CN102257963A - 姜荷花的组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了姜荷花的组织培养快速繁殖方法，属于植物组织培养技术领域。方法包括(一)培养基的配制；(二)块根小芽培养与灭菌；(三)外植体无菌苗的培养；(四)不定芽诱导培养；(五)不定芽增殖培养；(六)小苗生根培养；(七)组培苗的炼苗驯化与移栽等步骤。具有增殖培养期短(14-20天)，繁殖系数高(由2-4倍提高到5-8倍)，不定芽一致性好，组培繁育周期短(50-60天)，种苗质量好，移栽成活率可高达95％以上，是一种高效、快速提供优质姜荷花种苗的方法。本方法可在园林绿化与组培苗企业推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种花卉植物姜荷花的组织培养快速繁殖方法。
背景技术
姜荷花(Curcuma alismatifolia Gagnep.)为姜科姜荷属多年生热带草本宿根花卉，原产泰国清迈一带。由于其粉红色的苞片酷似荷花且为姜科故称之为姜荷花。姜荷花为穗状花序，花梗高出叶面，花色美丽、鲜艳，花期持久，是一种新型的鲜切花品种，观赏价值高，品质优良，具有很高的经济效益，开发利用前景广阔。姜荷花因其独特的花型，鲜艳的花色以及花期长，在日本和台湾深受人们的青睐，目前大陆市场几乎是空白，市场前景极为看好。但目前只能靠常规繁殖方法，繁殖速度很慢，远不能满足市场对其种苗的需求，故采用组织培养快速繁殖技术，可获得优质整齐的种苗，为其快速繁殖开辟一条有效途径。
“姜荷花组织培养技术研究”(牟小翎，2006，北方园艺)和“姜荷花新品种红观音的组织培养和快速繁殖技术”(商宏莉，2010，北方园艺)虽公开了有关姜荷花的组织培养方法，但上述方法仍具有如下不足之处：不定芽的繁殖系数较低，仅为2-4倍；而且在不定芽的增殖过程中，其根原基被诱导后易发育成大量的根系，这种不定芽和不定根同时生长的现象不仅严重影响了增殖效率，而且使不定芽的继代分割不易操作，最终导致种苗质量下降和移栽成活率较低，一般仅82％左右。
发明内容
本发明目的是，针对已有姜荷花组培技术中存在的不定芽繁殖系数偏低而根系生长过旺，从而影响增殖效率与种苗质量的缺陷，提供一种能快速、高效获得大量优质种苗的姜荷花组织培养快速繁殖方法。
本发明目的通过以下技术方案来实现。
姜荷花的组织培养快速繁殖方法，该方法按以下步骤进行：
(一)培养基的配制，包括基本培养基和各阶段培养基的组分及其每升所含的重量为：
1)基本培养基：MS或1/2MS培养基；
2)无菌苗培养基：1/2MS+白糖20-30g/L，琼脂5-8g/L，pH5.6-5.8；
3)不定芽诱导培养基：MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+白糖20-30g/L，琼脂5-8g/L，pH5.6-5.8；
4)增殖培养基：MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA 0.1-0.3mg/L+白糖20-30g/L，琼脂5-8g/L，pH5.6-5.8；
5)生根培养基：1/2MS+NAA0.5-1.5mg/L+白糖20-30g/L，琼脂5-8g/L，pH5.6-5.8；
(二)块根小芽培养与灭菌：选择无病斑、无虫瘦、健壮饱满的姜荷花块根放入生化培养箱中，在26-28℃、暗培养下催芽至长成0.5-2.0cm的小芽；取小芽经流水、无菌水冲洗干净，用70％酒精消毒45s，0.1％升汞水溶液浸泡10min灭菌，无菌水冲洗5-6次后，备用；
(三)外植体无菌苗的培养：将灭菌后小芽在超净台上剥取3-5mm的茎尖作为外植体，接种到无菌苗培养基中，在25±2℃、光强1500Lx、光照12h/d组培条件下培养6-7天至茎尖长到1.0-2.0cm时成外植体无菌苗；
(四)不定芽诱导培养：将外植体无菌苗接种到不定芽诱导培养基中，在同上组培条件下培养22-25天至形成初代不定芽并长到1.0-3.0cm；
(五)不定芽增殖培养：将上述的初代不定芽苗接种到增殖培养基中，在同上组培条件下培养10-15天至形成继代不定芽苗并长到3.0-6.0cm；
(六)小苗生根培养：将上述的继代不定芽苗接种到生根培养基中，在同上组培条件下培养12-15天，小苗长至4-8cm且至少具有3条≥长2cm的根时，即成可以出培养室的组培瓶苗；
(七)组培苗的炼苗驯化与移栽：将组培苗瓶移至普通大棚温室中；先拧松组培瓶盖培养2天，再开盖培养5天后，出瓶、洗净根部培养基移栽入泥炭∶珍珠岩＝4∶1的基质中，按常规肥水管理至长成成品苗，出圃。
本发明的有益效果：
一、本发明方法选择健康饱满的姜荷花块根进行催芽，经组织培养获得大量的无菌苗；采用本发明的方法，一般仅需50-62天即可大量得到可出瓶种植的种苗，是一种不受季节等因素影响，高效、快速提供优质姜荷花种苗的方法，可以加速良种推广速度，提高田间品种种植产量。
二、本发明通过特有培养基的配方，显著缩短了姜荷花不定芽的增殖培养期(10-15天)，从而大大提高了组培繁殖系数，由已有的2-4倍提高到5-8倍。
三、本发明通过对增殖培养基和生根培养基中激素成分的选择与含量的调节，在增殖阶段有效抑制了对根原基的发育诱导，提高了不定芽的繁殖系数，并保持了较好增殖一致性，也进一步提高了种苗的质量，使移栽成活率高达95％以上；
四、本发明建立的姜荷花组织培养体系将为工厂化育苗提供技术支撑，方法操作简单、污染率低、植株再生成功率高。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1：
姜荷花的组织培养快速繁殖方法，该方法按以下步骤进行：
(一)培养基的配制，包括基本培养基和各阶段培养基的组分及其每升所含的重量为：
1)基本培养基：MS或1/2MS培养基均按常规配方配制而成；
2)无菌苗培养基：1/2MS+白糖20g/L+琼脂8g/L，pH5.6；
3)不定芽诱导培养基：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+白糖20g/L+琼脂8g/L，pH5.6；
4)增殖培养基：MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.2mg/L+白糖25g/L+琼脂5g/L，pH5.6；
5)生根培养基：1/2MS+NAA0.5mg/L+白糖30g/L+琼脂8g/L，pH5.6；
(二)块根小芽培养与灭菌：选择无病斑、无虫瘿、健壮饱满的姜荷花块根放入生化培养箱中，在26-28℃、暗培养下催芽至长成0.5-2.0cm的小芽；取小芽经流水、无菌水冲洗干净，用70％酒精消毒45s，0.1％升汞水溶液浸泡10min灭菌，无菌水冲洗5-6次后，备用；
(三)外植体无菌苗的培养：将灭菌后小芽在超净台上剥取3-5mm的茎尖作为外植体，接种到无菌苗培养基中，在25±2℃、光强1500Lx、光照12h/d组培条件下培养6-7天至茎尖长到1.0-2.0cm时成外植体无菌苗；
(四)不定芽诱导培养：将外植体无菌苗接种到不定芽诱导培养基中，在同上(25±2℃、光强1500Lx、光照12h/d)组培条件下培养22-25天至形成初代不定芽并长到1.0-3.0cm；
(五)不定芽增殖培养：将上述的初代不定芽苗接种到增殖培养基中，在同上组培条件下培养10-15天至形成继代不定芽苗并长到3.0-6.0cm；以后每隔10-15天可重复增殖培养一批，直至满足生产对种苗数量的需求；
(六)小苗生根培养：将上述的继代不定芽苗接种到生根培养基中，在同上组培条件下培养12-15天，小苗长至4-8cm且至少具有3条≥长2cm的根时，即成可以出培养室的组培瓶苗；
(七)组培苗的炼苗驯化与移栽：将组培苗瓶移至普通大棚温室中；先拧松组培瓶盖培养2天，再开盖培养5天后，出瓶、洗净根部培养基移栽入泥炭∶珍珠岩＝4∶1的基质中，按常规肥水管理至长成成品苗，出圃；
