CN104771419B - 一种银杏叶发酵制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种银杏叶发酵制剂的制备方法，取地衣芽孢杆菌、嗜热乳杆菌、产朊假丝酵母分别进行扩培至含菌量为109～1010个/mL；取所得各菌液混合形成复合菌液，将复合菌液按5％接种量接至35～37℃温水中搅拌、活化培养20～30min，且温水中含总发酵物料8～10％m/v的红糖；将活化培养所得的菌液与银杏叶45～48％m/v、硫酸铵4～5％m/v、维生素C 0.1～0.2％m/v、硫酸钾0.1～0.2％m/v混合均匀，并补充水分至含水量40～50％m/v，接着于20～35℃下生料发酵10～15d，即得银杏叶发酵制剂。本发明发酵制剂具有较高的益生菌含量、适口性良好及营养成分丰富的特点。
Description
【技术领域】
本发明涉及一种生物制剂制备方法，具体涉及一种银杏叶发酵制剂的制备方法。
【背景技术】
银杏(Ginkgo biloba L.)是世界上最古老的孑遗植物，为我国特有珍稀树种，分布广泛，资源丰富。银杏的药用价值主要体现在其叶和果实，我国宋朝时民间就使用银杏叶治疗哮喘和支气管炎等疾病。
自20世纪60年代起，国内外学者对银杏叶的化学成分、药理作用、药物功效等进行了大量相关研究，结果表明银杏叶化学成分复杂，种类较多，许多成分具有重要的生理功能及活性。到目前为止，从银杏叶分离出的化学活性成分有160余种，包括银杏黄酮类、有机酸类、萜内酯类、烷基酚酸类、银杏酚类、醇类及甾类等。银杏叶的食用安全性也较高，目前以银杏叶及提取物为原料的药物和保健食品等已经大量上市；特别是近年来银杏叶作为饲料添加剂，在畜禽饲养方面有了一定的运用，能起到促进畜禽肠胃吸收、促生长、增强免疫力等功效，其作为一种新型饲料添加剂在畜牧业中具有广阔的开发应用前景。而银杏叶的相关开发，主要以银杏叶提取物为主，但银杏叶传统溶剂浸提法提取提取物既造成了大量有效成分的损失，也无法保证产品的纯天然性，而利用微生物发酵银杏叶制成微生物发酵剂，既克服了传统方法的缺点，又使银杏叶功效的成分得到更好的直接释放。
但从国内外资料调查可知，目前利用微生物发酵银杏叶制成的微生物发酵剂通常存在着如下缺陷：发酵剂中益生菌含量有限、适口性差、且营养成分不够丰富，从而使得该发酵剂得不到更为广泛的应用。
【发明内容】
本发明所要解决的技术问题在于提供一种银杏叶发酵制剂的制备方法，其所制得的发酵制剂具有较高的益生菌含量、适口性良好及营养成分丰富的特点，从而使得该发酵制剂具有更为广泛的应用前景。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种银杏叶发酵制剂的制备方法，该制备方法具体包括如下操作：
(1)菌株的扩培：取地衣芽孢杆菌、嗜热乳杆菌、产朊假丝酵母分别进行扩培至含菌量为109～1010个/mL，分别得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液，备用；
(2)活化培养：取(1)中所得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液并以2:2:1的体积比混合形成复合菌液，之后将复合菌液按5％接种量接至35～37℃温水中，搅拌、活化培养20～30min，且该温水中含总发酵物料8～10％m/v的红糖；
(3)发酵培养：活化培养后，将活化培养所得的菌液与银杏叶45～48％m/v、硫酸铵4～5％m/v、维生素C 0.1～0.2％m/v、硫酸钾0.1～0.2％m/v混合均匀，并补充水分至含水量40～50％m/v，接着用呼吸膜包装、密封，并于20～35℃下生料发酵10～15d，即得所述的银杏叶发酵制剂。
进一步地，所述含水量为45％m/v；发酵时间为15d，发酵温度为30℃。
进一步地，所述地衣芽孢杆菌扩培采用的培养基为LB培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、pH 7.2-7.6；嗜热乳杆菌扩培采用的培养基为MRS培养基：牛肉蛋白粉10g/L、鱼肉汁10g/L、酵母浸出汁粉5g/L、葡萄糖20g/L、醋酸钠5g/L、柠檬酸二铵2g/L、吐温800.1g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰28g/L、pH 6.0-6.4；产朊假丝酵母扩培采用的培养基为YPD培养基：葡萄糖20g/L,蛋白胨20g/L,酵母膏10g/L，pH5.0-5.5。
