CN102323255A - 一种缺血修饰白蛋白测定显色剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种缺血修饰白蛋白测定显色剂及其制备方法，按重量份数称取1-亚硝基-2-萘酚0.8～3.6份，氢氧化钠1.2-3.5份，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸0.5～4.0份溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.50-10.00，配成溶液C；量取溶液C100毫升，称取果糖0.5-3.0份，吐温200.05-0.5份，Proclin3000.01-0.06份加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。有益效果：本发明能快速检测缺血修饰白蛋白，并且检测比较灵敏，缺血修饰白蛋白组成成分常见，价格相对便宜，整个制备也比较方便，制备工序简单容易操作。
Description
技术领域
本发明属于医疗检测领域，具体的说，涉及一种体外诊断试剂。
背景技术
缺血修饰白蛋白( ischemia modified albumin,IMA)是近年来发现的一种新的生化标志物,在早期诊断急性心肌梗死(AMI)中具有独特的优势。在心肌缺血5～10 min内IMA即可升高,可持续6 h,其诊断心肌缺血的敏感性优于目前所有的标志物和其他检查。IMA 的测定通常是采用白蛋白2钴结合( albumin cobalt binding, ACB)试验,正常情况下血清白蛋白（HA）的N-末端可以与过渡金属元素（如Co，Cu和Ni等）有很强的结合能力。加入氯化钴溶液，钴离子与白蛋白的N-末端结合，溶液中存在游离钴的浓度较低。心肌缺血时，IMA不与Co2+结合的白蛋白,加入同样浓度氯化钴溶液后，溶液中存在较高浓度的游离钴，再加入显色剂与溶液中游离钴发生颜色反应，采用分光光度法测定吸光度，即可推测缺血修饰白蛋白含量。常用于钴离子显色的化合物有二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT），1-亚硝基-2-萘酚等，目前主要以用DTT配制的显色剂为主，该显色剂易被空气氧化,稳定性差,难以保存。
发明内容
为解决以上技术问题，本发明目的之一在于提供一种成本低廉，稳定性好，易于保存，检测灵敏度高的缺血修饰白蛋白测定显色剂。
本发明目的之二在于提供一种制备缺血修饰白蛋白测定显色剂的方法。
本发明目的是这样实现的：
一种缺血修饰白蛋白测定显色剂按重量份数由下列原料组成：
pH值为7.50～10.00的C溶液100份
果糖0.5-3.0份
吐温20 0.05-0.5份
Proclin300 0.01-0.06份；
上述C溶液按重量份数比由1-亚硝基-2-萘酚0.8～3.6份，氢氧化钠1.2-3.5份，溶于100份纯化水中，配成溶液A；柠檬酸0.5～4.0份溶于100份纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.50-10.00得到。
通过使用1-亚硝基-2-萘酚来充当钴离子的显色物，加入氢氧化钠提高1-亚硝基-2-萘酚的水溶性，用柠檬酸调节溶液pH使溶液体系更适合显色反应，加入果糖用于保护显色物的还原性，加入吐温20用于保持溶液的分散性与溶解能力，加入Proclin300使缓冲液避免滋生细菌等微生物起到防腐作用。通过以上各组分的综合作用达到提高缺血修饰白蛋白测定显色剂的稳定性和检测灵敏度的目的
一种制备缺血修饰白蛋白测定显色剂的方法，其关键在于按如下步骤进行：
（1）称取1-亚硝基-2-萘酚0.8～3.6份，氢氧化钠1.2-3.5份，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸0.5～4.0份溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.50-10.00，配成溶液C；
（2）量取溶液C100毫升，称取果糖0.5-3.0份，吐温20 0.05-0.5份，Proclin300 0.01-0.06份加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
有益效果：本发明能快速检测缺血修饰白蛋白，并且检测比较灵敏，缺血修饰白蛋白组成成分常见，价格相对便宜，整个制备也比较方便，制备工序简单容易操作。
具体实施方式
实施例1
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚0.8克，氢氧化钠1.2克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸0.5克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.50，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取果糖0.5克，吐温20 0.05毫升，Proclin300 0.01ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例2
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚1.0克，氢氧化钠1.4克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸0.8克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH8.00，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取果糖0.6克，吐温20 0.08毫升，Proclin300 0.02ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例3
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚1.2克，氢氧化钠1.6克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸1.0克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH8.50，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取果糖0.8克，吐温20 0.10毫升，Proclin300 0.04ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例4
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚1.4克，氢氧化钠1.8克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸1.2克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH9.00，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取果糖1.0克，吐温20 0.12毫升，Proclin300 0.06ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例5
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚1.6克，氢氧化钠2.0克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸1.2克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH9.50，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，称取果糖1.2克，吐温20 0.14毫升，Proclin300 0.05ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例6
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚1.8克，氢氧化钠2.2克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸1.4克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH10.00，配成溶液C
(2)量取溶液C 100毫升，称取果糖1.4克，吐温20 0.18毫升，Proclin300 0.04ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例7
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚2.0克，氢氧化钠2.6克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸1.8克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH9.60，配成溶液C
