CN102228514A - 一种从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法 - Google Patents

一种从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，在用水或醇水混合溶剂提取之后，将提取液浓缩之后依次经过三步分离：大孔树脂吸附并用醇水溶剂洗脱、脱色树脂吸附(对橄榄提取液中的色素有良好吸附作用的脱色树脂(对橄榄苦苷有良好吸附作用的大孔吸附树脂，洗脱除去其他杂质)，吸附除去色素)和有机溶剂萃取，逐步对提取液当中的橄榄苦苷进行分离纯化，最后获得高含量的橄榄苦苷提取物，橄榄苦苷的含量大于40％，甚至达到80～90％。

Description

一种从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法
技术领域
本发明属于橄榄苦苷提取的技术领域，涉及一种从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法。
背景技术
橄榄叶的药用历史已有数千年，古希腊人用它来清洗伤口。有迹象显示饮用橄榄叶泡的茶是中东地区传统上已沿用数百年的治疗例如咳嗽，喉咙痛，膀胱炎和发热等不适的方法。另外，橄榄叶软膏被用于治疗疖子，皮疹，疣子和其它皮肤疾病。长期以来，人们一直从橄榄油中提取抗氧化活性成分。生物学家研究发现，油橄榄叶含有的抗氧化活性成分较之橄榄油更为突出，尤其是橄榄苦苷在叶中的含量明显高于果实和树。科学家发现，地中海沿岸冠心病和癌症的发生率都比较低，他们认为橄榄苦苷与冠心病和癌症发生率低有着密切的联系。
橄榄苦苷具有以下的功效：1、可以阻止细胞和病毒的生长，并刺激免疫系统中重要细胞的活性，以抵抗感染。2、对皰疹、膀胱和微菌感染也极为有效。3、它有抗氧化能力，能减轻低密度脂蛋白的氧化程度，预防冠心病，动脉粥样硬化的发生。4、保持健康的血压和胆固醇水平，有舒缓血管平滑肌，降低血压的能力。
橄榄苦苷的使用具有广阔的前景，具体包括：1、制药，用于制造治疗病毒、细菌、寄生虫和吸血虫等所引起的疾病的新药，和治疗感冒的新药。2、护肤品，用于护肤品中可以促进肌肤原蛋白再生，自然抵御由氧化而导致肌肤的破坏。
目前市场上橄榄叶提取物橄榄苦苷含量大多为10～40％，但高含量的橄榄苦苷产品不多。比如，党建章、张幸生、黄晓裕等，在《D-101大孔树脂富集橄榄叶中橄榄苦苷的研究》中采用D101静态吸附，水洗脱糖类等物质，以70％乙醇洗脱，可制备出5～20％的产品。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，该方法便于规模化生产高含量橄榄苦苷，橄榄苦苷含量能够大于40％。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，包括以下步骤：
1)将清洗干净的油橄榄叶用其质量6～200倍的水在0～40℃浸提1～4h或在40～100℃加热提取1～2h，过滤，收集滤液；共提取2～3次，合并滤液浓缩至1/6～1/12，得到浓缩提取液；
或者将清洗干净的油橄榄叶用其质量6～200倍的体积分数10～90％的醇溶液加热回流提取1～2h，过滤，收集滤液；共提取2～3次，合并滤液浓缩至无醇，得到浓缩提取液；
2)将浓缩提取液放凉至室温后上样于大孔吸附树脂，使得橄榄苦苷被吸附在大孔吸附树脂上，用体积分数10～90％的醇溶液进行洗脱，收集洗脱液；
3)将收集的洗脱液浓缩，浓缩至无醇后静置放凉至室温，将浓缩液上样于脱色树脂，收集流出液；
4)用流出液体积0.8～2.0倍量的有机溶剂进行萃取，收集有机相，浓缩干燥去除有机溶剂后，得到包含橄榄苦苷的提取物。
所述的体积分数10～90％的醇溶液为甲醇或乙醇的水溶液。
所述的用醇溶液提取得到的浓缩提取液在上样于大孔吸附树脂之前，还添加其体积1/5～1/2的水。
所述的大孔吸附树脂为DM130树脂、D101树脂或AB-8树脂。
所述的脱色树脂为XDA-7树脂、LX-68树脂、LX-10G树脂或LSA-700树脂。
所述的萃取所用的有机溶剂为正丁醇、乙酸乙酯、氯仿或正乙烷。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明提供的从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，在用水或醇水混合溶剂提取之后，将提取液浓缩之后依次经过三步分离：大孔树脂吸附并用醇水溶剂洗脱、脱色树脂吸附(对橄榄提取液中的色素有良好吸附作用的脱色树脂(对橄榄苦苷有良好吸附作用的大孔吸附树脂，洗脱除去其他杂质)，吸附除去色素)和有机溶剂萃取，逐步对提取液当中的橄榄苦苷进行分离纯化，最后获得高含量的橄榄苦苷提取物，橄榄苦苷的含量大于40％，甚至达到80～90％。
附图说明
图1为本发明的工艺流程图；
图2为本发明制备的产品的橄榄苦苷含量检测的色谱图之一；
图3为本发明制备的产品的橄榄苦苷含量检测的色谱图之二。
具体实施方式
