CN110944625B

CN110944625B - 氯倍他索的水包油纳米乳液组合物

Info

Publication number: CN110944625B
Application number: CN201880040366.8A
Authority: CN
Inventors: J·萨纳古斯廷·阿奎鲁; M·D·C·伦迪内斯·格里斯; M·I·德尔加多·加南
Original assignee: Laboratory Rescuer Co
Current assignee: Laboratory Rescuer Co
Priority date: 2017-06-23
Filing date: 2018-01-18
Publication date: 2022-05-03
Anticipated expiration: 2038-01-18
Also published as: ES2875851T3; CY1124193T1; CN110944625A; ZA202000128B; US10857160B2; KR102571107B1; SI3641728T1; TWI768056B; MY190953A; AU2018288256A1; RU2759901C2; TW201904562A; KR20200019945A; US20190298737A1; IL271474B; CO2020000026A2; JP2020524672A; PT3641728T; JP7065895B2; WO2018233878A1

Abstract

本发明涉及一种具有连续的水相和分散的油微滴的水包油纳米乳液组合物，其中所述纳米乳液包含：(a)氯倍他索；(b)一种或多种油组分；和(c)一种或多种表面活性剂；以及一种或多种药学上可接受的赋形剂或载剂，其中：所述纳米乳液组合物的重量渗透摩尔浓度为100mOsm/Kg至500mOsm/Kg；通过动态光散射测得的所述微滴的平均尺寸为1nm至500nm；所述油组分与所述油组分和一种或多种表面活性剂的总和之间的重量比为0.001至0.5；所述油组分与氯倍他索之间的重量比为1:1至200:1；并且所述表面活性剂与氯倍他索之间的重量比为2:1至200:1。本发明还涉及所述组合物的制备方法，其作为药物以及用于预防和/或治疗炎性疾病或病况的用途。

Description

氯倍他索的水包油纳米乳液组合物

本发明涉及药学领域。具体而言，本发明涉及含有氯倍他索的组合物。更具体地，本发明涉及氯倍他索的水包油纳米乳液组合物，其制备方法，以及其作为药物的用途、并且特别是在预防和/或治疗炎性疾病或病况中的用途。

背景技术

丙酸氯倍他索是[17-(2-氯乙酰基)-9-氟-11-羟基-10,13,16-三甲基-3-氧代-6,7,8,11,12,14,15,16-八氢环戊并[a]菲-17-基]丙酸酯的国际非专属药名(INN)，CAS编号为25122-46-7。丙酸氯倍他索的结构对应于式(I)：

丙酸氯倍他索是用于治疗各种炎性疾病的糖皮质素类的皮质类固醇。

一方面，丙酸氯倍他索用于治疗皮肤病症，包括湿疹、唇疱疹、银屑病和硬化性苔藓。其也用于治疗一些自体免疫疾病，包括斑秃、白斑病、扁平苔藓(自体免疫皮肤结节)和蕈样肉芽肿(T细胞皮肤淋巴瘤)。其具有非常高的效力且一般不应以封闭敷料使用或用于长期的连续使用。其可以为局部制剂的形式，诸如洗发精、慕思、软膏和润肤霜剂呈现。

另一方面，还公开了丙酸氯倍他索展现出强抗炎作用，因此可以以滴眼剂的形式用于治疗各种眼病，例如外眼部和前眼部的炎性疾病，例如眼睑炎、结膜炎、角膜炎、巩膜炎、上巩膜炎、虹膜炎、虹膜睫状体炎和眼色素层炎，以及在眼部手术后出现的炎性疾病。

然而，由于丙酸氯倍他索在水中的溶解度低，因此难以制备含有丙酸氯倍他索且不伤害其药代动力学和药效学特性的稳定组合物。

即使获得丙酸氯倍他索制剂如此困难，但本领域中存在着一些含有丙酸氯倍他索的制剂。特别地，欧洲专利EP0844001公开了丙酸氯倍他索的水包油乳液，其包含液体石蜡油和磷脂以供滴注入眼中。对于眼部施用，这些乳液具有众所周知的局限，例如制剂的粘度使视觉模糊或患者缺乏依从性。具体而言，这些乳液具有有限的生物利用度和渗透性。因此，将乳液局部施用至眼后的眼部生物利用度仍是个尚未被令人满意地解决的挑战。

此外，眼用组合物的另一个限制是它们的灭菌。本领域中已公开过一些对眼用组合物进行灭菌的技术，这些技术涉及可能影响氯倍他索稳定性的热或辐射步骤。特别地，欧洲专利EP0844001中公开的组合物需要复杂的制造过程以实现活性成分的均匀分布，这可能破坏药物物质的稳定性，对于高度敏感的分子(例如氯倍他索)更是如此。

此外，PCT专利申请WO2017037663公开了一种用于治疗银屑病的丙酸氯倍他索的局部水包油纳米乳液，其中该组合物包含大量的醇、油组分和表面活性剂。此专利申请中公开的组合物由于高比例的溶剂或不适于这些施用途径的组分而仍然具有在眼或粘膜中的不适当耐受性的问题。此外，获得此种组合物的方法需要高能量方法，其损害药物的稳定性行为。最后，PCT专利申请WO2017037663并未提及活性成分从该组合物的释放，且并未证明相关活性。

因此，基于现有技术中已知的内容，仍有需要寻找含丙酸氯倍他索的稳定组合物，在其施用后具有适当药代动力学和药效学特性以及适当的耐受性。

发明内容

发明人已发现一种稳定的水包油纳米乳液组合物，其含有氯倍他索且具有低含量的油组分和表面活性剂，并且油组分或表面活性剂相对于活性成分的量具有特定重量比，且油的量相对于油组分和表面活性剂的总和具有特定重量比，所述组合物允许在施用后具有良好的感觉，并且对于炎性疾病或病况的预防和/或治疗具有适当的药代动力学和药效学特性。

一方面，本发明的纳米乳液组合物具有良好的稳定性，甚至是活性成分或最终组合物的良好的稳定性。另一方面，本发明的纳米乳液组合物还允许有效量的氯倍他索在治疗区域的良好释放和吸收，并且与氯倍他索的不适当分布有关的副作用更少。最后，本发明的纳米乳液在施用后也具有舒适的感觉和耐受性。

因此，本发明的第一方面涉及一种具有连续的水相和分散的油微滴的水包油纳米乳液组合物，其中所述纳米乳液包含：(a)治疗有效量的氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯；(b)一种或多种油组分；和(c)一种或多种表面活性剂；以及一种或多种药学上可接受的赋形剂或载剂，其中：所述纳米乳液组合物的重量渗透摩尔浓度(osmolality)为100mOsm/Kg至500mOsm/Kg；通过动态光散射测得的所述微滴的平均尺寸为1nm至500nm；所述油组分与所述油组分和一种或多种表面活性剂的总和之间的重量比为0.001至0.5；所述油组分与氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯之间的重量比为1:1至200:1；并且所述表面活性剂与氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯之间的重量比为2:1至200:1。

本发明的第二方面涉及一种制备本发明第一方面所述的水包油纳米乳液组合物的方法，所述方法包括：(a)将氯倍他索与所述油组分和所述表面活性剂混合，从而制备油相；(b)制备水相；(c)将步骤(a)中获得的油相在步骤(b)中获得的水相中乳化；(d)可选地，在步骤(a)、步骤(b)或步骤(c)之后调节pH、重量渗透摩尔浓度、pH和重量渗透摩尔浓度；和(e)可选地，在步骤(a)、步骤(b)或步骤(c)中添加一种或多种额外的药学上可接受的赋形剂或载剂。

本发明的第三方面涉及本发明第一方面所述的水包油纳米乳液组合物，其用作药物。

本发明的第四方面涉及本发明第一方面所述的水包油纳米乳液组合物，其用于预防和/或治疗炎性疾病或病况。

附图说明

图1示出了在对本发明的组合物11进行HET-Cam眼刺激测定后获得的图像(A)和对超出本发明范围的比较用组合物34进行HET-Cam眼刺激测定后获得的图像(B)。这些图像在测定开始时(1)和在测定结束时(2)(5分钟)采集。

具体实施方式

除非另有说明，否则本申请中在此使用的所有术语应以本领域已知的普通含义来理解。本申请中使用的某些术语的其他更具体的定义如下所述，并且旨在统一适用于整个说明书和权利要求书中，除非另外明确列出的定义提供了更宽泛的定义。

