CN102178687B - 精氨酸糖苷的制备方法 - Google Patents
精氨酸糖苷的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102178687B CN102178687B CN2011100388437A CN201110038843A CN102178687B CN 102178687 B CN102178687 B CN 102178687B CN 2011100388437 A CN2011100388437 A CN 2011100388437A CN 201110038843 A CN201110038843 A CN 201110038843A CN 102178687 B CN102178687 B CN 102178687B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acetic acid
- afg
- arginine
- eluate
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 title claims abstract description 22
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 22
- -1 arginine glucoside Chemical class 0.000 title claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 6
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 title abstract 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 73
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims abstract description 28
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims abstract description 12
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 239000002683 reaction inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims abstract description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical group [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 20
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 12
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims description 12
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 claims description 10
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 14
- 239000000843 powder Substances 0.000 abstract description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 9
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract description 6
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 abstract description 5
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 3
- 241000544912 Melanoides Species 0.000 abstract description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 abstract 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 abstract 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract 1
- HIMXGTXNXJYFGB-UHFFFAOYSA-N alloxan Chemical compound O=C1NC(=O)C(=O)C(=O)N1 HIMXGTXNXJYFGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 34
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 34
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 31
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 28
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 14
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 13
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 12
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 11
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 11
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 7
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 6
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 6
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 6
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 6
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 5
- 229930182837 (R)-adrenaline Natural products 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 229960005139 epinephrine Drugs 0.000 description 5
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- NAHBVNMACPIHAH-HLICZWCASA-N p-ii Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H]2CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=3C=CC=CC=3)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)=O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 NAHBVNMACPIHAH-HLICZWCASA-N 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- ATADHKWKHYVBTJ-FVGYRXGTSA-N (R)-adrenaline hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 ATADHKWKHYVBTJ-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 3
- MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 18beta-glycyrrhetic acid Chemical compound C([C@H]1C2=CC(=O)[C@H]34)[C@@](C)(C(O)=O)CC[C@]1(C)CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@H](O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 108010005094 Advanced Glycation End Products Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 2
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 2
- YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N Rosiglitazone Chemical compound C=1C=CC=NC=1N(C)CCOC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 2
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 1
- 108010001394 Disaccharidases Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000007241 Experimental Diabetes Mellitus Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000594182 Sarcophaga sigma Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282894 Sus scrofa domesticus Species 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001943 adrenal medulla Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011609 ammonium molybdate Substances 0.000 description 1
- APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P ammonium molybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 1
- 229940010552 ammonium molybdate Drugs 0.000 description 1
- 235000018660 ammonium molybdate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 230000001466 anti-adreneric effect Effects 0.000 description 1
