CN102342263A

CN102342263A - 一种改善水蛭体内水蛭素含量的方法

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Publication number: CN102342263A
Application number: CN2011102286495A
Authority: CN
Inventors: 杨鹏
Original assignee: CHONGQING DUOPUTAI PHARMACEUTICAL CO LTD
Current assignee: CHONGQING DUOPUTAI PHARMACEUTICAL CO LTD
Priority date: 2011-08-10
Filing date: 2011-08-10
Publication date: 2012-02-08

Abstract

本发明涉及水蛭养殖领域，具体涉及针对吸血类水蛭，改善水蛭体内水蛭素含量的方法，具体表现是稳定并提高水蛭素含量。本发明改善水蛭体内水蛭素含量的方法，向水蛭正常饲喂饲料，其特征在于：在捕捞前的12～54小时，补喂至少一次饲料；或者是在正常饲喂饲料后的12-54小时捕捞；其中，正常饲喂和补喂采用的饲料为动物血液。利用本发明方法可稳定捕捞水蛭体内水蛭素含量，并显著提高水蛭体内水蛭素含量。

Description

一种改善水蛭体内水蛭素含量的方法

技术领域

本发明涉及水蛭养殖领域，具体涉及针对吸血类水蛭，改善其体内水蛭素含量的方法，具体表现是提高并稳定水蛭素含量。

背景技术

水蛭为环节动物门(Annelida)蛭纲(Hirrdinea)的统称，俗称蚂蟥。世界上已知约有500余种，分4目。在我国共有2目、8科、33属，有近100种。我国药典(2010年版)收载水蛭药材来源仅三种：分别为蚂蟥Whitmania pigra Whitman、水蛭Hirudo nipponica whitman或柳叶蚂蟥Whitmania acranulata Whitman，其中蚂蟥和柳叶蚂蟥属于非吸血类水蛭，水蛭Hirudonipponica whitman(又称日本医蛭)属于吸血类水蛭。近年来，国内外许多的学者对水蛭的药理应用及活性成分进行了较深入的研究，但这些研究多集中于吸血类的水蛭，例如医蛭类以及菲牛蛭类等，因为大多数的活性成分基本上都是从吸血的水蛭中获得。水蛭素(hirudin)是水蛭中的一种活性成分，是蛭类动物唾液腺分泌的一种酸性多肽，由65个氨基酸残基组成的单链多肽，具有很强的抗凝和抗栓活性，是目前已知的最强的凝血酶抑制剂，主要存在于吸血类水蛭中，而非吸血的水蛭如蚂蟥和柳叶蚂蟥目前尚未见有抗凝物质的报导。

水蛭是一味重要的传统中药材，史载于《神农本草经》，历代本草均有记述，中医认为它有破血、逐瘀通经的功能，历来用于治疗症瘕、痞块、血瘀闭经、跌打损伤；现代除了传统应用外，主要用于制备治疗心脑血管疾病的中成药。近年来，随着医药学对水蛭研究的不断深入，其药用价值得以逐步体现，使其成为世界性的紧俏中药材之一。国内外市场需求的增大，以及环境污染、人类的掠夺性捕捉导致的野生资源枯竭使水蛭的人工饲养势在必行。水蛭适应性强，耐饥能力强，具有极强的抗病力，且人工饲养水蛭具有不受地区条件限制、饲料成本低、投资少、见效快等特点使水蛭的人工饲养基地逐渐出现。

吸血类水蛭体内抗凝活性物质含量高，但吸血类水蛭在饲养过程中，发明人发现同批饲养的水蛭因捕捞时间而导致水蛭体内水蛭素含量不稳定。

发明内容

本发明所解决的技术问题是通过调整水蛭的摄食时间，用以改善水蛭体内水蛭素含量的方法。

发明人在饲喂吸血类水蛭时，一般每周饲喂2次，随时捕捞，但是发明人发现这种饲喂及捕捞方式获得的水蛭体内水蛭素含量不稳定，影响水蛭药材质量，也难以在市场上获得肯定。后来发明人在研制过程中发现在正常饲喂的基础上，在捕捞前的12～54小时，补喂至少一次动物血液，或者是在饲喂后的第12-54小时捕捞；上述操作方法可稳定捕捞水蛭体内水蛭素含量，并显著提高水蛭体内水蛭素含量。

本发明改善水蛭体内水蛭素含量的方法是，向水蛭正常饲喂饲料，其特征在于：在捕捞前的12～54小时，补喂至少一次饲料；或者是在正常饲喂饲料后的12-54小时捕捞；其中，正常饲喂和补喂采用的饲料为动物血液；优选脊椎动物的血液。

