CN104829774A - 用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱及其制备方法，属于材料化学技术领域。该分子印迹整体微柱的制备方法，包括以下步骤：将模板、混合致孔剂、功能单体、交联剂和引发剂在50～80℃聚合12～48h，除去模板后，即得用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱。制备的分子印迹整体微柱对阿奇霉素回收率为90％以上，对阿奇霉素显示高的交叉反应，具有高的选择性和特异性，作为分析动物组织、饲料及环境水等基质中阿奇霉素的样品净化前处理材料有着广泛的应用前景。

Description

用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱及其制备方法

技术领域

本发明属于材料化学技术领域，特别涉及一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱及其制备方法。

背景技术

阿奇霉素(Azithromycin)，化学名为：(2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R)-13-[(2，6-二脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核-已吡喃糖基)氧]-2-乙基-3，4，10-三羟基-3，5，6，8，10，12，14-七甲基-11-[[3，4，6-三脱氧-3-(二甲氨基)-β-D-木-已吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮，是具有氮杂环的十五元环大环内酯类抗生素，对肺炎链球菌、流感嗜血杆菌以及肺炎支原体所致的肺炎、化脓性链球菌等具有良好的疗效。由于该药尚未列入兽医临床用药，国内还未制定阿奇霉素在动物可食性组织中的最高残留限量(MRLs)和检测标准，但有不少畜牧养殖者违规使用阿奇霉素。最新研究表明，阿奇霉素不仅可能导致急性肝损伤，还可能引发心脏活动异常变化，长期食用阿奇霉素残留的动物源性食品，不仅会导致耐药性的产生，而且可能对敏感个体造成致命的伤害。动物源性食品中阿奇霉素残留越来越受到人们的关注，阿奇霉素在畜禽、水产品体内的代谢和残留消除规律已有研究报道，主要采用高效液相色谱、高效液相色谱-串联质谱等方法分析测定阿奇霉素残留。因阿奇霉素本身的大环内酯结构，无特征紫外吸收基团，高效液相色谱紫外检测不灵敏；目前，一般都采用高效液相色谱-串联质谱分析阿奇霉素残留，虽然灵敏度大大提高，但前处理一般都是采用蛋白沉淀法或采用传统的固相萃取小柱(如C₁₈、HLB)，缺乏选择性，特异性不强，净化不理想，分析测定中基质效应强，从而影响整个检测方法的灵敏度和准确定量。

基于类似抗原-抗体作用的分子印迹固相萃取技术具有高选择性和特异性，是一种具有广泛应用前景的固相萃取材料。如果能像抗体一样，合成某些类似抗体的对阿奇霉素具有高选择性的高分子吸附材料，可大大提高阿奇霉素检测的灵敏度和准确性。

分子印迹(molecular imprinting)是基于分子识别理论而迅速发展起来的一个新的研究领域，分子印迹技术(MIT)也被称为制造“塑料抗体”的技术。分子印迹整体微柱(molecularly imprinted polymer monolithic micro-column,MIPMMC)是一类集成了分子印迹的立体选择性和整体柱制备简单、柱压低以及传质速率快等优点，因此它具有特殊的分子结构和官能团，能选择性地识别印迹分子或其结构类似物。

有机聚合物基质分子印迹整体柱的制备较简单，通常是将一定比例的模板分子、功能单体、交联剂、致孔剂和引发剂的混合溶液注入空的管柱(通常为不锈钢管或石英毛细管)中，密封，通过热引发或光引发进行原位聚合反应，再用有机溶剂洗净模板分子、残余单体和致孔剂。分子印迹整体柱内的印迹位点完整，非特异性结合位点比本体聚合的少，具有较高的选择识别能力和较好的色谱性能。其制备方法及后处理操作简单，克服了填充柱分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymers,MIPs)材料制备的诸多不足。可作为色谱的固定相、固相萃取材料、生物传感器和化学反应催化剂等，已被广泛用于环境、生物、药物分析、食品分析等领域。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的首要目的是提供一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法。该制备方法成本低廉，操作简单。

本发明的另一个目的是提供通过上述制备方法制备得到的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱。该分子印迹整体微柱对阿奇霉素有高选择性和亲和性，对阿奇霉素的回收率达90％以上。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法，包括以下步骤：将模板、混合致孔剂、功能单体、交联剂和引发剂在50～80℃聚合12～48h，除去模板后，即得用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱。

