CN102223878A - 包含鞘磷脂的脂质体系统 - Google Patents
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Abstract
本公开提供一种脂质体系统,所述脂质体系统包括水性介质,在所述水性介质中分散有脂质体,所述脂质体在其脂质体内水性区室中包封至少一种活性剂,所述水性介质与所述脂质体内水性区室处于等渗平衡,所述脂质体具有包含形成脂质体的脂质的膜,所述形成脂质体的脂质中的至少一种是鞘磷脂(SPM),所述脂质体系统相比于不含SPM的同种脂质体具有更大的稳定性,而且在一个实施方式中在长期保存期间具有稳定性,所述稳定性的特征在于在所述保存之后所述水性介质中存在不超过30%的所述至少一种活性剂。本公开还提供:利用所述脂质体系统保存脂质体的方法;所述脂质体系统用于治疗医疗状况或用于诊断医疗状况的应用;包含所述脂质体系统的药物或诊断组合物;以及治疗或诊断医疗状况的方法,所述方法包括向对象施用一定量的所述脂质体系统。
Description
技术领域
本发明涉及脂质体技术领域。
背景技术
除了其他应用之外,脂质体作为药物载体用于经由多种机制进行递送。为此,使用了各种类型的脂质体,包括小单层囊泡(SUV)、大单层囊泡(LUV)、多层囊泡(MLV)、多泡囊泡(MVV)、大多泡囊泡(LMVV,有时也称为巨大多泡囊泡“GMV”)、寡层囊泡(OLV)等等。本领域的技术人员理解的是,LMVV与各种尺寸的具有“洋葱样”MLV结构的单层囊泡稍有不同。在LMVV中,相对于脂质的量的形成水相的水性介质的量多于MLV中的情况,这可能使更多量的药物装载入水相中,即与尺寸分布类似的MLV系统相比具有更高的药物/脂质摩尔比。该差异已由Grant等,2004[Anesthesiology 101(1):133-7,2004]和美国专利6,162,462例证。已经发现MLV与LMVV的结构差异不仅能够使更多量的药物装载入脂质体中,而且延长了药物从LMVV系统的释放。
具体而言,美国专利6,162,462公开了脂质体布比卡因组合物,其中布比卡因通过跨膜硫酸铵梯度装入,所述脂质体是巨大多泡囊泡(GMV,LMVV的异名),在所述脂质体组合物中包封的药物与脂质的摩尔比为至少1.0。US 6,162,462的脂质体中包封的具体药物是两亲性止痛药布比卡因(BUP)。这些装载了布比卡因的LMVV显示出对小鼠和人提供了优异的镇痛作用[Grant et al.2004和US 6,162,462,同上]。然而,利用这些LMVV仍未解决的现象在于在4℃或室温保存期间从LMVV泄露布比卡因。因此,一段时间之后,系统中包含游离药物(其量高于药物MTD),施用包含该游离药物的脂质体系统可能导致毒性和有害的副作用(源自与高含量的游离药物接触)、不利的药物代谢动力学和较短的治疗效果持续时间。因此,本领域需要提供一种能够减少或防止在保存期间药物自包封该药物的脂质体泄露的系统。
发明内容
本公开基于以下发现:如果脂质体膜包含鞘磷脂,而且LMVV位于与脂质体内水性介质处于等渗平衡的水性介质中,则装载有大量两亲性药物(布比卡因,BUP)的大多泡囊泡(LMVV)在减少BUP泄露方面能够得到稳定。
因此,本公开根据其第一方面提供一种脂质体系统,所述脂质体系统包括水性介质,在所述水性介质中分散有脂质体,所述脂质体在其脂质体内水性区室中包封至少一种活性剂,所述水性介质与所述脂质体内水性区室处于等渗平衡,所述脂质体具有包含形成脂质体的脂质的膜,所述形成脂质体的脂质中的至少一种是鞘磷脂(SPM),所述脂质体系统相比于不含SPM的同种脂质体(即,形成脂质体的膜中不含SPM)具有更大的稳定性。在一个实施方式中,所述脂质体系统在长期保存期间稳定,所述稳定性的特征在于在所述保存之后所述水性介质中存在不超过30%的所述至少一种活性剂。
本公开根据其第二方面还提供一种保存脂质体的方法,所述脂质体在其脂质体内水性区室中包封至少一种活性剂,所述脂质体具有包含形成脂质体的脂质的膜,至少一种形成脂质体的脂质是鞘磷脂(SPM),所述方法包括:形成脂质体系统,在所述脂质体系统中所述脂质体分散在与所述脂质体的脂质体内水性区室处于等渗平衡的水性介质中;和保存所述脂质体系统,所述脂质体系统相比于不含SPM的同种脂质体具有更大的稳定性。
本公开的一些方面还提供:本文中所定义的脂质体系统用于制备药物或诊断组合物的应用;以及所定义的脂质体系统用于医疗状况的治疗或用于医疗状况的诊断。
此外,本公开的一个方面提供一种药物或诊断组合物,所述药物或诊断组合物包含本文中所定义的脂质体系统和至少一种生理上可接受的载体。
进而本公开提供一种用于治疗或诊断医疗状况的方法,所述方法包括向对象施用一定量的本文中所定义的脂质体系统。
在一个优选实施方式中,所述活性剂是两亲性化合物,通过主动装载(remote loading)技术装载入脂质体中;SPM是合成或半合成的C16或C18SPM,所述脂质体是大多泡囊泡(LMVV)。
本公开的具体脂质体系统包括由至少氢化大豆卵磷脂(HSPC)、C16SPM、胆固醇和包封的BUP的组合形成的LMVV。
附图说明
为理解本发明并领会如何实际实施本发明,现将通过仅非限制性实例的方式,参照如下附图对实施方式进行说明,附图中:
图1A~1B是显示在4℃(图1A)或37℃(图1B)保存期间,布比卡因(BUP)从具有不同脂质组成(设定各自的BUP与磷脂的摩尔比)的大多泡囊泡(LMVV)中释放的图示,所述大多泡囊泡利用通过跨膜硫酸铵(AS)梯度驱动的主动装载而已经装载入BUP。
图2A~2B是显示在4℃(图2A)或37℃(图2B)保存期间,布比卡因(BUP)从具有不同脂质组成(设定各自的BUP与磷脂的摩尔比)的大多泡囊泡(LMVV)中释放的图示,所述大多泡囊泡利用通过跨膜醋酸钙(CA)梯度驱动的主动装载而已经装载入BUP。
图3A~3B是显示在4℃(图3A)或37℃(图3B)保存期间,布比卡因(BUP)从具有不同脂质组成(HSPC/CHOL 6/4摩尔比;HSPC/C16SPM/CHOL 3/3/4摩尔比;和HSPC100/CHOL 6/4摩尔比,设定各组成的BUP与磷脂的摩尔比)的LMVV中释放的图示,所述LMVV使用被动装载法已经装载入BUP。
图4A~4C是显示使用表8中标示为制剂1~8的各脂质体系统(在附图中用对应的制剂编号“x”标示为“lip x”)的小鼠镇痛作用的持续时间的图示,图4A显示脂质体BUP或其游离态的注射体积的效果,BUP的量为恒定的6mg/小鼠;图4B显示5种不同的LMVV制剂的效果,BUP的量为恒定的3mg;图4C描述八种不同的LMVV制剂(表8)在3mg/小鼠的剂量时的对比。
图5A~5F是比较表8中标示的5种不同的LMVV制剂(图5A~5E中的“lip x”)的两种不同剂量的BUP(3mg/小鼠和6mg/小鼠),以及两种不同量(0.375mg/小鼠和0.75mg/小鼠)的非包封(游离)的BUP(图5F中)的镇痛作用持续时间的图示;图5A比较lip 2(3mg BUP/小鼠和6mg BUP/小鼠)的效果,图5B比较lip 3(3mg BUP/小鼠和6mg BUP/小鼠)的效果,图5C比较lip 4(3mg BUP/小鼠和4.5mg BUP/小鼠)的效果,图5D比较lip 5(3mg BUP和6mg BUP)的效果,图5E比较lip 8(3mgBUP/小鼠和6mg BUP/小鼠)的效果,图5F比较使用两种体积(150μl和300μl)在0.375mg/小鼠时和使用150μl体积在0.75mg/小鼠时的游离(非脂质体)BUP的效果。
图6是显示包含HSPC∶C16SPM∶胆固醇[3/3/4]3mg BUP的LMVV和Grant et al.2004描述的LMVV以及游离的BUP 0.75mg/小鼠(最大耐受剂量,MTD)在20小时之后的体内镇痛作用的图示。
图7是显示包含HSPC∶C16SPM∶胆固醇[3/3/4]3mg BUP-LMVV的LMVV和游离的BUP 0.75mg/小鼠(最大耐受剂量,MTD)在40小时之后的体内镇痛作用的图示.
