CN102199185A - 重楼皂苷ⅰ的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种重楼皂苷I的制备方法，由如下步骤组成：(1)取重楼，用乙醇水溶液浸泡、加热回流提取，过滤；(2)过滤液减压浓缩，离心，得到上清液和沉淀，沉淀作为样品A；(3)上清液通过大孔吸附树脂柱，用乙醇水溶液洗脱，收集70％-85％的乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩，作为样品B；(4)将样品A与B混合，用柱层层析正相硅胶色谱柱进行纯化，得到重楼皂苷I即薯蓣皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-[a-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。本发明的方法有机溶剂用量少，不污染环境，节约成本，适合工业生产。
Description
技术领域
本发明涉及重楼皂苷I的制备方法。
背景技术
重楼，又称七叶一枝花，是百合科重楼属植物的泛称，以蚤体之名首载于《神农本草经》。本品味苦，性微寒，有小毒，归肝经，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效，用于痈疮、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌打伤痛、凉风抽筋等症。关于重楼总皂苷的抗肿瘤作用的文献报道很多。
中国中药杂志，2008，33(16)：2057-2060公开了滇重楼皂苷对10种肿瘤细胞株的细胞毒谱及构效关系研究；王羽等在中国中药杂志，2007，32(14)：1425-1428)发表了滇重楼的抗肿瘤活性成分研究；程志祥等对重楼总皂苷作用人肝癌细胞系HepG2的细胞毒性作用及蛋白组学进行了研究。重楼皂苷I(薯蓣皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-[a-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷)是总皂苷中含量最大的皂苷，有研究发现重楼皂苷I在0.31-5pg/ml浓度范围内对Bel-7402细胞的增殖均有抑制作用，并呈现出明显的时间剂量依赖效应关系。
重楼皂苷I能诱导肿瘤细胞凋亡，流式检测在浓度为1.25/ml作用后可出现明显的凋亡峰，作用时间越长，凋亡率越高；DNA凝胶电泳可见DNA断裂片段明显增多；重楼皂苷I对A549肺癌细胞的增殖也有很强的抑制作用。同时，中国专利200810172416.6公布了一种重楼皂苷I的制备方法，但是该方法有机溶剂使用量大，污染环境，消耗能源，且步骤繁琐。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种重楼皂苷I的制备方法。
重楼皂苷I的制备方法，由如下步骤组成：
(1)取重楼，用体积百分浓度为60％-85％的乙醇水溶液浸泡、加热回流提取，所述乙醇水溶液的重量为重楼重量的4～10倍，提取2～3次，每次1～3小时，过滤；
(2)过滤液减压浓缩至室温下相对密度为0.93～1.0，离心，得到上清液和沉淀，沉淀作为样品A；
(3)上清液通过大孔吸附树脂柱，依次用体积百分浓度为50％～60％的乙醇水溶液、70％～85％的乙醇水溶液洗脱，收集70％-85％的乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至25℃相对密度为1.5，作为样品B；
(4)将样品A与B混合，用柱层层析正相硅胶色谱柱进行纯化，得到重楼皂苷I即薯蓣皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-[a-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。
所述大孔吸附树脂为弱极性或非极性的聚苯乙烯型树脂。
所述弱极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂的型号为AB-8或DM130。
所述非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂的型号为D101、X-5、HPD-100或D1300。
本发明的方法有机溶剂用量少，不污染环境，节约成本，适合工业生产，重楼皂苷I的得率为不小于药材重量的0.05％，回收率不低于60％，纯度不低于90％。
具体实施方式
下面的实施例可以使本领域的技术人员理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
重楼皂苷I的制备方法，由如下步骤组成：
(1)取重楼，用体积百分浓度为60％的乙醇水溶液浸泡、加热回流提取，所述乙醇水溶液的重量为重楼重量的4倍，提取3次，每次1小时，过滤；
(2)过滤液减压浓缩至室温下相对密度为1.0，离心，得到上清液和沉淀，沉淀作为样品A；
(3)上清液通过X-5型大孔吸附树脂柱(干树脂重量∶重楼药材重量≈1∶4)，依次用1.5倍树脂床体积(BV)的体积百分浓度为50％的乙醇水溶液、3BV的体积百分浓度为70％的乙醇水溶液洗脱，收集70％的乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至25℃相对密度为1.5，作为样品B；
(4)将样品A与B混合，加入等重量的硅胶并混合均匀，减压干燥，得拌样硅胶；将拌样硅胶填入装有为其重量20倍柱层层析正相硅胶的色谱柱的顶端，用体积比为78∶22的二氯甲烷、甲醇混合溶剂进行洗脱，用硅胶G板对洗脱液在线进行检测，收集含有重楼皂苷I的洗脱液，减压浓缩、干燥。即得重楼皂苷I即薯蓣皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-[a-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。重楼皂苷I的得率为不小于药材重量的0.05％，回收率大于60％，纯度高于90％。
实施例2
重楼皂苷I的制备方法，由如下步骤组成：
(1)取重楼，用体积百分浓度为65％的乙醇水溶液浸泡、加热回流提取，所述乙醇水溶液的重量为重楼重量的6倍，提取2次，每次3小时，过滤；
(2)过滤液减压浓缩至室温下相对密度为0.95，离心，得到上清液和沉淀，沉淀作为样品A；
(3)上清液通过D101型大孔吸附树脂柱(干树脂重量∶重楼药材重量≈1∶4)，依次用1.2倍树脂床体积(BV)的体积百分浓度为55％的乙醇水溶液、2.5BV的体积百分浓度为75％的乙醇水溶液洗脱，收集75％的乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至25℃相对密度为1.5，作为样品B；
(4)将样品A与B混合，加入等重量的硅胶并混合均匀，减压干燥，得拌样硅胶；将拌样硅胶填入装有为其重量30倍柱层层析正相硅胶的色谱柱的顶端，用体积比为78∶22的二氯甲烷、甲醇混合溶剂进行洗脱，用硅胶G板对洗脱液在线进行检测，收集含有重楼皂苷I的洗脱液，减压浓缩、干燥。即得重楼皂苷I即薯蓣皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-[a-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。重楼皂苷I的得率为不小于药材重量的0.05％，回收率大于60％，纯度高于90％。
实施例3
重楼皂苷I的制备方法，由如下步骤组成：
(1)取重楼，用体积百分浓度为70％的乙醇水溶液浸泡、加热回流提取，所述乙醇水溶液的重量为重楼重量的8倍，提取2次，每次3小时，过滤；
(2)过滤液减压浓缩至室温下相对密度为0.97，离心，得到上清液和沉淀，沉淀作为样品A；
(3)上清液通过AB-8型大孔吸附树脂柱(干树脂重量∶重楼药材重量≈1∶4)，依次用1倍树脂床体积(BV)的体积百分浓度为60％的乙醇水溶液、2.5BV的体积百分浓度为80％的乙醇水溶液洗脱，收集80％的乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至25℃相对密度为1.5，作为样品B；
(4)将样品A与B混合，加入等重量的硅胶并混合均匀，减压干燥，得拌样硅胶；将拌样硅胶填入装有为其重量40倍柱层层析正相硅胶的色谱柱的顶端，用体积比为78∶22的二氯甲烷、甲醇混合溶剂进行洗脱，用硅胶G板对洗脱液在线进行检测，收集含有重楼皂苷I的洗脱液，减压浓缩、干燥。即得重楼皂苷I即薯蓣皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-[a-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。重楼皂苷I的得率为不小于药材重量的0.05％，回收率大于60％，纯度高于90％。
实施例4
重楼皂苷I的制备方法，由如下步骤组成：
(1)取重楼，用体积百分浓度为75％的乙醇水溶液浸泡、加热回流提取，所述乙醇水溶液的重量为重楼重量的8倍，提取3次，每次2小时，过滤；
(2)过滤液减压浓缩至室温下相对密度为0.98，离心，得到上清液和沉淀，沉淀作为样品A；
(3)上清液通过DM130型大孔吸附树脂柱(干树脂重量∶重楼药材重量≈1∶4)，依次用1.3倍树脂床体积(BV)的体积百分浓度为55％的乙醇水溶液、2.5BV的体积百分浓度为75％的乙醇水溶液洗脱，收集75％的乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至25℃相对密度为1.5，作为样品B；
(4)将样品A与B混合，加入等重量的硅胶并混合均匀，减压干燥，得拌样硅胶；将拌样硅胶填入装有为其重量50倍柱层层析正相硅胶的色谱柱的顶端，用体积比为78∶22的二氯甲烷、甲醇混合溶剂进行洗脱，用硅胶G板对洗脱液在线进行检测，收集含有重楼皂苷I的洗脱液，减压浓缩、干燥。即得重楼皂苷I即薯蓣皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-[a-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。重楼皂苷I的得率为不小于药材重量的0.05％，回收率大于60％，纯度高于90％。
实施例5
重楼皂苷I的制备方法，由如下步骤组成：
(1)取重楼，用体积百分浓度为80％的乙醇水溶液浸泡、加热回流提取，所述乙醇水溶液的重量为重楼重量的9倍，提取3次，每次1小时，过滤；
(2)过滤液减压浓缩至室温下相对密度为0.96，离心，得到上清液和沉淀，沉淀作为样品A；
(3)上清液通过HPD-100型大孔吸附树脂柱，(干树脂重量∶重楼药材重量≈1∶4)，依次用1倍树脂床体积(BV)的体积百分浓度为60％的乙醇水溶液、2BV的体积百分浓度为80％的乙醇水溶液洗脱，收集80％的乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至25℃相对密度为1.5，作为样品B；
(4)将样品A与B混合，加入等重量的硅胶并混合均匀，减压干燥，得拌样硅胶；将拌样硅胶填入装有为其重量60倍柱层层析正相硅胶的色谱柱的顶端，用体积比为78∶22的二氯甲烷、甲醇混合溶剂进行洗脱，用硅胶G板对洗脱液在线进行检测，收集含有重楼皂苷I的洗脱液，减压浓缩、干燥。即得重楼皂苷I即薯蓣皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-[a-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。重楼皂苷I的得率为不小于药材重量的0.05％，回收率大于60％，纯度高于90％。
实施例6
(1)取重楼，用体积百分浓度为85％的乙醇水溶液浸泡、加热回流提取，所述乙醇水溶液的重量为重楼重量的10倍，提取2次，每次2小时，过滤；
(2)过滤液减压浓缩至室温下相对密度为0.93，离心，得到上清液和沉淀，沉淀作为样品A；
(3)上清液通过D1300型大孔吸附树脂柱，(干树脂重量∶重楼药材重量≈1∶4)，依次用1.5倍树脂床体积(BV)的体积百分浓度为55％的乙醇水溶液、2BV的体积百分浓度为85％的乙醇水溶液洗脱，收集85％的乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至25℃相对密度为1.5，作为样品B；
(4)将样品A与B混合，加入等重量的硅胶并混合均匀，减压干燥，得拌样硅胶；将拌样硅胶填入装有为其重量50倍柱层层析正相硅胶的色谱柱的顶端，用体积比为78∶22的二氯甲烷、甲醇混合溶剂进行洗脱，用硅胶G板对洗脱液在线进行检测，收集含有重楼皂苷I的洗脱液，减压浓缩、干燥。即得重楼皂苷I即薯蓣皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-[a-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。重楼皂苷I的得率为不小于药材重量的0.05％，回收率大于60％，纯度高于90％。
Claims (4)
1.重楼皂苷I的制备方法，其特征由如下步骤组成：
(1)取重楼，用体积百分浓度为60％-85％的乙醇水溶液浸泡、加热回流提取，所述乙醇水溶液的重量为重楼重量的4～10倍，提取2～3次，每次1～3小时，过滤；
(2)过滤液减压浓缩至室温下相对密度为0.93～1.0，离心，得到上清液和沉淀，沉淀作为样品A；
(3)上清液通过大孔吸附树脂柱，依次用体积百分浓度为50％～60％的乙醇水溶液、70％～85％的乙醇水溶液洗脱，收集70％-85％的乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至25℃相对密度为1.5，作为样品B；
(4)将样品A与B混合，用柱层层析正相硅胶色谱柱进行纯化，得到重楼皂苷I即薯蓣皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-[a-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。
2.根据权利要求1所述的重楼皂苷I的制备方法，其特征在于所述大孔吸附树脂为弱极性或非极性的聚苯乙烯型树脂。
3.根据权利要求2所述的重楼皂苷I的制备方法，其特征在于所述弱极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂的型号为AB-8或DM130。
4.根据权利要求2所述的重楼皂苷I的制备方法，其特征在于所述非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂的型号为D101、X-5、HPD-100或D1300。
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