CN102115781B - β地中海贫血突变检测试剂盒 - Google Patents

β地中海贫血突变检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN102115781B
CN102115781B CN 200910214393 CN200910214393A CN102115781B CN 102115781 B CN102115781 B CN 102115781B CN 200910214393 CN200910214393 CN 200910214393 CN 200910214393 A CN200910214393 A CN 200910214393A CN 102115781 B CN102115781 B CN 102115781B
Authority
CN
China
Prior art keywords
low density
seq
dna
nucleotide sequence
specific nucleotide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN 200910214393
Other languages
English (en)
Other versions
CN102115781A (zh
Inventor
李明
林炳生
张帆
陈华云
程钢
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Da Rui Biotechnology Ltd
Original Assignee
Daan Gene Co Ltd Zhongshan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Daan Gene Co Ltd Zhongshan University filed Critical Daan Gene Co Ltd Zhongshan University
Priority to CN 200910214393 priority Critical patent/CN102115781B/zh
Publication of CN102115781A publication Critical patent/CN102115781A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102115781B publication Critical patent/CN102115781B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种β地中海贫血突变检测试剂盒,特别是涉及利用一种不对称扩增的方法检测β-地中海贫血核苷酸多态性的试剂盒,该试剂盒包含一套特异性核苷酸多态性探针和扩增样品中靶基因的PCR引物,可以检测27种β-地中海贫血突变,并且检测过程更加快速,检测结果也更为准确。

