子水复水，每次10分钟，随后，切片用兔二步法进行免疫组化染色，使用抗体如下：ColⅣ(美国，1：500)和Fibronectin(美国，1：500)。随机收集20张图片，观察目的蛋白在肾皮质的表达及分布情况。同样切片用Masson和Sirius Red液染色，随机收集20张图片，由两位盲法研究者进行定量，计算系膜基质占据每个肾小球的百分比。
7、统计分析
数据以Mean±SEM表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，两两比较采用LSD检验或Dunnett’s T3检验。检验水准α＝0.05，P<0.05认为差异有统计学意义。
8、实验结果
(1)PRRX1过表达对db/m小鼠肾脏纤维化的诱导作用
为了验证PRRX1对db/m小鼠肾纤维化的影响，我们通过Western blot、qPCR检测EMT相关蛋白的变化情况，Masson、天狼星红(Sirus red)染色观察小鼠肾脏切片，评估小鼠的肾纤维化水平，免疫组化染色检测FN、ColⅣ在肾脏中的蛋白堆积情况。结果显示(图3)，与db/m+PRRX1-veh组小鼠相比，db/m+PRRX1-OE组小鼠肾实质中α-SMA、Vimentin的蛋白及mRNA水平显著提高，ZO-1、E-cadherin的蛋白及mRNA上水平显著降低。如图4所示，小鼠肾小管区域Masson、Sirus red染色阳性区域面积显著增多，免疫组化结果显示，在db/m+PRRX1-OE组小鼠肾小管区域FN、ColⅣ蛋白蓄积增多，qPCR结果与免疫组化结果一致。表明PRRX1过表达能够导致db/m小鼠肾小管上皮细胞EMT，促进肾脏纤维化，增加ECM相关蛋白的沉积。
(2)PRRX1敲低对db/db小鼠肾脏纤维化的抑制作用
为了进一步证实PRRX1对小鼠肾纤维化的影响，我们特异性敲除db/db小鼠肾脏中PRRX1。如图5所示，与db/db+PRRX1-veh组小鼠相比，db/db+PRRX1-KD组小鼠肾实质中α-SMA、Vimentin的蛋白及mRNA上水平显著降低，ZO-1、E-cadherin的蛋白及mRNA水平显著升高。同时图6显示，小鼠肾小管区域Masson、Sirus red染色阳性区域面积显著减少，免疫组化结果显示，在db/db+PRRX1-KD组小鼠肾小管区域FN、ColⅣ蛋白蓄积减少，qPCR结果与免疫组化结果一致。表明PRRX1敲低能够抑制db/db小鼠肾小管上皮细胞EMT，减少ECM相关蛋白的沉积，延缓肾脏纤维化。
综上所述，本发明从正反两方面证实PRRX1参与了肾小管细胞EMT及肾脏纤维化的过程。因此，PRRX1可以作为分子靶点用于制备糖尿病肾病的防治药物。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可能对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (8)

1.PRRX1在制备糖尿病肾病防治药物中的应用，其特征在于，所述PRRX1的序列如SEQID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PRRX1作为药物靶点在制备抗糖尿病肾病防治药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PRRX1以腺相关病毒作为载体。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物制成液体制剂或固体制剂。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物制成注射剂、口服液、颗粒剂、粉剂、片剂或胶囊剂。
6.PRRX1敲低腺相关病毒在制备糖尿病肾病防治药物中的应用，所述PRRX1的序列如SEQ ID NO.1所示。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物抑制肾小管EMT过程。
8.一种诊断试剂，它以权利要求1所述的PRRX1敲低腺相关病毒为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的载体。
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