CN102138898A - 抗肿瘤药物纳米脂质体 - Google Patents

Abstract

本发明涉及抗肿瘤药物纳米脂质体，具体涉及一种新型长循环纳米脂质体及其制备方法。本发明属于药物制剂领域。其特征在于以高相变温度脂质和胆固醇为膜材，制备成长循环纳米脂质体，所述磷脂相变温度为40-60℃。本发明采用硫酸铵梯度法制备。本发明与现有技术相比，可以减少抗肿瘤药物对人体的毒副作用，降低生产成本，对某些特定器官具有靶向性等优点。

Description

抗肿瘤药物纳米脂质体

技术领域

本发明属于医疗技术领域，涉及一种长循环抗肿瘤药物纳米脂质体组合物及其制备方法。

背景技术

脂质体(liposome)是磷脂分散在水中时形成的磷脂双分子层，其内部为水相的闭合囊泡。由于其结构类似生物膜，故又称人工生物膜(artificial biological membrane)据实验和临床应用的需要，可以改变脂质体的脂质成分提高脂质体的靶向性。脂质体作为抗肿瘤药物载体已试用于临床并取得了较满意的疗效。

脂质体的特点脂质体作为药物的载体具有以下优点：①脂质体载体能保护被包裹物；②能有效地控制药物释放；③能通过改变脂质体大小和电荷，可以控制药物在组织内的分布与在血液中的清除率；④能改变某种物理因素，例如改变用药局部的Ph、病变部位温度等能明显改变脂质体膜的通透性，使脂质体选择性的释放药物；⑤可用单克隆抗体等配体修饰脂质体，使药物靶向病变部位；⑥脂质体进人体内后主要被网状内皮系统吞噬，能激活机体的自身免疫功能，并使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积累，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物毒性；⑦脂质体本身对人体无毒性和免疫抑制作用。

脂质体的药代动力学研究显示，脂质体作为抗癌药物的载体，静脉注射后除被网状内皮系统认作外源分子，被吞噬细胞所吞噬，主要聚集于肝、脾及骨髓外，还可进人实质性肿瘤、炎症组织和高血压血管损伤等部位，因这些部位的毛细血管比正常血管通透性高。因而应用脂质体携载抗瘤药物比游离药物更易聚集在肿瘤部位，发挥更高的抗瘤作用。并且脂质体包裹具有化学毒性的抗肿瘤制剂时，能保护敏感组织免遭药物毒性的损害。

尽管普通脂质体给药后可显著地改变脂质体携带药物在体内的动力学特征，如增加血药浓度-时间曲线下面积、增加淋巴系统的导向性、降低正常组织的血药浓度、避免耐药性等。但普通脂质体作为药物载体，仍存在靶向分布特性不理想，贮存中稳定性欠佳等缺点，因而限制了脂质体在肿瘤化疗中的应用。

蒽环类药物在以化疗为基础的肿瘤治疗基本方案中具有不可替代的作用。多柔比星是乳腺癌、淋巴癌等多种肿瘤标准治疗方案中的基础治疗药物之一，多柔比星仍是当前最有效的化疗药物之一。虽然传统的多柔比星市场有一部分被心脏毒性较低的表柔比星替代，但表柔比星也存在剂量限制性毒性，加之本身用量比较大，所以其剂量限制性毒性表现也比较明显。由于其剂量限制性毒性，普通多柔比星和表柔比星就表现出其局限性了，而蒽环类药物的纳米脂质体等新机型尚未发现明显的剂量限制性毒性，对这类病人治疗上有很大优势。目前国外临床应用的脂质体蒽环类药物有脂质体柔红霉素、脂质体阿霉素Myocet和聚乙二醇包被的脂质体阿霉素Doxil(Caelyx)，这些药物的应用既保证了疗效，又减少了毒副反应。根据研究结果统计推断出脂质体阿霉素的最大累积剂量为达2200mg/m2(普通剂型为550mg/m2)。由于该产品开发时间较早，在大量临床实践中出现了大量由PEG引起的手脚皮肤颜色暂时变深、起水泡甚至脱皮等毒性较为严重(手足综合征，Hand-Foot Syndrome)，并且由于PEG修饰磷脂价格昂贵，是其价高一直高居不下，限制了在临床推广使用。PEG修饰脂质体Doxil由于药物包裹过严，难以从脂质体中释放，虽然其在体内的循环时间很长，在肿瘤组织的分布也较多，但肿瘤组织中能够发挥药效的药物浓度有限，所以其疗效提高受到限制。另一脂质体阿霉素Myocet则由于产品采用三瓶装试剂盒形式，包括脂质体、药物及缓冲液三部分，需要在使用前混合，水浴加热将药物包裹进入脂质体后方能使用，给临床使用带来了很大不便，并且该脂质体容易被体内网状内皮系统吞噬，在血液循环中驻留时间较短，药物的靶向释放较少。本发明设计的新型纳米脂质体克服了现有脂质体产品的上述不足，同时保留了PEG修饰脂质体长循环、靶向性等特点。

发明内容

本发明提供了一种稳定的，长期循环的抗肿瘤药物纳米脂质体，及其生产方法。PEG化得脂质体使用能够PEG包被脂质体，在脂质体的表面带有数千个PEG链，该过程被称为聚乙二醇化。PEG修饰脂质体由于含有亲水基团而能阻止血液中许多不同组分特别是调理素与其结合，从而降低与单核吞噬细胞系统MPS的亲和力，可在循环系统中稳定存在并使半衰期延长，增加肿瘤组织对它的摄取。还由于癌增长部位及感染、炎症部位病变引起毛细血管的通透性增加，含有药物的长循环脂质体能增加药物在这些部位的聚集量；又由于脂质体药物的缓释直接作用于病变部位，增强了治疗效果。此种增加药物的治疗指数的机制称为“被动靶向”。长循环脂质体的被动靶向作用已在许多动物模型上进行了研究。如小鼠结肠癌、乳腺癌、淋巴癌以及人类癌症模型等，并验证了其体内靶向作用。如有人用实验表明，阿霉素的长循环脂质体比游离阿霉素静注后在肿瘤组织中的药物浓度增加了4-16倍。又如，由人体免疫缺乏病毒(HIV)引起的卡巴氏瘤(KS)，其癌变部位的血管通透性显著增加，长循环脂质体可将高于正常皮肤5-11倍的阿霉素输送到KS部位，其总体有效率高于80％，而且可降低阿霉素的心毒性等毒副作用。不过研究发现，临床使用PEG修饰的脂质体时会产生“手足综合征“等严重不良反应，在手掌和足底都观察到了红肿和溃疡等症状。PEG化脂质体的另一个缺点是，PEG在脂质体表面的出现，可能减弱脂质体与细胞的相互作用，并且妨碍脂质体进入肿瘤组织，从而可能减少脂质体药物在肿瘤组织的释放和累积。

本发明提供了稳定的、长循环的、低毒性非聚乙二醇修饰的纳米脂质体，它展示了聚乙二醇化脂质体大丰稳定性，具有上文所述的长循环和低毒性等特点。但由于本发明的纳米脂质体不需要使用PEG来获得上述结果，所以他们不会导致“手足综合征”，并且药物在肿瘤组织的释放特性更佳，有利于提高药物治疗效果。

适合制备脂质体的任何磷脂都可以用于本发明中，适合的磷脂包括倾向于降低脂质体膜的通透性的磷脂。含有具有长的脂肪酸链的磷脂的脂质体更为合适，以确保药物释放比从由较短脂肪酸链的磷脂组成的脂质体更慢。随着脂肪酸的碳链长度的增加，相变温度也会提高。由具有较高相变温度的磷脂组成的脂质体比由较低相变温度组成的组织更缓慢释放其所包载药物。因为磷脂膜是半透性的，较高的相变温度使得药物能以比较慢的速度释放到血液中。磷脂的饱和度和电荷均会影响膜的通透性和稳定性。

本发明的纳米脂质体优选中性磷脂，优选相变温度为40℃-65℃，更优选50℃-55℃的中性磷脂。优选的磷脂具有至少十六个碳的脂肪酸链。

本发明的适合磷脂包括，但不限于二硬脂酰磷酯酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂和这些磷脂的衍生物。

将胆固醇与磷脂一起掺入脂质体中，以便改变脂质体膜的刚性和通透性，胆固醇是两亲性分子，并且将其自身插入磷脂膜中，使羟基朝亲水表面。磷脂与胆固醇的比例决定了药物从脂质体中释放的速度。磷脂和胆固醇的优选摩尔比大约为1∶0.1-1∶2。

用于包载到本发明的脂质体中的合适试剂是具有可离子化基团的水溶性两亲性化合物。两亲性化合物同时具有亲水和亲脂特性，并且可以是治疗或者药物。本发明优选的药物为蒽环类抗肿瘤药物，包括多柔比星、表柔比星和柔红霉素等。

本发明提供了以与组合物中相同比例所述组分生产组合物的方法，该方法包括：

1)将磷脂和胆固醇溶于适量无水乙醇中，形成透亮溶液；

2)减压回收乙醇，在容器壁形成膜，注入硫酸铵溶液，使得膜材溶解，水化1h～2h；

3)以注射用水为透析介质，透析15～20h，制造硫酸铵梯度，得空白脂质体；

4)在水浴加热条件下，通过孔径为400纳米-50nm的高压挤出仪连续挤压上述方法获得的空白脂质体，获得粒径≤100纳米的纳米脂质体；

5)在空白脂质体中加入药物溶液，在30℃～60℃孵化10～60分钟；

6)取孵化后的溶液，以缓冲液为透析外液，在4℃～37℃温度下透析12h，透析到外液无色透明，把透析液转移至容量瓶中定容，即可获得包封率高，稳定，粒径均匀的长循环脂质体。

具体实施方式

实施例：制备含有盐酸多柔比星纳米脂质体组合物的方法

分别称取氢化大豆磷脂和胆固醇156mg和521mg，置于旋转蒸发仪烧瓶内，加入4ml甲醇，在60℃水浴加热将其溶解成透亮溶液。将烧瓶与旋转蒸发仪连接，并且将水浴温度调至60℃，在真空条件下将溶剂去除，以便在烧瓶内壁形成类脂膜。然后用6ml硫酸铵溶液，使得膜材溶解，水化1h～2h获得空白脂质体。以注射用水为透析介质，透析15～20h，制造硫酸铵梯度，得空白脂质体。在60℃水浴加热条件下，通过孔径为400纳米-50nm的高压挤出仪连续挤压上述方法获得的空白脂质体，获得粒径≤100纳米的纳米脂质体。按照药物∶脂质1∶10的比例将10mg/ml盐酸多柔比星溶液和空白纳米脂质体混合，在65℃水浴中保温15分钟，即得盐酸多柔比星纳米脂质体。

Claims (7)

1.一种新型长循环纳米脂质体组合物，其特征在于：以高相变温度脂质和胆固醇为膜材，制备成长循环纳米脂质体，脂质与药物的摩尔比为1∶1-100∶1，分散相的平均粒径≤100nm。

2.如权利要求1的方法，其中，所述磷脂和胆固醇的摩尔比大约为1∶0.1-1∶2。

3.如权利要求1的方法，其中，所述磷脂相变温度为40-60℃。

4.如权利要求3的方法，其中，所述磷脂至少具有十六个碳的脂肪酸链。

5.如权利要求3-4的方法，其中，所述磷脂选自：二硬脂酰磷酯酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂和这些磷脂的衍生物。

6.如权利要求1的方法，其中，所述药物选自：阿霉素、柔红霉素和表阿霉素等蒽环类药物。

7.如权利要求1的方法，其中，制备方法如下：1).将磷脂、胆固醇溶于适量无水乙醇中，形成透亮溶液；2).减压回收乙醇，在容器壁形成膜；注入硫酸铵溶液，使得膜材溶解；水化1h～2h；3).以注射用水为透析介质，透析15～20h，制造硫酸铵梯度，得空白脂质体，在水浴加热条件下，通过孔径为400纳米-50nm的高压挤出仪连续挤压上述方法获得的空白脂质体，获得粒径≤100纳米的纳米脂质体；4).在空白脂质体中加入药物溶液；5).在30℃～60℃孵化10～60分钟；6).取孵化后的溶液，以缓冲液为透析外液，在4℃～37℃温度下透析12h，透析到外液无色透明；把透析液转移至容量瓶中定容，即可获得包封率高，稳定，粒径均匀的长循环脂质体。