Description

β地中海贫血突变检测试剂盒
技术领域
本发明涉及一种β地中海贫血突变检测试剂盒,特别是涉及利用一种不对称扩增的方法检测β-地中海贫血核苷酸多态性的试剂盒,该试剂盒包含一套特异性核苷酸多态性探针和扩增样品中靶基因的PCR引物,用于检测由于点突变引起的β-地中海贫血。
背景技术
地中海贫血分为α-地中海贫血和β-地中海贫血(简称β-地贫)。β-地贫是一种由β珠蛋白基因异常导致肽链表达失衡而产生的单基因遗传血液病,多由β-珠蛋白基因点突变所致,是我国南方各省最常见、危害最大的遗传病之一,也是世界上最常见的遗传性之一,据统计全世界约有1亿多人携带β-地中海贫血基因。我国广东、广西、四川、香港、台湾北部、云南、贵州、海南、福建、湖南、湖北是β-地中海贫血的高发省区,在新疆也有发现。我国部分省份的β-地中海贫血发生率见表1。
表1我国部分省份的β-地中海贫血发生率
Figure G2009102143935D00011
我国最常见的突变有CD41/42(41.6%)、IVSII-654(21.8%)、CD17(18.0%)、TATA 28(8.0%)、CD71/72(3.9%)、TATA 29(1.2%)等,其它(5.5%)。目前在中国发现的突变类型有27种,已经的商品化试剂盒最多仅能够检测其中的17种,对于一些少数民族地区和新近发现的突变通常难以检测,如:新疆发现的CD8(-AA)发生率16.6%(李厚钧等,1994),CD8/9(+G)(余伍忠等,1996),广东发现的CD71/72(+T)(张力等,2008),CD37(G→A)(钟惠珠等,2009),这些突变类型均没有可供使用的商品化试剂盒,而对于一些其它的突变,如:IVS II-5、41/42(-TTCT)和IVSII-5(G→C)双重杂合子突变也没有可用的商品化试剂盒,仅有学者在做少量的统计学研究。因此,商品化试剂盒以外的突变位点是否仅为个别情况存在还是由于没有深入研究而被忽略值得引起相关研究者的深思。进一步说,即使是少见的突变,也是客观存在的。从全面提高人口素质的角度,也是有必要完善检测位点的覆盖率。鉴于已有商品化试剂盒存在的不足,本发明提供了一种高覆盖率的试剂盒来满足临床应用的需求。
曲敬等公开了“用于诊断β-地中海贫血的核酸杂交膜条及试剂盒”(公开号:CN1718742A),该试剂盒仅检测中国的17种突变型别;杨梦苏公开了“用于诊断地中海贫血的DNA芯片及其制备方法”(公开号:CN 1453363A)可检测在中国发现的21种类型的突变,而这两个专利都有共同的不足:不能检测中国发现的27种型别的突变,而且其探针设计需要通过大量的探针筛选才能得到比较满意的结果;均把β-Globin基因扩增为两段,其中一段为600bp左右,而另一段为400bp左右。在杂交过程中,片段长度越长,杂交效率就越低,尤其是以玻片为载体的基因芯片,经验上的数值是不超过400bp,而为了弥补杂交效率不足,相应的措施是延长杂交时间,但这一方法并不适合于快速检测的初衷,这也就部分解释了为什么至今检测21个型别的基因芯片仍没有能够商品化。
在中国发现的27种类型的突变中,有17种为单碱基突变,使探针在同一条件下完成杂交本身就是件难以做到的工作,因此,有必要探索更为有效的探针设计方法。
郭学敏等公开了“一种寡核苷酸探针的设计方法”(公开号:CN 1461811A),该方法是在突变位点以外设计一个或多个人工突变,形成双突变或者多突变位点,但这样仍然无法有效的区分C→G后形成的GG错配。
以尼龙膜为基底的核酸杂交膜条技术,其主要的基本原理如下:寡核苷酸探针为含有特定DNA序列的寡核苷酸片段,其末端带有氨基标记。经活化处理的尼龙膜带有羧基,探针的氨基对羧基形成亲核攻击脱水后形成酰胺键从而将探针结合到膜上。PCR引物的5′末端带有生物素等标记基团,PCR反应结束后产物均带有生物素标记。
PCR产物与探针的结合过程可分为两个阶段,第一阶段在一定的温度下产物与探针互补配对结合,这一阶段的结合没有选择性,也就是说,只有部分互补配对也可以结合在探针上;第二阶段为特异性的洗脱阶段。第一阶段的非特异性结合中,当完全互补配对,则PCR产物与探针的结合力强于部分结合,通过一定的温度和离子强度,将部分结合的PCR产物洗脱而完全互补配对的PCR产物因结合力强而不被洗脱。
接下来通过辣根过氧化物酶结合于生物素基团,将PCR产物带上一个连接的辣根过氧化物酶,因辣根过氧化物酶在尼龙膜中存在物理吸附,需要用缓冲液将物理吸附的辣根过氧化物酶洗脱。最后一步为加入酶的底物,进行显色反应。
目前国内外基于膜杂交的商品化试剂均采用上述的原理,整个杂交过程显得非常冗长。
为了解决以上提及的问题,本发明人通过反复的实验探索,成功开发了一种利用一种不对称扩增的方法检测β-地中海贫血核苷酸多态性的试剂盒,该试剂盒可以检测27种β-地中海贫血突变,并且检测过程更加快速,检测结果也更为准确。
发明内容
本发明的目的在于提供一种β地中海贫血突变检测试剂盒,利用本试剂盒可以检测27种β-地中海贫血突变。
为了解决上述任务,本发明的具体技术路线为:
1)根据β-Globin基因序列设计PCR引物,设计的引物能够包括β-地中海贫血全部突变位点。设计的引物可由专业的合成公司合成,如:上海生工等。对上述引物的下游部分或上游和下游进行生物素或其它基团的标记,使得扩增的产物中含有相应的标记,以便在杂交后对杂交结果进行分析。
2)在包含所述引物的PCR试剂中,使用三重不对称PCR进行扩增,不对称PCR的一个突出优势为PCR完成后可直接用于杂交而不需要通过热变性或者碱变性,扩增产物中具有可与β-Globin基因突变探针特异性结合的DNA序列,可直接用于杂交实验。PCR反应试剂涉及的组分可以使用市售的产品,如:NEB公司生产的Taq 5×MasterMix,Fermentas公司生产的热启动酶等。
3)根据β-Globin基因公开文献报道的位点和基因多态性的突变类型设计检测探针,设计的探针可以在正义链和/或反义链。设计的探针可由专业的合成公司合成,如:上海生工等。
4)将上述探针点在经过活化的杂交膜上,并加入扩增产物,在杂交体系中,通过高浓度的盐离子溶液非选择性的结合靶基因,然后通过低浓度的盐离子浓度进行选择性的洗脱,随后交联特性性结合的酶,最后加入酶的底物显色。
为了达到上述检测步骤,本发明提供的β地中海贫血突变检测试剂盒由PCR试剂、以尼龙膜为载体的低密度芯片、杂交试剂三部分组成。
根据本发明一个优选的实施方案,PCR试剂可使用两种反应体系,分别为热启动酶反应体系或Taq酶反应体系,其中热启动酶反应体系由扩增待检样品中DNA的三对PCR引物、热启动酶及PCR反应的其它常规组分组成,Taq酶反应体系由扩增待检样品中DNA的三对PCR引物、Taq酶及PCR反应的其它常规组分组成,其特征在于PCR试剂的三对PCR引物分别为1F-β(SEQ ID NO:1)&1R-β(SEQ ID NO:2),2F-β(SEQ ID NO:3)&2R-β(SEQ ID NO:4)和3F-β(SEQ ID NO:5)&3R-β(SEQ ID NO:6),序列如下:
  引物名称   序列编号   序列(5′→3′)
  1F-β   SEQ ID NO:1   AGTAGCAATTTGTACTGATGGTATGG
  1R-β   SEQ ID NO:2   CCCAGTTTCTATTGGTCTCCTTAAACC
  2F-β   SEQ ID NO:3   GATAGGCACTGACTCTCTCTGC
  2R-β   SEQ ID NO:4   GAACTTAACCATAGAAAAGAAGG
  3F-β   SEQ ID NO:5   GTATCATGCCTCTTTGCACCATTC
  3R-β   SEQ ID NO:6   CACACAGACCAGCACGTTGCCCAGGAGC
热启动酶反应体系中的热启动酶和PCR反应的其它常规组分均可以使用市售产品,如NEB公司生产的产品,并参照市售产品的说明书配制。
Taq酶反应体系中Taq酶和PCR反应的其它常规组分均可以使用市售产品,如Fermentas公司生产的产品,并参照市售产品的说明书配制。
根据本发明的实施方案,PCR试剂中三对PCR引物的终浓度分别为0.5μM~40μM,其中优选的方案是上游引物(SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:5)终浓度为1μM,下游引物(SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6)终浓度为10μM。
根据本发明一个优选的实施方案,低密度芯片由硝酸纤维素、尼龙或醋酸纤维素等材料制成的膜、点在膜上的检测β-Globin基因突变位点的特异性探针组成,其特征在于特异性探针的序列如下:
  探针名称  序列编号   序列(5′→3′)
  TATA 32-N  SEQ ID NO:7   TGGGCATAAAAGTCAGTG
  TATA32-M  SEQ ID NO:8   TGGGAATAAAAGTCAGGTG
  TATA30-N  SEQ ID NO:9   GGCATAAAAGTCAGGGCTA
  TATA30-M  SEQ ID NO:10   GGCACAAAAGTCAGGGCTA
  TATA29-N  SEQ ID NO:11   GCATAAAAGTCAGGGCATG
  TATA29-M  SEQ ID NO:12   GCATGAAAGTCAGGGCATG
  TATA28-N  SEQ ID NO:13   GCATAAAAGTCAGGGCAGATG
  TATA28-M  SEQ ID NO:14   GCATAGAAGTCAGGGCAGATG
  Cap+1-N  SEQ ID NO:15   CTATCTATTGCTTACATTTG
  Cap+1-M  SEQ ID NO:16   CTATCTATTGCTTCCATTTG
  Cap40-43-N  SEQ ID NO:17   GCAACCTCAAACAGACA
  Cap40-43-M  SEQ ID NO:18   GCAACCTCAGACACCAT
  Innitiation-N  SEQ ID NO:19   CTAAACAGACACCATGGTG
  Innitiation-M  SEQ ID NO:20   CTAAACAGACACCAGGGTG
  CD8-N  SEQ ID NO:21   CTGAGGAGAAGTCTGC
  CD8-M  SEQ ID NO:22   CTGAGGAGGTCTGCCG
  CD8/9-N  SEQ ID NO:23   CTGAGGAGAAGTCTGC
  CD8/9-M  SEQ ID NO:24   TGAGGAGAAGGTCTGC
  CD14/15-N  SEQ ID NO:25   TTACTGCCCTGTGGG
  CD14/15-M  SEQ ID NO:26   TTACTGCCCTGGTGG
  CD17-N  SEQ ID NO:27   CTCCTGTGGGGCAAGGTGA
  CD17-M  SEQ ID NO:28   CTCCTGTGGGGCTAGGTGA
  CD19-N  SEQ ID NO:29   GGTGAACGTGGATGAAGTTAG
  CD19-M  SEQ ID NO:30   GGTGGACGTGGATGAAGTTAG
  CD26-N  SEQ ID NO:31   GTAAGTTGGTGGTGAGGC
  CD26-M  SEQ ID NO:32   GTAAGTTGGTGGTAAGGC
  CD27/28-N  SEQ ID NO:33   TGGTGAGGCCCTGG
  CD27/28-M  SEQ ID NO:34   TGGTGAGGCCCCTG
  CD30-N  SEQ ID NO:35   CTTAGGCTGCTGGTGGTCTAC
  CD30-M  SEQ ID NO:36   CTTAGGCTGCTGGTGGTCTAC
  CD31-N  SEQ ID NO:37   CTTAGGCTGCTGGTGGTC
  CD31-M  SEQ ID NO:38   CCTTAGGTGCTGGTGGTC
  CD37-N  SEQ ID NO:39   CCTTGGACCCAGAGGTTAC
  CD37-M  SEQ ID NO:40   CCTTAGACCCAGAGGTTAC
  CD41-N  SEQ ID NO:41   TGGACCCAGAGGTTCTTTG
  CD41-M  SEQ ID NO:42   TGGACCCAGAGGTTTCTTTG
  CD41/42-N  SEQ ID NO:43   GGTTCTTTGAGTCCTTTG
  CD41/42-M  SEQ ID NO:44   GGTTGAGTCCTTTGGGGA
  CD43-N  SEQ ID NO:45   CTTTGAGTCCTTTGGGGACT
  CD43-M  SEQ ID NO:46   CTTTTAGTCCTTTGGGGACT
  71/72-N  SEQ ID NO:47   GGTGCCTTTAGTGATGG
  71/72-M  SEQ ID NO:48   TCGGTGCCTTTTAGTGATG
  CD95-N  SEQ ID NO:49   ACTGTGACAAGCTGCAC
  CD95-M  SEQ ID NO:50   ACTGTGACAAAGCTGCAC
  IVSI-1-N  SEQ ID NO:51   GGCAGGTTGGTATCAAGT
  IVSI-1-M  SEQ ID NO:52   GGCAGTTTGGTATCAAGT
  IVSII-1-N  SEQ ID NO:53   GTTGGTATCAAGGTTACTA
  IVSII-1-M  SEQ ID NO:54   GTTGCTATCAAGGTTACAA
  IVSII-5-N  SEQ ID NO:55   GTAACTTCAGGGTGAGTCT
  IVSII-5-M  SEQ ID NO:56   GTAACTTCAGGGTGACTCT
  IVSII-nt654-N  SEQ ID NO:57   TAAGGCAATAGCAATATAC
  IVSII-nt654-M  SEQ ID NO:58   TAAGGTAATAGCAATATAC
  显色控制点  SEQ ID NO:59   GCCGTAACCGTCACAATCCGT
特异性探针中用于检测没有发生突变的位点为正常探针(用N表示),用于检测发生突变的位点为突变探针(用M表示),检测位点包括TATA 32,TATA 30,TATA29,TATA28,Cap+1,Cap40-43,Inititaion,CD8,CD8/9,CD14/15,CD17,CD19,CD26,CD27/28,CD30,CD31,CD37,CD41/42,CD41,CD43,CD71/72(+A),CD71/72(+T),CD95,IVSI-1,IVSI-5,IVSII-5,IVSII-654的一个或一个以上的组合。
根据本发明的实施方案,低密度芯片中特异性探针的终浓度分别为1μM~10μM,其中优选的方案是5μM。
根据本发明的实施方案,杂交试剂由杂交液I、杂交液II、酶、显色液组成,其中杂交液I的组成为1~6×SSC,0.1%~1%SDS,其中优选的方案是2×SSC,0.5%SDS;杂交液II的组成为0.1~1×SSC,0.1%~1%SDS,其中优选的方案是0.5×SSC,0.5%SDS。
根据本发明另一个优选的实施方案,其中酶为辣根过氧化物酶,用量为0.005U~1U/ml,优选的用量为0.1U。使用不同的酶需要使用与之相匹配的显色系统,辣根过氧化物酶的显色底物可以是3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine(简称TMB),显色液优选的方案为0.1M柠檬酸钠(pH4.9),0.42mM TMB,0.004%H2O2(v/v);也可以使用1,2-phenylenediamine(简称OPD),显色液优选的方案为50mM磷酸钠,20mM柠檬酸钠,pH5.0,4mM OPD,0.004%H2O2(v/v);或其它能与辣根过氧化物酶结合的底物。
本试剂盒将靶基因分为三个片段,分别设计β-Globin扩增引物,并结合β-Globin基因突变位点的特异性探针,同时也覆盖了多达27个β-Globin基因突变检测位点,避免常规检测产品可能造成的β地中海贫血患者漏检。
附图说明
图1多重不对称PCR扩增产物电泳图。图中1-12泳道包含两种不同的PCR体系扩增产物,1-6泳道为6例不同的EDTA抗凝全血热启动酶反应体系扩增产物,7-12泳道为6例不同的EDTA抗凝全血Taq酶反应体系扩增产物,标本同1-6泳道。DNA marker为100bpLadder(TaKaRa)。
图2多重不对称PCR扩增产物杂交结果。共有8组,编号分别为1-8,其中1为β-Globin正常,2为IVSII-nt654杂合子,3为CD41/42杂合子,4为CD17杂合子,5为TATA28纯合子,6为CD26纯合子,7为CD41/42纯合子,8为TATA 32,TATA 30,TATA29,TATA28,Cap+1,Cap40-43,Initiation,CD8,CD8/9,CD14/15,CD17,CD19,CD26,CD27/28,CD30,CD31,CD37,CD41/42,CD41,CD43,CD71/72(+A),CD71/72(+T),CD95,IVSI-1,IVSI-5,IVSII-5,IVSII-654型别扩增产物混合后杂交结果。
