CN102318743B

CN102318743B - 改善银杏叶饲喂适口性及提高其产品生物活性的方法

Info

Publication number: CN102318743B
Application number: CN201110292164A
Authority: CN
Inventors: 赵林果; 曹福亮; 汪贵斌
Original assignee: Nanjing Forestry University
Current assignee: Nanjing Forestry University
Priority date: 2011-09-30
Filing date: 2011-09-30
Publication date: 2012-10-24
Anticipated expiration: 2031-09-30
Also published as: CN102318743A

Abstract

改善银杏叶饲喂适口性及提高其产品生物活性的方法，将银杏叶、食用菌废菌渣、豆粕等组成的固体发酵原料与微生物的营养盐溶液混合均匀，灭菌，得到固体发酵基料；以产β-葡萄糖苷酶的微生物为菌种，将该菌种扩培后接种到所制备的固体发酵基料中进行发酵；完成发酵后的物料干燥，粉碎；加入香味剂混合均匀，即得产品。应用试验表明，本发明饲料添加剂对畜禽具有显著的促生长和防病抗病作用。能显著促进仔猪和乳猪的生长，对其腹泻疾病的防治具有明显的效果；能较好地提高蛋鸡的产蛋性能并降低鸡蛋胆固醇的含量；对奶牛乳房炎具有较好的预防和辅助治疗作用。

Description

改善银杏叶饲喂适口性及提高其产品生物活性的方法

技术领域

本发明涉及一种饲料添加剂的制备方法及其产品，尤其涉及一种以银杏叶、食用菌废菌渣和豆粕为主要原料，采用微生物将其发酵转化，以及发酵产物与香味剂进行复配得到一种生物饲料添加剂的方法和由该方法得到的产品，本发明还涉及该产品在养殖业中的应用，属于饲料领域。

背景技术

为了片面追求养殖效率或为了防病抗病、减少高密度养殖过程中畜禽的发病率，养殖户会大剂量使用一些化学合成的促生长剂、抗生素。这些物质会残留在畜禽产品内，经食物链进入人体，导致人类的一系列疾病；而且这些物质的大量使用，使动物和人体中的细菌产生了较强的耐药性，并且造成畜禽产品品质下降。

近几年来，人们对安全、卫生、健康、生态、环保等问题日益关注，世界上许多国家纷纷禁止或限制在饲料中使用化学合成物、抗生素。与此同时，在全球范围内研究、开发与生产无污染、无药物残留、既能促进动物生长又能防治动物疾病并可替代抗生素、激素、类激素的天然添加剂倍受重视，而且发展迅速。迄今为止，应用现代高新技术开发、生产出来的天然添加剂主要有动物微生态制剂、饲用酶制剂、饲用低聚糖、中草药等。但研究表明，若将两种或两种以上的生物饲料添加剂按一定比例混合起来制成的产品，可以明显地提高畜禽的防病抗病能力和促生长作用。

银杏叶除具有一般树叶的营养外，更重要的是含有黄酮类、萜内酯类、聚戊烯醇类化合物以及生物碱和多糖等活性成分。所以，银杏叶及其提取物可以作为一种天然的畜禽免疫调节剂和生长促进剂。目前，国内外对银杏叶的开发利用主要集中在医药、生物农药、食品、化装品等方面。尽管也有直接利用银杏叶作为饲料添加剂的研究报道，但其适口性较差、生物活性不显著、纤维素、半纤维素等大分子难以被单胃动物利用。

近年来的动物应用试验表明，大豆异黄酮具有促进动物生长、增强机体免疫力、提高动物泌乳、增加产蛋量和蛋重及提高繁殖机能等多种营养生理功能。豆粕是食用油加工中产生的副产品，大豆异黄酮主要残留在豆粕中，并主要以糖苷型为主的异黄酮形式存在。豆粕用作饲料时，由于细胞壁的作用大豆异黄酮不易被动物消化吸收，而且研究表明，在动物体内糖苷型的异黄酮不能直接被吸收，而是先被小肠的β-葡萄糖苷酶水解后脱去糖基进入血液中，才能发挥各种生理作用。而小肠的β-葡萄糖苷酶由于个体差异，活性有很大的差别。如果直接利用苷元型异黄酮，则能迅速发挥作用。因此，提高豆粕中异黄酮的利用率以及把以糖苷型为主的异黄酮转化为具有更高生理活性的苷元型异黄酮具有重要的意义。

