CN102159697A

CN102159697A - 洗涤剂和清洁剂

Info

Publication number: CN102159697A
Application number: CN2009801186170A
Authority: CN
Inventors: G·瑞恩哈兹; H·J·楚尔兹; R·克扎加; T·格瑞尼尔-斯托弗尔; M·斯特鲁哈拉
Original assignee: Clariant Finance BVI Ltd
Current assignee: Clariant International Ltd; Clariant Finance BVI Ltd
Priority date: 2008-05-17
Filing date: 2009-05-12
Publication date: 2011-08-17
Anticipated expiration: 2029-05-12
Also published as: US20110071067A1; JP2011521027A; PL2300587T3; EP2300587A1; EP2300587B1; DE102008024084A1; CN102159697B; WO2009141073A1; BRPI0912764A2; KR20110040763A; ES2417754T3

Abstract

本发明涉及洗涤剂和清洁剂，其包含由叶绿素酶与另一种水解酶，优选脂肪酶，特别是半乳糖脂酶组成的组合。由叶绿素酶与半乳糖脂酶构成的组合与这两种酶的分别各自单独使用相比改善了去污能力，特别是对于含叶绿素的污渍。

Description

洗涤剂和清洁剂

本发明涉及含酶的洗涤剂和清洁剂，其除了常规成分外，还含有由叶绿素酶与至少另外一种水解酶，优选脂肪酶，特别优选半乳糖脂酶组成的组合。

洗涤剂除了含有对于洗涤过程不可缺少的内容物，如表面活性剂和构建剂材料(Buildermaterial)之外，通常还含有其它成分，它们可概括为术语洗涤助剂并且它们包括这样不同的活性物质组，如泡沫调节剂、灰变抑制剂、漂白剂和染料转移抑制剂。这类助剂还包括通过对纺织品上的污渍进行酶降解来促进表面活性剂功效的物质。这对于应用于硬质表面的清洁剂也同样适用。在此，除了促进蛋白质去除的蛋白酶，使脂肪裂解的脂肪酶外，特别重要的是淀粉酶和纤维素酶，所述淀粉酶的任务是通过淀粉-多糖的催化水解而使含淀粉的污渍易于去除。

洗涤剂和清洁剂的其它常规内容物是能有助于去除像茶和红葡萄酒渍的颜色污渍。对此使用无机过氧化合物，特别是过氧化氢和固体过氧化物，其通过释放过氧化氢而溶解于水中，如过硼酸钠和碳酸钠-过氧化氢合物，历来作为氧化剂用于消毒和漂白目的。这些化合物在稀释溶液中的氧化效果主要依赖于温度。在较低温度时，无机过氧化合物的氧化效果将通过添加所谓的漂白活化剂来改善。在此首选考虑出自N-或O-酰基化合物的物质类别的化合物，例如多酰基化的亚烷基二胺或羧酸酯。通过添加这些物质可以增强过氧化物漂洗液的漂白效果，以致在低于60℃的温度下已经达到过氧化物漂洗液单独使用下95℃时的相同效果。

通常，酶与漂白体系在效果上是互补的，甚至常观察到协同效应。特别顽固的污渍类别是含叶绿素的污渍，特别是草和树叶的污斑，无论是至今使用的酶还是漂白体系，均不能达到足够程度的去除。对此的难题是，叶绿素不以游离形式而是以与疏水的或含蛋白的植物成分的组合存在，由此增加了漂白体系进攻发色团的难度。

叶绿素酶(EC 3.1.1.14)，作为催化叶绿素或脱镁叶绿素催化分解为叶绿素酯或脱镁叶绿酸和叶绿醇的水解酶，已知约100年了。通过叶绿素酶与叶绿素的反应改善发色团体系的水溶性。

脂肪酶已然常规地在洗涤剂和清洁剂的配方中用于清除脂质或油的污渍。这种酶在此通过水解三酰甘油以及磷脂中一个或多个酯键来清除含油污渍。半乳糖脂酶是脂肪酶中的一个特殊类别，其仅裂解三酰甘油和磷脂或除此之外还裂解半乳糖脂中的一个或多个酯键。

目前还未见报道特别是半乳糖脂酶在商品洗涤剂和清洁剂的配方中的使用。

在半乳糖脂中，一个或多个半乳糖残基以sn-3-位与二酰甘油连接。半乳糖脂是光合活性膜的主要成分，并因此主要存在于植物和光合活性细菌中。在所述半乳糖脂膜中嵌有叶绿素分子。人们例如在植物中发现半乳糖脂酶，其主要存在于叶绿体中。半乳糖脂解酶的其它来源是来自哺乳动物消化道中的脂肪酶并且在微生物中也已检测到该活性。

令人惊讶地发现，叶绿素酶与另一种水解酶，特殊脂肪酶且特别是半乳糖脂酶的组合导致对含叶绿素的污渍意想不到的协同改善效果，从而这种酶的联合使用特别适合在洗涤剂和清洁剂中使用。

本发明的主题是洗涤剂或清洁剂，其包含叶绿素酶与水解酶的组合，优选脂肪酶且特别是半乳糖脂酶。

通过使用叶绿素酶与至少另外一种水解酶，优选脂肪酶，特别是半乳糖脂酶的这种组合将提高特别是在含有过氧化合物的含水洗涤液和清洁液中洗涤剂和清洁剂的去污能力，尤其是针对带颜色的、基于叶绿素的污渍。针对带颜色的污渍的去污能力这一概念在此以其最广泛的意义进行理解，不仅包括漂白存在于纺织品上的污渍，漂白从纺织品上脱离而存在于漂洗液中的污渍，还包括将漂洗条件下从纺织品上脱离的、存在于漂洗液中的纺织染料在其又能附着于其它颜色的纺织品之前纺织染料氧化破坏。即使在使用用于坚硬表面的清洁液时，该概念理解为，不仅漂白存在于坚硬表面的污渍，特别是茶，还有漂白存在于洗碗液中、从坚硬表面脱离的污渍。

作为成分，根据本发明的洗涤剂和清洁剂包含叶绿素酶。作为叶绿素酶主要使用植物酶，优选取自橙(Citrus sinensis)和小麦(Triticum aestivum)的酶。对于在根据本发明的产品中的使用，所述酶可以重组地例如在大肠杆菌或巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中生产，并随即用标准方法从细胞质粗提物或培养基上清液中纯化。

