CN102105475B

CN102105475B - 螺氨基二氢噻嗪衍生物

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Publication number: CN102105475B
Application number: CN200980129365.1A
Authority: CN
Inventors: 元木贵史; 金子敏彦; 山本昇; A·卡恩
Original assignee: Eisai R&D Management Co Ltd
Current assignee: Eisai R&D Management Co Ltd
Priority date: 2008-07-28
Filing date: 2009-07-24
Publication date: 2014-04-09
Anticipated expiration: 2029-07-24
Also published as: AU2009277485B2; CN102105475A; AU2009277485A1; EP2318416B1; KR20110048491A; CA2731209A1; IL210548A0; IL210548A; ES2433223T3; EP2318416A1; US8501733B2; WO2010013794A1; US20110152253A1

Abstract

通式(I)表示的化合物或其药学可接受的盐，具有Aβ产生的抑制作用或BACE1抑制作用，并且可用作Aβ导致的且以阿尔茨海默型痴呆为典型的神经变性疾病的预防或治疗剂。

Description

螺氨基二氢噻嗪衍生物

技术领域

本发明涉及螺氨基二氢噻嗪衍生物及其药物应用。更具体地说，本发明涉及螺氨基二氢噻嗪衍生物，其具有对淀粉样蛋白-β(下文称作Aβ)蛋白产生的抑制作用或β-位点淀粉样蛋白-β前体蛋白裂解酶1(下文称作BACE1)的抑制作用并且有效治疗Aβ蛋白导致的神经变性疾病，特别是阿尔茨海默型痴呆、唐氏综合征等；且本发明涉及包含所述螺氨基二氢噻嗪衍生物作为活性成分的药物组合物。

背景技术

阿尔茨海默病是一种以神经元变性和缺失、衰老斑形成和神经原纤维变性为特征的疾病。目前，仅应用以乙酰胆碱酯酶抑制剂为代表的症状改善剂对阿尔茨海默病进行对症治疗，抑制该病进展的基础药物疗法尚未研发出来。因此有必要开发用于控制疾病发作原因的方法，以产生用于阿尔茨海默病的基础药物。

据推定作为淀粉样蛋白前体蛋白(下文称作APP)代谢物的Aβ-蛋白与神经元变性和缺失以及痴呆症状发作高度相关(例如参见非专利参考文献3和4)。Aβ-蛋白具有由40个氨基酸组成的Aβ40和具有两个添加在C-末端的氨基酸的Aβ42作为主要成分。已知Aβ40和Aβ42具有高度聚集性(例如参见非专利参考文献5)并且是衰老斑的主要成分(例如参见非专利参考文献5、6和7)。此外，已知Aβ40和Aβ42通过在家族性阿尔茨海默病中观察到的APP和早老素基因突变而增加(例如参见非专利参考文献8、9和10)。因此，期待减少Aβ40和Aβ42产生的化合物作为阿尔茨海默病的进展抑制剂或预防剂。

由β-分泌酶(BACE1)和γ-分泌酶先后裂解APP产生Aβ。为此，已经尝试生产γ-分泌酶和β-分泌酶抑制剂以抑制Aβ产生。已知的β-分泌酶在下述的专利参考文献1-15和非专利参考文献1和2等中报道。特别地，专利参考文献1、14和15描述了氨基二氢噻嗪衍生物和具有β-分泌酶抑制活性、即BACE1抑制活性的化合物。

现有技术文献

[专利文献]

[专利文献1]WO 2007/049532

[专利文献2]US 3235551

[专利文献3]US 3227713

[专利文献4]JP-A-09-067355

[专利文献5]WO 01/087293

[专利文献6]WO 04/014843

[专利文献7]JP-A-2004-149429

[专利文献8]WO 02/96897

[专利文献9]WO 04/043916

[专利文献10]WO 2005/058311

[专利文献11]WO 2005/097767

[专利文献12]WO 2006/041404

[专利文献13]WO 2006/041405

[专利文献14]WO 2008/133273

[专利文献15]WO 2008/133274

[非专利文献]

[非专利文献1]Journal of Heterocyclic Chemistry，Vol.14，p.717-723(1977)。

[非专利文献2]Journal of Organic Chemistry，Vol.33，p.3126-3132(1968)。

[非专利文献3]Klein WL和其他七人，Alzheimer′s disease-affectedbrain：Presence of oligomeric Aβligands(ADDLs)suggests a molecularbasis for reversible memory loss，Proceedings of National Academy ofScience USA 2003，Sep 2；100(18)，p.10417-10422。

[非专利文献4]Nitsch RM和其他十六人，Antibodies againstβ-amyloid slow cognitive decline in Alzheimer′s disease，Neuron，2003，May 22；38，p.547-554。

[非专利文献5]JarrettJT和其他两人，The carboxyterminus of the βamyloid protein is critical for the seeding of amyloid formation：Implications for the pathogenesis of Alzheimers′disease，Biochemistry，1993，32(18)，p.4693-4697。

[非专利文献6]Glenner GG和其他一人，Alzheimer′s disease：initialreport of the purification and characterization of a novel cerebrovascularamyloid protein，Biochemical and biophysical research communications，1984，May 16，120(3)，p.885-890。