本发明一种银杏叶发酵制剂的制备方法的有益效果在于：提供一种银杏叶发酵制剂的制备方法，其以银杏叶为发酵基质，通过筛选获取优良的发酵菌株进行发酵，不仅制备方法简单易行、成本低、可操作性强，而且所得的发酵制剂中的粗蛋白、氨基酸含量显著上升，即发酵制剂具有益生菌含量高、适口性好、及营养丰富的特点，从而使得该发酵制剂具有更为广泛的应用前景。
【具体实施方式】
本发明一种银杏叶发酵制剂的制备方法，该制备方法具体包括如下操作：
(1)菌株的扩培：取地衣芽孢杆菌、嗜热乳杆菌、产朊假丝酵母分别进行扩培至含菌量为109～1010个/mL，分别得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液，备用；各菌的扩培采用的培养液分别是：地衣芽孢杆菌扩培采用的培养基为LB培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、pH 7.2-7.6；嗜热乳杆菌扩培采用的培养基为MRS培养基：牛肉蛋白粉10g/L、鱼肉汁10g/L、酵母浸出汁粉5g/L、葡萄糖20g/L、醋酸钠5g/L、柠檬酸二铵2g/L、吐温800.1g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰28g/L、pH 6.0-6.4；产朊假丝酵母扩培采用的培养基为YPD培养基：葡萄糖20g/L,蛋白胨20g/L,酵母膏10g/L，pH 5.0-5.5；
(2)活化培养：取(1)中所得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液并以2:2:1的体积比混合形成复合菌液，之后将复合菌液按5％接种量接至35～37℃温水中，搅拌、活化培养20～30min，且该温水中含总发酵物料8～10％m/v的红糖；
(3)发酵培养：活化培养后，将活化培养所得的菌液与银杏叶45～48％m/v、硫酸铵4～5％m/v、维生素C 0.1～0.2％m/v、硫酸钾0.1～0.2％m/v混合均匀，并补充水分至含水量40～50％m/v，接着用呼吸膜包装、密封，并于20～35℃下生料发酵10～15d，即得所述的银杏叶发酵制剂。
实验室为了得到发酵培养的最优条件，采用L934正交表进行优化试验，筛选得到发酵培养的最优条件为：含水量为45％m/v；发酵时间为15d，发酵温度为30℃。
为了更好的对本发明进行说明，本发明举了如下几个实施例。
实施例1
取地衣芽孢杆菌、嗜热乳杆菌、产朊假丝酵母分别进行扩培至含菌量为109个/mL，分别得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液，备用；取所得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液并以2:2:1的体积比混合形成复合菌液，之后将复合菌液按5％接种量接至35℃温水中，搅拌、活化培养25min，且该温水中含总发酵物料8％m/v的红糖；活化培养后，将活化培养所得的菌液与银杏叶45％m/v、硫酸铵4.8％m/v、维生素C 0.1％m/v、硫酸钾0.1％m/v混合均匀，并补充水分至含水量42％m/v，每个实施例最终成分加和为100％，接着用呼吸膜包装、密封，并于30℃下生料发酵15d，即得银杏叶发酵制剂。
实施例2
取地衣芽孢杆菌、嗜热乳杆菌、产朊假丝酵母分别进行扩培至含菌量为1010个/mL，分别得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液，备用；取所得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液并以2:2:1的体积比混合形成复合菌液，之后将复合菌液按5％接种量接至37℃温水中，搅拌、活化培养30min，且该温水中含总发酵物料10％m/v的红糖；活化培养后，将活化培养所得的菌液与银杏叶45％m/v、硫酸铵4.7％m/v、维生素C 0.15％m/v、硫酸钾0.15％m/v混合均匀，并补充水分至含水量40％m/v，每个实施例最终成分加和为100％，接着用呼吸膜包装、密封，并于20℃下生料发酵12d，即得银杏叶发酵制剂。