所述的模板为螺旋霉素或替米考星。

所述的混合致孔剂为良性溶剂与非良性溶剂的混合体系。

所述的模板、功能单体、交联剂、良性溶剂、非良性溶剂和引发剂的比例为0.04mmol:0.04～0.32mmol:0.04～1.6mmol﹕50～200μL:300～450μL:1～10mg；分子印迹整体微柱的体积为20～60μL。

所述的功能单体为甲基丙烯酸、丙烯酸、2-乙烯基吡啶、4-乙烯基吡啶、甲基丙烯酸羟乙酯、对乙烯苯甲酸或丙烯酰胺中的一种或多种。

所述的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或二乙烯苯中的一种或多种。

所述的良性溶剂与非良性溶剂的混合体系中，良性溶剂/非良性溶剂为甲苯/十二醇，甲苯/庚烷，环己醇/十二醇，二甲基甲酰胺/十二烷，四氢呋喃/异辛烷中的一种以上；优选的混合致孔剂的混合体系为体积比为1:4的甲苯与十二醇的混合液。混合致孔剂一方面要保证模板的充分溶解，另一方面混合致孔剂的比例对制备的分子印迹整体微柱透液性、表面特性具有重要影响，同时致孔剂对印迹聚合物在使用介质体系中阿奇霉素的识别也非常关键，当致孔剂选择甲苯-十二醇(1:4，v/v)时，能够制备出对阿奇霉素具有高度特异性识别的分子印迹整体微柱。

所述的引发剂为水溶性引发剂或油溶性引发剂；所述的油溶性引发剂为偶氮二异丁腈；所述的水溶性引发剂为过硫酸铵。

一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法，其优选的具体步骤为：

(1)预聚物的制备：向模板中加入混合致孔剂，涡旋至模板溶解，加入功能单体，超声，静置，得到预聚物；

(2)聚合固化：向预聚物中加入交联剂和引发剂，超声，通氮气，用移液枪精确移取一定混合体系至一端封口的小枪头里，密封，真空干燥箱中聚合，得到聚合物；

(3)用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备：枪头连接注射器，结合可调流速注射泵，溶剂A洗涤去模板，溶剂B洗涤后，即得用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱。

步骤(1)中所述的超声时间为2min；静置时间为1h；

步骤(2)中所述的超声时间为5min；所述的通氮气时间为5min；所述体积为20～60μL；所述的真空干燥箱中聚合的温度为50～80℃，时间为12～48h。

步骤(3)中所述注射器规格为2～10mL。

步骤(3)中所述的溶剂A为乙酸与甲醇的混合溶液，混合溶液中乙酸与甲醇的体积比为1:9(v/v)；所述的溶剂A洗涤的流速为0.2mL/min；

步骤(3)中所述的溶剂B为甲醇，体积为6mL。

一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱由上述制备方法获得，所述的的分子印迹整体微柱对阿奇霉素的回收率为90％以上。

根据上述所述的制备方法制备得到的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱，该分子印迹整体微柱对阿奇霉素的回收率达90％以上。对阿奇霉素显示高的交叉反应，具有高的选择性和特异性，作为分析动物组织、饲料及环境水等基质中阿奇霉素的样品净化前处理材料有着广泛的应用前景。

本发明的分子印迹整体微柱，经试验检测发现：将该MIPMMC用于固相萃取净化(15mg/枪头)，聚合物结合阿奇霉素的吸附量约为30μg/mg聚合物；在猪肉中添加阿奇霉素回收率试验表明，在0.5～10ng/g浓度添加水平范围内，阿奇霉素回收率大于86％；本发明MIPMMC通过注射器与注射泵连接工作，重复使用10次后，阿奇霉素的回收率仍然大于80％。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明制备MIPMMC时，采用的致孔剂为甲苯-十二醇(1:4，v/v)，既有利于模板的溶解，而且制备的整体微柱的透液性能良好，使制备的印迹聚合物特异性识别能力强，使用方便。

(2)本发明的制备方法后处理简单，无需研磨过筛，有效的克服了传统聚合方式的繁琐前处理，同时避免了对有效印迹孔穴的破坏，具有较高的吸附容量。

(3)本发明的MIPMMC在乙腈、乙酸乙酯、水(pH 8)中对阿奇霉素呈现高的亲和性和选择性，回收率大于90％。

(4)本发明以对螺旋霉素为模板制得的MIPMMC对阿奇霉素显示高的交叉反应，具有高的选择性和特异性，与以阿奇霉素本身为模板合成的MIPMMC相比，可以防止因阿奇霉素洗脱不完全，使用时因MIPMMC中“模板泄露”(残留的阿奇霉素模板)造成对阿奇霉素检测结果的影响，作为分析动物组织及环境水等基质中阿奇霉素的样品净化前处理材料有着广泛的应用前景。

附图说明

图1：阿奇霉素乙腈溶液通过MIPMMC-1和NIPMMC-1柱的色谱图(10μg/mL)；

其中，a：阿奇霉素乙腈溶液过MIPMMC-1色谱图；b：阿奇霉素乙腈溶液过NIPMMC-1色谱图。

图2：阿奇霉素乙腈溶液通过MIPMMC-2和NIPMMC-2的色谱图(10μg/mL)；

其中，c:阿奇霉素乙腈溶液过MIPMMC-2色谱图；d：阿奇霉素乙腈溶液过NIPMMC-2色谱图。

图3：阿奇霉素地表水溶液通过MIPMMC-1和NIPMMC-1的色谱图(25μg/mL)；

其中，e：阿奇霉素地表水溶液过MIPMMC-1色谱图；f：阿奇霉素地表水溶液过NIPMMC-1色谱图。

图4：猪肉组织提取液添加阿奇霉素(0.5ng/g)通过MIPMMC-2和NIPMMC-2的色谱图；

其中，g：MIPMMC-2色谱图；h：NIPMMC-2色谱图。

图5：测定阿奇霉素的标准曲线；

其中，j：高效液相色谱-蒸发光测定阿奇霉素的标准曲线，A表示峰面积，C表示浓度(μg/mL)；i：高效液相色谱-串联质谱法测定阿奇霉素的标准曲线。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

(1)称取0.034g(0.04mmoL)螺旋霉素于试管中,加入500μL甲苯和十二醇(1:4，v/v)的混合致孔剂，涡旋溶解后，再加入13.6μL(0.16mmoL)甲基苯烯酸功能单体，超声5min，静置1h，形成预聚合物。

(2)向上述预聚合物中加入乙二醇二甲基丙烯酸酯150μL(0.8mmoL)和偶氮二异丁腈2mg(0.012mmol)，超声2min，通氮气5min，移取40μL于一端封口的小枪头中，密封，60℃真空干燥箱中聚合24h，得到印迹微萃取小枪头。

(3)将上述小枪头去两端封口，连接2.5mL注射器，装载于螺旋注射泵上，先用乙酸与甲醇混合溶液(乙酸与甲醇的体积比为1:9，v/v)6mL洗涤除去模板螺旋霉素，流速设定为0.05mL/min，再用6mL甲醇洗涤除去乙酸，流速为0.2mL/min，得到用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱。制备好的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱(MIPMMC-1)平均收率达(92.0±2.0)％。

非印迹聚合物(NIPMMC-1)的制备除不加模板分子外，均按上述方法制备和处理。

阿奇霉素乙腈溶液通过MIPMMC-1和NIPMMC-1柱的色谱图(10μg/mL)如图1所示。

实施例2

(1)称取0.034g(0.04mmoL)替米考星于试管中,加入600μL甲苯/十二醇(1:4，v/v)的混合致孔剂，涡旋溶解后，再加入13.6μL(0.16mmoL)甲基苯烯酸功能单体，超声5min，静置1h，形成预聚合物。

(2)向上述预聚合物中加入乙二醇二甲基丙烯酸酯150μL(0.8mmoL)和偶氮二异丁腈2mg(0.012mmol)，超声2min，通氮气5min，移取40μL于一端封口的小枪头中，密封，60℃真空干燥箱中聚合24h，得到印迹微萃取小枪头。

(3)将上述小枪头去两端封口，连接2.5mL注射器，装载于螺旋注射泵上，先用乙酸与甲醇混合溶液(乙酸与甲醇的体积比为1:9)6mL洗涤除去模板螺旋霉素，流速为0.05mL/min，再用6mL甲醇洗涤除去乙酸，流速为0.2mL/min，得到用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱。制备好的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱(MIPMMC-2)平均收率为(85.5±6.0)％。

非印迹聚合物(NIPMMC-2)的制备除不加模板分子外，均按上述方法制备和处理。

阿奇霉素乙腈溶液通过MIPMMC-2和NIPMMC-2的色谱图(10μg/mL)如图2所示。

实施例3

(1)称取0.034g(0.04mmoL)螺旋霉素于试管中,加入500μL甲苯和十二醇(1:4，v/v)的混合致孔剂，涡旋溶解后，再加入13.6μL(0.16mmoL)对乙烯苯甲酸功能单体，超声5min，静置1h，形成预聚合物。

(2)向上述预聚合物中加入乙二醇二甲基丙烯酸酯150.4μL(0.8mmoL)和偶氮二异丁腈2mg(0.012mmol)，超声2min，通氮气5min，移取40μL于一端封口的小枪头中，密封，60℃真空干燥箱中聚合24h，得到印迹微萃取小枪头。

(3)将上述小枪头去两端封口，连接2.5mL注射器，装载于螺旋注射泵上，先用乙酸与甲醇混合溶液(乙酸与甲醇的体积比为1:9，v/v)6mL洗涤除去模板螺旋霉素，流速为0.05mL/min，再用6mL甲醇洗涤除去乙酸，流速为0.2mL/min，得到用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱。制备好的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱平均收率为(70.2±4.6)％。

非印迹聚合物的制备除不加模板分子外，均按上述方法制备和处理。

实施例4

(1)称取0.034g(0.04mmoL)螺旋霉素于试管中,加入500μL甲苯和十二醇(1:4，v/v)的混合致孔剂，涡旋溶解后，再加入0.022g(0.16mmoL)三氟甲基丙烯酸功能单体，超声5min，静置1h，形成预聚合物。

(2)向上述预聚合物中加入加入二乙烯苯280μL(2mmoL)和偶氮二异丁腈3mg(0.018mmol)，超声2min，通氮气5min，移取40μL于一端封口的小枪头中，密封，60℃真空干燥箱中聚合24h，得到印迹微萃取小枪头。

(3)将上述小枪头去两端封口，连接2.5mL注射器，装载于螺旋注射泵上，先用乙酸与甲醇混合溶液(乙酸与甲醇的体积比为1:9，v/v)6mL洗涤除去模板螺旋霉素，流速为0.05mL/min，再用6mL甲醇洗涤除去乙酸，流速为0.2mL/min，得到用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱。制备好的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱平均收率为(80.4±3.9)％。

非印迹聚合物的制备除不加模板分子外，均按上述方法制备和处理。

实施例5

(1)称取0.035g(0.04mmoL)替米考星于试管中,加入600μL甲苯/庚烷(1:4，v/v)的混合致孔剂，涡旋溶解后，再加入0.022g(0.16mmoL)三氟甲基丙烯酸，超声5min，静置1h，形成预聚合物。

(2)向上述预聚合物中加入二乙烯苯280μL(2mmoL)和偶氮二异丁腈5mg(0.030mmol)，超声2min，通氮气5min，移取40μL于一端封口的小枪头中，密封，60℃真空干燥箱中聚合24h，得到印迹微萃取小枪头。

(3)将上述小枪头去两端封口，连接2.5mL注射器，装载于一注射泵上，先用乙酸与甲醇混合溶液(乙酸与甲醇的体积比为1:9，v/v)6mL洗涤除去模板螺旋霉素，流速为0.05mL/min，再用6mL甲醇洗涤除去乙酸，流速为0.2mL/min，得到用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱。制备好的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱平均收率为(74.0±5.2)％。

非印迹聚合物的制备除不加模板分子外，均按上述方法制备和处理。

实施例6

将实施例1和2制备的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱MIPMMC-1和MIPMMC-2连接2.5mL注射器，结合注射泵，依次用1mL甲醇、1mL去离子水以0.2mL/min恒速平衡活化。

分别取1.5、5、10、15、30及50μg/mL系列浓度的阿奇霉素乙腈溶液1mL过柱，依次用0.5mL氯仿、0.5mL乙腈洗涤，再用氨水和甲醇混合液(氨水与甲醇的体积比为5:95,v/v)1mL洗脱。氮气吹干洗脱液，用20mmoL/L的乙酸铵的0.1％甲酸水溶液溶解，用高效液相色谱蒸发光检测。

阿奇霉素乙腈溶液过NIPMMC-1和NIPMMC-2固相萃取柱的操作步骤同上。

具体计算回收率过程：

根据保留时间定性，外标法定量，测定系列浓度(1，5，10，15，30及50μg/mL)阿奇霉素标准溶液响应值，得到的色谱峰积分得面积A_s，根据得到的峰面积的对数lg(A_s)和浓度C_s的对数lg(C_s)，做出标准曲线如附图5j所示，再分别测定样品峰面积A_i，换算为lg(A_i)，带入标准曲线算出lg(C_i)后计算出C_i，回收率R(％)＝100×C_i/C_s×100。

实施例7

将实施例1和2制备的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱MIPMMC-1和MIPMMC-2连接2.5mL注射器，结合注射泵，依次用1mL甲醇、1mL去离子水以0.2mL/min恒速平衡活化。

分别取0.5、2.5、5、10、20、25及50ng/mL系列浓度的阿奇霉素乙腈溶液1mL过柱，依次用0.5mL氯仿、0.5mL乙腈洗涤，再用氨水和甲醇混合液(氨水与甲醇的体积比为5:95,v/v)1mL洗脱。氮气吹干洗脱液，用10％甲醇0.1％甲酸水溶液溶解，用高效液相色谱-串联质谱检测。

阿奇霉素乙腈溶液过NIPMMC-1和NIPMMC-2固相萃取柱的操作步骤同上。

具体计算回收率过程：

根据保留时间定性，外标法定量，测定系列浓度(0.5，2.5，5，10，20，25及50ng/mL)阿奇霉素标准溶液响应值，得到的色谱峰积分得面积A_s，根据得到的峰面积的对数A_s和浓度C_s，做出的定量离子对标准曲线如附图5i所示，再分别测定样品峰面积A_i，计算出C_i，回收率R(％)＝100×C_i/C_s×100。

实施例8

将实施例1制备的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱连接2.5mL注射器，结合注射泵，依次用1mL甲醇、1mL去离子水以0.2mL/min恒速平衡活化。

分别取1.5、10、及20μg/mL系列浓度的阿奇霉素地表水溶液(氨水调pH＝8)1mL过柱依次用0.5mL氯仿、0.5mL乙腈洗涤，再用氨水和甲醇混合液(氨水与甲醇的体积比为5:95，v/v)1mL洗脱。氮气吹干洗脱液，用20mmoL/L的乙酸铵0.1％甲酸水溶液溶解，用高效液相色谱蒸发光检测。阿奇霉素地表水溶液过NIPMMC-1固相萃取柱的操作步骤同上。

实施例9

将实施例1制备的用于检测阿奇霉素的MIPMMC连接2.5mL注射器，结合注射泵，依次用1mL甲醇、1mL去离子水以0.2mL/min恒速平衡活化。

分别取0.5、5.0及10ng/g系列浓度的阿奇霉素猪肉(3g)乙腈提取溶液4mL过柱依次用0.5mL氯仿、0.5mL乙腈洗涤，再用氨水和甲醇混合液(氨水与甲醇的体积比为5:95，v/v)1mL洗脱。氮气吹干洗脱液，用10％甲醇0.1％甲酸水溶液溶解，用高效液相色串联质谱检测。猪肉组织中添加阿奇霉素提取溶液过NIPMMC固相萃取柱的操作步骤同上。

图3为阿奇霉素地表水溶液过MIPMMC-1和NIPMMC-1固相萃取柱的色谱图(20μg/mL)；图4为猪肉组织添加阿奇霉素提取溶液过MIPMMC-2和NIPMMC-2固相萃取柱的色谱图。表1为MIPMMC、NIPMMC对地表水中不同浓度阿奇霉素的回收率。回收率的测定方法，同实施例7。表2为MIPMMC、NIPMMC对猪肉基质中不同浓度阿奇霉素的回收率。回收率的测定方法，同实施例8。

表1地表水添加不同浓度阿奇霉素的回收率(n＝3)

表2猪肉组织中添加不同浓度阿奇霉素回收率(n＝3)

表1、表2结果表明，系列浓度的阿奇霉素地表水溶液以及猪肉组织添加样品提取溶液在制备的MIPMMC-1、MIPMMC-2上回收率均大于86％，在NIPMMC-1、NIPMMC-2上回收率均小于35％。