正常饲喂是每周饲喂至少1次，一般为2次；所采用的饵料通常为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液；若不计成本，也可以使用新鲜的动物血液，“新鲜的动物血液”系指当天采集并且尚未凝固的血液。

补喂采用的饲料，既可以是经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液，也可以是新鲜的动物血液，或其混合。

若采用经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液补喂时，在捕捞前的12～42小时补喂，或者是在正常饲喂后的12～42小时捕捞；优选在捕捞前24～42小时补喂，或者是优选在饲喂后的24～42小时捕捞。

若采用新鲜的动物血液补喂时，则在捕捞前的12～54小时补喂，或者是在饲喂新鲜的动物血液后的12～54小时捕捞；优选在捕捞前的24～48小时补喂，或者是优选在饲喂新鲜的动物血液后的24～48小时捕捞。

从补喂后的水蛭素含量测定可见，采用新鲜血液可显著提高水蛭体内水蛭素含量，故本发明优选新鲜的动物血液补喂。而且采用新鲜血液还有助于水蛭分解吸收，并避免因血液变质而导致水蛭产生疾病，甚至死亡。

本发明方法可采用的动物血液为脊椎动物的新鲜血液，如猪血、牛血、羊血、鸭血、鸡血。

以往捕捞水蛭并无特殊时间要求，随时可能捕捞，但是按照该方式捕捞得的水蛭体内水蛭素含量不稳定。采用本发明方法后可明显改善水蛭体内水蛭素的含量，水蛭体内水蛭素相对稳定，并且含量明显提高。

本发明的有益效果是：

1、本发明方法打破了自然条件的限制，采用了人工饲喂的方法控制吸血类水蛭的采食周期，从而有效地控制水蛭将饵料转换为水蛭素的最佳时机，提高水蛭体内水蛭素含量。

2、选择动物血液，尤其是新鲜的动物血液补喂水蛭，可提高水蛭的饵料品质，使水蛭能够更好地分解吸收饵料营养，顺利地将其转化成水蛭素。

具体实施方式

吸血类水蛭的正常饲喂时间为每周2次，以往捕捞并无特殊时间要求，随时可能捕捞，该方式捕捞得的水蛭体内水蛭素含量不稳定。发明人发现采用本发明饲喂方法后，可稳定并提高水蛭素的含量。

本发明改善水蛭体内水蛭素含量的方法是：向水蛭正常饲喂饲料，改进之处在于：在捕捞前的12～54小时，补喂至少一次饲料；或者是在正常饲喂饲料后的12-54小时捕捞。其中，正常饲喂和补喂采用的饲料为动物血液；优选脊椎动物的血液。

动物血液为新鲜的动物血液，具体是指当天采集并且尚未凝固的动物血液。采用新鲜血液有助于水蛭分解吸收，而且可以避免因血液变质而导致水蛭产生疾病，甚至死亡。可采用的动物血液为脊椎动物的血液，如猪血、牛血、羊血、鸭血、鸡血。

本发明饲喂方法筛选试验：

1、实验材料

选取同一批成年水蛭分别放于A、B、C、D、E、F六块试验田中饲养，每块试验田中各饲养日本医蛭(即水蛭Hirudo nipponica whitman)100kg。其中A、B试验田为对照组，C、D试验田为试验组1，E、F试验田为试验组2，六块田中水蛭正常(每周2次，即每隔72小时饲喂一次)饲喂1个月后开始测试实验。

2、水蛭素含量测定方法

将捕捞的水蛭样品匀浆、干燥后按照2010版药典一部水蛭项下【含量测定】方法进行测定：取本品粉末(过三号筛)约1g，精密称定，精密加入0.9％氯化钠溶液5ml，充分搅拌，浸提30分钟。并时时振摇，离心，精密量取上清液100μl，置试管(8mm×38mm)中，加入含0.5％(牛)纤维蛋白原(以凝固物计)的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(临用配制)200μl，摇匀，置水浴中(37℃±0.5℃)温浸5分钟，滴加每1ml中含40单位的凝血酶溶液[注2](每1分钟滴加1次，每次5μl，边滴加边轻轻摇匀)至凝固，记录消耗凝血酶溶液的体积，按下式计算：

