CN102216302A

CN102216302A - Akt和p70 s6激酶抑制剂

Info

Publication number: CN102216302A
Application number: CN2009801449532A
Authority: CN
Inventors: R·D·达利; S·约瑟夫; T·A·谢泼德
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2008-11-11
Filing date: 2009-11-03
Publication date: 2011-10-12
Anticipated expiration: 2029-11-03
Also published as: HK1158203A1; UA100190C2; EP2358710B1; CO6382114A2; MX2011005000A; ES2391704T3; CY1113409T1; IL211940A; JP2012508274A; ECSP11011048A; PE20110807A1; US8148387B2; NZ592062A; JO2822B1; CN102216302B; AR074072A1; RS52520B; KR20110074578A; MA32776B1; CA2743019C

Abstract

本发明提供下式（I）的AKT和p70S6激酶抑制剂：

Description

AKT和P70 S6激酶抑制剂

发明背景

磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/AKT/哺乳动物雷帕霉素靶（mTOR）路径包括在细胞生长和存活的控制中至关重要的许多信号点。AKT，也称作蛋白激酶B，是在这种路径中具有关键作用的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。PI3K介导AKT的活化。PI3K产生结合到AKT上的磷脂。在结合后，AKT补充到血浆膜中并通过磷酸化活化。AKT活化和信号传导促进细胞存活、生长和增殖。在多种癌症中涉及提高的AKT活化。P70 S6激酶是丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，其是PI3K/AKT/mTOR信号通路的下游效应子。P70 S6激酶将细胞中的核糖体蛋白S6磷酸化并响应促有丝分裂的刺激调节核糖体生物发生、细胞生长和细胞周期进程。在许多实体瘤中普遍激活P70 S6激酶。

在WO 2008/075109中公开了一系列具有AKT抑制活性的取代哌啶化合物。这些化合物据公开用于治疗包括或源自异常细胞生长或异常停止的细胞死亡的疾病或病症，包括癌症。仍然需要提供可用于治疗增殖性疾病，如癌症的替代性AKT抑制剂。本发明提供替代性AKT抑制剂。本发明的优选化合物是比本领域中已知的那些更有力的AKT抑制剂。

另外，需要提供可用于治疗增殖性疾病，如癌症的替代性p70 S6激酶抑制剂。本发明提供替代性p70 S6激酶抑制剂。本发明的优选化合物是比本领域中已知的那些更有力的p70 S6激酶抑制剂。

本发明的优选化合物是AKT和p70 S6激酶的抑制剂。本发明的更优选化合物是比已知AKT抑制剂更有力的AKT抑制剂和比已知p70 S6激酶抑制剂更有力的p70 S6激酶抑制剂。

本发明的某些化合物具有比本领域中已知的AKT和/或p70 S6激酶抑制剂低的hERG活性。

发明概述

本发明提供下式的化合物或其可药用盐：

Figure DEST_PATH_29446DEST_PATH_IMAGE001

其中：

X是F、Cl、CF₃、CN或H；

Y是F、H或Cl；

R¹和R²独立地为H、C₁-C₄烷基或CH₂CH₂OH；或R¹和R²与和它们相连的氮原子一起形成任选在2-位被羟甲基或在3-位被羟基取代的吡咯烷环，或在3-位被羟基取代的氮杂环丁烷环；

R³是H或OH；

R⁶是H；或R⁶和R²与和R²相连的氮原子一起形成哌啶环；

R⁷和R⁸独立地为H或CH₃；或R⁷和R¹与和R¹相连的氮原子一起形成吡咯烷环；

W是CR⁴R⁵、NR¹⁰、C=O或C=CH-R⁹；

R⁴和R⁵独立地为H、CH₃或CH₂CH₃；R⁴和R⁵与和它们相连的碳原子一起形成环戊烷环；或R⁴或R⁵之一是苄基，另一是H；

R⁹是2-噻唑基、4-吡啶基、2-甲基-4-噻唑基、2-咪唑基、5-噻唑基或4-咪唑基；且

R¹⁰是H或C₁-C₃烷基。

本发明提供包含本发明的化合物或其可药用盐,和可药用载体、稀释剂或赋形剂的药物制剂。

本发明提供用于治疗的本发明的化合物或其可药用盐。

本发明提供用于治疗多形性成胶质细胞瘤的本发明的化合物或其可药用盐。本发明进一步提供治疗哺乳动物的多形性成胶质细胞瘤的方法，包括给予需要这种治疗的哺乳动物有效量的本发明的化合物或其可药用盐。另外，本发明提供本发明的化合物或其可药用盐用于制造多形性成胶质细胞瘤的治疗药剂的用途。此外，本发明提供包含本发明的化合物或其可药用盐的用于治疗的药物组合物，并提供包含本发明的化合物或其可药用盐的用于治疗多形性成胶质细胞瘤的药物组合物。

发明详述

上式中使用的一般化学术语具有它们的通常含义。例如，术语“C₁-C₄烷基”是指含1至4个碳原子的直链或支链的、一价、饱和脂族链，并包括，但不限于，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。同样地，术语“C₁-C₃烷基”包括甲基、乙基和异丙基。甲基和乙基是优选烷基。

本发明的化合物是碱，因此与许多有机和无机酸任一反应形成可药用盐，且本发明包括式I的化合物的可药用盐。本文所用的术语“可药用盐”是指对活体基本无毒的式I的化合物的盐。此类盐包括Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977)中列举的可药用盐，它们是技术人员已知的。游离碱和盐酸盐、甲苯磺酸盐、半琥珀酸盐和三三氟甲烷磺酸盐是优选的。游离碱尤其优选。

本发明的一些化合物具有一个或多个手性中心并可以以各种立体异构构型存在。由于这些手性中心，本发明的化合物以外消旋物、对映异构体混合物和以独立的对映异构体以及非对映体和非对映体混合物的形式存在。所有这样的外消旋物、对映异构体和非对映体在本发明的范围内。本领域普通技术人员可利用公知技术和方法，如J. Jacques等人, "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981，和E.L. Eliel和S.H. Wilen,” Stereochemistry of Organic Compounds”, (Wiley-Interscience 1994)，和1998年4月29日公开的欧洲专利申请No. EP-A-838448公开的那些制备式I的化合物的具体立体异构体和对映异构体。拆分的实例包括重结晶技术或手性色谱法。

技术人员还会认识到，式I的化合物以互变异构体形式存在，例如：

Figure DEST_PATH_258171DEST_PATH_IMAGE002

尽管互变异构体在结构上不同，但技术人员会认识到它们平衡存在并在普通条件下容易和快速地相互转化。（参见，March, Advanced Organic Chemistry, 第三版, Wiley Interscience, New York, New York (1985), 第66-70页；和Allinger, Organic Chemistry, 第二版, Worth Publishers, New York, New York, (1976), 第173页）。因此，以单一互变异构体形式表示式I的化合物也考虑了独立的两种互变异构体形式及其混合物。

本文中公开的化合物使用Chem Draw Ultra version v10或Chem Bio Viz Ultra version v11内的命名程序命名。

在另一实施方案中，提供下式的化合物：

Figure DEST_PATH_100225DEST_PATH_IMAGE003

其中：

X是F、Cl、CF₃、CN、H或CHF₂；

Y是F、H或Cl；

R³是H或OH；

R⁶是H；或R⁶和R²与和R²相连的氮原子一起形成哌啶环；

R⁷和R⁸独立地为H或CH₃；或R⁷和R¹与和R¹相连的氮原子一起形成吡咯烷环或哌啶环；

W是CR⁴R⁵、NR¹⁰、C=O或C=CH-R⁹；

R¹⁰是H或C₁-C₃烷基；或其可药用盐。

在一个实施方案中，本发明包括Y是F的式I的化合物。

在另一实施方案中，本发明包括X是Cl、CF₃或F的式I的化合物。特别地，X是CF₃。

在另一实施方案中，本发明包括W是CR⁴R⁵、NR¹⁰或C=CH-R⁹的式I的化合物。

在另一实施方案中，本发明包括W是CR⁴R⁵的式I的化合物。特别地，R⁴和R⁵独立地为H或CH₃；或R⁴是H且R⁵是CH₂CH₃；或R⁴和R⁵与和它们相连的碳原子一起形成环戊烷环。更特别地，R⁴和R⁵独立地为H或CH₃；或R⁴和R⁵与和它们相连的碳原子一起形成环戊烷环。更特别地，R⁴和R⁵独立地为H或CH₃。再更特别地，R⁴和R⁵都是H。

在另一实施方案中，本发明包括W是NR¹⁰的式I的化合物。特别地，R¹⁰是甲基或乙基。

在另一实施方案中，本发明包括W是C=CH-R⁹的式I的化合物。特别地，R⁹是5-噻唑基。

在另一实施方案中，本发明包括R¹和R²独立地为H、C₁-C₄烷基或CH₂CH₂OH；或R¹和R²与和它们相连的氮原子一起形成任选在2-位被羟甲基或在3-位被羟基取代的吡咯烷环的式I的化合物。特别地，R¹和R²独立地为H或CH₃；或R¹和R²与和它们相连的氮原子一起形成吡咯烷环。更特别地，R¹和R²都是CH₃。

在另一实施方案中，本发明包括R³是H的式I的化合物。

在另一实施方案中，本发明包括R⁶是H的式I的化合物。

在另一实施方案中，本发明包括R⁷是H；或R⁷和R¹与和R¹相连的氮原子一起形成吡咯烷环的式I的化合物。特别地，R⁷是H。

在再一实施方案中，本发明包括R⁸是H的式I的化合物。

在另一实施方案中，本发明包括Y是F且X是Cl、CF₃或F的式I的化合物。特别地，Y是F；X是Cl、CF₃或F；且W是CR⁴R⁵。更特别地，Y是F；X是Cl、CF₃或F；W是CR⁴R⁵；且R⁴和R⁵独立地为H或CH₃，或R⁴和R⁵与和它们相连的碳原子一起形成环戊烷环。再更特别地，Y是F；X是Cl、CF₃或F；W是CR⁴R⁵；R⁴和R⁵独立地为H或CH₃，或R⁴和R⁵与和它们相连的碳原子一起形成环戊烷环；且R¹和R²独立地为H、C₁-C₄烷基或CH₂CH₂OH，或R¹和R²与和它们相连的氮原子一起形成任选在2-位被羟甲基或在3-位被羟基取代的吡咯烷环。

在另一实施方案中，本发明包括Y是F；X是Cl、CF₃或F；且W是NR¹⁰的式I的化合物。特别地，Y是F；X是Cl、CF₃或F；W是NR¹⁰；且R¹和R²独立地为H、C₁-C₄烷基或CH₂CH₂OH，或R¹和R²与和它们相连的氮原子一起形成任选在2-位被羟甲基或在3-位被羟基取代的吡咯烷环。

在另一实施方案中，本发明包括Y是F；X是Cl、CF₃或F；且W是C=CH-R⁹的式I的化合物。特别地，Y是F；X是Cl、CF₃或F；W是C=CH-R⁹；且R⁹是5-噻唑基。更特别地，Y是F；X是Cl、CF₃或F；W是C=CH-R⁹；R⁹是5-噻唑基；且R¹和R²独立地为H、C₁-C₄烷基或CH₂CH₂OH，或R¹和R²与和它们相连的氮原子一起形成任选在2-位被羟甲基或在3-位被羟基取代的吡咯烷环。

在再一实施方案中，本发明的化合物包括下式的那些或其可药用盐：

其中：

X是F、Cl或CF₃ _；

R¹和R²独立地为H、C₁-C₄烷基或CH₂CH₂OH；或R¹和R²与和它们相连的氮原子一起形成任选在2-位被羟甲基或在3-位被羟基取代的吡咯烷环；

R³是H或OH；

R⁶是H；或R⁶和R²与和R²相连的氮原子一起形成哌啶环；

W是CR⁴R⁵、NR¹⁰或C=CH-R⁹；

R⁴和R⁵独立地为H或CH₃；或R⁴和R⁵与和它们相连的碳原子一起形成环戊烷环；

R⁹是5-噻唑基；且

R¹⁰是H或C₁-C₃烷基。

在一个实施方案中，本发明包括X是CF₃的式II的化合物。

在另一实施方案中，本发明包括W是CR⁴R⁵且R⁴和R⁵独立地为H或CH₃的式II的化合物。特别地，R⁴和R⁵都是H。

在另一实施方案中，本发明包括W是NR¹⁰且R¹⁰是甲基或乙基的式II的化合物。

在另一实施方案中，本发明包括R¹和R²独立地为H或CH₃；或R¹和R²与和它们相连的氮原子一起形成吡咯烷环的式II的化合物。特别地，R¹和R²都是CH₃。

在另一实施方案中，本发明包括R³是H的式II的化合物。

在另一实施方案中，本发明包括R⁶是H的式II的化合物。

在另一实施方案中，本发明包括R⁷是H，或R⁷和R¹与和R¹相连的氮原子一起形成吡咯烷环的式II的化合物。特别地，R⁷是H。

在另一实施方案中，本发明包括R⁸是H的式II的化合物。

本发明的下列化合物或其可药用盐是优选的：

4-{4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-(2-甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮；

4-{4-[1-(2-氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮；

4-{4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-((R)-1-甲基-哌啶-3-基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮；

4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,5-二甲基-5,7-二氢吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮；

4-{4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮；

4-{4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮；

4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮；

7-乙基-6-{4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-7H-嘌呤-8(9H)-酮；

6-{4-[4-(3-氯-4-氟苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-7-乙基-7H-嘌呤-8(9H)-酮；

6-{4-[4-(3,4-二氟苯基)-1-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-7-乙基-7H-嘌呤-8(9H)-酮；

6-{4-[4-(3-氯-4-氟苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-7-异丙基-7H-嘌呤-8(9H)-酮；

6-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-7-乙基-7H-嘌呤-8(9H)-酮；

6-{4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-7-乙基-7,9-二氢-嘌呤-8-酮；

4-{4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5-乙基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮；

4-{4-[4-(3,4-二氟苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5-甲基-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮；

4-{4-[4-(3-氯-4-氟苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,5-二甲基-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮；和

4-{4-[4-(3-氯-4-氟苯基)-1-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5-甲基-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮。

化合物4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮或其可药用盐尤其优选。

在一个优选实施方案中，化合物4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮或其可药用盐是结晶4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮半水合物。结晶4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮半水合物以包含至少一个下列峰的X-射线粉末衍射图为特征：7.4、14.9、21.1、19.8或10.5 (± 0.1° 2θ)。优选以包含在7.4、14.9、21.1、19.8和10.5 (± 0.1° 2θ)的峰的X-射线粉末衍射图为特征。结晶4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮半水合物也可以以包含至少一个下列共振的SSNMR谱为特征：179.8、156.9、151.9、137.5或33.8 ppm。优选以包含在179.8、156.9、151.9、137.5和33.8 ppm的共振的SSNMR谱为特征。

在另一实施方案中，化合物4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮或其可药用盐是4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮三三氟甲烷磺酸。4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮三三氟甲烷磺酸以包含至少一个下列峰的X-射线粉末衍射图为特征：22.6、21.7、21.5、21.1、20.4、20.2、18.6、18.5、15.5、15.0和13.2 (± 0.1° 2θ)。优选以包含在22.6、21.7、21.5、21.1、20.4、20.2、18.6、18.5、15.5、15.0和13.2 (± 0.1° 2θ)的峰的X-射线粉末衍射图为特征。4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮三三氟甲烷磺酸也可以以包含至少一个下列共振的SSNMR谱为特征：176.9、155.4、150.0、148.0、94.6、57.7、36.4、32.0和27.4 ppm。优选以包含在176.9、155.4、150.0、148.0、94.6、57.7、36.4、32.0和27.4 ppm的共振的SSNMR谱为特征。

在另一实施方案中，化合物4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮或其可药用盐是4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮一水合物。4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮一水合物以包含至少一个下列共振的SSNMR谱为特征：164.9、150.7、138.3和61.6 ppm。优选以包含在164.9、150.7、138.3和61.6 ppm的共振的SSNMR谱为特征。

在另一实施方案中，提供选自下列的化合物：

5-乙基-4-{4-[4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1-((S)-哌啶-2-基甲基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮三盐酸盐；

4-{4-[4-(3-二氟甲基-4-氟苯基)-1-(((R)-1-甲基哌啶-2-基)甲基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5-乙基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮；和

(R)-6-{4-[4-(3-二氟甲基-4-氟苯基)-1-((1-甲基哌啶-2-基)甲基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-7-乙基-7H-嘌呤-8(9H)-酮。

本发明的化合物是AKT和p70 S6激酶的抑制剂并因此可用于治疗代谢病和失调症，如肥胖症、糖尿病、代谢综合征、胰岛素抵抗、高血糖症、高氨基酸血症和高脂血症。本发明的化合物还可用于治疗哺乳动物的癌症，特别是多形性成胶质细胞瘤、结肠腺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、顺铂耐药性小细胞肺癌、卵巢癌、白血病、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、肾细胞癌、多发性骨髓瘤、卡波西肉瘤（Sodhi等人, Cancer Cell, 10: 133-143 (2006)）、霍奇金淋巴瘤（Dutton等人, J. Pathol., 205: 498-506 (2005)）、淋巴管肌瘤病（Goncharova等人, J. Biol. Chem., 277:34, 30958-30967 (2002)）、非霍奇金淋巴瘤、肉瘤和神经内分泌瘤，特别是胰腺或小肠的神经内分泌瘤（Wong等人, 2009 Gastrointestinal Cancers Symposium, Abstract no. 174）。AKT和p70 S6激酶的抑制剂也是哺乳动物血管生成的可用抑制剂。要治疗的哺乳动物优选是人。

本发明的化合物或其可药用盐可用在治疗哺乳动物的癌症，特别是上述癌症的方法中，包括给予需要这种治疗的哺乳动物有效量的本发明的化合物或其可药用盐。本发明的化合物或其可药用盐可用于治疗癌症，特别是上述癌症。此外，本发明的化合物或其可药用盐可用于制造癌症，特别是上述癌症的治疗药剂。还提供了包含本发明的化合物或其可药用盐的用于治疗癌症，特别是上述癌症的药物组合物。

