CN102175807A - 马尾松针挥发油成分的气相色谱指纹图谱的建立方法和应用 - Google Patents

马尾松针挥发油成分的气相色谱指纹图谱的建立方法和应用 Download PDF

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俞忠明
寿旦
张扬
李洪玉
章建民
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Abstract

本发明属于中药分析技术领域，用于松针药材的鉴别及成分比较，尤其涉及马尾松针挥发油成分的气相色谱（GC）指纹图谱的建立方法和应用。马尾松针挥发油成分的气相色谱-指纹图谱的建立方法，该方法包括以下的步骤：1)对照品溶液的制备；2)供试品溶液制备；3)气相色谱分析；4）松针挥发油气相指纹图谱中共有峰的标定；5）松针挥发油气相指纹图谱分析结果。本发明与及文献方法相比，方法快速，简便，重现性和稳定性均很好，特征性强，能够作为松针鉴别的依据，并为马尾松药材及其制剂的质量控制提供依据。

Description

马尾松针挥发油成分的气相色谱指纹图谱的建立方法和应用
技术领域
本发明属于中药分析技术领域，用于松针药材的鉴别及成分比较，尤其涉及马尾松针挥发油成分的气相色谱(GC)指纹图谱的建立方法和应用。
背景技术
马尾松(Pinus massoniana Lamb.)是我国亚热带南部潮湿地区分布最广的树种。干燥的马尾松针叶作为一味常用中药，《本草纲目》上记载：“松针，气味苦、温，毒，久服令人不老，轻身益气，主治风湿疮，生毛发，安五脏，守中，不饥延年。”现代研究表明，松针具有镇静、镇痛抗炎、抗氧化、抗衰老等作用，加之资源丰富，再生速度快，因而日益受到人们的重视。
有研究从马尾松松针水煎液的正丁醇部位分离得到了5个化合物(郑晓珂，冯卫生，王彦志，等.松针的化学成分研究[J].中国药学杂志，2004，39(11)：820).但有关不同产地松针的成分研究未见报道。本专利申报前期已通过药效实验筛选出了松针镇静催眠有效部位，并开展了松针药材的成分研究，已初步分析得到了马尾松针的挥发性成分谱。目前对马尾松针挥发油中的有效成分，中国药典2010年版一部尚无规定。
鉴于药典(2010年版，一部)中未收载有关松针的标准；目前尚未见有关马尾松针挥发油成分GC分析的文献报道。故发明一项既能够快速准确地进行马尾松针挥发油成分分析的方法，同时在某种程度上能够反映药材的品质的分析方法，具有重要的学术研究价值及实际应用的价值。
发明内容
为了解决松针药材的鉴别及成分比较存在的技术问题，本发明的一个目的是提供马尾松针挥发油成分的气相色谱(GC)指纹图谱的建立方法，本发明的另外一个目的是提供采用上述的气相色谱(GC)指纹图谱对马尾松药材及其制剂进行鉴别和含量差异分析。本发明的指纹图谱方法分析马尾松针中挥发油成分，以石竹烯为参照物，采用GC法，建立马尾松针挥发油的气相色谱指纹图谱，并对不同产地的马尾松针挥发油成分进行比较，为马尾松药材及其制剂的质量控制提供依据，达到准确使用药材，严格区分其他混淆品的目的。
为了实现上述的第一个目的，本发明采用了以下的技术方案：
马尾松针挥发油成分的气相色谱-指纹图谱的建立方法，该方法包括以下的步骤：
1)对照品溶液的制备
精密吸取石竹烯对照品，配制成石竹烯对照品溶液；
2)供试品溶液制备
鲜松针采集后，按照挥发油提取法，自测定器上端加水使充满刻度部分，连接回流冷凝管，加热蒸馏，放冷，分取挥发油层，读取体积数后脱水，定容，摇匀，即得供试品溶液；
3)气相色谱分析
采集不同产地的松针药材多批次，按照步骤2)制备得到供试品溶液，分别进样，进行色谱分析，得到气相色谱图；
4)松针挥发油气相指纹图谱中共有峰的标定
通过对上述不同产地松针供试品溶液的气相色谱分析，对步骤4)所得气相色谱图进行分析，得到气相色谱图；结果显示各样品中大部分成分的色谱峰均出现在保留时间5～20min之间，色谱峰分离良好，其中17个色谱峰为所有供试品所共有的特征峰，其中6号为石竹烯，将其作为参比峰；
5)松针挥发油气相指纹图谱分析结果
通过对上述不同产地松针样品的气相色谱分析，松针指纹图谱特征如下：上述样品的色谱图中均出现1-17号峰，其中6号与石竹烯对照品色谱图石竹烯的保留时间相同；以石竹烯对照品保留时间为参照，计算各共有指纹峰的相对保留时间，相对保留时间的RSD均小于1.0％，所有样品中，共有指纹峰峰面积之和占总峰面积之比值均大于69％。
作为优选的方法，上述的步骤1)中先将石竹烯对照品置于5mL的容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，制得石竹烯储备溶液，再精密吸取上述石竹烯储备溶液，置于5mL的容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，配制成质量浓度为1μg/mL的石竹烯对照品溶液。
作为优选的方法，上述的步骤2)中鲜松针采集后，切成2cm长小段，阴干至含水量8％以下，密封保存，精密称取松针小段，置挥发油提取器中，加水1L，浸泡10h，然后进行提取。