作为其它成分，根据本发明的洗涤剂和清洁剂包含水解酶，优选脂肪酶，特别是半乳糖脂酶。所用的半乳糖脂酶一方面可以取自原核生物来源，例如假单胞菌属(Pseudomomas sp.)或色杆菌属(Chromobacter sp.)，另一方面也可以取自酵母菌、真菌、以及植物或动物来源的真核生物的半乳糖脂酶，例如念珠菌属(Candida sp.)，豆类(Phaseolus vulgaris)，马铃薯(Solanum tuberosum)，豚鼠(Cavia porcellus)，马(Equus caballus)或人(Homo sapiens)。对于在根据本发明的产品中的使用，所述酶可以重组地例如在大肠杆菌或巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中生产，并随即用标准方法从细胞质粗提物或培养基上清液中纯化。

根据本发明的洗涤剂和清洁剂，通常每克含有各自0.0001至10mg，优选各自0.001mg至1.0mg，特别是各自0.02至0.3mg的叶绿素酶和另一种水解酶。

根据本发明的洗涤剂和清洁剂可以作为粉状固体、以后压实的微粒形式、作为均质溶液或悬浊液存在，除了上述的酶之外，原则上还包含所有熟知的和在此类制剂中常规的内容物。根据本发明的制剂可以包含表面活性剂、构建物质(Buildersubstanzen)、附加的基于有机和/或无机的过氧化合物的漂白剂、附加的漂白活化剂、漂白催化剂、水可混的有机溶剂、附加酶、螯合剂、电解质、pH调节剂和其它助剂，如光学增亮剂、灰变抑制剂、染料转移抑制剂、泡沫调节剂、银缓蚀剂、以及染料和香料。本发明的清洗剂可以包含一种或多种表面活性剂，其中特别是阴离子表面活性剂，非离子表面活性剂及其混合物，然而，阳离子、两性离子和两亲表面活性剂也是考虑的。

适宜的非离子表面活性剂尤其是烷基糖苷和烷基糖苷的乙氧基化和/或丙氧基化的产物，或者直链或分支的醇，其具有各自12～18个碳原子的烷基和3～20，优选4～10个烷基醚基团。此外可用的是鉴于烷基部分相应于所述长链的醇衍生物的N-烷基胺、邻二醇、脂肪酸酯和脂肪酸酰胺的乙氧基化和/或丙氧基化的产物，以及具有5～12个碳原子的烷基的烷基酚的乙氧基化和/或丙氧基化的产物。

作为非离子表面活性剂优选使用烷氧基化的、有利的是乙氧基化的、特别是具有优选8～18个碳原子的伯醇且每摩尔醇平均含有1～12mol氧化亚乙基单元(EO)，其中醇残基可以是直链或优选在2-位有甲基分支的，或者可以以混合形式包含直链和甲基分支的残基，以及通常以氧代醇残基形式存在。然而特别优选的是醇乙氧基化物，其直链残基源自具有12～18个碳原子的天然醇，例如椰醇、棕榈醇、牛油醇或油醇，并且每摩尔醇平均含有2～8个EO。属于优选的乙氧基化的醇类的实例例如具有3EO或4EO的C₁₂-C₁₄醇，具有7EO的C₉-C₁₁醇，具有3EO、5EO、7EO或8EO的C₁₃-C₁₅醇，具有3EO、5EO或7EO的C₁₂-C₁₈醇，以及它们的混合物，如具有3EO的C₁₂-C₁₄醇和具有7EO的C₁₂-C₁₈醇的混合物。给出的乙氧基化度是统计平均值，其对于特定的产物可以是整数或分数。

优选的醇乙氧基化物具有狭窄的同源分布(eingeengter Homologenverteilung)(窄幅乙氧基化物，NRE)。除了这些非离子表面活性剂之外，还使用具有12个EO以上的脂肪醇。对此的实例是具有14EO、16EO、20EO、25EO、30EO或40EO的(牛油)脂肪醇。特别是对用于机洗餐具过程的清洁剂，通常使用泡沫极低的化合物。对此优选包括C₁₂-C₁₈烷基聚乙二醇-聚丙二醇醚，其每分子中带有高达8mol的氧化亚乙基和氧化亚丙基单元。当然也可以使用其它熟知的低泡沫非离子表面活性剂，例如C₁₂-C₁₈烷基聚乙二醇-聚丁二醇醚，其每分子中带有高达8mol的氧化亚乙基和氧化亚丁基单元，以及封端的聚烷二醇混合醚。

特别优选的是还有含羟基的烷氧基化醇，所谓的羟基混合醚。作为非离子表面活性剂也可以使用由通式RO(G)x所示的烷基糖苷，其中，R是一级直链或甲基分支的，特别是2-位甲基分支的具有8～22，优选12～18个碳原子的脂族残基，并且G是五碳糖或六碳糖单元，优选葡萄糖。低聚度x表示单糖苷或寡糖苷的分布，为1至10之间的任意值—其可以认作为分析待定的大小和分数值；优选x为1.2～1.4。同样适宜的是多羟基脂肪酸酰胺。

另一类优选使用的非离子表面活性剂是烷氧基化的、优选乙氧基化的或者乙氧基化和丙氧基化的脂肪酸烷基酯，优选具有1～4个碳原子的烷基链，特别是脂肪酸甲酯，其作为单一的非离子表面活性剂或者与其它非离子表面活性剂结合，特别是与烷氧基化的脂肪醇和/或烷基糖苷一起使用。

氧化胺型的非离子表面活性剂，例如N-椰烷基-N，N-二甲胺氧化物和N-牛油基-N，N-二羟乙基胺氧化物，以及脂肪酸烷醇酰胺也是适用的。这些非离子表面活性剂的用量优选不超过乙氧基化的脂肪醇，特别是不多于一半。