- 229940127003 anti-diabetic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 102000012740 beta Adrenergic Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010079452 beta Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 description 1
- 150000003943 catecholamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000001904 diabetogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxomagnesium;hydrate Chemical compound O.[Mg]=O.[Mg]=O.[Mg]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- IHZDYHDJAVUIBH-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenarsenate Chemical compound [Na+].[Na+].O[As]([O-])([O-])=O IHZDYHDJAVUIBH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960004580 glibenclamide Drugs 0.000 description 1
- 230000003087 glucogenic effect Effects 0.000 description 1
- ZNNLBTZKUZBEKO-UHFFFAOYSA-N glyburide Chemical compound COC1=CC=C(Cl)C=C1C(=O)NCCC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(=O)NC2CCCCC2)C=C1 ZNNLBTZKUZBEKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004116 glycogenolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N metformin Chemical compound CN(C)C(=N)NC(N)=N XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003105 metformin Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- 229960003243 phenformin Drugs 0.000 description 1
- ICFJFFQQTFMIBG-UHFFFAOYSA-N phenformin Chemical compound NC(=N)NC(=N)NCCC1=CC=CC=C1 ICFJFFQQTFMIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 229960004586 rosiglitazone Drugs 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L sodium dithionite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])=O JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000012109 statistical procedure Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开一种精氨酸糖苷的制备方法,将精氨酸与麦芽糖置入冰醋酸中,加入美拉德反应抑制剂,反应10分钟到2小时得总反应物;将总合成物低温真空浓缩至浸膏,硅胶干法拌样,挥去醋酸,过200~300目硅胶湿柱,50-90%乙醇洗脱,收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液部分,低压浓缩,冷冻干燥成粉末,溶于醋酸水溶液中,过聚丙烯酰胺柱以醋酸水溶液洗脱,收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥即得。本发明提高合成中AFG的转化率,降低反应副产物的产生,减少美拉德反应终产物类黑素的生成,从而大幅降低AFG分离纯化成本;提供了AFG在预防及治疗1型糖尿病和2型糖尿病的医学作用。
Description
技术领域
本发明公开一种精氨酸糖苷的制备方法,还公开了AFG在治疗1型、2型糖尿病及其并发症药物的应用,属于中医药学技术领域。
背景技术
糖尿病是一种需长期治疗的慢性疾病。西医治疗糖尿病是口服降糖药物如格列本脲、二甲双胍、罗格列酮等药物,必要时给予胰岛素,主要通过降低血糖或调节代谢分泌紊乱达到治疗疾病的目的。但长期服用降糖药会产生严重的抗药性、过敏性休克、低血糖,并引起肝肾损伤等不良反应等。针对这种慢性消耗性疾病不仅要依靠药物治疗,更主要是要求改变不良的生活习惯,同时服用补充治疗剂。