作为优选的方法，上述的步骤2)中脱水采用无水硫酸钠脱水，挥发油溶解、定容采用二氯甲烷。
作为优选的方法，上述的步骤3)中气相色谱条件如下：
氢火焰离子化检测器FID，HP-5ms色谱柱，30m×0.32mm×0.25μm，载气为恒流流速的高纯He：1.0mL/min，燃气为H2：250mL/min，助燃气为空气：250mL/min；
采用分流进样方式，分流比为50∶1；进样量为1.0μL；气化室温度为280℃；
柱温程序升温：初温为50℃，停留2min，以10℃/min升至170℃，保持8min，以5℃/min升至250℃，保持2min；
氢火焰离子化检测器的检测温度为300℃。
作为优选的方法，上述的步骤3)中采用8～15批次不同产地的松针药材。作为最优选的方法，上述的步骤3)中采用10批次不同产地的松针药材。
作为优选的方法，上述的步骤4)中1-17号色谱峰分别为色谱图中保留时间：7.426min、8.118min、8.916min、10.758min、11.406min、14.083min、14.556min、14.823min、15.023min、15.288min、15.413min、16.656min、17.299min、17.826min、18.422min、18.798min、25.699min的色谱峰。
为了实现上述的第二个目的，本发明采用了以下的技术方案：
马尾松药材及其制剂的鉴别方法，该方法采用上述任意一项技术方案所述的方法建立的气相色谱-指纹图谱。
马尾松药材及其制剂的含量差异分析方法，该方法采用上述任意一项技术方案所述的方法建立的气相色谱-指纹图谱。
本发明由于采用了上述的技术方案，优点在于：
1、中国药典2010年版一部中未收载马尾松，其他国家及地方标准均无马尾松针药材标准的内容；马尾松针作为近年来广泛应用的药材资源，有必要研究并制订其质量标准，马尾松针的挥发油GC指纹图谱作为马尾松的鉴别及含量差异分析方法，是其质量标准的重要内容。本发明与及文献方法相比，方法快速，简便，重现性和稳定性均很好，特征性强，能够作为松针鉴别的依据，并为马尾松药材及其制剂的质量控制提供依据。
2、本发明方法先进，采用GC法，建立了马尾松挥发油的气相色谱指纹图谱。
3、本发明方法操作简单，所使用的仪器设备和材料普及性好，便于药材种植、加工及销售企业推广应用。
附图说明
图1为产地为浙江临安的松针挥发油色谱图，图中6号峰为石竹烯。
图2为石竹烯对照品色谱图。
图3为10批不同产地松针样品挥发油的GC色谱叠加图。
具体实施方式
实施例1
马尾松针挥发油成分的气相色谱-指纹图谱的建立方法，该方法包括以下的步骤：
1)精密吸取并称量0.05mg竹烯对照品，置于5mL的容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，制得石竹烯储备溶液，再精密吸取石竹烯储备溶液0.5mL，置于5mL的容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，即制备得到质量浓度为1μg/mL的石竹烯对照品溶液；
2)采集松针(产地浙江临安)，切成2cm小段后阴干，精密称取松针小段50g，置挥发油提取器中，加水1L，浸泡10h，按照挥发油提取法(2010版中国药典一部附录XD)，自测定器上端加水使充满刻度部分，连接回流冷凝管，加热蒸馏2.5h，放冷，分取挥发油层，读取体积数为0.30mL，加0.2g无水硫酸钠脱水，通过脱脂棉滤过，挥发油用二氯甲烷溶解，脱脂棉用二氯甲烷洗涤2次，洗涤液并入挥发油溶液中，并定容至10mL，摇匀，即得到以松针药材计，质量浓度为5g/mL的供试品溶液；
3)GC条件
氢火焰离子化检测器FID，HP-5ms色谱柱(30m×0.32mm×0.25μm)，载气为恒流流速的高纯He：1.0mL/min，燃气为H2：250mL/min，助燃气为空气：250mL/min；采用分流进样方式，分流比为50∶1；进样量为1.0μL。气化室温度为280℃；柱温程序升温：初温为50℃，停留2min，以10℃/min升至170℃(保持8min)，以5℃/min升至250℃(保持2min)；氢火焰离子化检测器的检测温度为300℃；
4)GC分析
取步骤2)的供试品溶液，按步骤3)的条件进行测定。得到GC图谱见图1；其中1-17号色谱峰分别为色谱图中保留时间：7.426min、8.118min、8.916min、10.758min、11.406min、14.083min、14.556min、14.823min、15.023min、15.288min、15.413min、16.656min、17.299min、17.826min、18.422min、18.798min、25.699min的色谱峰；17个特征峰的峰面积之和占总峰面积之比为84.75％。
实施例2
采集不同产地的松针药材10批次，按照上述的方法得到气相色谱图，然后进行GC分析。表1为10批松针共有指纹峰的相对保留时间；表2为10批松针共有指纹峰的相对峰面积。
Figure BDA0000044555490000051
Figure BDA0000044555490000061

