CN102253146A - 温胃止痛膏中的丁香酚含量的测定方法 - Google Patents
温胃止痛膏中的丁香酚含量的测定方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种用气相色谱法测定温胃止痛膏中的丁香酚(C10H12O2)含量的方法;该方法灵敏度高、分离度好、分析速度快、适用范围广、稳定性和重现性好、操作简单可行、测定准确;本方法进一步推动了温胃止痛膏含量分析方法研究和质量标准的完善,并为工业化生产节约了人力物力,是值得推广的简便易行的好方法。
Description
㈠技术领域:本发明属于一种温胃止痛膏的质量检测方法,具体地说,是用气相色谱法对温胃止痛膏中的主要活性成分丁香酚(C10H12O2)含量进行测定的方法。
㈡背景技术:温胃止痛膏是一种新型透皮贴膏,它主要由白术(炒)、吴茱萸、丁香、肉桂、当归、川芎、延胡索 、厚朴等八种名贵中药材精制而成,具有健脾温阳,行气止痛的功效。常用于脾胃虚寒证所致的胃脘疼痛,腹胀,呃逆嗳气,形寒肢冷等症的辅助治疗。
温胃止痛膏含有白术(炒)、吴茱萸、丁香、 肉桂、当归、川芎、延胡 索 、厚朴八余味药,其中的主药为丁香。
丁香为桃金娘科植物丁香Eugenia caryophyllata Thunb.的干燥花蕾,主要分布主产于坦桑尼亚、马来西亚、印度尼西亚,我国主产于广东、海南等地,具有温中降逆,散寒止痛,温肾助阳之功效,临床用于治疗胃寒呕吐、呃逆、脘腹冷痛等疾病。经过分析,丁香的主要活性成分是丁香酚,由于丁香在温胃止痛膏的功效中起主要作用,因此测定丁香中丁香酚的含量为保证用药的安全性、有效性非常重要,需检测其在制剂中的含量。
温胃止痛膏的国家标准没有含量测定,此前只有薄层鉴别,是一种定性检测,但是由于薄层鉴别不能检测出具体含量,检测误差较大、重现性较差,且易受环境和操作的影响;因此迫切需要更精准的检测方法。而气相色谱法灵敏度高、分离度好、分析速度快、适用范围广、稳定性和重现性好、操作简单可行,所以用气相色谱法测定要优于使用薄层鉴别法。
㈢发明内容:本发明的目的在于提供一种用气相色谱法对温胃止痛膏中的主要活性成分丁香酚(C10H12O2)含量进行测定的方法;该方法
灵敏度高、分离度好、分析速度快、适用范围广、稳定性和重现性好、操作简单可行、测定准确;同时也是对现有温胃止痛膏质量标准的完善。
本发明的温胃止痛膏中的丁香酚含量的测定方法,是用气相色谱法测定温胃止痛膏中的丁香酚的含量,其操作步骤如下:
A、对照品溶液的制备:取丁香酚对照品约150mg,精密称定,置25ml量瓶中,用正已烷稀释至刻度,混匀,作为对照品溶液;
B、内标溶液制备:取适量内标物丹皮酚、桂皮醛、联苯、萘、十三烷、正二十二烷或水杨酸甲酯中的一种,加正已烷制成每1ml含2-8mg的溶液,作为内标溶液;
C、供试品溶液的制备:取规格为8cm*10cm的温胃止痛膏2片,剪成条状,置250ml圆底烧瓶中,加水100ml,连接挥发油测定器,自测定器上端加水使充满刻度部分,并溢流入烧瓶为止,再加正已烷5ml,将烧瓶内溶液加热至微沸,并保持微沸4小时,冷却后弃去水相,将正已烷通过一个铺有无水硫酸钠的漏斗,滤至25ml量瓶中,即得到吸收液;挥发油测定器及漏斗用正已烷少许洗涤,洗涤液与吸收液合并,精密加入上述配制好的内标溶液3ml,加正已烷稀释至刻度,混匀后作为供试品溶液;
D、测定
a、色谱条件
气相色谱柱,载气为氮气或氦气,进样口温度150-200℃,柱温150-210℃,检测器为FID,进样量2μl;
b、供试品测定
分别精密量取丁香酚对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入气相色谱仪测定,记录色谱图,计算,即得。
所述的气相色谱柱选用a、不锈钢色谱柱Φ3mm×2m,PEG-20M为固定相,涂布浓度10%;担体Chromosorb W,或b、色谱柱Rtx-WAX,30 m×0.32 mm×0.25μm或c、毛细管柱25 m×0.25 mm×0.25μm或d、PEG-20M毛细管柱30 m×0.32 mm×0.25μm的一种。
