CN101708031B - 一种抗应激促生长饲料添加剂的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗应激促生长饲料添加剂的生产方法，属于微生物发酵工程技术领域。该方法包括：(1)酿酒酵母种子液的培养；(2)蜜环菌种子液的培养；(3)酿酒酵母和蜜环菌混合发酵生产液的制备；(4)混合发酵生产液的吸附处理与包装等工艺步骤。本发明以豆粕、玉米粉等廉价、易得农付产品为主要原料，经菌种液体混合发酵工艺生产而成，具有生产成本低，效果好、安全，无残留，抗应激，促生长等作用。本发明饲料添加剂可在畜、禽养殖业和饲料生产企业中推广应用。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵工程技术领域，具体涉及一种以蜜环菌和酿酒酵母混合发酵生产抗应激促生长饲料添加剂的方法。
技术背景
所谓应激(Stress)是动物机体对外界或内部的各种异常刺激所产生的非特异性应答反应。畜禽在其整个生产过程中要承受各种各样的而且相当大的应激，这些因素包括：周围环境发生突然变化、日粮突然发生改变、饲料中含有有毒成分(如霉菌毒素)，环境气温(高温、寒冷)和湿度(潮湿)等的变化，或为防止传染病的传播而使用各种预防药物和接种疫苗，这些都是产生应激的重要来源。通常认为应激通过神经系统并引起神经、内分泌、免疫等各中枢系统的一系列变化来完成，这些变化将重新调整机体的内环境平衡状态，以对抗和适应应激原的作用。但这种内环境的变动，常常是以增加功能器官负荷或消耗自身防御机制为代价，因此过度强烈或长时间的应激将造成机体适应能力下降或适应潜能耗竭，表现为厌食、生长停滞、体重下降、饲料转化率降低、机体免疫力降低、疾病发生，将严重影响动物的生产成绩。但在养殖过程中畜禽发生各种不同程度的应激是不可避免的，由于应激畜牧业生产每年的损失是巨大的。为解决这一问题，生产上已研制开发出多种抗应激的添加剂。目前市场上常用的抗应激添加剂为安定止痛类镇静剂(如氯丙嗪、巴比妥、安定等)，这类药物效果虽好，但具有毒副作用和药物残留，因此只允许用于兽医治疗，而不允许以饲料、饮水方式给予。此外，参与糖类代谢的物质(琥珀酸、苹果酸、延胡索酸、柠檬酸等)，缓解酸中毒和维持酸碱平衡的物质(NaHCO3、NH4CL、KCL等)，微量元素(锌、硒等)，微生态制剂、中草药制剂、维生素制剂(VC、VB、VE)及抗生素(杆菌肽锌、黄霉素、维吉尼亚霉素)等，上述几类添加剂主要是通过额外添加营养物质或抗生素等以抵消应激造成的危害，但这些添加剂其作用一直存在不稳定性，有些还存在添加过量易引发其它危害、有些还存在残留和副作用等(如安定止痛类镇静剂、抗生素)。
蜜环菌(Armillariella mellea)是一种食、药两用的食用菌，属天麻共生真菌，大量的研究表明其发酵物具有与天麻类似的药理作用，对神经系统的镇静、抗惊厥作用是明确有效的，并由此已开发出“脑心舒”、“天麻蜜环菌片”等保健品和药品，是一种无任何毒副作用的绿色产品。其能通过对中枢神经系统的调节作用达到镇定安神的效果，以阻止不良应激对机体产生的危害发生。
酿酒酵母(Saccharomyces cercvisiae)是一种可食用微生物，也是常用的微生态制剂菌种，该菌的发酵培养物中除包含有酵母细胞和细胞外的代谢产物及自溶产物外，如肽、有机酸、寡糖、氨基酸、增味物质和芳香物质等，还包含有许多经实践证明对畜禽生长有益的“未知生长因子”。经长达几十年的科学研究和生产应用实践证明，酵母发酵培养物可有效地调节动物肠道中微生物的数量和比例，抑制病原体的生存，改善动物健康状态，从而明显提高了饲养动物的生产力水平。