出于本发明的目的，给出的任何范围都包括该范围的下限端点和上限端点。

本申请中在此使用的术语“氯倍他索”是指式(II)的化合物。

氯倍他索可以为盐的形式或酯的形式。特别地，氯倍他索可以为其丙酸酯的形式，对应于如上定义的式(I)的化合物。

术语“纳米乳液”是指胶体分散体系，其包含至少两个不混溶的相，一个相作为平均尺寸(通过动态光散射测得)为1nm至500nm的微滴分散在另一个相中。

术语“平均尺寸”和“均值尺寸”具有相同的含义并且可互换地使用。它们是指微滴的平均直径。这些体系的平均尺寸可通过本领域技术人员已知的标准方法来测量。“平均尺寸”和“均值尺寸”应理解为数量上的D(n,50)微滴平均尺寸。D(n,50)微滴平均尺寸是中值直径，其中50％的微滴由大于指定值的微滴组成，而50％的微滴由小于指定值的微滴组成。在本发明中，微滴的平均尺寸是通过动态光散射(DLS)测量的。DLS利用胶体的两个常见特征，即廷德耳效应(散射)和布朗运动，其使得光以不同的强度散射。时间分析取决于使用数学模型的强度波动，允许确定平均尺寸(参见Hassan,P.等“Making sense of Brownianmotion:colloid characterization by dynamic light scattering”,Langmuir,2015,vol.31,pp.3-12)。由于布朗运动，微滴在不断地移动，并且由于布朗运动，微滴的尺寸与其速度之间的关系如斯托克斯-爱因斯坦方程中定义。随着微滴的到处移动，散射的光会引起强度波动。此外，在不同的时间将信号强度与其自身进行比较以获得相关性函数。然后，该信息可用于计算强度的大小分布，并将可其转换为体积或数量上的尺寸分布。特别地，使用Zetasizer Nano ZS(Malvern Instruments)确定微滴的直径(即，微滴的均值尺寸)。在本发明中，使用执行本申请中的上述计算的Zetasizer Nano ZS(Malvern Instruments)，通过动态光散射(DLS)直接进行微滴平均尺寸(D(n,50))的测量(无稀释)。

本发明的纳米乳液组合物是水包油纳米乳液。术语“水包油”和“O/W”具有相同的含义并且可互换地使用。它们是指油作为微滴分散于整个水相的纳米乳液。

术语“重量百分比(％)”、“重量/重量％”和“w/w％”具有相同的含义并且可互换地使用。它们是指组合物的各成分的重量相对于组合物总重量。

术语“体积百分比(％)”、“体积/体积％”和“v/v％”具有相同的含义并且可互换地使用。它们是指组合物的各成分的体积相对于组合物总体积。

术语“％(w/v)”和“质量浓度”具有相同的含义并且可互换地使用。它们是指成分的质量除以组合物的体积。

术语“重量比”是指给定化合物相对于另一种给定化合物(例如油组分和氯倍他索之间)在重量上的关系。

术语“体积比”是指给定化合物相对于另一种给定化合物(例如在比较用缓冲溶液样品中的乙腈和水之间)在体积上的关系。

术语“重量渗透摩尔浓度”是指每千克溶剂的促成溶液的渗透压的溶质的摩尔数(或渗透摩尔)。重量渗透摩尔浓度通过使用渗压计测量样品的凝固点降低来测定。

术语“pH”的定义为由适合的适当标准化的电位传感器和测量系统给出的值。该测量系统传统上称为“pH计”。纳米乳液的pH通过标准纲要传统方法测量。

如上面所述的，本发明的第一方面涉及一种水包油纳米乳液，其包含治疗有效量的氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯。本文中使用的表述“治疗有效量”是指氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯的量，其在施用时足以预防所针对的疾病或病况的一种或多种症状的发展或在一定程度上缓解这些症状。根据本发明施用的氯倍他索的具体剂量显然会由围绕该情况的具体环境(包括所施用的活性氯倍他索、施用途径、待治疗的具体病况和类似的考虑)来决定。

在一个实施方式中，氯倍他索为药学上可接受的盐的形式。本文中使用的术语“药学上可接受的盐”涵盖了由药学上可接受的非毒性酸(包括无机酸或有机酸)形成的盐。对于这些盐并无限制，除了在用于治疗目的时它们必须是药学上可接受的。氯倍他索的盐可由药学上可接受的非毒性酸(包括无机酸和有机酸)来制备。此种酸特别包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、溴氢酸、盐酸、乳酸、马来酸、苹果酸、苦杏仁酸、甲磺酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸和对甲苯磺酸等。

在一个实施方式中，氯倍他索为药学上可接受的酯的形式。本文中使用的术语“药学上可接受的酯”涵盖了由药学上可接受的非毒性酸(包括无机酸或有机酸)形成的酯。对于这些酯并无限制，除了在用于治疗目的时它们必须是药学上可接受的。氯倍他索的酯可由药学上可接受的非毒性酸(包括无机酸和有机酸)来制备。此种酸特别包括乙酸、丁酸、丙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、溴氢酸、盐酸、乳酸、马来酸、苹果酸、苦杏仁酸、甲磺酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸和对甲苯磺酸等。在一个实施方式中，氯倍他索为选自由丁酸氯倍他索和丙酸氯倍他索组成的组的酯形式；优选是式(I)的丙酸氯倍他索。

在一个实施方式中，本发明的组合物中的氯倍他索的治疗有效量为0.001重量％至0.1重量％，优选0.01重量％至0.05重量％，更优选0.05重量％。在一个实施方式中，组合物包含0.001重量％至0.1重量％的丙酸氯倍他索，优选包含0.01重量％至0.05重量％的丙酸氯倍他索。

术语“油”在本文中以一般含义使用以指于室温下一般是油性的、粘稠的且为液体的广泛类型的物质。本文中定义的油可来自动物、矿物、植物或合成来源。术语“油组分”是指处在胶体分散液中的油或多种油的组合。术语“室温”是指无加热或冷却的环境的温度，一般为20℃至25℃。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液的油组分是(C₄-C₂₀)烷基的单甘油酯、二甘油酯或三甘油酯以及它们的混合物。在一个实施方式中，该(C₄-C₂₀)烷基的单甘油酯、二甘油酯或三甘油酯是中链三甘油酯。术语“中链三甘油酯”和“MCT”具有相同的含义并且可互换地使用，并且是指甘油和(C₆-C₁₂)脂肪酸的三酯。MCT的实例包括己酸(C₆)、辛酸(C₈)、癸酸(C₁₀)和月桂酸(C₁₂)。该MCT的三个脂肪酸残基可以相同或不同，优选存在两个不同的脂肪酸残基。在一个实施方式中，油是选自己酸、辛酸、癸酸、月桂酸以及它们的混合物的中链三甘油酯；优选油是辛酸/癸酸三甘油酯。本发明的包含MCT作为油组分的纳米乳液组合物是特别有利的，因为氯倍他索在MCT中的溶解度非常高，于是使用MCT允许减少本发明的纳米乳液中的油含量。

在替代性实施方式中，本发明的纳米乳液的油组分不是单甘油酯、二甘油酯或三甘油酯，其选自由以下组成的组：油酸乙酯、油酸癸酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、异硬脂酸异丙酯、异硬脂酸异十八烷基酯、甘油单硬脂酸酯、乳酸肉豆蔻酯、羟基硬脂酸乙基己酯、壬酸乙基己酯、三异辛酸甘油酯(triethylhexanoin)、异十六烷、轻质矿物油、矿物油、植物油、三异壬精(triisononanoin)、苯甲酸(C₁₂-C₁₅)烷基酯以及它们的混合物；优选地，其选自由以下组成的组：油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、异硬脂酸异丙酯、异硬脂酸异十八烷基酯、油酸癸酯、蓖麻油、摩洛哥坚果(argan)油、三异壬精、苯甲酸(C₁₂-C₁₅)烷基酯以及它们的混合物。

术语“烷基”是指含有在说明书或权利要求中具体定义的碳原子数目的饱和、支化或直链烷基链。

术语“植物油”是指自植物萃取的三甘油酯。植物油的实例是摩洛哥坚果油、玉米油、棕榈油、椰子油、棉籽油、橄榄油、花生油、菜籽油、葵花油、芝麻油、大豆油、红花油、蓖麻油、橄榄油以及它们的混合物。

在一个实施方式中，油组分是(C₆-C₁₂)烷基的单甘油酯、二甘油酯或三甘油酯与除了如上定义的单甘油酯、二甘油酯或三甘油酯以外的油的混合物。在一个实施方式中，油是MCT和蓖麻油的混合物。

如上所述，油组分与氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯之间的重量比为1:1至200:1。在一个实施方式中，油组分与氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯之间的重量比为1:1至100:1；优选为1:1至90:1。

本文所用的术语“表面活性剂”是指一种化合物，其降低两种液体之间或液体与固体之间的表面张力或界面张力。表面活性剂具有疏水性部分和亲水性部分。取决于亲水性部分的性质，表面活性剂被分类为非离子性(具有不带电但为极性的亲水性部分的表面活性剂)、阴离子性(当亲水性部分含有带负电的基团时)、阳离子性(当亲水性部分含有带正电的基团时)或两性(当亲水性部分同时含有阳离子基团和阴离子基团时)。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液的一种或多种表面活性剂是非离子性表面活性剂。非离子性表面活性剂的实例包括但不限于(C₃₀-C₄₀)烷基聚(环氧乙烷)、聚(环氧乙烷)和聚(环氧丙烷)的嵌段共聚物(商业上称为泊洛沙姆或泊洛沙胺(Poloxamine))、(C₈-C₁₄)烷基聚葡萄糖苷(包括辛基葡萄糖苷和癸基麦芽糖苷)、脂肪醇(包括鲸蜡醇和油醇)、椰油酰胺MEA、椰油酰胺DEA、脱水山梨醇酯和其衍生物、或脱水山梨醇酯乙氧基化物和其衍生物。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液的一种或多种表面活性剂是选自以下组的非离子性表面活性剂：具有30至40个氧基亚乙基单元的聚氧乙烯蓖麻油，特别是聚氧乙烯35蓖麻油(也称为聚乙二醇35蓖麻油；以