另一方面，食用菌废菌渣指的是食用茵被采收后残留在栽培瓶或栽培袋内的培养料。培养料中具有生物活性的营养素和酶可以作为天然的抗氧化剂和抗炎药物，利用食用菌废菌渣来提高家禽的免疫力、减少抗生素使用量、预防和控制家禽流行性传染病将有着广阔的应用前景。

发明内容

解决的技术问题：本发明一是克服将银杏叶和豆粕直接作为畜禽饲料或饲料添加剂使用所存在的适口性差、活性成分利用率低及其生理活性不显著等缺陷，将银杏叶和豆粕进行微生物发酵处理和添加香味剂，由其制备得到的产品适口性明显改善，动物的采食量明显提高。发酵后，银杏叶和豆粕中的糖苷型黄酮类化合物分别转化为相应的苷元型黄酮类化合物，显著增强了它们的生物活性；二是解决养殖业中动物内源酶不足、饲料转化率低等问题，通过微生物发酵，同时产生纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶、蛋白酶等多组分的复合酶；三是通过在发酵基料中使用食用菌废菌渣，使得产品中活性物质成分更加多样化。因此，本发明产品对畜禽具有显著的促生长和防病抗病等多种功效。

技术方案：

一种改善银杏叶饲喂适口性及提高其产品生物活性的方法，包括以下步骤：

（1）将固体发酵原料与微生物的营养盐溶液混合均匀，灭菌，得到固体发酵基料；其中，所述的固体发酵原料由以下重量份的各成分组成：银杏叶5～8份、食用菌废菌渣1～4份、豆粕1～4份、不超过2份的麸皮或农林废弃物；

（2）以产β-葡萄糖苷酶的微生物为菌种，将该菌种扩培后接种到步骤（1）所制备的固体发酵基料中进行发酵；

（3）完成发酵后的物料干燥，粉碎；

（4）加入香味剂混合均匀，即得产品。

步骤（1）中所述固体发酵原料的各组成成分的重量份为：粉碎后的银杏叶6～8份、食用菌废菌渣2～3份、豆粕1～2份、不超过1.5份的麸皮。

所述的农林废弃物选自稻草、花生壳、山芋藤或玉米芯中的任意一种或一种以上按任意比例所组成的混合物。

步骤（1）所述的微生物营养盐溶液主要采用改进的察氏培养基，组成和质量百分数为：葡萄糖或蔗糖1 %，NaNO₃0.2 %，K₂HPO₄.3H₂O 0.1 %，MgSO₄.7H₂O 0.05 %，余量为蒸馏水；其中，所述的微生物营养盐溶液的pH值为4～7，优选5.0。

步骤（1）中将固体发酵原料与微生物的营养盐溶液按照1g：1.2～2.0mL的配比比例进行混合。

步骤（2）中所述的产β-葡萄糖苷酶的微生物包括黑曲霉（Aspergillus niger）或米曲霉（Aspergillus oryzae）。这些微生物不但能产生β-葡萄糖苷酶，还能产生纤维素酶、半纤维素酶、β-葡聚糖酶、蛋白酶、糖化酶等复合酶；这些微生物可以从自然界中筛选、诱变获得，也可以从商业途径购买得到（例如可以购自于中国工业微生物菌种保藏管理中心，网址：http://www.china-cicc.org/）。

步骤（2）中，所述的接种为利用孢子进行接种或利用液体种子进行接种；其中，用孢子接种时，当制成的孢子悬浮液中孢子的含量为5×10⁶个/mL时，按体积分数计，接种量为0.5～5﹪；用液体种子接种时，按体积比计，接种量为1～5%；发酵条件为：湿度80～90%，温度26～32℃，发酵时间48～96小时。

步骤（4）中所述的香味剂组成及在发酵产品中的质量含量包括柠檬酸0.5-4%、香兰素0.5-3%、乙基麦芽酚0.1-2%、乙酸乙酯0.1-0.5%、椰子醛0.1-0.5%和甜味剂0.1-0.5%。