Claims (10)

1.马尾松针挥发油成分的气相色谱-指纹图谱的建立方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：
1)对照品溶液的制备
精密吸取石竹烯对照品，配制成石竹烯对照品溶液；
2)供试品溶液制备
鲜松针采集后，按照挥发油提取法，自测定器上端加水使充满刻度部分，连接回流冷凝管，加热蒸馏，放冷，分取挥发油层，读取体积数后脱水，定容，摇匀，即得供试品溶液；
3) 气相色谱分析
采集不同产地的松针药材多批次，按照步骤2）制备得到供试品溶液，分别进样,进行色谱分析，得到气相色谱图；
4）松针挥发油气相指纹图谱中共有峰的标定
通过对上述不同产地松针供试品溶液的气相色谱分析，对步骤4)所得气相色谱图进行分析，得到气相色谱图；结果显示各样品中大部分成分的色谱峰均出现在保留时间5～20min之间，色谱峰分离良好，其中17个色谱峰为所有供试品所共有的特征峰，其中6号为石竹烯，将其作为参比峰；
5）松针挥发油气相指纹图谱分析结果
通过对上述不同产地松针样品的气相色谱分析，松针指纹图谱特征如下：上述样品的色谱图中均出现1-17号峰，其中6号与石竹烯对照品色谱图石竹烯的保留时间相同；以石竹烯对照品保留时间为参照，计算各共有指纹峰的相对保留时间，相对保留时间的RSD均小于1.0% ，所有样品中，共有指纹峰峰面积之和占总峰面积之比值均大于69%。
2.根据权利要求1所述的马尾松针挥发油成分的气相色谱-指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤1）中先将石竹烯对照品置于5mL的容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，制得石竹烯储备溶液，再精密吸取上述石竹烯储备溶液，置于5mL的容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，配制成质量浓度为1 μg/mL的石竹烯对照品溶液。
3.根据权利要求1所述的马尾松针挥发油成分的气相色谱-指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤2）中鲜松针采集后，切成2cm长小段，阴干至含水量8%以下，密封保存，精密称取松针小段，置挥发油提取器中，加水1L，浸泡10h，然后进行提取。
4.根据权利要求1所述的马尾松针挥发油成分的气相色谱-指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤2）中脱水采用无水硫酸钠脱水，挥发油溶解、定容采用二氯甲烷。
5.根据权利要求1所述的马尾松针挥发油成分的气相色谱-指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤3）中气相色谱条件如下：
氢火焰离子化检测器FID，HP-5ms色谱柱，30m×0.32mm×0.25μm，载气为恒流流速的高纯He：1.0mL/min，燃气为H2：250mL/min，助燃气为空气：250mL/min；
采用分流进样方式，分流比为50:1；进样量为1.0μL；气化室温度为280℃；
柱温程序升温：初温为50℃，停留2min，以10℃/min升至170℃，保持8min，以5℃/min升至250℃，保持2min；
氢火焰离子化检测器的检测温度为300℃。
6.根据权利要求1所述的马尾松针挥发油成分的气相色谱-指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤3）中采用8～15批次不同产地的松针药材。
7.根据权利要求6所述的马尾松针挥发油成分的气相色谱-指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤3）中采用10批次不同产地的松针药材。
8.根据权利要求1所述的马尾松针挥发油成分的气相色谱-指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤4）中1-17号色谱峰分别为色谱图中保留时间：7.426min、8.118min、8.916min、10.758min、11.406min、14.083min、14.556min、14.823min 、15.023min、15.288min、15.413min 、16.656min、17.299min、17.826min、 18.422min、18.798min 、25.699min 的色谱峰。
9.马尾松药材及其制剂的鉴别方法，其特征在于该方法采用权利要求1～8任意一项权利要求所述的方法建立的气相色谱-指纹图谱。
10.马尾松药材及其制剂的含量差异分析方法，其特征在于该方法采用权利要求1～8任意一项权利要求所述的方法建立的气相色谱-指纹图谱。
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