CN102166512A

CN102166512A - 人参皂苷Rg1分子印迹材料,其制备方法,其应用

Info

Publication number: CN102166512A
Application number: CN 201110050539
Authority: CN
Inventors: 刘庆山; 尹小英; 黄火强; 徐羽; 谷雨龙; 刘伟志; 方亮
Original assignee: 刘庆山
Current assignee: Minzu University of China
Priority date: 2011-03-03
Filing date: 2011-03-03
Publication date: 2011-08-31
Anticipated expiration: 2031-03-03
Also published as: CN102166512B

Abstract

本发明公开了一种人参皂苷Rg1分子印迹材料的制备及利用该材料为固相萃取剂分离、纯化天然产物中的Rg1拟似物的方法。该材料属于新型分离材料，可以作为固相萃取柱的固定相，用于从中药快速高效地定向分离、富集Rg1拟似物，由此可以获得高提取率的目标成分，该材料具有极强的应用价值。

Description

人参皂苷Rg1分子印迹材料,其制备方法,其应用

技术领域：

本发明专利涉及合成及其在靶向分离中应用的领域，具体涉及人参皂苷Rg1分子印迹材料的制备及利用该材料为固相萃取剂分离、纯化植物中的Rg1拟似物的方法。

背景技术：

(1)人参皂苷Rg1具有促进神经干细胞增殖的作用，对于脑卒中后遗症、神经退行性病变等疾病的治疗有重要作用。鉴于临床缺乏促神经干细胞增殖的药物，利用Rg1为模板，合成分子印迹材料，从中药、民族药、天然植物中靶向筛选活性成分有重要意义。

(2)中草药所含成分复杂，为了提高中草药的治疗效果，就要尽最大限度提取有效成分，去除无效成分及有毒成分。因此，中草药活性成分分离提取对于提高中药制剂的内在质量和临床疗效都极为重要。传统中药活性成分的分离提取常采用硅胶柱、C₁₈键合相柱、Al₂O₃柱等利用成分的吸附系数差异实现分离，但最大缺点是选择性差，富集容量低，尤其对一些结构复杂，多手性碳原子，且含量低的活性化合物，分离提纯难度大，采用这些常规分离手段往往需要反复操作，提取率极低，手性构型可能因此改变而失活。分子印迹材料是为模板分子量身定做的高分子材料，由于其经洗脱模板分子后，能留下在形状、大小以及识别位点都与模板分子相匹配的空穴，该空穴能重新识别模板分。由于其兼有高效、稳定和特异选择性且合成价格低廉的特点，因而具有较广泛应用前景。

发明内容：

本发明的目的在于避免常规中药提取方法技术存在的问题，建立一种基于Rg1印迹材料为新型吸附分离材料，并以此作固相萃取柱的固定相从中药粗提物中定向分离、富集Rg1拟似物的方法，由此可以获得高提取率的目标成分。本发明通过以下的技术方案实现的，具体包括步骤如下：

1.Rg1印迹材料的制备：

(1)将Rg1、功能单体和交联剂按照质量比10∶360∶3600溶解在装有70mL致孔剂乙腈溶液的圆底烧瓶中；

(2)再加入引发剂偶氮二异丁腈80mg后，通氮气脱氧15min；

(3)将密封好的圆底烧瓶放入冰水浴中，紫外灯照射24h，使聚合完全；

(4)将制得的材料用10％(W/V)十二烷基硫酸钠(SDS)的0.2mol/L氢氧化钠溶液混合液反复洗涤后，用紫外光谱检测直至无模板分子吸收为至。以甲醇为溶剂，通过索氏提取的方法洗去模板分子及没有聚合的功能单体及交联剂，洗脱液以紫外光谱进行检查直至检测不到以上物质的吸收为止，最后用去离子水洗涤材料至中性。

(5)将除去模板分子的材料真空干燥2h，获得Rg1分子印迹材料；

(6)非印迹材料的制备方法，除不加入模板分子外，其余步骤同上。

2.固相萃取分离纯化中药粗提液中的Rg1拟似物：

(1)固相萃取分离纯化中药粗提物中的Rg1拟似物：称取药材粉末(过50目筛)5.0g，加入甲醇提取液40mL，浸泡1h后，放入超声波中超声40min后，旋转蒸发至干，用甲醇溶解并定容至5mL，备用；

(2)将上述得到的Rg1分子印迹材料采用干法装柱填充到固相萃取柱中，并用甲醇溶液平衡柱子；取野沙参药材粗提取液5mL上样后，用甲醇洗脱保留在萃取柱中的Rg1，将洗脱液收集并浓缩、干燥，即得到高纯度的Rg1。

本发明制备的分子印迹材料形貌为规则球形且单分散，粒径4-20μm左右，对Rg1拟似物具有很好的识别性能，作为固相萃取的填料，可用于中药中Rg1拟似物成分的高效分离、富集及纯化。