本发明涉及的精氨酸糖苷(简称:AFG)化学名为:1-(精氨酸-N α基)-1-去氧-4-O-(α-D-吡喃葡萄糖基)-D-果糖,AFG在天然动植物中的含量有限,且提纯颇具难度,在文献报道的AFG合成方法:精氨酸与麦芽糖质量比为1:2或1:4,反应时间1h,反应温度80℃,溶剂为冰醋酸。AFG制备过程中涉及的美拉德反应中,反应的速率与反应底物的结构有着很大的关系,就还原糖褐变速率而言:五碳糖>六碳糖>双糖就氨基化合物而言,胺类>碱性氨基酸>中性氨基酸。而AFG是由六碳糖和碱性氨基酸反应而得,要提高AFG产率的同时也产生了大量的副产物,而降低副产物的量的同时AFG的转化率也随之降低,所以有效的控制反应只发生在初级阶段产生大量的AFG,而不使其进一步进入高级反应阶段。其合成率大约有15%-28%左右,同时有大量副产物产生,给后期纯化工作带来很大困难。因此,制约了AFG在医药方面的实用推广。
经检索目前还未见AFG在治疗治疗1型糖尿病和2型糖尿病药物中的应用。
发明内容
本发明公开一种精氨酸糖苷的制备方法,为一种新的合成方法,具有合成率高,分离纯化成本低等特点,使该化合物具有药用价值,适于工业化生产。
本发明还公开了精氨酸糖苷及其组合物在制备治疗1型糖尿病和2型糖尿病药物中的新用途。
本发明精氨酸糖苷的制备方法,包括以下步骤:
1)将精氨酸与麦芽糖以1:(2-6)的重量比例置入2-8倍量的冰醋酸中,加入美拉德反应抑制剂,精氨酸与抑制剂质量比为1:(0.1-3),在50-100℃条件下,反应10分钟到2小时得总反应物;
2)将总合成物低温真空浓缩至浸膏,硅胶干法拌样,挥去醋酸,过200~300目硅胶湿柱,50-90%乙醇洗脱,收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液部分,低压浓缩,冷冻干燥成粉末,溶于1-8倍量的0.2%醋酸水溶液中,过聚丙烯酰胺柱以0.2%醋酸水溶液洗脱,收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥即得。
所述的美拉德反应抑制剂选自:亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、保险粉中的任意一种。
本发明中的药物,其中含AFG纯品5%-55%,还含有氨基酸、微量元素、美拉德反应终产物等。本领域技术人员可以理解到,这些物质的存在会维持或者增强本发明的药物的作用。
以下实验表明本发明提供的
AFG
在治疗
1
型和
2
型糖尿病的临床用途:
试验例
1
AFG
对四氧嘧啶
(ALX)
所致糖尿病小鼠的作用(
1
型)
1
实验材料与方法
1.1材料与试剂
精氨酸衍生物: AFG自制,纯度98%。
昆明小鼠,SPF级别雌鼠,(20 ± 2)g,吉林大学动物实验中心提供。
血糖仪:OneTouch®UltraEasy 美国强生公司,9 5 % 乙醇、氨水、盐酸、氢氧化钠、葡萄糖、无水磷酸氢二钠、无水硫酸钠、钼酸铵、砷酸氢二钠,均为分析纯试剂,北京化工厂。生理盐水,长春豪邦药业有限公司。PH4.6磷酸缓冲液(溶解四氧嘧啶用)四氧嘧啶(Alloxan):美国Sigma公司出品。
1.2 方法
四氧嘧啶糖尿病小鼠的建模与分组:60只雌性昆明种小鼠适应性喂养1周后,随机分为2组,第1组8只为正常对照组(N),第2组50只为造模组。模型制备时小鼠禁食不禁水12 h,腹腔注射四氧嘧啶,以生理盐水配成2% 溶液(现配现用),200 mg/kg注射后自由进食,72 h后尾静脉取血,测定血糖值(mmol/L),取血糖值>10 mmol/L为建模成功。将建模小鼠随机分为每组8只的糖尿病模型组(M),AFG高剂量组(AFGH),中剂量组(AFGM),低剂量组(AFGL)。AFG高、中、低剂量组灌胃10、30、50 mg/kg·d。
(1)饮食﹑饮水量的测定:从小鼠分组开始,每天对各组的饮食﹑饮水量进行记录并进行统计学处理。
(2)体重的测定:每周定时称量体重。
(3)血糖测定:用血糖仪进行测定。
统计分析 各组实验数据以x ±s表示,采用SPSS统计软件方差分析,用ANOVA分析法进行组间比较。P<0.05为具有统计学意义,P<0.01差异非常显著。
2. 结果及讨论
四氧嘧啶是一种特异的胰岛β细胞毒剂,可选择性地作用于小鼠胰岛β细胞,促进氧自由基释放,进而破坏胰岛β细胞,使细胞DNA损伤,最终导致胰岛素释放减少,空腹血糖升高,形成糖尿病模型。
四氧嘧啶能够选择性被胰腺细胞所摄取,引起细胞坏死造成胰岛素分泌不足而导致糖尿病。饮水量与模型组相比,结果见表1及附图1,中剂量组饮水量与模型组比较明显下降(P<0.01)差异非常显著;摄食量与模型组相比,低、中剂量组摄食量与模型组比较,均有明显下降,结果见表2及附图2;体重与模型组相比,高、中、低3个剂量组体重均有明显上升,结果见表3及附图3;AFG组空腹血糖与模型组相比,中、低2个剂量组,均明显下降,结果见表4及附图4;
表1 AFG对糖尿病小鼠饮水量的影响
实验组与模型组比较,P<0.05差异显著* P<0.01差异非常显著**
表2 AFG对糖尿病小鼠摄食量的影响
实验组与模型组比较,P<0.05差异显著 * P<0.01差异非常显著 *
*表3 AFG对糖尿病小鼠体重的影响
实验组与模型组比较,P<0.05差异显著 * P<0.01差异非常显著 **
表4 AFG对糖尿病小鼠血糖的影响
实验组与模型组比较,P<0.05差异显著 * P<0.01差异非常显著 **
试验例
2
AFG
对链脲佐菌素(
STZ
)所致糖尿病大鼠的作用(
2
型)
实验动物
清洁级Wistar大鼠,雌雄各半,体重180~220 g;雄性ICR小鼠,清洁级,体重18~22g,均由吉林大学实验动物中心提供,动物合格证号:SCXK(吉)2007-0003。在室温(18~25)℃,相对湿度50%~80%的环境条件下饲养。
药物与试剂
AFG样品1:纯度50%,4℃保存,临用时以蒸馏水配制所需浓度。消渴丸,批号:Z44020045,广州中一药业有限公司生产。链脲霉素(STZ),Sigma公司生产,批号s20130,用时以0.1mol/ L,pH 4.4柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制成1 %的溶液(0.1M柠檬酸缓冲液:0.26M柠檬酸,0.32M磷酸氢二钠,按照3:4体积比混合),避光、冰浴、现用现配。四氧嘧啶(ALX) ,Fluka公司产品。盐酸肾上腺素( ADR) 注射液: 上海禾丰制药有限公司。肝糖原含量测定试剂盒,南京建成生物工程研究所。柠檬酸北京化学试剂厂;磷酸氢二钠,北京化学试剂厂。