上述任何一项制备方法所得到的产品。

上述产品作为饲料添加剂的应用，包括：按w/w计，在基础日粮中添加0.01～1.0％的所述产品，混合均匀，用于牛、猪或鸡等畜禽养殖用的饲料。

有益效果：本发明以银杏叶、食用菌废菌渣和豆粕为主要原料，以产β-葡萄糖苷酶的微生物为菌种，通过生物转化，使得银杏叶的青气、药味减弱或消失并产生花果香味；使得银杏叶的糖苷型黄酮类化合物转化为黄酮醇、豆粕中的糖苷型异黄酮转化为苷元型异黄酮，增强了生物活性，达到了脱苦的效果，同时添加的香味剂进一步改善了银杏叶饲喂适口性，提高了动物的采食量。此外，本发明生物饲料添加剂所含的多组分复合酶和具有多种生物活性的营养素，可提高饲料转化率，消除抗营养因子，补充动物内源酶的不足，能促进机体自身免疫的增强作用，对多种病毒、细菌和寄生虫有普遍的抵抗作用。本发明产品适口性好，富含多种活性成分，对畜禽具有显著的促生长和防病抗病作用，并能显著提高畜禽产品的品质。

应用试验表明，本发明饲料添加剂对畜禽具有显著的促生长和防病抗病作用。能显著促进仔猪和乳猪的生长，对其腹泻疾病的防治具有明显的效果；能较好地提高蛋鸡的产蛋性能并降低鸡蛋胆固醇的含量；对奶牛乳房炎具有较好的预防和辅助治疗作用；

本发明饲料添加剂的使用方法和用量：在基础日粮中添加0.01～1.0％（w/w）本发明饲料添加剂，混合均匀，用于牛、猪、鸡等动物养殖的饲料，按常规饲喂方法和用量投喂。

具体实施方式

下面通过实施例子对本发明作进一步说明。应当指出，这些实施例子仅仅是对本发明的例证，不应该理解为对本发明的限制。

实验所用的微生物菌种：

1、黑曲霉（Aspergillus niger），购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；商品编号：CICC 2158；

2、米曲霉（Aspergillus oryzae），购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；商品编号：CICC 2014；

实施例1

（1）试验菌的选用与扩培：以黑曲霉（Aspergillus niger ）为菌种，利用察氏培养基（察氏培养基各组分及其重量百分比为：葡萄糖或蔗糖 2～3 %，NaNO₃0.2 %，K₂HPO₄.3H₂O 0.1 %，MgSO₄.7H₂O 0.05 %，KCl 0.05%， FeSO₄.7H₂O 0.001%，余量为蒸馏水）的斜面或茄子瓶培养黑曲霉获得黑曲霉孢子，加生理盐水制成孢子悬浮液，孢子的含量为5×10⁶个/mL；

（2）微生物的营养盐溶液的配制：按葡萄糖1％（即每1L营养盐溶液中含葡萄糖10g，下同）、NaNO₃0.2 %、K₂HPO₄.3H₂O 0.1 %、MgSO₄.7H₂O 0.05 %的量依次称取并溶解于50mM、pH5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中，配成营养盐溶液；

（3）发酵基料的制备：发酵基料的制备：发酵原料按粉碎后的银杏叶：食用菌废菌渣：豆粕：麸皮＝7.5：1.0：1.0：0.5的重量比例称取；按固液比1：1.6（即100g 发酵原料中加入160mL 营养盐溶液）的比例将发酵原料与营养盐溶液混合，搅拌均匀；将配制好的发酵基料在121℃下灭菌50min，取出，冷却；

（4）发酵：按常规的微生物无菌操作要求，将扩培后的黑曲霉种子接入所制备的发酵基料中，接种量为5%vt，搅拌均匀，在湿度90%、温度28 ℃条件下发酵72小时；

（5）发酵完成后的物料干燥，粉碎。

（6）加入香味剂：香味剂组成及在发酵产品中的质量百分比含量为柠檬酸2%、香兰素1%、乙基麦芽酚1%、乙酸乙酯0.25%、椰子醛0.25%和甜味剂0.25%。

实施例2

（1）试验菌的选用与扩培：以米曲霉（Aspergillus oryzae）为菌种，利用察氏液体培养基（察氏培养基各组分及其重量百分比为：葡萄糖或蔗糖 2～3 %，NaNO₃0.2 %，K₂HPO₄.3H₂O 0.1 %，MgSO₄.7H₂O 0.05 %，KCl 0.05%， FeSO₄.7H₂O 0.001%，余量为蒸馏水）制备米曲霉的液体种子，培养时间为48h；

