CN1120889C - 诊断遗传性贫血相关基因突变的dna芯片 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种诊断遗传性贫血相关基因突变的DNA芯片，其特征在于：在玻片、硅片、膜、高分子材料上固定检测遗传性贫血相关基因突变的特异DNA探针。本发明与现有技术相比，在一显微镜载玻片大小的载体表面，固定70×4DNA探针，因此可同时检测遗传性贫血如α，β地中海贫血症，血红蛋白异常等相关基因突变。具有平行分析和多重分析特点。特定的洗脱条件可以区分全配杂交和单碱基失配杂交。适合于早期诊断，产前筛查遗传性贫血。

Description

诊断遗传性贫血相关基因突变的DNA芯片

本发明涉及一种诊断遗传性贫血相关基因突变的DNA芯片。

中国是一个遗传病大国。遗传病是由于人体生殖细胞或受精卵的遗传物质发生改变而引起的疾病，从亲代传至后代。通常包括三大类：单基因遗传病，染色体遗传病和多基因遗传病。从世界范围讲，新生儿中至少2％有明显的先天异常。虽然大多数遗传病的发病率低(多基因病除外)。然而遗传病种类繁多，因此总数很多。仅单基因遗传病就有4000多种，染色体病有100多种，多基因病也不少于100种。并且目前国际上以平均每年发现100多种新单基因遗传病的速度在发展。这也反应了遗传病带给医学，社会和家庭问题的严重性。

绝大多数遗传病目前还没有有效的治疗方法，因此预防就显得尤为重要。若能在妊娠早期诊断出胎儿是否患病，对患病胎儿进行人工流产，可防止患儿出生。产前遗传筛检，辅以人工流产，已证明是一种有效预防严重危害健康的遗传病的方法。我国现有残疾人5000万，其中相当数量是遗传病引起的。由于边远地区和某些农村近亲结婚率高，遗传病发病率仍呈现上升趋势，因此广泛开展产前遗传筛检，杜绝患儿出生，降低发病率，对于我国优生优育，提高人口素质起着重要作用。

由于许多遗传病特别是单基因孟德尔型遗传病的基因及基因突变的机制已研究清楚，使我们在基因水平能准确诊断大部分遗传病。在许多发达国家，新生婴儿的遗传筛检很普遍。例如早在60年代，美国法律已规定必须对所有新生婴儿进行苯丙酮酸尿症的筛检。彻底消除了因苯丙酮酸尿症引起的智能障碍儿童的出现。因为如果苯丙酮酸尿症婴儿在出生时便能及时接受特别食谱治疗，就不会出现疾病症状。另外针对特定的新生儿遗传筛检，如针对黑人婴儿的镰刀血球细胞症，犹太婴儿的戴萨克斯症等都已普遍实施。但在中国，由于遗传病种类繁多，传统遗传筛检方法需要较昂贵的仪器，专业人才，高费用等，使我国在产前产后遗传筛检普及方面做得非常不够。这对中国的可持续发展问题，人口素质提高问题，社会保障负担问题都有非常深远的影响。举例来说，苯丙酮酸尿症是由于肝脏苯丙氨酸羟化酶严重缺乏所致的常染色体隐性遗传病。患者由于苯丙氨酸羟化酶缺乏或不足，造成苯丙氨酸不能按其正常代谢途径转化为酪氨酸，使得苯丙氨酸代谢物在体内大量蓄积，损坏患者的神经系统发育，而导致智力发育障碍。在欧美地区发病率为1/10000，在我国是1/16000。在产前遗传筛检和人工流产结合，控制遗传病发病率最成功的事例是地中海地区对β地中海贫血症的控制。地中海贫血是一种遗传性溶血性贫血，是世界上最常见和发病率最高的一种单基因遗传病。在地中海地区，美国黑人，东南亚，印度次大陆和中国南方(广东，广西，海南，贵州，四川等省)发病率较高。世界卫生组织在1985年预测到本世纪末全世界将有7％的人口携带血红蛋白病的遗传基因。据统计资料，广东省α地中海贫血发病率5.15％，β地中海贫血3％；广西省南宁地区α地中海贫血发病率14.9％，个别地区高达26％；海南省有些地区α地中海贫血发病率4.8％，β地中海贫血16.8～24.9％；香港α地中海贫血发病率3％，β地中海贫血6％；澳门α地中海贫血发病率6.2％，β地中海贫血3.4％等。由于目前对地中海贫血的治疗没有特效的方法，最根本的措施是产前诊断，杜绝患儿出生，以达到预防和优生的目的。从1975年以来，地中海地区的塞浦路斯，意大利，Sardinia，和希腊成功地实施了产前遗传筛检和选择性人工流产方法，现在地中海贫血的发病率显著下降了5倍以上。