图8A~8E是比较当保存在各种保存介质(盐水、0.5%BUP或2.0%BUP)中时按原样经由AS跨膜装载有布比卡因的HSPC100/C16SPM/CHOL(3/3/4摩尔比)LMVV在4℃于标示的保存时间期间的游离布比卡因的水平的变化(以保存介质中的%表示)的图示。
具体实施方式
本公开基于以下理解:诸如US 6,162,462和Grant et al.(Grant et al.2004,同上)中描述的那些等现有的布比卡因脂质体制剂在低温下进行长期保存期间存在泄漏的趋势,这可能在给需要该药物的对象进行施用时导致中毒的风险。这些布比卡因脂质体制剂在大多泡囊泡(LMVV,在US 6,162,462中称为巨大多泡囊泡,GMV)中包含的药物/磷脂比很高(>0.5摩尔/摩尔),但是在保存之后,发现大量的先前包封的药物存在于外部介质中。因此,设计了一种新型的脂质体系统,在这种脂质体系统中,与迄今为止现有的布比卡因脂质体制剂相比,在脂质体外部的介质中的游离布比卡因的量在4℃进行长期保存后明显减少。还发现,尽管所述脂质体系统在4℃保存期间是稳定的,但在生理条件下(即,在37℃时),布比卡因以可控的持久的速率从脂质体中释放从而获得长期(持久的)镇痛作用。
具体而言,已经发现,在脂质体双层中包含用于形成脂质体双层的全部磷脂的至多75%的量或全部脂质(包含约33摩尔%的胆固醇)的50%的量的鞘磷脂的脂质体减少了泄漏量,而且没有损害布比卡因在37℃从脂质体中的释放率并且没有损害药物在脂质体中的高装载。
因此,根据本公开的第一方面,本公开提供一种脂质体系统,所述脂质体系统包括水性介质,在所述水性介质中分散有脂质体,所述脂质体在其脂质体内水性区室中包封至少一种活性剂,所述水性介质与所述脂质体内水性区室处于等渗平衡,所述脂质体具有包含形成脂质体的脂质的膜,所述形成脂质体的脂质中的至少一种是鞘磷脂(SPM),所述脂质体系统是稳定的。
已经发现,包含SPM的脂质体的稳定性明显高于在其脂质膜中不含SPM的脂质体的稳定性。脂质体系统的稳定性也根据长期保存性确定,所述稳定性的特征在于在所述保存之后所述水性介质中存在不超过30%,有时不超过20%,甚至不超过10%的所述系统的所述至少一种活性剂。
正如本文中使用的,术语“脂质体系统”表示包含形成至少一种脂质体并封住至少一个脂质体内水性区室的有组织集合的脂质的系统。除了脂质体之外,所述系统还包含其中分散或悬浮所述脂质体的水性介质。
所述水性介质是具有所期望的渗透压摩尔浓度和离子浓度的任何水基缓冲液,应当理解为包括各种生理上可接受的缓冲液。缓冲系统通常是弱酸及其可溶性盐的混合物,如柠檬酸钠/柠檬酸;或二元酸的单阳离子或双阳离子盐,如酒石酸氢钾;酒石酸氢钠、磷酸/磷酸二氢钾和磷酸/磷酸氢二钠。弱酸缓冲液是具有4~7的恒定的pH值的缓冲溶液,弱碱缓冲液是具有7~10的恒定的pH值的缓冲溶液。可用于制造本公开的水性介质的缓冲液的一些非限制性实例包括生理盐水(0.9%NaCl)、磷酸盐缓冲盐水(PBS)、蔗糖缓冲液、组氨酸缓冲液等,pH设定在约4~8,或5.5~7(如通常用于脂质体药物递送系统)。
在一个实施方式中,所述水性介质包含一定量的游离活性剂,水性介质中存在所述游离活性剂可实现或参与形成所述等渗平衡。游离活性剂的量确定为以致形成所述等渗平衡。如本文中的实例所示,水性介质中游离试剂的存在也减少了试剂从脂质体中的泄露(这比得上水性介质中不含游离药物的相同制剂)。
在水性介质中分散有脂质体。术语“分散”用于表示脂质体在水性介质中的分布或悬浮。
正如所知的,脂质体由以下讨论的包含形成脂质体的脂质的脂质双层和水性脂质体内核心构成。根据本公开,脂质体外部的水性介质和脂质体内水性区室处于等渗平衡。所述等渗平衡应当理解为意指水性介质与脂质体内水性区室的介质具有相似的渗透压摩尔浓度,相似性定义为渗透压摩尔浓度差不超过50mOsmole。根据一个实施方式,所述水性介质和所述脂质体内水相的渗透压摩尔浓度为约50mOsm/kg~约600mOsm/kg,或甚至为约250mOsm/kg~约550mOsm/kg。等渗平衡可通过用具有与脂质体内水性区室相似的渗透压摩尔浓度的缓冲溶液洗涤包封活性剂的脂质体获得。具体而言,一旦活性剂装载入脂质体中,未被包封的试剂可由选择的缓冲溶液洗去。
脂质体的膜是双层膜,可制备为包含各种生理上可接受的形成脂质体的脂质。正如本文中使用的,术语“形成脂质体的脂质”用来主要表示甘油磷脂和鞘磷脂。甘油磷脂具有甘油骨架,其中,首基处的至少一个、优选两个羟基被酰基、烷基或烯基链、磷酸酯基团的一种或两种、或以上基团的任何组合和/或以上基团的衍生物取代,并且可以在首基处包含化学反应性基团(例如胺、酸、酯、醛或醇),由此使脂质具有极性首基。鞘磷脂由1位上连接有磷酰胆碱部分的神经酰胺单元构成,因而实际上为N-酰基鞘氨醇。鞘磷脂中的磷酰胆碱部分构成鞘磷脂的极性首基。
在形成脂质体的脂质中,酰基链的长度通常为14~约24个碳原子,并具有为完全氢化、部分氢化或非氢化脂质的不同的饱和度。此外,脂质基质可以是天然来源的、半合成的或者全合成的脂质,并且可以是电中性的、带负电的或带正电的。
形成脂质体的甘油磷脂的实例包括但不限于:甘油磷脂、磷脂酰甘油(PG),包括二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG);磷脂酰胆碱(PC),包括蛋黄磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰胆碱(POPC)、氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC);磷脂酸(PA)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰丝氨酸(PS)。
正如所知的,形成脂质体的脂质还可以包括阳离子脂质(单阳离子或多阳离子脂质)。阳离子脂质通常由亲脂性部分构成,例如固醇或同一甘油骨架,两个酰基或两个烷基,或者一个酰基和一个烷基链向其贡献两亲性分子的疏水区域,由此形成具有整体上的净正电荷的脂质。优选的是,脂质的首基带正电。
单阳离子脂质例如可包括1,2-二肉豆蔻酰-3-三甲基铵丙烷(DMTAP)、1,2-二油烯氧基-3-(三甲基氨基)丙烷(DOTAP)、N-[1-(2,3-二(十四烷氧基))丙基]-N,N-二甲基-N-羟乙基溴化铵(DMRIE)、N-[1-(2,3-二油烯氧基)丙基]-N,N-二甲基-N-羟乙基-溴化铵(DORIE)、N-[1-(2,3-二油烯氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)、3β[N-(N′,N′-二甲基氨基乙烷)氨基甲酰基]胆固醇(DC-Chol)和二甲基-二(十八烷基)溴化铵(DDAB)。
多阳离子脂质可包括与单阳离子脂质相似的亲脂性部分,其上连接精胺或亚精胺。这些包括但不局限于N-[2-[[2,5-双(3-氨丙基)氨基]-1-氧戊基]氨基]乙基]-N,N-二甲基-2,3-双[(1-氧-9-十八碳烯基)氧基]-1-丙铵(DOSPA)和神经酰胺氨基甲酰基精胺(CCS)。阳离子脂质可形成衍生的磷脂的一部分,例如,中性脂质二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)与聚赖氨酸衍生,从而形成阳离子脂质聚合物。
根据本公开,形成脂质体的脂质至少包括鞘磷脂。本文中使用的术语“鞘磷脂”或“SPM”表示与磷酰胆碱基团结合的任何N-酰基鞘氨醇,所述磷酰胆碱基团形成鞘磷脂的极性首基(N-酰基鞘氨醇磷酰胆碱)。与鞘氨醇的伯氨基连接的酰基链可以是饱和的或不饱和的,支化的或不支化的。在一个实施方式中,酰基链包含12~24个碳原子(C12~C24),有时为14~20个碳原子。在一些优选实施方式中,SPM是C16:0或C18:0鞘磷脂,即,饱和的C16或C18SPM。SPM优选是合成的或半合成的SPM,即,天然的SPM的衍生物,并且可包括天然的D-赤式(2S,3R)异构体和非天然的L-苏式(2S,3S)异构体,不过前者(也就是天然的异构体)是优选的。
另外,在本公开的情况下,鞘磷脂也用于表示对应的二氢物种,即,与本文中如上限定的SPM对应的任何二氢鞘磷脂(DHSM)。
在一个实施方式中,所述脂质体系统包含的脂质体膜中的SPM的含量为所述膜中的全部磷脂(形成脂质体的脂质)的25摩尔%~75摩尔%,或在包含胆固醇时为全部脂质的约50摩尔%。
在另一个实施方式中,除SPM之外的所述形成脂质体的脂质与所述SPM的摩尔比为1∶1~2∶1,与本公开使用的SPM无关。
通常,形成脂质体的脂质在组装为脂质体膜时具有的固体有序相(SO)到液体无序相(LD)的相变温度具有限定为Tm>37℃的特征温度。Tm是SO至LD相变温度范围内相变的热容量发生最大变化时的温度。令人感兴趣的是,已经发现而且如下所示,固体有序相到液体无序相的Tm为约53℃的HSPC与Tm为约41.4℃的C16SPM的组合令人意外地形成了稳定的脂质体系统,也就是说,与缺少C16SPM的脂质体系统相比,4℃保存期间的药物泄露减少,缺少C16SPM的脂质体系统欠稳定,即,在4℃保存(即,相同的保存条件)期间显示更高的药物泄露速率。
在本公开的上下文中,术语“稳定性”用来表示,得到的脂质体与然而不含SPM的同种脂质体(即,脂质体膜不包含SPM作为形成脂质体的脂质的一部分)相比更为稳定(在保存期间或保存后较少的试剂从脂质体中泄露,泄露差在统计上显著)。所述稳定性也可以定义为装载药物的脂质体在4℃保存至少3个月的时间时不会发生化学和物理变化。所述稳定性例如通过测定存在于或释放(泄露)至脂质体外水性介质的游离活性剂(即未包封的活性剂)的量而确定,表示稳定性的该量小于脂质体系统内的活性剂的总量(总量包括包封的和未包封的试剂)的30%、20%、有时甚至小于10%。令人惊讶的是,本文中呈现的结果表明,当对脂质体制剂(例如包含HSPC和胆固醇)比较包封的试剂从同种制剂中的泄漏量时,若脂质膜中含有SPM,试剂的泄露减少。
所述脂质体还可以包含通常用于形成脂质体的其他脂质,例如,用于稳定化,用于影响表面电荷、膜的流动性和/或辅助将活性剂装载入脂质体中。该脂质的实例可包括固醇,如胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯、胆固醇硫酸酯或胆固醇的任何其他的衍生物。