本方法进一步推动了温胃止痛膏含量分析方法研究和质量标准的完善,并为工业化生产节约了人力物力,是值得推广的简便易行的好方法。
本发明与现有的薄层法比较,具有以下优点:
1.灵敏度高,测量误差小;
2.分离度好;
3.稳定性和重现性好,受环境和操作影响小;
4.用量少;
5.操作简单;
6. 丁香的的主要活性成分是丁香酚,用气相色谱法能精确地检测出丁香酚的含量,比定性分析更准确,能更加保证了药物的安全性和有效性。
(四)具体实施方式:
实施例1:
照气相色谱法(中国药典2000版二部附录Ⅵ E)测定。
1、对照品溶液的制备:取丁香酚对照品约150mg,精密称定,置25ml量瓶中,用正已烷稀释至刻度,混匀;作为对照品溶液;
2、内标溶液的制备:取丹皮酚适量,加正已烷制成每1ml含2mg的溶液,作为内标溶液;
3、供试品溶液的制备:
取规格为8cm*10cm的温胃止痛膏2片,剪成条状,置250ml圆底烧瓶中,加水100ml,连接挥发油测定器,自测定器上端加水使充满刻度部分,并溢流入烧瓶为止,再加正已烷5ml,将烧瓶内溶液加热至微沸,并保持微沸4小时,冷却后弃去水相,将正已烷通过一个铺有无水硫酸钠的漏斗,滤至25ml量瓶中,即得到吸收液;挥发油测定器及漏斗用正已烷少许洗涤,洗涤液与吸收液合并,精密加入内标溶液3ml,加正已烷稀释至刻度,混匀,作为供试品溶液;
4、测定方法:
a、色谱条件:以PEG-20M为固定相,涂布浓度10%;担体Chromosorb W(AW-DMCS);不锈钢色谱柱(Φ3mm×2m);进样口温度150℃,柱温150℃;载气为氮气;检测器为FID;进样量:2μl。
b、系统适用性试验
精密吸取丁香酚对照品溶液1、2、3、4、5、6ml,分别置于25ml量瓶中,各精密加入内标溶液3ml,用正己烷稀释至刻度,摇匀。于上述量瓶中取2μl,色谱进样,测定丁香酚和内标物的峰面积,以丁香酚对照品取样量为横坐标,丁香酚与内标物的色谱峰面积比值为纵坐标,绘制标准曲线;丁香酚在0.96 -–5.76μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9997);精密度:RSD = 0.71%,表明该方法精密度良好。
5、供试品测定
分别精密量取丁香酚对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入气相色谱仪测定,记录色谱图,计算,即得。
实施例2:
照气相色谱法(中国药典2000版二部附录Ⅵ E)测定。
1、对照品溶液的制备:取丁香酚对照品约150mg,精密称定,置25ml量瓶中,用正已烷稀释至刻度,混匀;作为对照品溶液;
2、内标溶液的制备:取桂皮醛适量,加正已烷制成每1ml含5mg的溶液,作为内标溶液。
3、供试品溶液的制备:
取8cm*10cm的温胃止痛膏2片,剪成条状,置250ml圆底烧瓶中,加水100ml,连接挥发油测定器,自测定器上端加水使充满刻度部分,并溢流入烧瓶为止,再加正已烷5ml,将烧瓶内溶液加热至微沸,并保持微沸4小时,冷却后弃去水相,将正已烷通过一个铺有无水硫酸钠的漏斗,滤至25ml量瓶中,即得到吸收液;挥发油测定器及漏斗用正已烷少许洗涤,洗涤液与吸收液合并,精密加入内标溶液3ml,加正已烷稀释至刻度,混匀,作为供试品溶液。
4、测定方法:
a、色谱条件:色谱柱(Rtx-WAX,30 m×0.32 mm,0.25μm);进样口温度150℃;柱温150℃;检测器为FID;载气为氮气;进样量:2μl。
b、系统适用性试验
精密吸取丁香酚对照品溶液1、2、3、4、5、6ml,分别置于25ml量瓶中,各精密加入内标溶液3ml,用正己烷稀释至刻度,摇匀。于上述量瓶中取2μl,色谱进样,测定丁香酚和内标物的峰面积,以丁香酚对照品取样量为横坐标,丁香酚与内标物的色谱峰面积比值为纵坐标,绘制标准曲线;丁香酚在0.32 -1.92 μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9998);精密度:RSD = 0.82%,表明该方法精密度良好。