因为遗传病种类多，每种遗传病所相关基因突变也多。传统的遗传病诊断方法费时费力，且价格昂贵，不适合在中国进行全国性的产前遗传筛检。在现有技术中，α和β地中海贫血症，镰刀性贫血症，血红细胞异常和6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏症等遗传性贫血的诊断主要是利用相关基因突变检测和酶活性分析方法。疾病相关基因突变的检测主要有(1)PCR-RFLP(restriction fragment lengthpolymorphism)，该方法利用多种限制性内切酶对基因扩增产物进行酶切，不同的基因序列将产生不同的电泳图谱(Mercier，B.et al.，Eur.J.Immunogenetics，21，105，1994)。该方法只能应用于当突变改变了某一酶切位点时。该方法的改进是在突变位点引入酶切位点法，即PCR-AIRS(attificial introduction ofrestrictionsites)(Cotton，R.G.H.Mut.Res.，285，125，1993)。(2)PCR-SSO(sequence specificoligonucleotide)或PCR-ASO(allele specific oligonucleotide)(Cotton，R.G.H.Mut.Res.，285，125，1993；Saiki，R.K.et al.，Nature，324，163，1986)，待测基因经PCR扩增后，分别与15-20bp标记的野生型和突变型探针杂交。该方法需进行同位素标记或地高辛，生物素，过氧化物酶等标记，分析过程复杂，不适宜快速分析。(3)PCR-SSP(sequence specific primers)或ASPCR(allele specific PCR)，其原理是根据已知突变位点的性质在引物中设计一错配碱基，使之仅能扩增突变型或野生型基因。该方法较为快速简便。(Wu，D.Y，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86，2757，1989；Rust，S.，et al.，Nucleic Acids Research，21，3623，1993；Newton，R.et al.，Nucleic Acids Research，17，2503，1989)。(4)PCR-SSCP(single-strandedconformation polymorphism)，SSCP是指单链DNA分子在中性PAGE中电泳迁移率随其构象改变的性质。因此可作为基因变异的检测方法，最早由Orita用于癌基因点突变和人基因组多态性研究(Orita，M.，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86，2766，1989)，此法仅能检测基因变异的存在，而不能确定突变的部位和内容。(5)DNA测序法，这是最直观，最准确的方法。但技术复杂价格昂贵，不能作为常规方法。

