CN102279232B - 生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法 - Google Patents
生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102279232B CN102279232B CN2011100762251A CN201110076225A CN102279232B CN 102279232 B CN102279232 B CN 102279232B CN 2011100762251 A CN2011100762251 A CN 2011100762251A CN 201110076225 A CN201110076225 A CN 201110076225A CN 102279232 B CN102279232 B CN 102279232B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- biological sample
- solid phase
- imprinted polymer
- sulfamido
- phase extraction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
本发明涉及到一种生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)制备分子印迹聚合物：按模板分子：功能单体：交联剂的摩尔比1∶2～8∶25的比例配料，通过本体聚合法获得对磺胺类抗生素具有特异识别功能的分子印迹聚合物；(2)称取一定量待分离生物样品于研钵中，用研钵磨碎，加入适量上述分子印迹聚合物，进一步匀浆后得到匀浆样品；其中待分离生物样品与分子印迹聚合物的重量比为2∶1-5。(3)将所述的匀浆样品置于固相萃取小柱中，依次用2.0-4.0mL水、2.0-4.0mL 10wt％乙腈水溶液淋洗，然后用3.0-5.0mL甲醇/甲酸混合溶液洗脱；磺胺类抗生素即溶于甲醇/甲酸洗脱液中从所述的待分离生物样品中分离出来。本发明所提供的方法选择性广、分离纯化效果好。
Description
技术领域
本发明涉及分析化学、食品安全、兽药残留领域，具体地说，是涉及复杂生物样品中磺胺类抗生素多残留的高选择性、快速分离、富集和纯化方法。
背景技术
磺胺类抗生素(Sulfonamides，SAs)是一类化学合成的抗生素，它对多数革兰氏阳性菌及某些革兰氏阴性菌有抑制作用，被广泛应用于治疗各种动物的细菌性感染疾病，但是磺胺类抗生素可导致机体过敏反应、破坏机体的造血系统、导致各种贫血症的发生。尤其是，目前抗生素在食品中的残留问题十分普遍，世界上许多国家都对动物源性食品中的抗生素残留限量作了严格规定，加拿大、欧盟、美国等国家规定动物组织中磺胺类药物总量的最大残留量是100μg/kg；我国农业部第235号文件规定其在动物源性食品中磺胺类抗生素的最高残留限量(MRL)为0.1mg/kg。因此，磺胺类抗生素的检测对保障我国动物性产品出口贸易的正常发展和人民身体健康具有重要意义。
目前，对磺胺类抗生素残留的分析检测方法主要有分光光度法、示波极谱法、荧光光度法、毛细管电泳法(CE)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱质谱联用法(HPLC-MS)及用于快速检测的放射免疫法和酶联免疫法。但是由于样品基质的复杂性和多样性，常规检测方法和仪器往往无法从复杂的样品中准确的检测到痕量的违禁药物残留；而且复杂的样品基质会影响检测仪器的寿命，增加检测成本。同时，在检测过程中，样品的前期处理占用的时间和工作量通常占整个检测过程的60％以上，导致检测效率较低。