作为其它表面活性剂考虑所谓的双子表面活性剂(Gemini-Tenside)。通常理解为这样的化合物，即每个分子中含有两个亲水基团。这些基团通常由一个所谓的“间隔臂”彼此分开。这种间隔臂通常是应当足够长的碳链，从而所述亲水基团具有充分的间距以使它们各自独立地可以发挥作用。在例外情况下，双子表面活性剂不应仅限于这样的“二聚体”，还可以理解为相应的“三聚体”表面活性剂。适宜的双子表面活性剂例如是硫酸化的羟基混合醚，或二聚醇双-硫酸盐和-硫酸化醚和三聚醇三-硫酸盐和-硫酸化醚。封端的二聚和三聚混合醚尤其突出地表现出双向和多边的功能性。此外，也可以使用双子-多羟基脂肪酸酰胺或聚-多羟基脂肪酸酰胺。

适宜的阴离子表面活性剂尤其是肥皂和含有硫酸或磺酸基团的肥皂。作为磺酸型的表面活性剂优选考虑C₉-C₁₃烷基苯磺酸盐、烯基磺酸盐，即烯基烷磺酸盐和羟基烷磺酸盐及二磺酸盐的混合物，例如获自由具有端基或内双键的C₁₂-C₁₈单烯烃通过用气态三氧化硫磺化，随后用碱或酸水解得到的磺化产物。适宜的还有烷基磺酸盐，其由C₁₂-C₁₈烷烃通过例如氯磺化或磺化氧化作用，随后水解或中和得到。适宜的还有α-磺化脂肪酸的酯(酯磺酸盐)，例如氢化的椰酸、棕榈仁酸或牛油脂肪酸的α-磺化甲酯，其通过对植物和/或动物来源的具有8～20个碳原子的脂肪酸分子的甲酯进行α-磺化，并之后中和形成水溶性的单盐来制备得到。优选在此涉及氢化的椰酸、棕榈酸、棕榈仁酸或牛油脂肪酸的α-磺化酯，在此也可以以最低量优选不超过约2～3重量％存在诸如油酸的不饱和脂肪酸的磺化产物。特别优选的α-磺化脂肪酸烷基酯，其酯基的烷基链不超过4个碳原子，诸如甲酯、乙酯、丙酯和丁酯。特别有利的是α-磺化脂肪酸的甲酯(MES)，也使用其皂化的二盐也适用。

另一类适用的阴离子表面活性剂是硫化的脂肪酸甘油酯，其为单酯、双酯和三酯及其混合物，其制备方法是通过单甘油与1～3mol脂肪酸进行酯化或三酰甘油与0.3～2mol甘油进行酯交换。作为烷(烯)基硫酸盐，优选C₁₂-C₁₈脂肪醇的硫酸单酯的碱金属盐特别是钠盐，所述C₁₂-C₁₈脂肪醇例如椰醇、牛油脂肪醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇或硬脂醇，或者C₁₀-C₂₀氧代醇和这样的相同链长的仲醇单酯。

此外优选所述链长的烷(烯)基硫酸盐，其包含由合成的、石化基础制造的直链烷基，其如同基于脂族化学原料相应的适当化合物类似地降解。出于洗涤技术关注的是特别优选C₁₂-C₁₆烷基硫酸盐和C₁₂-C₁₅烷基硫酸盐及C₁₄-C₁₅烷基硫酸盐，2，3-烷基硫酸盐也是适宜的阴离子表面活性剂。适宜的还有用1～6mol环氧乙烷乙氧基化的直链或分支的C₇-C₂₁醇的硫酸单酯，如具有平均3.5mol氧化亚乙基(EO)的2-甲基分支的C₉-C₁₁醇，或具有1～4EO的C₁₂-C₁₈脂肪醇。优选的阴离子表面活性剂还包括烷基磺化琥珀酸盐，也称为磺化琥珀酸盐或磺化琥珀酸酯，并且与醇的磺化琥珀酸的单酯和/或二酯，是优选的脂肪醇和特别是乙氧基化的脂肪醇。优选的磺化琥珀酸盐含有C₈-C₁₈脂肪醇残基或其混合。特别优选的磺化琥珀酸盐含有其本身可视作由前述非离子表面活性剂的乙氧基化脂肪醇衍生而来的脂肪醇基。此处的琥珀酸盐，其脂肪醇基特别优选由具有狭窄同源分布的乙氧基化脂肪醇所衍生。同样也可以使用优选在烷(烯)基链中具有8～18个碳原子的烷(烯)基琥珀酸或其盐。

作为其它的阴离子表面活性剂考虑氨基酸的脂肪酸衍生物，例如N-甲基牛磺酸(Tauride)和/或N-甲基甘氨酸(肌氨酸)。在此特别优选肌氨酸或肌氨酸盐，此处主要是较高级的、任选的单或多不饱和脂肪酸的肌氨酸盐，如油酰肌氨酸盐。作为其它的阴离子表面活性剂考虑特别是肥皂。特别适宜的是饱和脂肪酸的肥皂，如月桂酸盐、肉豆蔻酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、氢化芥酸盐和山萮酸盐，以及特别是从天然脂肪酸衍生的肥皂混合物，例如椰酸、棕榈仁酸或牛油脂肪酸。这些肥皂或肥皂替代品的组合也同样已知用于烯基琥珀酸盐。

所述阴离子表面活性剂，包括肥皂，可以以钠盐、钾盐或铵盐，以及诸如单、二或三乙醇胺的有机碱的可溶性盐的形式存在。优选所述阴离子表面活性剂以钠盐或钾盐，特别是钠盐的形式存在。

表面活性剂包含在根据本发明的洗涤剂中的混合比例优选5～50重量％，特别是8～30重量％，然而用于坚硬表面清洁的制剂，尤其是用于餐具的机洗清洁，具有较低的表面活性剂含量在10重量％以内，特别是5重量％以内，优选0.5～3重量％的范围。