综上所述，在有关疾病相关基因突变诊断的现有技术中，存在操作繁杂，所需时间长，成本较高，难以自动化及大量样本平行分析等问题。

本发明的目的是提供一种可同时检测遗传性贫血所有相关基因突变的诊断遗传性贫血相关基因突变的DNA芯片。

为了达到上述目的本发明采取下列措施：

诊断遗传性贫血相关基因突变的DNA芯片，它是在玻片、硅片、膜、高分子材料上固定检测遗传性贫血相关基因突变的特异DNA探针，所说的探针为：β地中海贫血症β(27-28)1        TGG TGA GGC CCT GGG CAGβ(27-28)2        GGT GAG GCC CCT GGG CAGβ(43)1           GGT TCT TTG AGT CCT TTβ(43)2           GGT TCT TTT AGT CCT TTβ(42+T)2         AGG TTC TTT TGA GTC CTIVS(2-1)1         CTT CAG GGT GAG TCTIVS(2-1)2         CTT CAG GAT GAG TCTβ(1)1            ACA GAC ACC ATG GTG CAC CTβ(1)2            ACA GAC ACC AGG GTG CAC CTβ(8)1            GAG GAG AAG TCT GCCβ(8)2            TGA GGA GGT CTG CCGβ(8-9)2          AGG AGA AGG TCT GCCβ(37)1           TAC CCT TGG ACC CAGβ(37)2           TAC CCT TAG ACC CAGP(+40-43)1        GCA ACC TCA AAC AGA CAP(+40-43)2        AGC AAC CTC AGA CAC CAP(β31，IVS1)1    CAC CCT TAG GCT GCT GGP(IVS1)2          CCC ACC CTG AGG CTG CTβ(31)2           CCC TTA GGT GCT GGT GGP(cap+1)1         ATT GCT TAC ATT TGCP(cap+1)2         ATT GCT TCC ATT TGCβ(19)1           AAG GTG AAC GTG GATβ(19)2           AAG GTG AGC GTG GATβ(95+A)1         CTG TGA CAA GCT GCAβ(95+A)2         TGT GAC AAA GCT GCAIVS(2-5)1         AGG GTG AGT CTA TGGIVS(2-5)2         AGG GTG ACT CTA TGGβ(41-42)1        CAG AGG TTC TTT GAG Tβ(41-42)2        CAG AGG TTG AGT CCT TIVS(2-654)1       GTT AAG GCA ATA GCAIVS(2-654)2       GTT AAG GTA ATA GCAβ(17)1           CTG TGG GGC AAG GTG AACβ(17)2           CTG TGG GGC TAG GTG AACβ(71-72)1        TGC CTT TAG TGA TGGβ(71-72)2        TGC CTT TAA GTG ATGβ(71-72)3        TGC CTT TTA GTG ATGIVS(1-5)1         CAG GTT GGT ATC AAGIVS(1-5)2         CAG GTT GCT ATC AAGIVS(1-1)1         TGG GCA GGT TGG TATIVS(1-1)2         TGG GCA GTT TGG TATβ(30)2           CTG GGC GGG TTG GTAP(-28)1           GGG CAT AAG AGT CAGP(-28)2           GGG CAT AGG AGT CAGP(-29)2           TGG GCA TGG AAG TCAP(-30)1           CTG GGC ATA AAA GTCP(-30)2           CTG GGC ACA AAA GTCP(-31)2           GCT GGG CGT AAA AGTP(-32)2           GGC TGG GAA TAA AAGβ(14-15)1        TAC TGC CCT GTG GGG CAA GGβ(14-15)2      TAC TGC CCT GGT GGG GCA AGHbE(26)1        TGG TGG TGA GGC CCTHbE(26)2        TGG TGG TAA GGC CCTα地中海贫血症，HbH，HbS，和HbM血红蛋白异常Constant Spring突变P(cs)1  ATA CCG TTA AGC TGGP(cs)2  ATA CCG TCA AGC TGGQuong SZE突变P(qs)1  GCC TCC CTG GAC AAGP(qs)2  GCC TCC CCG GAC AAGHbS镰刀形贫血突变P(hbs)1   ACT CCT GAG GAG AAGP(hbs)2  ACT CCT GTG GAG AAGDuan突变P(duan)1  GTG GAC GAC ATG CCCP(duan)2  GTG GAC GCC ATG CCCHbM突变P(hbm)1    TAA GGG CCA CGG CAAP(hbm)2    TAA GGG CTA CGG CAAP(hbm)3    CGA CCT GCA CGC GCAP(hbm)4    CGA CCT GTA CGC GCAP(hbm)5    AAG AAA GTG CTC GGTP(hbm)6    AAG AAA GAG CTC GGTP(hbm)7    TGA GCT GCA CTG TGAP(hbm)8    TGA GCT GTA CTG TGAP(hbm)9    GAA GGC TCA TGG CAAP(hbm)10   GAA GGC TTA TGG CAA

本发明与现有技术相比，在一显微镜载玻片大小的载体表面，固定70×4DNA探针，因此可同时检测遗传性贫血相关基因突变。具有平行分析和多重分析特点。特定的洗脱条件可以区分全配杂交和单碱基失配杂交。适合于早期诊断，产前筛查遗传性贫血。同一芯片可同时检测导致中国人种遗传性贫血所有基因突变位点，如β地中海贫血症，包括β41-42(-TCTT)，IVS2-654(C-T)，β17(A-T)，-28(A-G)，β71-72(+A或+T)，IVS1-5(G-C)，-30(T-C)，β14-15(+G)，IVS1-1(G-C)，HbE26(G-A)，β27-28(+C)，-29(A-G)，β43(G-T)，IVS2-1(G-T)，β1(T-G)，IVS(2-5)，β(30)，-31，-32，β(31)，cap+1，β(19)，β(95+A)，β(42+T)，β(1)，β(8)，β(8-9)，+40-43，β(37)，β(31)突变；血红蛋白异常的Constant Spring(T-C)，Quong SZE(T-C)，HbS(β6 A-T)，Duan(α75 A-C)，HbM(α58 C-T，α87 C-T，β68T-A，β93 C-T，β64 C-T)突变。开发中国常见遗传病诊断基因芯片将是最好的产前遗传筛检方法。设计中国最常见的几种遗传性贫血疾病，例如地中海贫血，血红蛋白异常等的基因的中国发生率最高的几种突变检测探针，通过自动化微控制技术将其按一定的阵列顺序固定在芯片上，构建中国常见遗传性贫血诊断基因芯片。如果全国广泛采用该技术进行全面的产前遗传筛检，结合选择性的人工流产，从而彻底杜绝严重影响身体健康的遗传性贫血的出现，对提高我国人口素质，减轻社会家庭的负担具有重要的意义。