依照上述方法，只需50-62天即可获得组培苗；该组培苗的移栽成活率可达到95％以上。
实施例2：
本例中，步骤(一)培养基的配制，包括各阶段培养基的组分及其每升所含的重量为：
2)无菌苗培养基为：1/2MS+白糖25g/L+琼脂5g/L，pH5.7；
3)不定芽诱导培养基为：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+白糖30g/L+琼脂5g/L，pH5.7；
4)增殖培养基为：MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L+白糖30g/L+琼脂7g/L，pH5.7；
5)生根培养基为：1/2MS+NAA1.0mg/L+白糖25g/L+琼脂6g/L，pH5.7；
其余步骤、工艺同于实施例1。
实施例3：
本例中，步骤(一)培养基的配制，包括各阶段培养基的组分及其每升所含的重量为：
2)无菌苗培养基：1/2MS+白糖30g/L+琼脂6g/L，pH5.8；
3)不定芽诱导培养基：MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L+白糖25g/L+琼脂7g/L，pH5.8；
4)增殖培养基：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.3mg/L+白糖20g/L+琼脂8g/L，pH5.8；
5)生根培养基：1/2MS+NAA1.5mg/L+白糖20g/L+琼脂5g/L，pH5.8；
其余步骤、工艺同于实施例1。
Claims (1)
1.姜荷花的组织培养快速繁殖方法，其特征在于按以下步骤进行：
(一)培养基的配制，包括基本培养基和各阶段培养基的组分及其每升所含的重量为：
1)基本培养基：MS或1/2MS培养基；
2)无菌苗培养基：1/2MS+白糖20-30g/L，琼脂5-8g/L，pH5.6-5.8；
3)不定芽诱导培养基：MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+白糖20-30g/L，琼脂5-8g/L，pH5.6-5.8；
4)增殖培养基：MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA 0.1-0.3mg/L+白糖20-30g/L，琼脂5-8g/L，pH5.6-5.8；
5)生根培养基：1/2MS+NAA0.5-1.5mg/L+白糖20-30g/L，琼脂5-8g/L，pH5.6-5.8；
(二)块根小芽培养与灭菌：选择无病斑、无虫瘦、健壮饱满的姜荷花块根放入生化培养箱中，在26-28℃、暗培养下催芽至长成0.5-2.0cm的小芽；取小芽经流水、无菌水冲洗干净，用70％酒精消毒45s，0.1％升汞水溶液浸泡10min灭菌，无菌水冲洗5-6次后，备用；
(三)外植体无菌苗的培养：将灭菌后小芽在超净台上剥取3-5mm的茎尖作为外植体，接种到无菌苗培养基中，在25±2℃、光强1500Lx、光照12h/d组培条件下培养6-7天至茎尖长到1.0-2.0cm时成外植体无菌苗；
(四)不定芽诱导培养：将外植体无菌苗接种到不定芽诱导培养基中，在同上组培条件下培养22-25天至形成初代不定芽并长到1.0-3.0cm；
(五)不定芽增殖培养：将上述的初代不定芽苗接种到增殖培养基中，在同上组培条件下培养10-15天至形成继代不定芽苗并长到3.0-6.0cm；
(六)小苗生根培养：将上述的继代不定芽苗接种到生根培养基中，在同上组培条件下培养12-15天，小苗长至4-8cm且至少具有3条≥长2cm的根时，即成可以出培养室的组培瓶苗；
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