EL、

EL销售)；具有40至60个氧基亚乙基单元的聚氧乙烯氢化蓖麻油，特别是聚氧乙烯40氢化蓖麻油(也称为聚乙二醇40氢化蓖麻油；以

RH40销售)；聚氧乙烯20脱水山梨醇单油酸酯(也称为聚山梨醇酯80且以

80销售)；聚氧乙烯20脱水山梨醇单硬脂酸酯(也称为聚山梨醇酯60且以

60销售)；聚氧乙烯20脱水山梨醇三油酸酯(也称为聚山梨醇酯85，以

85销售)；聚氧乙烯20脱水山梨醇三硬脂酸酯(也称为聚山梨醇酯65，以

65销售)；聚氧乙烯20脱水山梨醇单月桂酸酯(也称为聚山梨醇酯20)；聚氧乙烯20脱水山梨醇单棕榈酸酯(也称为聚山梨醇酯40)；聚氧乙烯4脱水山梨醇单月桂酸酯(也称为聚山梨醇酯21且以

21销售)；脱水山梨醇三油酸酯(以

85销售)；脱水山梨醇三硬脂酸酯；脱水山梨醇倍半油酸酯；脱水山梨醇油酸酯(以

80销售)；脱水山梨醇硬脂酸酯；脱水山梨醇异硬脂酸酯；脱水山梨醇棕榈酸酯；脱水山梨醇月桂酸酯(以

20销售)；聚乙二醇十六烷基醚(以

C10销售)；甘油硬脂酸酯(以

GMS40销售)；甘油单油酸酯；乙二醇硬脂酸酯；乙二醇二硬脂酸酯；D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)；具有2个氧基亚乙基单元的聚氧化乙烯硬脂基醚；具有2至20个氧基亚乙基单元的聚氧化乙烯蓖麻油；鲸蜡硬脂醇；硬脂醇；油醇聚醚(oleth)-2；壬苯醇醚；辛苯昔醇；辛苯酚聚亚甲基；聚氧化乙烯40硬脂酸酯；聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)共聚物(特别是泊洛沙姆188和泊洛沙姆407)；以及它们的混合物。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液的一种或多种表面活性剂是选自以下组的非离子性表面活性剂：聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯20脱水山梨醇单油酸酯、聚氧乙烯20脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯20脱水山梨醇三油酸酯、聚氧乙烯20脱水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯20脱水山梨醇三硬脂酸酯、聚氧乙烯20脱水山梨醇单棕榈酸酯、聚乙二醇十六烷基醚、甘油硬脂酸酯、D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、聚氧乙烯40硬脂酸酯、脱水山梨醇单月桂酸酯、辛苯醇醚40以及它们的混合物。在一个实施方式中，本发明的纳米乳液的一种或多种表面活性剂是选自由聚氧乙烯20脱水山梨醇单油酸酯和聚氧乙烯35蓖麻油组成的组的非离子性表面活性剂。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液的一种或多种表面活性剂是选自以下组的非离子性表面活性剂：脱水山梨醇酯乙氧基化物衍生物、脱水山梨醇酯衍生物、聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)共聚物、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯40硬脂酸酯、辛苯醇醚40、D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)以及它们的混合物。

如上面所述的，表面活性剂与氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯之间的重量比为2:1至200:1。在一个实施方式中，表面活性剂与氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯之间的重量比为2:1至190:1；优选为2:1至180:1。

如在上文也提及的，本发明的纳米乳液的油组分与油组分和一种或多种表面活性剂的总和之间的重量比为0.001至0.5。在一个实施方式中，油组分与油组分和表面活性剂的总和之间的重量比为0.001至0.4；优选0.005至0.4；更优选0.005至0.3。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液的重量渗透摩尔浓度为100mOsm/Kg至500mOsm/kg；优选150mOsm/Kg至400mOsm/kg。在一个实施方式中，当本发明的纳米乳液是眼用组合物时，重量渗透摩尔浓度为120mOsm/Kg至380mOsm/Kg。这是有利的，因为这些组合物是等渗的且因此适用于眼部施用。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液的微滴平均尺寸为1nm至500nm；优选1nm至250nm。在一个实施方式中，当本发明的纳米乳液是眼用组合物时，则用动态光散射测得的微滴平均尺寸为1nm至250nm。这是有利的，因为该纳米乳液组合物是透明的且避免了不舒适的视觉模糊感觉。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液的pH为4.0至8.0；优选4.5至7.4。在一个实施方式中，当本发明的纳米乳液是眼用组合物时，组合物的pH为4.5至7.4(如泪液的pH一样)。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液的乙醇的量为0重量％至3重量％；优选地是，乙醇的量为0重量％至2重量％。这是有利的，因为较低量的乙醇允许减少用于眼用、鼻用或含服施用途径时的不舒适感觉。

如上面所述的，本发明的纳米乳液还包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或载剂。术语“可接受的赋形剂或载剂”是指可接受的材料、组合物或媒剂，其包括但不限于pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂、螫合剂、稳定剂、增粘剂、粘附性聚合物、穿透增强剂和张度剂。各组分必须在与组合物的其他成分是相容的意义上是可接受的。其必须还适用于与人类和动物的组织或器官接触而无过度毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或其他问题或并发症，而且与合理的效益/风险比率相符。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液进一步包含一种或多种pH调节剂。术语“pH调节剂”是指酸或碱或它们的混合物，其可用于将终产物的pH调节至所需的水平，而不影响该乳液的稳定性。在一个实施方式中，本发明的纳米乳液进一步包含选自以下组的pH调节剂：乳酸和其盐(例如乳酸钠、乳酸钾和乳酸钙)、柠檬酸和其盐(例如柠檬酸钠、柠檬酸钾、柠檬酸钙、柠檬酸锂、柠檬酸三钠和柠檬酸氢二钠)、酒石酸和其盐(例如酒石酸钠酒石酸钾、酒石酸钙和酒石酸锂)、乙酸和其盐(例如乙酸钠、乙酸钾和乙酸钙)、盐酸、硼酸和其盐(硼酸钠)、硫酸和其盐(例如硫酸钠和硫酸钾)、硝酸、盐酸、磷酸和其盐(例如磷酸盐二氢钠、磷酸一氢钠、磷酸二氢钾、磷酸锂、磷酸钾和磷酸钙)、碳酸和其盐(例如碳酸钠、碳酸氢钠和碳酸氢钾)、马来酸和其盐(马来酸锂、马来酸钠、马来酸钾和马来酸钙)、琥珀酸和其盐(琥珀酸锂、琥珀酸钠、琥珀酸钾和琥珀酸钙)、氢氧化钠、氢氧化钾、三乙醇胺、二异丙醇胺、氨、三(羟甲基)氨基甲烷、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、以及它们的混合物。在一个实施方式中，pH调节剂选自由三(羟甲基)氨基甲烷、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠以及它们的混合物组成的组。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液进一步包含选自以下组的pH调节剂：乙酸、硼酸、山梨酸、柠檬酸、磷酸、磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾和其盐、盐酸、氢氧化钠、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硫酸钠、三(羟甲基)氨基甲烷、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、碳酸氢钠、硼酸钠、乙酸钠、重硫酸钠、苯甲酸钠、柠檬酸钠以及它们的混合物。