与C₁₈键合固相萃取柱，硅胶固相萃取柱及非印迹材料萃取柱相比，Rg1印迹固相萃取柱对提取液中的Rg1拟似物有更好的选择性，柱容量最高，达到6mg/g，是C₁₈键合固相萃取柱和硅胶固相萃取柱的4-6倍，非印迹材料固相萃取柱的4倍。同时洗脱率达到94％，亦高于其它吸附剂固相萃取柱。

附图说明：

附图1是人参皂苷Rg1分子式。

具体实施方式：

下面对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方案和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1：

1.Rg1分子印迹材料的优选制备方法：

Rg1质量为1～50mg，功能单体50～560mg丙烯酰胺和5-～590mg甲基丙烯酸，交联剂EDMA 1000～5500mg混合，溶解于装有5～80mL致孔剂乙腈液的圆底烧瓶中，加入引发剂AIBN 78mg，通氮气脱氧15min，在氮气保护下迅速封口。将密封好的烧瓶放入0℃的冰水浴中紫外等照射24h后，得到材料。反应后的材料用去离子水反复漂洗后，经10％(W/V)上二烷基硫酸钠(SDS)的0.2mol/L氢氧化钠溶液反复洗涤以除去印迹分子，用去离子水洗涤至中性后，以甲醇为溶剂采用索氏提取器进行洗脱，除去未完全反应的有机试剂，以紫外光谱进行检查洗脱液，直至检测不到以上物质的吸收为止，再用最后再用大量的去离子水反复洗涤至中性，真空干燥2小时，即得到Rg1印迹材料。

2.固相萃取分离纯化中药粗提液中的拟Rg1分子：

称取野沙参粉末5.0g，加入甲醇溶液40ml，放入超声波中超声40min后，称重用甲醇补足重量，过滤即得野沙参粗提取液。称取200mg洗脱好的Rg1印迹材料，采用干法装柱，依次加入甲醇和40％甲醇溶液平衡固相萃取柱后，取药材粗提取液5mL，上样，往柱中加压，控制流速为0.5mL/min，再用10mL甲醇溶液洗脱保留在萃取柱上的Rg1。经浓缩、干燥得到Rg1拟似物1.3mg。

Claims

1.本发明的目的在于提供一种制备人参皂苷(Rg1)分子印迹材料的方法，并提供利用该材料作为固相萃取固定相从中药粗提物中定向分离、富集、纯化Rg1及类似结构活性成分的方法。其特征在于可通过以下步骤得到：

(1)首先将Rg1、功能单体(丙烯酰胺和甲基丙烯酸)和交联剂(乙二醇二甲基丙烯酸酯，EDMA)按比例超声溶解在装有致孔剂乙腈溶液的圆底烧瓶中；加入引发剂偶氮二异丁腈，在冰水浴中，紫外灯照射聚合24h；反应后的材料用去离子水反复漂洗后，经10％(W/V)十二烷基硫酸钠(SDS)的0.2mol/L氢氧化钠溶液反复洗涤以除去印迹分子和多余的动能单体，以紫外光谱进行检查洗脱液，直至检测不到以上物质的吸收为止，再用最后再用大量的去离子水反复洗涤至中性，即得到Rg1印迹材料。

(2)固相萃取分离纯化中药粗提物中的Rg1拟似物：称取藏药珊瑚丸药材粉末(过50目筛)5.0g，加入甲醇40mL，浸泡1h后，放入超声波中超声40min，冷却至室温后称量用甲醇补足重量，过滤即得到藏药珊瑚丸药材机提取液；将上述得到的Rg1分子印迹材料采用干法装柱填充到固相萃取柱中，用甲醇溶液平衡柱子；取藏药珊瑚丸药材粗提取液上样后，用甲醇洗脱保留在萃取柱中的Rg1拟似物，将洗脱液收集并浓缩、干燥，即得到高纯度的Rg1拟似物。

2.根据权利要求1的要求，该分子印迹材料制备采用的模板分子是Rg1。

3.根据权利要求1的要求，分子印迹材料制备采用的功能单体是丙烯酰胺和甲基丙烯酸。

4.根据权利要求1的要求，分子印迹材料制备采用的交联剂是乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)。

5.根据权利要求1的要求，分子印迹材料制备采用的引发剂是偶氮二异丁腈(AIBN)。

6.根据权利要求1的要求，分子印迹材料制备采用的敛孔剂是乙腈。

7.根据权利要求1的要求，洗除材料中模板分子及没有聚合的交联剂、功能单体和引发剂采用的是10％(W/V)十二烷基硫酸钠(SDS)的0.2mol/L氢氧化钠溶液、甲醇和去离子水。

8.根据权利要求1的要求，聚合反应需在冰水浴中紫外灯照射下完成聚合。

9.根据权利要求1的要求，该材料可作为固相萃取固定相从中药粗提物中定向分离、富集、纯化Rg1拟似物。

10.根据权利要求1的要求，该材料可作为填充料用于制备固相萃取柱。