CN102283850A - 一种水包油型复方酮康唑纳米药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种水包油型复方酮康唑纳米药物，该药物的粒径在1～100nm之间，由下述质量百分比的原料组成：酮康唑0.01%～8.0%、丁香酚0.01%～10%、丙酸氯倍他索0.001%～5.0%、表面活性剂25.0%～45.0%、助表面活性剂0～10.0%、油0.1%～25.0%、其余量为蒸馏水。该药物能够治疗顽固性皮肤真菌感染，念珠菌病、慢性皮肤粘膜念珠菌病、皮炎芽生菌病、球孢子菌病、组织胞浆菌病、着色真菌病、副球孢子菌病，由皮肤真菌和酵母菌所致的皮肤真菌病、花斑癣及发癣，皮肤炎症和瘙痒症。该药物渗透性强，稳定性好，侵润性好，作用时间持久，效果显著，成本低且制备方法简单，便于推广应用。

Description

一种水包油型复方酮康唑纳米药物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种酮康唑、丁香酚、丙酸氯倍他索的复方新剂型，具体涉及一种水包油型复方酮康唑纳米药物及其制备方法。

背景技术

目前临床上治疗皮肤病的药物主要有复方软膏，注射针剂，口服剂型，但大都只针对真菌病、螨病或湿疹，而这些疾病往往同时发病，同时治疗这些皮肤病的药物少有报道。口服剂型虽在胃酸内溶解易吸收，但吸收后分布广泛，血药浓度波动较大，会带来许多如恶心、呕吐、腹痛、头痛等不良反应，偶有肝损害及过敏反应。软膏及其他外用剂型虽然可以减轻不良反应，扩大了临床的引用范围，但存在透皮效果不理想，稳定性差，生物利用度不高的缺点，他们需要借助氮酮、DMF、DMSO等皮肤渗透促进剂增加透皮吸收效果。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题与不足，本发明的目的在于提供一种水包油型复方酮康唑纳米药物，该药物透皮吸收效果好，生物利用度高，药物稳定性高，并且溶解度高、缓释性好，治疗宠物常见主要皮肤病，治疗效果好，载药量很理想，可以满足临床需求。

实现上述发明目的的技术方案是一种水包油型复方酮康唑纳米药物，该纳米药物的粒径在1～100nm之间，由下述质量百分比的原料组成：

    酮康唑0.01%～8.0%、丁香酚0.01%～10%、丙酸氯倍他索0.001%～5.0%、表面活性剂25.0%～45.0%、助表面活性剂0～10.0%、油0.1%～25.0%、其余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。

    本发明的药物中涉及的表面活性剂是非离子表面活性剂，表面活性剂主要有天然表面活性剂和合成表面活性剂，天然表面活性剂无毒，价廉，但存在批间差异，对大生产很不利，天然表面活性剂降低界面张力的能力不强。合成表面活性剂分为离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂两大类，离子型表面活性剂有胺或季胺盐、脂肪酸盐、脂肪醇磺酸盐等，这类表面活性剂由于溶血作用强，而且使用受到pH值的限制。非离子表面活性剂可以与多种助表面活性剂合用，而离子型表面活性剂有强亲水性，需与清油的助表面活性剂合用以增强其增容作用。非离子型表面活性剂在pH值在3～10内均适用，受离子强度、无机盐、酸、碱的影响小，本身毒性和刺激性小，能与大多数药物配伍，应用最广。HLB值在4～7的表面活性剂可制备W/O型纳米药物，HLB值在8～18的表面活性剂可制备O/W型纳米药物，考虑到纳米药物的易形成性和和稳定性，本发明选用的表面活性剂是HLB介于10～16之间的非离子型表面活性剂，或者与一种HLB﹤10的非离子型表面活性剂复配。可选用的表面活性剂有聚氧乙烯蓖麻油（Cremophor EL HLB=13.5），聚氧乙烯氢化蓖麻油（Cremephor RH40 HLB=14～16），聚氧乙烯山梨醇油酸酯（Tween-80 HLB=11），聚氧乙烯甘油三酸酯（Tagat TO HLB=11.3），聚乙二醇-8-甘油辛酸/葵酸酯（Labrasol HLB=14），椰子油C8/C10聚乙二醇甘油酯（Labrafac CM10 HLB=10），聚乙二醇月桂酸甘油酯（Gelucire44/14 HLB=14)和山梨醇酐单硬脂酸酯（Span-80 HLB=4.3）中的一种或两种混合物。

    油相的选择要考虑到药物的溶解性和自乳化性，原则上油相分子体积越小，溶解力越强，油相分子链过长不能形成纳米药物。为提高主药在油相中的溶解度，增大纳米药物的形成区域，应选用短链油相。本发明选用2-苯乙醇、丁香酚与IPM、乙酸乙酯、维生素E油、杏仁油、小麦胚芽油、三乙酸甘油酯、月桂酸异丙酯、豆油、橄榄油中任一种或几种混合物作为油相，也可只用2-苯乙醇与丁香酚作为油相。

    本发明可选用无水乙醇、1,2-丙二醇做助表面活性剂，本发明中助表面活性剂不是形成水包油型复方纳米药物的必要成分，在助表面活性剂成分为零的情况下也可形成水包油型纳米药物。

本发明还有一个目的是提供上述复方酮康唑纳米药物的制备方法，具体包括下列步骤：

1）称取酮康唑、丁香酚、丙酸氯倍他索、表面活性剂、助表面活性剂、油、蒸馏水，备用；

2）将酮康唑，丙酸氯倍他索加入油中搅拌均匀，再加入助表面活性剂和丁香酚搅拌至完全溶解；

3）将表面活性剂加入步骤2）制备的溶液中搅拌均匀；

4）在室温下迅速搅拌步骤3）制备的溶液，搅拌的同时缓慢滴加蒸馏水，不断搅拌体系呈透明澄清的液体即复方纳米乳药物。

本发明用酮康唑，丙酸氯倍他索，丁香酚作为组合是因为酮康唑对深部感染真菌如念珠菌属、着色真菌属、球孢子菌属、组织浆胞菌属、孢子丝菌属等均具抗菌作用，对毛发癣菌等亦具抗菌活性，可治疗各种皮肤癣及皮肤念珠菌病。丙酸氯倍他索是目前临床应用的高效外用皮质类固醇中药效较强的一种，有治疗治疗皮肤炎症和瘙痒症，如神经性皮炎、接触性皮炎、脂溢性皮炎、湿疹、局限性瘙痒症等的作用，与酮康唑配合使用具有协同作用，效果比单独使用好。丁香酚具有抗菌消炎，麻醉止痛，解热降温，抗寄生虫的作用，对螨虫的杀伤力较强。三种药物配伍对宠物皮肤病具有较好的治疗效果。将三种药物制成纳米药物体系大大减小药物副作用及对皮肤的刺激性，增加了稳定性，同时达到了缓慢释放的作用，延长了药物的作用时间。

本发明的具体使用方法：

均匀喷洒或涂抹于患处皮肤表层，每日一次。

与现有技术相比，复方酮康唑纳米药物有如下优点：

1. 制备方法简单，安全性高，便于推广。

2. 该组合体系稳定，澄清透明，流动性好，年度可根据需要进行调整，侵润性好，渗透能力强，能渗透进皮肤发挥药效。

3. 可根据其功能，制成喷雾剂和涂抹剂。

4. 应用范围广，不仅可用于治疗犬，猫等宠物皮肤病，还可用于兔皮肤病的治疗，为养殖业做贡献。

5. 该药物具有治疗临床常见的宠物真菌性，细菌性，寄生虫性皮肤病及湿疹的功能，三种药物配伍治疗较其他只针对一种病症的药物治疗更彻底。

附图说明

图1是本发明水包油型复方酮康唑纳米药物的电镜图。

以下通过试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括了本发明药物稳定性试验和临床药效试验。

试验例1稳定性试验

1）外观稳定性试验

本发明经西北农林科技大学透射电子显微镜检测液滴直径分布在1～100nm之间，电镜照片见图1。纳米药物外观为黄色、淡黄色或无色透明液体，分散均匀，长时间室温下放置，体系透明澄清，形态稳定，无浑浊、分层、析出现象。