根据本发明的制剂优选包含至少一种水溶性和/或非水溶性、有机和/或无机的构建剂。水溶性有机构建剂物质包括多羧酸，特别是柠檬酸和糖酸；单体或多聚体的氨基多羧酸，特别是甲基甘氨酸二乙酸，次氮基三乙酸和乙二胺四乙酸，以及聚天冬氨酸，聚膦酸，特别是氨基三(亚甲基膦酸)、乙二胺四(亚甲基膦酸)和1-羟乙烷-1，1-二膦酸，多聚体羟基化合物如糊精以及多聚体多羧酸，特别是通过氧化多糖或糊精而获得的多羧酸酯，聚合的丙烯酸、甲基丙烯酸、马来酸和它们的共聚物，其也可以聚合入地包含较少比例的无羧酸功能性的可聚合物质。不饱和羧酸同聚物的相对分子质量通常在3000～200,000的范围内，共聚物在2000～200,000之间，优选30,000～120,000之间，均以游离酸计。特别优选的丙烯酸-马来酸共聚物的相对分子质量是30,000～100,000。常规的商业产品如BASF公司的Sokalan TM CP 5，CP 10和PA 30。适宜地，较少选择这样一类化合物：其是带有乙烯基醚的丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物，所述乙烯基醚如乙烯基甲基醚、乙烯基酯、乙烯、丙烯或苯乙烯，其中酸的比例至少在50重量％。作为水溶性有机构建剂的物质还可以使用三元共聚物，其包含两个不饱和酸和/或其盐作为单体，第三单体是乙烯基醇和/或酯化的乙烯基醇或碳水化合物。第一酸单体及其盐衍生自单乙烯不饱和C₃-C₈羧酸，优选C₃-C₄单羧酸，特别是(甲基)丙烯酸。第二酸单体及其盐可以是C₄-C₈二羧酸，在此特别优选马来酸的衍生物，和/或烯丙基磺酸的衍生物，其在2-位有烷基或芳基取代。这类聚合物通常具有相对分子质量介于1000～200,000。另外优选的共聚物是，其单体优选丙烯醛和丙烯酸/丙烯酸盐或者醋酸乙烯酯。所述有机构建剂物质可以特别是用于制成液体制剂以水溶液形式，优选以30-50重量百分比的水溶液形式使用。所有提到的酸通常以它们的水溶性盐的形式使用，特别是碱金属盐。

这类有机构建剂物质可以按希望以用量在40重量％以内，尤其在25重量％以内，优选1～8重量％包含。临近所述上限值的用量优选以糊状或液体，特别是含水的根据本发明的制剂使用。

作为水溶性无机构建剂的物料尤其考虑碱金属硅酸盐、碱金属碳酸盐和碱金属磷酸盐，其可以其碱性、中性或酸性的钠盐或钾盐的形式存在。此处举例如磷酸三钠，二磷酸四钠，二氢二磷酸二钠，三磷酸五钠，所谓的六偏磷酸钠，低聚磷酸三钠，其低聚度为5～1000，特别是5～50，及相应的钾盐或者钠盐与钾盐的混合物。作为非水溶性、水可分散的无机构建剂的物料尤其使用晶体或无定型的碱金属铝硅酸盐，用量在50重量％以内，优选不超过40重量％，在液体制剂中特别是1～5重量％。其中晶体铝硅酸钠优选具有洗涤剂品质，特别是沸石的A型、P型和任选用X型，单独或混合，例如A型和X型沸石的共晶形式(Vegobond

TM AX，Condea Augusta S.p.A.的商品)。临近所述上限值的用量优选在固体、颗粒型制剂中使用。适宜的铝硅酸盐尤其不含粒径大于30μm的颗粒，并且优选至少80重量％的颗粒粒剂小于10μm。其钙束缚力通常在每克100～200mg CaO的范围。

所述铝硅酸盐的适宜的取代物或部分取代物是晶体碱金属硅酸盐，其可单独存在或与无定型的硅酸盐混合存在。在根据本发明的制剂中作为骨架物质所使用的碱金属硅酸盐优选具有碱金属氧化物与SiO₂的摩尔比小于0.95，特别是在1∶1.1至1∶12，并且可以无定型或晶体存在。优选的碱金属硅酸盐是硅酸钠，特别是无定型的硅酸钠，具有Na₂O∶SiO₂的摩尔比为1∶2至1∶2.8。作为晶体硅酸盐，其可以单独存在或与无定型硅酸盐以混合物存在，优选使用通式Na₂Si_xO_2x+1·yH₂O的晶体片层硅酸盐，其中x(所谓的模量)的数值为1.9～22，尤其是1.9～4，y的数值为0～33，优选的数值对应x为2、3或4。优选的晶体片层硅酸盐是所述通式中x的数值设定为2或3。特别优选β-或δ-二硅酸钠(Na₂Si₂O₅·yH₂O)。由无定型碱金属硅酸盐制造的、上述通式的实质上无水的晶体碱金属硅酸盐，其中x数值为1.9～2.1，也可用于根据本发明的制剂中。在另一种根据本发明的制剂的优选实施形式中，使用具有2～3的模量的晶体片层硅酸钠。具有1.9～3.5范围模量的晶体硅酸钠在根据本发明的制剂的其它优选实施形式中使用。符合上述式(I)的晶体片层状硅酸盐由Clariant以商品名Na-SKS出售，例如Na-SKS-1(Na₂Si₂₂O₄₅·xH₂O，Kenyait)，Na-SKS-2(Na₂Si1₄O₂₉·xH₂O，Magadiit)，Na-SKS-3(Na₂Si₈O₁₇·xH₂O)或Na-SKS-4(Na₂Si₄O₉·xH₂O，Makatit)。其中主要适用的是Na-SKS-5(α-Na₂Si₂O₅)，Na-SKS-7(β-Na₂Si₂O₅，Natrosilit)，Na-SKS-9(Na₂Si₂O₅·3H₂O，)，Na-SKS-10(NaHSi₂O₅·3H₂O，Kanemit)，Na-SKS-11(t-Na₂Si₂O₅)和Na-SKS-13(NaHSi₂O₅)，尤其是Na-SKS-6(δ-Na₂Si₂O₅)。在根据本发明的制剂的优选设计中，使用下列颗粒化合物：选自晶体片层硅酸盐和柠檬酸盐，选自晶体片层硅酸盐和如上所述的(共)聚合体多羧酸，或选自碱金属硅酸盐和碱金属碳酸盐，例如以名称Nablon