中国发明专利申请CN200810052542.8所公开的《磺胺甲恶唑分子印迹聚合物的制备方法》，该申请采用磺胺甲恶唑为模板分子、甲基丙烯酸为功能单体、离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐为致孔剂、乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂、偶氮二异丁腈为引发剂，制备得到的分子印迹聚合物用于固相萃取和高效液相色谱填料对磺胺甲恶唑分子表现出较好的识别特异性。但是该申请中的分子印迹聚合物只对磺胺甲恶唑具有识别性，对其它的磺胺类抗生素则没有识别性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状提供一种生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其通过利用对磺胺类抗生素特异的分子印迹聚合物作为基质固相分散萃取技术的填料，进一步通过对萃取条件的优化，建立一种复杂生物样品中磺胺类抗生素多残留分离纯化方法，以达到从复杂生物样品中快速、高选择性的分离和富集磺胺类抗生素多残留、有效的去除样品基质的干扰、同时提高了检测灵敏度和准确度的目的。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)制备分子印迹聚合物：按模板分子：功能单体：交联剂的摩尔比1∶2～8∶25的比例配料，通过本体聚合法获得对磺胺类抗生素具有特异识别功能的分子印迹聚合物；
其中，所述的模板分子为磺胺二甲氧嘧啶，所述的功能单体为甲基丙烯酸，所述的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；
(2)称取0.1-0.3g待分离生物样品于研钵中，用研钵磨碎，加入适量上述分子印迹聚合物，进一步匀浆后得到匀浆样品；
(3)将所述的匀浆样品置于固相萃取小柱中，依次用2.0-4.0mL水、2.0-4.0mL10wt％乙腈水溶液淋洗，然后用3.0-5.0mL甲醇/甲酸混合溶液洗脱；磺胺类抗生素即溶于甲醇/甲酸洗脱液中从所述的待分离生物样品中分离出来；
其中，所述甲醇/甲酸混合溶液中甲醇与甲酸的体积比为90∶10。
较好的，步骤(2)中所述匀浆样品中待分离生物样品与所述分子印迹聚合物的重量比为2∶5。
上述各方案中所采用的固相萃取小柱为聚丙烯固相萃取小柱，其能获得更佳的萃取效果。较好的，所述固相萃取小柱的体积可以为3-10mL。
为获得理想的分离纯化效果，提高样品回收率，上述各方案中，步骤(3)中所述匀浆样品置于所述固相萃取小柱之前，可以先向所述的固相萃取小柱中预装20-30mg所述的分子印迹聚合物。
众所周知，制备可同时特异识别一类物质的分子印迹聚合物及解决模板分子的渗漏对检测结果的干扰，模板分子的选择是关键。模板分子的选择不仅对分子印迹聚合物的识别特性具有重要的影响，而且对分离纯化效果也有一定的影响。本发明在大量试验的基础上，选择磺胺二甲氧嘧啶为模板分子，进一步结合功能单体、交联剂用量及比例的优化，制备得到一种具有固定孔穴和特定功能基团排列的高分子交联聚合物，对磺胺类抗生素具有较好的特异识别功能，可同时实现对多种磺胺类抗生素的特异性识别，例如同时识别磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺-5-甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶等，适用性广；将其应用于基质固相分散萃取，表现出较好的分离、纯化性能，尤其适用于复杂生物样品中多残留磺胺类抗生素的快速高效分离纯化，并且模板分子残留对检测结果干扰小，检测效率高，分离富集效果好。
附图说明
图1为本发明实施例1中分离效果的液相色谱图；
图2为本发明实施例2中分离效果的液相色谱图；
图3为本发明实施例3中分离效果的液相色谱图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
下述各实施例中分子印迹聚合物的制备方法如下：
称取适量功能单体甲基丙烯酸和模板分子磺胺二甲氧嘧啶(SDM)溶解于15mL乙腈稀释剂中，加入交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯EGDMA 5mL、偶氮二异丁腈引发剂120mg，超声脱气5～10min，混合均匀后，通入氮气10～15min，密封。置于60℃水浴中反应24h；聚合反应结束后，将合成的块状聚合物取出研磨、过筛后依次用甲醇∶甲酸(90∶10，v/v)、甲醇通过索氏萃取除去模板分子，用丙酮反复沉降以除去过细的聚合物颗粒，然后将除去模板分子的聚合物在50℃真空干燥，即得到对磺胺类抗生素具有特异识别功能的分子印迹聚合物。
实施例1.