2）离心加速试验

    取按实施例1的方法制得的复方纳米药物适量于离心管中，密封管口，置高速离心机中，以4000r/min的转速离心30min，复方纳米药物液仍保持澄清透明，离心管底部未发现药物析出的现象。

3）光稳定性试验

     取适量复方纳米药物液和空白纳米药物液装入青霉素玻璃瓶内，放置于日光下照射10d，于1d，3d，5d，10d取样。结果表明，复方纳米药物液仍保持澄清透明，颜色为黄色，无变化。空白纳米药物液仍澄清透明，呈黄色，未出现分层，浑浊等不稳定现象。

）温度稳定性试验

    取适量该复方纳米药物分装于几个玻璃瓶中，密封后放置在冰箱4℃、室温25℃和37℃三种温度条件下考察30d，每隔5d观察一次。结果表明，复方纳米药物在三种条件下长时间保持澄清透明的外观，未出现不稳定现象。

试验例2 毒理学试验

1. 皮肤刺激性试验

1.1 试验方法

    选择20只健康雌性家兔按体重随机分为两组，即完整皮肤和破损皮肤组，每组10只。将家兔背部脊柱两侧用硫化钠水溶液对称脱毛，脱毛面积左右各5cm×5cm，饲养24h后将破损皮肤组脱毛部位用碘酊消毒，再用无菌针头划“#”号，值轻度渗血。将复方纳米药物药液按0.5g每只均匀涂于每组中5只家兔一侧脱毛皮肤上，将空白纳米药物液0.5g均匀涂于每组另外5只家兔一侧脱毛皮肤上，用无菌纱布覆盖，再用无刺激性胶布加以固定，单笼笼饲养。另一侧涂相同剂量的蒸馏水作为对照。涂药后贴敷时间至少4h，结束后去除药物并用温水清洗给药部位。每天相同方法，同一时间给药1次，持续给药7d。

试验期间与自然光下观察皮肤反应，在每次去除受试物1h以及再次涂敷前观察及记录皮肤红斑、水肿、有无色素沉着、出血点、皮肤皮肤菲薄等情况及发生时间和消退时间。末次贴敷后，在去除受试物后1h，24h，48h，72h观察并记录皮肤反应情况，按表1给出评分标准评分，按表2进行皮肤刺激性强度评价。试验结果见表3。

              表1 皮肤反应强度评价标准

表2 皮肤刺激强度评价标准

分值	评价
		0～0.49	无刺激性
0.50～2.99	轻度刺激性
		3.00～5.99	中度刺激性
6.00～8.00	强刺激性

1.2试验结果

表3 家兔皮肤刺激性试验结果

结果表明，家兔完整皮肤和破损皮肤接触相同剂量的复方纳米药物药物和空白纳米药物后不同时间动物未见局部红斑、水肿、色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等情况，同体左右侧未见异常反应。

．皮肤过敏试验

2.1 试验方法

    将30只豚鼠按体重、性别随机分3组，每组10只。将豚鼠脊柱两侧用1%硫化钠溶液脱毛，去毛面积左右各3cm×3cm，饲养24小时后给药。第1组为空白对照组，给空白纳米药物0.2g；第2组为给药组，给复方纳米药物0.2g；第3组为阳性对照组，给1%2，4-二硝基氯苯0.2ml。将各组的受试物分别涂于左侧脱毛部位，用无菌纱布和无刺激性胶布固定6h。第7天和第14天以同样的方法给药一次，第28天激发给药，用上述同样的方法将相应的受试物涂在右侧脱毛区，阳性对照组改为0.1%2，4-二硝基氯苯，同法覆盖固定6h。贴敷结束后，去除药物并用温水清洗。

试验期间与自然光下观察皮肤反应。去除受试物后即刻和第24h，48h，72h观察并记录皮肤反应情况。按表4对皮肤红斑和水肿进行评分并统计反应平均值和致敏率；按表5判断致敏性。同时观察动物是否出现哮喘，站立不稳或休克等过敏反应。试验结果见表6。