具体实施方式
为了更好地理解本发明的本质,通过对本发明实施方式的描述,详细说明但不限制本发明。实施例中使用的组分,除特殊说明外,均选用发明内容中的优选方案。
实施例1样品靶核酸的制备
1)6例临床收集的EDTA抗凝全血,轻轻颠倒玻璃管混合5~10次。
2)取一个1.5ml洁净离心管,用Mark笔在管盖做好标记。将300μl混匀抗凝血加入离心管中,加入1ml灭菌双蒸水充分混匀,室温放置3分钟。
3)室温下3000rpm离心5分钟。弃上清,保留褐红色沉淀。
4)重复以上步骤1次。尽可能吸除残存液体。
5)加入DNA提取液(5%Chelex-100)充分混匀。100℃水浴10分钟,10000rpm离心5分钟,-20℃保存备用。
实施例2靶核酸的PCR扩增
PCR试剂使用了热启动酶或者Taq酶反应体系,分别为热启动酶反应体系和Taq酶反应体系,其中Taq酶由NEB公司生产,热启动酶由Fermentas生产,10×热启动PCR缓冲液和Taq 5×Master Mix也均为市售,反应体系的制备如下:
Figure G2009102143935D00071
PCR反应体系,直接加入2μl提取的DNA模板,瞬时(3秒)离心后,将各反应管放人PCR仪中。
热启动酶反应体系扩增条件:95℃15min,然后94℃30s,56℃45s,72℃60s,运行45个循环,最后72℃7min。
Taq酶反应体系扩增条件:94℃5min,然后94℃30s,56℃45s,72℃60s,运行45个循环,最后72℃7min。
扩增产物经2%的琼脂糖凝胶电泳检测(见附图1),从电泳结果可以得出结论:热启动酶反应体系和Taq酶反应体系均可成功扩增出目的条带,其中1F-β&1R-β扩增条带为427bp,2F-β&2R-β扩增条带为327bp,3F-β&3R-β扩增条带为281bp。
实施例3低密度基因芯片的制备
低密度基因芯片载体为尼龙膜,膜条使用前需用10%的EDC-HCl(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,Sigma公司)溶液充分浸泡活化60分钟纯水洗涤2次每次3分钟,然后室温晾干。探针冻干粉12000rpm离心5分钟,然后用灭菌的纯水溶解成10μM后,按每孔1.0μl直接在膜条的适当位置上以固定格式点样,如下:
低密度基因芯片探针阵列
Figure G2009102143935D00072
点样后室温放置2小时,用0.1M NaOH溶液处理膜条10分钟并用蒸馏水充分洗涤,室温晾干后保存于4℃备用。
实施例4反向斑点杂交检测(Streptavidin-POD/TMB显色系统)
经测序验证的核酸,包括正常人、IVS II-nt654杂合子、CD41/42杂合子、CD17杂合子、TATA28纯合子、CD26纯合子、CD41/42纯合子,另外还包括以下型别的核酸:TATA 32、TATA 30、TATA 29、Cap+1、Cap40-43、Initiation、CD8、CD8/9、CD14/15、CD19、CD27/28、CD30、CD31、CD37、CD41、CD43、CD71/72(+A)、CD71/72(+T)、CD95、IVSI-1、IVSI-5、IVSII-5,核酸扩增使用Taq酶反应体系及相应扩增条件进行,其扩增产物用于反向斑点杂交。反向斑点杂交过程包括以下几个步骤:核酸杂交、结合的核酸与酶交联及非特异性结合核酸的洗脱、与酶底物结合显色、杂交结果分析。下面详细说明各步骤的操作。
(1)核酸杂交
待检测DNA经多重不对称PCR扩增后的产物,与标记对应编号的低密度基因芯片一并放入15ml离心管,加入6-9ml杂交液I,42℃杂交4小时。其中,膜条编号对应的核酸测序型别是:1为β-Globin正常,2为IVS II-nt654杂合子,3为CD41/42杂合子,4为CD17杂合子,5为TATA28纯合子,6为CD26纯合子,7为CD41/42纯合子,8同时加入TATA 32,TATA30,TATA29,TATA28,Cap+1,Cap40-43,Initiation,CD8,CD8/9,CD14/15,CD17,CD19,CD26,CD27/28,CD30,CD31,CD37,CD41/42,CD41,CD43,CD71/72(+A),CD71/72(+T),CD95,IVSI-1,IVSI-5,IVSII-5,IVSII-654型别核酸扩增产物的混合物。
(2)结合的核酸与酶交联及非特异性结合核酸的洗脱
预热至42℃的杂交液II加入0.1U Streptavidin-POD,42℃轻摇15分钟。
(3)与酶底物结合显色
弃去含Streptavidin-POD的杂交液II,加入显色液,显色10分钟。
(4)杂交结果分析
弃去显色液,用蒸馏水洗涤两次,每次2-3分钟。吸水纸吸干低密度基因芯片表面的水,在扫描仪上扫描,实验结果显示,本发明试剂盒的判读结果与测序结果完全一致(详见附图2)。
序列表
<110>中山大学达安基因股份有限公司
<120>β地中海贫血突变检测试剂盒
<140>
<141>
<160>59
<210>1
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作PCR引物。
<400>1
agtagcaatttgtactgatggtatgg
<210>2
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作PCR引物。
<400>2
cccagtttctattggtctccttaaacc
<210>3
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作PCR引物。
<400>3
gataggcactgactctctctgc
<210>4
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作PCR引物。
<400>4
gaacttaaccatagaaaagaagg
<210>5
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作PCR引物。
<400>5
gtatcatgcctctttgcaccattc
<210>6
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作PCR引物。
<400>26
cacacagaccagcacgttgcccaggagc
<210>7
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>7
tgggcataaaagtcagtg
<210>8
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>8
tgggaataaaagtcaggtg
<210>9
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>9
ggcataaaagtcagggcta
<210>10
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>10
ggcacaaaagtcagggcta
<210>11
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>11
gcataaaagtcagggcatg
<210>12
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>12
gcatgaaagtcagggcatg
<210>13
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>13
gcataaaagtcagggcagatg
<210>14
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>14
gcatagaagtcagggcagatg
<210>15
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>15
ctatctattgcttacatttg
<210>16
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>16