（2）微生物的营养盐溶液的配制：按葡萄糖1.0％（即每1L营养盐溶液中含葡萄糖10g，下同），NaNO₃0.2 %、K₂HPO₄.3H₂O 0.1 %、MgSO₄.7H₂O 0.05 %的量依次称取并溶解于50mM、pH5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中，配成营养盐溶液；

（3）发酵基料的制备：发酵原料按粉碎后的银杏叶：食用菌废菌渣：豆粕：麸皮＝7.0：1.5：1.0：0.5的重量比例称取；按固液比1：1.8（即100g 发酵原料中加入180mL 营养盐溶液）的比例将发酵原料与营养盐溶液混合，搅拌均匀；将配制好的发酵基料在121℃下灭菌50min，取出，冷却；

（4）发酵：按常规的微生物无菌操作要求，将扩培后的米曲霉种子接入所制备的发酵基料中，接种量为8%vt，搅拌均匀，在湿度90%、温度30 ℃下培养72h；

（5）发酵完成后的物料干燥，粉碎。

（6）加入香味剂：香味剂组成及在发酵产品中的含量为柠檬酸3%、香兰素1%、乙基麦芽酚0.5%、乙酸乙酯0.3%、椰子醛0.2%和甜味剂0.2%。

实施例3

（3）发酵基料的制备：发酵原料按粉碎后的银杏叶：食用菌废菌渣：豆粕：麸皮＝6.0：2.0：1.0：1.0的重量比例称取；按固液比1：2.0（即100g 发酵原料中加入180mL 营养盐溶液）的比例将发酵原料与营养盐溶液混合，搅拌均匀；将配制好的发酵基料在121℃下灭菌50min，取出，冷却；

（4）发酵：按常规的微生物无菌操作要求，将扩培后的黑曲霉种子接入所制备的发酵基料中，接种量为2%vt，搅拌均匀，在湿度90%、温度26 ℃条件下发酵96小时；

（5）发酵完成后的物料干燥，粉碎。

（6）加入香味剂：香味剂组成及在发酵产品中的含量为柠檬酸1%、香兰素2%、乙基麦芽酚0.8%、乙酸乙酯0.3%、椰子醛0.2%和甜味剂0.5%。

试验例1 本发明饲料添加剂的有关性能试验

供试样品：本发明实施例1、2和3所制备的动物饲料添加剂，分别编号为产品1、2和3。

一、本发明饲料添加剂风味品质及糖苷型黄酮类化合物含量的检测试验

检测方法：

采用水蒸汽蒸馏法在相同的条件下分别制得银杏叶发酵前和发酵后（供试样品）样品的精油。采用GC/MS对精油化学成分进行分析。各化合物的相对含量由GC面积归一化法计算。香气物质含量以所含的主要代表物β-芳樟醇、橙花叔醇、β-桉叶醇、β-紫罗兰酮的总量计。

采用HPLC法测定银杏叶发酵前后黄酮醇（糖苷型黄酮类化合物含量）和黄酮醇苷类（苷元型黄酮类化合物）的变化。色谱柱为C₁₈柱，检测波长为370nm，流动相为甲醇-水-磷酸(55:45:0.5)。采用标准品（槲皮素、山萘酚、异鼠李素、芦丁）并结合指纹图谱分析。糖苷型黄酮类化合物含量主要以芦丁含量计；苷元型黄酮类化合物的含量主要以槲皮素、山萘酚、异鼠李素计。大豆异黄酮及其糖苷型异黄酮和苷元型异黄酮的测定也采用HPLC法。色谱柱为C₁₈柱，检测波长为260nm，以1.5%乙酸-甲醇-乙腈(70∶22.5∶7.5)为流动相等度洗脱，检测波长260nm。