实施例9

本研究采用以下方法考察整体微柱的吸附容量。将实施例1制备的用于检测阿奇霉素的MIPMMC1连接2.5mL注射器，结合注射泵，依次用1mL甲醇、1mL去离子水以0.2mL/min恒速平衡活化。

准确配制10μg/mL阿奇霉素乙腈标准溶液，以0.5mL/min低速过整体微柱，每毫升流出液均氮气吹干，用20mmoL/L的乙酸铵0.1％甲酸水溶液溶解，用高效液相色谱蒸发光检测，直到流出液的峰面积与上样液的峰面积相等，记录总的上样体积V₀和流出液的平均浓度C。利用公式Q＝(C₀-C)V₀/m计算MIPMMC对阿奇霉素的吸附量，平行测定3次，取算术平均值。其中C₀为原始浓度(μg/mL)，C为平衡浓度(μg/mL)，m为一个整体微柱印迹聚合物的质量(15mg)，V₀为总的上样体积体积(mL)，Q为每毫克吸附剂所吸附的阿奇霉素的微克数(μg/mg)。试验表明，上样至第62mL时，两者浓度一致。NIPMMC的吸附试验除同上。结果表明，MIPMMC-1结合阿奇霉素的最大吸附量约为30μg/mg聚合物，NIPMMC-1则在5.4μg/mg以下。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将模板、混合致孔剂、功能单体、交联剂和引发剂在50～80℃聚合12～48h，除去模板后，即得用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱；

所述的模板为螺旋霉素或替米考星。

2.根据权利要求1所述的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法，其特征在于：所述的混合致孔剂为良性溶剂/非良性溶剂的混合体系；

所述的模板、功能单体、交联剂、良性溶剂、非良性溶剂和引发剂的比例为0.04mmol:0.04～0.32mmol:0.04～1.6mmol﹕50～200μL:300～450μL:1～10mg，分子印迹整体微柱的体积为20～60μL。

3.根据权利要求1所述的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法，其特征在于：所述的功能单体为甲基丙烯酸、丙烯酸、2-乙烯基吡啶、4-乙烯基吡啶、甲基丙烯酸羟乙酯、对乙烯苯甲酸或丙烯酰胺中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法，其特征在于：所述的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或二乙烯苯中的一种或多种。

5.根据权利要求2所述的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法，其特征在于：所述的良性溶剂与非良性溶剂的混合体系中，良性溶剂/非良性溶剂为甲苯/十二醇，甲苯/庚烷，环己醇/十二醇，二甲基甲酰胺/十二烷，四氢呋喃/异辛烷中的一种以上。

6.根据权利要求1所述的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法，其特征在于：所述的混合致孔剂的混合体系为体积比为1:4的甲苯与十二醇的混合液。

7.根据权利要求1所述的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法，其特征在于：所述的引发剂为水溶性引发剂或油溶性引发剂；所述的油溶性引发剂为偶氮二异丁腈；所述的水溶性引发剂为过硫酸铵。

8.根据权利要求1～7任一项所述的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法，其特征在于：具体步骤为：

(1)预聚物的制备：向模板中加入混合致孔剂，涡旋至模板溶解，加入功能单体，超声，静置，得到预聚物；

(2)聚合固化：向预聚物中加入交联剂和引发剂，超声，通氮气，用移液枪精确移取一定混合体系至一端封口的小枪头里，密封，真空干燥箱中聚合，得到聚合物；

(3)用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备：枪头连接注射器，结合可调流速注射泵，溶剂A洗涤去模板，溶剂B洗涤后，即得用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱。

9.根据权利要求8所述的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的超声时间为2min，静置时间为1h；

步骤(2)中所述的超声时间为5min；所述的通氮气时间为5min；所述体积为20～60μL；所述的真空干燥箱中聚合的温度为50～80℃，时间为12～48h。

步骤(3)中所述的溶剂A为乙酸与甲醇的混合溶液，混合溶液中乙酸与甲醇的体积比为1:9；所述的溶剂A洗涤的流速为0.2mL/min；

步骤(3)中所述的溶剂B为甲醇，体积为6mL。

10.一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱由权利要求1～7任一项所述的制备方法获得，其特征在于：所述的的分子印迹整体微柱对阿奇霉素的回收率为90％以上。