5、供试品测定
分别精密量取丁香酚对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入气相色谱仪测定,记录色谱图,计算,即得。
实施例3
照气相色谱法(中国药典2000版二部附录Ⅵ E)测定。
1、对照品溶液的制备:取丁香酚对照品约150mg,精密称定,置25ml量瓶中,用正已烷稀释至刻度,混匀;作为对照品溶液;
2、内标溶液的制备:取联苯适量,加正已烷制成每1ml含2mg的溶液,作为内标溶液。
3、供试品溶液的制备:
取8cm*10cm的温胃止痛膏2片,剪成条状,置250ml圆底烧瓶中,加水100ml,连接挥发油测定器,自测定器上端加水使充满刻度部分,并溢流入烧瓶为止,再加正已烷5ml,将烧瓶内溶液加热至微沸,并保持微沸4小时,冷却后弃去水相,将正已烷通过一个铺有无水硫酸钠的漏斗,滤至25ml量瓶中,即得到吸收液;挥发油测定器及漏斗用正已烷少许洗涤,洗涤液与吸收液合并,精密加入内标溶液3ml,加正已烷稀释至刻度,混匀,作为供试品溶液。
4、测定方法:
a、色谱条件:PEG-20M弹性石英毛细管柱(25 m×0.20 mm×0.33μm);进样口温度155℃;柱温180℃;载气氮气,检测器FID;进样量:2μl。
b、系统适用性试验
精密吸取丁香酚对照品溶液1、2、3、4、5、6ml,分别置于25ml量瓶中,各精密加入内标溶液3ml,用正己烷稀释至刻度,摇匀。于上述量瓶中取2μl,色谱进样,测定丁香酚和内标物的峰面积,以丁香酚对照品取样量为横坐标,丁香酚与内标物的色谱峰面积比值为纵坐标,绘制标准曲线;丁香酚在0.256-1.792 μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999);精密度:RSD = 0.91%,表明该方法精密度良好。
5、供试品测定
分别精密量取丁香酚对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入气相色谱仪测定,记录色谱图,计算,即得。
实施例4
照气相色谱法(中国药典2000版二部附录Ⅵ E)测定。
1、对照品溶液的制备:取丁香酚对照品约150mg,精密称定,置25ml量瓶中,用正已烷稀释至刻度,混匀;作为对照品溶液;
2、内标溶液的制备:取十三烷适量,加正已烷制成每1ml含4mg的溶液,作为内标溶液。
3、供试品溶液的制备:
取8cm*10cm的温胃止痛膏2片,剪成条状,置250ml圆底烧瓶中,加水100ml,连接挥发油测定器,自测定器上端加水使充满刻度部分,并溢流入烧瓶为止,再加正已烷5ml,将烧瓶内溶液加热至微沸,并保持微沸4小时,冷却后弃去水相,将正已烷通过一个铺有无水硫酸钠的漏斗,滤至25ml量瓶中,即得到吸收液;挥发油测定器及漏斗用正已烷少许洗涤,洗涤液与吸收液合并,精密加入内标溶液3ml,加正已烷稀释至刻度,混匀,作为供试品溶液。
4、测定方法:
a、色谱条件:毛细管柱(25 m×0.25 mm×0.25μm);进样口温度180℃;柱温210℃;载气为氦气,检测器FID;进样量:2μl;
b、系统适用性试验
精密吸取丁香酚对照品溶液2、4、6、8、10ml ,分别置于25ml量瓶中,各精密加入内标溶液3ml,用正己烷稀释至刻度,摇匀。于上述量瓶中取2μl,色谱进样,测定丁香酚和内标物的峰面积,以丁香酚对照品取样量为横坐标,丁香酚与内标物的色谱峰面积比值为纵坐标,绘制标准曲线;丁香酚在0.576 —2.880 μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9997);精密度:RSD = 0.67%,表明该方法精密度良好。
5、供试品测定
分别精密量取丁香酚对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入气相色谱仪测定,记录色谱图,计算,即得。
实施例5:
照气相色谱法(中国药典2000版二部附录Ⅵ E)测定。