下面结合附图和实施例对本发明作详细说明。

图1是遗传性贫血诊断DNA专用芯片模式图；

图2是检测β14-15(+G)，突变的地中海贫血患者的结果模式图；

图3是检测β14-15(+G)突变的地中海贫血患者的杂交结果图；

图4是检测HbS镰刀形贫血突变的患者的杂交结果图。

本发明的目的是这样实现的。将设计的特异性探针固定于一种载体如载玻片、硅片、膜和高分子材料表面。用表面阵列的特异性DNA探针杂交方法来检测各种各种遗传病基因的突变。探针设计：

选取遗传性贫血相关基因突变中中国人最常见的基因突变：β地中海贫血症，包括β41-42(-TCTT)，IVS2-654(C-T)，β17(A-T)，-28(A-G)，β71-72(+A或+T)，IVS1-5(G-C)，-30(T-C)，β14-15(+G)，IVS1-1(G-C)，HbE26(G-A)，β27-28(+C)，-29(A-G)，β43(G-T)，IVS2-1(G-T)，β1(T-G)，IVS(2-5)，β(30)，-31，-32，β(31)，cap+1，β(19)，β(95+A)，β(42+T)，β(1)，β(8)，β(8-9)，+40-43，β(37)，β(31)突变；血红蛋白异常的Constant Spring(T-C)，Quong SZE(T-C)，HbS(β6 A-T)，Duan(α75 A-C)，HbM(α58 C-T，α87 C-T，β68 T-A，β93 C-T，β64 C-T)突变；合成相对应得野生型和突变型DNA探针，固定于芯片表面。相关探针如下：β地中海贫血症β(27-28)1       TGG TGA GGC CCT GGG CAGβ(27-28)2       GGT GAG GCC CCT GGG CAGβ(43)1          GGT TCT TTG AGT CCT TTβ(43)2          GGT TCT TTT AGT CCT TTβ(42+T)2        AGG TTC TTT TGA GTC CTIVS(2-1)1        CTT CAG GGT GAG TCTIVS(2-1)2        CTT CAG GAT GAG TCTβ(1)1           ACA GAC ACC ATG GTG CAC CTβ(1)2           ACA GAC ACC AGG GTG CAC CTβ(8)1           GAG GAG AAG TCT GCCβ(8)2           TGA GGA GGT CTG CCGβ(8-9)2         AGG AGA AGG TCT GCCβ(37)1          TAC CCT TGG ACC CAGβ(37)2          TAC CCT TAG ACC CAGP(+40-43)1       GCA ACC TCA AAC AGA CAP(+40-43)2       AGC AAC CTC AGA CAC CAP(β31，IVS1)1   CAC CCT TAG GCT GCT GGP(IVS1)2         CCC ACC CTG AGG CTG CTβ(31)2          CCC TTA GGT GCT GGT GGP(cap+1)1        ATT GCT TAC ATT TGCP(cap+1)2        ATT GCT TCC ATT TGCβ(19)1          AAG GTG AAC GTG GATβ(19)2          AAG GTG AGC GTG GATβ(95+A)1        CTG TGA CAA GCT GCAβ(95+A)2        TGT GAC AAA GCT GCAIVS(2-5)1        AGG GTG AGT CTA TGGIVS(2-5)2        AGG GTG ACT CTA TGGβ(41-42)1       CAG AGG TTC TTT GAG Tβ(41-42)2       CAG AGG TTG AGT CCT TIVS(2-654)1      GTT AAG GCA ATA GCAIVS(2-654)2      GTT AAG GTA ATA GCAβ(17)1          CTG TGG GGC AAG GTG AACβ(17)2          CTG TGG GGC TAG GTG AACβ(71-72)1       TGC CTT TAG TGA TGGβ(71-72)2              TGC CTT TAA GTG ATGβ(71-72)3              TGC CTT TTA GTG ATGIVS(1-5)1               CAG GTT GGT ATC AAGIVS(1-5)2               CAG GTT GCT ATC AAGIVS(1-1)1               TGG GCA GGT TGG TATIVS(1-1)2               TGG GCA GTT TGG TATβ(30)2                 CTG GGC GGG TTG GTAP(-28)1                 GGG CAT AAG AGT CAGP(-28)2                 GGG CAT AGG AGT CAGP(-29)2                 TGG GCA TGG AAG TCAP(-30)1                 CTG GGC ATA AAA GTCP(-30)2                 CTG GGC ACA AAA GTCP(-31) 2                GCT GGG CGT AAA AGTP(-32)2                 GGC TGG GAA TAA AAGβ(14-15)1              TAC TGC CCT GTG GGG CAA GGβ(14-15)2              TAC TGC CCT GGT GGG GCA AGHbE(26)1                TGG TGG TGA GGC CCTHbE(26)2                TGG TGG TAA GGC CCTα地中海贫血症，HbH，HbS，和HbM血红蛋白异常Constant Spring突变P(cs)1  ATA CCG TTA AGC TGGP(cs)2  ATA CCG TCA AGC TGGQuong SZE突变P(qs)1  GCC TCC CTG GAC AAGP(qs)2  GCC TCC CCG GAC AAGHbS镰刀形贫血突变P(hbs)1  ACT CCT GAG GAG AAGP(hbs)2  ACT CCT GTG GAG AAGDuan突变P(duan)1  GTG GAC GAC ATG CCCP(duan)2  GTG GAC GCC ATG CCCHbM突变P(hbm)1    TAA GGG CCA CGG CAAP(hbm)2    TAA GGG CTA CGG CAAP(hbm)3    CGA CCT GCA CGC GCAP(hbm)4    CGA CCT GTA CGC GCAP(hbm)5    AAG AAA GTG CTC GGTP(hbm)6    AAG AAA GAG CTC GGTP(hbm)7    TGA GCT GCA CTG TGAP(hbm)8    TGA GCT GTA CTG TGAP(hbm)9    GAA GGC TCA TGG CAAP(hbm)10   GAA GGC TTA TGG CAA

遗传性贫血诊断芯片的构建：合成以上DNA探针，5’末端用氨基或其它活性基团修饰。每种探针重复3次固定于载体的活性表面，构建遗传性贫血诊断DNA专用芯片。

样品处理：用设计的PCR引物扩增待检测样品的靶的基因或突变区域，荧光标记可以用PCR引物5’末端标记或PCR扩增时加入荧光标记的dNTP。DNA芯片表面杂交过程：荧光标记的PCR扩增产物在一定的条件下与遗传性贫血诊断芯片表面的DNA探针杂交，在洗涤液A(2XSSC，0.1％SDS)中，洗涤5min；用洗涤液B(2XSSC)洗涤5min，上述洗涤过程在42℃恒温箱中进行。将芯片取出于1500rpm离心2min后，放置在37℃烘箱烘干。用特定的洗脱条件可以区分全配杂交和单碱基失配杂交。

β珠蛋白基因HBB基因引物：HBB-A/HBB-B引物对扩增β珠蛋白基因片断(包括基因调控区、外显子1、内含子1、外显子2、内含子2、外显子3)，扩增产物1416bp。其序列为：HBB-A：gacaggtacggctgtcatcaHBB-B：aatccagccttatcccaaccα1珠蛋白基因引物：HBA1-1/HBA1-2引物对扩增α1珠蛋白基因外显子2片断，扩增产物326bp。其序列为：HBA1-1：CAA GAC CTA CTT CCC GCA CTHBA1-2：GCA GAG AAG AGG GTC AGT GGα2珠蛋白基因引物：HBA2-1/HBA2-2引物对扩增α2珠蛋白基因外显子3片断，扩增产物280bp。其序列为：HBA2-1：CCCTCT TCTCTGCACAGCTCHBA2-2：GAG AGA ACC CAG GCA CAC AC

杂交信号检测：杂交后用共聚焦荧光显微镜或荧光扫描仪检测DNA芯片杂交信号；从而可以检测待测基因突变。

图1为遗传性贫血诊断DNA专用芯片模式图。1：玻片；2：20×3突变序列探针，从左到右是IVS1-5(G-C)，IVS1-1(G-C)，HbE26(G-A)，β27-28(+C)，β17(A-T)，β14-15(+G)，-28(A-G)，-29(A-G)，-30(T-C)，-31，-32，β1(T-G)，cap+1，β(19)，β(8)，β(8-9)，+40-43，β(30)，β(31)，β(37)；3：20×3与2相对应的正常序列探针；4：20×3突变序列探针，从左到右是β71-72(+A或+T)，β41-42(-TCTT)，β(42+T)，β43(G-T)，IVS2-654(C-T)，IVS2-1(G-T)，IVS(2-5)，β(95+A)；ConstantSpring突变，Quong SZE突变，HbS镰刀形贫血突变，Duan突变，HbM突变的1，2，3，4，5，β41-42(-TCTT)，IVS2-654(C-T)。5：20×3与4相对应的正常序列探针；

图2为检测β14-15(+G)，突变的地中海贫血患者的结果模式图。6：β14-15(+G)突变位点信号。

图3为检测β14-15(+G)突变的地中海贫血患者的杂交结果图。7和8：正常序列信号；6：β14-15(+G)突变位点信号。

图4为检测HbS镰刀形贫血突变的患者的杂交结果图。7和8：正常序列信号；9；HbS镰刀形贫血突变位点信号。

实施例1

利用本发明的芯片检测β14-15(+G)突变的地中海贫血患者。取待测者血液1毫升，利用商业化的基因组DNA抽提试剂盒或标准的苯酚抽提/乙醇沉淀方法提取待测者的基因组DNA，用设计的3组PCR(聚合酶链式反应)引物对β珠蛋白基因的外显子1，2，3进行扩增(一引物的5’端用荧光修饰)。扩增的体积为50μl，混合PCR产物，加入1/10体积的3M pH5.2醋酸缓冲液，加入2.5倍体积的-20℃冷藏的100％乙醇，混匀后，-20℃放置30分钟。13000rpm离心10分钟，用70％乙醇洗涤沉淀，干燥。

DNA芯片表面杂交过程：

5μl杂交缓冲液(5XSSC，0.2％SDS)溶解上述DNA，95℃变性5分钟，冷却至室温，滴加于DNA阵列表面，再盖上载玻片，42℃杂交4～8小时。杂交信号检测：用共聚焦荧光显微镜或荧光扫描仪检测DNA芯片杂交信号。结果如图3。

实施例2

利用本发明的芯片检测HbS镰刀形贫血突变的贫血患者。取待测者血液1毫升，利用商业化的基因组DNA抽提试剂盒或标准的苯酚抽提/乙醇沉淀方法提取待测者的基因组DNA，用设计的3组PCR(聚合酶链式反应)引物对β珠蛋白基因的外显子1，2，3进行扩增(一引物的5’端用荧光修饰)。扩增的体积为50μl，混合PCR产物，加入1/10体积的3M pH5.2醋酸缓冲液，加入2.5倍体积的-20℃冷藏的100％乙醇，混匀后，-20℃放置30分钟。13000rpm离心10分钟，用70％乙醇洗涤沉淀，干燥。

DNA芯片表面杂交过程：

5μl杂交缓冲液(5XSSC，0.2％SDS)溶解上述DNA，95℃变性5分钟，冷却至室温，滴加于DNA阵列表面，再盖上载玻片，42℃杂交4～8小时。杂交信号检测：

用共聚焦荧光显微镜或荧光扫描仪检测DNA芯片杂交信号。结果如图4。实施例说明本发明在遗传性贫血相关基因突变检测方面的应用的可行性。适合于早期诊断，产前筛查遗传性贫血。

Claims (1)

1.一种诊断遗传性贫血相关基因突变的DNA芯片，其特征在于：在玻片、硅片、膜、高分子材料上固定检测遗传性贫血相关基因突变的特异DNA探针，所说的探针为：β地中海贫血症β(27-28)1        TGG TGA GGC CCT GGG CAGβ(27-28)2        GGT GAG GCC CCT GGG CAGβ(43)1           GGT TCT TTG AGT CCT TTβ(43)2           GGT TCT TTT AGT CCT TTβ(42+T)2         AGG TTC TTT TGA GTC CTIVS(2-1)1         CTT CAG GGT GAG TCTIVS(2-1)2         CTT CAG GAT GAG TCTβ(1)1            ACA GAC ACC ATG GTG CAC CTβ(1)2            ACA GAC ACC AGG GTG CAC CTβ(8)1            GAG GAG AAG TCT GCCβ(8)2            TGA GGA GGT CTG CCGβ(8-9)2          AGG AGA AGG TCT GCCβ(37)1           TAC CCT TGG ACC CAGβ(37)2           TAC CCT TAG ACC CAGP(+40-43)1        GCA ACC TCA AAC AGA CAP(+40-43)2        AGC AAC CTC AGA CAC CAP(β31，IVS1)1    CAC CCT TAG GCT GCT GGP(IVS1)2          CCC ACC CTG AGG CTG CTβ(31)2           CCC TTA GGT GCT GGT GGP(cap+1)1         ATT GCT TAC ATT TGCP(cap+1)2         ATT GCT TCC ATT TGCβ(19)1           AAG GTG AAC GTG GATβ(19)2           AAG GTG AGC GTG GATβ(95+A)1         CTG TGA CAA GCT GCAβ(95+A)2         TGT GAC AAA GCT GCAIVS(2-5)1         AGG GTG AGT CTA TGGIVS(2-5)2           AGG GTG ACT CTA TGGβ(41-42)1          CAG AGG TTC TTT GAG Tβ(41-42)2          CAG AGG TTG AGT CCT TIVS (2-654)1        GTT AAG GCA ATA GCAIVS(2-654)2         GTT AAG GTA ATA GCAβ(17)1             CTG TGG GGC AAG GTG AACβ(17)2             CTG TGG GGC TAG GTG AACβ(71-72)1          TGC CTT TAG TGA TGGβ(71-72)2          TGC CTT TAA GTG ATGβ(71-72)3          TGC CTT TTA GTG ATGIVS(1-5)1           CAG GTT GGT ATC AAGIVS (1-5)2          CAG GTT GCT ATC AAGIVS(1-1)1           TGG GCA GGT TGG TATIVS(1-1)2           TGG GCA GTT TGG TATβ(30)2             CTG GGC GGG TTG GTAP(-28)1             GGG CAT AAG AGT CAGP(-28)2             GGG CAT AGG AGT CAGP(-29)2             TGG GCA TGG AAG TCAP(-30)1             CTG GGC ATA AAA GTCP(-30)2             CTG GGC ACA AAA GTCP(-31)2             GCT GGG CGT AAA AGTP(-32)2             GGC TGG GAA TAA AAGβ(14-15)1          TAC TGC CCT GTG GGG CAA GGβ(14-15)2          TAC TGC CCT GGT GGG GCA AGHbE(26)1            TGG TGG TGA GGC CCTHbE(26)2            TGG TGG TAA GGC CCTα地中海贫血症，HbH，HbS，和HbM血红蛋白异常Constant Spring突变P(cs)1  AIA CCG TTA AGC TGGP(cs)2  AIA CCG TCA AGC TGGQuong SZE突变P(qs)1  GCC TCC CTG GAC AAGP(qs)2   GCC TCC CCG GAC AAGHbS镰刀形贫血突变P(hbs)1  ACT CCT GAG GAG AAGP(hbs)2  ACT CCT GTG GAG AAGDuan突变P(duan)1  GTG GAC GAC ATG CCCP(duan)2  GTG GAC GCC ATG CCCHbM突变P(hbm)1    TAA GGG CCA CGG CAAP(hbm)2    TAA GGG CTA CGG CAAP(hbm)3    CGA CCT GCA CGC GCAP(hbm)4    CGA CCT GTA CGC GCAP(hbm)5    AAG AAA GTG CTC GGTP(hbm)6    AAG AAA GAG CTC GGTP(hbm)7    TGA GCT GCA CTG TGAP(hbm)8    TGA GCT GTA CTG TGAP(hbm)9    GAA GGC TCA TGG CAAP(hbm)10   GAA GGC TTA TGG CAA

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