实验仪器
JPS-5型手持式快速全血葡萄糖测试仪,北京怡成生物电子技术有限公司生产。离心机,721型分光光度计,上海东方仪器厂;酶标仪,日本三洋公司。酸度计,上海虹易科技公司;分析天平,沈阳龙腾科技公司;-70度冰箱,日本三洋公司;-20度冰箱,新飞公司;紫外可见分光光度计上海精密科学仪器有限公司;三用恒温水箱,江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司。
统计分析
1.糖尿病模型的建立
10只Wistar大鼠正常饮食作为正常对照。其余大鼠自由饮食高糖高脂饲料(配方:蛋黄2.5%、蔗糖20%、猪油10%、基础饲料67.5%)12周后,禁食16小时,腹腔注射小剂量STZ 30mg/kg诱发糖尿病。正常对照组腹腔注射生理盐水3 ml/kg。注射STZ稳定2周后,每组禁食12h,不禁水,尾尖取血,用快速血糖测试仪检测大鼠空腹血糖(fasting blood
glucose,FBG) ,选取FBG值≥9.0mmol/ L的大鼠,纳入本实验。2. 动物分组及给药
将模型制备成功的Wistar大鼠按空腹血糖值随机分为模型组、消渴丸1.5g/kg组、受试样品1(分别为100、30、10mg/kg三个剂量组)三个剂量组,每组10只。取上述10只正常大鼠为对照组。模型组和正常组给予等容量蒸馏水灌胃,均于上午9:00时灌胃1次,连续4周。分别于给药14天、第28天测量空腹血糖。
3.结果及讨论
链尿菌素为一种广谱抗菌素,具有抗菌、抗肿瘤和致糖尿病的作用,对实验动物的胰岛β细胞具有高度选择性毒性作用,引起胰岛细胞损伤,产生糖尿病。与模型组相比,给药4周后,样品组及消渴丸组空腹血糖值明显降低(P<0.05),结果见图5。
试验例
3
AFG
对四氧嘧啶
(ALX)
所致糖尿病大鼠的作用(
2
型)
实验动物
清洁级Wistar大鼠,雌雄各半,体重180~220 g;雄性ICR小鼠,清洁级,体重18~22g,均由吉林大学动物中心提供,动物合格证号:SCXK(吉)2007-0003。在室温(18~25)℃,相对湿度50%~80%的环境条件下饲养。
药物与试剂
AFG样品1:纯度50%,4℃保存,临用时以蒸馏水配制所需浓度。消渴丸,批号:Z44020045,广州中一药业有限公司生产。链脲霉素(STZ),Sigma公司生产,批号s20130,用时以0.1mol/ L,pH 4.4柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制成1 %的溶液(0.1M柠檬酸缓冲液:0.26M柠檬酸,0.32M磷酸氢二钠,按照3:4体积比混合),避光、冰浴、现用现配。四氧嘧啶(ALX) ,Fluka公司产品。盐酸肾上腺素( ADR) 注射液: 上海禾丰制药有限公司。肝糖原含量测定试剂盒,南京建成生物工程研究所。柠檬酸北京化学试剂厂;磷酸氢二钠,北京化学试剂厂。
实验仪器
JPS-5型手持式快速全血葡萄糖测试仪,北京怡成生物电子技术有限公司生产。离心机,721型分光光度计,上海东方仪器厂;酶标仪,日本三洋公司。酸度计,上海虹易科技公司;分析天平,沈阳龙腾科技公司;-70度冰箱,日本三洋公司;-20度冰箱,新飞公司;紫外可见分光光度计上海精密科学仪器有限公司;三用恒温水箱,江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司。
1.大鼠糖尿病模型的建立
将大鼠适应性喂养1周后,按体重随机分为2组。第1组10只为正常对照组(A组),第2组200只为造模组。造模时大鼠禁食不禁水12h,腹腔注射ALX,现配现用,以生理盐水配成2% 的注射液给药,1次/d,连续2d,剂量分别为120mg/kg和100mg/kg,并且在日照时间10h以上的阳光充足的条件下饲养,72h后形成糖尿病模型,注射后自由进食。大鼠尾静脉取血,测定血糖浓度(mmol/l)。末次注射ALX后的第4天测空腹血糖值,血糖值>9.0mmol/l者为造模成功者。
2. 动物分组及给药
将140只模型制备成功的Wistar大鼠按空腹血糖值随机分为14组,模型组、阳性对照药(消渴丸)1.5g/kg组、受试样品1(各分为100、30、10 mg/kg三个剂量组)样品2(分别为100、30、10 mg/kg),每组10只。取上述10只正常大鼠为对照组。各组灌胃量均为2ml/只,1次/ d,28d后禁食不禁水测量空腹血糖。
3.结果及讨论
四氧嘧啶是一种特异的胰岛β细胞毒剂,可选择性地作用于大鼠胰岛β细胞,促进氧自由基释放,进而破坏胰岛β细胞,使细胞DNA损伤,最终导致胰岛素释放减少,空腹血糖升高,形成糖尿病模型。
四氧嘧啶能够选择性被胰腺细胞所摄取,引起细胞坏死造成胰岛素分泌不足而导致糖尿病。与模型组相比,药4周后,样品1、2组及消渴丸组空腹血糖值明显降低(P<0.05),结果见表5;
试验例
4
AFG
对小鼠肾上腺素性高血糖的影响
实验动物
清洁级Wistar大鼠,雌雄100x concentrated
penicillin-streptomycin stock mixture,体重180~220 g;雄性ICR小鼠,清洁级,体重18~22g,均由吉林大学动物中心提供,动物合格证号:SCXK(吉)2007-0003。在室温(18~25)℃,相对湿度50%~80%的环境条件下饲养。
药物与试剂
AFG样品1、样品2纯度均为50%,4℃保存,临用时以蒸馏水配制所需浓度。消渴丸,批号:Z44020045,广州中一药业有限公司生产。链脲霉素(STZ),Sigma公司生产,批号s20130,用时以0.1mol/ L,pH 4.4柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制成1 %的溶液(0.1M柠檬酸缓冲液:0.26M柠檬酸,0.32M磷酸氢二钠,按照3:4体积比混合),避光、冰浴、现用现配。四氧嘧啶(ALX) ,Fluka公司产品。盐酸肾上腺素( ADR) 注射液: 上海禾丰制药有限公司。肝糖原含量测定试剂盒,南京建成生物工程研究所。柠檬酸北京化学试剂厂;磷酸氢二钠,北京化学试剂厂。