U = \frac{C_{1} V_{1}}{C_{2} V_{2}}

式中U——每1g含凝血酶活性单位，U/g；

C1——凝血酶溶液的浓度，U/ml；

C2——供试品溶液的浓度，g/ml；

V1——消耗凝血酶溶液的体积，μl；

V2——供试品溶液的加入量，μl。

中和一个单位的凝血酶的量，为一个抗凝血酶活性单位。

3、补喂血液时间筛选试验以及血液质量筛选试验

于最后一次正常饲喂后开始计时，A、B试验田中水蛭无作为；12小时后，C、D试验田中水蛭补饲一次新鲜的动物血液；12小时后，E、F试验田中水蛭补饲一次冷藏保存1周后的动物血液。分别于计时开始后的6、12、18、24、30、36、42、48、54、60、66、72小时的时间点每块试验田中至少随机捕捞水蛭3次，进行水蛭素含量测定(水蛭素含量以抗凝血酶活性计)，测定结果见表1。

试验中所采用的新鲜的动物血液均为当天采集的、且尚未凝固的动物血液，主要是脊椎动物血液，没有区分血液来源，如猪血、牛血、羊血、鸭血、鸡血等脊椎动物血液中的至少一种，可择一使用，也可以混合使用。

表1加饲血液时间以及血液质量筛选试验结果n≥3

其中，n≥3表示每块地捕捞超过三次，各田含量取平均值。

补喂后X小时捕捞，即捕捞前X小时补喂，如：补喂后24小时捕捞即捕捞前24小时补喂，补喂后48小时捕捞即捕捞前48小时补喂。

由表1可以看出：

正常饲喂的A、B试验田中水蛭在72小时内的水蛭素含量为在101～111之间变化，不稳定，最后12小时有逐渐降低的趋势。

C、D试验田中水蛭在12小时后补喂了一次新鲜动物血液，水蛭素含量较A、B试验田有所增加，在第36小时(即补喂后24小时)时水蛭素含量增加到最高，为124左右，较A、B试验田明显大幅度增高，并且该高含量基本稳定持续至第60小时(即补喂后48小时)，高含量稳定持续时间为24小时。

E、F试验田中水蛭在12小时后补喂了一次冷藏后动物血液，水蛭素含量亦有所增加，但增加幅度不如C、D试验田高，在第36小时(即补喂后24小时)时水蛭素含量增加到最高，为119左右，该最高值保持时间不长，大约持续至第48小时(即补喂后36小时)，持续时间为12小时。

因此在正常饲喂的基础上于捕捞前12～54小时内补饲一次动物血液可显著提高水蛭体内的水蛭素含量，尤其是于捕捞前24～48小时内补饲一次新鲜动物血液能够使水蛭体内的水蛭素含量增高近17％左右。而且在相对固定的时间段内捕捞水蛭，获得的水蛭体内水蛭素含量相对稳定，可控制产品的出厂质量。

Claims

1.改善水蛭体内水蛭素含量的方法，向水蛭正常饲喂饲料，其特征在于：

在捕捞前的12～54小时，补喂至少一次饲料；

或者是在正常饲喂饲料后的12-54小时捕捞；

其中，正常饲喂和补喂采用的饲料为动物血液。

2.根据权利要求1所述的改善水蛭体内水蛭素含量的方法，其特征在于：正常饲喂和补喂采用的动物血液为脊椎动物的血液。

3.根据权利要求1或2所述的改善水蛭体内水蛭素含量的方法，其特征在于：正常饲喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液。

4.根据权利要求1-3任一项所述的改善水蛭体内水蛭素含量的方法，其特征在于：补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液、新鲜的动物血液中至少一种。

5.根据权利要求4所述的改善水蛭体内水蛭素含量的方法，其特征在于：

补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液时，在捕捞前的12～42小时补喂；优选在捕捞前24～42小时补喂；

或者是在正常饲喂后的12～42小时捕捞；优选在饲喂后的24～42小时捕捞。

6.根据权利要求4所述的改善水蛭体内水蛭素含量的方法，其特征在于：补喂采用的饲料为新鲜的动物血液时：

在捕捞前的12～54小时补喂；优选在捕捞前的24～48小时补喂；

或者是在饲喂新鲜的动物血液后的12～54小时捕捞；优选在饲喂新鲜的动物血液后的24～48小时捕捞。

7.根据权利要求1-6任一项所述的改善水蛭体内水蛭素含量的方法，其特征在于：正常饲喂是每周饲喂至少1次。

8.根据权利要求7所述的改善水蛭体内水蛭素含量的方法，其特征在于：正常饲喂是每周饲喂至少2次。