TM 15商购可得的。

在根据本发明的制剂中，可任选以90重量％以内的用量包含构建剂物质。优选以75重量％以内的用量包含。根据本发明的洗涤剂具有构建剂含量尤其为5～50重量％。在用于清洁坚硬表面的根据本发明的制剂中，特别是用于机洗餐具，构建剂物质的含量尤其为5～88重量％，其中在这样的制剂中优选不使用非水溶性构建剂物料。特别用于机洗餐具的根据本发明的制剂的优选实施形式是包含20～40重量％的水溶性有机构建剂(特别是碱金属柠檬酸盐)，5～15重量％的碱金属碳酸盐和20～40重量％的碱金属二硅酸盐。

作为适宜的过氧化合物尤其考虑过氧化氢和在洗涤条件下释放过氧化氢的无机盐，其包括碱金属的过硼酸盐、过碳酸盐、过硅酸盐和/或过硫酸盐如过一硫酸盐(Caroat)，也可以用有机过酸或有机酸的过酸盐，如邻苯二甲酰亚胺过己酸，过苯甲酸，二过十二烷二酸的盐。如果使用固体过氧化合物，可以使用粉末或颗粒的形式，其原则上也可以按常规方法包裹。过氧化合物的用量优选50重量％以内，尤其是5～30重量％，特别优选8～25重量％。添加少量已知的漂白稳定剂例如膦酸盐、硼酸盐或者偏硼酸盐和偏硅酸盐以及诸如硫酸镁的镁盐可以是有利的。

作为漂白活化剂特别是使用化合物，其能够在过水解的条件下得到优选具有1～10个碳原子尤其是2～4个碳原子的脂肪族过氧羧酸，和/或任选取代的过苯甲酸。作为适宜的物质，其O-和/或N-酰基具有所述的碳原子数和/或任选取代的苯甲酰基。优选多个酰基化的烷二胺，特别是四乙酰基乙二胺(TAED)，酰化的三嗪衍生物，特别是1，5-二乙酰基-2，4-二氧代六氢-1，3，5-三嗪(DADHT)，酰化的甘脲，特别是四乙酰基甘脲(TAGU)，N-酰亚胺，特别是N-壬酰基琥珀酰亚胺(NOSI)，酰化的酚磺酸盐，特别是正壬酰或异壬酰氧基苯磺酸盐(n-或iso-NOBS)，羧酸酐，特别是邻苯二甲酸酐，酰化的多元醇，特别是三醋汀，乙二醇双醋酸酯，2，5-二乙酰氧基-2，5-二氢呋喃和烯醇酯以及乙酰化的山梨醇和甘露醇，酰化的糖衍生物，特别是五乙酰基葡萄糖(PAG)，五乙酰基果糖，四乙酰基木糖和八乙酰基乳糖以及乙酰化的，任选N-烷基化的葡糖胺和葡糖酸内酯，和/或N-酰基化的内酰胺，例如N-苯甲酰基己内酰胺。也优选使用亲水取代的酰基缩醛和酰基内酰胺。

这类漂白活化剂可以基于全部制剂以常规用量范围包含，优选0.5～10重量％，特别是1～8重量％。添加于以上所列常用的漂白活化剂或取而代之还可包含磺酰亚胺和/或强化漂白的过渡金属盐或过渡金属络合物作为所谓的漂白催化剂。属于为此考虑的过渡金属化合物尤其是锰、铁、钴、钌或钼-Salen络合物及其已知的N-类似物，锰、铁、钴、钌或钼的羰基络合物，锰、铁、钴、钌、钼、钛、钒和铜与含氮的三齿配体的络合物，钴、铁、铜和钌的胺络合物。强化漂白的过渡金属络合物，特别是以Mn、Fe、Co、Cu、Mo、V、Ti和/或Ru为中心原子的，以常规用量，分别基于制剂的总量优选1重量％以内的用量，尤其是0.0025～0.25重量％和特别优选0.01～0.1重量％使用。

此外，根据本发明的洗涤剂和清洁剂可以包含蛋白酶、另一种脂肪酶、淀粉酶和/或纤维素酶。为此所用的蛋白酶属于由微生物尤其细菌或真菌可获得的在碱性范围具有最适pH的酶。根据本发明的制剂中蛋白酶的优选用量是，在成品制剂中100～7500PE/g(每克蛋白酶单位按照Tenside 7，125(1970)中所述的方法确定)，尤其是125～5000PE/g，特别优选150～4500PE/g。可用的蛋白酶是商购可得的，例如名为BLAP TM，Savinase TM，Esperase TM，Maxatase TM，Optimase TM，Alcalase TM，Durazym TM，Everlase TM，Maxapem

&或Purafect TM OxP。

对于根据本发明的制剂可使用的淀粉酶，优选与至少另一种酶联合使用，其属于由细菌或真菌可获得的酶，其最适pH优选在碱性范围，最大约pH 10。可用的商品例如Termamyl TM，Maxamyl TM，Duramyl TM或Purafect TM OxAm。淀粉酶在本发明的制剂中优选的使用量是成品制剂中0.01～2KNU/g(“千Novo单位”每克，按Novo公司的标准方法，其中1KNU是指5.26g淀粉在pH 5.6和37℃下分解所需的酶量，基于由S.P.Colowick的P.Bernfeld和N.D.Kaplan在Methods in Enzymology，卷1，1955，149页中所述的方法)，尤其是0.015～1.8KNU/g，特别优选0.03～1.6KNU/g。如果根据本发明的制剂包含淀粉酶，则选择优选经基因工程修饰的淀粉酶。

在根据本发明的制剂中任选地附加所包含的另一种脂肪酶涉及由微生物特别是细菌或真菌可获得的酶。脂肪酶在根据本发明的制剂中的优选用量是成品制剂中脂解活性在10～10,000LU/g(“脂酶活性单元”每克，依照EP258068所述的方法经三丁酸甘油酯在30℃和pH 7下酶促水解而确定)，尤其是80～5000lU/g，特别优选100～1000LU/g。普通商品脂肪酶例如Lipolase TM，Lipomax TM，Lumafast TM和Lipozym TM。

根据本发明可用的纤维素酶也同样是由细菌或真菌可获得的酶，其最适pH优选接近中性至弱碱性，pH范围6～9.5。在根据本发明的制剂中的优选用量是在成品制剂中纤维素分解活性在0.05～1.5IU/g(“国际单位”每克，基于对羧甲基纤维素钠在pH 9.0和40℃下酶促水解，如由S.Ito等在Agric.Biol.Chem.53，1275(1989)中所描述的)，尤其是0.07～1.4IU/g，特别优选0.1～1.3IU/g。适用的商品例如制造商Novo Nordisk的Celluzyme或者Kao的KAC TM。

由于多种酶在根据本发明的制剂中使用，可以通过将两种或多种分开的或者按已知方法分别生产的酶进行混合，或者通过将两种或多种共同以一个颗粒生产的酶进行。

作为在制剂中附加可使用的酶可以考虑选自如下类别：角质酶、支链淀粉酶、半纤维素酶、氧化酶、漆酶和过氧化酶及其混合物。尤其适宜的是由真菌和细菌获得的酶有效成分，所述真菌和细菌如枯草杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)、柔毛腐殖霉菌(Humicola lanuginosa)、特异腐殖霉菌(Humicola insolens)、假产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes)、洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)或灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)。这些酶可以吸附到载体上和/或嵌入包裹物质中，以防其过早地失活。这些酶在根据本发明的洗涤剂和清洁剂中优选以5重量％以内，尤其是0.2～4重量％的用量包含。

对于根据本发明的制剂，尤其当其以液体或糊状形式存在，除水之外可使用的有机溶剂包括具有1～4个碳原子的醇，特别是甲醇、乙醇、异丙醇和叔丁醇，具有2～4个碳原子的二醇，特别是乙二醇和丙二醇及其混合物，和衍生自所述化合物组的醚。这类水可混的溶剂在根据本发明的制剂中的优选用量不超过30重量％，尤其是6～20重量％。

此外，所述制剂可以在洗涤剂和清洁剂中进一步含有常规成分。这种非必要成分包括特别是酶稳定剂、灰变抑制剂、染料转移抑制剂、泡沫抑制剂和光学增亮剂以及染料和香料。为了起到针对银蚀保护的作用，在根据本发明的餐具清洁剂中可以使用的银缓蚀剂。用于坚硬表面的本发明的清洁剂还可以另外包含磨砂作用成分，尤其广泛选自石英粉、木屑、塑料粉、白垩和玻璃微球及其混合物。磨砂成分在根据本发明的清洁剂中优选含有不超过20重量％，尤其是5～15重量％。

为了调节所期望的、不是通过其余组份的混合物自身产生的pH值，根据本发明的制剂包含体系相容性和环境相容性的酸，尤其是柠檬酸、乙酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、羟乙酸、琥珀酸、戊二酸和/或己二酸，但还有无机酸，尤其硫酸，或碱，特别是氢氧化铵或碱金属氧化物。这类pH调节剂在根据本发明的制剂中优选以用量不超过20重量％，尤其是1.2重量％～17重量％含有。

考虑用于根据本发明的纺织品洗涤剂中的染料转移抑制剂尤其包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯咪唑、聚N-氧化物如聚(乙烯基吡啶N-氧化物)和乙烯基吡咯烷酮与乙烯基咪唑的共聚物。

灰变抑制剂具有以下任务：使从纺织品纤维上脱落的污物保持悬浮于溶液中。多数有机性质的水溶性胶体适于此目的，例如淀粉、动物胶、明胶、淀粉或纤维素的醚羧酸或醚磺酸的盐或者纤维素或淀粉的酸性硫酸酯的盐。含水溶性酸性基团的聚酰胺也适于此目的。此外可以使用不同于上述的淀粉衍生物，例如醛淀粉。优选使用纤维素醚，如羧甲基纤维素(钠盐)、甲基纤维素、羟烷基纤维素和混合醚，如甲基羟乙基纤维素、甲基羟丙基纤维素、甲基羧甲基纤维素及其混合物，例如基于制剂计，以用量0.1～5重量％使用。

为了增强清洁效果，根据本发明的洗涤剂尤其可以包含能去污的聚合物，所谓的去污聚合物(soil-release-Polymere)，其通常由羧酸单元和任选的聚合的二醇单元组成，例如含有对苯二甲酸乙二醇酯(Ethylenterephthalat)和聚对苯二甲酸乙二醇酯(Polyoxyethylenterephthalat)基团。在能去污的聚合物中可以含有其它单体单元，例如丙二醇、聚丙二醇、亚烷基-或亚烯基二羧酸、间苯二甲酸、羧基或磺基取代的邻苯二甲酸异构体。还可以使用封端的衍生物，即既没有游离的羟基也没有游离的羧基而是带有例如C_1-4烷基或被一元羧酸(例如苯甲酸或磺基苯甲酸)在末端酯化的聚合物。合适的还有聚酯，其除了氧化亚乙基或对苯二甲酸单元外，还含有1，2-亚丙基、1，2-亚丁基和/或3-甲氧基-1，2亚丙基以及甘油单元，并且被C₁-C₄-烷基封端；由对苯二甲酸乙二醇酯和聚对苯二甲酸乙二醇酯组成的摩尔质量为900～9000的去污聚合物，其中聚乙二醇单元的摩尔重量为300～3000，且对苯二甲酸乙二醇酯与聚对苯二甲酸乙二醇酯酯的摩尔比为0.6～0.95；具有聚对苯二甲酸丙二醇酯和聚对苯二甲酸氧乙二醇酯单元、至少部分被C_1-4烷基或酰基封端的聚酯；含有磺乙基封端的对苯二甲酸酯的去污聚酯；具有对苯二甲酸酯单元、烷二醇单元和聚-C_2-4-乙二醇单元的通过不饱和端基的磺化制备的去污聚酯；具有胺基、铵基团和/或氧化胺基团的阳离子去污聚酯和具有乙氧基化的、季铵化的吗啉单元的阳离子去污聚酯。同样合适的是由对苯二甲酸乙二醇酯和聚对苯二甲酸乙二醇酯组成的聚合物，其中聚乙二醇单元的摩尔重量为750-5000并且对苯二甲酸乙二醇酯与聚对苯二甲酸乙二醇酯的摩尔比为50∶50～90∶10，以及摩尔重量为15000-50000的由对苯二甲酸乙二醇酯和聚对苯二甲酸乙二醇酯组成的聚合物，其中聚乙二醇单元的摩尔重量为1000～10000并且对苯二甲酸乙二醇酯与聚对苯二甲酸乙二醇酯的摩尔比为2∶1～6∶1。

根据本发明的纺织品洗涤剂包含二氨基芪二磺酸的衍生物或其碱金属盐做作为光学增亮剂。合适的是例如4，4′-双(2-苯胺基-4-吗啉代-1，3，5-三嗪基-6-氨基)芪-2，2’-二磺酸的盐或同类构造的化合物，其带有二乙醇氨基、甲氨基、苯胺基或2-甲氧基乙氨基以代替吗啉基。此外，也可以存在经取代的二苯乙烯基类型的增亮剂，例如4，4’-双(2-磺基苯乙烯基)联苯、4，4-双(4-氯-3-磺基苯乙烯基)联苯、或4-(4-氯苯乙烯基)-4’-(2-磺基苯乙烯基)联苯的碱金属盐。也可使用上述光学增亮剂的混合物。

特别在用于机械方法中有利的是，在所述制剂中添加常规的泡沫抑制剂。作为泡沫抑制剂合适的是例如天然或合成来源的肥皂，其含有高比例的C₁₈-C₂₄脂肪酸。适宜的非表面活性剂类泡沫抑制剂是例如有机聚硅氧烷及其与超细的、任选硅烷化的硅酸以及石蜡、蜡、微晶蜡的混合物及其与硅烷化的硅酸或双脂肪酸烷二酰胺的混合物。使用各种不同的泡沫抑制剂的混合物也是有利的，例如选自聚硅酮、石蜡或蜡的那些。优选的泡沫抑制剂尤其是含聚硅酮和/或石蜡的泡沫抑制剂，结合在颗粒状的、水溶性或水可分散的载体物质上。特别优选石蜡与双硬脂酸乙二酰胺的混合。

根据本发明的固体制剂的制备可采用已知的方法进行，例如通过喷雾干燥或造粒，其中对酶和其它可能对热敏感的内容物如漂白剂任选地稍后分开地添加。用于具有较高散重(尤其是在650～950g/L的范围)的根据本发明的制剂的制备，优选是已知的具有挤出步骤的方法。另一种优选的借助造粒的方法描述于欧洲专利EP0642576。

为了制备根据本发明的制剂的片剂形式，其可以是单相或多相、单色或多色且特别是由单层或多层优选两层组成，优选将所有的成分—任选各一层—在搅拌机中彼此混合，并且该混合物料借助常规压片方式例如偏心轴压片或轮杆压片压制。特别是在多层片剂的情况下，有利的是至少有一层是预先压制的。由此制备的片剂优选重量在10～50g，特别是15～40g。该片剂的空间形状可以是任意的且可以是圆形、椭圆形或边角形，也可以是中间体的形式。优选边角是整圆的。圆形片剂优选具有直径30～40mm。尤其角形或方形式样片剂，其主要通过投料装置例如洗碗机使用，该片剂的尺寸依赖于所述投料装置的几何结构和容积。示例性优选的实施形式具有(20～30mm)×(34～40mm)，特别是26×36mm或24×38mm的基面。

以包含在溶液中的常规溶剂的形式的根据本发明的液体或糊状洗涤剂和清洁剂，通常通过内容物的简单混合(其可以以物质或作为溶液给如一个自动混合器中)而制备。

通过制备克隆本发明所用的叶绿素酶是根据文献已知的(IntEnz酶命名EC 3.1.1.1.14)，例如根据Tsuchiya et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96，15362-15367(1999)。例如对于叶绿素酶已知的拟南芥(Arabidopsis thaliana)AT1G19670或AT5G43860。半乳糖脂酶已知为EC 3.1.1.26，CAS登记号：37278-40-3。

实施例

1.在大肠杆菌中叶绿素酶的重组表达

将叶绿素酶的基因用聚合酶链式反应，由作为引物的具有寡核苷酸Citrus_CHL_fwd_Ndel和Citrus_CHL_rev_Xhol的cDNA探针进行扩增。为了定向克隆入相应的表达载体，例如pET28a(Novagen)，可以将针对限制性核酸内切酶(Ndel和Xhol)的识别序列同时构建在该寡核苷酸中。载体pET28a包含噬菌体T7启动子体系，并编码C端和/或N端的His标签(His-tag)。扩增的DNA用这两个限制性核酸内切酶消化，并在琼脂糖凝胶上分级并纯化，其中从凝胶中切割相应的条带并抽提。将该消化并用凝胶纯化的PCR产物与用同样的限制性核酸内切酶切割并与去磷酸化的表达载体连接。随后可以将该连接的DNA用于电感受态大肠杆菌DH10B(Invitrogen)的转化。阳性转化子可以通过菌落PCR(Kolonie-PCR)、限制性分析和测序鉴定。

为了表达叶绿素酶可以用含有经验证的插入子的质粒克隆转化大肠杆菌Tuner(DE3)pLacl(Novagen)。将培养物在37℃下在加入卡那霉素(50μg/mL)和氯霉素(34μg/mL)的2xYT培养基中培养。在光学密度约为0.8时，通过添加1mM的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。随后在30℃下继续培养4到6小时。

2.源自大肠杆菌的重组叶绿素酶的纯化

通过离心收集细胞并在含有500mM NaCl、20mM咪唑和0.5mg/mL溶菌酶的20mM磷酸钠缓冲液中(pH 7.4)重悬浮，并在室温下温育。通过三次在液氮下冷冻并接着在约42℃再解冻或通过超声进行细胞破碎。将反应物料离心，其中叶绿素酶作为溶解的蛋白存在于上清液中。随后将叶绿素酶通过金属亲和色谱进一步纯化。为此将金属亲和基质用含有500mM NaCl、20mM咪唑和10％甘油的20mM磷酸钠缓冲液(pH 8)平衡，在样品施加后，将基质用上述的缓冲液洗涤并随后将叶绿素酶用含有500mM NaCl、250mM咪唑和10％甘油的20mM磷酸钠缓冲液(pH 8)洗脱。

3.叶绿素酶活性测试

所表达的叶绿素酶的活性根据相应的反应产物叶绿素酯提高的水溶性来确定。该反应在100μL反应物料中实施，该反应物料包括100μM取自菠菜(Fluka)的叶绿素、20％丙酮(v/v)和100mM Na-MOPSpH 7.0。反应物料于37℃，在振荡下温育60分钟，然后添加50μL丙酮、50μL正己烷和5μL Tris-盐酸(2M；pH 9.0)使反应结束。将混合物通过剧烈振荡来良好匀浆，然后通过两分钟离心加速分相。通过叶绿素酶的反应，水溶性的叶绿素酯存在于下层水相而没有反应的叶绿素存在于上层有机相。为了定量，在80μL水相中混入120μL甲醇，并测定受激叶绿素酯的荧光(Ex 355nm；Em 660nm)。生成的叶绿素酯的量通过标准校正曲线确定。

4.在巴斯德毕赤酵母中半乳糖脂酶的重组表达

将侧翼有限制性核酸内切酶Kpnl和Pagl的识别位点的人胰脂酶相关蛋白2、半乳糖脂酶的合成的基因表达盒克隆入毕赤酵母表达载体如pGK1或pGAPZα中。为此，不仅将该合成的基因，而且将随后还被去磷酸化的相应的表达载体用限制性核酸内切酶根据厂商说明进行消化。将消化的核酸在琼脂糖凝胶电泳上根据大小分级并纯化，然后用T4DNA连接酶根据厂商说明进行连接。该连接的DNA随后用于电感受态的大肠杆菌DH10B的转化。阳性转化子通过菌落PCR、限制性分析和测序鉴定。

为了表达脂肪酶，用经验证的质粒克隆转化巴斯德毕赤酵母。在加入三丁酸甘油酯的YPD平板上在活性的脂肪酶分泌的情况下根据晕圈检测表达。随后将具有脂肪酶活性的液体培养物加入具有博莱霉素(Zeocin，100μg/L)的YPD培养基中。将培养物在30℃在振荡下温育48至72小时。然后将细胞从存在脂肪酶的培养上清液中通过离心分离。将培养上清液通过透析脱盐并通过冻干浓缩。

5.脂肪酶活性测试

通过在p-硝基苯基丁酸酯pNP-C4或p-硝基苯基辛酸酯pNP-C8水解期间在405nm下消光的增加来跟踪脂肪酶的活性。该反应在1mL反应物料中进行，该反应物料包括2mM p-硝基苯酯，50mM磷酸钾缓冲液(pH 8)和0.1％Triton X-100。405nm下消光的增加在至少1分钟的时间段内持续跟踪。借助于p-硝基苯酚的消光系数ε_{(pNP，405nm，pH} ₈₎＝16.05mM^-1cm^-1的增加计算出体积活性。一个单位对应于在上述测试反应物料中在22℃下在一分钟内催化释放1μmol p-硝基苯酚的酶量。

6.从叶绿体中释放叶绿素酯的测定

从菠菜叶分离用于该检测的叶绿体。为此将新鲜的菠菜叶用海沙在研钵中磨碎，并用50mM磷酸钙缓冲液pH8和0.33M蔗糖在研钵中匀浆。将悬液用八层纱布过滤并将细胞碎片以及剩余的沙子在200×g离心1分钟去除。随后将上清液中的叶绿体在1000×g离心10分钟沉淀。将叶绿体沉淀重悬浮于具有2mM EDTA、1mM MgCl₂和0.33M山梨醇的50mM HEPES pH 7.6中。通过测定在652nm下在80％丙酮中具有ε＝34.5I g^-1cm^-1的消光来确定叶绿体含量。

借助于反应产物提高的水溶性确定从叶绿体中释放的叶绿素酯。将相应于10μg叶绿素含量的叶绿体在150μL的反应物料中在40℃下温育60分钟，该反应物料含有具有不同量的叶绿素酶(例如250ng)和/或脂肪酶(例如5U pNP-C4)的50mM磷酸钙缓冲液pH 8。随后将叶绿体沉淀并确定上清液中释放的叶绿素酯。通过检测652nm下的消光或通过检测60％甲醇中的荧光(Em 355nm；Ex 655nm)进行叶绿素酯确定。

结果：

7.从纺织品表面去除草污斑

为了测定洗涤能力，将小片棉织品(WFK 10A，

Krefeld)用新鲜切割的草均匀染色。为了老化，将污斑避光干燥库存至少三天。

之后先将棉布片(ca.1cm²)在37℃用500μL酶溶液处理2小时，该酶溶液含有～3μg叶绿素酶(实施例2)和～7.5U(pNP-C4)半乳糖脂酶(实施例4)。棉布片随后用洗涤剂溶液(Spee Color Waschmittel，Henkel D üsseldorf)在40℃手洗。对含叶绿素污渍的清除度用白度测量仪测定。ΔR值用来描述经处理与未经处理的被测纺织品的区别。

洗涤结果(％减轻)

纺织品所用的洗涤剂

Spee Color溶液 36.9％减轻

Spee Color溶液添加叶绿素酶 44.6％减轻

Spee Color溶液添加叶绿素酶和半乳糖脂酶 54.5％减轻

明显可以看出，本发明的叶绿素酶与脂肪酶的组合使用，相对于仅有叶绿素酶而不用脂肪酶的情况，其清洁能力有显著改善。

Claims

1.洗涤剂和清洁剂，其包含叶绿素酶和另一种水解酶。

2.根据权利要求1的洗涤剂和清洁剂，其特征在于，所述水解酶是脂肪酶。

3.根据权利要求1的洗涤剂和清洁剂，其特征在于，所述水解酶是半乳糖脂酶。

4.根据权利要求1的洗涤剂和清洁剂，其特征在于，其每克含有0.0001mg至10mg的叶绿素酶，和0.0001mg至10mg的水解酶。

5.根据权利要求1的洗涤剂和清洁剂，其特征在于，其还含有蛋白酶。

6.根据权利要求1的洗涤剂和清洁剂，其特征在于，其还含有淀粉酶。

7.根据权利要求1-6中一项或多项的洗涤剂和清洁剂的用途，用于去除含叶绿素的污渍。