CN102168047A - 一株降低原油黏度的菌 - Google Patents
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Abstract
一株降低原油黏度的菌，它涉及一株降低原油黏度的菌。本发明降低原油黏度的菌，它为假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，属于假单胞菌属(Pseudomonas)，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M 2010341，保藏日期为2010年12月09日。本发明中降低原油黏度的菌，具有明显的降粘效果，降粘率达到51.75；该菌的特点是产生有机酸为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸，琥珀酸，乳酸等能够在地下矿藏中有效的溶解储油岩层孔隙中沉积的碳酸盐，增大油层的孔隙度和渗透率，改善原油的流动环境，降低原油黏度，改善其流动性，以便于原油三次采油的更有效的开采。
Description
技术领域
本发明涉及一株降低原油黏度的菌。
背景技术
在油田的外围，低渗透、低丰度含油区块地质储量也很大，石油埋藏在地下岩石孔隙中，有的储层石油黏度高、渗透率低，依靠机械压力、注水或注入聚合物方法进行开采，成本高，技术难度大，致使这些油藏难以实现经济有效开采。
微生物采油技术，即微生物提高原油采收率技术，是通过将筛选的微生物注入油藏，利用微生物在油藏中的有益活动，微生物的代谢产物与油藏中液相和固相的相互作用，对原油/岩油/水界面性质的特性作用等，改变原油的某些物理化学特征，改善原油的流动性质，从而提高原油采收率的综合性技术，具有成本低、环保等特点，应用前景广阔，但目前降低原油黏度的优良菌株种类有限，制约了这一技术的工业化应用。
发明内容
本发明提供了一株降低原油黏度的菌。
降低原油黏度的菌，它为假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，属于假单胞菌属(Pseudomonas)，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M 2010341，保藏日期为2010年12月09日；它为革兰氏阴性菌，杆状，长为1.5～4μm，宽为0.5～1μm；在牛肉膏蛋白胨培养基上形成无色透明菌落，圆形、直径为0.5～1mm，表面光滑，边缘整齐。
本发明中降低原油黏度的菌，它为假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，其利用葡萄糖、利用木糖、利用甘露醇、利用阿拉伯糖、利用柠檬酸盐、利用硝酸盐、利用铵态氮、卵磷脂酶试验阴性、乳糖试验阴性、产硫化氢试验阴性、纤维素分解试验阴性、产氨试验阴性、吲哚试验阴性、明胶试验阳性、淀粉试验阳性、石蕊牛奶试验胨化、M.R.试验阳性、V.P.试验阳性、H2S试验阳性、接触酶试验阳性、乙酰甲基甲醇试验阴性、苯丙氨酸脱氨酶试验阴性、油脂水解试验试验阴性、生长温度为30～37℃、生长pH值为7.2～7.4。
本发明中降低原油黏度的菌，它为假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，其16SrDNA序列在NCBI网站上作比对之后得到与Pseudomonas sp.AMD4的序列的相似性达到了99％。结合细菌形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果，确定假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1为假单胞菌属的一个新菌种。
本发明中降低原油黏度的菌，它为假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，属于假单胞菌属(Pseudomonas)，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M2010341，保藏日期为2010年12月09日。
本发明中降低原油黏度的菌，它为假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，具有明显的降粘效果，降粘率达到51.75；该菌的特点是产生有机酸为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸，琥珀酸，乳酸等能够在地下矿藏中有效的溶解储油岩层孔隙中沉积的碳酸盐，增大油层的孔隙度和渗透率，改善原油的流动环境。酸与碳酸盐岩反应产生的CO2等气体可增加油层压力，部分气体溶于原油中使其膨胀，降低原油黏度，改善其流动性，以便于原油三次采油的更有效的开采，进行单井吞吐试验大大提高了原油采收率，取得了巨大的经济效益，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式降低原油黏度的菌，它为假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，属于假单胞菌属(Pseudomonas)，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M 2010341，保藏日期为2010年12月09日；它为革兰氏阴性菌，杆状，长为1.5～4μm，宽为0.5～1μm；在牛肉膏蛋白胨培养基上形成无色透明菌落，圆形、直径为0.5～1mm，表面光滑，边缘整齐。
本实施方式中假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，根据《伯杰氏细菌学鉴定手册》进行常规生理生化鉴定，实验结果为：利用葡萄糖、利用木糖、利用甘露醇、利用阿拉伯糖、利用柠檬酸盐、利用硝酸盐、利用铵态氮、卵磷脂酶试验阴性、乳糖试验阴性、产硫化氢试验阴性、纤维素分解试验阴性、产氨试验阴性、吲哚试验阴性、明胶试验阳性、淀粉试验阳性、石蕊牛奶试验胨化、M.R.试验阳性、V.P.试验阳性、H2S试验阳性、接触酶试验阳性、乙酰甲基甲醇试验阴性、苯丙氨酸脱氨酶试验阴性、油脂水解试验试验阴性。