以往酵母发酵培养物作为饲料添加剂在市场上已有多种产品，但将蜜环菌发酵物作为饲料添加剂或将上述蜜环菌与酿酒酵母两菌种共同发酵的发酵产物，作为饲料添加剂及其制备方法尚未见有报道。
发明内容
本发明目的是，针对以往在解决饲养动物应激反应添加剂中所存在的不稳定性、药物残留及其它毒副作用的问题，提出一种生产成本低、添加效果好、安全、稳定，对饲养动物神经系统具有镇静、抗惊厥和促生长作用的抗应激促生长饲料添加剂的生产方法。
本发明目的通过以下技术方案来实现。
一种抗应激促生长饲料添加剂的生产方法，该方法按以下步骤进行：
(1)酿酒酵母(Saccharomyces cercvisiae)菌株2.1952的种子液培养：将酿酒酵母原始斜面菌种接入试管种子培养基内，经26～28℃静止培养24～30h后成为试管种子；按3～5％接种量将试管种子接入三角瓶种子培养基中，经26～28℃静止培养20～24h后成为三角瓶种子；按10％接种量将三角瓶种子接入卡氏罐种子培养基中，经26～28℃静止培养16～20h成为酿酒酵母发酵种子液，备用；所述试管、三角瓶及卡氏罐的种子培养基均为10°Bx糖化麦芽汁培养基；
(2)蜜环菌(Armillariella mellea)菌株5.146的种子液培养：将蜜环菌母种接入三角瓶种子培养基中，经26～28℃，180～200rpm摇床培养6～7d后成为三角瓶种子；按5～10％接种量将三角瓶种子接入一级种子罐的培养基中，经26～28℃、180～200rpm、通气量为1∶0.4～0.6的条件下培养48～72h后成为一级种子罐种子；按5～10％接种量将一级种子罐种子接入二级种子罐的培养基中，在同上条件下培养48～72h成蜜环菌发酵种子液，备用；所述三角瓶、一级种子罐及二级种子罐的培养基均由玉米粉20～30g/L、豆粕粉10～20g/L、葡萄糖10～15g/L、硫酸铵3～5g/L、磷酸二氢钾1.5～2.0g/L和硫酸镁0.5～1.0g/L，经121℃，灭菌20min制备而成；
(3)酿酒酵母和蜜环菌混合发酵生产液的制备：取步骤(2)蜜环菌发酵种子液，按10％接种量接入生产罐生产发酵培养基中，经26～28℃、180～200rpm、通气量1∶0.6～0.8条件下发酵培养24h；再将步骤(1)酿酒酵母发酵种子液按2～4％接种量接入生产罐生产发酵培养基中，在同上条件下继续发酵培养24～36h成酿酒酵母和蜜环菌的混合发酵生产液；所述生产发酵培养基为：玉米粉40～60g/L、豆粕粉15～25g/L、葡萄糖15～20g/L、尿素4.0～6.0g/L、磷酸二氢钾1.5～2.0g/L和硫酸镁0.5～1.0g/L，灭菌条件：121℃，20min；
(4)混合发酵生产液的吸附处理与包装：将步骤(3)混合发酵生产液与玉米芯粉按体积重量1～2升∶1公斤的比例混合进行吸附处理后，在不高于40℃条件下烘干、粉碎、包装成产品。
本发明饲料添加剂的使用方法为，按重量0.1～0.3％比例加入畜禽饲料中，混合均匀即可。
本发明的有益效果是：
一、本发明饲料添加剂由于具有中枢神经系统镇静作用，能抑制受到应激动物的皮质激素的分泌，从而起到抗应激的效果并抑制不良应激引起的危害发生，同时可改善动物的健康状态并提高动物的生产力水平，且饲用后亦无药物残留及其它毒副作用。由实施例4表1可看出，添加本发明抗应激促生长饲料添加剂后，试验组仔猪的尿素氮和血糖浓度两指标的测定值均小于对照组；同时还能增加采食量，在料肉比相当的情况下，日增重明显提高，故又起到了促进生长的作用。
二、本发明饲料添加剂以豆粕、玉米粉及玉米芯粉等廉价、易得农付产品为主要原料，经菌种液体发酵生产而成，具有生产成本低，饲养效果好、安全、无副作用等特点，可在畜、禽饲料生产企业和畜禽饲养专业户中推广应用。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明，但其发明内容并不受这些实例所限止。
本发明采用的酿酒酵母(Saccharomyces cercvisiae)菌株2.1952，和蜜环菌(Armillariella mellea)菌株5.146，均从中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)引进。
实施例1：(一种抗应激促生长饲料添加剂的生产方法1)
按以下步骤进行：
(1)酿酒酵母(Saccharomyces cercvisiae)菌株2.1952种子液培养：将酿酒酵母原始斜面菌种接入试管种子培养基内，经26～28℃静止培养30h后成为试管种子；按3％的接种量将试管种子接入三角瓶种子培养基中，经26～28℃静止培养24h后成为三角瓶种子；按10％的接种量将三角瓶种子接入卡氏罐种子培养基中，经26～28℃静止培养20h成酿酒酵母发酵种子液，备用；上述试管、三角瓶及卡氏罐的种子培养基均采用10°Bx糖化麦芽汁培养基；
所述10°Bx糖化麦芽汁培养基的制备方法：取大麦芽一定数量，粉碎，加4倍于麦芽重量的60℃水，在55～60℃保温糖化，不断搅拌，经3～4小时后，用纱布过滤，除去残渣，煮沸后用滤纸过滤一次，即得澄清麦芽汁，再加水稀释成10°Bx麦芽汁；灌装后121℃、灭菌20分钟即得10°Bx糖化麦芽汁培养基；
(2)蜜环菌(Armillariella mellea)菌株5.146种子液培养：将蜜环菌母种接入500ml三角瓶培养基中，经26～28℃，180～200rpm摇床培养7d后成三角瓶种子；按10％接种量将三角瓶种子接入一级种子罐培养基中，经26～28℃、180～200rpm、通气量为1∶0.4的条件下培养72h后成为一级种子罐种子；按8％接种量将一级种子罐种子接入二级种子罐培养基中，在同上条件下培养48h后成蜜环菌发酵种子液，备用；上述三角瓶、一级种子罐及二级种子罐的培养基组成相同，均为：玉米粉20g/L、豆粕粉20g/L、葡萄糖15g/L、硫酸铵4g/L、磷酸二氢钾2.0g/L和硫酸镁0.5g/L，灭菌条件：121℃，20min；
(3)酿酒酵母和蜜环菌混合发酵生产液的制备：取步骤(2)蜜环菌发酵种子液，按10％接种量接入生产罐的生产发酵培养基中，经26～28℃、180～200rpm、通气量1∶0.6条件下发酵培养24h后；再将步骤(1)酿酒酵母发酵种子液按2％接种量接入生产罐发酵培养基中，在同上条件下继续发酵培养36h成酿酒酵母和蜜环菌的混合发酵生产液；所述生产发酵培养基为：玉米粉60g/L、豆粕粉15g/L、葡萄糖15g/L、尿素6.0g/L、磷酸二氢钾1.8g/L和硫酸镁0.5g/L，灭菌条件：121℃，20min；
(4)混合发酵生产液的吸附处理与包装：将步骤(3)混合发酵生产液与玉米芯粉按体积重量1升∶1公斤比例混合进行吸附处理后，在40℃条件下烘干、粉碎、包装成产品。
实施例2.(一种抗应激促生长饲料添加剂的生产方法2)