ctatctattgcttccatttg
<210>17
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>17
gcaacctcaaacagaca
<210>18
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>18
gcaacctcagacaccat
<210>19
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>19
Ctaaacagacaccatggtg
<210>20
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>20
ctaaacagacaccagggtg
<210>21
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>21
ctgaggagaagtctgc
<210>22
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>22
ctgaggaggtctgccg
<210>23
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>23
ctgaggagaagtctgc
<210>24
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>24
tgaggagaaggtctgc
<210>25
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>25
ttactgccctgtggg
<210>26
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>26
ttactgccctggtgg
<210>27
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>27
ctcctgtggggcaaggtga
<210>28
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>28
ctcctgtggggctaggtga
<210>29
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>29
ggtgaacgtggatgaagttag
<210>30
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>30
ggtggacgtggatgaagttag
<210>31
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>31
gtaagttggtggtgaggc
<210>32
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>32
gtaagttggtggtaaggc
<210>33
<211>14
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>33
tggtgaggccctgg
<210>34
<211>14
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>34
tggtgaggcccctg
<210>35
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>35
cttaggctgctggtggtctac
<210>36
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>36
cttaggctgctggtggtctac
<210>37
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>37
cttaggctgctggtggtc
<210>38
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>38
ccttaggtgctggtggtc
<210>39
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>39
ccttggacccagaggttac
<210>40
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>40
ccttagacccagaggttac
<210>41
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>41
tggacccagaggttctttg
<210>42
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>42
tggacccagaggtttctttg
<210>43
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>43
ggttctttgagtcctttg
<210>44
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>44
ggttgagtcctttgggga
<210>45
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>45
ctttgagtcctttggggact
<210>46
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>46
cttttagtcctttggggact
<210>47
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>47
ggtgcctttagtgatgg
<210>48
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>48
tcggtgccttttagtgatg
<210>49
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>49
actgtgacaagctgcac
<210>50
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>50
actgtgacaaagctgcac
<210>51
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>51
ggcaggttggtatcaagt
<210>52
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>52
ggcagtttggtatcaagt
<210>53
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>53
gttggtatcaaggttacta
<210>54
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>54
gttgctatcaaggttacaa
<210>55
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>55
gtaacttcagggtgagtct
<210>56
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>56
gtaacttcagggtgactct
<210>57
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>57
taaggcaatagcaatatac
<210>58
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>58
taaggtaatagcaatatac
<210>59
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据特定核苷酸序列设计,以用作低密度基因芯片杂交反应探针。
<400>59
gccgtaaccgtcacaatccgt