(一)磺胺类抗生素分子印迹聚合物的制备
准确称取功能单体甲基丙烯酸2mmol和模板分子磺胺二甲氧嘧啶1mmol溶解于15mL乙腈中，加入交联剂EGDMA 25mmol、引发剂偶氮二异丁腈120mg，超声脱气5min，混合均匀后，通入氮气10～15min，密封。置于60℃水浴中反应24h；聚合反应结束后，将合成的块状聚合物取出研磨、过筛后依次用甲醇∶甲酸(90∶10，v/v)、甲醇通过索氏萃取除去模板分子，用丙酮反复沉降以除去过细的聚合物颗粒，然后将除去模板分子的聚合物在50℃真空干燥，即得到分子印迹聚合物。
(二)磺胺类抗生素基质固相分散萃取方法，具体步骤如下
选择市购且经检测体内无磺胺类抗生素残留的鱼作为样品，向该鱼样品中加入磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑和磺胺间二甲氧嘧啶，三种加标浓度如表1所示。
称取0.2g加标后的鱼样品于研钵中，用研钵磨碎，加入0.5g分子印迹聚合物，进一步匀浆后，得到匀浆样品。
(2)向下端带有垫片的10mL聚丙烯固相萃取小柱中预装20mg分子印迹聚合物，然后将匀浆样品置于聚丙烯固相萃取小柱中。
(3)依次用2.0mL水、3.0mL 10wt％乙腈水溶液淋洗聚丙烯固相萃取小柱中的匀浆样品，然后用3mL体积比为90∶10甲醇/甲酸混合液进行洗脱，磺胺类抗生素即溶于甲醇/甲酸洗脱液中。
(三)分离效果的检测
基质固相分散萃取获得的甲醇/甲酸洗脱液40℃氮气吹干后，溶于0.5mL液相色谱流动相中，0.22μm滤膜过滤后用高效液相色谱-紫外检测器检测。检测结果如表1所示，其液相色谱如图1所示。
实施例2
(一)磺胺类抗生素分子印迹聚合物的制备
准确称取功能单体甲基丙烯酸4mmol和模板分子磺胺二甲氧嘧啶1mmol溶解于15mL乙腈中，加入交联剂EGDMA 25mmol、引发剂偶氮二异丁腈120mg，超声脱气5～10min，混合均匀后，通入氮气15min，密封。置于60℃水浴中反应24h；聚合反应结束后，将合成的块状聚合物取出研磨、过筛后依次用甲醇∶甲酸(90∶10，v/v)、甲醇通过索氏萃取除去模板分子，用丙酮反复沉降以除去过细的聚合物颗粒，然后将除去模板分子的聚合物在50℃真空干燥，即得到分子印迹聚合物。
(二)磺胺类抗生素基质固相分散萃取方法，具体步骤如下
(1)选用市场购买的、经检测后体内无磺胺类抗生素残留的虾作为样品，向该虾样品中加入磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑和磺胺间二甲氧嘧啶。三种加标浓度如表1所示。
经检测称取0.2g虾于研钵中，用研钵磨碎，加入0.1g分子印迹聚合物，进一步匀浆后，得到匀浆样品。
(2)向下端带有垫片的10mL聚苯乙烯固相萃取小柱中预装20mg分子印迹聚合物，将匀浆样品置于聚苯乙烯固相萃取小柱中。
(2)依次用2.0mL水、3.0mL 10wt％乙腈水溶液淋洗聚苯乙烯固相萃取小柱，然后用体积比为90∶10的甲醇/甲酸混合液进行洗脱，匀浆样品中受到磺胺类抗生素即溶于甲醇/甲酸洗脱液中。
(三)分离效果的检测
基质固相分散萃取获得的甲醇/甲酸洗脱液40℃氮气吹干后，溶于0.5mL液相色谱流动相中，0.22μm滤膜过滤后用高效液相色谱-紫外检测器检测。检测结果如表1所示，其液相色谱如图2所示。
实施例3
(一)磺胺类抗生素分子印迹聚合物的制备
准确称取功能单体甲基丙烯酸8mmol和模板分子磺胺二甲氧嘧啶1mmol溶解于15mL乙腈中，加入交联剂EGDMA 25mmol、引发剂偶氮二异丁腈120mg，超声脱气10min，混合均匀后，通入氮气10min，密封。置于60℃水浴中反应24h；聚合反应结束后，将合成的块状聚合物取出研磨、过筛后依次用甲醇∶甲酸(90∶10，v/v)、甲醇通过索氏萃取除去模板分子，用丙酮反复沉降以除去过细的聚合物颗粒，然后将除去模板分子的聚合物在50℃真空干燥，即得到分子印迹聚合物。
(二)磺胺类抗生素基质固相分散萃取方法，具体步骤如下
(1)选择市购且经检测体内无磺胺类抗生素残留的猪肉作为样品，向该猪肉样品中加入磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑和磺胺间二甲氧嘧啶，三种加标浓度如表1所示。
称取0.2g加标后的猪肉样品于研钵中，用研钵磨碎，加入0.3g分子印迹聚合物，进一步匀浆后，得到匀浆样品；
(2)向下端带有垫片的10mL聚丙烯固相萃取小柱中预装30 mg分子印迹聚合物，将匀浆样品置于聚苯乙烯固相萃取小柱中。
(3)将获得固相萃取小柱依次用2.0mL水、2.0mL10wt 10％乙腈水溶液淋洗，然后用3mL甲醇/甲酸(90/10，v/v)洗脱，获得对磺胺类抗生素多残留分离纯化技术。
(三)分离效果的检测
基质固相分散萃取获得的甲醇/甲酸洗脱液40℃氮气吹干后，溶于0.5mL液相色谱流动相中，0.22μm滤膜过滤后用高效液相色谱-质谱检测。检测结果如表1所示，其液相色谱如图3所示。
表1
a，n＝3
Claims (7)
1.生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)制备分子印迹聚合物：按模板分子∶功能单体∶交联剂的摩尔比1∶2～8∶25的比例配料，通过本体聚合法获得对磺胺类抗生素具有特异识别功能的分子印迹聚合物；
其中，所述的模板分子为磺胺二甲氧嘧啶；所述的功能单体为甲基丙烯酸，所述的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；
(2)称取一定量待分离生物样品于研钵中，用研钵磨碎，加入适量上述分子印迹聚合物，进一步匀浆后得到匀浆样品；其中待分离生物样品与分子印迹聚合物的重量比为2∶1-5。