本实施方式中假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，生长温度为30～37℃、生长pH值为7.2～7.4；最适最适生长温度30℃，生长pH值7.2。
本实施方式中假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，是从大庆和俄罗斯石油样品中经过初筛，然后再进行复筛得到：
1、初筛
将采集到的大庆和俄罗斯石油样品于4℃冰箱中保存；将两种样品分别接种到无机盐培养基富集培养。
将每种油样分别接种两个三角瓶，作为平行样，共四个三角瓶，轻摇使油样在无机盐培养基中充分散开，于37℃恒温箱中恒温培养48h。在培养的过程中随时观察现象，液体培养基中逐渐混浊，且随着时间增长，混浊现象越来越明显。
2、复筛
制备无机盐培养基，分装于四个500ml的三角瓶中。以2％的接种量吸取初筛得到的加有原油样品的菌液于该无机盐培养基中。
将接种后的三角瓶置于37℃恒温箱中恒温培养。
3、梯度稀释
将培养了48h的液体培养基中的菌液进行梯度稀释。
4、稀释液的平板分离纯化
将梯度稀释得到的菌液划平板分离纯化：每个梯度划平板两个，作为平行样。
准确吸取0.1ml菌悬液滴在平板培养基表面中央位置，用玻璃涂棒涂布均匀。将接好菌的每个稀释度的平板倒置于37℃恒温箱内恒温培养48h。
5、取单菌落，斜面保存培养基中保存。
6、血琼脂培养基筛选
将斜面保存的菌株，进行血平板筛选，利用生物表面活性剂有溶血的特性来筛选产生生物表面活性剂的菌株。
其中，无机盐培养基由1g的K2HPO4·H2O、1g的KH2PO4、0.5g的MgSO4·H2O、1g的NH4NO3、0.02g的CaCl2、3g的原油和痕量的FeCl3加入蒸馏水并定容至1000mL组成，pH值为7.2～7.4；
斜面保存培养基由3g的牛肉膏、10g的蛋白胨、5g的NaCl和8.5g的琼脂加入蒸馏水并定容至1000mL组成，121℃高压蒸汽下灭菌20min；
血琼脂培养基由5.0g的牛肉膏、10.0g的蛋白胨、5.0g的NaCl和15.0g的琼脂加入蒸馏水并定容至1000mL组成，pH值为7.0～7.2，121℃高压蒸汽下灭菌20min，冷却至50℃时加入5％～10％的无菌脱脂纤维绵羊血(或兔血)。
本实施方式中假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，产有机酸，其产酸实验如下：
假单胞杆菌Hd-DN-2-1的发酵液处理后离心，过滤，等待进样检测；将流动相的pH值确定为2.3；
色谱柱：多孔性阴离子交换树脂柱；流动相的配制：200mL的0.05mol/LH2SO4用蒸馏水定容至2000mL，调整pH至2.3；流动相使用前通过0.45μm水系滤膜过滤并超声振荡20min待用；流动相流速为0.8mL/min；折光指数检测器，折光检测率R＝1；进样量20μL；柱温65℃；用HPLC法测得有机酸为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、琥珀酸和乳酸。
本实施方式中假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1的降粘实验：
首先对该菌株进行富集培养，然后将富集培养24h的菌液，分别按2％的比例接种到原油培养基中进行发酵培养，在37℃水浴振荡摇床中培养5-7天，每个三角瓶中原油培养基200mL，接种32瓶并做好标记，同时，做一瓶空白样，以做对照。
打开电源，调节转数和变换转子找到最适合的转数和转子。将选择好的转子安装在数显黏度计上，将待测液放置在相应位置上。然后，调节转数30r/min开始测量。32株细菌降黏结果如表1所示，菌株具有明显的降粘效果，降粘率达到51.75。
表1
| 菌株 | 培养温度℃ | 原始黏度Pa.s | 降解后黏度Pa.s | 降黏率％ |
| Hd-DN-2-1 | 40 | 0.315 | 0.152 | 51.75 |
本实施方式中假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1的单井吞吐试验：
在油层中部温度60℃的葡北过渡带选取原油黏度＞15mPa·s、含蜡量＞20％、含水33.9％～86.2％、油层有效厚度2.4～8，4m、产油量0.4～3.6t/d的10口油井，实施了一个轮次的Hd-DN-2-1微生物吞吐试验。根据油井静、动态参数，取处理半径为4～5m，单井注入菌液3.5～6.0t，微生物段塞尺寸55～60t，以0.1～0.15m3/min的排量经由套管注入油井，并井3天后开井生产。10口井中大部分井压力上升，泵效和沉没度增大；大部分井产液量、产油量增大，含水下降，有效期平均为153天；有8口井产出的原油黏度和含蜡量均增大，黏度最大增幅26.39mPa·s，含蜡量最大增幅为26.35个百分点。4口井的监测数据表明，开井生产后产出液中菌数大幅上升至10个/n以上，5个月内维持在104个/n1L水平；从产出液中还分离出了注入的菌种。
Claims (1)
1.一株降低原油黏度的菌，其特征在于它为假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)Hd-DN-2-1，属于假单胞菌属(Pseudomonas)，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M 2010341，保藏日期为2010年12月09日。
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