实施例3
取地衣芽孢杆菌、嗜热乳杆菌、产朊假丝酵母分别进行扩培至含菌量为1010个/mL，分别得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液，备用；取所得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液并以2:2:1的体积比混合形成复合菌液，之后将复合菌液按5％接种量接至36℃温水中，搅拌、活化培养20min，且该温水中含总发酵物料9％m/v的红糖；活化培养后，将活化培养所得的菌液与银杏叶41％m/v、硫酸铵4.6％m/v、维生素C 0.2％m/v、硫酸钾0.2％m/v混合均匀，并补充水分至含水量45％m/v，每个实施例最终成分加和为100％，接着用呼吸膜包装、密封，并于35℃下生料发酵10d，即得银杏叶发酵制剂。
为了验证本发明制备方法所制得的发酵制剂的营养成分等特性，申请人对其进行了感官评定及营养分析，具体地，选定实施例1所制备的发酵制剂，并与发酵前的营养成分进行对比分析，所得结果如下表1所示。
表1发酵制剂感官评定及营养分析结果
由表1的结果表明：发酵后发酵复合菌株大量生长，嗜热乳杆菌产生了乳酸的香味，并且地衣芽孢杆菌、产朊假丝酵母将银杏叶中的纤维、黄酮的分解，使其发酵物质中的粗蛋白、氨基酸含量显著上升，提高了产品的益生菌含量、适口性及营养成分。
综上，本发明提供一种银杏叶发酵制剂的制备方法，通过原料选取，以银杏叶为发酵基质，筛选并配比几种特定的菌株为发酵菌株进行发酵，且发酵方式具有特殊性即发酵过程先包装后发酵，从而使得制备方法简单易行、成本低、可操作性强，而且所得的发酵制剂中的粗蛋白、氨基酸含量显著上升，即发酵制剂具有益生菌含量高、适口性好、及营养丰富的特点，从而使得该发酵制剂具有更为广泛的应用前景。
Claims (3)
1.一种银杏叶发酵制剂的制备方法，其特征在于：该制备方法具体包括如下操作：
(1)菌株的扩培：取地衣芽孢杆菌、嗜热乳杆菌、产朊假丝酵母分别进行扩培至含菌量为109～1010个/mL，分别得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液，备用；
(2)活化培养：取(1)中所得地衣芽孢杆菌菌液、嗜热乳杆菌菌液、产朊假丝酵母菌液并以2:2:1的体积比混合形成复合菌液，之后将复合菌液按5％接种量接至35～37℃温水中，搅拌、活化培养20～30min，且该温水中含总发酵物料8～10％m/v的红糖；
(3)发酵培养：活化培养后，将活化培养所得的菌液与银杏叶45～48％m/v、硫酸铵4～5％m/v、维生素C 0.1～0.2％m/v、硫酸钾0.1～0.2％m/v混合均匀，并补充水分至含水量40～50％m/v，接着用呼吸膜包装、密封，并于20～35℃下生料发酵10～15d，即得所述的银杏叶发酵制剂。
2.根据权利要求1所述的一种银杏叶发酵制剂的制备方法，其特征在于：所述含水量为45％m/v；发酵时间为15d，发酵温度为30℃。
3.根据权利要求1所述的一种银杏叶发酵制剂的制备方法，其特征在于：所述地衣芽孢杆菌扩培采用的培养基为LB培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、pH7.2-7.6；嗜热乳杆菌扩培采用的培养基为MRS培养基：牛肉蛋白粉10g/L、鱼肉汁10g/L、酵母浸出汁粉5g/L、葡萄糖20g/L、醋酸钠5g/L、柠檬酸二铵2g/L、吐温800.1g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰28g/L、pH 6.0-6.4；产朊假丝酵母扩培采用的培养基为YPD培养基：葡萄糖20g/L,蛋白胨20g/L,酵母膏10g/L，pH 5.0-5.5。
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