检测结果见表1。

表1 本发明银杏叶饲料添加剂风味品质及苷元型黄酮类化合物含量的变化

样品	气味	主要香气物质	糖苷型黄酮类化合物	苷元型黄酮类化合物增量
					产品1	发酵前的青气、药味显著减弱，花果香味较浓	发酵后：发酵前＝4.5:1	发酵后：发酵前＝0.48:1	发酵后：发酵前＝1.8:1
产品2	发酵前的青气、药味明显减弱，呈花果香味	发酵后：发酵前＝3.9:1	发酵后：发酵前＝0.6:1	发酵后：发酵前＝1.5:1
					产品3	发酵前的青气、药味消失，有花果香味	发酵后：发酵前＝3.4:1	发酵后：发酵前＝0.66:1	发酵后：发酵前＝1.3:1

二、本发明饲料添加剂中主要酶种类（β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、半纤维素酶、β-葡聚糖酶、蛋白酶、糖化酶）活力大小的测定

检测方法：

粗酶液的提取：准确称取本发明银杏叶饲料添加剂1g，加入一定体积的pH值4.8的缓冲溶液，置40℃水浴中浸提60 min，过滤后备用。

β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、半纤维素酶、β-葡聚糖酶活力大小的测定：取0.05 mol/L柠檬酸缓冲溶液1.0 mL、1 %水杨素（或羧甲基纤维素钠、木聚糖、β-葡聚糖）0.5 mL、经适当稀释后的酶液0.5 mL于25 mL的刻度试管中，50 ℃下保温30 min。冷却后分别加入3.0 mL DNS，并用蒸馏水定容到25 mL。混匀，在540 nm条件下比色。定义1 g固体样品在50 ℃、pH值4.8条件下，每分钟水解底物产生1μg葡萄糖（或木糖）所需的酶量为一个酶活单位，酶活力单位为μg/g。

蛋白酶活力的测定参见《酶制剂应用手册》（姜锡瑞主编）。定义1 g固体样品在50 ℃、pH3.0条件下，每分钟水解酪素产生1μg酪氨酸所需的酶量为一个酶活单位。酶活力单位为μg/g。

糖化酶活力的测定参见《酶制剂应用手册》（姜锡瑞主编）。定义1 g固体样品在40 ℃、pH4.6条件下，每小时水解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活单位。酶活力单位为μg/g。

检测结果见表2。

表2 本发明银杏叶饲料添加剂中主要酶的酶活力大小（μg.g^-1）

样品	β-葡萄糖苷酶	纤维素酶	半纤维素酶	β-葡聚糖酶	蛋白酶	糖化酶
							产品1	3760	1109	12500	1460	950	1100
产品2	2600	1398	9850	1000	2196	1620
							产品3	3150	1425	16540	1510	2320	1750

试验例2 本发明银杏叶饲料添加剂的畜禽养殖应用试验

供试样品：本发明实施例1-3所制备的其中一种动物饲料添加剂；使用方法：在基础日粮中添加0.01～1.0％（w/w）本发明饲料添加剂。

一、本发明银杏叶饲料添加剂对仔猪生长性能及仔猪防病抗病（腹泻率）的影响试验

（1）试验方法

饲养试验选用胎次相同或相近，健康、体重较一致、8kg左右的仔猪，按饲养试验要求，并按初始猪的重量相同或相近原则随机分成2组，每组设2个重复，每个重复6头(公母各半)。一组为对照组（不添加供试样品），另一组为试验组（添加供试样品），其中，试验组添加0.2%供试样品。各组的基础日粮相同(不添加任何抗生素药物) ，正试期为 40d。饲养规程均按常规管理与免疫。预试开始日的早晨空腹称重。正试期内，每两周和试验结束时，停喂24 h后早晨空腹称重。试验期间每日观察、记录采食量和腹泻头数。计算试验猪的平均采食量、日增重和料重比。

腹泻率=试验期间每日腹泻头数总和/(试猪头数×试验天数) ×100％

表3 本发明银杏叶饲料添加剂对仔猪生产性能的影响

项目	对照组	试验组
			头数（头）	12	12
平均日增重(kg)	0.32	0.38
			平均日采食量(kg/d.头)	0.77	0.75
料肉（kg/kg）	2.41	1.97
			发病猪头数（头）	5	0
发病率（腹泻率；％）	41.7	0

（2）试验结果：本发明银杏叶饲料添加剂对仔猪生产性能的影响见表3。结果表明，（1）未添加本发明银杏叶饲料添加剂的对照组，平均每头每天增重0.32kg，料肉比2.41。添加本发明银杏叶饲料添加剂的对照组，平均每头每天增重0.38kg，料肉比为1.97。显然，添加本发明银杏叶添加剂有明显促生长作用，提高了饲料报酬。（2）对照组在试验期间有5头猪腹泻，试验组的猪皮发红，毛发亮，无任何病情，说明本发明银杏叶饲料添加剂有较好降低腹泻率的作用。

二、本发明银杏叶饲料添加剂对蛋鸡生产性能及鸡蛋品质的影响试验

（1）试验方法

采用密闭式鸡舍，笼养。同一处理的各重复均匀分布于鸡舍。各组饲养管理方式一致，鸡舍温度15～25℃，湿度60％～70％，自然光照，早晚辅以人工照明，每日恒定光照(40 W白炽灯)20 h。饲喂粉料，自由采食、饮水。试验分为对照组（不添加供试样品）和试验组（添加0.05%供试样品）。试验期间各试验组不使用任何抗生素。按常规防疫程序进行防疫和鸡舍消毒。每天定时饲喂2～4次，每天拣蛋1次。每组鸡每天供料量相同。统计各组鸡产蛋数量、蛋重，计算平均产蛋率和料蛋比，并检测鸡蛋胆固醇含量。

（2）试验结论

将试验数据进行计算、分析，并将结果汇总于表4和表5。从表中可知，与对照组相比，添加本发明银杏叶饲料添加剂在试验期内能较好地提高产蛋率，提高幅度为4.1%，每枚鸡蛋增重5.15g；对照组与试验组料量比分别为1.943和1.793；同时能显著降低鸡蛋中的胆固醇，试验喂35天，胆固醇下降23.24%。

表4 日粮中添加本发明银杏叶饲料添加剂对蛋鸡生产性能的影响

样品	平均产蛋率(%)	平均蛋重(g/枚)	平均耗料量(g/只)	料蛋比
					对照组	89.25	60.90	119.5	1.96
试验组	91.36	63.75	119.5	1.87

注：每组每天供料量相同

表5 日粮中添加本发明银杏叶饲料添加剂对蛋鸡胆固醇含量的影响

对照样胆固醇含量	15d试验样胆固醇含量	35d试验样胆固醇含量
			413mg/100g	376mg/100g	317 mg/100g

三、本发明银杏叶饲料添加剂对奶牛乳房炎的预防效果

（1）试验方法：试验采用对比试验设计方法，将18头乳房炎奶牛随机分为两组试验组（试验A组和试验B组）和一组对照组，每组6头。其中对照组乳房炎奶牛每日使用1次青霉素和链霉素进行治疗；试验A组乳房炎奶牛不采取药物治疗措施，但在奶牛精料中添加0.6%供试样品。试验B组既采用药物治疗，用药种类、用药量和方法同对照组，同时也在奶牛精料中添加0.6%供试样品。试验共计45d，其中预试期5d，正试期40d。

（2）分析判断方法：用温水清洗乳房，抹干后用浸有0.1%新洁尔灭溶液的毛巾擦洗乳房，再用70%乙醇棉球消毒乳头和操作人员的手。将每个乳头的前两把奶废弃，挤出并收集各个乳区的乳样5mL于检验样品盘中，用BMT法对各乳样进行乳房炎检验。将BMT试剂与乳样充分混合后，按表5标准进行判定：