脂质体还可包含脂质聚合物。术语“脂质聚合物”本文中用于表示在其极性首基处由亲水性聚合物修饰的脂质物质。脂质聚合物的聚合物首基通常是水溶性的,并且与疏水的脂质区域共价或非共价连接。通常,亲水性聚合物具有的分子量等于或高于750Da,可以是极性的或非极性的。诸如根据本公开可以使用的那些等脂质聚合物已知对于形成长循环脂质体是有效的。有大量的可以连接到脂质上形成脂质聚合物的聚合物,例如但不限于聚乙二醇(PEG)、聚唾液酸、聚乳酸(也称为聚丙交酯)、聚羟基乙酸(也称为聚乙交酯)、聚乳酸-聚羟基乙酸、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑啉、聚羟乙基噁唑啉、聚羟丙基噁唑啉、聚天冬酰胺、聚羟丙基甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚乙烯基甲基醚、聚丙烯酸羟乙基酯、诸如羟甲基纤维素或羟乙基纤维素等衍生纤维素。这些聚合物可以以均聚物或嵌段共聚物或无规共聚物的形式使用。衍生为脂质聚合物的脂质可以是中性、带负电以及带正电的。最常使用的市售的可衍生为脂质聚合物的脂质是基于磷脂酰乙醇胺(PE)、通常为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)的那些脂质。
可根据本公开使用的一族具体的脂质聚合物是连接至DSPE的单甲基化PEG(具有不同长度的PEG链),其中所述PEG聚合物通过氨基甲酸酯键与脂质相连而形成带负电的脂质聚合物,或中性的甲基聚乙二醇二硬脂酰甘油(mPEG-DSG)和中性的甲基聚乙二醇羟羰基-3-氨基-1,2-丙二醇二硬脂酰酯(mPEG-DS)[Garbuzenko O.等,Langmuir.21:2560-2568(2005)]。另外的脂质聚合物是磷脂酸PEG(PA-PEG)。
所述PEG部分的首基的分子量为约750Da~约20,000Da,有时为约750Da~约12,000Da,通常为约1,000Da~约5,000Da。脂质体中通常采用的一种具体的PEG-DSPE是其中PEG具有2000Da分子量的PEG-DSPE,在本文中称为2000PEG-DSPE或者2kPEG-DSPE。
脂质体系统的脂质包封至少一种活性剂。包封包括在脂质体内相中俘获/封入至少一种活性剂。俘获是非共价的俘获,即,在脂质体水相中,活性剂游离地分散而且在适宜的条件下可从脂质体中以可控的方式释放。
所述活性剂可以是小分子量的化合物以及聚合物(例如,肽、蛋白质、核酸序列等)。术语“活性剂”用于表示包封的试剂一旦施用则具有有益的效果,例如,作为治疗剂,作为造影剂(例如,放射性核素染料或与载体配合的染料、发色团或荧光团生成剂等)、作为保健用化合物等。所述活性剂可以是水溶性的、亲水性化合物以及两亲性化合物。
在一个实施方式中,所述活性剂是两亲性化合物。术语“两亲性化合物”用来表示同时具有亲水性和亲脂性的活性剂。有各种本领域中已知的具有生物活性的两亲性化合物。一个实例包括抗癌化合物阿霉素。将阿霉素(例如DOXILTM)装载入预制的脂质体中通过跨膜硫酸铵梯度驱动(美国5,192,549、US 5,316,771和Haran等[Haran G,et al.(1993)Transmembrane ammonium sulfate gradients in liposomes produce efficient and stable entrapment of amphipathic weak bases.Biochim Biophys Acta.1151(2):201-15]。
在一个其他的实施方式中,两亲性活性剂是止痛药。所述止痛药通常用于局部止痛。一组非限制性的止痛药选自由苯坐卡因、氯普鲁卡因、可卡因、环美卡因、二甲卡因、丙氧卡因、普鲁卡因、丙美卡因、丁卡因、阿替卡因、布比卡因、卡铁卡因、辛可卡因、依替卡因、左布比卡因、利多卡因、甲哌卡因、哌罗卡因、丙胺卡因、罗哌卡因、三甲卡因、蛤蚌毒素和河豚毒素组成的组。一组优选的止痛药包括但不限于布比卡因、利多卡因、罗哌卡因、左布比卡因、普鲁卡因、氯普鲁卡因、苯坐卡因、依替卡因、甲哌卡因、丙胺卡因、ciprocaine、丁卡因、地布卡因、庚卡因、美索卡因、丙泮卡因、卡比唑卡因和布他卡因。本公开的具体的止痛药是布比卡因(以下有时称为“BUP”)。
在另一个实施方式中,所述活性剂是水溶性分子,例如肽、蛋白质或核酸序列,例如包括细胞因子、抗体、免疫刺激寡核苷酸(ISS-ODN)、siRNA等。
正如所知的,脂质体通常可具有各种形状和尺寸。所述脂质体可以是多层脂质体(MLV)或多泡囊泡(MVV)。MVV脂质体已知具有多个非同心的紧密填装的内部水性腔室由脂质膜的网络分隔并包封在脂质膜内。在本发明的上下文下,MVV称为大多泡囊泡(LMVV),在本领域中也以术语巨大多泡囊泡(GMV)指代。根据一个实施方式,脂质体通常具有的直径为至少200nm,一般在约200nm~25μm的范围内,有时为约250nm~25μm。
当所述脂质体是MVV或LMVV时,应当理解将试剂装载入LMVV中包括使所述试剂容纳在通过脂质膜形成的多个水性区室中,并且通常还处于环绕非同心的脂质膜的水性环境中。有时,所述试剂可以被俘获(嵌埋)在脂质膜中,例如,在所述活性剂是亲脂性化合物的时候。
本文中公开的脂质体系统的特征在于具有很高的活性剂/脂质比,即,相对于脂质体而言活性剂的水平很高。尽管不排除其他情况,不过高装载一般取决于使用的脂质体的种类、它们的尺寸、装载条件等。在一个实施方式中,通过在高初始活性剂浓度的条件下将所述活性剂主动装载(见下文)入LMVV中实现高装载。在本公开的上下文中,高装载用于表示这样的装载:在得到的脂质体系统中活性剂与脂质的比例为至少约0.5摩尔药物/摩尔形成脂质体的磷脂(摩尔/摩尔)的比例(这是本公开的LMVV的特性)。
将活性剂装载入脂质体中可通过本领域中已知的任何技术进行。这样的技术通常包括将试剂被动装载或主动(“remote loading”)装载入脂质体中。
将试剂包封入脂质体中的被动装载技术通常涉及在制备脂质体的过程中装载试剂,例如,用活性剂的溶液使干燥的形成脂质体的脂质水合。利用被动装载,试剂可以与脂质体膜结合或包封在水性核心中。Bangham等[Bangham AD,Standish MM,Watkins JC(1965)Diffusion of univalent ions across the lamellae of swollen phospholipids.J MoI Biol.13(1):238-52]记载了一种用于被动装载的方法,其中,使含有所关注的试剂的水相与沉积在反应容器壁上的干燥的形成脂质体的脂质的膜接触。在机械手段搅拌下,脂质发生溶胀,由此形成多层囊泡(MLV)。用于被动装载的其他方法是Szoka和Papahadjopoulos[Szoka F.C.Jr5Papahadjopoulos D.(1978)Procedure for preparation of liposomes with large internal aqueous space and high capture by reverse-phaseevaporation.Proc Natl Acad Sci U S A.75(9):4194-8.]描述的反相蒸发(REV)法,根据该方法,将脂质在水不溶性有机溶剂中的溶液在水性载体相中乳化,随后在减压下除去有机溶剂。被动装载的其他方法包括使脂质体进行连续的脱水和再水合处理,或冷冻和解冻。脱水通过蒸发或冻干进行[Kirby C and Gregoriadis G(1984)Dehydration-Rehydration Vesicles:A Simple Method for High Yield Drug Entrapment inLiposomes.Nat.Biotechnol.2,979-984],或者使通过在水溶液中进行超声波处理而制备的脂质体与待包封的溶质混合,然后将混合物在氮气下在旋转烧瓶中干燥。再水合时,制得大脂质体,其中包封了大部分的溶质[Shew RL,Deamer DW.(1985)A novel method for encapsulation of macromolecules in liposomes.Biochim Biophys Acta.816(1):1-8]。装载还可以通过使活性剂与干燥的形成脂质体的脂质共同冻干而改善[国际专利申请公报WO03000227]。
也可使用主动装载技术。例如,利用离子梯度或pH梯度作为预制的脂质体装载驱动力来装载脂质体。利用pH梯度的装载可以根据美国专利5,616,341、5,736,155和5,785,987、美国5,192,549、美国5,316,771和Haran等[Haran G,et al.(1993)Transmembrane ammonium sulfate gradients in liposomes produce efficient and stable entrapment of amphipathic weak bases.Biochim Biophys Acta.1151(2):201-15]中描述的方法进行,以引用的方式并入本文中。pH梯度可以是基于柠檬酸钙的梯度或基于硫酸铵的梯度。
根据一个实施方式,脂质体具有多层囊泡(MLV)或多泡囊泡(MVV)的形式,优选大多泡囊泡(LMVV)。
本公开还提供一种如上所限定的脂质体的保存方法,即,在脂质体内水性区室中包封至少一种活性剂,所述脂质体具有包含形成脂质体的脂质的膜,至少一种形成脂质体的脂质是鞘磷脂(SPM),所述方法包括:形成脂质体系统,在所述脂质体系统中所述脂质体分散在与所述脂质体的脂质体内水性区室处于等渗平衡的水性介质中;和保存所述脂质体系统,由此在所述保存之后所述水性介质中存在不超过30%,有时不超过20%,甚至不超过10%的所述至少一种活性剂。
所述方法可实现长期稳定的保存(在低温下,例如4℃)所述脂质体。尽管最小的稳定保存期是3个月,不过如将在以下非限制性实例中展示的,在4℃保存时也可以获得4个月(120天)、4.5个月、甚至达到6个月的稳定保存。不过,如上所示,在低于身体的生理温度(即,低于37℃)的任何其他温度也可以维持所述稳定性。当提及较低的温度时,应当理解合理的保存温度应当为比体中心温度低至少15℃,即,低于22℃。根据一个实施方式,在约2℃~8℃的温度保存。
由于在含有SPM的LMVV的保存期间活性剂的泄露较少,因而已经发现不必在将脂质体系统施用给需要的对象之前洗涤该脂质体系统。所述脂质体系统可直接施用给需要的对象,或可以与生理上可接受的添加剂组合。
因此,本发明还提供如上限定的脂质体系统用于制备药物或诊断组合物的应用,以分别用于治疗医疗状况或用于诊断的目的。除了所述脂质体系统之外,组合物通常还包含至少一种生理上可接受的添加剂。