本发明的化合物或其可药用盐可用在抑制哺乳动物血管生成的方法中，包括给予需要这种治疗的哺乳动物有效量的本发明的化合物或其可药用盐。本发明的化合物或其可药用盐可用于抑制血管生成。此外，本发明的化合物或其可药用盐可用于制造抑制血管生成的药剂。还提供了包含本发明的化合物或其可药用盐的用于抑制血管生成的药物组合物。

本发明的化合物可以与其它治疗剂，特别是mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶）抑制剂、EGFR（表皮生长因子受体）抑制剂、吉西他滨（Gemzar®）、顺铂、tasisulam（N-[(5-溴噻吩-2-基)磺酰基]-2,4-二氯苯甲酰胺钠）、培美曲塞（Alimta®）、多西他赛（Taxotere®）、阿霉素（Doxil®）或伊立替康（Campto®；Camptosar®）联合使用。优选的mTOR抑制剂包括雷帕霉素（也被称作西罗莫司）及其类似物，如依维莫司（42-O-(2-羟基)乙基-雷帕霉素；公开在EP 1 413 581中）、西罗莫司脂化物（temsirolimus）（42-(3-羟基-2-(羟基甲基)-2-甲基丙酸酯)-雷帕霉素；Torisel®；公开在WO 95/28406中）和deforolimus（42-(次膦酸二甲酯)雷帕霉素；公开在WO 03/64383中）。优选的EGFR抑制剂包括埃罗替尼、西妥昔单抗（Erbitux®；公开在EP 0 359 282中）、帕尼单抗（Vectibix®；公开在EP 0 359 282中）和gefinitib（Iressa®；公开在EP 0 566 226中）。

在一个实施方案中，本发明提供作为同时、分开或顺序用于治疗的联合制剂的含有本发明的化合物或其可药用盐和选自上文列举的那些的治疗剂的产品。本发明进一步提供与选自上文列举的那些的治疗剂同时、分开和顺序联合用于治疗多形性成胶质细胞瘤、结肠腺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、顺铂耐药性小细胞肺癌、卵巢癌、白血病、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、肾细胞癌、多发性骨髓瘤、卡波西肉瘤、霍奇金淋巴瘤、淋巴管肌瘤病、非霍奇金淋巴瘤或肉瘤的本发明的化合物或其可药用盐。本发明进一步提供治疗选自多形性成胶质细胞瘤、结肠腺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、顺铂耐药性小细胞肺癌、卵巢癌、白血病、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、肾细胞癌、多发性骨髓瘤、卡波西肉瘤、霍奇金淋巴瘤、淋巴管肌瘤病、非霍奇金淋巴瘤和肉瘤的癌症的方法，包括以联合有效的量给予需要其的患者本发明的化合物或其可药用盐和选自上文列举的那些的治疗剂。

在另一实施方案中，本发明提供包含本发明的化合物以及可药用载体和任选其它治疗剂，特别是选自上文列举的那些的治疗剂的药物组合物。

本发明的化合物优选口服给药。本发明的化合物也优选静脉给药。根据情况，可以使用其它给药途径或甚至优选。例如，透皮给药可能非常适合在服用口服药物方面健忘或性急的患者。本发明的化合物在特定情况下也可通过经皮、肌肉内、鼻内或直肠内途径给药。给药途径可以以任何方式改变，受药物的物理性质、患者和护理人员的方便以及其它相关情况限制（Remington's Pharmaceutical Sciences, 第18版, Mack Publishing Co. (1990)）。

本领域普通技术人员可以根据业内公认的技术和程序制备式I的化合物。更具体地，可以如下列流程图、制品和实施例中所述制备式I的化合物。本领域技术人员会认识到，可以改变下列流程图中的各个步骤以提供式I的化合物。试剂和原材料是本领域普通技术人员易得的。除非另行指明，所有取代基如上定义。

流程图1

Figure DEST_PATH_122856DEST_PATH_IMAGE005

在升高的温度下加热在溶剂，如丙醇、异丙醇（IPA）、NN-二甲基甲酰胺（DMF）、甲醇、N-甲基-吡咯烷酮（pyrrolidene）（NMP）或二甲亚砜（DMSO）中的式（1）的取代咪唑哌啶、式（2）的取代酮和碱，如三乙胺（TEA）、二异丙基乙胺（DIPEA）或1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯（DBU）以形成式I的化合物。L是离去基，例如，氯。或者，可以通过首先合并叔丁醇钾、N,N'-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-亚基-乙酰丙酮化物氯化钯 [IPrPd(acac)Cl (J. Org. Chem. 2006, 71(10), 3816-3821)]并用氮气吹扫来进行该反应。随后添加无水1,2-二甲氧基乙烷（DME）和化合物（1）和（2）并加热至80℃。

可以通过使化合物（1）与被亚苄基取代的式（2）的化合物反应和随后将亚苄基还原成苄基来制备R⁴或R⁵之一是苄基，另一是氢的式I的化合物。

P’_c基团可代表含如上定义的取代基的所需最终胺片段（P_c）、P_c的前体或受保护的P_c片段。所有其它取代基如上定义。如果P’_c中的保护基是羧基苄基，可以在与化合物（2）反应之前或之后进行脱保护以提供所需胺。可以通过与浓HCl反应来除去羧基苄基保护基。或者，其可在四氢呋喃（THF）中在氢化锂铝存在下除去以提供如P_c中定义的甲基取代的胺取代基。

注：在4-(4-{4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-[2-(异丙基-甲基-氨基)-乙基]-1H-咪唑-2-基}-哌啶-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5,6-二酮盐酸盐的情况下，可以在反应条件下观察到5位亚甲基氧化成酮。

如流程图2中所示制备式（1）的取代咪唑哌啶化合物，其中PG是氮保护基，且所有其它取代基如上所述。

流程图2

Figure DEST_PATH_945318DEST_PATH_IMAGE006

可以由相应的2-溴-苯基乙酮化合物制备式（A）的化合物。在R⁶和R²形成哌啶环的式I的化合物的合成中，在反应形成化合物（B）之前，受保护的哌啶环作为化合物（A）中的胺取代基存在。通过在溶剂，如DMF中使3-氨基-哌啶-1-羧酸与式（E）的化合物在碱，如TEA存在下反应来合成胺取代的化合物。随后在合成中，可以除去哌啶-3-基上的保护基并替换成甲基取代基。

如果R³ = H，在溶剂，如THF、二氯甲烷（DCM）或DMF中在降低的温度下，使式（A）的胺与氮保护的哌啶羧酸在偶联剂，如氯甲酸异丁酯、1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]-碳二亚胺盐酸盐（EDC）、1-丙膦酸环酐（PPA）或亚硫酰二氯和碱，如N-甲基吗啉（NMM）、DIPEA或TEA存在下反应形成式（B）的酰胺。当式（B）的化合物、乙酸铵或氯化铵和碱，如TEA在密封容器中在压力下暴露在微波热中时，形成式（C）的咪唑哌啶。可通过在液氨中使2-氧代-2-苯基乙醛与4-甲酰基-哌啶-1-羧酸叔丁酯缩合整夜来制备化合物（C）的中间体，其中苯基是未取代的。

式（C）的化合物随后烷基化以提供式（D）的化合物，其中R³是氢。更具体地，式（C）的化合物在溶剂，如DMSO中用碱，如KOH或氢化钠脱质子，随后添加含离去基，如卤素，特别是氯的P’_c。大多数烷基化剂可购得或通过本领域已知的方法合成。例如，可以在盐酸水溶液或在苯中的三溴化磷中在亚硫酰二氯存在下由相应的醇制备烷基化剂。

该烷基化剂的胺可以进一步被苄基取代。苄基可随后通过与氯甲酸苄酯反应来换成羧基苄基保护基，这可以在一个或两个步骤中进行。或者，烷基化剂可含有腈基团，将其还原形成胺。所得胺可随后被羧基苄基保护。

可以使式（C）的化合物与2-(2-溴乙氧基)四氢-2H-吡喃或(2-溴乙氧基)-叔丁基-二甲基硅烷反应形成式（D）的化合物，其中P’_c分别是2-(四氢-吡喃-2-基氧基)乙基或2-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-乙基。将这些基团转化成2-羟基-乙基取代基和随后转化成2-甲磺氧基-乙基取代基。甲磺酰氧基（甲磺酰基）离去基可随后被所需胺替代。

如果所需P_c基团是吡咯烷-2-基甲基，通过与2-(甲苯-4-磺酰氧基甲基)-pyrrolidene-1-羧酸苄基酯反应，将羧基苄基保护的吡咯烷-2-基甲基添加到式（C）的化合物中。

或者，式（H）的4-溴-咪唑在钯(0)催化剂存在下与硼酸苯酯化合物（I）偶联形成R³是氢的式（D）的化合物。可以由4-(1H-咪唑-2-基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯制备式（H）的化合物。首先添加P’_c，随后使该化合物与N-溴代琥珀酰亚胺反应形成4,5-二取代的化合物，最后通过在降低的温度与正丁基锂（nBuLi）反应来将其转化成4-溴取代的化合物（H）。可以通过上文列出方法将P’_c转化成所需P_c基团。

如流程图2的中间序列中所示合成R³是羟基的式（D）的化合物。首先，通过式（E）的酰基溴与甲酰胺在升高的温度下的反应形成式（F）的咪唑化合物。式（F）的咪唑化合物随后在如上所述的类似烷基化条件下烷基化以提供式（G）的化合物。在溶剂，如THF中在降低的温度和惰性气氛下用金属化剂，如nBuLi处理咪唑化合物（G），随后用环氮保护的4-哌啶酮处理以产生式（D）的化合物。

随后除去式（D）的哌啶保护基以提供式（1）的化合物。

式（A）的胺和式（E）的酰基溴可购得或通过本领域中已知的方法合成。

流程图3

Figure DEST_PATH_274668DEST_PATH_IMAGE007

W = NR¹⁰的式（2）的中间体可购得或通过技术人员已知的方法合成。例如，5-氨基-4,6-二氯嘧啶（J）在强碱存在下用R¹⁰-卤化物烷基化以产生N-烷基化嘧啶（K）。通过在密封容器中加热，用氨置换化合物（K）中的氯基之一，以产生嘧啶二胺（L）。用光气、三光气或羰基二咪唑环化产生W = NR¹⁰的中间体（2）。

流程图4

通过技术人员已知的方法合成式（2）的中间体，其中W = CR⁴R⁵或C=CH-R⁹。例如，

Figure DEST_PATH_473568DEST_PATH_IMAGE008

可以由2-(4,6-二羟基嘧啶-5-基)乙酸甲酯制备2-(4,6-二氯嘧啶-5-基)乙酸甲酯。又可以通过将1,1,2-乙烷三羧酸三乙酯添加到甲醇钠的甲醇溶液中并随后加入甲脒盐酸盐来制备该二羟基化合物。

使2-(4,6-二氯嘧啶-5-基)乙酸甲酯与4-甲氧基苄胺或2,4-二甲氧基苄胺在碱，例如，DIPEA和溶剂，例如，乙腈（ACN）存在下反应产生苄基保护的乙酸酯（M）。在酸的水溶液和热中处理化合物（M）产生苄基保护的羟基嘌啉（N）。化合物（N）在强酸，例如三氟乙酸（TFA）或40% HBr水溶液和热中脱保护以产生已知的中间体4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮。可以由5,5-二溴-4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮制备4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮，前者又由4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶通过与过溴溴化吡啶

Figure DEST_PATH_454032DEST_PATH_IMAGE009

反应来制备。

4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮用R⁴/R⁵-卤化物和碱烷基化或与R⁹-甲醛缩合产生化合物（2）。由4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮通过与1,4-二碘丁烷反应形成式（2）的化合物，其中R⁴和R⁵一起形成环戊烷环。

在另一方法中，在流程图1的偶联反应中使用苄基保护的化合物（N）代替化合物（2），随后除去苄基保护基。

技术人员会认识到，式I的化合物中并非所有取代基都耐受用于合成该化合物的某些反应条件。这些部分可以在合成中的便利时刻引入，或可以视必要或需要保护和随后脱保护。技术人员还会认识到，可以在本发明的化合物合成中的任何便利时刻除去保护基。引入和除去氮保护基的方法是本领域中公知的；参见，例如，Greene and Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”, 第3版, John Wiley and Sons, New York, 第7章 (1999)。此外，技术人员会认识到，在许多情况下，部分的引入次序不重要。制造式I的化合物所需的步骤的特定次序取决于合成的特定化合物、原料化合物以及取代中间体和产物的相对不稳定性（liability）。

制品1

2-氨基-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙酮，4-甲基苯磺酸酯

将叠氮化钠（1.76克；1.05当量（equiv））一次性添加到2-溴-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙酮（9.19克；1.00当量）在THF（50毫升）中的溶液中。将该混合物在室温（RT）下搅拌整夜。过滤固体并用THF洗涤。在20℃下将该粗制叠氮化物添加到三苯膦（1.06当量；8.64克）和对甲苯磺酸（2.2当量；12.0克）在THF（50毫升）中的溶液中。将该混合物搅拌整夜。过滤固体，随后用THF洗涤以获得5.5克标题化合物。MS(ES): m/z = 217.2 [M + H]。

以与制品1中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_447395DEST_PATH_IMAGE010

。

制品4

2-氨基-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙酮，盐酸盐

向2-溴-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙酮（60.00克，1.00当量；210.50毫摩尔（mmol））在乙酸乙酯（EA）（450毫升；4.60摩尔（mol））中的溶液中加入1,3,5,7-四氮杂三环-[3.3.1.13,7]癸烷（Methenamine, 1.10当量；231.55毫摩尔；32.46克）并在室温下搅拌整夜。真空除去溶剂并用甲基-叔丁基醚（MTBE）研制该固体，过滤并真空干燥。加入乙醇（450毫升；7.73摩尔），接着氯化氢（36.5 wt/wt%在水中）（150毫升；8.30当量；1.75摩尔）并将该混合物搅拌整夜。真空除去溶剂并在真空中在50℃下干燥该固体1周以产生白色固体状的标题化合物（54.23克；100%收率）以及一定量的铵盐。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 8.69-8.59 (m, 4H), 8.07-8.01 (m, 1H), 4.95 (d, J= 5.2 Hz, 2H)。原样使用该固体。

制品5

4-(2-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-氧代乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

向哌啶-1,4-二羧酸单-叔丁酯（1.20当量；252.61毫摩尔；57.92克）在THF（400毫升）中的溶液中，加入NMM（3当量；631.52毫摩尔；69.66毫升）。用干冰-丙酮浴冷却至-10℃。逐滴加入氯甲酸异丁酯（1.1当量；231.56毫摩尔；30.26毫升），使温度保持在低于-5℃。在-5至10℃下30分钟后，加入悬浮在THF（300毫升）中的2-氨基-1-(4-氟-3-(三氟甲基)-苯基)-乙酮盐酸盐（54.23克；1.00当量；210.51毫摩尔）并在该浴中在-5℃下搅拌该混合物20分钟，随后在室温下搅拌1小时。在水和EA之间分相；用水，随后饱和NaCl水溶液（盐水）洗涤有机层，经无水MgSO₄干燥，过滤并在真空中浓缩。将该粗制品悬浮在MTBE中并搅拌2小时。过滤固体并在真空中干燥以产生标题化合物（64.44克；70.79%）。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 8.37-8.26 (m, 3H), 7.74-7.68 (m, 1H), 4.61 (d, J= 5.5 Hz, 2H), 3.91 (d, J= 12.9 Hz, 2H), 2.75-2.64 (m, 2H), 2.46-2.37 (m, 1H), 1.69-1.60 (m, 2H), 1.39 (s, 12H)。

以与制品5中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_201725DEST_PATH_IMAGE011

。

制品8

4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H -咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

向4-(2-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-氧代乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（29.4克；1.00当量；67.99毫摩尔）在1-丁醇（150毫升；1.64摩尔）中的溶液中加入乙酸铵（15当量；1.02摩尔；78.61克），接着TEA（1当量；67.99毫摩尔；9.48毫升）。在密封管中在160 ℃下搅拌该混合物。在3小时后，冷却至RT并在EA和水之间分相，和用水和盐水洗涤有机层。在真空中浓缩。在MTBE中研制该残留物，过滤并真空干燥以产生白色固体状的标题化合物（18.23克；44.10毫摩尔；64.86%）。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 12.01 (s, 1H), 8.08-8.04 (m, 2H), 7.70 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 7.49-7.43 (m, 1H), 3.99 (d, J= 12.6 Hz, 2H), 2.92-2.85 (m, 3H), 1.91-1.87 (m, 2H), 1.64-1.51 (m, 2H), 1.41 (s, 9H)。

以与制品8中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_337488DEST_PATH_IMAGE013

。

制品11

2-氧代-2-苯基乙醛

在1,4-二氧杂环己烷（15毫升）中加入SeO₂（4.6克；0.042摩尔；1.0当量）、乙酸（1.2毫升；0.021摩尔；0.5当量）、水（1.5毫升；0.083摩尔；2.0当量）并在80℃下搅拌直至该溶液变清澈。将该反应冷却至RT，加入苯乙酮（5.0克；0.042摩尔；1.0当量）并在80℃下搅拌18小时。将该反应冷却至RT，经Celite®过滤，用EA洗涤该残留物，并经无水硫酸钠干燥。蒸发有机层，使用在己烷中的EA经50克二氧化硅提纯以产生标题化合物（4.0克，72.7%）。MS (ES+): m/z = 135 (M+H)。