实验仪器
JPS-5型手持式快速全血葡萄糖测试仪,北京怡成生物电子技术有限公司生产。离心机,721型分光光度计,上海东方仪器厂;酶标仪,日本三洋公司。酸度计,上海虹易科技公司;分析天平,沈阳龙腾科技公司;-70度冰箱,日本三洋公司;-20度冰箱,新飞公司;紫外可见分光光度计上海精密科学仪器有限公司;三用恒温水箱,江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司。
1.动物分组及给药
将150只小鼠按体重随机分为15组,分别为空白对照组、模型组、苯乙双胍(0. 1g/ kg) 组、受试样品1、样品2 (各分为100、30、10三个剂量组), 每组10只。各组均灌胃给药,每日1次,共7日,空白对照组及模型组给予等体积蒸馏水。试验前日禁食不禁水12h。于第7日血糖仪测定空腹血糖值(mmol/ L) 作为药前值,然后给药,药后30min,除空白对照组其他各组动物分别皮下注射0.1 %肾上腺素0. 25mg/ kg ,分别于注射肾上腺素后30、60、90min断尾取血,测定空腹血糖值。90min取同一部位肝脏按试剂盒方法测肝糖元含量。
2 结果及讨论
肾上腺素是肾上腺髓质产生的儿茶酚胺类物质,其通过兴奋体内肾上腺素β受体,促进肝脏及肌肉糖原分解, 并能促进糖异生作用,促进糖代谢造成小鼠实验性高血糖。肝脏既是利用葡萄糖又是产生葡萄糖的器官,体内内源性葡萄糖的产生主要( > 75 %) 来自肝脏。
结果表明,模型组小鼠注射肾上腺素后30min~90min血糖均明显升高,90min后肝糖原含量明显降低,与空白对照组比较差异显著(P <0101) 。与模型组比较, 阳性对照药后60min、90min血糖值明显下降( P<0. 05或P <0.01) ,90min后肝糖原含量无明显变化;样品1、2各剂量量组药后60min、90min血糖值均明显下降( P < 0. 05) , 90min后肝糖原含量明显升高( P <0.05) ,提示样品1、2、3、4可明显对抗肾上腺素性高血糖,结果见图7。
本实验结果显示, 样品1、2可增加肾上腺性高血糖小鼠的空腹肝糖元含量(结果见图8),提示其可能是通过提高肝糖元含量,增加葡萄糖去路来降低血糖。
本发明AFG的药物含有治疗有效量的单体及其组合物为活性成分,以及含有一种或多种药学上可接受的载体。本领域技术人员可以理解到,这些物质的存在会维持或者增强本发明的药物组合物的作用。
另外,应该特别指出的是,可以根据需要在发明的药物组合中加入一种或多种天然或合成的其它与本活性物质具有协同或辅助作用的成分,这些可能被加入的天然或合成的辅助成分是本领域技术人员已知的和可以想象到的。可将所说的组合物配制成经口给药的剂型,如片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂等。
为了制备适于口服给药的片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂等,可以使用蔗糖、半乳糖、玉米淀粉、明胶、微晶纤维、滑石粉等作为载体或赋形剂。在这些经口给药的剂型中,还可以含有合适的其它添加剂,诸如崩解剂、润滑剂、填充剂、黏合剂、娇味剂、防腐剂、分散剂、表面活性剂、着色剂等。
本发明药物组合物最优选的给药途径是各种口服给药的剂型,例如片剂、颗粒剂、胶囊剂或丸剂,这些经口给药剂型的每日剂量一般含有10~1000mg本活性物质。其次为肌肉或静脉注射剂。
本发明的积极效果在于:提高合成中AFG的转化率,降低反应副产物的产生,减少美拉德反应终产物类黑素的生成,从而大幅降低AFG分离纯化成本;提供了AFG在预防及治疗1型糖尿病和2型糖尿病的医学作用。
附图说明
图1、AFG对糖尿病小鼠饮水量的影响图;
与模型组比较,P<0.05差异显著*;P<0.01差异非常显著**;
图2、AFG对糖尿病小鼠摄食量的影响图;
与模型组比较,P<0.05差异显著*;P<0.01差异非常显著**;
图3、AFG对糖尿病小鼠体重的影响图;
与模型组比较,P<0.05差异显著* ;P<0.01差异非常显著**;
图4、AFG对糖尿病小鼠血糖的影响图;
与模型组比较,P<0.05差异显著*;P<0.01差异非常显著** ;
柱形图左起为2周时 FBG(mmol/L),给药剂量mg/kg:依次为100、30、10。其次为4周时 FBG(mmol/L),给药剂量mg/kg:依次为100、30、10;对照组、模型组和消渴丸组左为2周右为4周空腹血糖。与对照组比较 * P<0.001;与模型组比较▲P<0.05,▲▲ P<0.01;
与对照组比较 * P<0.001;与模型组比较▲P<0.05,▲▲ P<0.01 ;
图7、AFG对小鼠肝糖原含量的影响(±s , n = 10)图;
与对照组比较 * P<0.001;与模型组比较▲P<0.05,▲▲ P<0.01 ;柱形图表示:样品1、样品2左起给药剂量mg/kg:依次为100、30、10,随着给药剂量的减少,肝糖原含量降低;
图8、AFG对照品的HPLC色谱图。
具体实施方式:
通过以下实施例进一步举例描述本发明,并不以任何方式限制本发明,在不背离本发明的技术解决方案的前提下,对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
实施例
1
1.取精氨酸1g与麦芽糖2g置入35ml冰醋酸中,加入亚硫酸钠0.1g,在50℃条件下,反应30分钟,得总反应物,将总反应物低温真空浓缩至浸膏,硅胶干法拌样,过硅胶(200~300目)湿柱,50-90%乙醇洗脱,以自动部分收集器收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液部分,低压浓缩至浸膏,冷冻干燥成粉末,再将粉末溶于5倍量的0.2%醋酸水溶液中,过聚丙烯酰胺(Bio-gel P-Ⅱ)柱,以0.2%醋酸水溶液洗脱,以自动部分收集器收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥,即得AFG 0.1g。HPLC检测为单一峰,保留时间与标准品一致,如附图1。
实施例
2
取精氨酸1g分别与麦芽糖2g置入40ml冰醋酸中,加入亚硫酸氢钠0.1g,在70℃条件下,反应30分钟得总反应物,然后同实施例 1方法处理,得AFG 0.3g。
实施例
3
AFG的合成
取精氨酸1g与麦芽糖2g,置入50ml冰醋酸中,加入保险粉0.2g,在85℃条件下,反应30分钟得总反应物,然后同实施例 1方法处理,得AFG 0.5g。
实施例
4
取精氨酸1g与麦芽糖6g置入60ml冰醋酸中,加入亚硫酸氢钠0.1g,在100℃条件下,反应30分钟,得总反应物,然后同实施例 1方法处理,得AFG 0.2g。
实施例
5
5.1 取精氨酸1g与麦芽糖4g置入40ml冰醋酸中,加入亚硫酸氢钠0.5g,在85℃条件下,得总反应物;将AFG总合成物,低温真空浓缩至浸膏,硅胶干法拌样,过硅胶(200~300目)湿柱,50-90%乙醇洗脱,以自动部分收集器收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液部分,低压浓缩至浸膏,冷冻干燥成粉末,再将粉末溶于5倍量的0.2%醋酸水溶液中,过聚丙烯酰胺(Bio-gel P-Ⅱ)柱,以0.2%醋酸水溶液洗脱,以自动部分收集器收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥,即得AFG 1.0 g。
实施例
6
取精氨酸1g与麦芽糖4g置入40ml冰醋酸中,加入亚硫酸氢钠1.0g,在85℃条件下,反应50分钟得总反应物;将AFG总合成物,低温真空浓缩至浸膏,硅胶干法拌样,过硅胶(200~300目)湿柱,50-90%乙醇洗脱,以自动部分收集器收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液部分,低压浓缩至浸膏,冷冻干燥成粉末,再将粉末溶于8倍量的0.2%醋酸水溶液中,过聚丙烯酰胺(Bio-gel P-Ⅱ)柱,以0.2%醋酸水溶液洗脱,以部分收集器收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥,即得AFG1.2g。
实施例
7
取精氨酸1g与麦芽糖4g置入40ml冰醋酸中,加入亚硫酸氢钠3g,在85℃条件下,反应50分钟得总反应物;将AFG总合成物,低温真空浓缩至浸膏,硅胶干法拌样,过硅胶(200~300目)湿柱,50-90%乙醇洗脱,以自动部分收集器收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液部分,低压浓缩至浸膏,冷冻干燥成粉末,再将粉末溶于8倍量的0.2%醋酸水溶液中,过聚丙烯酰胺(Bio-gel P-Ⅱ)柱,以0.2%醋酸水溶液洗脱,以部分收集器收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥,即得AFG1.5g。
实施例
8
取AFG1g,加入赋形剂药用环糊精10g,混合均匀,造粒,装入胶囊,每粒含活性成分10mg。
实施例
9
取AFG 1g,加入注射用水10ml,制成针剂,每支含AFG 10mg。
实施例
11
取AFG 1g,制成粉针剂针剂,每支含AFG 10mg。
实施例
12
取AFG 1g,加入赋形剂药用环糊精10g,混合均匀,造粒,制得片剂,每片含活性成分10mg。
Claims (1)
1. 一种精氨酸糖苷的制备方法,包括以下步骤:
1)将精氨酸与麦芽糖以1:(2-6)的重量比例置入2-8倍量的冰醋酸中,加入美拉德反应抑制剂,精氨酸与抑制剂质量比为1:(0.1-3),在50-100℃条件下,反应10分钟到2小时得总反应物;
2)将总合成物低温真空浓缩至浸膏,硅胶干法拌样,挥去醋酸,过200~300目硅胶湿柱,50-90%乙醇洗脱,收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液部分,低压浓缩,冷冻干燥成粉末,溶于1-8倍量的0.2%醋酸水溶液中,过聚丙烯酰胺柱以0.2%醋酸水溶液洗脱,收集各流份,薄层色谱检查,收集Rf值为0.2的洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥即得;
美拉德反应抑制剂选自亚硫酸钠或亚硫酸氢钠。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2011100388437A CN102178687B (zh) | 2011-03-21 | 2011-03-21 | 精氨酸糖苷的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2011100388437A CN102178687B (zh) | 2011-03-21 | 2011-03-21 | 精氨酸糖苷的制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102178687A CN102178687A (zh) | 2011-09-14 |
CN102178687B true CN102178687B (zh) | 2012-07-04 |
Family
ID=44565094
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2011100388437A Expired - Fee Related CN102178687B (zh) | 2011-03-21 | 2011-03-21 | 精氨酸糖苷的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102178687B (zh) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105085584A (zh) * | 2014-06-28 | 2015-11-25 | 郑毅男 | 精氨酸果糖苷(af)制备方法及其医用用途 |
CN104447892A (zh) * | 2014-09-11 | 2015-03-25 | 郑毅男 | 一种精氨酸双糖苷检测方法及其医用用途 |
CN104257672A (zh) * | 2014-09-12 | 2015-01-07 | 吉林农业大学 | 一种精氨酸双糖苷的新医疗用途 |
CN104610384B (zh) * | 2014-11-11 | 2018-02-27 | 郑毅男 | 一种精氨酸双糖苷的合成方法及其在抗衰老中的应用 |
CN107011393A (zh) * | 2016-03-24 | 2017-08-04 | 郑毅男 | 一种精氨酸单糖苷(af)的新合成方法及其在医药方面的用途 |
CN112724184B (zh) * | 2021-02-02 | 2021-08-13 | 吉林农业大学 | 人参中特有化合物精氨酸双糖苷afg的分离制备方法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH09316091A (ja) * | 1996-05-24 | 1997-12-09 | Bizen Kasei Kk | アルギニルフラクトシルグルコース類の製造法 |
KR20090022456A (ko) * | 2007-08-30 | 2009-03-04 | 주식회사 케이티앤지 | 홍삼으로부터 아미노당 추출물의 제조방법 |
KR100966613B1 (ko) * | 2009-12-21 | 2010-06-29 | 한남대학교 산학협력단 | 혈당상승억제 효능을 나타내는 아르기닌 유도체 또는 이의 염을 포함하는 조성물의 제조방법 |
-
2011
- 2011-03-21 CN CN2011100388437A patent/CN102178687B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
曹国军等.红参加工与精氨酸双糖苷(AFG)的形成.《中药材》.2003,第26卷(第2期),97-98. * |
李向高等.红参中梅拉德反应及其产物的研究.《吉林农业大学学报》.1997,第19卷(第4期),7-13. * |
雷涛等.美拉德反应产物制备研究.《牡丹江医学院学报》.2007,第28卷(第1期),65-67. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102178687A (zh) | 2011-09-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102178687B (zh) | 精氨酸糖苷的制备方法 | |
CN100364570C (zh) | 一种具有降糖作用的药物组合物及其制备方法 | |
CN1267456C (zh) | 一种降糖的沙蒿多糖制备方法及其应用 | |
CN103536635A (zh) | 一种黑参制备方法及其在治疗糖尿病中的应用 | |
CN101623293A (zh) | 一种注射用药物组合物 | |
CN103919775A (zh) | 9-去甲基小檗碱在制备降血糖药物中的应用 | |
CN101606936B (zh) | 一种治疗糖尿病的药物组合物 | |
CN1224383C (zh) | 一类新型降低血糖化合物 | |
US20240226077A1 (en) | Compositions and Methods for Increasing Athletic Performance | |
CN101283993A (zh) | 盐酸二甲双胍缓释片在治疗2型糖尿病药物中的应用 | |
CN101564378A (zh) | 左卡尼汀口服溶液及其制备方法 | |
CN103073650A (zh) | 红芪多糖4及其有效成分的制备和应用 | |
CN104666585A (zh) | 地黄叶提取物在制备降血糖类药物中的应用 | |
CN101307090B (zh) | 知母皂苷bⅲ的制备方法及其用途 | |
CN101623284A (zh) | 一种复方维生素c注射剂药物组合物 | |
CN106938011A (zh) | 一种具有降血糖作用的中药及制备方法 | |
CN102060903A (zh) | 一种人参皂苷Rh2提取物及制备方法 | |
CN104543662B (zh) | 一种降糖鸡腿菇多糖颗粒的生产方法 | |
CN1679866A (zh) | 知母总皂苷在制备治疗或预防糖尿病的药物中的应用 | |
US20090247496A1 (en) | Pharmaceutical composition and extract of poria for enhancing uptake of nutrients | |
JPH0369328B2 (zh) | ||
Hollander et al. | Influence of life-prolonging dietary restriction on intestinal vitamin A absorption in mice | |
CN107446009A (zh) | 金圣草黄素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖醛酸甲酯及其提取方法和用途 | |
CN1223601C (zh) | 黄连总生物碱的提取工艺及其新用途 | |
CN100532395C (zh) | 一种源自灰树花子实体的α-葡聚糖、其制备方法及用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120704 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |