CN102150620B - 金果榄组培繁殖方法及其诱导培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种金果榄组培繁殖方法及其诱导培养基。本发明采用MS+6-苄氨基嘌呤(6-BA)+奈乙酸(NAA)+赤霉素(GA3)+激动素(KT)作为金果榄丛生芽诱导培养基，这四种生长激素组合，在合适的浓度和弱酸性的环境下，可激活金果榄体细胞内的作用酶，促进金果榄外植体的萌发和生长，培养20天就能形成粗壮的丛生芽，扩繁达25倍；本发明还采用MS+吲哚丁酸(IBA)+奈乙酸(NAA)作为生根诱导培养基，能有效地促进金果榄单苗生根形成新植株。应用上述两种诱导培养基的金果榄组培繁殖方法，可快速有效地繁殖金果榄，解决了其野生资源日益减少和自然繁殖率低的问题，为深入开发其医药价值提供了有力的种源保障。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养繁殖领域，具体涉及到一种金果榄组培繁殖方法及其诱导培养基。
背景技术
金果榄(Tinospora capillipes Gagnep.)为防己科青牛胆属常绿缠绕藤本植物，主产于四川、湖南、广西、湖北、贵州等省区。它是中药金果榄基源植物之一，具有清热解毒、利咽止痛之功效，主治咽喉肿痛、痈疽疔毒、泄泻、痢疾、脘腹热痛等。金果榄药用块根，是《中国药典》历年收载的药材品种，其块根含掌叶防己碱(Palnmtine)和咖伦宾(Colmtfifin)、巴马汀、药根碱、非洲防己碱、千金藤碱、蝙蝠葛碱和木兰花碱。民间广泛用于治疗胃痛，现代药理研究表明，金果榄有明显的抗炎镇痛、抗菌、抗肿瘤、降血糖、抗应激、抗溃疡及解毒作用等，又被喻为可替代抗生素的天然药物。
一直以来，金果榄都依靠挖取野生品作药用，由于只挖不种，加上生长较慢，野生资源日趋枯竭，人工种植和抚育势在必行。另外，金果榄雌雄异株，授粉受到环境影响极大，自然结实率低，资源调查和引种中发现，雄株远多于雌株(约50∶1)，结果机会大大减少；且种子有明显的休眠期，发芽率较低。因此，种源缺乏是金果榄资源锐减的主要原因。目前，金果榄扦插繁殖未获得成功。组织培养快速繁殖是现代生物技术，在香蕉、罗汉果、甜茶、石斛等作物上已取得成功，并应用于生产，而金果榄组培繁殖研究并未见成功报导。利用MS培养基(Murashige and Skoog Stock)为基础培养基，添加不同浓度和不同种类的激素，在多种植物组织培养中已获得成功。其中，所用激素或激素组合及其浓度是组培成功与否的技术关键，不同植物使用的激素和浓度大不相同。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种金果榄组培繁殖方法，以有效利用现有资源快速繁殖金果榄，并能充分保障其医药用途开发所需原料来源。
本发明要解决的另一技术问题是提供用于上述金果榄组培繁殖方法的丛生芽诱导培养基和生根诱导培养基。
为解决上述技术问题本发明采用如下技术方案：
金果榄组培繁殖方法，将金果榄外植体接种到丛生芽诱导培养基中进行培养，待丛生芽长至3cm时，将丛生芽分割成小丛或单苗接种到生根诱导培养基中进行培养；
上述丛生芽诱导培养基以MS培养基为基础，含有下列浓度的物质：
6-苄氨基嘌呤 0.46～0.55mg/L 奈乙酸 0.18～0.24mg/L
赤霉素 0.8～1.3mg/L 激动素 0.15～0.23mg/L，
其pH值为4.5～5.0；
上述生根诱导培养基以MS培养基为基础，含有下列浓度的物质：
吲哚丁酸0.6～1.2mg/L 奈乙酸 0.6～1.2mg/L。
外植体为嫩茎。
嫩茎先经洗净并用0.1％HgCl2溶液消毒处理8～10min。
培养均在温度26±3℃、光照时间12～14h.d-1、光照强度20～30μmol.m-2.s-1的条件下进行。
单苗长到5～7cm时，于室内炼苗1周，取出洗净种植于已消毒拌有50％育苗基质的红壤土中。
金果榄丛生芽诱导培养基，以MS培养基为基础，含有下列浓度的物质：
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赤霉素0.8～1.3mg/L 激动素0.15～0.23mg/L。
该培养基的pH值为4.5～5.0。
金果榄生根诱导培养基，以MS培养基为基础，含有下列浓度的物质：
吲哚丁酸0.6～1.2mg/L 奈乙酸0.6～1.2mg/L。
本发明采用MS+6-苄氨基嘌呤(6-BA)+奈乙酸(NAA)+赤霉素(GA3)+激动素(KT)作为金果榄丛生芽诱导培养基，这四种生长激素组合，在合适的浓度和弱酸性的环境下，可激活金果榄体细胞内的作用酶，促进金果榄外植体的萌发和生长，培养20天就能形成粗壮的丛生芽，扩繁达25倍；本发明还采用MS+吲哚丁酸(IBA)+奈乙酸(NAA)作为生根诱导培养基，能有效地促进金果榄单苗生根形成新植株。应用上述两种诱导培养基的金果榄组培繁殖方法，可快速有效地繁殖金果榄，解决了其野生资源日益减少和自然繁殖率低的问题，为深入开发其医药价值提供了有力的种源保障。
具体实施方式
实施例1
(1)丛生芽诱导
取金果榄幼嫩茎，先用洗洁精洗去表面污垢，接着流水冲洗15min，然后在超净工作台上用75％乙醇处理30s，无菌水冲洗1遍，再用0.1％HgCl2消毒10min，无菌水冲洗5次；用无菌滤纸吸干外植体，植于用MS添加6-BA 0.46mg/L、NAA 0.24mg/L、GA30.8mg/L、KT 0.15mg/L，pH值调节至4.5的培养基上，在温度为26±3℃，光照时间为12～14h.d-1，光照强度20～30μmol.m-2.s-1的条件下，培养22天，平均得到25.2倍的丛生芽，丛生芽较粗壮，绿色，生长稍缓慢。
(2)生根诱导
待丛生芽生长至3～4cm时，将丛生芽分割成小丛或单苗接种到生根培养基，生根培养基配方为：在MS上，添加IBA 0.6mg/L+NAA 1.2mg/L制成；在温度为26±3℃，光照时间为12～14h.d-1，光照强度20～30μmol.m-2.s-1的条件下，培养30天开始生长出白色的不定根，50天长出1～2条，粗壮，长度约1cm的不定根。
(3)炼苗与移栽
待上述已生根的单苗生长有5～7cm的组培苗，打开培养瓶盖，于室内炼苗1周，取出洗净种植于疏松的红壤土中；在透光度30％左右的育苗棚中，保持湿润，培养2个月，叶片淡绿色，成活率达82％。
实施例2
(1)丛生芽诱导
取金果榄幼嫩茎，先用洗洁精洗去表面污垢，接着流水冲洗15min，然后在超净工作台上用75％乙醇处理30s，无菌水冲洗1遍，再用0.1％HgCl2消毒8min，无菌水冲洗5次；用无菌滤纸吸干外植体，植于用MS添加6-BA 0.50mg/L、NAA 0.20mg/L、GA3 1.0mg/L、KT 0.20mg/L，pH值调节至4.7的培养基上，在温度为26±3℃，光照时间为12～14h.d-1，光照强度20～30μmol.m-2.s-1的条件下，培养20天，平均得到27倍的丛生芽，丛生芽粗壮，叶浓绿色、肥厚，长势好。
(2)生根诱导
待丛生芽生长至3～4cm时，将丛生芽分割成小丛或单苗接种到生根培养基，生根培养基配方为：在MS上，添加IBA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L制成；在温度为26±3℃，光照时间为12～14h.d-1，光照强度20～30μmol.m-2.s-1的条件下，培养25天开始生出白色的不定根，45天长出2～3条，粗壮，长度约2cm的不定根。
(3)炼苗与移栽
待上述已生根的单苗生长有5～7cm的组培苗，打开培养瓶盖，于室内炼苗1周，取出洗净种植于已消毒拌有50％育苗基质的红壤土中；在透光度30％左右的育苗棚中，保持湿润，培养2个月，叶片浓绿色，生长健壮，成活率达88％，此基质适合金果榄幼苗生长。
实施例3
(1)丛生芽诱导
取金果榄幼嫩茎，先用洗洁精洗去表面污垢，接着流水冲洗15min，然后在超净工作台上用75％乙醇处理30s，无菌水冲洗1遍，再用0.1％HgCl2消毒9min，无菌水冲洗5次；用无菌滤纸吸干外植体，植于用MS添加6-BA 0.55mg/L、NAA 0.18mg/L、GA3 1.3mg/L、KT 0.23mg/L，pH值调节至5.0的培养基上，在温度为26±3℃，光照时间为12～14h.d-1，光照强度20～30μmol.m-2.s-1的条件下，培养18天，平均得到25.8倍的丛生芽，丛生芽较粗壮，叶浓绿色，生长较快。
(2)生根诱导
待丛生芽生长至3～4cm时，将丛生芽分割成小丛或单苗接种到生根培养基，生根培养基配方为：在MS上，添加IBA 1.2mg/L+NAA 0.6mg/L制成；在温度为26±3℃，光照时间为12～14h.d-1，光照强度20～30mol.m-2.s-1的条件下，培养30天开始生长出白色的不定根，48天长出2条，粗壮，长度约2cm的不定根。
(3)炼苗与移栽
用上述已生根的单苗生长高于培养瓶，高度约8～10cm的组培苗，打开培养瓶盖，于室内炼苗1周，取出洗净种植于已消毒拌有50％育苗基质的红壤土中；在透光度30％左右的育苗棚中，保持湿润培养；打开瓶盖后3～4天有顶芽坏死现象，但苗还成活，种植2个月，侧芽萌发，叶片绿色，成活率达83％。
Claims (5)
1.一种金果榄组培繁殖方法，其特征在于：将金果榄外植体接种到丛生芽诱导培养基中进行培养，待丛生芽长至3cm时，将丛生芽分割成小丛或单苗接种到生根诱导培养基中进行培养；
所述丛生芽诱导培养基以MS培养基为基础，含有下列浓度的物质：
6-苄氨基嘌呤0.46～0.55 mg/L 萘乙酸0.18～0.24 mg/L
赤霉素0.8～1.3 mg/L 激动素0.15～0.23 mg/L，
其pH值为4.5～5.0；
所述生根诱导培养基以MS培养基为基础，含有下列浓度的物质：
吲哚丁酸0.6～1.2 mg/L 萘乙酸0.6～1.2 mg/L。
2.根据权利要求1所述的金果榄组培繁殖方法，其特征在于：所述外植体为嫩茎。
3.根据权利要求2所述的金果榄组培繁殖方法，其特征在于：所述嫩茎先经洗净并用0.1%HgCl2溶液消毒处理8～10min。
4.根据权利要求3所述的金果榄组培繁殖方法，其特征在于：所述培养均在温度26±3℃、光照时间12～14h.d-1、光照强度20～30μmol.m-2.s-1的条件下进行。
5.根据权利要求4所述的金果榄组培繁殖方法，其特征在于：待所述单苗长到5～7cm时，于室内炼苗1周，取出洗净种植于已消毒拌有50%育苗基质的红壤土中。
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