CN101543259B

CN101543259B - 生物饲料添加剂的制备方法

Info

Publication number: CN101543259B
Application number: CN2009100313109A
Authority: CN
Inventors: 曹福亮; 金丽; 杨小虎
Original assignee: Nanjing Forestry University
Current assignee: Nanjing Forestry University
Priority date: 2009-05-08
Filing date: 2009-05-08
Publication date: 2012-05-30
Anticipated expiration: 2029-05-08
Also published as: CN101543259A

Abstract

本发明涉及一种生物饲料添加剂的制备方法，所得生物饲料添加剂用于畜禽养殖，可以有效提高养殖速度和质量。所述生物饲料添加剂的制备方法为：由黄芪、银杏叶、麸皮磨成粉状后，与营养液混合均匀制成固体培养基，经产朊假丝酵母菌发酵，制得生物饲料添加剂，其中黄芪、银杏叶、麸皮的质量比为1∶2～4∶1，营养液的制备方法为：将蔗糖2.47～3g、(NH4)₂SO₄3.29～4g、KH₂PO₄2g、MgSO₄·7H₂O 0.5g溶于水后用水定容至100mL。本发明所得生物饲料添加剂营养丰富，富含多糖、维生素、矿物质、消化酶、促生长因子和较齐全的氨基酸，具有良好的适口性，可以有效提高养殖速度和质量。

Description

生物饲料添加剂的制备方法

技术领域

本发明涉及一种生物饲料添加剂的制备方法，属于动物饲料添加剂领域。

背景技术

我国自古就有中药拌入饲料治病的记载，有数以万计的临床证明有效的药方。中草药属于天然药物，具有促进畜禽生长发育，改善机体免疫机能，防治疾病的作用；同时还具有药源广、价格低、效果好、无副作用、无残留等优点。黄芪性微温，味甘，有补气固表、止汗脱毒、生肌、利尿、退肿之功效。黄芪的化学成分主要有黄酮类、皂苷类和多糖等，银杏叶拥有独特的多种活性成分，如黄酮类、萜内脂类、聚戊烯醇类化合物等药用成分。二者在动物饲料添加剂领域已有应用，效果较好。

酵母培养物在动物饲料中的研究和应用已有多年，在应用方面取得比较好的效果，酵母培养物属于一种微生态制剂，通常指用固体或液体培养基经酵母菌发酵后共同组成的混合物，由细胞物(即酵母菌)、代谢产物和变性培养基三部分组成，它营养丰富，富含多糖、维生素、矿物质、消化酶、促生长因子和较齐全的氨基酸，具有良好的适口性，能够增强免疫力以及促进生长的作用，是集营养、保健为一体的饲料添加剂。单独用液体或固体培养基经发酵菌发酵生产的酵母培养物不够理想，操作烦琐、费时，容易感染杂菌，因此目前一般采用液固态结合发酵工艺。它采用液态培养基制菌种，固态发酵，液体培养后液体中的酵母菌数量较多，然后接种到固体培养基上接种量较大，因此可以加大液态接种量，从而缩短了发酵周期，大大降低了杂菌污染程度，同时采用合理的干燥工艺，有效地保存了产品中的生物活性物质。

尽管如此，随着现代畜禽养殖业的发展，人们生活水平的提高，对于畜禽的养殖速度和质量要求也越来越高，现有的饲料添加剂已不能满足畜禽养殖的要求。

发明内容

本发明提供了一种生物饲料添加剂的制备方法，所得生物饲料添加剂用于畜禽养殖，可以有效提高养殖速度和质量。

所述生物饲料添加剂的制备方法为：由黄芪、银杏叶、麸皮磨成粉状后，与营养液混合均匀制成固体培养基，经产朊假丝酵母菌发酵，制得生物饲料添加剂，其中黄芪、银杏叶、麸皮的质量比为1∶2～4∶1。

所述营养液的制备方法为：将蔗糖2.47～3g、(NH4)₂SO₄3.29～4g、KH₂PO₄2g、MgSO₄·7H₂O0.5g溶于水后用水定容至100mL。营养液的pH值为5.5～6.0，可以用常见的酸、碱性试剂进行调解，如醋酸。所述pH值是为了适应产朊假丝酵母菌的生长要求，对于本领域的普通技术人员而言确定pH值是容易的。