Claims (5)

1.一种β地中海贫血突变检测试剂盒,由PCR试剂、以尼龙膜为载体的低密度芯片、杂交试剂组成,其特征在于PCR试剂中三对PCR引物序列分别为:
1F-β:5’-AGTAGCAATTTGTACTGATGGTATGG-3’
1R-β:5’-CCCAGTTTCTATTGGTCTCCTTAAACC-3’
2F-β:5’-GATAGGCACTGACTCTCTCTGC-3’
2R-β:5’-GAACTTAACCATAGAAAAGAAGG-3’
3F-β:5’-GTATCATGCCTCTTTGCACCATTC-3’
3R-β:5’-CACACAGACCAGCACGTTGCCCAGGAGC-3’;
点在低密度芯片上的特异性探针的序列为:
TATA32-N:5’-TGGGCATAAAAGTCAGTG-3’
TATA32-M:5’-TGGGAATAAAAGTCAGGTG-3’
TATA30-N:5’-GGCATAAAAGTCAGGGCTA-3’
TATA30-M:5’-GGCACAAAAGTCAGGGCTA-3’
TATA29-N:5’-GCATAAAAGTCAGGGCATG-3’
TATA29-M:5’-GCATGAAAGTCAGGGCATG-3’
TATA28-N:5’-GCATAAAAGTCAGGGCAGATG-3’
TATA28-M:5’-GCATAGAAGTCAGGGCAGATG-3’
Cap+1-N:5’-CTATCTATTGCTTACATTTG-3’
Cap+1-M:5’-CTATCTATTGCTTCCATTTG-3’
Cap40-43-N:5’-GCAACCTCAAACAGACA-3’
Cap4043-M:5’-GCAACCTCAGACACCAT-3’
Innitiation-N:5’-CTAAACAGACACCATGGTG-3’
Innitiation-M:5’-CTAAACAGACACCAGGGTG-3’
CD8-N:5’-CTGAGGAGAAGTCTGC-3’
CD8-M:5’-CTGAGGAGGTCTGCCG-3’
CD8/9-N:5’-CTGAGGAGAAGTCTGC-3’
CD8/9-M:5’-TGAGGAGAAGGTCTGC-3’
CD14/15-N:5’-TTACTGCCCTGTGGG-3’
CD14/15-M:5’-TTACTGCCCTGGTGG-3’
CD17-N:5’-CTCCTGTGGGGCAAGGTGA-3’
CD17-M:5’-CTCCTGTGGGGCTAGGTGA-3’
CD19-N:5’-GGTGAACGTGGATGAAGTTAG-3’
CD19-M:5’-GGTGGACGTGGATGAAGTTAG-3’
CD26-N:5’-GTAAGTTGGTGGTGAGGC-3’
CD26-M:5’-GTAAGTTGGTGGTAAGGC-3’
CD27/28-N:5’-TGGTGAGGCCCTGG-3’
CD27/28-M:5’-TGGTGAGGCCCCTG-3’
CD30-N:5’-CTTAGGCTGCTGGTGGTCTAC-3’
CD30-M:5’-CTTAGGCTGCTGGTGGTCTAC-3’
CD31-N:5’-CTTAGGCTGCTGGTGGTC-3’
CD31-M:5’-CCTTAGGTGCTGGTGGTC-3’
CD37-N:5’-CCTTGGACCCAGAGGTTAC-3’
CD37-M:5’-CCTTAGACCCAGAGGTTAC-3’
CD41-N:5’-TGGACCCAGAGGTTCTTTG-3’
CD41-M:5’-TGGACCCAGAGGTTTCTTTG-3’
CD41/42-N:5’-GGTTCTTTGAGTCCTTTG-3’
CD41/42-M:5’-GGTTGAGTCCTTTGGGGA-3’
CD43-N:5’-CTTTGAGTCCTTTGGGGACT-3’
CD43-M:5’-CTTTTAGTCCTTTGGGGACT-3’
71/72-N:5’-GGTGCCTTTAGTGATGG-3’
71/72-M:5’-TCGGTGCCTTTTAGTGATG-3’
CD95-N:5’-ACTGTGACAAGCTGCAC-3’
CD95-M:5’-ACTGTGACAAAGCTGCAC-3’
IVSI-1-N:5’-GGCAGGTTGGTATCAAGT-3’
IVSI-1-M:5’-GGCAGTTTGGTATCAAGT-3’
IVS II-1-N:5’-GTTGGTATCAAGGTTACTA-3’
IVS II-1-M:5’-GTTGCTATCAAGGTTACAA-3’
IVS II-5-N:5’-GTAACTTCAGGGTGAGTCT-3’
IVS II-5-M:5’-GTAACTTCAGGGTGACTCT-3’
IVS II-nt654-N:5’-TAAGGCAATAGCAATATAC-3’
IVS II-nt654-M:5’-TAAGGTAATAGCAATATAC-3’
显色控制点:5’-GCCGTAACCGTCACAATCCGT-3’。
2.根据权利要求1的试剂盒,其特征还在于PCR试剂中上游引物1F-β、2F-β、3F-β的终浓度为1μM,下游引物1R-β、2R-β、3R-β的终浓度为10μM。
3.根据权利要求1的试剂盒,其特征还在于点在低密度芯片上的特异性探针的浓度为5μM。
4.根据权利要求1的试剂盒,其特征还在于杂交试剂中杂交液I的组成为2×SSC,0.5%SDS,杂交液II的组成为0.5×SSC,0.5%SDS,辣根过氧化物酶的用量为0.1U。
5.根据权利要求1的试剂盒,其特征还在于杂交试剂中显色底物包括TMB或OPD。
CN 200910214393 2009-12-30 2009-12-30 β地中海贫血突变检测试剂盒 Active CN102115781B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200910214393 CN102115781B (zh) 2009-12-30 2009-12-30 β地中海贫血突变检测试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200910214393 CN102115781B (zh) 2009-12-30 2009-12-30 β地中海贫血突变检测试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102115781A CN102115781A (zh) 2011-07-06
CN102115781B true CN102115781B (zh) 2013-04-03

Family

ID=44214703

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 200910214393 Active CN102115781B (zh) 2009-12-30 2009-12-30 β地中海贫血突变检测试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102115781B (zh)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103255225B (zh) * 2013-05-27 2014-09-10 钦州市妇幼保健院 一种基于荧光标记定量pcr技术的地中海贫血基因检测方法
CN104372100B (zh) * 2014-11-28 2017-05-03 博奥生物集团有限公司 检测地中海贫血相关基因突变的试剂盒及其应用
CN105420233B (zh) * 2015-12-08 2020-05-15 海南医学院附属医院 Hbb基因突变和hla分型检测试剂盒
CN111321211A (zh) * 2018-12-14 2020-06-23 北京大学深圳医院 人β地中海贫血基因分型检测的试剂及检测方法
CN111593112A (zh) * 2020-05-12 2020-08-28 深圳市星蝶科技有限公司 一种用于检测β-地中海贫血的PCR试剂及试剂盒
CN111593119A (zh) * 2020-06-28 2020-08-28 成都市妇女儿童中心医院 用于检测母体血液中胎儿游离DNA β-地中海贫血突变的探针及试剂盒
CN111909990B (zh) * 2020-08-28 2023-11-28 亚能生物技术(深圳)有限公司 单管同时检测基因的缺失突变和点突变的荧光pcr检测方法
CN112342289B (zh) * 2020-11-04 2023-08-15 广州精科医学检验所有限公司 用于长片段pcr富集地中海贫血基因的引物组及其应用
CN117487909B (zh) * 2023-12-29 2024-03-19 广州凯普医药科技有限公司 一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的引物探针组合及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1120889C (zh) * 2000-07-24 2003-09-10 浙江江南生物科技有限公司 诊断遗传性贫血相关基因突变的dna芯片
CN1570150A (zh) * 2004-05-12 2005-01-26 刘敬忠 α-地中海贫血基因诊断试剂盒及应用
CN1661098A (zh) * 2004-12-29 2005-08-31 深圳益生堂生物企业有限公司 缺失型α-地中海贫血基因诊断芯片
CN100396792C (zh) * 2005-04-08 2008-06-25 亚能生物技术(深圳)有限公司 用于诊断β-地中海贫血的核酸杂交膜条及试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1120889C (zh) * 2000-07-24 2003-09-10 浙江江南生物科技有限公司 诊断遗传性贫血相关基因突变的dna芯片
CN1570150A (zh) * 2004-05-12 2005-01-26 刘敬忠 α-地中海贫血基因诊断试剂盒及应用
CN1661098A (zh) * 2004-12-29 2005-08-31 深圳益生堂生物企业有限公司 缺失型α-地中海贫血基因诊断芯片
CN100396792C (zh) * 2005-04-08 2008-06-25 亚能生物技术(深圳)有限公司 用于诊断β-地中海贫血的核酸杂交膜条及试剂盒

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
宋春林 等.基因测序确认-例新β地中海贫血基因突变CD112(T-A).《中国优生与遗传杂志》.2008,第16卷(第8期),31-32. *
张力 等.α地中海贫血的基因芯片快速诊断技术研究.《中国优生与遗传杂志》.2007,第15卷(第6期),22-24. *
李明 等.基因芯片法诊断地中海贫血.《中华血液学杂志》.2003,551-552. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN102115781A (zh) 2011-07-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102115781B (zh) β地中海贫血突变检测试剂盒
CN102220411A (zh) 一种一体化检测α、β突变型地中海贫血的试剂盒
Zhang et al. Evaluation of the inclusion of circular RNAs in mRNA profiling in forensic body fluid identification
KR102006803B1 (ko) 메틸화 dna 다중 검출방법
CN104212910B (zh) 单管扩增同时检测α和β地中海贫血基因试剂盒
CN103571822B (zh) 一种用于新一代测序分析的多重目的dna片段富集方法
CN104178566B (zh) 一种可用于微卫星检测的多重荧光pcr通用接头及检测方法和应用
CN101824411B (zh) 转基因水稻科丰6号的旁侧序列及定性pcr检测方法
WO2018133547A1 (zh) 无创产前胎儿β型地贫基因突变检测文库构建方法、检测方法和试剂盒
CN108823296B (zh) 一种检测核酸样本污染的方法、试剂盒及应用
CN101921853A (zh) 一种快速检测山羊Lhx3基因单核苷酸多态性的PCR-RFLP方法
CN102925560A (zh) HRM法检测突变型α-地中海贫血基因的试剂盒和方法
CN112979737A (zh) 一种降低Taqman探针荧光背景的方法
CN108517372A (zh) 一种用于鉴定人参配方颗粒的引物组及鉴定方法
CN101597642A (zh) 一种检测人类RhD血型基因型的多重PCR方法及试剂盒
CN104263827A (zh) 一种用于连接酶反应的新型探针设计方法
CN102234684A (zh) Braf基因突变检测特异性引物和液相芯片
CN101275167B (zh) 一种含羟基红花黄色素a的红花的筛选方法
CN103571957A (zh) 检测y染色体微缺失的引物和试剂盒及其使用方法
CN103290118B (zh) 一种非缺失型α地中海贫血实时荧光PCR检测试剂盒
CN107099606A (zh) 一种快速检测her‑2基因扩增的探针组、试剂盒及方法
CN107227380A (zh) 一种同步检测pcv2和prv感染的引物序列及方法
CN103484538B (zh) 检测肠球菌耐药性的组合物及方法
CN113564269A (zh) 阻碍细菌保守区域逆转录的探针组合物及其应用
CN101691616B (zh) 一种检测桑树花叶萎缩病病原体的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: GUANGZHOU DARUI ANTIBODY ENGINEERING TECHNOLOGY CO

Free format text: FORMER OWNER: DAAN GENE CO., LTD., ZHONGSHAN UNIV.

Effective date: 20140926

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20140926

Address after: 510665 Guangzhou high tech Industrial Development Zone, Guangdong, Xiang Shan Road, No. 19

Patentee after: Guangzhou Darui Antibodies Engineering Technology Co.Ltd

Address before: 510665 Guangzhou high tech Industrial Development Zone, Guangdong, Xiang Shan Road, No. 19

Patentee before: Daan Gene Co., Ltd., Zhongshan Univ.

CP01 Change in the name or title of a patent holder
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 510665 Guangzhou high tech Industrial Development Zone, Guangdong, Xiang Shan Road, No. 19

Patentee after: Guangzhou Da Rui Biotechnology Ltd.

Address before: 510665 Guangzhou high tech Industrial Development Zone, Guangdong, Xiang Shan Road, No. 19

Patentee before: Guangzhou Darui Antibodies Engineering Technology Co.Ltd