1、对照品溶液的制备:取丁香酚对照品约150mg,精密称定,置25ml量瓶中,用正已烷稀释至刻度,混匀;作为对照品溶液;
2、内标溶液的制备:取萘适量,加正已烷制成每1ml含3mg的溶液,作为内标溶液。
3、供试品溶液的制备:
取8cm*10cm的温胃止痛膏2片,剪成条状,置250ml圆底烧瓶中,加水100ml,连接挥发油测定器,自测定器上端加水使充满刻度部分,并溢流入烧瓶为止,再加正已烷5ml,将烧瓶内溶液加热至微沸,并保持微沸4小时,冷却后弃去水相,将正已烷通过一个铺有无水硫酸钠的漏斗,滤至25ml量瓶中,即得到吸收液;挥发油测定器及漏斗用正已烷少许洗涤,洗涤液与吸收液合并,精密加入内标溶液3ml,加正已烷稀释至刻度,混匀,作为供试品溶液。
4、测定方法:
a、色谱条件:毛细管柱(25 m×0.25 mm×0.25μm);进样口温度180℃;柱温210℃;载气为氦气,检测器FID;进样量:2μl。
b、系统适用性试验
精密吸取丁香酚对照品溶液1、2、3、4、5、6ml,分别置于25ml量瓶中,各精密加入内标溶液3ml,用正己烷稀释至刻度,摇匀。于上述量瓶中取2μl,色谱进样,测定丁香酚和内标物的峰面积,以丁香酚对照品取样量为横坐标,丁香酚与内标物的色谱峰面积比值为纵坐标,绘制标准曲线;丁香酚在0.704—3.520 μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9997);精密度:RSD = 0.67%,表明该方法精密度良好。
5、供试品测定
分别精密量取丁香酚对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入气相色谱仪测定,记录色谱图,计算,即得。
实施例6:
照气相色谱法(中国药典2000版二部附录Ⅵ E)测定。
1、对照品溶液的制备:取丁香酚对照品约150mg,精密称定,置25ml量瓶中,用正已烷稀释至刻度,混匀;作为对照品溶液;
2、内标溶液的制备:取正二十二烷适量,加正已烷制成每1ml含5mg的溶液,作为内标溶液。
3、供试品溶液的制备:
取8cm*10cm的温胃止痛膏2片,剪成条状,置250ml圆底烧瓶中,加水100ml,连接挥发油测定器,自测定器上端加水使充满刻度部分,并溢流入烧瓶为止,再加正已烷5ml,将烧瓶内溶液加热至微沸,并保持微沸4小时,冷却后弃去水相,将正已烷通过一个铺有无水硫酸钠的漏斗,滤至25ml量瓶中,即得到吸收液;挥发油测定器及漏斗用正已烷少许洗涤,洗涤液与吸收液合并,精密加入内标溶液3ml,加正已烷稀释至刻度,混匀,作为供试品溶液。
4、测定方法:
a、色谱条件:PEG-20M毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.25μm);进样口温度200℃;柱温210℃;载气为氮气,检测器FID;进样量:2μl。
b、系统适用性试验
精密吸取丁香酚对照品溶液1、2、3、4、5、6ml,分别置于25ml量瓶中,各精密加入内标溶液3ml,用正己烷稀释至刻度,摇匀。于上述量瓶中取2μl,色谱进样,测定丁香酚和内标物的峰面积,以丁香酚对照品取样量为横坐标,丁香酚与内标物的色谱峰面积比值为纵坐标,绘制标准曲线;丁香酚在0.384 —2.304μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9995);精密度:RSD = 0.88%,表明该方法精密度良好。
5、供试品测定
分别精密量取丁香酚对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入气相色谱仪测定,记录色谱图,计算,即得。
实施例7:
照气相色谱法(中国药典2000版二部附录Ⅵ E)测定。
1、对照品溶液的制备:取丁香酚对照品约150mg,精密称定,置25ml量瓶中,用正已烷稀释至刻度,混匀;作为对照品溶液;
2、内标溶液的制备:取水杨酸甲酯适量,加正已烷制成每1ml含4mg的溶液,作为内标溶液;
3、供试品溶液的制备:
取8cm*10cm的温胃止痛膏2片,剪成条状,置250ml圆底烧瓶中,加水100ml,连接挥发油测定器,自测定器上端加水使充满刻度部分,并溢流入烧瓶为止,再加正已烷5ml,将烧瓶内溶液加热至微沸,并保持微沸4小时,冷却后弃去水相,将正已烷通过一个铺有无水硫酸钠的漏斗,滤至25ml量瓶中,即得到吸收液;挥发油测定器及漏斗用正已烷少许洗涤,洗涤液与吸收液合并,精密加入内标溶液3ml,加正已烷稀释至刻度,混匀,作为供试品溶液。
4、测定方法:
a、色谱条件:色谱柱固定液为9%OV-17;进样口温度180℃,柱温180℃;载气为氮气;检测器为FID;进样量:2μl。
b、系统适用性试验
精密吸取丁香酚对照品溶液2、4、6、8、10ml ,分别置于25ml量瓶中,各精密加入内标溶液3ml,用正己烷稀释至刻度,摇匀。于上述量瓶中取2μl,色谱进样,测定丁香酚和内标物的峰面积,以丁香酚对照品取样量为横坐标,丁香酚与内标物的色谱峰面积比值为纵坐标,绘制标准曲线;丁香酚在0.576 —2.880 μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9997);精密度:RSD = 0.75%,表明该方法精密度良好。
5、供试品测定
分别精密量取丁香酚对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入气相色谱仪测定,记录色谱图,计算,即得。
上述实施例1-实施例7的测定结果表明,本法采用指定的几种内标物中的任何一种(丹皮酚、桂皮醛、联苯、萘、十三烷、正二十二烷、水杨酸甲酯)及色谱柱中的任一种(a、不锈钢色谱柱Φ3mm×2m,PEG-20M为固定相,涂布浓度10%;担体Chromosorb W(AW-DMCS),或b、色谱柱Rtx-WAX,30 m×0.32 mm×0.25μm或c、毛细管柱25 m×0.25 mm×0.25μm或d、PEG-20M毛细管柱30 m×0.32 mm×0.25μm),均可有效进行温胃止痛膏的丁香酚含量的测定,且方便易行,准确度高,易于操作。
Claims (2)
1.温胃止痛膏中丁香酚含量的测定方法,其特征是用气相色谱法测定温胃止痛膏中丁香酚的含量,其操作步骤如下:
A、对照品溶液的制备:取丁香酚对照品约150mg,精密称定,置25ml量瓶中,用正已烷稀释至刻度,混匀,作为对照品溶液;
内标溶液制备:取适量内标物丹皮酚、桂皮醛、联苯、萘、十
三烷、正二十二烷或水杨酸甲酯中的一种,加正已烷制成每1ml含2-8mg的溶液,作为内标溶液;
C、供试品溶液的制备:取规格为8cm*10cm的温胃止痛膏2片,剪成条状,置250ml圆底烧瓶中,加水100ml,连接挥发油测定器,自测定器上端加水使充满刻度部分,并溢流入烧瓶为止,再加正已烷5ml,将烧瓶内溶液加热至微沸,并保持微沸4小时,冷却后弃去水相,将正已烷通过一个铺有无水硫酸钠的漏斗,滤至25ml量瓶中,即得到吸收液;挥发油测定器及漏斗用正已烷少许洗涤,洗涤液与吸收液合并,精密加入上述配制好的内标溶液3ml,加正已烷稀释至刻度,混匀后作为供试品溶液;
D、测定
a、色谱条件
气相色谱柱,载气为氮气或氦气,进样口温度150-200℃,柱温150-210℃,检测器为FID,进样量2μl;
b、供试品测定
分别精密量取丁香酚对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入气相色谱仪测定,记录色谱图,计算,即得。
2.根据权利要求1所述的温胃止痛膏中丁香酚含量的测定方法,其特征在于:所述的气相色谱柱选用a、不锈钢色谱柱Φ3mm×2m,PEG-20M为固定相,涂布浓度10%;担体Chromosorb W,或b、色谱柱Rtx-WAX,30 m×0.32 mm×0.25μm或c、毛细管柱25 m×0.25 mm×0.25μm或d、PEG-20M毛细管柱30 m×0.32 mm×0.25μm的一种。
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