作为本发明的改进，黄芪、银杏叶、麸皮磨成粉状后，过20～40目筛。所述固体培养基的含水率为60％～65％(g/mL)。

所述发酵方法可以采用公知方法，如固体发酵，作为优选方案，用于发酵的产朊假丝酵母菌为经液体培养的种子液。所述种子液中酵母菌的含量优选为6～9×10⁹个/mL。其中产朊假丝酵母菌液体培养方法为现有技术，本领域的普通技术人员可以根据固态发酵条件的要求，确定产朊假丝酵母菌液体培养的条件。

具体地，所述经产朊假丝酵母菌发酵包括如下步骤：

(1)产朊假丝酵母菌扩大培养：将产朊假丝酵母菌种转接到斜面培养基上培养；

(2)产朊假丝酵母菌种子液培养：将步骤(1)得到的产朊假丝酵母菌接种于液体种子培养基中培养得到种子液；

(3)固态发酵培养：将固体培养基灭菌，然后将步骤(2)得到的种子液按7.43～10％的体积比接种到固体培养基上进行培养。

步骤(1)中斜面培养基为PDA培养基，于25～28℃培养20～24h。所述PDA培养基的制备方法为：将马铃薯200g切成小块，放在水中煮沸并维持20～30分钟用双层纱布过滤得马铃薯汁，加入蔗糖15～20g搅拌溶解，再加入琼脂15～20g，继续加热，使琼脂完全融化呈透明状，最后加水定容至1000mL。

步骤(2)中，在25～28℃，180～200rpm的摇床中培养24～30h。所述液体种子培养基的制备方法为：将葡萄糖20g，蛋白胨5～10g，酵母浸膏5～10g溶于水后用水定容至1000mL，得液体培养基于121℃条件下灭菌20min，

步骤(3)将固体培养基于121℃条件下灭菌30min，在温度为28～30℃、湿度为90～100％的条件下培养48～60h。

作为本发明的改进，固体培养基经产朊假丝酵母菌发酵后，于40～50℃下干燥，粉碎后制得生物饲料添加剂。

本发明通过大量实验进行了配方和发酵培养条件的优化，并经重复验证，实验结果一致。所得生物饲料添加剂有如下特点：

1.本饲料添加剂既含有中药黄芪，又含有银杏叶，这两者作为饲料添加剂的应用已经比较广泛，效果较好。

2.混合黄芪和银杏叶细粉，使其在微生物的作用下发酵，使原来不易消化吸收的大分子物质经微生物的转化变成小分子。测定结果表明，发酵后该饲料添加剂蛋白质含量提高了72.06％，总氨基酸提高了20.92％，必需氨基酸提高了28.58％。

3.发酵后，固体培养基就成为酵母培养物，由细胞物、代谢产物和变性培养基三部分组成，含有“促生长因子”，具有良好的适口性，易于肠粘膜吸收，使血液中的有效成分迅速达到有效浓度，可以更好的提高动物的免疫功能。

本发明所得生物饲料添加剂营养丰富，富含多糖、维生素、矿物质、消化酶、促生长因子和较齐全的氨基酸，具有良好的适口性，推荐饲料中添加量为0.1％～0.3％。用于畜禽养殖，可以有效提高养殖速度和质量。

附图说明

图1是本发明工艺流程图。

具体实施方式

制备实施例1

1.选取松针、黄芪、山楂三种中药分别与银杏叶混合进行发酵，选取合适中药及其与银杏叶、麸皮的比例。

2.试验采用二因素完全随机设计，设一个对照，共10个处理，重复3次，试验设计见表1。

表1二因素完全随机设计表

表2不同中药-银杏叶组合的发酵比较

注：不同的小写字母表示差异显著(P＜0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)。

3.试验结果表明，以黄芪-银杏叶-麸皮为发酵原料进行发酵的效果较好(表2)。松针-银杏叶-麸皮发酵后的产物颗粒较粗，有浓郁的松脂味，其中的酵母菌形态较为饱满，但数量不多；黄芪-银杏叶-麸皮发酵后的产物颗粒较细腻，有中药清香，其中的酵母菌有大有小，生长旺盛；山楂-银杏叶-麸皮发酵后的产物颗粒小，粘稠，山楂味很浓，其中的酵母菌较小；银杏叶发酵产物颗粒较细，有酒香味，其中的酵母菌形态饱满。多重比较结果表明，黄芪-银杏叶以1∶4的比例混合发酵所产生的酵母菌数量与其他组合达到了极显著水平。黄芪-银杏叶发酵的培养物中粗蛋白含量与松针-银杏叶、山楂-银杏叶相比都达到了极显著水平。

4.方差分析结果表明，中药种类对酵母培养物中的酵母菌数量和粗蛋白含量都有极显著的影响，而中药与银杏叶、麸皮的比例对两者无显著影响(表3)。从以上结果可以得出，选用黄芪-银杏叶为发酵底物进行发酵较为合适，且黄芪-银杏叶-麸皮的比例为1∶2～4∶1，从经济角度考虑，也可以考虑黄芪-银杏叶-麸皮的比例为1∶4∶1。

表3不同中药-银杏叶组合发酵的方差分析表

制备实施例2

1、将产阮假丝酵母菌种转接到斜面培养基上，于28℃培养20h，上述的斜面培养基为PDA培养基，制备过程如下：200g马铃薯用水煮好后加入蔗糖20g、琼脂10g，混合均匀，再加水定容至1000mL。

2、将步骤(1)得到的产朊假丝酵母在超净工作台接种于液体种子培养基中，摇床(28℃，200rpm)培养24h。液体种子培养基的制备过程如下：将葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母浸膏10g溶于水中，再用水定容至1000mL。液体培养基于121℃条件下灭菌20min。所得种子培养液中酵母菌的含量为9×10⁹个/mL，放入4℃冰箱保存，可保存1个月。

3、将黄芪、银杏叶、麸皮烘干磨成细粉，40目过筛，按黄芪、银杏叶、麸皮比例为1∶4∶1，混合均匀，得到黄芪-银杏叶-麸皮混合料。

4、按比例称取蔗糖3g、(NH4)₂SO₄4g、KH₂PO₄2g、MgSO₄·7H₂O0.5g，溶于水中，定容，用醋酸调节pH值为5.5～6.0，得到营养液100ml。

5、按每6g黄芪-银杏叶-麸皮混合料加入10.2ml营养液将上述两者比混合，搅拌均匀，在121℃条件下灭菌30min。其中，1g黄芪-银杏叶-麸皮混合料的体积为3mL，其本身含水率为10％左右，加入营养液后得到含水量为60％(g/mL)的固体培养基18ml。

6、在无菌工作台将产阮假丝酵母种子液按7.43％的体积比接入已灭菌的固体培养基中进行发酵，控制温度为28℃、湿度为95％，培养60h。

7、将发酵产物40℃干燥，粉碎，就是黄芪-银杏叶生物饲料添加剂。

制备实施例3

1、将产阮假丝酵母菌种转接到斜面培养基上，于25℃培养24h，上述的斜面培养基为PDA培养基，制备过程如下：将马铃薯200g切成小块，放在水中煮沸并维持20～30分钟用双层纱布过滤得马铃薯汁，加入蔗糖15g搅拌溶解，再加入琼脂20g，继续加热，使琼脂完全融化呈透明状，最后加水定容至1000mL。

2、将步骤(1)得到的产朊假丝酵母在超净工作台接种于液体种子培养基中，摇床(25℃，200rpm)培养30h。液体种子培养基配方为：葡萄糖20g，蛋白胨6g，酵母浸膏10g，溶于蒸馏水中定容至1000mL。液体培养基于121℃条件下灭菌20min。所得种子培养液中酵母菌的含量为6×10⁹个/mL，放入4℃冰箱保存，可保存1个月。

3、将黄芪、银杏叶、麸皮烘干磨成细粉，40目过筛，按黄芪、银杏叶、麸皮比例为1∶2∶1，混合均匀，得到黄芪-银杏叶-麸皮混合料。

4、按比例称取蔗糖3g、(NH4)₂SO₄.3.5g、KH₂PO₄2g、MgSO₄·7H₂O0.5g，溶于水后定容，用醋酸调节pH值为5.5～6.0，得到营养液100ml。

5、按每6g黄芪-银杏叶-麸皮加入11.1ml营养液将上述两者比混合，搅拌均匀，在121℃条件下灭菌30min。其中，1g黄芪-银杏叶-麸皮混合料的体积为3mL，其本身含水率为10％左右，加入营养液后得到含水量为65％(g/mL)的固体培养基18ml。