此外,本发明提供一种用于治疗或诊断医疗状况的方法,所述方法包括向需要所述治疗或诊断的对象施用一定量的如上限定的脂质体系统或包含该脂质体系统的生理上可接受的组合物。
单独的或组合了生理上可接受的添加剂的脂质体系统可通过本领域中可接受的任何途径施用。根据一个实施方式,脂质体系统的施用通过胃肠外注射或输注进行。这包括但不限于静脉内、动脉内、肌内、脑内、脑室内、心脏内、皮下、骨内(进入骨髓)、皮内、鞘内、腹膜内、膀胱内、海绵体腔内和硬脑膜外(硬膜外)注射或输注。胃肠外施用也可包括经皮施用(例如通过透皮贴剂)、透粘膜施用(例如,通过扩散或注射到腹膜内)、吸入和玻璃体内施用(通过眼睛)。
当活性剂是止痛药时,施用的优选模式是通过可由医生或任何其他适合的医师确定的任何可接受的途径的局部施用。
脂质体系统的施用量以及由此的包封在其中的活性剂的量对于在目标位点实现活性剂的所期望的效果应当是有效的。例如,如果活性剂是药物,则脂质体系统的量应确定为使得在目标位点处包封在脂质体系统中的药物的量足以实现所期望的治疗效果。该所期望的治疗效果可包括但不限于改善与医疗状况有关的症状、防止与医疗状况有关的症状的显现、减缓医疗状况的进展状态、增强好转期的开始、防止或减缓由医疗状况所造成的不可逆的损害、减轻医疗状况的严重性、治愈医疗状况或防止其发展等。用脂质体系统治疗的医疗状况可以是任何可通过包封在本公开的脂质体中的活性剂治疗的状况。
此外,活性剂可以是诊断剂。为此,脂质体系统的量应当使得能够在目标位点令标记物成像。
脂质体系统的量将根据本领域中已知的那些考虑因素而确定,通常使用恰当设计的临床试验(剂量范围研究等)来确定。
本文中使用的形式“a”、“an”和“the”包括单数以及复数指代,除非上下文另有明确规定。例如,术语“a lipsome forming lipid”包括一种或多种能够形成脂质体的脂质。
此外,本文中使用的术语“包含(包括)”意指所述脂质体系统包含所列举的成分,即,形成脂质体的脂质、SPM和活性剂,但是并不排除其他要素,诸如生理上可接受的载体和赋形剂以及其他活性剂。术语“主要由……构成”用来限定脂质体系统包含所列举的要素但是不含其他可能对脂质体系统实现的效果具有重要意义的要素。“由……构成”应当意味着不含超过痕量的其他要素。由这些转换术语各自限定的实施方式均在本发明的范围内。
此外,所有的数值,例如,当提及构成包含所列举的要素的脂质体系统的要素的量或范围时,是由所述的值变化(+)或(-)至多20%,有时至多10%的近似值。应当理解的是,即使并不总是明确规定,所有的数值标示前均可加上术语“约”。
下面,将在以下根据本发明进行的试验的描述中对本发明举例说明。应当理解,这些实施例旨在描述的性质而非限制。显然,根据以上教导,能够实现这些实施例的许多修改和变化。因此,应理解的是,在所附权利要求的范围内,本发明可以以无数可能的方式另外实施,而非以下所具体描述的方式。
一些非限制性实例的说明
材料
药物:
盐酸布比卡因(BUP)USP XXIII(Orgamol,SA,Evionnaz,Switzerland)。
甲泼尼龙琥珀酸钠(MPS)(PHARMACIANV/SAPuurs-Belgium)。
脂质:
胆固醇(CHOL)(NE;Solvay Pharmaceuticals(Veenedaal,Netherlands))。
完全氢化的大豆卵磷脂(HSPC-100),100H,批次号50190(Phospholipids GmbH Nattermannallee 1*D 50829Koln,Germany)。HSPC 100是99.5纯度,即,包含的lysoPC和脂肪酸的量低于检测限。
完全氢化的大豆卵磷脂(HSPC)(Lipoid Gmbh,Ludwigshafen,Germany)。98.0纯度,即,包含少于1.2%的lysoPC和约1%的脂肪酸。
完全合成的N-棕榈酰基-D-赤式-鞘氨醇-1-磷酰胆碱,N-棕榈酰基鞘磷脂,(C16-SPM)>98%纯度,批号546701(Biolab Ltd.,POB 34038Jerusalem 91340)。
缓冲液:
硫酸铵(AS,MERCK);
醋酸钙一水合物(CA,Aldrich);
氯化钙二水合物(MERCK);
方法
装载药物的LMVV的制备
大多泡囊泡(LMVV)的制备
将具有所期望的摩尔比(关于成分及摩尔比的细节见表1)的脂质的粉末混合物溶解在60℃~65℃的乙醇中,然后添加至水溶液(硫酸铵(AS)、醋酸钙(CA)或其他缓冲液,如下所示)中以达到最终磷脂(PL)浓度为60mM且最终乙醇浓度为10%。
使得到的溶液于65℃混合30分钟以获得多层囊泡(MLV)。也可以使用制备MLV的替代方法(例如参见Barenholz & Crommelin,1994,In:Encyclopedia of Pharmaceutical Technology.(Swarbrick,J.and Boylan,J.C.,Eds.),Vol.9,Marcel Dekker,NY,1-39页)。
使用所期望的水相(例如,硫酸铵250mM或127mM,醋酸钙250mM或200mM,或所期望的缓冲液)由MLV制得LMVV,即,由MLV使其经历10个在液氮中冷冻然后在60℃的水浴中解冻的循环由此形成LMVV。在每一个循环时,将每1ml的分散的LMVV溶液在液氮中保持1分钟。例如,3ml的分散液在液氮中保持3分钟。
梯度生成
通过从脂质体外水相除去AS或CA(分别地)并以NaCl取代,由此生成跨膜AS或CA梯度。
三种方法用来生成pH梯度:
(i)离心法(Grant et al 2004,同上),用于AS和CA梯度,在1000g,温度4℃,持续5分钟。除去上清液,在4℃用盐水洗涤球粒。洗涤过程重复7次。
(ii)使用MWCO 12-14000Dalton渗析管的渗析法
(iii)使用具有中空纤维盒500000NMWC的Midjet台式系统(GE Healthcare Bio-Sciences Corp.Westborough,MA 01581USA)的渗滤法。
布比卡因的装载
使用两种替代性方法使LMVV装载布比卡因:
具有跨膜硫酸铵(AS)梯度的预制脂质体的主动装载(Haran等(1993),BBA,1151201-215),改进为适应LMVV(Grant等2004,同上);或装载入具有跨膜醋酸钙(CA)梯度的预制LMVV中(Clerc&Barenholz.(1995),BBA,1240,65-257,Avnir et al(2008)Arthritis & Rheumatism,58,119-129)。该方法利用BUP与阿霉素类似是两亲性弱碱这一事实。
(ii)使用BUP的水溶液通过脂质水合进行被动装载,以形成装载BUP的MLV,由该MLV如上所述制备装载BUP的LMVV(LMVV制备)。
在两种方法中,装载于60℃~65℃进行,该温度高于HSPC和C16SPM的固体有序相(SO)到液体无序相(LD)的相变温度范围(Tm)。注意,HSPC和C16SPM是此处描述的LMVV的形成脂质体的脂质。
对于主动装载,装载于60℃~65℃,使用处于蒸馏水中的4.5%、5.5%或5.7%的BUP(与(盐水=0.9%重量/体积)的渗透压摩尔浓度相当),或6%的BUP作为脂质体外部水相进行30分钟。0.5ml的量的湿LMVV球粒和2ml的BUP溶液用于主动装载。然后将混合物冷却至4℃一整夜。
BUP的被动装载通过用包含4.5%(231mOsm/kg)、或5.5%(285mOsm/kg)、或6%(301mOsm/kg)、或7%(346mOsm/kg)、或8%(373mOsm/kg)或10%(454mOsm/kg)BUP(W/V)的蒸馏水的水溶液于65℃将脂质乙醇溶液水合30分钟来进行。对于该过程,使用包含225mg磷脂和77mg CHOL的0.5ml脂质乙醇溶液。将该溶液与5ml的上述BUP水溶液中的一种混合。用10个冷冻解冻循环(如上所述)处理悬浮液,然后使其在冷室内(4℃~6℃)保持一整夜。
游离药物的除去
未包封的BUP通过用盐水洗涤(1ml脂质体/4ml盐水)然后在1000g于4℃~5℃将分散液离心5分钟而从LMVV除去。洗涤过程重复7次。用于替换CA梯度装载的脂质体的脂质体外部分的最终的介质(本文中称为“水性介质”)是PBS。PBS的使用优于盐水。AS和用于脂质体的被动装载的介质被替换,LMVV用非缓冲盐水洗涤。
LMVV浓缩至2%BUP的最终溶液用于被动装载和AS装载。对于CA梯度装载,使用具有1%BUP最终浓度的LMVV,因为这些LMVV的体积很大。这些浓度接近用于BUP注射的最高浓度。
针对在4℃保存期间BUP从脂质体中的释放率来测定由此形成的LMVV的稳定性。
在等渗条件下的布比卡因的装载
当提及等渗条件时,应当理解意指脂质体内水性核心和脂质体内外的外部介质的渗透压摩尔浓度基本相等或接近,均如上所限定。
测试了三种渗透压摩尔浓度:
(i)280mOsm/kg等渗于生理盐水(0.9%NaCl)条件:AS和CA梯度LMVV用约20mg/ml的AS或CA溶液制备,通过AS或CA溶液调节至280mOsm/kg。BUP装载浓度为在水中5.7%BUP,或在NaCl溶液中4.5%BUP以达到280mOsm/kg。
(ii)550mOsm/kg,等渗于250mM AS:用于生成AS梯度的洗涤溶液和用于在装载后除去游离药物的溶液是NaCl溶液,调节至550mOsm/kg。药物装载浓度为在NaCl溶液中4.5%BUP,或在蔗糖溶胶中4.5%BUP以达到550mOsm/kg。
(iii)650mOsm/kg,等渗于250mM CA。
布比卡因与脂质的比例
使用三种类型的BUP与脂质的体积比将BUP装载入AS-LMVV中。
(i)湿LMVV球粒:5.7%BUP∶脂质,1∶4体积/体积。
(ii)湿LMVV球粒:5.7%BUP∶脂质,1∶2体积/体积。
(iii)湿LMVV球粒:5.7%BUP∶脂质,1∶1体积/体积。
表1中提供了得到的LMVV的特征。
表1:BUP装载的LMVV
脂质/Chol比 | 装载方法 | 平均尺寸(μm) |
SPM/CHOL 6/4 | CA梯度 | 8.33±4.71 |
SPM/CHOL 6/4 | AS梯度 | 5.7±2.6 |
HSPC/CHOL 6/4 | 被动 | 6.0±3.2 |
此外,图1A和1B比较了根据在4℃(图1A)和37℃(图1B)的释放率测定的BUP-LMVV(通过类似的步骤制备,不过用H100)的装载稳定性。所述比较涉及的LMVV的不同脂质组成如下:
(i)HSPC(Lipoid GmbH的)和CHOL的先前的制剂,如美国6,162,46中描述的,其内容以引用的方式并入本文中;