(3)向下端带有垫片的固相萃取小柱中预装20-30mg的分子印迹聚合物，将所述的匀浆样品置于固相萃取小柱中，依次用2.0-4.0mL水、2.0-4.0mL10wt％乙腈水溶液淋洗，然后用3.0-5.0mL甲醇/甲酸混合溶液洗脱；磺胺类抗生素即溶于甲醇/甲酸洗脱液中从所述的待分离生物样品中分离出来；
其中，所述甲醇/甲酸混合溶液中甲醇与甲酸的体积比为90∶10；
所述的磺胺类抗生素包括磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺-5-甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑和磺胺二甲氧嘧啶。
2.根据权利要求1所述的生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其特征在于步骤(2)中所述匀浆样品中待分离生物样品与所述分子印迹聚合物的重量比为2∶5。
3.根据权利要求1或2所述的生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其特征在于所述的固相萃取小柱为聚丙烯固相萃取小柱。
4.根据权利要求3所述的生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其特征在于所述固相萃取小柱的体积为3-10mL。
5.根据权利要求1或2所述的生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其特征在于步骤(3)中所述匀浆样品置于所述固相萃取小柱之前，先向所述的固相萃取小柱中预装20-30mg所述的分子印迹聚合物。
6.根据权利要求3所述的生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其特征在于步骤(3)中所述匀浆样品置于所述固相萃取小柱之前，先向所述的固相萃取小柱中预装20-30mg所述的分子印迹聚合物。
7.根据权利要求4所述的生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其特征在于步骤(3)中所述匀浆样品置于所述固相萃取小柱之前，先向所述的固相萃取小柱中预装20-30mg所述的分子印迹聚合物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011100762251A CN102279232B (zh) | 2011-03-24 | 2011-03-24 | 生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011100762251A CN102279232B (zh) | 2011-03-24 | 2011-03-24 | 生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102279232A CN102279232A (zh) | 2011-12-14 |
| CN102279232B true CN102279232B (zh) | 2013-12-11 |
Family
ID=45104796
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2011100762251A Expired - Fee Related CN102279232B (zh) | 2011-03-24 | 2011-03-24 | 生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102279232B (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102921392B (zh) * | 2012-11-08 | 2016-03-16 | 大连海洋大学 | 磺胺嘧啶分子印迹整体柱的制备方法 |
| CN105628668A (zh) * | 2014-10-28 | 2016-06-01 | 河北伊诺光学科技有限公司 | 一种牛奶中磺胺二甲嘧啶的分子印迹-拉曼联用检测方法 |
| CN104774292B (zh) * | 2015-04-27 | 2017-10-24 | 新疆大学 | 一种用高吸水树脂浓缩水溶液中低浓度磺胺甲恶唑的方法 |
| CN106540668B (zh) * | 2015-09-18 | 2019-04-23 | 中华人民共和国淮安出入境检验检疫局 | 磁性亲水分子印迹复合材料及其制备方法 |
| CN105199045B (zh) * | 2015-10-01 | 2019-03-05 | 大连理工大学 | 一种识别磺胺类抗生素的分子印迹聚合物的制备方法 |
| CN107233873B (zh) * | 2017-07-24 | 2019-03-29 | 齐鲁工业大学 | 对磺胺类药物具有特异性的固相微萃取纤维的制备方法 |
| CN109046278A (zh) * | 2018-07-09 | 2018-12-21 | 大连工业大学 | 一种中空组合模板分子印迹聚合物微壳的制备方法与应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2626823A1 (fr) * | 2008-03-25 | 2009-09-25 | Universite De Montreal | Polymeres a empreinte moleculaire, leur procede de preparation et leur utilisation pour detecter des molecules en milieu biologique |
| CN101245121A (zh) * | 2008-03-28 | 2008-08-20 | 南开大学 | 磺胺甲恶唑分子印迹聚合物的制备方法 |
| CN101434679A (zh) * | 2008-12-25 | 2009-05-20 | 上海交通大学 | 分子印迹聚合物的制备及用其分离盐酸克伦特罗的方法 |
-
2011
- 2011-03-24 CN CN2011100762251A patent/CN102279232B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102279232A (zh) | 2011-12-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102279232B (zh) | 生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法 | |
| Hennion et al. | Immuno-based sample preparation for trace analysis | |
| Sun et al. | Determination of tetracyclines in food samples by molecularly imprinted monolithic column coupling with high performance liquid chromatography | |
| CN101559352B (zh) | 用于检测三聚氰胺的分子印迹聚合物及其制备方法 | |
| Piletsky et al. | Custom synthesis of molecular imprinted polymers for biotechnological application: Preparation of a polymer selective for tylosin | |
| EP2282209A1 (en) | Method for labelling sugar chains | |
| Mergola et al. | Developments in the synthesis of a water compatible molecularly imprinted polymer as artificial receptor for detection of 3-nitro-L-tyrosine in neurological diseases | |
| CN103512984A (zh) | 一种检测不同种类“瘦肉精”残留的样品前处理方法 | |
| CN101246150B (zh) | 一种四环素分子印迹整体柱的制备方法 | |
| CN105628844B (zh) | 一种测定动物组织中残留苯并咪唑类药物的方法 | |
| CN103558320B (zh) | 硼酸亲和整体柱固相微萃取-高效液相色谱在线联用系统 | |
| CN104931597A (zh) | 能同时检测水产品中多种类药物残留的方法 | |
| CN101434679A (zh) | 分子印迹聚合物的制备及用其分离盐酸克伦特罗的方法 | |
| CN104829774A (zh) | 用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱及其制备方法 | |
| CN101628955B (zh) | 一种同时识别氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素的分子印迹聚合物的制备方法 | |
| CN103626938B (zh) | 一种美洛西林钠硅胶表面分子印迹聚合物的制备方法 | |
| CN104316628A (zh) | 分子拥挤试剂和离子液体为致孔剂制备印迹整体柱的方法 | |
| CN103396512A (zh) | 混合模板分子印迹聚合物及其固相萃取柱的制备方法和应用 | |
| CN100586965C (zh) | 苯二氮类药物分子印迹固相萃取剂的制备方法 | |
| CN101747513A (zh) | 一种富集痕量莱克多巴胺的高分子聚合物的制备方法 | |
| Díaz-Bao et al. | Evaluation of molecularly imprinted polymers for the simultaneous SPE of six corticosteroids in milk | |
| CN102565228B (zh) | 一种检测磺胺类药物残留的方法 | |
| CN102565243B (zh) | 有机胂类分子印迹整体柱的制备及应用 | |
| CN102121924B (zh) | 一种醋酸甲基泼尼松龙及其杂质的分析方法 | |
| CN101792395B (zh) | 用分子印迹聚合物分离盐酸克伦特罗的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20131211 Termination date: 20170324 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |