CN100479820C

CN100479820C - 伊曲康唑脂质体及其制备方法

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Publication number: CN100479820C
Application number: CNB2006101510844A
Authority: CN
Inventors: 吴琳华; 董迪; 金锐; 纪宏宇; 刘红梅; 兰恭赞
Original assignee: Harbin Medical University
Current assignee: Harbin Engineering University; Harbin Medical University
Priority date: 2006-12-01
Filing date: 2006-12-01
Publication date: 2009-04-22
Anticipated expiration: 2026-12-01
Also published as: CN1969830A

Abstract

伊曲康唑脂质体及其制备方法，它涉及一种脂质体及其制备方法。它解决了尚未有伊曲康唑脂质体问世的问题。伊曲康唑脂质体按以下比例由18～22mg伊曲康唑、505～509mg卵磷脂、90～95mg胆固醇、73～77mg去氧胆酸钠、505～509mg甘露醇、505～509mg乳糖和18～22ml pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓液制成。制备方法：(一)将伊曲康唑、去氧胆酸钠、卵磷脂和胆固醇加入氯仿；(二)减压蒸发氯仿；(三)将乳糖和甘露醇加入磷酸盐缓冲液；(四)加磷酸盐缓冲液清洗脂膜再超声乳化；(五)冷冻干燥，即得到粉末状冻干伊曲康唑脂质体。本发明首次公开了一种伊曲康唑脂质体及其制备方法，制备出的脂质体药物含量高达98%以上，伊曲康唑脂质体包封率为74.3%～75.5%，伊曲康唑脂质体渗漏率为3.12%～3.37%，伊曲康唑脂质体稳定性好，Ke值为0.946%～1.12%。

Description

伊曲康唑脂质体及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种脂质体及其制备方法。

背景技术

人类真菌感染症有三类：浅表、皮下和系统性真菌感染(systemic fungal infection，SFI)。浅表和皮下二类已得到较好的防治，唯SFI至今仍为棘手。随着广谱抗真菌药物的大量应用、骨髓或器官移植的开展、糖皮质激素与免疫抑制剂的广泛使用、各种导管介入治疗的普遍采用及艾滋病的出现，使得系统性真菌感染者数量与日俱增，而且具有诊断困难，病情进展快，死亡率高的特点。

伊曲康唑(Itraconazole)为第二代三氮唑类衍生物，通过抑制真菌细胞膜的必需成分麦角甾醇的生物合成而发挥其抗真菌作用。正常情况下麦角固醇的前体物质羊毛甾醇在真菌细胞色素P450的催化下生成14-α-去甲基羊毛醇，1-α-去甲基羊毛醇再经过其它步骤生成麦角固醇；伊曲康唑在基底结合部位与真菌细胞色素P450发生交互作用，阻断羊毛醇去甲基化，使羊毛醇及14-α-去甲基羊毛醇蓄积在细胞膜上；由于麦角固醇合成受阻致使真菌细胞膜的通透性改变，细胞膜结合酶的活性和甲壳质合成受阻，从而使真菌生长受抑制。所以伊曲康唑对念珠菌属及酵母菌、霉菌、皮肤癣菌和其它致病真菌具有广谱性，临床主要用于治疗浅表及系统性真菌感染。伊曲康唑应用广泛适用于儿童真菌感染患者、老年真菌感染患者、糖尿病真菌感染患者、艾滋病真菌感染患者和慢性肉芽肿、恶性血液病等高危疾病真菌感染患者。

目前，市场上销售的伊曲康唑产品有伊曲康唑胶囊剂和伊曲康唑注射剂。伊曲康唑胶囊剂只适用于治疗浅表性真菌感染；因其能达到较高而稳定的血药浓度，限制了伊曲康唑胶囊剂在治疗系统性真菌感染方面的使用。伊曲康唑注射液的问世为SFI的患者增加新的选择，但由于伊曲康唑的亲脂性，在体内易与血浆蛋白结合，注射液长期大量使用会造成体内药物蓄积。并且目前市售的伊曲康唑胶囊剂和注射剂都具有较强的毒性和较强副作用。

脂质体是由脂质双分子层组成，内部为水相的闭合囊泡，结构类似生物膜，在脂质体的水相和膜内可以包裹多种物质。脂质体具有缓释、提高药物稳定性及改善药物动力学特性等优点，脂质体作为药物载体，具有靶向性从而减少药物剂量，降低毒性，减少副作用，是近20年国内外新型给药系统研究领域的热点之一。由于脂质体是一种外源性颗粒，进入体内被网状内皮系统摄取而主要在肝、脾、肺等部位富集，出现较高的局部药物浓度，起到被动靶向效果。静注后可以改变被包封药物的体内分布，提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量；构成脂质体的材料主要是磷脂和胆固醇，它们的生物相容性好，无毒性、无抗原性，大大降低了药物毒性。但是，目前尚未有伊曲康唑脂质体问世的报道。

发明内容

本发明的目的是为了解决目前伊曲康唑胶囊剂在治疗系统性真菌感染方面受限、伊曲康唑注射剂长期大量使用造成体内药物蓄积、伊曲康唑胶囊剂和注射剂都具有较强的毒性和较强副作用以及尚未有伊曲康唑脂质体问世的问题，而公开一种伊曲康唑脂质体及其制备方法。伊曲康唑脂质体按以下比例由18～22mg伊曲康唑、505～509mg卵磷脂、90～95mg胆固醇、73～77mg去氧胆酸钠、505～509mg甘露醇、505～509mg乳糖和18～22mL pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓液制成。伊曲康唑脂质体按以下步骤制备：(一)将18～22mg伊曲康唑、73～77mg去氧胆酸钠、505～509mg卵磷脂和90～95mg胆固醇加入18～22mL氯仿中，搅拌使其完全溶解；(二)在45±2℃条件下减压蒸发溶剂氯仿，形成一层均匀脂膜，再通入N₂ 8～12min；(三)将505～509mg乳糖和505～509mg甘露醇加入18～22mL pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓冲液；(四)常压下用加入乳糖和甘露醇的磷酸盐缓冲液旋转清洗脂膜，再超声乳化4～6min形成半透明混悬液；(五)半透明混悬液在-45±2℃下预冻3±0.1h，再冻干20±0.5h，即得到粉末状冻干伊曲康唑脂质体。本发明首次公开了一种伊曲康唑脂质体及其制备方法。本发明中的伊曲康唑脂质体具有良好的生物相容性、无毒性、无抗原性、缓释、靶向性、提高药物稳定性及改善药物动力学特性等优点；作为制剂的中间体可制成伊曲康唑脂质体注射液、口服液、胶囊和贴剂，这些含有伊曲康唑脂质体的药物具有以下优点：①大幅降低了长期使用游离药物在体内的蓄积量，能达到较高而稳定的血药浓度，提高伊曲康唑脂在病灶部位的靶向分布，提高了伊曲康唑的生物利用度；②弥补了胶囊剂吸收不规则、血药浓度波动大的缺点，消除了治疗系统性真菌感染中的限制；③伊曲康唑在靶器官的浓度高，可采用续贯疗法，降低医疗费用和患者负担；④能更好发挥伊曲康唑的疏水性，减少用药剂量，降低药物在体内的蓄积，节约了成本；⑤大幅度降低了伊曲康唑药物的毒性和副作用；⑥为进一步制备高效伊曲康唑制剂奠定基础。本发明伊曲康唑脂质体的制备方法简单易行，制备出的脂质体药物含量高达98％以上，伊曲康唑脂质体包封率为74.3％～75.5％，伊曲康唑脂质体渗漏率为3.12％～3.37％，伊曲康唑脂质体稳定性好，Ke值为0.946％～1.12％。

附图说明

图1是伊曲康唑脂质体激光粒度测定结果图，图2是伊曲康唑脂质体20000倍电镜扫描图，图3是伊曲康唑脂质体Zeta电位测定结果图。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式伊曲康唑脂质体按以下比例由18～22mg伊曲康唑、505～509mg卵磷脂、90～95mg胆固醇、73～77mg去氧胆酸钠、505～509mg甘露醇、505～509mg乳糖和18～22mL pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓液制成。

本实施方式中伊曲康唑脂质体所制药物可在饭间或饭后使用，可增加药物的吸收率，但不可与特非那丁、阿司咪唑或西沙比利合用。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：伊曲康唑脂质体按以下比例由20mg伊曲康唑、507.7mg卵磷脂、92.3mg胆固醇、75mg去氧胆酸钠、507.7mg甘露醇、507.7mg乳糖和20mL pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓液制成。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二的不同点是：磷酸盐缓液的pH值为6.0。其它与实施方式一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一、二或三的不同点是：卵磷脂为蛋黄卵磷脂。其它与实施方式一、二或三相同。

具体实施方式五：本实施方式伊曲康唑脂质体按以下步骤制备：(一)将18～22mg伊曲康唑、73～77mg去氧胆酸钠、505～509mg卵磷脂和90～95mg胆固醇加入18～22mL氯仿中，搅拌使其完全溶解；(二)在45±2℃条件下减压蒸发溶剂氯仿，形成一层均匀脂膜，再通入N₂8～12min；(三)将505～509mg乳糖和505～509mg甘露醇加入18～22mL pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓冲液；(四)常压下用加入乳糖和甘露醇的磷酸盐缓冲液旋转清洗脂膜，再超声乳化4～6min形成半透明混悬液；(五)半透明混悬液在-45±2℃下预冻3±0.1h，再冻干20±0.5h，即得到粉末状冻干伊曲康唑脂质体。

本实施方式步骤(二)中通入N₂是为了将溶剂氯仿去除净。

伊曲康唑脂质体也可按逆相蒸发法制备：先将18～22mg伊曲康唑、73～77mg去氧胆酸钠、505～509mg卵磷脂和90～95mg胆固醇加入18～22mL氯仿中，搅拌使其完全溶解；再将加入505～509mg乳糖和505～509mg甘露醇的18～22mL pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓冲液倒入；之后超声乳化30min，形成油包水型(W/O)型乳剂；再减压蒸发除去氯仿；最后在-45±2℃下冷冻干燥，伊曲康唑脂质体。伊曲康唑脂质体还可按乙醚注入—超声法制备：先将18～22mg伊曲康唑、73～77mg去氧胆酸钠、505～509mg卵磷脂和90～95mg胆固醇加入乙醚，使其完全溶解；再将加入505～509mg乳糖和505～509mg甘露醇的18～22mL pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓冲液倒入；之后置于50℃条件下搅拌1h，挥发乙醚；再超声乳化5min形成半透明混悬液；最后在-45±2℃下冷冻干燥，伊曲康唑脂质体。

三种制备方法制备出的伊曲康唑脂质体的包封率(EE％)和药物泄漏率(L％)如表1所示。结果证明本实施方式伊曲康唑脂质体制备方法制备的伊曲康唑脂质体包封率最高，药物泄漏率最低，是效果最为理想的伊曲康唑脂质体制备方法。

表1

	乙醚注入-超声法	逆相蒸发法	本实施方式
	乙醚注入-超声法	逆相蒸发法	本实施方式	EE％	57.8	49.8	76.4
L％	18.3	19.8	11.7	EE％	57.8	49.8	76.4

对本实施方式制备的伊曲康唑脂质体进行激光粒度测定，测定结果如图1所示。检测结果表明伊曲康唑脂质体平均粒径为202.3nm，符合注射标准。

对本实施方式制备的伊曲康唑脂质体进行3个批次的含药量检测，检测结果如表2所示。本实施方式制备的伊曲康唑脂质体伊曲康唑含量在国家药典规定的95％～105％范围内，RSD值<2％，均符合要求。

表2

批次	伊曲康唑含量(％)	RSD(％)
批次	伊曲康唑含量(％)	RSD(％)	1	98.57	0.86
2	100.34	1.12	1	98.57	0.86

3

100.15

0.92

对本实施方式制备的伊曲康唑脂质体进行3个批次的包封率检测，3个批次的包封率分别为74.9％、74.3％和75.5％，包封率高。对本实施方式制备的伊曲康唑脂质体进行3个批次的渗漏率检测，3个批次的渗漏率分别为3.12％、3.37％和3.26％，渗漏率低。对本实施方式制备的伊曲康唑脂质体进行3个批次的酸碱性测试，测试结果显示伊曲康唑脂质体在pH值为0～10的环境中稳定。对本实施方式制备的伊曲康唑脂质体进行3个批次的稳定性测试，稳定常数Ke值分别为0.946％、1.05％和1.12％。测试数据说明伊曲康唑脂质体在离心前后粒径变化较小，离心加速稳定性好。对本实施方式制备的伊曲康唑脂质体进行3个批次的沉降稳定性检测，3批伊曲康唑脂质体分别于第13，13，14天时有极少量沉淀产生，观察至第30天沉淀无明显增多，可见伊曲康唑脂质体重建后在12天内稳定。

对本实施方式制备的伊曲康唑脂质体进行20000倍电镜观察，电镜扫描图如图2所示。通过20000倍电镜扫描图可以观察到伊曲康唑脂质体的双层膜结构，且大小均匀。

对本实施方式制备的伊曲康唑脂质体进行Zeta电位测定，测定结果如图3所示。本实施方式制备的伊曲康唑脂质体Zeta电位为-69.4，说明复水后很稳定。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式五的不同点是：步骤(一)将20mg伊曲康唑、75mg去氧胆酸钠、507.7mg卵磷脂和92.3mg胆固醇加入20mL氯仿中，搅拌使其完全溶解。其它步骤与实施方式五相同。

具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式五的不同点是：步骤(二)在45℃条件下减压蒸发溶剂氯仿，形成一层均匀脂膜，再通入N₂ 10min。其它步骤与实施方式五相同。

具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式五的不同点是：步骤(三)将507.7mg乳糖和507.7mg甘露醇加入20mL pH值为6.0的磷酸盐缓冲液。其它步骤与实施方式五相同。

具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式五的不同点是：步骤(四)中超声乳化5min形成半透明混悬液。其它步骤与实施方式五相同。

具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式五的不同点是：步骤(五)中半透明混悬液在-45℃下预冻3h，再冻干20h。其它步骤与实施方式五相同。

具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式五的不同点是：步骤(一)中的卵磷脂为蛋黄卵磷脂。其它步骤与实施方式五相同。

具体实施方式十二：本实施方式伊曲康唑脂质体按以下步骤制备：(一)将20mg伊曲康唑、75mg去氧胆酸钠、507.7mg蛋黄卵磷脂和92.3mg胆固醇加入20mL氯仿中，搅拌使其完全溶解；(二)在45℃条件下减压蒸发溶剂氯仿，形成一层均匀脂膜，再通入N₂ 10min；(三)将507.7mg乳糖和507.7mg甘露醇加入20mL pH值为6.0的磷酸盐缓冲液；(四)常压下用加入乳糖和甘露醇的磷酸盐缓冲液旋转清洗脂膜，再超声乳化5min形成半透明混悬液；(五)半透明混悬液在-45℃下预冻3h，再冻干20h，即得到粉末状冻干伊曲康唑脂质体。

本实施方式通过正交试验评分，分数最高为77.8。

Claims

1、伊曲康唑脂质体，其特征在于伊曲康唑脂质体按以下比例由18～22mg伊曲康唑、505～509mg卵磷脂、90～95mg胆固醇、73～77mg去氧胆酸钠、505～509mg甘露醇、505～509mg乳糖和18～22mL pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓液按以下步骤制成：(一)将18～22mg伊曲康唑、73～77mg去氧胆酸钠、505～509mg卵磷脂和90～95mg胆固醇加入18～22mL氯仿中，搅拌使其完全溶解；(二)在45±2℃条件下减压蒸发溶剂氯仿，形成一层均匀脂膜，再通入N₂ 8～12min；(三)将505～509mg乳糖和505～509mg甘露醇加入18～22mL pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓冲液；(四)常压下用加入乳糖和甘露醇的磷酸盐缓冲液旋转清洗脂膜，再超声乳化4～6min形成半透明混悬液；(五)半透明混悬液在-45±2℃下预冻3±0.1h，再冻干20±0.5h，即得到粉末状冻干伊曲康唑脂质体。

2、根据权利要求1所述的伊曲康唑脂质体，其特征在于伊曲康唑脂质体按以下比例由20mg伊曲康唑、507.7mg卵磷脂、92.3mg胆固醇、75mg去氧胆酸钠、507.7mg甘露醇、507.7mg乳糖和20mL pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓液制成。

3、根据权利要求1或2所述的伊曲康唑脂质体，其特征在于磷酸盐缓液的pH值为6.0。

4、根据权利要求1、2或3所述的伊曲康唑脂质体，其特征在于卵磷脂为蛋黄卵磷脂。

5、一种如权利要求1所述伊曲康唑脂质体的制备方法，其特征在于伊曲康唑脂质体按以下步骤制备：(一)将18～22mg伊曲康唑、73～77mg去氧胆酸钠、505～509mg卵磷脂和90～95mg胆固醇加入18～22mL氯仿中，搅拌使其完全溶解；(二)在45±2℃条件下减压蒸发溶剂氯仿，形成一层均匀脂膜，再通入N₂ 8～12min；(三)将505～509mg乳糖和505～509mg甘露醇加入18～22mL pH值为5.5～6.5的磷酸盐缓冲液；(四)常压下用加入乳糖和甘露醇的磷酸盐缓冲液旋转清洗脂膜，再超声乳化4～6min形成半透明混悬液；(五)半透明混悬液在-45±2℃下预冻3±0.1h，再冻干20±0.5h，即得到粉末状冻干伊曲康唑脂质体。

6、根据权利要求5所述的伊曲康唑脂质体的制备方法，其特征在于步骤(一)将20mg伊曲康唑、75mg去氧胆酸钠、507.7mg卵磷脂和92.3mg胆固醇加入20mL氯仿中，搅拌使其完全溶解。

7、根据权利要求5所述的伊曲康唑脂质体的制备方法，其特征在于步骤(二)在45℃条件下减压蒸发溶剂氯仿，形成一层均匀脂膜，再通入N₂10min。

8、根据权利要求5所述的伊曲康唑脂质体的制备方法，其特征在于步骤(三)将507.7mg乳糖和507.7mg甘露醇加入20mL pH值为6.0的磷酸盐缓冲液。

9、根据权利要求5所述的伊曲康唑脂质体的制备方法，其特征在于步骤(四)中超声乳化5min形成半透明混悬液。

10、根据权利要求5所述的伊曲康唑脂质体的制备方法，其特征在于步骤(五)中半透明混悬液在-45℃下预冻3h，再冻干20h。