表5 使用奶牛乳房炎诊断液判断乳房炎阳性标准

乳反应现象	诊断分级	判断代号
			混合均匀，无变化	阴性	－
出现凝块和絮状物；液体混浊，粘性较强，或半透明并呈胶冻状	阳性	＋

乳房炎阳性率计算：阳性率（％）＝（阳性乳区数/总乳区数）×100

（3）试验结论

本发明银杏叶饲料添加剂对奶牛乳房炎具有较好的防治效果，无论是单独使用还是与抗生素配合使用均具有显著的效果，优于单独使用抗生素。试验前经乳房触诊检验，试验组与对照组奶牛均有明显乳房肿块，试验进行至30d时，试验组奶牛乳房肿块明显减小，试验结束时，试验组奶牛乳房肿块完全消失，而对照组奶牛直至试验结束时仍然有明显的肿块。试验期内，单独使用本发明银杏叶饲料添加剂的有效率达到85％以上；当与抗生素配合使用，不仅效果显著，而且大大缩短治愈时间，降低了抗生素的使用量以及抗生素在奶牛体内及牛奶中的残留（表6）。

表6 本发明银杏叶饲料添加剂对奶牛乳房炎阳性率的变化

试验时间(d)	对照组	试验A组	试验B组
				预试期	39.81	38.46	41.05
10	37.04	31.15	24.80
				20	32.75	28.40	13.68
30	29.56	12.27	2.56
				40	26.17	5.69	0

Claims

1.一种改善银杏叶饲喂适口性及提高其产品生物活性的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将固体发酵原料与微生物的营养盐溶液混合均匀，灭菌，得到固体发酵基料；其中，所述的固体发酵原料由以下重量份的各成分组成：银杏叶5～8份、食用菌废菌渣1～4份、豆粕1～4份、不超过2份的麸皮或农林废弃物，所述的农林废弃物选自稻草、花生壳、山芋藤或玉米芯中的任意一种或一种以上按任意比例所组成的混合物；

（2）以产β-葡萄糖苷酶的微生物为菌种，将该菌种扩培后接种到步骤（1）所制备的固体发酵基料中进行发酵，所述的产β-葡萄糖苷酶的微生物为黑曲霉（Aspergillus niger）或米曲霉（Aspergillus oryzae）；

（3）完成发酵后的物料干燥，粉碎；

（4）加入香味剂混合均匀，即得产品。

2.根据权利要求1所述的改善银杏叶饲喂适口性及提高其产品生物活性的方法，其特征在于：步骤（1）中所述固体发酵原料的各组成成分的重量份为：粉碎后的银杏叶6～8份、食用菌废菌渣2～3份、豆粕1～2份、不超过1.5份的麸皮。

3.根据权利要求1所述的改善银杏叶饲喂适口性及提高其产品生物活性的方法，其特征在于：步骤（1）所述的微生物营养盐溶液主要采用改进的察氏培养基，组成和质量百分数为：葡萄糖或蔗糖1 %，NaNO₃0.2 %，K₂HPO₄.3H₂O 0.1 %，MgSO₄.7H₂O 0.05 %，余量为蒸馏水；其中，所述的微生物营养盐溶液的pH值为4～7。

4.根据权利要求1所述的改善银杏叶饲喂适口性及提高其产品生物活性的方法，其特征在于：步骤（1）中将固体发酵原料与微生物的营养盐溶液按照1g：1.2～2.0mL的配比比例进行混合。

5.根据权利要求1所述的改善银杏叶饲喂适口性及提高其产品生物活性的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述的接种为利用孢子进行接种或利用液体种子进行接种；其中，用孢子接种时，当制成的孢子悬浮液中孢子的含量为5×10⁶个/mL时，按体积分数计，接种量为0.5～5﹪；用液体种子接种时，按体积比计，接种量为1～5%；发酵条件为：湿度80～90%，温度26～32℃，发酵时间48～96小时。

6.根据权利要求1所述的改善银杏叶饲喂适口性及提高其产品生物活性的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的香味剂组成及在发酵产品中的质量含量包括柠檬酸0.5-4%、香兰素0.5-3%、乙基麦芽酚0.1-2%、乙酸乙酯0.1-0.5%、椰子醛0.1-0.5%和甜味剂0.1-0.5%。

7.权利要求1-6任何一项改善银杏叶饲喂适口性及提高其产品生物活性的方法所得到的产品。

8.权利要求7所述的产品作为饲料添加剂的应用，包括：按w/w计，在基础日粮中添加0.01～1.0％的权利要求7所述的产品，混合均匀，用于牛、猪或鸡养殖用的饲料。