(2)量取溶液C 100毫升，称取果糖1.8克，吐温20 0.22毫升，Proclin300 0.05ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例8
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚2.2克，氢氧化钠3.0克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸2.5克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH9.80，配成溶液C
(2)量取溶液C 100毫升，称取果糖2.20克，吐温20 0.28毫升，Proclin300 0.06ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例9
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚2.6克，氢氧化钠3.2克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸3.0克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH9.20，配成溶液C
(2)量取溶液C 100毫升，称取果糖2.60克，吐温20 0.32毫升，Proclin300 0.03ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例10
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚3.0克，氢氧化钠3.5克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸3.5克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH8.50，配成溶液C
(2)量取溶液C 100毫升，称取果糖3.00克，吐温20 0.38毫升，Proclin300 0.05ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例11
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚3.2克，氢氧化钠3.1克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸4.0克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.90，配成溶液C
(2)量取溶液C 100毫升，称取果糖2.70克，吐温20 0.40毫升，Proclin300 0.06ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例12
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚3.6克，氢氧化钠3.3克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸4.5克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH9.90，配成溶液C
(2)量取溶液C 100毫升，称取果糖3.0克，吐温20 0.45毫升，Proclin300 0.03ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例13
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚2.3克，氢氧化钠2.3克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸5.00克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH10.00，配成溶液C
(2)量取溶液C 100毫升，称取果糖2.3克，吐温20 0.50毫升，Proclin300 0.05ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
实施例14
(1)称取1-亚硝基-2-萘酚1.7克，氢氧化钠2.9克，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸4.70克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH9.00，配成溶液C
(2)量取溶液C 100毫升，称取果糖2.8克，吐温20 0.37毫升，Proclin300 0.01ml加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
表1是本发明实施例1-14的测试部分结果
表1中用于测试的原料分别为：
人血清白蛋白：人血清白蛋白（美国Sigma公司生产）
Cocl2： Cocl2（美国Sigma公司生产）
仪器：Olympus AU400全自动生化分析仪
所用的一般化学试剂均为分析纯级别
测试时把钴离子加入人血清白蛋白中反应结合后，加入显色剂进行显色反应，测定其吸光度值，然后进行数据分析。
表1：测试结果
Claims (2)
1.一种缺血修饰白蛋白测定显色剂按重量份数由下列原料组成：
pH值为7.50～10.00的C溶液100份
果糖0.5-3.0份
吐温20 0.05-0.5份
Proclin300 0.01-0.06份；
所述C溶液按重量份数比由1-亚硝基-2-萘酚0.8～3.6份，氢氧化钠1.2-3.5份，溶于100份纯化水中，配成溶液A；柠檬酸0.5～4.0份溶于100份纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.50-10.00得到。
2.一种制备权利要求1所述缺血修饰白蛋白测定显色剂的方法，其特征在于按如下步骤进行：
（1）称取1-亚硝基-2-萘酚0.8～3.6份，氢氧化钠1.2-3.5份，溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取柠檬酸0.5～4.0份溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.50-10.00，配成溶液C；
（2）量取溶液C100毫升，称取果糖0.5-3.0份，吐温20 0.05-0.5份，Proclin300 0.01-0.06份加入溶液C中，搅拌均匀，配成缺血修饰白蛋白测定显色剂。
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| D. BAR-OR等: "A Novel Assay For Cobalt-Albumin Binding And Its Potential As A Marker For Myocardial Ischemia-A Preliminary Report", 《THE JOURNAL OF EMERGENCY MEDICINE》, vol. 19, no. 4, 30 November 2000 (2000-11-30), pages 311 - 315 * |
| D. BAR-OR等: "Characterization of the Co2+ and Ni2+ binding amino-acid residues of the N-terminus of human albumin", 《EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY》, vol. 268, no. 1, 31 January 2001 (2001-01-31), pages 42 - 47, XP001018870, DOI: doi:10.1046/j.1432-1327.2001.01846.x * |
| E. COGAN: "Separation of Cobalt from Its Alloys and Ores with 1-Nitroso-2-naphthol", 《ANALYTICAL CHEMISTRY》, vol. 32, no. 8, 31 July 1960 (1960-07-31), pages 973 - 975 * |
| 孙金芳: "缺血修饰白蛋白的检测及临床应用", 《医学综述》, vol. 14, no. 17, 30 September 2008 (2008-09-30), pages 2640 - 2642 * |
| 陈志晓等: "改良缺血修饰白蛋白测定方法(白蛋白-钴结合试验)的建立", 《检验医学》, vol. 25, no. 05, 31 May 2010 (2010-05-31), pages 372 - 375 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102323255B (zh) | 2013-08-14 |
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