在一个优选的实施方式中，pH调节剂是三(羟甲基)氨基甲烷和其盐。本发明的纳米乳液中的pH调节剂的量为0.01重量％至3重量％。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液进一步包含一种或多种稳定剂。术语“稳定剂”是指一种化合物，其增强纳米乳液和/或活性成分的稳定性。在一个实施方式中，稳定剂是水溶性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、其盐以及它们的混合物；优选聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施方式中，稳定剂是三(羟甲基)氨基甲烷和/或三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐。使用三(羟甲基)氨基甲烷和其盐是特别有利的，因为其允许减少降解产物的总量，这意味本发明的纳米乳液中的活性成分的稳定性高于本领域中公开的乳液。本发明的纳米乳液中的稳定剂的量为0.01重量％至15重量％。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液进一步包含一种或多种生物粘附性聚合物。术语“生物粘附性聚合物”是指一种可增加本发明组合物的滞留时间的物质。适于本发明的生物粘附性聚合物的实例包括：聚乙烯吡咯烷酮，例如聚维酮K17、聚维酮K25、聚维酮K30和聚维酮K 90F；聚乙烯醇；黄原胶；瓜尔胶；维纶胶(welan gum)；结冷胶(gellan gum)；黄蓍胶；长角豆胶；琼脂；甲基纤维素；乙基纤维素；羟乙基纤维素；羟乙基甲基纤维素；羟丙基纤维素；羟丙基甲基纤维素；羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯；羟丙基甲基纤维素乙酸酯琥珀酸酯；羧甲基纤维素钠；羧甲基纤维素钙；聚乙二醇；甘油；角叉菜胶；藻酸；藻酸钠；藻酸钾；丙二醇藻酸酯；透明质酸；透明质酸钠；聚(丙烯酸)衍生物，例如卡波姆和polycarbol；泊洛沙姆；壳聚糖和壳聚糖衍生物；乙烯基甲基醚/马来酸酐共聚物；麦芽糊精；以及它们的混合物。在一个实施方式中，本发明的组合物包含聚乙烯吡咯烷酮作为生物粘附性聚合物。在一个实施方式中，生物粘附性聚合物的存在量为组合物总重的0.01重量％至15重量％。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液进一步包含一种或多种防腐剂。术语“防腐剂”是指一种预防微生物和/或真菌污染的化合物。适于本发明的防腐剂的实例包括但不限于氯化苄烷铵、西他氯铵(cetalkonium chloride)、苄索氯铵、氯己定、苄醇、氯丁醇、2-苯基乙醇、对羟苯甲酸丙酯、对羟苯甲酸甲酯、乙酸苯汞、硼酸苯汞、去氢乙酸钠、山梨酸硝酸苯汞、氯化鲸蜡基吡啶、西曲溴铵(cetrimonium bromide)、苄基溴、过硼酸钠、乙汞硫柳酸钠以及它们的混合物。本发明的纳米乳液中的防腐剂的量为0重量％至1重量％。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液进一步包含一种或多种张度剂。术语“张度剂”是指一种可用于调节纳米乳液的重量渗透摩尔浓度的化合物。在一个实施方式中，张度剂选自以下组：氯化钠、氯化钾、氯化钙、磷酸钠、磷酸钾、碳酸氢钠、碳酸钙、乳酸钠、山梨醇、甘露醇、木糖醇、右旋糖、聚乙二醇、丙二醇、右旋糖聚糖以及它们的混合物；优选是甘油。本发明的纳米乳液中的张度剂的量为0重量％至15重量％。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液进一步包含一种或多种螫合剂。术语“螫合剂”和“螯合试剂”具有相同的含义并且可互换地使用。它们是指一种能够使离子络合的化合物。螫合剂的实例是柠檬酸，特别是柠檬酸一水合物、EDTA(乙二胺四乙酸)和其盐，例如二钾EDTA、二钠EDTA、钙二钠EDTA、钠EDTA和三钠EDTA、富马酸、苹果酸和麦芽醇。在一个实施方式中，螫合剂选自由依地酸钠、柠檬酸以及它们的盐和混合物组成的组。本发明的纳米乳液中的螫合剂的量为0重量％至2重量％。

本文中所用的术语“穿透增强剂”是指一种增强药物穿透的物质。穿透增强剂的实例是表面活性剂，例如脱水山梨醇单月桂酸酯、脱水山梨醇单棕榈酸酯、脱水山梨醇三油酸酯、聚氧乙烯20脱水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯20脱水山梨醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯5脱水山梨醇单油酸酯、聚氧乙烯20脱水山梨醇三油酸酯、聚氧乙烯9月桂基醚、聚氧乙烯23月桂基醚、聚氧乙烯20鲸蜡基醚、聚氧乙烯20油基醚、聚乙二醇十八烷基醚、聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚氧乙烯50硬脂酸酯、棕榈酰基肉碱、癸酸钠、十二烷基硫酸钠、胆汁酸(例如脱氧胆酸、牛胆酸、牛脱氧胆酸、熊脱氧胆酸和牛熊脱氧胆酸)、脂肪酸(例如癸酸、辛酸和油酸)、劳拉氯铵(lauralkonium chloride)、氯化苄烷铵、西他氯铵、西曲溴铵、氯己定二葡萄糖酸酯、苄醇、氯丁醇、2-苯基乙醇、对羟苯甲酸酯、对羟苯甲酸丙酯和对羟苯甲酸甲酯、EDTA、1-十二烷基氮杂环庚-2-酮(月桂氮酮)、六亚甲基月桂酰胺、六亚甲基辛酰胺、癸基甲基亚砜、皂素、环糊精、pz-肽、α-氨基酸、氯化鲸蜡基吡啶、细胞松弛素、离子载体或它们的混合物。本发明的纳米乳液中的穿透增强剂的量为0.01重量％至10重量％

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液包含：0.001重量％至0.1重量％的氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯；优选丙酸氯倍他索；0.001重量％至20重量％的一种或多种油组分；0.002重量％至20重量％的一种或多种表面活性剂；足以配齐100％的量的水；和可选的，足以实现4.0至8.0的pH的量的pH调节剂；和可选的，足以实现100mOsm/Kg至500mOsm/Kg的重量渗透摩尔浓度的量的张度剂。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液包含：0.01重量％至0.05重量％的氯倍他索其药学上可接受的盐或酯，丙酸氯倍他索；0.01重量％至10重量％的一种或多种油组分；0.02重量％至10重量％的一种或多种表面活性剂；足以配齐100％的量的水；和可选的，足以实现4.0至8.0的pH的量的pH调节剂；和可选的，足以实现100mOsm/Kg至500mOsm/Kg的重量渗透摩尔浓度的量的张度剂。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液包含：0.001重量％至0.1重量％的氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯，优选丙酸氯倍他索；0.001重量％至20重量％的中链脂肪酸三甘油酯；0.002重量％至20重量％的聚氧乙烯20脱水山梨醇单油酸酯；足以配齐100ml的量的水；可选的，足以实现4.0至8.0的pH的量的三(羟甲基)氨基甲烷；和可选的，足以实现100mOsm/Kg至500mOsm/Kg的重量渗透摩尔浓度的量的甘油。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液包含：0.01重量％至0.05重量％的氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯，优选丙酸氯倍他索；0.01重量％至10重量％的中链脂肪酸三甘油酯；0.02重量％至10重量％的聚氧乙烯20脱水山梨醇单油酸酯；足以配齐100ml的量的水；可选的，足以实现4.0至8.0的pH的量的三(羟甲基)氨基甲烷；和可选的，足以实现100mOsm/Kg至500mOsm/Kg的重量渗透摩尔浓度的量的甘油。

在一个实施方式中，本发明的纳米乳液组合物是眼用组合物、耳用组合物、鼻用组合物或含服用组合物。在一个实施方式中，本发明的纳米乳液组合物为滴眼剂、滴耳剂、滴鼻剂或口喷雾剂的形式。

在一个实施方式中，纳米乳液组合物为滴眼剂的形式的眼用组合物。这是有利的，因为本发明的纳米乳液是透明的，这避免了使用后的不适感觉，例如视觉模糊和灼烧感。当纳米乳液是眼用组合物时，其应当是无菌的。术语“无菌的”是指已经经过灭菌处理并且不含活细菌、真菌或其他微生物的纳米乳液组合物。在一个实施方式中，纳米乳液组合物是无菌的眼用组合物。

在一个实施方式中，纳米乳液组合物是多剂量眼用组合物，并且该组合物进一步包含如上定义的防腐剂。在一个实施方式中，纳米乳液组合物是单剂量眼用组合物。这是有利的，因为这些纳米乳液不需要在组合物中包含防腐剂。

本发明的第二方面涉及一种制备如上定义的纳米乳液的方法。本发明的纳米乳液组合物可根据本领域中熟知的纳米乳液(特别是水包油纳米乳液)制备方法来制备。适合的赋形剂和/或载剂以及它们的量可由本领域技术人员根据正制备的制剂的类型来容易地决定。

在一个实施方式中，制备本发明的纳米乳液的方法是通过相转变组成(PIC)来进行。在一个实施方式中，制备如上定义的水包油纳米乳液组合物的方法包括：(a)通过混合氯倍他索与油组分和表面活性剂来制备油相；(b)制备水相；(c)将步骤(a)中获得的所述油相在步骤(b)中获得的所述水相中乳化；(d)可选地，在步骤(a)、步骤(b)或步骤(c)之后调节pH、重量渗透摩尔浓度、pH和重量渗透摩尔浓度；和(e)可选地，在步骤(a)、步骤(b)或步骤(c)中添加一种或多种额外的药学上可接受的赋形剂或载剂。

在一个实施方式中，步骤(a)通过在适合的容器中进行混合直到获得均质混合物来进行。

在一个实施方式中，步骤(b)通过溶解或分散水相的组分来进行。在一个实施方式中，将步骤(b)进行适合于获得均质混合物的时间。

在一个实施方式中，步骤(c)通过将连续混合过程保持在10℃至60℃的温度下以将油相与水相乳化来进行。在一个实施方式中，步骤(c)是在步骤(a)中获得的油相的温度接近在步骤(b)中获得的水相的温度时进行。表述“油相的温度接近水相的温度”是指该温度值由于测量误差而是“近似的”。应了解“接近”是指给定温度值±10℃。该值的变化是源于方法的固有灵敏度。

本发明的纳米乳液可通过在温和条件下的简单方法进行而不需要高压下的均化步骤。与高能量程序(例如高压和超声)有关的方法可能负面地影响活性成分的有效期限和最终剂型的稳定性。因此，制备本发明的纳米乳液的所述方法对于活性成分的稳定性而言是有利的。

在一个实施方式中，当纳米乳液组合物是无菌组合物时，如上定义的方法进一步包括灭菌步骤。在一个实施方式中，灭菌步骤在步骤(a)、步骤(b)、步骤(c)、步骤(d)或步骤(e)之后进行。在一个实施方式中，灭菌过程在步骤(e)之后进行。灭菌步骤可根据本领域中熟知的方法进行。在一个实施方式中，灭菌步骤通过选自由过滤、高压灭菌法、加热、辐射和它们的组合组成的组的方法进行；优选灭菌步骤通过过滤进行。在一个实施方式中，本发明的方法进一步包括灭菌过滤。由于微滴平均尺寸和其柔性，纳米乳液可过滤灭菌，这是有利的，因为其使用温和条件且不需要可能负面地影响活性成分的稳定性的高温或辐射方法。因此，涉及灭菌过滤的制备本发明的纳米乳液的方法对于活性成分和纳米乳液的稳定性是有利的。

所有以上针对本发明的纳米乳液组合物公开的实施方式也适用于其制备方法。

本发明的纳米乳液组合物可通过如上定义的其制备方法来定义，且因此可通过本发明的方法获得的本发明的纳米乳液组合物被视为本发明的一部分。出于本发明的目的，表述“可获得的”、“获得的”和同等的表述可互换地使用，并且在任何情况下，表述“可获得的”涵盖表述“获得的”。

所有以上针对本发明的纳米乳液组合物以及针对其制备方法公开的实施方式也适用于可通过该制备方法获得的纳米乳液。

本发明的第三方面涉及如上定义的纳米乳液组合物，其用作药物。

如上面所述的，本发明的第四方面涉及如上定义的纳米乳液组合物，其用于预防和/或治疗炎性疾病或病况。此方面也可以描述成如上定义的纳米乳液组合物在制备用于预防和/或治疗炎性疾病或病况的药物中的用途。其也涉及一种预防和/或治疗患有或易于患有炎性疾病或病况的哺乳动物的方法，其中该方法包括将包含治疗有效量的氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯以及一种或多种药学上可接受的赋形剂或载剂的如上定义的纳米乳液组合物施用至所述哺乳动物。

在一个实施方式中，炎性疾病或病况选自由眼炎性疾病或病况、耳炎性疾病或病况、和口咽炎性疾病或病况组成的组。

在一个实施方式中，炎性疾病或病况是眼炎性疾病或病况。在一个实施方式中，眼炎性疾病或病况选自以下组：与眼手术后相关的炎症和疼痛；葡萄膜炎，例如前葡萄膜炎(虹膜炎和虹膜睫状体炎)或中葡萄膜炎(睫状体炎)；毒性前段综合征；青光眼睫状体炎危机或高血压前葡萄膜炎，例如青光眼睫状体炎综合征；交感性眼炎，例如眼内手术或穿透性创伤后继发的双眼肉芽肿性全葡萄膜炎；涉及眼的自身免疫病，例如Cogan氏综合征或Reiter氏综合征；过敏性结膜炎，例如季节性过敏性结膜炎、多年性过敏性结膜炎、春季角膜结膜炎和特应性角膜结膜炎；眼睑炎；间质性角膜炎；边缘角膜炎(卡他性溃疡)；细菌、病毒或真菌结膜炎；和严重干眼症。

在一个实施方式中，炎性疾病或病况是耳炎性疾病或病况。在一个实施方式中，耳炎性疾病或病况选自以下组：外耳道炎，例如弥散性、局部性或湿疹性耳炎；中耳炎，例如急性或慢性；涉及耳道的特应性皮肤炎。

在一个实施方式中，炎性疾病或病况是口咽炎性疾病或病况。在一个实施方式中，口咽炎性疾病或病况选自以下组：咽炎；急性会厌炎；过敏性喉炎；非感染性急性喉炎；扁平苔藓；口疮性口炎和类天疱疮。

所有以上对于本发明的纳米乳液组合物公开的实施方式也适用于通过其用途限定的纳米乳液组合物。

在整个说明书和权利要求中，词语“包含”和此词语的变体并非旨在排除其他技术特征、添加物、组分或步骤。此外，词语“包含”涵盖“由……组成”的情况。本发明的其他目的、优点和特征对本领域技术人员而言在检视说明书后会变得明显或可通过本发明的实施来学习。以下实施例是以实例的方式提供，且它们并非旨在限制本发明。此外，本发明涵盖于本文中描述的具体和优选的实施方式的所有可能的组合。

实施例

1.水包油纳米乳液

1.1.组合物

A.本发明的组合物

实例1-22示出含有式(I)的丙酸氯倍他索的本发明的纳米乳液。

表1A-1C示出本发明的范围内的实例1-22的纳米乳液的定量组成，其中各组分的量是以各成分相对于组合物的总重量的重量百分比(％)表示。此外，实例1-22的纳米乳液的重量渗透摩尔浓度为100mOsm/Kg至500mOsm/Kg，通过动态光散射测得的微滴平均尺寸为1nm至500nm，且pH为4.0至8.0。

表1A

“q.s.”指足够的量表1B

“q.s.”指足够的量

表1C

“q.s.”指足够的量

B.比较用组合物

实例23-33示出了含有式(I)的丙酸氯倍他索的落在本发明的范围外的组合物。

表1D-1E示出实例23-33的比较用组合物的定量组成，其中各组分的量是以各成分相对于组合物的总重量的重量百分比(％)表示。

特别而言，比较用组合物24、25、26和29落在本发明的范围外，因为油组分与油组分和表面活性剂的总和之间的重量比为0.7，高于提出的限值0.5。此外，油和表面活性剂的百分比高于本发明的纳米乳液的相应百分比。比较用组合物30和31是表面活性剂和氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯之间的重量比高于200:1的纳米乳液。比较用组合物23和27落在本发明的范围外，因为其不是纳米乳液。组合物23和27是胶束溶液，没有油组分的正面活性，且组合物23还含有高百分比的醇，如在现有技术的氯倍他索制剂中所描述的那样。组合物28是悬浮液，因此丙酸氯倍他索并未适当地溶解。组合物32和33是用于药理学研究的安慰剂。

表1D

“q.s.”指足够的量

表1E

“q.s.”指足够的量

C.比较用缓冲溶液

比较用缓冲溶液示出了含有式(I)的丙酸氯倍他索的落在本发明的范围外的组合物。这些比较用缓冲溶液用于稳定性试验(参见1.3节)。

表2示出了在pH 6.0、pH 6.8和pH 7.4时的比较用缓冲溶液的定量组成，其中各组分的量是以相对于溶液的最终体积的克数来表示。

表2

“q.s.”指足够的量

1.2.制备方法

A.本发明的组合物

本发明的实例1-22的组合物按照如以下定义的方法制备：

步骤1(油相)：在适合的反应器中混合丙酸氯倍他索、油和表面活性剂以获得均质混合物。

步骤2(水相)：在分开的反应器中放入水。

步骤3：在搅拌下将水相逐步添加至油相，直到获得纳米乳液。将水相和油相的温度保持恒定在约25℃。

步骤4：根据他们的溶解度，在水相、油相或纳米乳液中添加其他赋形剂或载剂。

B.比较用组合物

本发明的实例23的比较用组合物按照如以下定义的方法制备：

步骤1.在适合的反应器中搅拌氯倍他索和乙醇直到完全溶解。

步骤2.在适合的容器中，将PVAc-PVCap-PEG溶于水中。

步骤3.在持续搅拌下将氯倍他索溶液逐步填加至聚合物溶液中，直到获得均质组合物。

本发明的实例24-26和29-33的比较用组合物按照下文描述的方法制备：

步骤1(油相)：在适合的反应器中混合丙酸氯倍他索、油和表面活性剂以获得均质相。

步骤2(水相)：将油相中不包括的赋形剂溶于水中。

步骤3：在搅拌下将水相逐步添加至油相中，直到获得纳米乳液。

本发明的实例27的比较用组合物按照下文描述的方法制备：

步骤1.在适合的反应器中搅拌氯倍他索和D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)直到获得均质混合物。

步骤2.在适合的容器中，将结冷胶溶于水中。

步骤3.在持续搅拌下将水溶液逐步添加至表面活性剂和氯倍他索的混合物中，直到获得均质组合物。

步骤4.添加甘油并搅拌制剂直到均质。

本发明的实例28的比较用组合物按照下文描述的方法制备：

步骤1.在适合的反应器中搅拌氯倍他索和矿脂，直到获得均质混合物。

C.比较用缓冲溶液

比较用缓冲组合物按照下文描述的方法制备：

将磷酸二氢钠一水合物和磷酸氢二钠二水合物溶于乙腈/水(体积比1:1)中，随后立即将丙酸氯倍他索溶于所得的介质中。

1.3.稳定性测试

将丙酸氯倍他索在纳米乳液组合物中的化学稳定性与相同pH的缓冲溶液进行比较，以评估纳米乳液的保护作用。

A.样品

测试样品：将实例11的本发明的纳米乳液组合物调节至6.0、6.8和7.4的pH。

比较用缓冲溶液样品在1.2节中公开。

B.方法

将在A节中提及的样品按照USP<18334>专题论文“丙酸氯倍他索”中描述的针对有机杂质的分析方法来分别分析，该方法可获自药典的网站http://www.pharmacopeia.cn/v29240/usp29nf24s0_m18334.html#usp29nf24s0_m18334，2017年6月。

所采用的色谱系统由Agilent 1290高效液相色谱组成，具有240nm紫外检测。将Kromasil C₁₈(150x 4.6mm,5μm)柱用于分离杂质。

用水/乙腈(体积:体积为1:1)将约1g的每种组合物稀释至5ml的最终体积，制得样品。

C.条件

在70℃下将样品分别于6.0、6.8和7.4的pH下维持24小时。该时间之后，分析样品。

D.结果

表3示出了在将样品维持在B节中提及的条件下后检测到的降解产物的总量和任意单个降解产物的百分比。具体而言，以重量百分比(％)表示的任意单个降解产物的量以及降解产物的总量示于下表中。

表3

如表3的结果所示，相比于在比较用磷酸盐缓冲溶液中携带的丙酸氯倍他索，本发明的纳米乳液中存在的丙酸氯倍他索在所有测试的pH下皆稳定得多。

具体而言，在pH 6.0时，比较用溶液中的降解产物是本发明的纳米乳液中的7倍之多。此外，在pH 6.8时，比较用溶液中的降解产物是本发明的纳米乳液中的降解产物的14倍之多，在pH 7.4时是53倍之多。

因此，与溶液相比，本发明的纳米乳液组合物改善了丙酸倍氯松的稳定性，此外，本发明的组合物也符合ICH三方协调指导原则新药产品中的杂质Q3B(R2)的规格的严格法规事务要求。

1.4.体外药物释放性能测试

对于局部组合物进行性能测试的目的是测量药物从剂型中的释放。垂直扩散槽(VDC或Franz槽)系统是测量药物从胶态剂型中的释放的简单、可靠且可再现的方法。

药物释放可以利用基于扩散方程的数学模型(例如由Higuchi发表的模型，其经常被使用)来描述。此模型描述了当维持沉降条件时作为时间的平方根的函数(斜率μg/h^1/2)的药物释放。该斜率可视作为活性成分从受测组合物中的释放速率。

A.样品

测试样品：实例7、11和22的本发明的纳米乳液组合物。

比较用样品：实例26、28和29的比较用组合物。

B.方法

递送系统和储库之间的扩散性传播透过惰性的、高度渗透性的支撑膜(多硫烷Tuffryn膜0.45μm)而发生。该膜使产品和接收介质保持分开且区分。该膜是经挑选以提供最小可能的扩散阻力，并且不控制速率。

C.条件

释放速率实验在32℃±1℃下进行。为达成沉降条件，接收介质是5％TPGS水溶液。将测试和比较用样品置于设置在15mm直径孔口的Franz槽中的膜上。取样在4h期间进行，且被提取的体积用新鲜的接收介质置换。按照丙酸氯倍他索USP专题论文中描述的针对有机杂质的分析方法(可获自药典的网站http://www.pharmacopeia.cn/v29240/usp29nf24s0_m18334.html#usp29nf24s0_m18334，2017年6月)，在每个取样时间对每个释放槽确定接收物中的丙酸氯倍他索的量。

对所测试的不同的制剂计算平均累积释放量(μg)，且使用时间的平方根作为自变量来构建线性函数。斜率是评估药物从不同的组合物中释放的速率的主要因子。

D.结果

丙酸氯倍他索从本发明的组合物和从本发明中公开的比较用组合物中的释放情况显示出对线性数学扩散模型的良好适应。这是从接近于1的系数值(R²)证实的，如下表4中所示。

表4示出了以μg/h^1/2表示的斜率值和系数R²值。

表4

实例	斜率(μg/h<sup>1/2</sup>)	系数R<sup>2</sup>
			实例7	38.3	0.9973
实例11	42.1	0.9945
			比较用实例28	0.7	0.9924
比较用实例29	6.5	0.9977
			实例22	29.1	0.9916
比较用实例26	4.8	0.9973

然而，只有本发明的组合物显示出活性成分的快速递送，而比较用组合物具有不完全的且较低的氯倍他索自组合物的递送。高斜率值确认了本发明的组合物中的氯倍他索的快速递送(参见实例7、11和22)，同时比较用组合物(实例26、28和29)显现出低斜率值，其与较低且不完全的递送相关。

具体而言，相比于比较用样品，本发明的纳米乳液中携带的活性成分以更高的量和速率释放至接收介质。然而，比较用组合物的功效由于氯倍他索对于目标生物组织的到达受限而受损，而纳米乳液允许活性成分的正确释放。此行为特别适用于眼部、鼻部或含服施用，因为在这些位置受限的滞留时间是一项挑战，活性成分必须以更快速且有效的方式递送。

2.药理学功效研究

A.耐受性

A.1.体外耐受性

A.1.1.角膜细胞体外耐受性研究(STE方法)

样品

测试样品：实例2、4、8、11、14、16、19和20的纳米乳液。

比较用样品：比较用实例24、25、26、30和31的纳米乳液。

材料和方法

STE测试方法(OECD TG 491)是一种基于测试化学物(物质和混合物)诱发细胞毒性的能力来评估其眼部危害潜力的体外方法。此实验的目的在于表征眼用纳米乳液中的丙酸氯倍他索的细胞毒作用。

将SIRC(Statens Serum Institut兔角膜)细胞接种于无菌的96孔微过滤板中，并将其维持于培养中直到汇合。将测试制剂以确定的浓度稀释在生理盐水(PBS)中，并用时5分钟将培养基用氯倍他索纳米乳液置换。之后，细胞活力通过MTT测定来确定。细胞死亡率是以百分比的形式表示，并且相对于生理盐水对照针对每种测试浓度来进行计算。

结果

经测试的本发明的纳米乳液在所测试的浓度下未显示出细胞毒性，因此按STE评分将其归类为最低刺激性，表明无眼部损伤潜力。然而，以上提及的比较用实例的组合物的培养显示出了细胞毒性作用。

因此，本发明的纳米乳液并不展现眼危害潜力，且必然认为其在眼部水平上被良好地耐受，而比较用组合物会是刺激物且不适用于眼部施用途径。

A.1.2.内耳细胞体外耐受性研究

样品

测试样品：实例2、4、8、11、14、16和20的纳米乳液。

比较用样品：比较用实例24、30和31的纳米乳液。

材料和方法

HEI-OC1(House Ear Institute-柯蒂氏器官-1)细胞系是可用于研究目的最常使用的听觉细胞系之一。HEI-OC1细胞表达若干种柯蒂氏器官感觉细胞的特征性分子标志物(参见Kalinec GM等，“Acochlear cell line as an in vitro system for drugototoxicity screening”.Audiol.Neurootol.2003；vol.8,pp.177-89)。

此试验的目的是测试丙酸氯倍他索纳米乳液对于耳部施用的潜在耳毒性。

将HEI-OC1细胞平板接种于无菌96孔微过滤板中，24小时后，用5％和0.05％的稀释在生理盐水(PBS)中的氯倍他索纳米乳液处理5分钟。之后，细胞活力通过MTT测定来确定。细胞死亡率是以百分比的形式表示，并且相对于生理盐水对照针对每种测试浓度来进行计算。

结果

对于经测试的本发明的纳米乳液未观察到细胞毒性。然而，比较用组合物的培养在5％的浓度下显示高的细胞死亡率。

因此，本发明的纳米乳液展现出低的耳部刺激潜力，而比较用制剂不适用于耳部施用。

A.2.体内眼耐受性研究

样品

测试样品：本发明的实例11的纳米乳液。

比较用样品：实例27的比较用组合物。

对照样品：实例32的媒剂。

材料和方法

-此研究的目标是评估丙酸氯倍他索的不同制剂的眼部刺激潜力。

-将雄性新西兰兔用于此测试。

-所使用的方案基于TG405:OCDE化学品测试规范：急性眼刺激/腐蚀(2012)。

-将兔分配在不同的组(包括对照组和测试组)中。处理过程包括：将以上定义的对照样品、测试样品和比较用样品一日7次施用至每只动物的双眼。因此，各样品是在将下眼睑轻轻拉离眼球后放置于结膜下囊中。在施用后，使眼睑闭上并轻轻地使其保持闭合以防止材料流失。在每日给药前和最后一次给药后30分钟时使用狭缝灯根据眼病变分级(来自TG405:OCDE化学品测试规范：急性眼刺激/腐蚀(2012))来检查结膜、角膜、眼睑和虹膜。将对照未处理动物用作参照。