(ii)HSPC-100(Phospholipids GmbH,Germany)和CHOL;
(iii)HSPC/C16SPM和CHOL;
(iv)HSPC 100/C16SPM和CHOL。
图1A和1B中提供的数据表明,HSPC/CHOL脂质体在4℃保存60天期间BUP的释放率最高,然后是HSPC100/CHOL脂质体的释放率。HSPC100/C16SPM/CHOL脂质体实现最低的释放率。在24小时内,在37℃的释放达到脂质体的BUP的60%~70%的水平-该情况下没有达到稳定水平。因此推断尽管在由HSPC100/C16SPM/CHOL构成的LMVV的情况中BUP的装载稍有降低(较低的BUP/PL比),但在4℃时该特定制剂的BUP的低释放率仍然使得这一组合是优选的制剂。此外还推断出,与不含SPM的同种制剂相比SPM的存在减少了泄漏。
检验了使用不同的装载技术、不同的活性剂(BUP或MPS,即“药物”)和不同的水性介质(洗涤缓冲液)的包含HSPC100/C16SPM/CHOL 3/3/4(所述的SUV或者LMVV)的脂质体的释放率。结果显示在表2中。
图2A和2B描述了BUP在4℃(图2A)和37℃(图2B)从具有与图1A~1B所用的相同脂质组成的LMVV中的释放率,其中BUP使用醋酸钙梯度主动装载。使用的SPM是C16SPM,与HSPC/SPM/CHOL和HSPC100/SPM/CHOL的比较也在4℃进行。
用于CA梯度装载的BUP/PL比低于AS梯度装载获得的比例。稳定性根据4℃的释放评估。该比例也比于37℃通过AS梯度主动装载的LMVV得到的比例低(即,更高的释放率)。所述释放率与通过AS梯度装载BUP的LMVV的释放率相似,不同之处在于在第一个10小时释放率更快,随后几乎达到稳定。由图2A明显可知,HSPC100LMVV具有比基于HSPC的LMVV更好的稳定性(即,在4℃的泄露较少),而且C16SPM对于改善稳定性的效果远大于两种HSPC制剂间的差异。C16SPM还使两种HSPC组合物的泄漏率降低了类似的程度。
图3A和3B描述了与图1A和1B所用相同的脂质组成的BUP装载的LMVV在4℃(图3A)和37℃(图3B)的释放率,其中LMVV被动装载BUP。使用的SPM是C16SPM,与HSPC/SPM/CHOL和HSPC100/SPM/CHOL的比较也在4℃进行。
通常,所用的3种脂质组成的被动装载的LMVV在4℃的释放率高于经由CA梯度主动装载的释放率,甚至与AS主动装载的LMVV相比也更高。
不过,LMVV脂质组成在4℃和37℃对于释放率的影响类似于(不过在量值上更大)对通过AS和CA梯度驱动的主动装载所观察到的,因此表明离子梯度驱动的主动装载增大了4℃时的装载稳定性。
LMVV的优化
制备具有不同的HSPC100∶C16SPM摩尔比的各种制剂以确定这两种成分的最优比例。表3A和3B中提供了各种制剂。
表3A:利用AS梯度通过主动装载形成的HSPC100/C16SPM/CHOL LMVV中的HSPC100∶C16SPM摩尔比的影响
表3B:利用CA梯度通过主动装载形成的HSPC100/C16SPM/CHOL LMVV中的HSPC100∶C16SPM摩尔比的影响
*HSPC,非HSPC100
此外,将预制的LMVV在4℃以2000g离心5分钟以得到压缩的LMVV。对于主动装载,将压缩的LMVV悬浮在各体积的5.7%的BUP中。表4中给出了BUP与LMVV或PL的体积比。
表4:5.7%的BUP与压缩的LMVV的体积比(在装载时)的被动装载的优化
体内实验
布比卡因装载的LMVV制剂:
在无菌条件下制备8种制剂(具体如下),然后在Clinical Microbiology Department,Hadassah Hospital,Jerusalem,Israel(以色列耶路撒冷的哈达萨医院的临床微生物科)测试其无菌度。在2℃~8℃的受控温度下,将脂质体由Jerusalem Israel运至Dr G.J.Grant,Department of Anesthesiology,NYU,School of Medicine,NYC,USA。运输前和运抵目的地之后的HPLC分析(未示出)表明在运输过程中未发生泄漏。
在体内实验前分析全部脂质体制剂的游离BUP和总BUP,并使这些制剂浓缩至达到2%(重量/重量)的BUP(脂质体制剂编号1、2、3、5、6、8)或1%(重量/重量)的BUP(脂质体制剂编号4、7)的水平。BUP通过主动装载(CA或AS梯度)或通过被动装载而装载入脂质体中。
表8:体内实验之前的脂质体组成分析
# | 脂质体* | 装载技术 | 脂质体种类 | 游离BUP% |
1 | H100/SPM/CHOL | AS梯度 | MLV | 3.88 |
2 | H100/SPM/CHOL | CA梯度 | MLV | 3.95 |
3 | H100/SPM/CHOL | AS梯度 | LMVV | 3.69 |
4 | H100/SPM/CHOL | CA梯度 | LMVV | 4.52 |
5 | H100/CHOL | AS梯度 | LMVV | 3.68 |
6 | HSPC/CHOL | AS梯度 | LMVV | 7.80 |
7 | H100/CHOL | CA梯度 | LMVV | 7.66 |
8 | H100/SPM/CHOL | 6%BUP被动装载 | LMVV | 1.90 |
*含有SPM,比例为3/3/4,不含SPM,比例为6/4
小鼠模型中的镇痛功效
使用电流发生器(S48型,Grass Instruments)在注射位点处对直接覆盖腹部的皮肤进行电刺激,由此进行镇痛测试。
在注射前对小鼠(雄性Swiss-Webster,26±3gr)进行测试以确定叫声阈值,然后注射包封BUP的脂质体,再测定镇痛作用的持续时间(G.J.Grant等,pharmaceutical research,第18卷,第3期,336-343,2001)。
主要的体内筛选研究的持续时间为2天,在使用两种不同的制剂#4(在表9A中称为PILOT)的注射体积的初步研究进行之后开始。
为了评估改变注射的体积和BUP浓度的影响,在每一组中,三只小鼠接受150μl的2%的制剂,三只小鼠接受300μL的1∶1稀释的2%制剂。
先前已经确定(Grant et al.2004,同上;Bolotin et al.2000,同上;和美国6,162,462)LMVV(GMV)包封的BUP在注射后提供了大约75分钟的镇痛效果。
各种制剂1~8在不同的BUP浓度、不同注射体积等的镇痛功效列于表9A~9C中。在这些表格中,数字评分“1”表示完全镇痛,当没有镇痛效果时给出数字评分“0”,当具有部分镇痛作用时为数值“10”。在以下表格中,数值“10”由“0.5”代替。
在表9A的以LMVV制剂#4注射的小鼠的结果中,两只注射300μl的小鼠和两只注射150μl的小鼠表示为“PILOT 1~4”。测试在注射后4小时、17小时和21小时进行。
图4A~4C、5A~5F、6和7显示了镇痛作用的持续时间。这些图的差别在于使用的制剂,图4和5使用表8中标示的各种制剂,图6和7使用HSPC100/C16SPM/CHOL(3/3/4)。体内结果显示,含有SPM的脂质体具有比不含SPM的脂质体明显更强的镇痛效果。这些结果明确显示,与现有技术的制剂[Grant et al.2004,同上]相比,在脂质体内包含SPM并未降低系统的镇痛效果。
表9A:不同BUP浓度(以脂质体-BUP施用)和不同注射体积的镇痛作用的持续时间
2007年8月9日
1表示小鼠处于镇痛作用下,0表示小鼠缺乏镇痛作用;10表示小鼠处于部分镇痛作用下
注意:在2007年8月8日,我们对四只动物注射了LMVV制剂#4(2只为300μl,2只为150μl);测试在4小时、17小时和21小时进行。这些在下方的表格中标记为“PILOT”。
表9B:不同BUP浓度和不同注射体积的镇痛效果
2007年8月13日
标准布比卡因(对照)1=镇痛作用;0=无镇痛作用;10=部分镇痛作用
脂质体(LMVV)布比卡因实验研究
表9C:不同BUP浓度和不同注射体积的镇痛效果
2007年8月13日
标准布比卡因(对照)1=镇痛作用;0=无镇痛作用;10=部分镇痛作用
脂质体(LMVV)布比卡因实验研究
如上所示,对表格引入数字评分以评估各种脂质体制剂在体内表现的镇痛效果:对于每个时间段(例如4小时、8小时等),如果完全镇痛则给出数字评分1;如果部分镇痛(不完全)则给出10或0.5;0则是无镇痛作用。分别计算每一亚组的平均值(即,1%300μl,2%150μl)。
结果显示,其中BUP通过CA梯度主动装载入LMVV中且等渗水性介质是盐水的制剂4获得了最佳镇痛效果,尽管各制剂间的差别并不显著,但与作为参比脂质体GMV制剂的BUP制剂[Grant et al.2004,同上;Bolotin et al.2000,同上;和美国6,162,462]相比镇痛作用有10倍的增强。
在单独的试验中,评估重复注射布比卡因装载的LMVV对小鼠的影响。结果显示(数据未示出)第二次(重复)注射后获得的镇痛作用与在第一次注射时获得的相同,没有观察到任何副作用。由此推断,镇痛作用可通过重复注射而延长,第二次注射后的镇痛时间至少与在第一次注射后获得的时间相同。
Claims (54)
1.一种脂质体系统,所述脂质体系统包括水性介质,在所述水性介质中分散有脂质体,所述脂质体在其脂质体内水性区室中包封至少一种活性剂,所述水性介质与所述脂质体内水性区室处于等渗平衡,所述脂质体具有包含形成脂质体的脂质的膜,所述形成脂质体的脂质中的至少一种是鞘磷脂(SPM),所述脂质体系统相比于不含SPM的同种脂质体具有更大的稳定性。
2.如权利要求1所述的脂质体系统,所述脂质体系统在长期保存期间稳定,所述稳定性的特征在于在所述保存之后所述水性介质中存在不超过30%的所述至少一种活性剂。
3.如权利要求2所述的脂质体系统,其中,在所述保存之后所述水性介质中存在不超过10%的所述至少一种活性剂。
4.如权利要求1~3中任一项所述的脂质体系统,其中,所述SPM是C12~C24SPM。
5.如权利要求1~3中任一项所述的脂质体系统,其中,所述SPM是C16SPM。
6.如权利要求1~5中任一项所述的脂质体系统,其中,所述SPM是合成或半合成的SPM。
7.如权利要求1~6中任一项所述的脂质体系统,其中,所述膜包含的SPM的量为所述膜中全部磷脂的25摩尔%~75摩尔%。
8.如权利要求1~7中任一项所述的脂质体系统,所述脂质体系统包含的除SPM之外的所述形成脂质体的脂质与所述SPM的摩尔比为1∶1~2∶1。
9.如权利要求1~8中任一项所述的脂质体系统,其中,所述形成脂质体的脂质共同具有的固体有序相到液体无序相的相变温度(Tm)高于37℃。
10.如权利要求1~9中任一项所述的脂质体系统,其中,所述膜包含固醇。
11.如权利要求10所述的脂质体系统,其中,所述固醇是胆固醇。
12.如权利要求1~11中任一项所述的脂质体系统,其中,所述脂质体是多层囊泡(MLV)或多泡囊泡(MVV)。
13.如权利要求12所述的脂质体系统,其中,所述MVV是直径为200nm~25μm的大MVV(LMVV)。
14.如权利要求1~13中任一项所述的脂质体系统,其中,所述水性介质和所述脂质体内水性区室具有的渗透压摩尔浓度为50mOsm/kg~600mOsm/kg。
15.如权利要求14所述的脂质体系统,其中,所述水性介质和所述脂质体内水性区室具有的渗透压摩尔浓度为275mOsm/kg~550mOsm/kg。
16.如权利要求1~15中任一项所述的脂质体系统,其中,所述水性介质和所述脂质体内水性区室具有的渗透压摩尔浓度差为不超过50mOsmole。
17.如权利要求1~16中任一项所述的脂质体系统,其中,所述水性介质包含一定量的游离态的所述至少一种活性剂。
18.如权利要求1~17中任一项所述的脂质体系统,其中,所述水性介质是生理上能够接受的介质。
19.如权利要求1~18中任一项所述的脂质体系统,其中,所述活性剂是两亲性化合物。
20.如权利要求19所述的脂质体系统,其中,所述两亲性化合物是止痛药。
21.如权利要求20所述的脂质体系统,其中,所述止痛药是选自由苯坐卡因、氯普鲁卡因、可卡因、环美卡因、二甲卡因、丙氧卡因、普鲁卡因、丙美卡因、丁卡因、阿替卡因、布比卡因、卡铁卡因、辛可卡因、依替卡因、左布比卡因、利多卡因、甲哌卡因、哌罗卡因、丙胺卡因、罗哌卡因、三甲卡因、蛤蚌毒素和河豚毒素组成的组中的局部止痛药。
22.如权利要求21所述的脂质体系统,其中,所述止痛药选自由布比卡因、利多卡因、罗哌卡因、左布比卡因、普鲁卡因、氯普鲁卡因、苯坐卡因、依替卡因、甲哌卡因、丙胺卡因、ciprocaine、丁卡因、地布卡因、庚卡因、美索卡因、丙泮卡因、卡比唑卡因和布他卡因组成的组。
23.如权利要求1~22中任一项所述的脂质体系统,其中,所述活性剂与所述形成脂质体的脂质的摩尔比为高于0.5摩尔/摩尔。
24.如权利要求1~23中任一项所述的脂质体系统,其中,所述长期保存包括在4℃保存至少3个月的时间。
25.一种保存脂质体的方法,所述脂质体在其脂质体内水性区室中包封至少一种活性剂,所述脂质体具有包含形成脂质体的脂质的膜,至少一种形成脂质体的脂质是鞘磷脂(SPM),所述方法包括:形成脂质体系统,在所述脂质体系统中所述脂质体分散在水性介质中,所述水性介质与所述脂质体的脂质体内水性区室处于等渗平衡;和保存所述脂质体系统,所述脂质体系统相比于不含SPM的同种脂质体具有更大的稳定性。
26.如权利要求25所述的方法,其中,在所述保存之后所述水性介质中存在不超过30%的所述至少一种活性剂。
27.如权利要求26所述的方法,其中,在所述保存之后所述水性介质中存在不超过10%的所述至少一种活性剂。
28.如权利要求25~27中任一项所述的方法,所述方法包括将所述活性剂装载入所述脂质体内水性区室中,所述装载包括主动装载或被动装载。
29.如权利要求28所述的方法,其中,所述活性剂是两亲性化合物,利用pH梯度将所述两亲性化合物主动装载到脂质体的所述脂质体内水性区室中。
30.如权利要求29所述的方法,其中,所述pH梯度是硫酸铵或醋酸钙梯度。
31.如权利要求25~30中任一项所述的方法,其中,所述SPM是C12~C24SPM。
32.如权利要求31所述的方法,其中,所述SPM是C16SPM。
33.如权利要求25~32中任一项所述的方法,其中,所述SPM是合成或半合成的SPM。
34.如权利要求25~33中任一项所述的方法,其中,所述膜包含的SPM的量为所述膜中全部脂质的25摩尔%~75摩尔%。
35.如权利要求25~34中任一项所述的方法,所述方法包括使除SPM之外的所述形成脂质体的脂质与所述SPM的摩尔比为1∶1~2∶1。
36.如权利要求25~35中任一项所述的方法,其中,所述形成脂质体的脂质共同具有的固体有序相到液体无序相的相变温度(Tm)高于37℃。
37.如权利要求25~26中任一项所述的方法,其中,所述脂质体膜包含固醇。
38.如权利要求37所述的方法,其中,所述固醇是胆固醇。
39.如权利要求25~37中任一项所述的方法,所述方法包括选自多层囊泡(MLV)或多泡囊泡(MVV)的脂质体。
40.如权利要求39所述的方法,其中,所述MVV是直径为200nm~25μm的大MVV(LMVV)。
41.如权利要求25~40中任一项所述的方法,其中,所述水性介质和所述脂质体内水性区室具有的渗透压摩尔浓度为50mOsm/kg~600mOsm/kg。
42.如权利要求41所述的方法,其中,所述水性介质和所述脂质体内水性区室具有的渗透压摩尔浓度为275mOsm/kg~295mOsm/kg。
43.如权利要求25~42中任一项所述的方法,其中,所述水性介质和所述脂质体内水性区室具有的渗透压摩尔浓度差为不超过50mOsmole。
44.如权利要求25~43中任一项所述的方法,所述方法包含一定量的游离态的所述至少一种活性剂。
45.如权利要求25~44中任一项所述的方法,其中,所述水性介质是生理上能够接受的介质。
46.如权利要求25~45中任一项所述的方法,其中,所述两亲性试剂是止痛药。
47.如权利要求46所述的方法,其中,所述止痛药是选自由苯坐卡因、氯普鲁卡因、可卡因、环美卡因、二甲卡因、丙氧卡因、普鲁卡因、丙美卡因、丁卡因、阿替卡因、布比卡因、卡铁卡因、辛可卡因、依替卡因、左布比卡因、利多卡因、甲哌卡因、哌罗卡因、丙胺卡因、罗哌卡因、三甲卡因、蛤蚌毒素和河豚毒素组成的组中的局部止痛药。
48.如权利要求47所述的方法,其中,所述止痛药选自由布比卡因、利多卡因、罗哌卡因、左布比卡因、普鲁卡因、氯普鲁卡因、苯坐卡因、依替卡因、甲哌卡因、丙胺卡因、ciprocaine、丁卡因、地布卡因、庚卡因、美索卡因、丙泮卡因、卡比唑卡因和布他卡因组成的组。
49.如权利要求25~48中任一项所述的方法,其中,在制备的所述脂质体中所述活性剂与所述形成脂质体的脂质的摩尔比为高于0.5摩尔/摩尔。
50.如权利要求25~49中任一项所述的方法,所述方法包括在4℃保存所述脂质体至少3个月的时间。
51.权利要求1~24中任一项所述的脂质体系统用于制备药物或诊断组合物的应用。
52.权利要求1~24中任一项所述的脂质体系统,所述脂质体系统用于医疗状况的治疗或用于医疗状况的诊断。
53.一种药物或诊断组合物,所述药物或诊断组合物包含权利要求1~24中任一项所述的脂质体系统,以及生理上能够接受的载体。
54.一种用于治疗或诊断医疗状况的方法,所述方法包括向对象施用一定量的权利要求1~2中任一项所述的脂质体系统或权利要求53所述的组合物。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9326953B2 (en) | 2003-04-25 | 2016-05-03 | The Penn State Research Foundation | Method and system for systemic delivery of growth arresting, lipid-derived bioactive compounds |
Families Citing this family (30)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2739822A1 (en) | 2008-10-07 | 2010-04-15 | Yechezkel Barenholz | Liposomal systems comprising sphingomyelin |
US8957207B2 (en) | 2009-03-24 | 2015-02-17 | Proteus S.A. | Methods for producing phycotoxins |
WO2010117996A1 (en) * | 2009-04-08 | 2010-10-14 | Children's Medical Center Corporation | Prolonged duration local anesthesia with minimal toxicity |
JP5813011B2 (ja) * | 2010-12-27 | 2015-11-17 | テルモ株式会社 | リポソーム組成物およびその製造方法 |
TWI483747B (zh) * | 2012-05-29 | 2015-05-11 | Univ Nat Chiao Tung | 口服式藥物載體及其製備方法 |
EP2948132B1 (en) | 2013-01-24 | 2020-08-19 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Method for diagnosing or treating tumors using sphingomyelin containing liposomes |
US9708354B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-07-18 | Cerenis Therapeutics Holding Sa | Methods for the synthesis of sphingomyelins and dihydrosphingomyelins |
US20140316154A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-10-23 | Cerenis Therapeutics Holding Sa | Methods for the synthesis of sphingomyelins and dihydrosphingomyelins |
NZ710890A (en) | 2013-03-15 | 2016-11-25 | Childrens Medical Ct Corp | Neosaxitoxin combination formulations for prolonged local anesthesia |
KR101503492B1 (ko) * | 2013-07-03 | 2015-03-19 | 전북대학교산학협력단 | 지질 및 리소좀 효소를 포함하는 리포좀 캡슐 및 그 제조방법 |
AU2014340137B2 (en) * | 2013-10-22 | 2020-02-13 | Lipella Pharmaceuticals Inc. | Delivery of agents using metastable liposomes |
US20160340659A1 (en) | 2014-01-30 | 2016-11-24 | Yissum Research And Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Actin binding peptides and compositions comprising same for inhibiting angiogenesis and treating medical conditions associated with same |
US9439983B1 (en) * | 2014-10-24 | 2016-09-13 | Verily Life Sciences Llc | Method for integrating nanoparticles as part of a hydrogel matrix |
US10213284B2 (en) | 2015-06-30 | 2019-02-26 | Tela Bio, Inc. | Corner-lock stitch patterns |
WO2017034418A1 (en) * | 2015-08-21 | 2017-03-02 | Reynolds John Noble James | Acoustic driven drug delivery systems |
US9700397B2 (en) * | 2015-11-30 | 2017-07-11 | Metal Industries Research & Development Centre | Implant carrier, mixing pot, and implant carrier assembly |
US10202567B2 (en) * | 2016-01-21 | 2019-02-12 | Lawrence Livermore National Security, Llc | Bioreactors including enzyme-embedded multicomponent polymers |
EP3448308A4 (en) | 2016-04-26 | 2020-01-08 | Tela Bio, Inc. | HERNIA REPAIR GRAFTS WITH ANTI-GRIP BARRIERS |
IL246378A0 (en) | 2016-06-21 | 2016-11-30 | Technion Res & Dev Foundation | A hybrid matrix of polymers that adhere to the mucosa and a lipidic drug release system for the treatment of oral cancer |
CN107496358A (zh) * | 2017-09-06 | 2017-12-22 | 苏州大学 | 一种脂质体增强型水凝胶及其应用 |
WO2019173792A1 (en) | 2018-03-09 | 2019-09-12 | Tela Bio, Inc. | Surgical repair graft |
AU2019266171B2 (en) * | 2018-05-07 | 2021-10-28 | Pharmosa Biopharm Inc. | Pharmaceutical composition for controlled release of treprostinil |
CN109535448B (zh) * | 2018-11-07 | 2021-06-18 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种载有藻胆蛋白的双网络水凝胶的制备方法 |
EP3934575A4 (en) | 2019-03-08 | 2022-12-28 | Tela Bio, Inc. | TEXTURED MEDICAL TEXTILES |
WO2020206314A1 (en) * | 2019-04-03 | 2020-10-08 | New York University | Liposomes encapsulating adenosine |
TWI712403B (zh) * | 2019-08-26 | 2020-12-11 | 長庚大學 | 水膠敷材 |
US11033495B1 (en) | 2021-01-22 | 2021-06-15 | Pacira Pharmaceuticals, Inc. | Manufacturing of bupivacaine multivesicular liposomes |
US11357727B1 (en) | 2021-01-22 | 2022-06-14 | Pacira Pharmaceuticals, Inc. | Manufacturing of bupivacaine multivesicular liposomes |
US11278494B1 (en) | 2021-01-22 | 2022-03-22 | Pacira Pharmaceuticals, Inc. | Manufacturing of bupivacaine multivesicular liposomes |
WO2022159564A1 (en) * | 2021-01-22 | 2022-07-28 | Pacira Pharmaceuticals, Inc. | Manufacturing of bupivacaine multivesicular liposomes |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4837028A (en) * | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US6162462A (en) * | 1998-08-12 | 2000-12-19 | New York University | Liposomal bupivacaine compositions prepared using an ammonium sulfate gradient |
WO2003000227A2 (en) * | 2001-06-25 | 2003-01-03 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | A method for preparation of vesicles loaded with biological material and different uses thereof |
Family Cites Families (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995013796A1 (en) * | 1993-11-16 | 1995-05-26 | Depotech Corporation | Vesicles with controlled release of actives |
US5736155A (en) | 1984-08-08 | 1998-04-07 | The Liposome Company, Inc. | Encapsulation of antineoplastic agents in liposomes |
US4921757A (en) * | 1985-04-26 | 1990-05-01 | Massachusetts Institute Of Technology | System for delayed and pulsed release of biologically active substances |
US4900556A (en) * | 1985-04-26 | 1990-02-13 | Massachusetts Institute Of Technology | System for delayed and pulsed release of biologically active substances |
US4812314A (en) | 1986-02-24 | 1989-03-14 | Yissum Research & Dev. Co. Of The Hebrew Univ. Of Jerusalem And Hadassah Medical Organization | Lipid replacement therapy |
US4877619A (en) * | 1986-08-25 | 1989-10-31 | Vestar, Inc. | Liposomal vesicles for intraperitoneal administration of therapeutic agents |
MX9203808A (es) | 1987-03-05 | 1992-07-01 | Liposome Co Inc | Formulaciones de alto contenido de medicamento: lipido, de agentes liposomicos-antineoplasticos. |
US5009819A (en) * | 1987-11-12 | 1991-04-23 | The Liposome Company, Inc. | Taste moderating composition |
IL91664A (en) | 1988-09-28 | 1993-05-13 | Yissum Res Dev Co | Ammonium transmembrane gradient system for efficient loading of liposomes with amphipathic drugs and their controlled release |