6、在无菌工作台将产阮假丝酵母种子液按10％的体积比接入已灭菌的固体培养基中进行发酵，控制温度为30℃、湿度为90％，培养48h。

应用实施例

下面结合养鸡应用试验对本发明做进一步描述，但本发明的应用方式不限于此。

试验方法如下：

取192只1日龄的三黄杂交肉小鸡做实验。试验分4个组，每组里有3个重复，每个重复16只鸡，4组鸡饲养条件都一致。第1组为对照组，饲喂基础日粮(江苏南通如东鑫龙饲料厂510肉小鸡饲料)，第2组在基础日粮中添加0.2％的黄芪-银杏叶-麸皮原料(未发酵，与制备实施例1中比例相同，磨成粉状后，过20～40目筛，混合均匀)，第3、4组分别为在基础日粮中添加0.2％的制备实施例2、制备实施例3所得黄芪-银杏叶生物饲料添加剂。试验期为35天，试验鸡自由饮水，专人负责，让鸡自由采食以吃饱不剩料为度，注意防疫工作。试验开始和结束称取每组中的每个重复鸡只的重量，统计耗料量，计算增重和料肉比。试验结束后分别从每个重复随机抽取3只鸡，翅静脉采血2ml，分离血清-20℃保存待测。每个重复屠宰3只鸡，测定屠宰性能和免疫器官指数。

实验结果如表4～8所示，结果表明：饲喂本发明所得生物饲料添加剂能有效提高肉小鸡的平均日增重、饲料转化率和屠宰性能，对肉小鸡的抗氧化能力、免疫能力都有重要影响，还有效提高了饲料中蛋白质的利用效率，降低了肉小鸡血清中胆固醇的含量。

表4各组肉小鸡生长性能比较

表5各组肉小鸡血清指标的比较

表6各组肉小鸡屠宰性能比较

表7各组肉小鸡鸡肉营养成分比较

表8各组肉小鸡免疫器官指数比较

Claims

1.一种生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于由黄芪、银杏叶、麸皮磨成粉状后，与营养液混合均匀制成固体培养基，经产朊假丝酵母菌发酵，制得生物饲料添加剂，其中黄芪、银杏叶、麸皮的质量比为1∶2～4∶1，所述营养液的制备方法为：将蔗糖2.47～3g、(NH4)₂SO₄3.29～4g、KH₂PO₄ 2g、MgSO₄·7H₂O 0.5g溶于水后用水定容至100mL，所述经产朊假丝酵母菌发酵包括如下步骤：

(2)产朊假丝酵母菌种子液培养：将步骤(1)得到的产朊假丝酵母菌接种于液体种子培养基中培养得到种子液，所述种子液中酵母菌的含量为6×10⁹～9×10⁹个/mL；

(3)固态发酵培养：将固体培养基灭菌，然后将步骤(2)得到的种子液按7.43～10％的体积比接种到固体培养基上在温度为28～30℃、湿度为90～100％的条件下培养48～60h。

2.如权利要求1所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于黄芪、银杏叶、麸皮磨成粉状后，过20～40目筛。

3.如权利要求1所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于。

4.如权利要求4所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于。

如权利要求5所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于

5.如权利要求6所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于步骤(1)中斜面培养基为PDA培养基，于25～28℃培养20～24h。

6.如权利要求6所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于所述PDA培养基的制备方法为：将马铃薯200g切成小块，放在水中煮沸并维持20～30分钟用双层纱布过滤得马铃薯汁，加入蔗糖15～20g搅拌溶解，再加入琼脂15～20g，继续加热，使琼脂完全融化呈透明状，最后加水定容至1000mL。

7.如权利要求6所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于步骤(2)，所述液体种子培养基的制备方法为：将葡萄糖20g，蛋白胨5～10g，酵母浸膏5～10g，溶于水后用水定容至1000mL，所得液体培养基于121℃条件下灭菌20min。

8.如权利要求6所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于步骤(2)是在25～28℃，180～200rpm的摇床中培养24～30h。

9.如权利要求6所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于步骤(3)中将固体培养基于121℃条件下灭菌30min。

10.如权利要求1-12中任一项所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于所述营养液的pH值为5.5～6.0。

11.如权利要求1-12中任一项所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于固体培养基的含水率为60％～65％(g/mL)。

12.如权利要求1-12中任一项所述的生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于固体培养基经产朊假丝酵母菌发酵后，于40～50℃干燥，粉碎后制得生物饲料添加剂。