结果

在施用本发明的纳米乳液后，在经处理的动物的眼的角膜、眼睑、虹膜或结膜中未观察到眼部异常(混浊、发红或肿胀)。因此，必然认为本发明的纳米乳液在眼部水平上不是刺激物。然而，使用上述比较用样品获得的结果显示为刺激物，且不适用于眼部施用。

B.对眼内压(IOP)的效果的研究

样品

测试样品：实例7和10的纳米乳液。

对照样品：阳性对照：地塞米松0.1％。

阴性对照：0.9％氯化钠盐水溶液。

材料和方法

-所使用的实验室动物是血压正常的白化新西兰兔。使这些兔适应于调节和维持稳定的眼内压(IOP)昼夜循环所需的光暗周期(12/12小时)。

-将兔分配在不同的组中：阳性对照组(阳性对照样品)、阴性对照组(阴性对照样品)和两个测试组(两个测试样品)。

-处理过程包括：将地塞米松注射至眼前房中，而对于剩下的组，用对照样品或测试组合物局部滴注每只动物的每只眼，一日4次，进行15日。

-这些组的IOP的测量是一日进行两次。在对各动物进行滴注后，观察眼表面上的各化合物的不良效应的可能性。

结果

对本发明的纳米乳液(实例7和10)进行的测试在15日间隔测试期间未显示出眼内压的显著改变。具体而言，在施用实例7的纳米乳液后，未观察到眼内压的统计学上显著的提高。同时，施用实例10的纳米乳液时未观察到改变。

另一方面，以前眼房施用地塞米松(阳性对照)处理的动物展现出眼内压值的统计学上显著的提高。

此外，对于测试的样品，未在任何眼科检查中观察到眼表面不良效应(几乎不显示改变或值得提及的观察结果)。

因此，应当认为本发明的纳米乳液在治疗期间(即在15日的滴注期间)是安全的。由于在体外耐受性测试中获得负面结果，比较用样品不适于在动物模型中测试。

C.抗炎功效研究

C.1.体外抗炎功效研究

样品

测试样品：实例2、6、7、10、11、16、21和22的纳米乳液。

材料和方法

THP-1细胞系是获自急性单核细胞性白血病患者的永生人类单核细胞系。将THP-1细胞平板接种，用LPS和IFN-γ诱发发炎症，并将细胞培养24小时。之后，将用测试样品处理细胞。用培养基稀释待测试的制剂，并培养另外24小时。使用BDOptEIA人TNFαElisa套组(根据BD 555212)通过ELISA来测量蛋白浓度。相对于经刺激组(其被设为100％的表达水平)，计算细胞因子水平的抑制百分比。

结果

本发明的纳米乳液组合物显示出减少TNFα蛋白表达的抗炎活性，其抑制百分比接近100％。这些结果确认了活性成分向培养基中的释放以及正确的抗炎活性。

C.2.体内抗炎功效研究

C.2.1.i)术后炎性的兔模型(穿刺术)

样品

测试样品：实例10和18

比较用样品：实例23

对照样品：阴性对照1：盐水溶液

阴性对照2：媒剂实例33

材料和方法

抗炎功效测试在通过眼前房穿刺术产生的急性术后炎症兔模型中进行。

将接受穿刺术的动物分配至不同的组：阴性对照组(阴性对照样品)、比较用测试组(比较用样品)和两个测试组(测试样品)。眼前房穿刺术用连接至注射器的针进行，并移出水状体液样品。在距离第一次穿刺术2小时后，进行第二次穿刺术以收集水状体液来进行生物化学评估。水状体液中的前列腺素E2(PGE2)的水平通过ELISA(R&D SystemsSKGE004B)来评估。

结果

此研究的目标是评估本发明的纳米乳液的丙酸氯倍他索的抗炎功效。

相比于对照，本发明的纳米乳液显著降低了水状体液的PGE₂浓度。然而，比较用组合物的施用并未显示出对PGE₂生物标志物的任何效果，说明明显缺乏功效。

因此，应当认为本发明的纳米乳液对治疗眼炎性疾病或病况是有效的。

3.比较例

以下公开的比较用组合物34和35是Mohammad Sajid Ali等(参见Mohammad SajidAli等，“accelerated Stability Testing of a Clobetasol propionate Loadednanoemulsion as per ICH guideline”.Scientia Pharmaceutica,2013,vol.81,no.4,pp.1089-1100)描述的丙酸氯倍他索乳液的再现产品。

3.1.比较用组合物

表5示出了比较例34和35的比较用组合物的定量组成，其中丙酸氯倍他索的量以相对于组合物总体积的质量浓度(w/v)表示；而组合物其余成分的量以相对于组合物总体积的体积百分比(％)(v/v)表示。

表5

比较例	比较例34	比较例35
			丙酸氯倍他索	0.05％(w/v)	0.05％(w/v)
桉油	15％(v/v)	15％(v/v)
			吐温20:乙醇(1:1)	35％(v/v)	-
吐温20:乙醇(1:2)	-	35％(v/v)
			水	q.s.*100.0％(v/v)	q.s.*100.0％(v/v)

“q.s.”指足够的量

3.2.制备方法

3.2.1.比较例34

按照Mohamed Sajid Ali在1092页的章节“丙酸氯倍他索纳米乳液的制备”中公开的方法制备吐温20和乙醇Smix之比为1:1的氯倍他索比较例34。本文中将此章节引用如下：

“[…]通过将0.05％(w/v)丙酸氯倍他索(CP)溶解在15％(v/v)的桉油中来制备优化的纳米乳液，然后将吐温20和乙醇(1:1v/v)的35％(v/v)混合物缓慢加入油相。之后缓慢加入剩余量的蒸馏水以得到100％(v/v)的最终制剂。使用涡旋混合器剧烈振荡混合物(油、Smix和水)[…]”

3.2.2.比较例35

按照Mohamed Sajid Ali在1092页的章节“丙酸氯倍他索纳米乳液的制备”中公开的方法制备吐温20和乙醇Smix之比为1:2(见1092页16行)的氯倍他索比较例35，其中将吐温20与乙醇之比由1:1改为了1:2。

3.3.外观和微滴平均尺寸的测量

3.3.1.肉眼评估

用肉眼观察比较例34和35(刚刚制备后)，结论是这些组合物是具有低粘度外观的不透光(不透明)的液体组合物。

3.3.2.通过动态光散射(DLS)测量微滴平均尺寸

通过动态光散射(DLS)分析比较例34和35的平均微滴尺寸。仪器确定了样品的高的多分散性，表明微滴平均尺寸的值超过6000nm。

3.3.3.结论

比较例34和35的不透明性表明Mohammad Sajid Ali等公开的比较用组合物34和35的微滴尺寸比纳米乳液(半透明)的高得多。此外，由于DLS测得的微滴尺寸显示出高分散和超过6000nm的微滴尺寸值，这意味着比较用组合物的微滴尺寸与纳米乳液微滴平均尺寸范围(1至500nm)不符。

因此，由上面全部公开内容可以看出，比较例34和35的微滴尺寸高于6,000nm(其是DLS的高检测点)，超出要求保护的范围，故必须将其视为乳液而不是纳米乳液。

3.4.稳定性测试

比较用组合物34和35不稳定，演变成三个不同的相，而不是保持均匀统一的外观。研究在25±2℃/60±5％相对湿度(RH)下进行，并且在储存时间为1周之前观察到了变化。

因此，比较用组合物34和35不具有胶体稳定性。

3.5.重量渗透摩尔浓度测试

3.5.1.样品

测试样品：比较用组合物34和35

3.5.2.材料和方法

重量渗透摩尔浓度通过使用渗透计测量样品的凝固点降低来确定。

3.5.3.结果

比较用组合物34和35的重量渗透摩尔浓度高于本发明要求保护的范围(即100mOsm/Kg至500mOsm/Kg)。具体地，这两个比较用组合物的重量渗透摩尔浓度都高于2500mOsm/Kg。特别值得注意的是，比较用组合物34的重量渗透摩尔浓度为2716mOsm/Kg(USP总章<771>眼科产品，参见重量渗透摩尔浓度和容量渗透摩尔浓度(osmolarity)<785>：眼科产品的可耐受范围为171mOsm/kg至约1711mOsm/kg)。比较用组合物的重量渗透摩尔浓度值远高于眼科应用的耐受重量渗透摩尔浓度(171mOsm/kg至1711mOsm/kg)。

因此，比较用组合物34和35不适用于眼科应用。由于鼻和耳组织的敏感性，鼻和耳用组合物也需要等渗的或略微高渗的或略微低渗的组合物。因此，组合物34和35不适用于鼻或耳施用的递送途径。

3.6.角膜细胞体外耐受性研究(STE方法)