US20020150539A1 (en) * | 1989-12-22 | 2002-10-17 | Unger Evan C. | Ultrasound imaging and treatment |
AU4155696A (en) * | 1994-11-09 | 1996-06-06 | Regents Of The University Of California, The | Immunoliposomes that optimize internalization into target cells |
US5800833A (en) | 1995-02-27 | 1998-09-01 | University Of British Columbia | Method for loading lipid vesicles |
US6395302B1 (en) * | 1996-11-19 | 2002-05-28 | Octoplus B.V. | Method for the preparation of microspheres which contain colloidal systems |
ATE535232T1 (de) | 1997-09-18 | 2011-12-15 | Pacira Pharmaceuticals Inc | Retardierte freisetzung liposomaler anesthetischer zusammensetzungen |
AU757686B2 (en) * | 1998-03-31 | 2003-03-06 | New York University | Liposomal bupivacaine compositions and methods of preparation |
TW476788B (en) * | 1998-04-08 | 2002-02-21 | Kimberly Clark Co | A cleanser and the making process thereof |
GB9813100D0 (en) * | 1998-06-18 | 1998-08-19 | Secr Defence | Method of forming liposomes |
WO2000012536A2 (en) * | 1998-08-31 | 2000-03-09 | Gryphon Sciences | Lipid matrix-assisted chemical ligation and synthesis of membrane polypeptides |
DE19852928C1 (de) * | 1998-11-17 | 2000-08-03 | Steffen Panzner | Strukturen in Form von Hohlkugeln |
EP1429726A2 (en) * | 2001-09-06 | 2004-06-23 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | A method for preparing liposome formulations with a predefined release profile |
CA2383259A1 (en) * | 2002-04-23 | 2003-10-23 | Celator Technologies Inc. | Synergistic compositions |
US20040224012A1 (en) * | 2001-10-05 | 2004-11-11 | Pichit Suvanprakorn | Topical application and methods for administration of active agents using liposome macro-beads |
WO2004018066A2 (en) * | 2002-05-17 | 2004-03-04 | The Penn State Research Foundation | Aqueous two-phase systems for particle manipulation and encapsulation within microscopic volumes |
US20030235610A1 (en) * | 2002-06-21 | 2003-12-25 | Piedmont Pharmaceuticals, Llc | Liposomes containing biologically active compounds |
GB0312309D0 (en) * | 2003-05-29 | 2003-07-02 | Gaslini Children S Hospital G | Targeted liposome |
EP1643972A4 (en) | 2003-06-27 | 2010-01-20 | Smithkline Beecham Corp | STABILIZED LIPOSOMAL TOPOTECAN COMPOSITION AND METHOD |
US20060141021A1 (en) * | 2004-12-29 | 2006-06-29 | Industrial Technology Research | Polymeric microspheres and method for preparing the same |
US20060239925A1 (en) * | 2005-04-21 | 2006-10-26 | Konica Minolta Medical & Graphic, Inc. | Method of manufacturing pharmaceutical preparation containing liposomes |
US8268347B1 (en) * | 2006-10-24 | 2012-09-18 | Aradigm Corporation | Dual action, inhaled formulations providing both an immediate and sustained release profile |
WO2009038779A2 (en) | 2007-09-19 | 2009-03-26 | University Of Tennessee Research Foundation | Methods and compositions for inhibiting undesirable cellular proliferation by targeted liposome delivery of active agents |
CA2739822A1 (en) | 2008-10-07 | 2010-04-15 | Yechezkel Barenholz | Liposomal systems comprising sphingomyelin |
US9775803B2 (en) * | 2011-10-19 | 2017-10-03 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Liposome comprising elastin-like polypeptide and tumor cell targeting material and use thereof |
US9949849B2 (en) * | 2013-05-14 | 2018-04-24 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Medial-lateral stabilizing prosthetic ankle/foot for angled and rough ground gait |
US9614864B2 (en) * | 2014-10-09 | 2017-04-04 | Bank Of America Corporation | Exposure of an apparatus to a technical hazard |
-
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2023
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4837028A (en) * | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US6162462A (en) * | 1998-08-12 | 2000-12-19 | New York University | Liposomal bupivacaine compositions prepared using an ammonium sulfate gradient |
WO2003000227A2 (en) * | 2001-06-25 | 2003-01-03 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | A method for preparation of vesicles loaded with biological material and different uses thereof |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
RACHEL HERTZ ET AL: "PERMEABILITY AND INTEGRITY PROPERTIES OF LECITHIN-SPHINGOMYELIN LIPOSOMES", 《CHEMISTRY AND PHYSICS OF LIPIDS》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9326953B2 (en) | 2003-04-25 | 2016-05-03 | The Penn State Research Foundation | Method and system for systemic delivery of growth arresting, lipid-derived bioactive compounds |
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