表4 皮肤过敏反应评分标准

表5 皮肤致敏性评价标准

致敏发生率	评价
		0～10	无致敏性
11～30	轻度致敏性
		31～60	中度致敏性
61～80	高度致敏性
		81～100	极度致敏性

2.2 试验结果

表6 各组受试动物的致敏强度

结果表明，复方纳米药物药液和空白纳米药物在激发接触后6h，12h，24h，72h未见豚鼠皮肤不良反应，无哮喘，站立不安，休克等过敏反应，致敏率为0。而阳性对照组则出现明显水肿和红斑。

试验例3 药效学试验

1． 兔体杀螨效果观察试验

1.1 试验方法

将30只感染真菌的病兔随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ 6组，每组5只，性别不限。处理分别为涂抹含丁香酚1%的纳米药物，全身喷洒含丁香酚0.5%的纳米药物，涂抹300倍稀释杀螨灵水溶液，全身喷洒600倍稀释杀螨灵水溶液，皮下注射10mg/ml阿维菌素，涂抹空白纳米药物。Ⅰ、Ⅲ组每天用药一次，连续用药两天，7d后再用药一次；Ⅱ、Ⅳ组间隔7d用药一次；Ⅴ组一次注射0.3mg/kg，间隔7d再注射一次。试验后每天观察并记录病兔的食欲、饮水、精神状况及病变情况。于用药后5天用透明胶带法粘取患处螨虫，镜检并记录螨虫总数数，死亡数，存活数，算出平均杀螨率。试验结果见表7。

1.2 试验结果

表7 兔体杀螨效果

注：— 表示未计算

     结果表明，第一次用药，阿维菌素效果最好，第二次用药后Ⅰ组效果最好，略优于注射阿维菌素组。

豚鼠体外抗真菌效果观察试验

2.1 试验方法

取普通级豚鼠，用硫化钠溶液脱去背毛5×6cm，24h用75%酒精擦拭脱毛部位，待脱毛部位残余酒精挥发干燥后，用无菌针头在涂菌部位划“#”字，面积为2×2cm，以划破表皮且血液不渗出为准，滴制备好的菌液0.5ml，涂匀，完毕后暴露于空气中，每天观察皮肤感染情况。5～7天后，选择接种部位出现类似皮癣症状（如局部红肿，渗出，皮肤出现鳞片样改变）的豚鼠，进行镜检为阳性后，确定感染成功后48h内开始试验治疗。试验分为6组，每组10只。第1，2，3组为复方纳米药物药液组，按体表面积计算，涂含酮康唑1%，丙酸氯倍他索0.05%的纳米药物0.1 g/cm²，0.2g/cm²， 0.4g/cm²，每日一次。第4组为阳性对照1%酮康唑洗剂组，每日一次，用药量为0.2g/cm²。第5组为空白对照组，不给药。空白组14天内不做任何处理。1，2，3，4组前7天每天一次于感染区涂药。后7天停止涂药。观察并比较结果。真菌对皮肤感染的治疗情况分为治愈和未治愈两种，治愈指病变部位鳞屑全部脱落、消失、皮肤恢复平整、光滑状；未治愈指病变部位呈现成块白色鳞屑状，或出现蔓延，病变逐渐向四周扩散，疗程结束后进行真菌镜检及真菌培养判断疗效。试验结果见表8。

2.2 试验结果

表8 豚鼠体外抗真菌效果

组别	动物数（只）	剂量（g/cm2）	治愈数(只)	未治愈数（只）	治愈率
						1	10	0.1	7	3	70%
2	10	0.2	9	1	90%
						3	10	0.4	9	1	90%
4	10	0.2	5	5	50%
						5	10	—	0	10	0%

    结果表明该药物组合物纳米药物对真菌性皮肤病有较好的治疗作用，优于同等计量的洗液。

豚鼠湿疹治疗效果观察

3.1 试验方法

　  取4～5周龄健康雌性豚鼠25只(本校实验动物中心) ，体重232. 4 ±32. 95 g，在每只小鼠背部两侧去毛4处，面积2 cm ×3 cm /处。按体重戊巴比妥腹腔注射麻醉；在去毛处皮内注射OVA 10μg +Al (OH) 3 0. 5 mg； 1周后，用3 cm ×4 cm纱布，涂上10%OVA + 10% SDS + 30%凡士林+ 50%水，贴于去毛处保持48 h；皮内注射后第3周，再用3 cm ×4 cm纱布，涂上10%OVA + 5% SDS + 37%凡士林+ 48%水，贴于剃毛处保持48 h；休息1周，用1 cm ×1 cm双层纱布，涂上10%OVA + 20%水+ 70%凡士林，贴于去毛处保持24 h，做抗原激发反应。48 h后对红斑、水肿、抓痕进行评分，计算总分。

样本总数100 个，随机分为A，B，C，D，E五组，每组20个。激发后即开始给药，A，B，C组给予复方纳米药物药液(其中丙酸氯倍他索浓度分别为0. 10%，0. 05%，0. 025% )，每日一次；D组给予丙酸氯倍他索软膏，每日两次；E为空白对照组。于用药后48 h，1， 2，3周对各组进行疗效评价。评价标准见表9。

3.2 试验结果         表9 豚鼠湿疹反应评分标准

    豚鼠背部OVA激发后48h出现湿疹样反应，表现为不同程度的弥漫性红斑、水肿、抓痕伴血痂，边界不清，其上少许粟粒状丘疹，部分有渗出。用药第5天，A，B，C，D组豚鼠背部红斑颜色变淡，轻度水肿，有少许抓痕和血痂； E组背部红斑弥漫，边界不清，轻度水肿，抓痕血痂明显，粟粒样丘疹，有渗出倾向。用药第7天，A，B，C，D组红斑缩小，水肿消退，少许痂皮，抓痕陈旧；E组症状无改善。连续用药15天后，A，B，C组红斑消退，色素加深，表皮基本恢复正常，较丙酸氯倍他索软膏组减少，E组症状仍无改善。

体外抑菌效果观察

4.1 试验方法

实验选用金黄色葡萄球菌，大肠杆菌和链球菌，通过测定最小抑菌浓度（MIC）来确定药物的抑菌效果。营养肉汤培养基按蛋白胨1%、肉浸膏1%、氯化钠0.5%、蒸馏水100mL配置，pH为7.4.从菌种管内移种后，在肉汤管内转钟2次，以18~24h培养物作为使用菌种，将细菌浓度稀释成1×10⁸个/mL作为细菌悬液。将复方药物组合物纳米药物用蒸馏水稀释成丁香酚浓度为0.1mg/mL~10mg/mL的对倍系列浓度的受试液，取各稀释浓度的受试液1mL加入到含1mL双倍浓度营养肉汤的试管中。取0.1mL细菌悬液接种于上述各试管中，作为试验组样本。以同法接种细菌于不含药液的营养肉汤的试管中，作为阴性对照组样本。以同法接种细菌与含空白纳米药物的营养肉汤的试管中，作为空白对照组样本。以同样的方法将细菌接种于含龙虎牌清凉油的营养肉汤试管中，作为阳性对照组样本。以各试组无菌生长的最高稀释度所对应的抑菌浓度作为该样品对应受试菌的最低抑菌浓度。试验结果见表10。

4.2 试验结果

表10 体外最低抑菌浓度

注：与阳性对照组比较* p＜0.01； 与空白纳米药物组比较^▲p＜0.01

     结果表明，复方药物组合物纳米药物组与阳性对照组比较差异极显著，对三种菌有明显的抑制作用。

实施例1

1）称取2-苯乙醇0.77g，丁香酚0.23g，酮康唑0.166g，丙酸氯倍他索0.01g，Tween-80 9g，蒸馏水14.000g，备用；

2）将酮康唑，丙酸氯倍他索加入2-苯乙醇中搅拌均匀，再加入丁香酚搅拌至完全溶解；

3）将Tween-80加入步骤2）制备的溶液中搅拌均匀；

4）在室温下迅速搅拌步骤3）制备的溶液，搅拌的同时缓慢滴加蒸馏水，不断搅拌体系呈透明澄清的液体即复方纳米乳药物。

实施例2

由Tween-80 8.000g、酮康唑0.500g、2-苯乙醇1.000g、IPM0.100g、丙酸氯倍他索     0.300g、丁香酚0.300g 、无水乙醇2.000g、蒸馏水12.000g组成。

实施例3

由EL40 7.000g、酮康唑 0.840g、2-苯乙醇0.900g、维生素E油0.060g、丙酸氯倍他索0.012g、丁香酚0.240g、蒸馏水13.750g组成。

实施例4

由Span-80 7.000g、酮康唑0.600g、2-苯乙醇0.600g、杏仁油0.090g、丙酸氯倍他索0.200g、丁香酚0.200g 、蒸馏水12.800g组成。

实施例5

由RH40 7.500g、Span-801.500g、2-苯乙醇0.700g、小麦胚芽油0.070g、丁香酚0.230g、酮康唑0.220g、丙酸氯倍他索0.112g、蒸馏水13.000g组成。

实施例6

由Tween-804.500g、2-苯乙醇0.250g、丁香酚0.125g、IPM 0.125g、酮康唑0.050g丙酸氯倍他索0.003g、蒸馏水14.000g组成。

实施例7

由RH40 6.800g、2-苯乙醇0.890g、三乙酸甘油酯0.010g、丁香酚0.300g、1，2-丙二醇1.000g、酮康唑0.500g 、丙酸氯倍他索0.015g、蒸馏水5.000g组成。

     实施例8

由EL40 9.000g 、2-苯乙醇  0.800g、月桂酸异丙酯 0.060g、丁香酚0.140g、酮康唑0.040g、丙酸氯倍他索0.012g、蒸馏水13.750g组成。

实施例9

由RH40 6.800g、2-苯乙醇0.880g、橄榄油0.020g、丁香酚0.300g、丙三醇1.000g、酮康唑0.500g 、丙酸氯倍他索0.015g、蒸馏水5.000g组成。 

Claims (5)

1.一种水包油型复方酮康唑纳米药物，其特征在于，该纳米药物的粒径在1～100nm之间，由下述质量百分比的原料组成：

    酮康唑0.01%～8.0%、丁香酚0.01%～10%、丙酸氯倍他索0.001%～5.0%、表面活性剂25.0%～45.0%、助表面活性剂0～10.0%、油0.1%～25.0%、其余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%；

    所述表面活性剂是Tween-80、RH40、EL40、Span-80 中的任何一种或两种混合物；

所述助表面活性剂是无水乙醇、1,2-丙二醇、丙三醇的任意一种或几种混合物；

所述油是2-苯乙醇与IPM、乙酸乙酯、维生素E油、杏仁油、小麦胚芽油、三乙酸甘油酯、月桂酸异丙酯、豆油、橄榄油中任一种或几种混合物。

2.根据权利要求1所述的水包油型复方酮康唑纳米药物，其特征在于，由下述质量百分比的原料组成：

酮康唑0.1%～7.0%、丁香酚0.1%～8.0%、丙酸氯倍他索0.01%～4.0%、表面活性剂28%～42.0%、助表面活性剂1～8.0%、油1.0%～24.0%、其余量为蒸馏水，上述组成的质量百分比之和为100%。

3.根据权利要求1所述的水包油型复方酮康唑纳米药物，其特征在于，由下述质量百分比的原料组成：

酮康唑1%～6.0%、丁香酚0.5%～7.5%、丙酸氯倍他索0.1%～3.8%、表面活性剂30.0%～40.0%、助表面活性剂1.5～7.5%、油1.5%～23.0%、其余量为蒸馏水，上述组成的质量百分比之和为100%。

4.根据权利要求1所述的水包油型复方酮康唑纳米药物，其特征在于，所述表面活性剂与油相重量比为24:1～1.5:1。

5.权利要求1所述水包油型复方酮康唑纳米药物的制备方法，其特征在于，具体包括下列步骤：

1）称取酮康唑、丁香酚、丙酸氯倍他索、表面活性剂、助表面活性剂、油、蒸馏水，备用；

2）将酮康唑，丙酸氯倍他索加入油中搅拌均匀，再加入助表面活性剂和丁香酚搅拌至完全溶解；

3）将表面活性剂加入步骤2）制备的溶液中搅拌均匀；

4）在室温下迅速搅拌步骤3）制备的溶液，搅拌的同时缓慢滴加蒸馏水，不断搅拌体系呈透明澄清的液体即复方纳米乳药物。