本例中，步骤(1)酿酒酵母的种子液培养：接种后的试管种子培养基经26～28℃静止培养27h后；按4％的接种量接入三角瓶种子培养基中，经26～28℃静止培养22h后；按10％的接种量接入卡氏罐种子培养基中，经26～28℃静止培养18h成酿酒酵母发酵种子液；步骤(2)蜜环菌的种子液培养：接种后的三角瓶培养基经26～28℃，180～200rpm摇床培养6.5d后；按8％接种量接入一级种子罐的培养基中，经26～28℃、180～200rpm、通气量为1∶0.5培养60h后；按10％接种量接入二级种子罐的培养基，在同上条件下培养60h成蜜环菌发酵种子液；培养基组成均相同：玉米粉25g/L、豆粕粉15g/L、葡萄糖13g/L、硫酸铵5g/L、磷酸二氢钾1.7g/L和硫酸镁0.8g/L，灭菌条件：121℃，20min；步骤(3)混合发酵生产液的制备：取步骤(2)蜜环菌发酵种子液，按10％接种量接入到生产发酵培养基中，经26～28℃、180～200rpm、通气量为1∶0.7的条件下发酵培养24h；再将步骤(1)酿酒酵母发酵种子液按3％接种量接入到生产罐生产发酵培养基中，在同上条件下继续发酵培养30h成混合发酵生产液；生产发酵培养基为：玉米粉50g/L、豆粕粉20g/L、葡萄糖18g/L、尿素5.0g/L、磷酸二氢钾2.0g/L和硫酸镁0.7g/L，灭菌条件：121℃，20min；步骤(4)吸附处理与包装：将步骤(3)生产的混合发酵生产液与玉米芯粉按体积重量1.5升∶1公斤的比例混合后，在39℃条件下烘干、粉碎、包装成产品；其余步骤工艺同实施例1。
实施例3.(一种抗应激促生长饲料添加剂的生产方法3)
本例中，步骤(1)酿酒酵母种子液培养：接种后的试管种子培养基经26～28℃静止培养24h后；按5％接种量接入三角瓶种子培养基中，经26～28℃静止培养20h后；按10％接种量接入卡氏罐种子培养基中，26～28℃静止培养16h成酿酒酵母发酵种子液；步骤(2)蜜环菌种子液培养：接种后的三角瓶培养基经26～28℃，180～200rpm摇床培养6.0d后；按5％接种量接入一级种子罐的培养基中，经26～28℃、180～200rpm、通气量为1∶0.6的条件下培养48h后；按5％接种量接入二级种子罐的培养基中，在同上条件下培养72h成蜜环菌发酵种子液；培养基组成均相同：玉米粉30g/L、豆粕粉10g/L、葡萄糖10g/L、硫酸铵3g/L、磷酸二氢钾1.5g/L和硫酸镁1.0g/L，灭菌条件：121℃，20min；步骤(3)混合发酵液生产的制备：取步骤(2)蜜环菌发酵种子液按10％接种量接入生产发酵培养基中，经26～28℃、180～200rpm、通气量1∶0.8条件下发酵培养24h；再将步骤(1)酿酒酵母种子液按4％接种量接入生产发酵罐培养基中，在同上条件下继续发酵培养24h成混合发酵生产液；生产发酵培养基为：玉米粉40g/L、豆粕粉25g/L、葡萄糖20g/L、尿素4g/L、磷酸二氢钾1.5g/L和硫酸镁1.0g/L，灭菌条件：121℃，20min；步骤(4)吸附处理与包装：将步骤(3)生产的混合发酵生产液与玉米芯粉按体积重量2.0升∶1公斤的比例混合后，在40℃条件下烘干、粉碎、包装成产品；其余步骤工艺同实施例1。
实施例4：(断奶仔猪喂养抗应激添加剂效果对比试验)
本例中采用的预混料：由浙江省农业科学院畜牧兽医研究所生产并提供：
本试验选用35日龄断奶三元杂交仔猪106头，分为试验与对照二个处理组；
对照组日粮配方为：玉米60.8％、豆粕15.0％、膨化大豆10.0％、鱼粉(秘鲁)5.0％、乳清粉6.0％、磷酸氢钙1.2％、石粉0.6％、盐0.3％、赖氨酸0.1％、预混料1.0％(预混料中的抗生素为黄霉素和金霉素)；
试验组日粮配方为：在对照组日粮配方基础上添加0.2％实施例1的饲料添加剂；
分别于添加后35天统计测定各组仔猪生长性能，并从每处理组随机取5头仔猪测定其相关血清生化参数的水平；结果见表1。
分栏和日粮的突然变化对断奶仔猪来说是一很大的应激，在应激反应中，家畜的中枢神经系统在应激原的作用下最终引起下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴和交感-肾上腺轴的激活，使糖皮质激素的分泌增加，促进蛋白质的分解代谢，造成尿素氮的增加，同时提高血糖浓度。由表1可看出，添加实施例1抗应激促生长饲料添加剂后，由于能对中枢神经系统起到镇静作用，从而抑制皮质激素的分泌，从而起到抗应激的效果，故试验组仔猪的尿素氮和血糖浓度两指标的测定值均小于对照组；本添加剂同时由于能增加采食量，在料肉比相当的情况下，日增重明显提高，故又起到了促进生长的作用。
表1不同处理组的仔猪生产性能、血清学指标的影响
Claims (1)
1.一种断奶仔猪抗应激促生长饲料添加剂的生产方法，其特征在于按以下步骤进行：
(1)酿酒酵母(Saccharomyces cercvisiae)菌株2.1952的种子液培养：将酿酒酵母原始斜面菌种接入试管种子培养基内，经26～28℃静止培养24～30h后成为试管种子；按3～5％接种量将试管种子接入三角瓶种子培养基中，经26～28℃静止培养20～24h后成为三角瓶种子；按10％接种量将三角瓶种子接入卡氏罐种子培养基中，经26～28℃静止培养16～20h成为酿酒酵母发酵种子液，备用；所述试管、三角瓶及卡氏罐的种子培养基均为10°Bx糖化麦芽汁培养基；
(2)蜜环菌(Armillariella mellea)菌株5.146的种子液培养：将蜜环菌母种接入三角瓶种子培养基中，经26～28℃，180～200rpm摇床培养6～7d后成为三角瓶种子；按5～10％接种量将三角瓶种子接入一级种子罐的培养基中，经26～28℃、180～200rpm、通气量为1∶0.4～0.6的条件下培养48～72h后成为一级种子罐种子；按5～10％接种量将一级种子罐种子接入二级种子罐的培养基中，在同上条件下培养48～72h成蜜环菌发酵种子液，备用；所述三角瓶、一级种子罐及二级种子罐的培养基均由玉米粉20～30g/L、豆粕粉10～20g/L、葡萄糖10～15g/L、硫酸铵3～5g/L、磷酸二氢钾1.5～2.0g/L和硫酸镁0.5～1.0g/L，经121℃，灭菌20min制备而成；
(3)酿酒酵母和蜜环菌混合发酵生产液的制备：取步骤(2)蜜环菌发酵种子液，按10％接种量接入生产罐生产发酵培养基中，经26～28℃、180～200rpm、通气量1∶0.6～0.8条件下发酵培养24h；再将步骤(1)酿酒酵母发酵种子液按2～4％接种量接入生产罐生产发酵培养基中，在同上条件下继续发酵培养24～36h成酿酒酵母和蜜环菌的混合发酵生产液；所述生产发酵培养基为：玉米粉40～60g/L、豆粕粉15～25g/L、葡萄糖15～20g/L、尿素4.0～6.0g/L、磷酸二氢钾1.5～2.0g/L和硫酸镁0.5～1.0g/L，灭菌条件：121℃，20min；
(4)混合发酵生产液的吸附处理与包装：将步骤(3)混合发酵生产液与玉米芯粉按体积重量1～2升∶1公斤的比例混合进行吸附处理后，在不高于40℃条件下烘干、粉碎、包装成产品。
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