制品12

4-(4-苯基-1H-咪唑-2-基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯

在甲醇（40毫升）中合并4-甲酰基-哌啶-1-羧酸叔丁酯（3.8克；0.017摩尔；0.6当量）和2-氧代-2-苯基乙醛（4.0克；0.29摩尔；1.0当量）。将该反应从0冷却至10℃。缓慢加入氢氧化铵溶液（25%溶液，40毫升）。该反应在室温下搅拌16小时。在真空下浓缩该反应，用水淬灭并用二乙醚萃取。浓缩有机层并过滤固体，用己烷洗涤并在真空下干燥以产生标题化合物（3.0克，51.7%）。MS (ES+): m/z = 328 (M+H)。

制品13

4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

将(2-氯-乙基)-二甲基-胺盐酸盐（1.10当量；579微摩尔；83毫克）一次性添加到4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（1当量；526微摩尔；200毫克）和粉状KOH（2.5当量；1.316毫摩尔；73.8毫克）在DMSO（3毫升）中的混合物中。升温至50℃并搅拌2小时。用DCM稀释，用水、盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，蒸发并在40克硅胶上用10%甲醇/ACN提纯以提供标题化合物（194毫克；0.43毫摩尔；82%）。MS (ES+): m/z = 451 (M+H)。

以与制品13中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_767332DEST_PATH_IMAGE014

。

制品19

4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

在0℃下将4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（500毫克；1.38毫摩尔）添加到NaH（110毫克；2.76毫摩尔）在DMSO（50毫升）中的溶液中，并在室温下搅拌1小时。将(N,N-二甲基)乙基氯盐酸盐（238毫克；1.65毫摩尔）添加到所得混合物中并使其在室温下搅拌18小时。通过薄层色谱法（TLC）监测反应。用冰水淬灭该反应混合物并用EA萃取。分离有机层，用盐水洗涤两次（2 x 50毫升），经无水Na₂SO₄干燥并减压蒸发。通过在硅胶（60/120目）上的柱色谱法使用DCM: 甲醇 (98:2)作为洗脱剂提纯该残留物以产生0.5克（86%）标题化合物。LCMS = 484(M+H)。

以与制品19中所述类似的方式制备下列中间体：

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制品21

4-{4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-[2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-乙基]-1H-咪唑-2-基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯

将4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（5.29克；13.93毫摩尔）；粉状KOH（111.46毫摩尔；6.95克）溶解在DMSO（69毫升）中并加热至40℃ 10分钟。经45分钟逐滴加入2-(2-溴乙氧基)四氢-2H-吡喃（34.83毫摩尔；5.48毫升），随后搅拌30分钟。冷却并用EA稀释和用3 x 300毫升饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。在400克硅胶上用0-10%EA/DCM提纯以提供标题化合物（6.848克，97%）。MS (ES): m/z = 508 (M+H)。

以与制品21中所述类似的方式制备下列中间体：

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制品23

4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-羟基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

将4-{4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-[2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-乙基]-1H-咪唑-2-基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯（6.85克；13.48毫摩尔）溶解在THF（200毫升）中并加入1M氯化氢水溶液（20毫升）和在室温下搅拌18小时。用EA稀释，用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，用无水MgSO₄干燥，过滤，和蒸发。在330克硅胶上用2:1 DCM/EA提纯该残留物以提供白色结晶固体状的标题化合物（5.07克；89 %）。MS (ES): m/z = 424 (M+H)。

以与制品23中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_989869DEST_PATH_IMAGE017

。

制品26

4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-甲磺酰氧基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

将4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-羟基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（5.07克；11.96毫摩尔）和TEA（35.88毫摩尔；5.0毫升）悬浮在DCM（50毫升）中并在冰浴中冷却。经9分钟逐滴加入甲磺酰氯（14.35毫摩尔；1.1毫升）并再搅拌30分钟。用饱和碳酸氢钠淬灭，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发以提供泡沫状的标题化合物（6.246克；104 %）。MS (ES): m/z = 502 (M+H)。

以与制品26中所述类似的方式制备下列中间体：

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制品29

4-{4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-[2-((R)-2-羟基甲基-吡咯烷-1-基)-乙基]-1H-咪唑-2-基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯

在密封容器中加入4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-(2-甲磺酰氧基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（500毫克；1当量；933微摩尔）；D-脯氨醇（3.00当量；2.80毫摩尔；283毫克）；DMF（1毫升）并在50℃下加热18小时。用EA稀释，用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并在40克硅胶上用1-10% MeOH/DCM提纯以提供标题化合物（506.9毫克；0.94毫摩尔；100%）。MS (ES+): m/z = 541 (M+H)。

以与制品29中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_365542DEST_PATH_IMAGE019

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制品35

4-[1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-乙基]-4-(3,4-二氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

在THF（100毫升）中合并4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（10.0克；0.028摩尔；1.0当量）、(2-溴-乙氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷（13.16克；0.055摩尔；2.0当量）、粉状KOH（7.72克；0.14摩尔；5.0当量）并在40℃下搅拌16小时。用水淬灭反应并用EA萃取。蒸发以产生标题化合物（14.3克，粗制）。MS (ES+): m/z = 522 (M+H)。

制品36

4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-羟基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

在THF（100毫升）中合并4-[1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-乙基]-4-(3,4-二氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（18.3克；0.035摩尔；1.0当量）、四丁基氟化铵（20.3克；0.07摩尔；2.0当量）并在室温下搅拌3小时。浓缩，用水淬灭反应并用EA萃取。蒸发有机层以产生标题化合物（3.5克；24.49%）。MS (ES+): m/z = 408(M+H)。

制品37

4-(4-(3,4-二氟-苯基)-1-{2-[(2-羟基-乙基)-甲基-氨基]-乙基}-1H-咪唑-2-基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯

在DMF（30毫升）中合并4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-甲磺酰氧基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（3.0克；0.0061摩尔；1.0当量）、2-甲基氨基-乙醇（1.48克；0.031摩尔；5.0当量）并在40-50℃下搅拌16小时。用水淬灭并用二乙醚萃取。蒸发有机层，在50克硅胶上用0至10 % MeOH/DCM提纯。汇集馏分以产生标题化合物（1.5克；52.2 %）。MS (ES+): m/z = 465 (M+H)。

以与制品37中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_506673DEST_PATH_IMAGE020

。

制品40

苄基-(2-氯-乙基)-甲基胺，盐酸盐

合并氯化氢（50毫升；4M在二氧杂环己烷中）、N-苄基-N-甲基乙醇胺（61.12毫摩尔；10克）、亚硫酰二氯（73.30毫摩尔；5.34毫升）并加热至90℃。搅拌2小时，蒸发并在醚下压碎固体，声处理15分钟，过滤，用醚洗涤，在真空下干燥以提供标题化合物（10.75克；80 %）。MS (ES): m/z = 184 (M+H)。

以与对苄基-(2-氯-乙基)-甲基胺，盐酸盐所述类似的方式由1-苯基甲基-(2R)-吡咯烷甲醇制备下列中间体：

。

制品41a

(R)-1-苄基-2-(溴甲基)哌啶盐酸盐

Figure DEST_PATH_589347DEST_PATH_IMAGE022

将(R)-(1-苄基哌啶-2-基)甲醇（30.0克，0.146摩尔，~1.0当量，粗制）装在350毫升苯中并在氮气氛下在0℃下加入三溴化磷（20.6毫升，0.219摩尔，1.5当量）在苯中的溶液。将反应物料在70℃下加热16小时。反应完成后，用饱和碳酸钠溶液（100毫升）淬灭该反应并在EA（3 x 100毫升）中萃取该化合物。用盐水洗涤有机层并经无水硫酸钠干燥。减压浓缩并将固体残留物溶解在二乙醚中。过滤溶解的部分并缓慢加入HCl（1.2当量，2 N在二乙醚中）并在室温下搅拌30分钟。过滤该沉淀盐并用EA接着用己烷洗涤。在高真空下干燥以得到13.2克盐酸盐形式的(R)-1-苄基-2-(溴甲基)哌啶。MS(ES): m/z=268, 270 (M+H)。

以与制品41a中所述类似的方式制备下列中间体：

。

制品42

4-[1-[2-(苄基-甲基-氨基)-乙基]-4-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

将粉状KOH（283毫克；5.05毫摩尔）和4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（2.02毫摩尔；768毫克）添加到DMSO（6毫升）中。随后一次性加入苄基-(2-氯-乙基)-甲基胺盐酸盐（2.22毫摩尔；0.49毫升）并加热至40℃历时18小时。冷却，用DCM/水稀释，加入盐水并分离层。用水、盐水洗涤有机相，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。在120克硅胶上用1% MeOH/DCM提纯以提供标题化合物（840.5毫克；79 %）。MS (ES): m/z = 527 (M+H)。

以与制品42中所述类似的方式制备下列中间体:

。

制品46a

(R) 4-(1-((1-苄基哌啶-2-基)甲基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

Figure DEST_PATH_837291DEST_PATH_IMAGE025

在室温下在氮气氛下向4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（4.5克，0.011摩尔，1.0当量）在DMSO（100毫升）中的溶液中加入粉状KOH（3.0克，0.055摩尔，5.0当量）并搅拌30分钟。向所得溶液中加入(R)-1-苄基-2-(溴甲基)哌啶盐酸盐（5.0克，0.0165摩尔，1.5当量）并将反应物料在室温下搅拌16小时。在完成后，用水（100毫升）稀释该反应并在EA（3 x 100毫升）中萃取该化合物。用盐水洗涤有机层（2 x 50毫升）并经无水硫酸钠干燥。减压浓缩有机层并在二氧化硅（100-200目）上使用2%丙酮- DCM提纯以得到3.0克（46%）标题化合物。(ES+): m/z= 601 (M+H)。

以与制品46a中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_779840DEST_PATH_IMAGE026

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制品47

4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

将4-[1-[2-(苄基-甲基-氨基)-乙基]-4-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（1.47毫摩尔；775毫克）；1,8-萘二胺，N,N,N’,N’-四甲基-（0.044毫摩尔；9.4毫克）溶解在1,2-二氯乙烷（DCE 20毫升）中并在冰浴中冷却。经几分钟逐滴加入氯甲酸1-氯乙酯（4.41毫摩尔；0.48毫升）以产生无色溶液；搅拌15分钟；随后移除冰浴并加热至70℃历时2小时。冷却至RT并蒸发。将该残留物溶解在甲醇（20毫升）中并加热至回流40分钟，蒸发并将该残留物溶解在DCM中，用碳酸氢钠、盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，蒸发以提供标题化合物（681毫克；106%）。MS (ES): m/z = 437 (M+H)。

以与制品47中所述类似的方式制备下列中间体：

。

制品51

4-[1-[2-(苄基氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-4-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

将4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（1.56毫摩尔；680毫克）溶解在DCM（10毫升）中并加入氯甲酸苄酯（1.56毫摩尔；0.23毫升）和DIPEA（3.11毫摩尔；0.54毫升）。搅拌15分钟并蒸发。在120克硅胶上用DCM至20% EA/DCM提纯该残留物以提供标题化合物（741毫克；83%）。MS (ES): m/z = 571 (M+H)。

以与制品51中所述类似的方式制备下列中间体：

。

制品55

4-[1-[2-(苄基氧基羰基-甲基-氨基)-乙基]-4-(3,4-二氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

在氮气下将4-[1-[2-(苄基-甲基-氨基)-乙基]-4-(3,4-二氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（1.8克；0.0035摩尔；1.0当量）装在ACN（40毫升）中并在0℃下逐滴加入氯甲酸苄酯。将该反应搅拌30分钟并达到室温。在室温下搅拌1.5小时。在完成后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭该反应并在EA中萃取。用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥和在真空下蒸发掉溶剂。在二氧化硅柱上使用15% EA/己烷提纯以得到标题化合物（1.6克；82 %）。(ES+): m/z = 555 (M+H)。

制品55a

2-((2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基) 苯基)-1H-咪唑-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸(R)-苄酯

Figure DEST_PATH_479003DEST_PATH_IMAGE029

将(R)4-(1-((1-苄基哌啶-2-基)甲基)-4-(4-氟-3-三氟甲基苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（3.0克，0.005摩尔，1.0当量）溶解在甲苯（15毫升）中并在氮气氛下在0℃下加入氯甲酸苄酯（8.5毫升，50%在甲苯中，0.025摩尔，5.0当量）。将该反应物料在室温下搅拌16小时。在完成后，用碳酸氢钠水溶液淬灭该反应物料并在EA中萃取（3 x 100毫升），用碳酸氢钠水溶液（3 x 50毫升）洗涤有机层并经无水硫酸钠干燥。减压浓缩并在硅胶（100-200目）柱上使用2.5%丙酮-DCM作为洗脱剂提纯粗制化合物以得到2.6克（81%）绿黄色胶状液体形式的标题化合物。(ES+): m/z= 645 (M+H)。

以与制品55a中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_592452DEST_PATH_IMAGE030

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制品56

4-[1-(1-苄基氧基羰基-吡咯烷-2-基甲基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

在干燥圆底烧瓶中，装入在干燥DMF（30毫升）中的4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（1.5克；0.0036摩尔；1.0当量）并冷却至0℃。在氮气下分份加入NaH（0.26克；0.011摩尔；3.0当量）并在室温下搅拌30分钟。在室温下加入2-(甲苯-4-磺酰氧基甲基)-吡咯烷-1-羧酸苄酯（2.46克；0.0072摩尔；2.0当量）并在40℃下加热整夜。用冷水淬灭并在EA中萃取。用水和盐水洗涤有机层。经无水硫酸钠干燥并浓缩。在二氧化硅（100-200目）上用10至20% EA/己烷提纯该粗制残留物以产生标题化合物（1.14克；51.6 %）。(ES+): m/z = 631 (M+H)。

以与制品56中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_517683DEST_PATH_IMAGE031

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参考制品58

4-[1-(2-苄基氧基羰基氨基-乙基)-4-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

将4-[1-(2-氨基-乙基)-4-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.94毫摩尔；396.7毫克）溶解在DCM（20毫升）中并加入DIPEA（1.41毫摩尔；0.25毫升）和氯甲酸苄酯（0.94毫摩尔；0.14毫升）。搅拌20分钟并用饱和碳酸氢钠洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。在40克硅胶上用0-40% EA/DCM提纯以提供标题化合物（222毫克；42%）。MS (ES): m/z = 557 (M+H)。

以与参考制品58中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_555040DEST_PATH_IMAGE032

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参考制品60

4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-氰基甲基-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

合并4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（2.55毫摩尔；969毫克）、四-N-丁基溴化铵（0.26毫摩尔；82毫克）、50重量%氢氧化钠水溶液（8.42毫摩尔；0.45毫升）和DCM（25毫升）。经10分钟逐滴加入溴乙腈（5.11毫摩尔；0.36毫升）。搅拌45分钟并用DCM稀释，用盐水、50%饱和氯化钠水溶液洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。在150克硅胶上用20% EA/DCM提纯以提供标题化合物（812毫克；76%）。MS (ES): m/z = 419 (M+H)。

以与参考制品60中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_616537DEST_PATH_IMAGE033

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参考制品62

4-[1-(2-氨基-乙基)-4-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

将4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-氰基甲基-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.94毫摩尔；392.9毫克）溶解在甲醇（20毫升）中。加入二氯化镍（1.03毫摩尔；135毫克）。逐份加入四氢硼酸钠（18.8毫摩尔；717毫克）。蒸发并在水/DCM之间分相和搅拌20分钟。加入Celite®，搅拌30分钟并过滤。用DCM、10% MeOH/DCM漂洗固体。将2毫升2M NH₃-MeOH添加到有机层中并蒸发。将该残留物溶解在 DCM中，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，经Celite®过滤并蒸发以提供标题化合物（498毫克；125%）。MS (ES): m/z = 423 (M+H)。

以与参考制品62中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_963205DEST_PATH_IMAGE034

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制品64

4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑

在压力容器中装入2-溴-1-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-乙酮（40.0克；0.14摩尔；1.0当量）和甲酰胺（175毫升；4.38摩尔；31.3当量）。在180℃下加热3小时。用饱和碳酸氢钠溶液淬灭并经Celite®过滤。用EA萃取并用水和盐水洗涤有机层。浓缩并在二氧化硅柱上用0-10% MeOH-EA提纯以产生标题化合物。（15.2克；47.0%）。(ES+): m/z = 231 (M+H)。

以与制品64中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_375732DEST_PATH_IMAGE035

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制品66

{2-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-咪唑-1-基]-乙基}-二甲基胺

在圆底烧瓶中装入在DMSO（281.56毫摩尔；20.00毫升）中的4-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-咪唑（1.85克；1.00当量；9.41毫摩尔）、KOH（3.00当量；28.23毫摩尔；1.58克，压碎成细粉）。一次性加入2-二甲基氨基乙基氯盐酸盐（1.20当量；11.29毫摩尔；1.63克）且该溶液变黄。在45℃下加热2天。用EA稀释该反应并用水、盐水洗涤，经MgSO₄干燥有机物；过滤，并浓缩成橙色油。用ISCO色谱法在Biotage 40M柱上提纯粗制品，以40毫升/分钟流速用5% MeOH/DCM至10% MeOH/DCM梯度洗脱以产生浅橙色油状的标题化合物（1.09克；4.07毫摩尔；43.27%）。MS(ES): (m/z) = 268.0 (M+H)。

以与制品66中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_403731DEST_PATH_IMAGE036

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制品70

4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸叔丁酯

将{2-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-咪唑-1-基]-乙基}-二甲基胺（1.00当量；4.07毫摩尔；1.09克）溶解在无水THF（15毫升；184.33毫摩尔）中并将该混合物冷却至-78℃。缓慢加入正丁基锂（1.40当量；5.70毫摩尔；3.56毫升）（1.6M Aldrich）并在-78℃下搅拌30分钟，随后经10分钟逐滴加入N-叔丁氧基羰基-4-哌啶酮（1.20当量；4.89毫摩尔；973.43毫克）的THF（10毫升）溶液。在20分钟后，将该反应升温至RT并搅拌3小时。在EA和水之间分相。用盐水、NaCl aq (50/50)洗涤有机层，并经MgSO₄干燥。过滤并浓缩。通过ISCO色谱法在Biotage 40M柱上提纯该残留物，用100% DCM至10% MeOH/DCM洗脱以产生785毫克（41%）白色固体状的标题化合物。ES(MS): (m/z) = 467.0 (M+H)。

以与制品70中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_896898DEST_PATH_IMAGE037

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制品74

4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-4-醇二盐酸盐

将4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-4-羟基-哌啶-1-羧酸叔丁酯（1.00当量；1.68毫摩尔；785.00毫克）溶解在5毫升DCM中并在室温下缓慢加入氯化氢（24.00毫摩尔；6.00毫升4M在二氧杂环己烷中）。在5分钟后，该溶液变浑浊，随后从溶液中出现油性白色固体。加入2毫升甲醇以使该固体重新溶解。在30分钟，HPLC显示25%原材料。再加入1毫升HCl溶液。在室温下总共搅拌2小时后，在真空下浓缩。再溶解在DCM中并在真空下蒸发成白色固体；将该白色固体在真空炉中在45℃下干燥至900毫克标题化合物。ES(MS): (m/z) = 367.0 (M+H)。

以与制品74中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_86571DEST_PATH_IMAGE038

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制品78

2-(4-(4-氯苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)-N,N-二甲基乙胺三盐酸盐

A. 4-(1-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：

将4-(1H-咪唑-2-基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯（40克；0.16摩尔；1.0当量）、粉状KOH（35.6克；0.64摩尔；4.0当量）、2-(2-溴-乙氧基)-四氢吡喃（66.2克；0.32摩尔；2.0当量）添加到DMSO（250毫升）中并在室温下搅拌2小时。用水淬灭反应并用EA萃取。蒸发有机层以产生标题化合物（58克；97 %）。

B. 4-(4,5-二溴-1-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：

在DCM（500毫升）中加入4-{1-[2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-乙基]-1H-咪唑-2-基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯（58.2克；0.15摩尔；1.0当量）并冷却至-10℃。加入N-溴代琥珀酰亚胺（54.6克；0.31摩尔；2.0当量）并使该反应达到室温。用水淬灭反应并用DCM萃取。蒸发有机层以产生标题化合物（78.2克；95 %）。

C. 4-(4-溴-1-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：

将4-{4,5-二溴-1-[2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-乙基]-1H-咪唑-2-基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯（39.0克；0.073摩尔；1.0当量）添加到THF（600毫升）中并在氩气氛下冷却至-78℃。在1小时内逐滴加入n-BuLi溶液（1.6 M在环己烷中）（53.7毫升；0.087摩尔；1.2当量）并在2小时内使其达到-30℃。用饱和氯化铵溶液淬灭该反应并用EA萃取。蒸发有机层并用硅胶色谱法提纯该残留物以产生标题化合物（13.2克；39%）。

D. 4-(4-溴-1-(2-羟基乙基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：

将4-{4-溴-1-[2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-乙基]-1H-咪唑-2-基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯（13.2克；0.029摩尔；1.0当量）、对甲苯磺酸（6.5克；0.034摩尔；1.2当量）添加到甲醇（200毫升）中并在室温下搅拌30分钟。浓缩并在饱和NaHCO₃水溶液和EA之间分相。蒸发有机层以产生标题化合物（10.0克；93%）。

E. 4-(4-溴-1-(2-(甲基磺酰氧基)乙基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：

将4-[4-溴-1-(2-羟基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（10.0克；0.027摩尔；1.0当量）、TEA（11.6毫升；0.080摩尔；3.0当量）添加到DCM（150毫升）中并冷却至0℃。逐滴加入甲磺酰氯（2.6毫升；0.032摩尔；1.2当量）并搅拌30分钟。用饱和NaHCO₃水溶液淬灭该反应并用DCM萃取。蒸发有机层以产生标题化合物（10.2克；84%）。

F. 4-(4-溴-1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：

在ACN（100毫升）中加入4-[4-溴-1-(2-甲磺酰氧基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（10.2克；0.023摩尔；1.0当量）、二甲基胺（40 %水溶液，22毫升；0.18摩尔；8.0当量）并在100℃下搅拌3小时。浓缩，用饱和NaHCO₃溶液淬灭该反应并用EA萃取。浓缩有机层；在硅胶柱上用EA/己烷提纯以产生标题化合物（7.5克；83.33 %）。

G. 4-(4-(4-氯苯基)-1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：

将4-[4-溴-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（1.0克；0.0024摩尔；1.0当量）、4-氯苯基硼酸（0.58克；0.0037摩尔；1.5当量）、3M Na₂CO₃溶液（0.79克；0.0074摩尔；3.0当量）添加到乙醇（5毫升）和甲苯（5毫升）中并用氩气将该反应脱气。加入Pd(PPh₃)₄（0.29克；0.00024摩尔；0.1当量）并在110℃下微波20分钟。加入EA并经Celite®床过滤。加入饱和NaHCO₃水溶液并用EA萃取。蒸发有机层，在硅胶柱上用在DCM中的甲醇提纯该残留物以产生标题化合物（0.8克；粗制）。

H. 2-(4-(4-氯苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)-N,N-二甲基乙胺三盐酸盐：

将在1,4-二氧杂环己烷中的4M HCl（2毫升）添加到在DCM中的4-[4-(4-氯-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.8克；0.0018摩尔；1.0当量）中并在室温下搅拌6小时。浓缩该反应，从二乙醚中结晶并过滤以得到标题化合物（0.6克；74.07 %）。MS (ES+): m/z = 333 (M+H)。

以与2-(4-(4-氯苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)-N,N-二甲基乙胺三盐酸盐的制备A.至H.中描述的类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_48710DEST_PATH_IMAGE039

。

制品83

[4-(3-氯-4-氟-苯基)-2-哌啶-4-基-咪唑-1-基]-乙腈双三氟乙酸酯

将4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-氰基甲基-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（399毫克；0.95毫摩尔）溶解在TFA（10毫升）中，搅拌15分钟并蒸发提供标题化合物（607毫克；110%）。MS (ES): m/z = 319 (M+H)。

制品84

{2-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-2-哌啶-4-基-咪唑-1-基]-乙基}-二甲基-胺二盐酸盐

将4-(4-(3-氯-4-氟苯基)-1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（194毫克；0.43毫摩尔）溶解在DCM（5毫升）和甲醇（3毫升）中并加入在二氧杂环己烷中的4 M氯化氢（5毫升；20毫摩尔）。搅拌30分钟并蒸发；加入DCM/MeOH并在真空下蒸发以提供白色固体状的标题化合物（245毫克）。MS (ES): m/z = 351 (M+H)。

以与制品84中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_614821DEST_PATH_IMAGE040

Figure DEST_PATH_729539DEST_PATH_IMAGE041

。

制品108a

2-((4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸(R)-苄酯三盐酸盐

Figure DEST_PATH_90113DEST_PATH_IMAGE042

将2-((2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸(R)-苄酯（2.6克，0.004摩尔，1.0当量）溶解在DCM（15毫升）中。将该反应物料冷却至0℃并逐滴加入HCl（4.0 M在二氧杂环己烷中，5毫升，0.020摩尔）。使该反应升温至RT并搅拌16小时。在完成后，浓缩该反应并在高真空下与甲醇（5 x 20毫升）共蒸发产生2.2克（83.6 %）标题化合物。(ES+): m/z= 545 (M+H)。

以与制品108a中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_477232DEST_PATH_IMAGE043

。

制品108c

(R)-2-((4-(3-(二氟甲基)-4-氟苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-1-甲基哌啶

Figure DEST_PATH_909350DEST_PATH_IMAGE044

在0℃下向氢化锂铝（0.638克，0.0168摩尔，5.0当量）在20毫升THF中的悬浮液中分小份加入(R)-苄基-2-((4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸酯（2.2克，0.0033摩尔，1.0当量）。该反应在室温下搅拌4小时。在完成后，冷却该反应并用冰冷水和随后10% NaOH溶液淬灭，并在室温下搅拌，经Celite®过滤所得悬浮液，用EA洗涤该固体滤饼。经无水硫酸钠干燥该滤液并减压浓缩以得到1.6克标题化合物。(ES+): m/z 407 (M+H)。

制品109

4-氯-5-(噻唑-2-基亚甲基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮

在甲醇（1.5毫升）中合并4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.3克；0.0017摩尔）、噻唑-2-甲醛（0.23毫升，0.0026摩尔）。逐滴加入吡咯烷（0.073毫升；0.0008摩尔）。在室温下搅拌15分钟。过滤固体以产生标题化合物（0.35克；76.08 %）。

以与制品109中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_799946DEST_PATH_IMAGE045

。

制品116

5-亚苄基-4-(4-(4-(3-氯-4-氟苯基)-1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮

合并{2-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-2-哌啶-4-基-咪唑-1-基]-乙基}-二甲基-胺三盐酸盐（0.5克；0.0013摩尔；1.0当量）；5-亚苄基-4-氯-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮（0.33克；0.0013摩尔；1.0当量）；DIPEA（1.7毫升0.0098摩尔；7.6当量）；2-丙醇（10毫升）并在100℃下微波30分钟。冷却和在真空中浓缩。用饱和碳酸氢钠溶液稀释并用DCM萃取。用水和盐水洗涤有机层并经无水硫酸钠干燥。浓缩该粗制化合物并通过反相HPLC提纯以产生作为E和Z异构体的混合物的标题化合物（0.09克；12.2 %）。MS (ES+): m/z = 572 (M+H)。

以与制品116中所述类似的方式制备下列中间体:

Figure DEST_PATH_908585DEST_PATH_IMAGE046

。

制品119

4-氯-5,5-二甲基-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮

方法A：将4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.25克；0.0015摩尔）添加到THF（7.5毫升）中。冷却至0℃并逐滴加入NaH（0.12克；0.0029摩尔）。在0℃下搅拌30分钟。逐滴加入甲基碘（0.18毫升，0.0029摩尔）。在0℃下搅拌30分钟，随后在室温下搅拌1小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭该反应并用EA萃取。蒸发有机层并在硅胶柱上使用丙酮:己烷作为洗脱剂提纯该残留物以产生标题化合物（172毫克；59.03%）。MS (ES+): m/z = 196 (M-H)。

方法B：将4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（1克；0.0058摩尔）、叔丁醇钾（3.31克；0.029摩尔）、CuBrMe₂S（0.12克；0.00059摩尔）添加到THF（20毫升）中。冷却至0℃并逐滴加入甲基碘（0.99毫升；0.016摩尔）。使该反应达到RT并搅拌10分钟。用饱和氯化铵水溶液淬灭并用EA萃取。蒸发有机层以产生标题化合物（0.91克；78.4%）。MS (ES+): m/z = 196 (M-H)。

制品120

4-氯-5-乙基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮

Figure DEST_PATH_517421DEST_PATH_IMAGE047

在THF（20毫升）中加入4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.5克；0.0029摩尔；1.0当量）并在氩气氛下冷却-78℃。逐滴加入六甲基-二硅基氨基锂（5.89毫升，0.0059摩尔；2.0当量；1 M在THF中）。在-78℃下搅拌30分钟。逐滴加入乙基碘（0.48毫升；0.0059摩尔；2.0当量）并使反应温度缓慢达到0℃。搅拌4小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭并用EA萃取。蒸发有机层以得到标题化合物（0.24克；41.38 %）。

制品121

4-氯-5-甲基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮

Figure DEST_PATH_690913DEST_PATH_IMAGE048

在THF（15毫升）中加入4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.4克；0.0023摩尔；1.0当量）并在氩气氛下冷却至-78℃。逐滴加入六甲基-二硅基氨基锂（4.7毫升；0.0047摩尔；2.0当量；在THF中1 M)。在-78℃下搅拌该反应30分钟。逐滴加入甲基碘（0.29毫升；0.0047摩尔；2.0当量），使反应温度缓慢达到-20℃并在-20℃下搅拌2小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭该反应并用EA萃取。蒸发有机层以产生标题化合物（0.24克；41.38 %）。

制品122

4'-氯螺[环戊烷-1,5'-吡咯并[2,3-d]嘧啶]-6'(7'H)-酮

在无水THF（20毫升）中加入4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.6克；0.0035摩尔；1.0当量）并在惰性气氛下将该反应冷却至-78℃。逐滴加入六甲基-二硅基氨基锂（8.8毫升；0.0088摩尔；2.5当量；1M在THF中）。在-78℃下搅拌30分钟。逐滴加入1,4-二碘丁烷（0.56毫升；0.0042摩尔；1.2当量），使反应温度缓慢达到0℃，并搅拌2小时。随后使该反应达到RT并再搅拌1小时。用饱和氯化铵溶液淬灭该反应并用EA萃取。用水、盐水洗涤有机层，并经无水硫酸钠干燥。蒸发有机层并在10克二氧化硅柱上用在DCM中的丙酮（5%）提纯。汇集馏分以产生标题化合物（0.34克；43.09%）。H NMR (DMSO-d6):11.68(1H, s), 8.53(1H, s), 2.0-2.1(m, 2H), 1.91-1.99(m, 6H)。

制品123

4,6-二氯-N-甲基嘧啶-5-胺

将5-氨基-4,6-二氯嘧啶（2克；0.012摩尔）添加到THF（60毫升）中。冷却至0℃并逐份加入NaH（0.53克；0.013摩尔）。在0℃下搅拌30分钟。逐滴加入甲基碘（0.7毫升，0.012摩尔）。在0℃下搅拌1小时，随后在室温下搅拌30分钟。用饱和氯化铵水溶液淬灭并用EA萃取。蒸发有机层并通过硅胶柱使用丙酮和己烷作为洗脱剂提纯该残留物以产生标题化合物（0.6克；27.64 %）。

如制品123中所述制备下列中间体：

。

制品126

6-氯-N⁵-甲基嘧啶-4,5-二胺

合并4,6-二氯-N-甲基嘧啶-5-胺（0.6克；0.0034摩尔）和液氨（6毫升）并在80℃下搅拌4小时。用EA萃取和蒸发以产生标题化合物（0.41克；76.78 %）。

如制品126中所述制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_641049DEST_PATH_IMAGE051

。

制品129

6-氯-7-甲基-7,9-二氢-嘌呤-8-酮

Figure DEST_PATH_352653DEST_PATH_IMAGE052

将6-氯-N⁵-甲基-嘧啶-4,5-二胺（0.41克，0.0025摩尔）添加到THF（12.3毫升）中。冷却至0℃，加入TEA（0.51克；0.005摩尔）、三光气（0.92克；0.0031摩尔）并在室温下搅拌1小时。用水淬灭并用EA萃取。蒸发有机层以产生标题化合物（0.2克；42 %）。

以与制品129中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_217841DEST_PATH_IMAGE053

。

制品131

6-氯-7,9-二氢-嘌呤-8-酮

合并6-氯-嘧啶-4,5-二胺（7.46毫摩尔；1.08克）；1,1'-羰基二咪唑（2当量；14.92毫摩尔；2.42克）和1,4-二氧杂环己烷（20毫升）并在氮气下加热至回流50分钟。将该黄色溶液蒸发成油。加入DCM（80毫升），静置1小时，过滤并在真空炉中在45℃下干燥以提供标题化合物（1.22克；7.15毫摩尔；96%）MS (ES+): m/z = 169 (M-H)。

以与制品131中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_419015DEST_PATH_IMAGE054

。

制品133

(2-{4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2-[1-(6-氧代-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-哌啶-4-基]-咪唑-1-基}-乙基)-甲基-氨基甲酸苄酯

合并{2-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2-哌啶-4-基-咪唑-1-基]-乙基}-甲基-氨基甲酸苄酯二盐酸盐（277微摩尔；160毫克）；4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（1.30当量；360微摩尔；61.1毫克）；DMF（3毫升）；TEA（7当量；1.94毫摩尔；270微升）并在微波中加热至160℃历时45分钟。蒸发，将该残留物溶解在DCM中，用饱和碳酸氢钠洗涤并蒸发有机层。在40克硅胶上用3% MeOH/DCM提纯该残留物以提供标题化合物（138.2毫克；0.22毫摩尔；78%）。MS (ES+): m/z = 638 (M+H)。

以与制品133中所述类似的方式制备下列中间体：

。

制品141

5,5-二溴-4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮

在40℃下将过溴溴化吡啶（3当量；70.5克；266毫摩尔）添加到4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶（66.1毫摩尔；10.16克）在叔丁醇（400毫升）中的溶液中。搅拌4小时，随后加入过溴溴化吡啶

Figure DEST_PATH_549017DEST_PATH_IMAGE009

（1当量；23.5克）并搅拌18小时。分割1L EA/1.5 L水，用EA萃取三次，合并有机物并用水（3 X 200毫升）洗涤，用盐水洗涤两次，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。悬浮在热DCM（200毫升）中，冷却，过滤并在真空下干燥以提供褐色固体状的标题化合物（13.00克；39.7毫摩尔，60%）。MS (ES+): m/z = 328 (M+H)。

制品142

4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮

将锌（2当量；12.12毫摩尔；792毫克）添加到5,5-二溴-4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（6.06毫摩尔；1.98克）在THF（20毫升）中的悬浮液中，并在20℃（放热）下加入饱和氯化铵水溶液（3毫升）。搅拌20分钟，随后经Celite®过滤，用THF漂洗，用饱和氯化铵洗涤有机相两次。用100毫升1:1 THF:EA萃取合并的水层四次，用饱和氯化铵洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，经硅胶塞过滤，用1 L 5% MeOH/DCM漂洗并蒸发滤液。将粗制固体悬浮在DCM/EA的回流混合物中并加载到330克干燥硅胶上。用0至2% MeOH/DCM色谱分离以提供标题化合物3.89克（22.93毫摩尔；59%）。MS (ES+): m/z = 168 (M-H)。

制品143

(R)-3-氨基-哌啶-1-羧酸苄酯

将在二氧杂环己烷中的4M HCl（100毫升）添加到(R)-3-叔丁氧基羰基氨基-哌啶-1-羧酸苄酯（71.65毫摩尔；23.96克）在DCM（100毫升）和MeOH（10毫升）中的溶液中。搅拌60分钟并蒸发。在DCM和饱和碳酸氢钠水溶液之间分割固体，用DCM萃取三次，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，经Celite®过滤并蒸发产生标题化合物17.39克（74.22毫摩尔；104%）。MS (ES+): m/z = 235 (M+H)。

制品144

(R)-3-[2-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2-氧代-乙基氨基]-哌啶-1-羧酸苄酯盐酸盐

将在15毫升DMF中的2-溴-1-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-乙酮（1.00当量；22.57毫摩尔；6.43克）逐滴合并到(R)-3-氨基-哌啶-1-羧酸苄酯（1当量；22.57毫摩尔；5.29克）和TEA（1当量；22.57毫摩尔；3.15毫升）在DMF（30毫升）中的溶液中。搅拌10分钟。用EA稀释，用盐水洗涤3X，经MgSO₄干燥，过滤，加入1当量在醚中的1M HCl并蒸发产生10.56克橙色残留物。溶解在IPA（100毫升）中，在冰浴中冷却，过滤固体，用二乙醚漂洗，在真空炉中在40℃下干燥以提供标题化合物（3.49克；7.35毫摩尔；33%）。MS (ES+): m/z = 439 (M+H)。

制品145

4-{((R)-1-苄基氧基羰基-哌啶-3-基)-[2-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酰基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯

在20℃下将亚硫酰二氯（1.2当量；10.5毫摩尔；765微升）经3分钟逐滴添加到哌啶-1,4-二羧酸单-叔丁酯（1.00当量；8.75毫摩尔；2.03克）和吡啶（5当量；43.74毫摩尔；3.54毫升）在DCM（60毫升）中的溶液中。搅拌90分钟。加入(R)-3-[2-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2-氧代-乙基氨基]-哌啶-1-羧酸苄酯盐酸盐（0.80当量；7.00毫摩尔；3.32克），接着经3分钟逐滴加入TEA（3.5当量；30.62毫摩尔；4.3毫升）并搅拌18小时。用1N HCl、水、盐水洗涤有机相3X，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。在150克硅胶上用20-50% EA/DCM提纯该残留物以提供标题化合物（2.86克；4.41毫摩尔；50%）。MS (ES+): m/z = 672 (M+Na)。

制品146

4-[1-((R)-1-苄基氧基羰基-哌啶-3-基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

在90℃下加热4-{((R)-1-苄基氧基羰基-哌啶-3-基)-[2-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酰基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯（4.40毫摩尔；2.86克）在DMF（2.5毫升）和乙酸铵饱和乙酸溶液（15毫升）中的溶液8小时。用EA稀释，用水、饱和碳酸氢钠、盐水洗涤有机相3X，经MgSO₄干燥并过滤。在80克硅胶上用5-20% EA/DCM提纯该残留物以提供标题化合物（2.08克；3.30毫摩尔；75%）。MS (ES+): m/z = 631 (M+H)。

制品147

4-[(R)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-哌啶-3-基-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

用10%载钯碳（100毫克）和1大气压氢气氢化4-[1-((R)-1-苄基氧基羰基-哌啶-3-基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（1.71毫摩尔；1.08克）在甲醇（20毫升）中的溶液60分钟。加入Celite®并过滤，用DCM漂洗并蒸发以提供标题化合物（834.3毫克；1.68毫摩尔；98%）。MS (ES+): m/z = 497 (M+H)。

制品148

4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-((R)-1-甲基-哌啶-3-基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯

合并4-[(R)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-哌啶-3-基-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（1.49毫摩尔；741毫克）；甲醛（5当量；7.46毫摩尔；560微升）；三乙酰氧基硼氢化钠（2当量；2.98毫摩尔；632毫克）和THF（25毫升）并在20℃下搅拌20分钟。用EA稀释，用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤有机相2X，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发以提供标题化合物（790.3毫克；1.55毫摩尔；104%）。MS (ES+): m/z = 511 (M+H)。

制品149

(R)-3-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2-哌啶-4-基-咪唑-1-基]-1-甲基-哌啶

将在二氧杂环己烷中的4M HCl（6毫升）添加到4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-((R)-1-甲基-哌啶-3-基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（1.55毫摩尔；790毫克）在甲醇（2毫升）和DCM（5毫升）中的溶液中并搅拌1小时。蒸发提供847毫克三HCl盐。在DCM/饱和碳酸氢钠之间分割712毫克三HCl盐，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发以提供标题化合物（529.6毫克；1.29毫摩尔；94%）。MS (ES+): m/z = 411 (M+H)。

以与制品149中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_858775DEST_PATH_IMAGE056

。

制品151

(R)-2-{4-(3-氯-4-氟-苯基)-2-[1-(6-氧代-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-哌啶-4-基]-咪唑-1-基甲基}-吡咯烷-1-羧酸苄酯

在25毫升3颈烧瓶中合并叔丁醇钾（1.1当量；321微摩尔；36.8毫克）；IPrPd(acac)Cl（0.08当量；23.4微摩尔；14.8毫克）和搅拌棒并用氮气吹扫5分钟。加入无水DME（3毫升），接着4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（1当量；292微摩尔；50毫克）；(R)-2-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-2-哌啶-4-基-咪唑-1-基甲基]-pyrrolidene-1-羧酸苄酯三盐酸盐（1.1当量；321微摩尔；159.6毫克）和0.5毫升1,2-DME并加热至80℃历时18小时。用EA稀释，用水、饱和碳酸氢钠、盐水洗涤有机相，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。在40克硅胶上用5% MeOH/DCM提纯该残留物以提供标题化合物（124.7毫克；0.198毫摩尔；68%）。MS (ES+): m/z = 630 (M+H)。

以与制品151中所述类似的方式制备下列中间体：

Figure DEST_PATH_991816DEST_PATH_IMAGE057

。

制品153

2-(4,6-二羟基嘧啶-5-基)乙酸甲酯

将乙烷-1,1,2-三羧酸三乙基酯（74.75克；1.00当量；303.54毫摩尔；69.41毫升）添加到甲醇钠（139.6毫升25% wt，在MeOH中，4.35M）（131.2克；2.00当量；607毫摩尔）在甲醇（224.8毫升）中的溶液中，随后在室温下加入甲脒盐酸盐（25.19克，1.01当量；306.58毫摩尔）。将该混合物搅拌整夜。在0℃下用37 % HCl酸化；过滤固体并在真空中干燥整夜以产生白色固体状的标题化合物（55.89克；99.99%收率）。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 8.03 (s, 1H), 3.55 (s, 3H), 3.24-3.15 (m, 2H)。

制品154

2-(4,6-二氯嘧啶-5-基)乙酸甲酯

将2-(4,6-二羟基嘧啶-5-基)乙酸甲酯（46.65克；1.00当量；253.33毫摩尔）悬浮液添加到磷酰氯（235.41毫升；10.00当量；2.53摩尔）中并在回流下搅拌3小时。在真空下蒸馏至原始体积的1/3并将该混合物倒入4℃磷酸氢二钾水溶液（2M）（2.53升；20当量；5.07摩尔）中。用EA萃取, 经MgSO₄干燥，过滤并在真空中浓缩。通过二氧化硅塞使用DCM作为洗脱剂提纯该粗制品以产生浅黄色固体状的标题化合物（30.32克；137.17毫摩尔；54.15%收率）。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 8.89 (s, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.69 (s, 3H)。

制品155

2-(4-氯-6-(4-甲氧基苄基氨基)嘧啶-5-基)乙酸甲酯

向2-(4,6-二氯嘧啶-5-基)乙酸甲酯（1.00当量；65.10毫摩尔；14.39克）在DMF（0.5 M；1.68摩尔；130.20毫升）中的溶液中加入4-甲氧基苄胺（1.10当量；71.61毫摩尔；9.36毫升）和DIPEA（1.20当量；78.12毫摩尔；13.62毫升）并将该混合物在60℃下搅拌1小时。用冰水淬灭，用EA萃取，并用1N HCl、水和盐水洗涤有机层，经MgSO₄干燥，过滤并在真空中浓缩成黄色固体状的标题化合物（54.98毫摩尔；17.69克；84.45%）且不经进一步提纯即使用。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 8.20 (s, 1H), 7.21-7.18 (m, 2H), 6.89-6.85 (m, 2H), 4.53 (d, J= 5.8 Hz, 2H), 3.76 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.65 (s, 3H)。

以与制品155中所述类似的方式制备下列中间体：

。

制品157

4-氯-7-(4-甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮

将2-(4-氯-6-(4-甲氧基苄基氨基)嘧啶-5-基)乙酸甲酯的溶液（16.21克，1.00当量；50.38毫摩尔）添加到HCl（4M在二氧杂环己烷中）（126毫升；10当量；503.79毫摩尔）和水（4.54毫升；5当量；251.89毫摩尔）中并在100℃下搅拌2小时。在真空中除去二氧杂环己烷并用EA萃取。用饱和NaHCO₃、水、随后盐水洗涤有机层。经MgSO₄干燥，过滤并在真空中浓缩。通过ISCO 330 g使用EA:hex 20至70%作为洗脱剂提纯该残留物以获得黄色固体状的标题化合物（11.15克；38.49毫摩尔；76.39%）。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 8.65 (s, 1H), 7.29-7.26 (m, 2H), 6.89-6.85 (m, 2H), 4.79 (s, 2H), 3.80 (s, 2H), 3.71 (s, 3H)。

制品158

4-氯-7-(2,4-二甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮

将2-(4-氯-6-(2,4-二甲氧基苄基氨基)嘧啶-5-基)乙酸甲酯（1.00当量；2.23摩尔；783克）在对甲苯磺酸（0.5当量；1.10摩尔；212克）中的溶液与甲苯（12升）合并并在回流下搅拌。在1小时后，在真空中除去甲苯并用DCM萃取。用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤有机层，经Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩。将残留物在甲醇（2升）中制浆并在真空中浓缩至大约1升。将该浆料冷却至10℃，过滤，用冷甲醇洗涤，和干燥以获得黄-橙色固体状的标题化合物（1.65摩尔；527克；74.05%）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): 8.59 (s, 1H), 7.13 (d, J= 8.4Hz, 1H), 6.43 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.40 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.92 (d, s, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.60 (s, 2H)。

制品159

4-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

将4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)- 1H -咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（25.00克；1.00当量；60.47毫摩尔）在DMSO（200.00毫升；2.82摩尔）中的溶液与KOH（粉末）（9.98克；151.18毫摩尔）合并，将该混合物加热至45℃。向该溶液中加入2-氯-N,N-二甲基乙胺盐酸盐（10.45克；1.20当量；72.57毫摩尔）。在45℃下搅拌该混合物3小时。将该混合物倒入冰水中，在室温下搅拌并用EA萃取。用水（3x）和盐水洗涤有机层；经MgSO₄干燥，过滤并在真空中浓缩以产生黄色油状的标题化合物（28.00克；57.79毫摩尔；95.56%），不进一步提纯即使用。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 8.04-8.00 (m, 2H), 7.74 (s, 1H), 7.46 (t, J= 9.9 Hz, 1H), 4.06-3.99 (m, 4H), 3.03-2.93 (m, 3H), 2.57 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H), 1.81-1.77 (m, 2H), 1.70-1.55 (m, 2H), 1.42 (s, 9H)。

制品160

2-(4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)-N,N-二甲基乙胺二盐酸盐

将4-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（28.00克；1.00当量；57.79毫摩尔）在DCM（280.00毫升；4.37摩尔）中的溶液与氯化氢在甲醇中的4M溶液（50.56毫升；3.50当量；202.25毫摩尔）合并。将该绿色悬浮液在室温下搅拌3小时。蒸发溶剂，加入EA（100毫升）并再蒸发。加入EA（200毫升）并将该悬浮液搅拌30分钟。在玻璃烧结漏斗上过滤以获得绿色固体状的标题化合物（26.00克；56.85毫摩尔；98.38%收率）。m/z (M+H): 385.2。

制品161

4-(4-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-基)-7-(4-甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮

将4-氯-7-(4-甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮（18.11克；1.05当量；62.52毫摩尔）在NMP（156.50毫升；1.62摩尔）中的溶液在室温下添加到2-(4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)-N,N-二甲基乙胺二盐酸盐（31.30克；1.00当量；59.54毫摩尔）和DIPEA（51.92毫升；297.71毫摩尔）中并在50℃下搅拌整夜。用水（900毫升）和EA（200毫升）淬灭该反应并用H₃PO₄ [85%水溶液 (aq.)]将该混合物的pH调节至1-2。搅拌15分钟并分离相。用H₃PO₄溶液（15% aq. 3x100毫升）萃取有机相。用EA/叔丁基甲基醚（tBuOMe）（4/1）（3x150毫升）洗涤合并的水相。用固体K₂CO₃将水相的pH调节至9并用EA萃取（3x15毫升）。用盐水洗涤合并的有机相，用木炭脱色，并经Celite®过滤。合并滤液并蒸发。使该残留物从EA/tBuOMe中结晶以获得浅玫瑰色固体状的标题化合物（17.00克；26.66毫摩尔；44.77%收率）。¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): 8.36 (s, 1H), 7.91-7.83 (m, 2H), 7.43-7.40 (m, 2H), 7.17-7.11 (m, 2H), 6.86-6.81 (m, 2H), 4.87 (s, 2H), 4.56 (d, J= 13.4 Hz, 2H), 4.13-4.07 (m, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.63 (s, 2H), 3.40-3.36 (m, 2H), 3.21-3.05 (m, 3H), 2.74 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.40-2.35 (m, 6H), 2.09-1.99 (m, 2H)。

制品162

4-(4-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-基)-7-(2,4-二甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮

合并在室温下的在甲醇（62.44摩尔；2.53升）中的4-氯-7-(2,4-二甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮（1.10当量；868.3毫摩尔；277.63克）、2-(4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)-N,N-二甲基乙胺二盐酸盐（1.00当量；789.35毫摩尔；361.0克）和TEA（9077毫摩尔；1265毫升）在甲醇（62.44摩尔；2.53升）中的溶液的混合物并将该混合物在55-60℃下搅拌整夜。使该反应混合物在水（10升）和EA（10升）之间分相。用2 N HCl (5 L)萃取有机层。分离并用EA（5升）萃取水层。油在水层中分离。倾析该水性液体并留下油以回收产物。用EA（5升）搅拌该倾析水层并用2 N NaOH将该混合物的pH调节至10-11。分离有机层，用盐水洗涤，并经Na₂SO₄干燥。过滤并蒸发溶剂以产生标题化合物（473.3毫摩尔；316.0克；60 %）。

将该倾析油溶解在水（15升）中并用EA（5升）洗涤。用EA（5升）搅拌水层并用2 N NaOH将该混合物的pH调节至10-11。分离有机相，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥。过滤并蒸发滤液。使残留物EA结晶；过滤并用MTBE洗涤。干燥以获得额外的浅玫瑰色固体状的标题化合物（46.42毫摩尔；31.0克；5.88 %）。¹H NMR (400 MHz, DMSO): 8.18 (s, 1H), 7.99-7.95 (m, 2H), 7.71 (s,1H), 7.43-7.39 (m, 2H), 6.76 (d, J=7.1 Hz 1H), 6.54 (d, J= 2 Hz 1H), 6.38- 6.35 (m, 1H) , 4.67 (s, 2H), 4.49 (d, J= 13.1 Hz, 2H), 4.03 (t, J=6.52,2H), 3.89 (s, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.15-3.09 (m, 3H), 2.57 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.18 (s, 6H), 1.89-1.74 (m, 4H)。

制品162a

2-((2-(1-(5-乙基-6-氧代-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸(2S)-苄酯

在压力管中合并2-((4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸(S)-苄酯三盐酸盐（1.1克，0.00168摩尔，1.0当量）；4-氯-5-乙基-5,7-二氢-吡咯并[2,3d] 嘧啶-6-酮（0.4克，0.002摩尔，1.2当量）；DIPEA（2毫升，0.011摩尔，7.0当量）和 2-丙醇（20毫升）并在密封条件下在120℃下加热整夜。冷却该反应物料并用水稀释。在EA中萃取并用盐水洗涤有机层。经无水硫酸钠干燥并浓缩粗制化合物。在硅胶（100-200目）柱上使用10%丙酮-DCM作为洗脱剂提纯。汇集含所需化合物的馏分并在真空下浓缩成标题化合物。MS (ES+): m/z =706 (M+H)。

实施例1

4-{4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-(2-甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮三盐酸盐

Figure DEST_PATH_241029DEST_PATH_IMAGE060

将(2-{4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2-[1-(6-氧代-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-哌啶-4-基]-咪唑-1-基}-乙基)-甲基-氨基甲酸苄酯（213微摩尔；136毫克）溶解在浓HCl（8毫升）中并加热至50℃历时60分钟。冷却至RT，用醚萃取2次，蒸发有机层，用MeOH共蒸发该残留物2次，用DCM/MeOH共蒸发该残留物2次以提供129.6毫克（0.21毫摩尔；99%）标题化合物。MS (ES+): m/z = 504 (M+H)。

基本如对4-{4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-(2-甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮三盐酸盐所述制备下列实施例：

Figure DEST_PATH_533470DEST_PATH_IMAGE061

Figure DEST_PATH_390568DEST_PATH_IMAGE062

Figure DEST_PATH_402298DEST_PATH_IMAGE063

Figure DEST_PATH_53859DEST_PATH_IMAGE064

。

实施例11a

5-乙基-4-{4-[4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1-((S)-哌啶-2-基甲基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮三盐酸盐

Figure DEST_PATH_161493DEST_PATH_IMAGE065

在浓HCl（10毫升）中加入2-((2-(1-(5-乙基-6-氧代-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸(2S)-苄酯（0.45克；1.0当量）并在50℃下加热1小时。在完成后，浓缩该反应物料，用甲苯提取，研制并用二乙醚、接着DCM和戊烷洗涤。在真空下干燥得到0.39克（90%）灰白色固体状的标题化合物。(ES+): m/z= 572 (M+H)。

实施例12

4-{4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-((R)-1-甲基-哌啶-3-基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮盐酸盐

Figure DEST_PATH_556702DEST_PATH_IMAGE066

在4毫升管瓶中合并叔丁醇钾（1.1当量；321微摩尔；36.8毫克）；IPrPd(acac)Cl（0.1当量；29.2微摩尔；18.4毫克）和和搅拌棒并用氮气吹扫10分钟。加入无水DME（2.5毫升），接着4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（1当量；292微摩尔；50毫克）；(R)-3-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2-哌啶-4-基-咪唑-1-基]-1-甲基-哌啶（1.1当量；321微摩尔；131.8毫克）并加热至80℃18小时。用15毫升水稀释，过滤，并用水漂洗。将该紫色固体溶解在EA中，用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，用无水MgSO₄干燥，过滤，蒸发并在40克硅胶上用2-10 % MeOH/DCM提纯以提供99.6毫克（0.18毫摩尔；63%）游离碱形式的标题化合物。溶解在DCM中，加入1当量在醚中的1M HCl并蒸发以提供101毫克标题化合物。MS (ES+): m/z = 544 (M+H)。

实施例13

4-{4-[1-(2-二甲基氨基-2-甲基-丙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮盐酸盐

合并{2-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2-哌啶-4-基-咪唑-1-基]-1,1-二甲基-乙基}-二甲基胺三盐酸盐（247微摩尔；200毫克）；4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（1.5当量；575微摩尔；97.5毫克）；TEA（1.92毫摩尔；267微升）；DMF（2毫升）并在微波反应器中在160℃下加热30分钟。蒸发并在40克硅胶上用2-7.5 % MeOH/DCM提纯以提供137.3毫克（0.25毫摩尔；66%）游离碱形式的标题化合物。溶解在DCM/MeOH中，加入1当量在醚中的1M HCl并蒸发以提供162.4毫克标题化合物。MS (ES+): m/z = 546 (M+H)。

基本如对4-{4-[1-(2-二甲基氨基-2-甲基-丙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮盐酸盐所述制备下列实施例：

Figure DEST_PATH_273619DEST_PATH_IMAGE069

Figure DEST_PATH_534836DEST_PATH_IMAGE070

。

实施例21

4-{4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1-(2-(异丙基-甲基-氨基)-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5,6-二酮盐酸盐

Figure DEST_PATH_938136DEST_PATH_IMAGE071

合并{2-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-2-哌啶-4-基-咪唑-1-基]-乙基}-异丙基-甲基-胺三盐酸盐（265微摩尔；138毫克）；4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（1.3当量；344微摩尔；58.4毫克）；氮饱和DMF（1毫升）和TEA（10当量；2.65毫摩尔；369微升）并在微波中加热至160℃历时30分钟。蒸发和将该残留物溶解在MeOH中，加载到10 g SCX上；用MeOH，随后DCM洗涤；用2M NH₃/MeOH洗脱。蒸发产生189毫克深红色残留物。将该残留物溶解在7N NH₃/MeOH中并在压力容器中在50℃下搅拌4小时并蒸发。该残留物在40克硅胶上用5-10 % MeOH/DCM提纯两次以提供26.3毫克（0.047毫摩尔；18%）游离碱形式的标题化合物。溶解在DCM中并加入2当量（23.5微升）4M HCl/二氧杂环己烷，蒸发提供27.9毫克标题化合物。MS (ES+): m/z = 560 (M+H)。

实施例22

4-{4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5-吡啶-4-基亚甲基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮

合并{2-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-2-哌啶-4-基-咪唑-1-基]-乙基}-二甲基-胺三盐酸盐（0.5克；0.0013摩尔；1.0当量）；4-氯-5-[1-吡啶-4-基-亚甲基]-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.34克；0.0013摩尔；1.0当量）；DIPEA（1.7毫升；0.0098摩尔；7.6当量）；2-丙醇（15毫升）并在80℃下微波20分钟。冷却并用水稀释。用EA萃取并用盐水洗涤。浓缩该粗制品并通过反相HPLC提纯以产生标题化合物，其为E和Z异构体的混合物（0.04克；5.4 %）。MS (ES+): m/z = 573 (M+H)。（注：所有烯烃化合物都是E和Z异构体的混合物）

以类似于对4-{4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5-吡啶-4-基亚甲基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮描述的方式制备下列实施例。

Figure DEST_PATH_508663DEST_PATH_IMAGE073

Figure DEST_PATH_262993DEST_PATH_IMAGE075

实施例30

4-{4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,5-二甲基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮

在DMF（8.43毫升）中合并2-(4-(3,4-二氟苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基-N,N-二甲基乙胺三盐酸盐（0.28克；0.00064摩尔）、4-氯-5,5-二甲基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.15克；0.00076摩尔）、TEA（0.74毫升；0.0053摩尔）并在微波中在150℃下加热3小时；冷却至RT并在真空下蒸发。用饱和碳酸氢钠溶液淬灭该反应并用EA萃取。蒸发EA层并在填满DCM的二氧化硅柱（60-120目）上首先用2体积10%丙酮/DCM，接着用1-5% MeOH/DCM作为洗脱剂提纯以产生标题化合物（0.05g；15.92%）。MS (ES+): m/ z = 496 (M+H)。

以类似于对4-{4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,5-二甲基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮描述的方式制备下列实施例：

。

实施例32

4-{4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,5-二甲基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮

Figure DEST_PATH_398756DEST_PATH_IMAGE078

将4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶三盐酸盐（0.3克；0.00062摩尔）、4-氯-5,5-二甲基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.16克；0.0008摩尔）、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯（DBU，0.76毫升；0.0051摩尔）合并到IPA（10毫升）中并在120℃下搅拌16小时；冷却并浓缩。用饱和碳酸氢钠溶液淬灭该反应并用EA萃取。蒸发EA层并通过柱色谱法使用0-5% MeOH/DCM作为洗脱剂提纯以提供标题化合物（0.045克；13.5 %）。MS (ES+): m/z = 538 (M+1)。

以类似于对4-{4-[4-(3-氯-4-氟-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,5-二甲基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮描述的方式制备下列化合物：

Figure DEST_PATH_828600DEST_PATH_IMAGE079

。

实施例34

5-苄基-4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮

在乙醇（5毫升）中合并5-亚苄基-4-(4-(1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基)-哌啶-1-基)-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.3克；0.00050摩尔）、PtO₂/C（0.15克；0.00055摩尔）并在氢气囊气氛下在80℃下搅拌16小时。将该反应冷却至RT，经Celite®过滤并浓缩。在硅胶柱上使用在DCM中的甲醇作为洗脱剂提纯以产生标题化合物（105毫克；35 %）。MS (ES+): m/z = 608 (M+1)。

以类似于对5-苄基-4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮描述的方式制备下列实施例：

。

实施例37

4-{4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1H-咪唑-

2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮

将4-(4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1H-咪唑-2-基)-哌啶三盐酸盐（0.3克；0.00065摩尔）、4-氯-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.15克；0.00083摩尔）、DIPEA（1.00毫升，0.0057摩尔）合并到IPA（9毫升）中并在微波中在80℃下加热1小时；冷却并浓缩。用饱和碳酸氢钠溶液淬灭并用EA萃取。蒸发EA并通过柱色谱法使用0-10% MeOH/DCM作为洗脱剂提纯以产生标题化合物（0.05克；15.67 %）。MS (ES+): m/z = 494 (M+1)。

以类似于对4-{4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮描述的方式制备下列实施例：

Figure DEST_PATH_719251DEST_PATH_IMAGE083

Figure DEST_PATH_362722DEST_PATH_IMAGE085

Figure DEST_PATH_760205DEST_PATH_IMAGE086

Figure DEST_PATH_834237DEST_PATH_IMAGE088

Figure DEST_PATH_394532DEST_PATH_IMAGE090

Figure DEST_PATH_87550DEST_PATH_IMAGE091

。

实施例57a

4-{4-[4-(3-二氟甲基-4-氟苯基)-1-(((R)-1-甲基哌啶-2-基)甲基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5-乙基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮

Figure DEST_PATH_241451DEST_PATH_IMAGE092

在压力管中合并(R)-2-((4-(3-(二氟甲基)-4-氟苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-1-甲基哌啶（0.8克，0.0018摩尔，1.0当量）；4-氯-5-乙基-5,7 二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.425克，0.00216摩尔，1.2当量）；DIPEA（2.3毫升，0.0126摩尔，7.0当量）和 IPA (15毫升）并在密封条件下在120℃下加热整夜。冷却该反应物料并用水（25毫升）稀释。在EA（2 x 50毫升）中萃取并用盐水洗涤有机层（2 x 50毫升）。经无水硫酸钠干燥和浓缩该粗制化合物。经短二氧化硅垫（100-200目）使用0-8% MeOH-DCM过滤该粗制品。浓缩粗制品的LCMS显示70%所需产物（m/z = 568 [M+H]）。经反相制备HPLC提纯以获得0.055克标题化合物。MS (ES+): m/z = 568 (M+H)。

类似于对4-{4-[4-(3-二氟甲基-4-氟苯基)-1-(((R)-1-甲基哌啶-2-基)甲基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5-乙基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮描述的方式制备下列实施例：

Figure DEST_PATH_497858DEST_PATH_IMAGE093

。

实施例58

6-{4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-7-甲基-7,9-二氢-嘌呤-8-酮

Figure DEST_PATH_663391DEST_PATH_IMAGE094

在NMP（9毫升）中合并2-(4-(3,4-二氟苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基-N,N-二甲基乙胺.3HCl（0.3克；0.00068摩尔）、6-氯-7-甲基-7,9-二氢-嘌呤-8-酮（0.15克；0.00081摩尔）、DIPEA（1.07毫升；0.0062摩尔）并在微波中在150℃下搅拌45分钟。冷却，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭该反应并用EA萃取。蒸发EA层并在硅胶上使用DCM和甲醇作为洗脱剂提纯以产生标题化合物（0.032克；9.3 %）。

MS (ES+): m/z = 484 (M+1)。

实施例59

6-{4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-7-乙基-7,9-二氢-嘌呤-8-酮

Figure DEST_PATH_979840DEST_PATH_IMAGE095

在甲醇（5毫升）中合并2-(4-(3,4-二氟苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基-N,N-二甲基乙胺.3HCl（0.25克；0.00057摩尔）；6-氯-7-乙基-7,9-二氢-嘌呤-8-酮（0.15克；0.00074摩尔）；TEA（0.46毫升；0.0033摩尔）并在微波中在160℃下加热60分钟。冷却，浓缩，用水淬灭并用EA萃取。蒸发EA层，用硅胶色谱法使用0-10% MeOH/DCM作为洗脱剂提纯该残留物以产生标题化合物（0.03克，10%）。MS (ES+): m/z = 497 (M+1)。

实施例60

4-{4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5-乙基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮

Figure DEST_PATH_480092DEST_PATH_IMAGE096

在IPA（10毫升）中合并2-(4-(3,4-二氟苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基-N,N-二甲基乙胺（0.35克；0.0010摩尔；1.0当量）、4-氯-5-乙基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮（0.23克；0.0011摩尔；1.1当量）、DIPEA（0.72毫升；0.0041摩尔；4.0当量）并在90℃下搅拌16小时。用软化水淬灭该反应并用EA萃取。蒸发有机层，在硅胶柱上用0-10% MeOH/DCM提纯以产生标题化合物（0.13克；24.13 %）。MS (ES+): m/z = 496 (M+H)。

类似于对4-{4-[4-(3,4-二氟-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-基}-5-乙基-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮描述的方式制备下列实施例：

Figure DEST_PATH_968885DEST_PATH_IMAGE098

Figure DEST_PATH_600910DEST_PATH_IMAGE100

Figure DEST_PATH_713091DEST_PATH_IMAGE101

Figure DEST_PATH_757151DEST_PATH_IMAGE103

Figure DEST_PATH_415403DEST_PATH_IMAGE104

Figure DEST_PATH_890247DEST_PATH_IMAGE105

Figure DEST_PATH_465716DEST_PATH_IMAGE107

。

实施例86

4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮

方法A：在压力管中装入4-(4-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-基)-7-(4-甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮（1.00当量；24.46毫摩尔；15.60克）在48% aq HBr（1.39摩尔；156.00毫升）和乙酸（816.72毫摩尔；46.80毫升）中的混合物。将该反应在115℃下搅拌36小时。在玻璃料上过滤，用水（100毫升）洗涤固体。用Na₂HPO₄溶液（10% w/w（312毫升））沉淀滤液并在玻璃料上过滤以获得褐色固体。在真空下干燥固体并悬浮在ACN中，在玻璃料上过滤。将该固体再悬浮在ACN（70毫升）中并在玻璃料上过滤以获得乳白色固体状的标题化合物（11.05毫摩尔；5.72克；45.18%）。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 10.96 (bs, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.02-7.98 (m, 2H), 7.75 (s, 1H), 7.48-7.41 (m, 1H), 4.55-4.47 (m, 2H), 4.05 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.75 (s, 2H), 3.34-3.35 (m, 2H), 3.21-3.07 (m, 3H), 2.59 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.21 (s, 6H), 1.83-1.73 (m, 2H)。

方法B：在压力烧瓶中，装入4-(4-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-基)-7-(2,4-二甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮（1.00当量；148.3毫摩尔；99.0克）在TFA（1.98摩尔；150毫升）和苯甲醚（2.75摩尔；300毫升）中的混合物。在120-125℃下搅拌20小时，随后在140℃下搅拌3小时。冷却至RT并加入DCM（2.5升）和H₂O（2.0升）。用0.5 N HCl（0.5升）漂洗反应烧瓶。用0.3 N HCl（500毫升）萃取有机层。用DCM（500毫升）萃取合并的水层并用0.1N HCl（500毫升）萃取合并的有机层。该分离烧瓶含有焦油状残留物，用DMF将其从烧瓶中洗掉。用DCM（4升）搅拌含有产物的合并的含水酸层，添加NaOH（50%水溶液，130毫升）将pH调节至5。用NaOH（5 N水溶液，25毫升）将该pH进一步调节至11.5-12。分离层并用DCM（2.5升和1.5升）萃取水层两次。合并DCM层并用15% NaCl水溶液（2升）洗涤。用DCM（1升）萃取水层。合并有机层并在真空中蒸发成灰色/粉色固体。用罐子（800毫升）搅拌该固体并加热至60℃以形成浆料。加入水（800毫升）并在加热至60℃。搅拌并达到室温。过滤，用1:1 ACN: 水洗涤，随后用ACN洗涤。在玻璃料上过滤以获得浅粉色固体状的标题化合物（116毫摩尔；60.05克；78.3 %）。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 10.96 (bs, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.02-7.98 (m, 2H), 7.75 (s, 1H), 7.48-7.41 (m, 1H), 4.55-4.47 (m, 2H), 4.05 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.75 (s, 2H), 3.34-3.35 (m, 2H), 3.21-3.07 (m, 3H), 2.59 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.21 (s, 6H), 1.83-1.73 (m, 2H)。

实施例87

结晶4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮半水合物的制备

向配有搅拌棒的20毫升闪烁管中装入211毫克的4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮，接着2毫升3:1 IPA/H₂O溶剂混合物。用12毫克半水合物晶种（参见下列制备）接种该悬浮液。在室温下搅拌（~600 RPM）大约4天。通过真空过滤分离该产物。

半水合物晶种的制备：

向配有搅拌棒的20毫升闪烁管中装入134毫克4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮，接着13毫升THF。在50℃上加热下搅拌（~600 RPM）所得浆料~15分钟直至出现溶解。使用0.25 μm过滤器过滤该温溶液。向该温溶液中逐滴加入5毫升庚烷直至存在混浊。再加入2毫升庚烷以提高收率并将该溶液自然冷却至室温。通过真空过滤分离产物。

X-射线粉末衍射：

在配有CuKa源（λ=1.54056 Å）和Vantec检测器并在40 kV和50 mA下运行的具有0.6 mm散度和检测器狭缝的Bruker D4 Endeavor X-射线粉末衍射仪上进行X-射线粉末衍射分析。在室温下进行该分析。以2θ从4°至40°以0.009的2θ的步长和0.2秒/步的扫描速率扫描样品。

结晶4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮半水合物以包含在7.4、14.9、21.1、19.8和10.5 (± 0.1°2θ)的峰的X-射线粉末衍射图为特征。

¹³C固态NMR：

使用在100.622 MHz的碳频率下运行并配有Bruker 4mm双共振探针的Bruker Avance II 400 MHz NMR能谱仪获得¹³C交叉极化/魔角旋转（CP/MAS）NMR（固态NMR或 SSNMR）谱。TOSS边带抑制与使用SPINAL64去耦（95.4Watts）和RAMP100成型H-核CP脉冲的交叉极化一起使用。采集参数如下：90°质子r.f.脉冲宽度2.5 µs，接触时间为0.5 ms，脉冲重复时间5 s，MAS频率10 kHz，谱宽30 kHz，采集时间为34 ms。化学位移参照在单独实验中的金刚烷（δ = 29.5 ppm）。

结晶4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮半水合物以包含在179.8、156.9、151.9、137.5和33.8 ppm的共振的SSNMR谱为特征。

实施例88

Figure DEST_PATH_164867DEST_PATH_IMAGE109

乙烷-1,1,2-三羧酸三乙基酯：

Figure DEST_PATH_376275DEST_PATH_IMAGE110

将400升丙酮装入反应器。装入71.17千克粉状碳酸钾，使温度保持在25-30℃。将55千克丙二酸二乙酯在搅拌下装入反应器，使温度保持在25-30℃。将该反应加热55-60℃2.5小时。将该反应冷却至50-54℃并将5.225千克碘化钠缓慢添加到该反应器中，使温度保持在52-54℃。缓慢加入71.5千克溴乙酸乙酯，使温度保持在52-54℃。搅拌12-14小时，使温度保持在55-60℃（回流）。将该反应冷却至10-15℃，过滤该反应物料并用110升丙酮（在10-15℃下）洗涤所得滤饼。将该滤液装入反应器，加热至45-50℃并浓缩直至看不到馏出物。对浓缩的馏出物施加真空并在真空（0.4-0.5 mmHg）下以80℃的外部温度蒸馏过量的未反应丙二酸二乙酯。将温度提高至135℃并蒸馏产物以提供45.5千克三乙基乙烷-1,1,2-三羧酸酯（53.72%），通过GC，纯度为93.2%。

2-(4,6-二羟基嘧啶-5-基)乙酸乙酯：

Figure DEST_PATH_942385DEST_PATH_IMAGE111

将394.5升甲醇在室温下装入反应器。将0.3682千克甲醇钠在室温下装入反应器，接着装入乙烷-1,1,2-三羧酸三乙酯（93.31千克）。在室温下搅拌3小时。将该反应加热至40-50℃并在真空下完全馏出甲醇。将263升甲醇在40-50℃下装入反应器并在真空下在40-50℃下完全馏出甲醇。将263升甲醇在40-50℃下装入反应器，缓慢冷却至10-15℃以促进结晶。装入54.54千克甲醇钠，使温度保持在10-15℃。将该反应缓慢加热至RT并搅拌1小时。将26.3千克乙酸甲脒在室温下装入反应器，并缓慢提高该反应物料的温度至回流（65-68℃）。通过使温度保持在65-68℃，搅拌2-9小时。将反应温度缓慢降至10-15℃并通过缓慢添加HCl甲醇溶液（15-18%）来将反应pH调节至1.5-2.0，使温度保持在10-15℃。将该反应冷却至0-5℃并保持1小时。在0-5℃下经离心机过滤所得固体并将湿滤饼旋转干燥30分钟。用26.3升冷甲醇（0-5℃）洗涤湿滤饼并将湿滤饼旋转干燥30分钟。在真空下在40-45℃下干燥该材料以提供固体状的2-(4,6-二羟基嘧啶-5-基)乙酸乙酯（35.65千克，76.6%）。

2-(4,6-二氯嘧啶-5-基)乙酸乙酯：

将525升甲苯和2-(4,6-二羟基嘧啶-5-基)乙酸乙酯（35千克）在室温下装入反应器。将该反应冷却至10-15℃并在使温度保持在10-15℃的同时装入87.5千克三氯氧化磷。将反应器内容物冷却至0-5℃并在使温度保持在0-5℃的同时将38.5千克TEA装入反应器。加热至回流（110-115℃）并搅拌3小时。在110-115℃下在大气压下从该反应中馏出175升甲苯。在45-50℃下装入175升甲苯，随后在110-115℃下在大气压下馏出与装入量相同体积的甲苯。将该反应物料冷却至20-22℃并在使温度保持在20-22℃的同时装入175升水。在20-22℃下搅拌15分钟。通过hyflo从反应器中过滤所得深棕色乳状液（有机层）并收集滤液。用157.5升甲苯洗涤该hyflo床。将底部水层与顶部有机层分离。

用105升甲苯洗涤水层，合并有机层。用175升3%氢氧化钠溶液（2x）洗涤合并的有机层。用175升水（2x）随后用15%盐水溶液（175升）洗涤有机层。装入175升15%盐水溶液。通过使温度保持在45-50℃，在真空下完全蒸馏有机层。将35升己烷加入反应物料，同时使温度保持在45-50℃，并蒸馏该反应（2x）。

将该反应冷却至0-5℃并过滤所得固体。在真空下干燥该材料以提供黄色固体状的2-(4,6-二氯嘧啶-5-基)乙酸乙酯（25千克，59.5%）。

4-氯-7-(2,4-二甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮：

Figure DEST_PATH_666945DEST_PATH_IMAGE113

将175升DMF和2-(4,6-二氯嘧啶-5-基)乙酸乙酯（25千克）在室温下装入反应器。将17.55千克DIPEA经5-10分钟装入反应器，同时使温度保持在25-28℃。将反应器内容物冷却至10-15℃并将该反应搅拌5-10分钟。通过使温度保持在10-15℃，将20.8千克2,4-二甲氧基苄胺装入反应器。将该反应缓慢加热至60-65℃并搅拌3小时。将该反应缓慢冷却至25-28℃并在使温度保持在10-15℃的同时将250升水装入反应器。将该反应物料搅拌10-15分钟，随后将该反应加热至25-28℃。将125升 DCM加入该反应，搅拌15分钟并分离层。用75升DCM洗涤水层。用75升1N HCl溶液，接着水（100升），最后用15%盐水（100升）洗涤合并的有机层。在真空下在45-50℃下蒸馏有机层。将50升己烷在45-50℃下加入该反应并在真空下在45-50℃下蒸馏该反应（2x）。将该反应冷却至0-5℃并搅拌30分钟。过滤所得固体并用50升冷正己烷（0-5℃）洗涤湿滤饼。在真空下在40-45℃下干燥所得固体。将甲苯（375升）、干燥固体和1.025千克对甲苯装入反应器。将该反应加热至85-90℃历时2小时。将该反应冷却至80-85℃并通过添加10%碳酸氢钠溶液来将pH调节至6.5-7.0。在真空下在45-50℃下蒸馏该反应。将反应器内容物冷却至25-28℃，将3X升甲苯加入该反应并加热至85-90℃。搅拌1小时，随后将反应器内容物冷却至25-28℃。进一步冷却至0-5℃并过滤固体。用75升冷甲苯（0-5℃）洗涤湿滤饼。用75升冷水（0-5℃）将该固体制浆并过滤。用37.5升冷水（0-5℃）洗涤湿滤饼并在真空下在40-45℃下干燥该材料以提供4-氯-7-(2,4-二甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮（26.5千克，73%收率，通过HPLC，98.89%纯度）。

2-氨基-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙酮，4-甲基苯磺酸酯：

在冰浴中将2-溴-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙酮（通过HPLC，93%纯度，1000克；3.51摩尔）和THF（5升）冷却至 <5℃。在< 5℃下经1小时逐滴加入叠氮化钠（239克；3.68摩尔，1.05当量）在水（800毫升）中的溶液。在< 5℃下搅拌1小时后，分离和弃置水层。在仍冷时，将有机层经3小时缓慢添加到三苯膦（920.2克，3.51摩尔，1.0当量）、一水合对甲苯磺酸一水合物（1335克，7.02摩尔，2.0当量）和THF（5升）的溶液中。在这种添加全程中使温度保持在< 15℃，固体在该添加过程中沉淀。将该反应混合物在<20℃下搅拌2小时，随后过滤固体，用THF（3 x 2升）洗涤，并在50℃下在真空下干燥以产生1167.4克（85%，针对原材料纯度校正量92%）白色结晶固体状的2-氨基-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙酮，4-甲基苯磺酸酯。HRMS (ESI) m/z (M+H) 222.0531，C₉H₈F₄NO计算值222.0537。

4-(2-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-氧代乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：

合并2-氨基-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙酮，4-甲基苯磺酸酯（1133克；2.88摩尔）、哌啶-1,4-二羧酸单-叔丁酯（795克；3.47摩尔，1.20当量）、THF（3450毫升）和EA（7500毫升）以形成白色稀浆料。在冰浴中将该浆料冷却至< 5℃并加入2-丙膦酸酐（T₃P）（在EtOAc中的50%溶液）（2385克；3.75摩尔，1.3当量）。随后经1小时加入NMM（795毫升；7.21摩尔，2.5当量），使该温度保持< 10℃。将所得浆料升温至环境温度并搅拌2小时。通过添加水来淬灭该反应。分离有机相，随后用NaHCO₃水溶液、NaCl水溶液洗涤。在旋转蒸发器上将有机相升温至50℃并加入正庚烷。在真空下蒸馏溶剂直至最终浆料体积为大约5升。将该浆料冷却至RT并过滤固体，用正-庚烷（2 x 1L）洗涤，随后在真空炉中在50℃下干燥整夜，产生白色固体状的4-(2-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-氧代乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（1124.8克，90%）。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 8.37-8.26 (m, 3H), 7.74-7.68 (m, 1H), 4.61 (d, J= 5.5 Hz, 2H), 3.91 (d, J= 12.9 Hz, 2H), 2.75-2.64 (m, 2H), 2.46-2.37 (m, 1H), 1.69-1.60 (m, 2H), 1.39 (s, 12H)。

4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯：

合并4-(2-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-氧代乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（100克，231毫摩尔）、乙酸铵（178.3克；2.31摩尔，10当量）和甲醇（1000毫升）。用于这种转化的反应器是盘绕的1/16” I.D.不锈钢管（炉中的管的总内体积为541摩尔）。将该反应器在炉中加热至140℃。通过调节器将该管中的背压控制在250 psig以使溶液过热高于其标准沸点。将如上制成的溶液在压力下以6.01毫升/分钟泵过该加热管（在该加热管中提供90分钟的总停留时间）。在溶液离开该炉时，在套管热交换器中将其冷却回20℃。一旦整个溶液经过该反应器（8小时总加工时间），将所得橙色溶液在真空下在30℃下浓缩至600毫升总体积。加入ACN（200毫升）并将该溶液加热至50℃。经2小时在接种下逐滴加入水（700毫升）以使该产物结晶。将所得浆料冷却至20℃并过滤固体，随后用在水中的20% MeOH（2 x 200毫升）洗涤。在真空下在50℃下干燥所得固体。在50℃下将该固体在ACN（200毫升）中再制浆，将该浆料冷却至环境温度，过滤固体并用ACN（100毫升）洗涤以提供灰白色固体状的4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（54.43克，132毫摩尔，57%）。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 12.01 (s, 1H), 8.08-8.04 (m, 2H), 7.70 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 7.49-7.43 (m, 1H), 3.99 (d, J= 12.6 Hz, 2H), 2.92-2.85 (m, 3H), 1.91-1.87 (m, 2H), 1.64-1.51 (m, 2H), 1.41 (s, 9H)。

4-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：

在配有机械搅拌器、氮气入口、干燥管和热电偶的22升3颈圆底烧瓶中装入DMSO（1385毫升）和4-[4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)- 1H -咪唑-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯（206.71克，0.5摩尔，1当量）。将所得悬浮液加热至43-48℃，随后一次性加入氢氧化钠粉末（50克，1.25摩尔，2.5当量）。将所得悬浮液在43-48℃下搅拌1小时。向这种悬浮液中加入2-氯-N,N-二甲基乙胺盐酸盐（90克，0.625摩尔，1.25当量）。将所得悬浮液搅拌35-40分钟。将该反应混合物冷却至18-23℃并加入冷水（227.4毫升）。一旦水添加完成，使反应混合物温度达到20-25℃, 搅拌60-90分钟并过滤该悬浮液。用DMSO（103.4毫升）和水（51.7毫升）的混合物洗涤该固体两次。用水（2 X 517毫升）洗涤该固体并在抽吸过滤器上干燥固体以提供褐色固体状的目标化合物（219.9克，87.5%收率）。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 8.04-8.00 (m, 2H), 7.74 (s, 1H), 7.46 (t, J= 9.9 Hz, 1H), 4.06-3.99 (m, 4H), 3.03-2.93 (m, 3H), 2.57 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H), 1.81-1.77 (m, 2H), 1.70-1.55 (m, 2H), 1.42 (s, 9H)。

2-(4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)-N,N-二甲基乙胺三盐酸盐：

在配有机械搅拌器、热电偶和氮气入口的1升3颈圆底烧瓶中装入乙醇（339.2毫升）并冷却至-5至5℃。以使温度保持在0-15℃的速率逐滴加入纯乙酰氯（78.5克，1摩尔，5当量）。将所得溶液冷却至0-5℃并搅拌30分钟。经5-10分钟加入4-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（96.9克，0.2摩尔，1当量）。将反应溶液升温至RT（发生结晶）并将所得悬浮液在RT下搅拌20-28小时。一旦反应视为完成，过滤该反应混合物并用乙醇（3 x 58毫升），随后用庚烷（2 x 96.9毫升）洗涤固体。在真空下在35-40℃下干燥固体以提供浅褐色固体状的目标化合物 (105.13g, >100%收率）。m/z (M+H): 385.2。

4-(4-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-基)-7-(2,4-二甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮：

合并 2-(4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-1-基)-N,N-二甲基乙胺三盐酸盐（98.76克，1当量）、DMSO（395毫升）和4-氯-7-(2,4-二甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮（1.1当量）。将所得悬浮液加热至60-65℃，随后加入TEA（6当量）。搅拌6小时。以流形式加入DMSO（395毫升）和水（150毫升）并将所得悬浮液在45-38℃下搅拌1小时。过滤该浆料并用DMSO（1体积）和水（1体积）的混合物洗涤该固体两次。用水（3 x 200毫升）、甲醇（3 x 200毫升）和庚烷（3 x 200毫升）进一步洗涤该固体。在过滤器上干燥滤饼以提供褐色固体状的目标化合物（106.5克，79.75%收率）。¹H NMR (400 MHz, DMSO): 8.18 (s, 1H), 7.99-7.95 (m, 2H), 7.71 (s,1H), 7.43-7.39 (m, 2H), 6.76 (d, J=7.1 Hz 1H), 6.54 (d, J= 2 Hz 1H), 6.38- 6.35 (m, 1H) , 4.67 (s, 2H), 4.49 (d, J= 13.1 Hz, 2H), 4.03 (t, J=6.52,2H), 3.89 (s, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.15-3.09 (m, 3H), 2.57 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.18 (s, 6H), 1.89-1.74 (m, 4H)。

4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮三三氟甲磺酸：

合并4-(4-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-基)-7-(2,4-二甲氧基苄基)-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6(7H)-酮（1.00当量；1500克）在DCM（10.125升，6.4体积）中的溶液。过滤除去不溶物并将该滤液冷却至0-5℃。加入苯甲醚（3.0升），接着TFA（3.3升）。将该溶液冷却至0-5℃并搅拌整夜。经10分钟加入三氟甲磺酸（3.3升）（导致放热至~25℃）并搅拌10分钟，接着加热该混合物~30℃并搅拌6小时。将该反应冷却至-18℃并加入水（11.25升）。将所得悬浮液搅拌35分钟并过滤。来自两个反应（如实施例86中所述）的所需悬浮液一起过滤并用水（6升）和DCM（2 x 6升）洗涤合并的固体。将该固体悬浮在水（6升）和DCM（12升）的混合物中并搅拌30分钟。过滤固体并用水（4 x 3升）和DCM（4 x 3升）洗涤以提供褐色固体状的产物4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮三三氟甲磺酸（4062克，93.5%收率）。¹H NMR (400 MHz, d6-DMSO): 11.32 (s, 1H), 9.50 (bs, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.14-8.18 (m, 1H), 7.75-8.12 (m, 1H), 7.76 (t, J=9.2 Hz, 1H), 4.55-4.67 (m, 4H), 3.85 (s, 2H), 3.58-3.65 (m, 3H), 3.16 (t, J= 12 Hz, 2H), 2.95 (s, 6H), 2.00-2.07 (m, 2H), 1.80-2.04 (m, 2H)；¹¹⁹F NMR (400 MHz, d6-DMSO): -60.13 (s, 3F、芳基-CF₃), -77.80 (s, 9F、3 x HOSO₂CF₃), -114.75 (bs, 1F、芳基-F)。

X-射线粉末衍射：在配有CuKa源（λ=1.54056 Å）和Vantec检测器并在35 kV和50 mA下运行的具有0.6 mm散度和检测器狭缝的Bruker D4 Endeavor X-射线粉末衍射仪上进行X-射线粉末衍射分析。在室温下进行该分析。以2θ从4°至40°以0.009的2θ的步长和0.5秒/步的扫描速率扫描样品。

4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮三三氟甲磺酸以包含在22.6、21.7、21.5、21.1、20.4、20.2、18.6、18.5、15.5、15.0和13.2 (±0.1°2θ)的峰的X-射线粉末衍射图为特征。

¹³C固态NMR：如实施例87中所述进行¹³C固态NMR。4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮三三氟甲磺酸以包含在176.9、155.4、150.0、148.0、94.6、57.7、36.4、32.0和27.4 ppm的共振的SSNMR谱为特征。

4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮一水合物：

4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮三三氟甲磺酸（4060克，4.2摩尔，1当量）用水（32.5升，8体积）制浆。加入50%氢氧化钠水溶液（1014克，3.1当量）并在室温下搅拌16小时（pH = 7）。加入50%氢氧化钠水溶液（33.6克，0.1当量）并搅拌1小时（pH=9-10）。过滤所得浆料并用水（4.06升，1体积）洗涤。将固体悬浮在水（20.3升，5体积）中并搅拌1小时。过滤所得浆料并用水（4.06升，1体积）洗涤。将固体悬浮在水（20.3升，5体积）中并搅拌1小时。过滤所得浆料并用水（4.06升，1体积）洗涤。将固体悬浮在水（20.3升，5体积）中并搅拌1小时。在真空下在30-35℃下干燥固体以提供灰白色固体状的4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮一水合物（2087.9克，98.1%）。

¹³C固态NMR：如实施例87中所述进行¹³C固态NMR。4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮一水合物以包含在164.9、150.7、138.3和61.6 ppm的共振的SSNMR谱为特征。

4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮：

4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮一水合物（2056克，1当量）在DCM（25.7升）中制浆。向该浆料中加入4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮（14.4克）作为晶种并加热至回流5小时。将该反应冷却至RT，搅拌30分钟并过滤。用DCM（2 x 4.11升）洗涤所得滤饼并在真空下在37-42℃下干燥该固体以提供灰白色固体状的4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮（1840克，79.18%收率）。¹H NMR (300 MHz, DMSO): 10.96 (bs, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.02-7.98 (m, 2H), 7.75 (s, 1H), 7.48-7.41 (m, 1H), 4.55-4.47 (m, 2H), 4.05 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.75 (s, 2H), 3.34-3.35 (m, 2H), 3.21-3.07 (m, 3H), 2.59 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.21 (s, 6H), 1.83-1.73 (m, 2H)。

实施例89

4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮半琥珀酸酯

将2.5克4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮添加到管瓶中。加入10毫升在甲醇中的1M琥珀酸（过量酸）和2毫升水。在环境温度下制浆至少1小时，取出粉白色浆料并通过真空过滤回收固体。用交替的几份（各～5毫升）新鲜丙酮、甲醇反复漂洗固体，随后用>100毫升（多个等分式样）水最终漂洗。为了制造一水合物，该固体在水中在环境温度下制浆至少24小时并在环境真空炉中干燥整夜。收率：92%。

p70 S6激酶体外酶检测法

使用p70 S6 TranscreenerADP-FP检测法测定对p70 S6激酶靶的化合物IC₅₀值。这种检测法通过测量在激酶反应中形成的二磷酸腺苷（ADP）浓度来评估在化合物抑制剂存在下的p70 S6激酶活性。在96孔半面积黑色聚苯乙烯板中进行激酶反应（25微升反应体积）。添加三磷酸腺苷（ATP）以启动反应。最终反应条件为10毫摩尔浓度N-2-羟基乙基-哌嗪-N’-2-乙磺酸（HEPES）pH 7.5，0.005% TRITON X-100，0.082毫摩尔浓度乙二醇四乙酸（EGTA），1毫摩尔浓度二硫苏糖醇，10毫摩尔浓度氯化镁，4微摩尔浓度底物肽，25微摩尔浓度ATP，活性p70 S6激酶（人重组氨基酸1-421，T412E，N-末端组氨酸标记的），4% DMSO和化合物的系列稀释品（从20,000至1纳摩尔浓度稀释1:3）。在添加ATP后，该反应在室温下培养60分钟，随后添加含52毫摩尔浓度HEPES pH 7.5、20毫摩尔浓度乙二胺四乙酸（EDTA）、0.4摩尔浓度氯化钠、0.02% BRIJ-3510微克/毫升抗-ADP抗体和4纳摩尔浓度ADP Far Red Tracer的25微升淬灭检测试剂以淬灭。将淬灭反应培养4-16小时，随后在Tecan Ultra Evolution读板仪中使用Ex_612nm和Em_633nm波长的偏振滤光片以荧光偏振模式读数。使用制成的ADP/ATP标准曲线将毫偏振(Millipolarization) (mP)原始数据换算成微摩尔浓度ADP（Huss等人, Development of a Transcreener Kinase Assay for Protein Kinase A and Demonstration of Concordance of Data with a Filter-Binding Assay Format, Journal of Biomolecular Screening, 12(4)；2007, 578-584）。使用抑制百分比数据推导各化合物的IC₅₀值，使用相对于板上对照物的微摩尔浓度ADP反应数据计算所述抑制百分比数据（活性酶 vs 100毫摩尔浓度抑制的酶对照物）。该抑制百分比和10点化合物浓度数据随后使用ACTIVITYBASE 4.0（Assay Guidance Manual Version 5.0, 2008, Eli Lilly and Company and NIH Chemical Genomics Center）拟合到四参数逻辑公式中。

所举例的化合物被基本如上所述测试并被测得具有小于或等于0.3μM的IC₅₀值。实施例31被基本如上所述测试并被测得具有0.007μM的IC₅₀。

这表明本发明的化合物是p70 S6激酶抑制剂。

AKT1体外酶检测法

使用AKT1 TranscreenerADP-FP检测法测定对AKT1靶的化合物IC₅₀值。这种检测法通过测量在激酶反应中形成的ADP浓度来评估在化合物抑制剂存在下的AKT1活性。在96孔半面积黑色聚苯乙烯板中进行激酶反应（25微升反应体积）。添加ATP以启动反应。最终反应条件为56毫摩尔浓度HEPES pH 7.4，0.008% TRITON X-100，5毫摩尔浓度氯化镁，30微摩尔浓度Crosstide肽，20微摩尔浓度ATP，hAKT1 Human Recombiant，V-AKT鼠科胸腺瘤病毒癌基因同源物1（组氨酸标记的，在昆虫细胞中表达），4% DMSO和化合物的系列稀释品（从20,000至1纳摩尔浓度稀释1:3）。在添加ATP后，该反应在室温下培养60分钟，随后添加含52毫摩尔浓度HEPES pH 7.5、20毫摩尔浓度EDTA、0.4摩尔浓度氯化钠、0.02% BRIJ-3510微克/毫升抗-ADP抗体和4纳摩尔浓度ADP Far Red Tracer的25微升淬灭检测试剂以淬灭。将淬灭反应培养4-16小时，随后在Tecan Ultra Evolution读板仪中使用Ex_612nm和Em_633nm波长的偏振滤光片以荧光偏振模式读数。使用制成的ADP/ATP标准曲线将毫偏振(Millipolarization) (mP)原始数据换算成微摩尔浓度ADP（Huss等人, Development of a Transcreener Kinase Assay for Protein Kinase A and Demonstration of Concordance of Data with a Filter-Binding Assay Format, Journal of Biomolecular Screening, 12(4)；2007, 578-584）。使用抑制百分比数据推导各化合物的IC₅₀值，使用相对于板上对照物的微摩尔浓度ADP反应数据计算所述抑制百分比数据（活性酶 vs 100毫摩尔浓度抑制的酶对照物）。该抑制百分比和10点化合物浓度数据随后使用ACTIVITYBASE 4.0（Assay Guidance Manual Version 5.0, 2008, Eli Lilly and Company and NIH Chemical Genomics Center）拟合到四参数逻辑公式中。

所举例的化合物被基本如上所述测试并被测得具有小于或等于0.3μM的IC₅₀值。实施例31被基本如上所述测试并被测得具有0.006μM的IC₅₀。这表明本发明的化合物是AKT1抑制剂。

U87MG细胞中磷酸化S6核糖体蛋白（S240/244）和磷酸化GSK3β（S9）的AlphaScreen SureFire检测

使用用于pS6（TGR Biosciences, TGRS6P2S10K）或pGSK3β（TGRGBS10K）的AlphaScreen SureFire®测量化合物对内源性磷酸化S6核糖体蛋白丝氨酸240/244（pS6）和磷酸化GSK3β 丝氨酸 9（pGSK3β）的形成的影响。这是使用磷酸化被分析物的immuno-sandwich capture的均匀检测法，接着使用抗体涂布的Alphascreen珠检测以生成放大信号。

将U87MG细胞保存在由用10%胎牛血清（FBS）、1%非必需氨基酸和1%丙酮酸钠补充的DMEM构成的U87MG培养基中。对该检测法而言，通过标准程序收取细胞，随后使用Vi-Cell计数。将细胞（50,000/孔）在100微升U87MG培养基中接种到Costar #3596 96孔板中。板在37℃，5% CO₂下培养整夜。

在检测日，用在含6% DMSO的培养基中稀释的20微升/孔化合物处理细胞。在37℃下1小时后，移除培养基，每孔加入50微升SureFire溶胞缓冲剂（TGR Biosciences SureFire®试剂盒组分）并在室温下在温和摇振下继续培养10分钟。将溶胞产物（6.0微升）转移到384孔ProxiPlate^TM (Perkin Elmer #6006280)中。对pS6检测法中，将含有1.3微升活化缓冲剂、0.15微升各供体和受体珠粒（Perkin Elmer AlphaScreen IgG检测试剂盒6760617R）和8.3微升用于pS6检测的反应缓冲剂（TGR Biosciences, TGRS6P2S10K）的混合物添加到各孔中。对pGSK3β检测法而言，将含有0.96微升活化缓冲剂、0.19微升各供体和受体珠粒和8.7微升用于pGSK3β检测法的反应缓冲剂（TGR Biosciences, TGRGBS10K）的混合物添加到各孔中。用箔密封该板，在温和摇振下在室温下培养4小时，随后在配有TurboModule的Perkin Elmer EnVision上使用标准AlphaScreen®设定（Ex_680nm和Em_520-620nm）读数。各板上由对照物测得的抑制百分比和10点化合物浓度数据随后使用ACTIVITYBASE 4.0（Assay Guidance Manual Version 5.0, 2008, Eli Lilly and Company and NIH Chemical Genomics Center）拟合到四参数逻辑公式中。

基本如上所述测试下列化合物并测得具有下列活性：

。

这表明本发明的化合物能够抑制p70 S6活性和AKT活性。

细胞增殖检测法

增殖检测法使用CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay System（可购自Promega）以基于所存在的ATP的量化测定培养物中活细胞的细胞数，这传递了代谢活性细胞存在的信号。

除仅含培养基作为空白对照物的列1外，将细胞在50微升体积的培养基（DMEM, 10% FBS, 25 mM HEPES, 1.0 mM丙酮酸钠和0.1 mM非必需氨基酸）中以2000个细胞/孔接种在96孔板中。该板在37℃和5%CO₂下培养整夜。第二天，在DMSO（500X）中以40 mM制备化合物储液并在96孔圆底聚丙烯板中在DMSO中系列稀释。一式两份地在10个浓度下检测化合物，每板4个化合物。

将4微升系列DMSO稀释物转移到96深孔板中并加入1毫升完全培养基以制造用于计量给料的2X储液。将50微升各2X计量给料储液轻轻转移到细胞板的相应孔中，产生0.2% DMSO浓度和100微升最终体积。将50毫升培养基添加到对照列（列12）和背景列（列1）中。用化合物在37℃，5% CO₂下培养细胞72小时。

在培养后，在各孔中加入100微升预制CellTiter-Glo试剂（Promega, Cat: G7571），随后通过在轨道式振荡器上混合来将细胞匀浆2分钟，并在室温下培养10分钟以使发光信号稳定化。在Wallac Victor V读板仪上记录发光原始数据并使用抑制百分比数据生成各化合物的IC₅₀值。将四参数逻辑曲线拟合各剂量响应。

基本如上所述在下列细胞系中测试下列化合物：

Figure DEST_PATH_971335DEST_PATH_IMAGE115

。

这表明本发明的化合物可用于通过涉及p70 S6激酶和/或AKT的机制抑制这些细胞系的增殖。

联合研究：

联合研究使用固定比率法，其中本发明的化合物与其它治疗剂以对应于单试剂的IC50当量的固定浓度比率存在。该联合研究读出是使用Cell Titer Glo试剂的各细胞系中的细胞增殖。类似地处理对照物，但不使用本发明的化合物或其它治疗剂。根据Zhao等人, Clinical Cancer Research, 10, 7994-8004 (2004) 描述的方法利用网络工具进行数据分析。根据下列公式针对一系列细胞增殖抑制活性水平计算联合指数。

在活性水平x下的联合指数 =

[在其它治疗剂的活性水平x/ICx下该联合中其它治疗剂的浓度] + [在本发明的化合物的活性水平x/ICx下该联合中本发明的化合物的浓度]

为清楚起见，下面概括在50%抑制下的联合指数值。

Figure DEST_PATH_127510DEST_PATH_IMAGE116

p70 S6K/AKT体内靶抑制的测定

将U87MG人成胶质细胞瘤细胞（5 x 10₆）在0.2毫升基质胶中皮下移植到无胸腺裸鼠的胁腹中。移植后两周，依据一定时程、单剂/单时间点或用于测定TMED₅₀（阈最小有效剂量）的剂量响应程序经口或肠胃外向小鼠给药。肿瘤在收取后快速冷冻并在剂量响应研究的情况下收集血液以测定母体化合物血浆暴露和计算TMEC₅₀（阈最小有效浓度）。肿瘤或组织在液氮中粉化并使用Lysing Matrix D管（MP Biomedicals, Solon, OH、cat# 6913-500）和BIO101 Thermo Savant Fast Prep FP12在400微升XY溶胞缓冲液（10微克/毫升亮抑酶肽、10微克/毫升胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制剂、10微克/毫升甲苯磺酰基苯基-丙氨酰氯甲基酮、10微克/毫升抑肽酶、60 mM β甘油磷酸酯、1% Triton X100、25 mM Tris pH 7.5、2.5 mM焦磷酸盐、150 mM NaCl、2 mM p-甲苯磺酰基-L-精氨酸甲酯、15 mM对硝基苯磷酸盐、5 mM苄脒、1 mM钒酸钠、10 mM NaF、50微克/毫升苯基-甲磺酰基氟、1 mM 1,4-二硫苏糖醇 (DTT)、15 mM EDTA pH 8.0、5 mM EGTA pH 8.0、1 µM微囊藻素、1 µM冈田酸和每10毫升1 个Roche完整蛋白酶抑制剂小片）中溶胞。将溶胞产物等分并立即检测或储存在-80℃以供后继测试。采用Meso Scale Discovery (Gaithersburg, MD) ELISA技术测量p70 S6K和AKT的体内靶抑制以评估对下游效应子S6RP的丝氨酸 240/244位点的磷酸化的影响。也使用这种技术在多路格式中评估p70 S6K(T389)、AKT(S473)和GSK3β(S9)的磷酸化。总之，将20微克溶胞产物添加到含有用适当捕获抗体预染的96孔板的碳电极中。使用钌标记的检测抗体探测相关蛋白。在含有共反应物TPA的读取缓冲剂存在下电流通过电极时，电化学发光导致产生光，其使用MSD Sector 6000仪器量化和记录。对于各研究，相对于赋形剂对照组计算抑制百分比并使用测定统计显著性用的JMP软件套装进行ANOVA分析。

基本如上文在体内靶抑制检测法中所述测试实施例31并测得具有下列活性：

Figure DEST_PATH_924565DEST_PATH_IMAGE117

。

这表明本发明的化合物可用于体内抑制p70 S6激酶和AKT。

HERG检测法

在放射性配体结合检测法中评测化合物对转染HEK-293细胞中的人HERG K⁺通道的亲合力。在含有50 mM Tris-HCl（pH 7.4）、10 mM KCl、1.2 mM MgCl₂和0.1%牛血清白蛋白（BSA）的缓冲液中，在不存在或存在受试化合物的情况下，在22℃下用2 nM [³H]阿司咪唑培养细胞膜匀浆（40微克蛋白质）75分钟。在存在10 µM阿司咪唑的情况下测定特异性结合。在培养后，样品在真空下通过用0.3% PEI预浸泡的玻璃纤维过滤器（GF/B, Packard）快速过滤，并使用96样品细胞收集器（Unifilter, Packard）用冰冷的50 mM Tris-HCl漂洗数次。将过滤器干燥，随后在闪烁计数器（Topcount, Packard）中用闪烁合剂（Microscint 0, Packard）计数放射性。结果以对照放射性配体特异性结合的抑制百分比表达。标准参照化合物是阿司咪唑，其在各实验中在几种浓度下测试以获得竞争曲线，由其计算其IC₅₀。(Finalayson等人, [³H]dofetilide binding in SHSY5Y and HEK293 cells expressing a HERG-like K⁺ channels, Eur. J. Pharmacol., 412: 203 (2001))。

基本如上所述测试实施例37并测得具有13.9μM的IC₅₀。

本发明的优选化合物具有低hERG活性。

Claims

1.下式的化合物或其可药用盐：

其中：

X是F、Cl、CF₃、CN或H；

Y是F、H或Cl；

R¹和R²独立地为H、C₁ - C₄烷基或CH₂CH₂OH；或R¹和R²与和它们相连的氮原子一起形成任选在2-位被羟甲基或在3-位被羟基取代的吡咯烷环，或在3-位被羟基取代的氮杂环丁烷环；

R³是H或OH；

R⁶是H；或R⁶和R²与和R²相连的氮原子一起形成哌啶环；

W是CR⁴R⁵、NR¹⁰、C=O或C=CH-R⁹；

R¹⁰是H或C₁-C₃烷基。

2.根据权利要求1的化合物或其可药用盐，其中Y是F。

3.根据权利要求1或权利要求2的化合物或其可药用盐，其中X是Cl、CF₃或F。

4.根据权利要求1至3任一项的化合物或其可药用盐，其中W是CR⁴R⁵。

5.根据权利要求4的化合物或其可药用盐，其中R⁴和R⁵独立地为H或CH₃，或R⁴和R⁵与和它们相连的碳原子一起形成环戊烷环。

6.根据权利要求1至3任一项的化合物或其可药用盐，其中W是NR¹⁰。

7.根据权利要求1至3任一项的化合物或其可药用盐，其中W是C=CH-R⁹。

8.根据权利要求7的化合物或其可药用盐，其中R⁹是5-噻唑基。

9.根据权利要求1至8任一项的化合物或其可药用盐，其中R¹和R²独立地为H、C₁ - C₄烷基或CH₂CH₂OH；或R¹和R²与和它们相连的氮原子一起形成任选在2-位被羟甲基或在3-位被羟基取代的吡咯烷环。

10.根据权利要求1至9任一项的化合物或其可药用盐，其中R³是H。

11.根据权利要求1的化合物，其是4-{4-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-4-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]哌啶-1-基}-5,7-二氢-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-6-酮或其可药用盐。

12.包含根据权利要求1至11任一项的化合物或其可药用盐和可药用载体、稀释剂或赋形剂的药物制剂。

13.根据权利要求1至11任一项的化合物或其可药用盐，用于治疗。

14.根据权利要求1至11任一项的化合物或其可药用盐，用于治疗多形性成胶质细胞瘤。

15.治疗哺乳动物的多形性成胶质细胞瘤的方法，包括给予需要这种治疗的哺乳动物有效量的根据权利要求1至11任一项的化合物或其可药用盐。

16.包含根据权利要求1至11任一项的化合物或其可药用盐的用于治疗的药物组合物。

17.用于治疗多形性成胶质细胞瘤的药物组合物，其包含根据权利要求1至11任一项的化合物或其可药用盐。