本发明提供的从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，利用水或醇水混合溶液作为溶剂进行提取，对提取液浓缩之后依次经过三步分离：大孔树脂吸附并用醇水溶剂洗脱、脱色树脂吸附和有机溶剂萃取，逐步对提取液当中的橄榄苦苷进行分离纯化，最后获得高含量的橄榄苦苷提取物。下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1
将清洗干净的油橄榄叶100g粉碎后，加入1000ml的水，60℃加热提取1h，过滤，收集滤液；油橄榄叶再加入1000ml的水再次加热提取，相同条件下共提取三次，合并滤液后浓缩至600ml；
放凉至室温后，将浓缩的提取液上样于大孔吸附树脂DM130，用50％的甲醇(体积比)进行洗脱，收集洗脱液；
将集洗脱液(A液)减压浓缩去除甲醇，浓缩至无醇后静置放凉至室温，将浓缩液上样于脱色树脂XDA-7，收集所有流出液(B液)；
用流出液(B液)体积1倍量的正丁醇进行萃取，收集有机相，浓缩干燥去除有机溶剂后，得到提取物1.52g。
利用HPLC法检测提取物所含有的橄榄苦苷的含量，色谱柱(ODS-3C18)，流动相：乙腈∶水∶磷酸＝21∶79∶0.1(V/V)，波长：254nm，柱温：室温，流速：0.8μl/min，进样量：50μl。提取物当中橄榄苦苷含量检测结果的色谱图如图2所示，经计算提取物当中橄榄苦苷的含量为82.18％。
实施例2
将干燥的油橄榄叶100g粉碎后，加入2000ml的80％乙醇，加热回流提取1h，过滤，收集滤液；共提取三次，合并滤液浓缩至无醇加水至800ml，放凉至室温后上样于大孔吸附树脂DM130，用70％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液(A液)；
将集洗脱液(A液)减压浓缩去除乙醇，浓缩至无醇后静置放凉至室温，将浓缩液上样于脱色树脂LX-68，收集流出液(B液)；
用流出液(B液)体积0.8倍量的乙酸乙酯进行萃取，收集有机相(乙酸乙酯相)，浓缩干燥去除有机溶剂后，得到提取物1.21g，检测提取物当中橄榄苦苷的含量为75.46％。
实施例3
将清洗干净的油橄榄叶100g粉碎后，加入5000ml的20％甲醇，加热回流提取1h，过滤，收集滤液；共提取三次，合并滤液浓缩至1000ml，放凉至室温后上样于大孔吸附树脂D101，用20％的甲醇进行洗脱，收集洗脱液(A液)；
将集洗脱液(A液)减压浓缩去除甲醇，浓缩至无醇后静置放凉至室温，将浓缩液上样于脱色树脂LX-10G，收集流出液(B液)；
用流出液(B液)体积1.0倍量的乙酸乙酯进行萃取，收集有机相(乙酸乙酯相)，浓缩干燥去除有机溶剂后，得到提取物0.54g，检测提取物当中橄榄苦苷的含量为93.22％。
实施例4
将干燥的油橄榄叶100g粉碎后，加入800ml的70％甲醇，加热回流提取1h，过滤，收集滤液；共提取三次，合并滤液浓缩至无醇加水至750ml，放凉至室温后上样于大孔吸附树脂AB-8，用50％的甲醇进行洗脱，收集洗脱液(A液)；
将集洗脱液(A液)减压浓缩去除甲醇，浓缩至无醇后静置放凉至室温，将浓缩液上样于脱色树脂LSA-700，收集流出液(B液)；
用流出液(B液)体积1.0倍量的氯仿进行萃取，收集有机相(氯仿相)，浓缩干燥去除有机溶剂后，得到提取物1.06g，检测提取物当中橄榄苦苷的含量为70.53％。
实施例5
将清洗干净的油橄榄叶100g粉碎后，加入1000ml水，在0～15℃浸提2h，过滤，收集滤液；共提取两次，合并滤液浓缩至600ml，放凉至室温后上样于大孔吸附树脂DM130，用70％的甲醇进行洗脱，收集洗脱液(A液)；
将集洗脱液(A液)减压浓缩去除甲醇，浓缩至无醇后静置放凉至室温，将浓缩液上样于脱色树脂LSA-700，收集流出液(B液)；
用流出液(B液)体积0.8倍量的正丁醇进行萃取，收集有机相(正丁醇)，浓缩干燥去除有机溶剂后，得到提取物0.9g，检测提取物当中橄榄苦苷的含量为61.09％，其橄榄苦苷含量检测结果的色谱图如图3所示。
实施例6
将干燥的油橄榄叶10kg粉碎后，加入80L的70％甲醇，加热回流提取1h，过滤，收集滤液；共提取三次，合并滤液浓缩至90L，放凉至室温后上样于大孔吸附树脂DM130，用60％的甲醇进行洗脱，收集洗脱液(A液)；
将集洗脱液(A液)减压浓缩去除甲醇，浓缩至无醇后静置放凉至室温，将浓缩液上样于脱色树脂LX-10G，收集流出液(B液)；
用流出液(B液)体积1.0倍量的氯仿进行萃取，收集有机相(氯仿相)，浓缩干燥去除有机溶剂后，得到提取物182g，检测提取物当中橄榄苦苷的含量为72.19％。
实施例7
将干燥的油橄榄叶100kg粉碎后，加入2000L的80％甲醇，加热回流提取1h，过滤，收集滤液；共提取三次，合并滤液浓缩至1000L，放凉至室温后上样于大孔吸附树脂DM130，用70％的甲醇进行洗脱，收集洗脱液(A液)；
将集洗脱液(A液)减压浓缩去除甲醇，浓缩至无醇后静置放凉至室温，将浓缩液上样于脱色树脂XDA-7，收集流出液(B液)；
用流出液(B液)体积1.0倍量的乙酸乙酯进行萃取，收集有机相，浓缩干燥去除有机溶剂后，得到提取物0.55kg，检测提取物当中橄榄苦苷的含量为96.31％。