3.6.1.样品、材料和方法

此测定如上文A.1.1节中公开的进行，但使用比较用组合物34和35作为测试样品。

3.6.2.结果

所测试的比较用组合物34和35在所测试的浓度下显示出细胞毒性，因此根据STE评分将其归类为有毒。

因此，比较用组合物34和35不适于用于眼部施用。

3.7.内耳细胞体外耐受性研究

3.7.1.样品、材料和方法

此测定如上文A.1.2节中公开的进行，但使用比较用组合物34和35作为测试样品。

3.7.2.结果

对于测试的比较组合物34和35观察到了细胞毒性。具体地，比较用组合物34和35的培养在受试浓度为5％时显示出较高的细胞死亡率。

因此，比较用组合物34和35不适于用于耳部施用。

3.8.眼刺激测定(HET-CAM)

3.8.1.材料和方法

HET-CAM是一种模拟绒毛尿囊膜的血管变化的方法，绒毛尿囊膜是眼结膜的类似物，该方法可用于确定受试物质的潜在刺激性。该方法基于ICCVAM推荐的测试方法操作规程：鸡卵测试-绒毛尿囊膜(HET-CAM)测试方法(NIH出版号10-7553，2010年出版)中描述的内容。

将受精的白SPF(不含特殊病原体)白色来亨鸡鸡卵在37℃和60％湿度下孵育至多至第10天。在确定了胚胎的活力之后，从气室正上方的壳上取下一个矩形窗口，并用2-3ml的0.9％盐水小心地润湿卵膜。返回培养箱30分钟后，取出内膜，用移液管将测试物质涂在CAM膜上。连续观察鸡卵5分钟，观察是否出现了消解、出血和/或凝结，并按照ICCVAM推荐的测试方法操作规程(NIH出版号10-7553，2010年出版)规范来确定刺激评分(IS)。

刺激评分(IS)如下：

-无刺激:0≥IS≥0.9

-轻度刺激:1≥IS≥4.9

-中度刺激:5≥IS≥9.9

-重度刺激:10≥IS≥21

3.8.2.结果

进行以上公开的HET-CAM眼刺激测定，并制作测试样品的相应代表性图像(参见图1)。

具体而言，代表性图像反映出本发明的纳米乳液没有引发任何消解、出血或凝结过程，但代表性图像反映出比较用组合物34是刺激性的。

此外，还确定了实例7和11的组合物以及比较用组合物34的刺激评分(IS)。IS的值公开在下表中：

因此，由上述结果可以看出，本发明的组合物是无刺激的，而Mohammad Sajid Ali等公开的比较用组合物被视为是刺激性的，因此不适合用作本发明提出的用途的药物。

3.9.结论

Mohammad Sajid Ali等公开的组合物是微滴平均尺寸高于6,000nm且重量渗透摩尔浓度高于2500mOsm/kg的非透明乳液。此外，油/氯倍他索之比为272，表面活性剂/氯倍他索之比为385，皆高于本发明的组合物所要求保护的范围。

此外，Mohammad Sajid Ali等公开的组合物不具有胶体稳定性，而且这些组合物是刺激性的，因此不适合用作药物。

引用文献列表

1.491OECD化学品测试规范。用于鉴定以下各项的短时间暴露体外测试方法：i)诱发性严重眼伤害的化学品，和ii)对于眼刺激或严重眼伤害而言不要求分类的化学品(2015)。可获自以下网站：

http://www.oecd-ilibrary.org/docserver/download/9715201e.pdf？expires＝1515680383&id＝id&accname＝guest&checksum＝623490053F1D25E26DB7B437B0669A4B，2015年7月。

2.Hassan,P.等，“Making sense of Brownian motion:colloidcharacterization by dynamic light scattering”,Langmuir,2015,vol.31,pp.3-12。

3.ICH三方协调指导原则新药产品中的杂质Q3B(R2)。可获自网站http://www.ich.org/products/guidelines/quality/quality-single/article/impurities-in-new-drug-products.html，2017年6月。

4.Kalinec GM,Webster P,Lim DJ,Kalinec F:Acochlear cell line as an invitro system for drug ototoxicity screening.Audiol.Neurootol.2003；8:177-89。

5.TG405:OCDE化学品测试规范：急性眼刺激/腐蚀(2012)。可获自网站http://www.oecd-ilibrary.org/docserver/download/9712201e.pdf？expires＝1515680005&id＝id&accname＝guest&checksum＝E0DCF0095196C8D17EBEBE86CAF3D3DA，2012年10月。

6.USP<18334>专题论文“丙酸氯倍他索”。可获自网站http://www.pharmacopeia.cn/v29240/usp29nf24s0_m18334.html#usp29nf24s0_m18334，2017年6月。

7.欧洲专利EP0844001。

8.PCT专利申请WO2017037663。

9.ICCVAM推荐的测试方法操作规程：鸡卵测试-绒毛尿囊膜(HET-CAM)测试方法(NIH出版号10-7553，2010年出版)规范。可获自网站https://ntp.niehs.nih.gov/iccvam/docs/protocols/ivocular-hetcam.pdf，2017年12月。

10.Mohammad Sajid Ali等，“Accelerated Stability Testing of aClobetasol propionate Loaded nanoemulsion as per ICH guideline”.ScientiaPharmaceutica,2013,vol.81,no.4,pp.1089-1100)。

Claims

1.一种具有连续的水相和分散的油微滴的水包油纳米乳液组合物，其中，所述纳米乳液包含：

(a)治疗有效量的氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯；

(b)一种或多种油组分；和

(c)一种或多种表面活性剂；

以及一种或多种药学上可接受的赋形剂或载剂，

其中：

所述纳米乳液组合物的重量渗透摩尔浓度为100mOsm/Kg至500mOsm/Kg；

通过动态光散射测得的所述微滴的平均尺寸为1nm至500nm；

所述油组分与所述油组分和一种或多种表面活性剂的总和之间的重量比为0.001至0.5；

所述油组分与氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯之间的重量比为1:1至200:1；并且

所述表面活性剂与氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯之间的重量比为2:1至200:1。

2.如权利要求1所述的水包油纳米乳液组合物，其包含0.001重量％至0.1重量％的丙酸氯倍他索。

3.如权利要求1所述的水包油纳米乳液组合物，其中，pH为4.0至8.0。

4.如权利要求1所述的水包油纳米乳液组合物，其中，所述油组分与所述油组分和一种或多种表面活性剂的总和之间的重量比为0.001至0.4。

5.如权利要求1所述的水包油纳米乳液组合物，其中，所述油组分与氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯之间的重量比为1:1至100:1。

6.如权利要求1所述的水包油纳米乳液组合物，其中，所述表面活性剂与氯倍他索或其药学上可接受的盐或酯之间的重量比为2:1至190:1。

7.如权利要求1所述的水包油纳米乳液组合物，其中，所述纳米乳液组合物中的乙醇的量为0重量％至3重量％。

8.如权利要求1所述的水包油纳米乳液组合物，其中，所述油组分选自由以下组成的组：蓖麻油；甘油单硬脂酸酯；油酸乙酯；油酸癸酯；肉豆蔻酸异丙酯；棕榈酸异丙酯；异硬脂酸异丙酯；异硬脂酸异十八烷基酯；乳酸肉豆蔻酯；矿物油；轻质矿物油；植物油；甘油与C₆-C₁₂烷基脂肪的单酯、二酯或三酯；以及它们的混合物。

9.如权利要求1所述的水包油纳米乳液组合物，其中，所述表面活性剂是选自由脱水山梨醇酯乙氧基化物衍生物、脱水山梨醇酯衍生物、聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)共聚物、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯40硬脂酸酯、辛苯醇醚40、D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)以及它们的混合物组成的组的非离子性表面活性剂。

10.如权利要求1所述的水包油纳米乳液组合物，其还包含选自由乙酸、硼酸、山梨酸、柠檬酸、磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、盐酸、氢氧化钠、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硫酸钠、三(羟甲基)氨基甲烷、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、碳酸氢钠、硼酸钠、乙酸钠、重硫酸钠、苯甲酸钠、柠檬酸钠以及它们的混合物组成的组的pH调节剂。

11.如权利要求1所述的水包油纳米乳液组合物，其还包含选自由氯化钠、甘油、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、丙二醇以及它们的混合物组成的组的张度剂。

12.如权利要求1至11中任一项所述的水包油纳米乳液组合物，其为眼用组合物、鼻用组合物、耳用组合物或含服组合物的形式。

13.一种制备权利要求1至12中任一项所述的水包油纳米乳液组合物的方法，所述方法包括：

(a)通过混合氯倍他索与所述油组分和所述表面活性剂来制备油相；

(b)制备水相；

(c)将步骤(a)中获得的油相在步骤(b)中获得的水相中乳化；

(d)可选地，在步骤(a)、步骤(b)或步骤(c)之后调节：pH；重量渗透摩尔浓度；pH和重量渗透摩尔浓度；和

(e)可选地，在步骤(a)、步骤(b)或步骤(c)中添加一种或多种额外的药学上可接受的赋形剂或载剂。

14.权利要求1至12中任一项所述的水包油纳米乳液组合物在制备用于预防和/或治疗炎性疾病或病况的药物中的用途。