Claims (6)

1.一种从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将清洗干净的油橄榄叶用其质量6～200倍的水在0～40℃浸提1～4h或在40～100℃加热提取1～2h，过滤，收集滤液；共提取2～3次，合并滤液浓缩至1/6～1/12，得到浓缩提取液；
或者将清洗干净的油橄榄叶用其质量6～200倍的体积分数10～90％的醇溶液加热回流提取1～2h，过滤，收集滤液；共提取2～3次，合并滤液浓缩至无醇，得到浓缩提取液；
2)将浓缩提取液放凉至室温后上样于大孔吸附树脂，使得橄榄苦苷被吸附在大孔吸附树脂上，用体积分数10～90％的醇溶液进行洗脱，收集洗脱液；
3)将收集的洗脱液浓缩，浓缩至无醇后静置放凉至室温，将浓缩液上样于脱色树脂，收集流出液；
4)用流出液体积0.8～2.0倍量的有机溶剂进行萃取，收集有机相，浓缩干燥去除有机溶剂后，得到包含橄榄苦苷的提取物。
2.如权利要求1所述的从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，其特征在于，所述的体积分数10～90％的醇溶液为甲醇或乙醇的水溶液。
3.如权利要求1所述的从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，其特征在于，所述的用醇溶液提取得到的浓缩提取液在上样于大孔吸附树脂之前，还添加其体积1/5～1/2的水。
4.如权利要求1所述的从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，其特征在于，所述的大孔吸附树脂为DM130树脂、D101树脂或AB-8树脂。
5.如权利要求1所述的从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，其特征在于，所述的脱色树脂为XDA-7树脂、LX-68树脂、LX-10G树脂或LSA-700树脂。
6.如权利要求1所述的从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，其特征在于，所述的萃取所用的有机溶剂为正丁醇、乙酸乙酯、氯仿或正乙烷。
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