[非专利文献7]Masters CL和其他五人，Amyloid plaque core proteinin Alzheimer disease and Down syndrome，Proceedings of NationalAcademy of Science USA，1985，Jun，82(12)，p.4245-4249。

[非专利文献8]Gouras GK和其他十一人，Intraneuronal Aβ42accumulation in human brain，American Journal of Pathology，2000，Jan，156(1)，p.15-20。

[非专利文献9]Scheuner D和其他二十人，Secreted amyloidβ-protein similar to that in the senile plaques of Alzheimer′s disease isincreased in vivo by the presenilin 1and 2and APP mutations linked tofamilial Alzheimer′s disease，Nature Medicine，1996，Aug，2(8)，p.864-870。

[非专利文献10]Forman MS和其他四人，Differential effects of theswedish mutant amyloid precursor protein on β-amyloid accumulation andsecretion in neurons and nonneuronal cells，The Journal of BiologicalChemistry，1997，Dec 19，272(51)，p.32247-32253。

发明概述

[本发明要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种与专利参考文献1所述的氨基二氢噻嗪衍生物和具有BACE1抑制活性的化合物不同的螺氨基二氢噻嗪化合物，其具有Aβ产生抑制作用或BACE1抑制作用，并且可用作Aβ导致的且以阿尔茨海默型痴呆为典型的神经变性疾病的预防或治疗剂，本发明的目的还在于提供所述化合物的药物应用。

[解决问题的方法]

本发明涉及：

[1]式(I)表示的化合物，

或其药学可接受的盐，其中

环A为C_6-10芳基或5-到10-元杂环基；

L为单键、氧原子或式-C(＝O)NR^L-(其中R^L为氢原子或可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-6烷基)表示的基团或各自可具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-6亚烷基、C_2-6亚链烯基或C_2-6亚炔基；

环B为C_3-8环烷基、C_6-10芳基或5-到10-元杂环基；

X为各自可具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-3亚烷基或C_2-3亚链烯基；

Y为氧原子、硫原子、亚砜、砜或式-NR^Y-表示的基团(其中R^Y是氢原子或各自可具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_3-8环烷基羰基、C_6-10芳基羰基、C_1-6烷基磺酰基、C_6-10芳基磺酰基、C_6-10芳基或5-到6-元杂芳基)；

Z为单键或C_1-3亚烷基；

R¹和R²各自独立地为氢原子、卤素原子、羟基、氰基、或各自可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-6烷基或C_1-6烷氧基；

R³为氢原子或各自可具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_6-10芳基羰基、C_1-6烷基磺酰基、C_6-10芳基磺酰基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基或5-到10-元杂环基；

R⁴和R⁵各自独立地为氢原子、卤素原子或羟基，或各自可具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷氧基、C_6-10芳基或5-到10-元杂环基；

R⁶、R⁷和R⁸各自独立地为氢原子、卤素原子、羟基或氰基，或各自可具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、C_1-6烷氧基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷氧基、C_6-10芳基或5-到10-元杂环基；并且

n为1-3的整数；

[取代基组α：氢原子、卤素原子、羟基、氧代、氰基、C_1-6烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、C_1-6烷氧基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷氧基、C_6-10芳基和5-到10-元杂环基]；

[2]如上述[1]所述的化合物或其药学可接受的盐，其中X为可具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-3亚烷基；

[3]如上述[1]或[2]所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Y为氧原子；

[4]如上述[1]或[2]所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Y为硫原子或砜基；

[5]如上述[1]或[2]所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Y为式-NR^Y-表示的基团(其中R^Y为氢原子或各自可具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_3-8环烷基羰基、C_6-10芳基羰基、C_1-6烷基磺酰基、C_6-10芳基磺酰基、C_6-10芳基或5-到6-元杂芳基)；

[6]如上述[1]-[5]中任意一项所述的化合物或其药学可接受的盐，其中L为式-C(＝O)NR^L-表示的基团(其中R^L为氢原子或可具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-6烷基)；

[7]如上述[1]-[6]中任意一项所述的化合物或其药学可接受的盐或溶剂化物，其中所述化合物选自下列化合物：

1)(-)-N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-5-氰基吡啶-2-甲酰胺，

2)N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-5-三氟甲基吡啶-2-甲酰胺，

3)N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-3，5-二氟吡啶-2-甲酰胺，

4)N-(2’-氨基-2，3，5’，6’-四氢螺[苯并吡喃-4，4’-[1，3]噻嗪]-6-基)-5-溴嘧啶-2-甲酰胺，

5)N-(2’-氨基-2，3，5’，6’-四氢螺[苯并吡喃-4，4’-[1，3]噻嗪]-6-基)-5-溴嘧啶-2-甲酰胺和

6)N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-3，5-二氯吡啶-2-甲酰胺；

[8]一种药物组合物，该药物组合物包含上述[1]-[7]中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐作为活性成分；

[9]上述[8]的药物组合物，用于抑制淀粉样蛋白-β蛋白产生；

[10]上述[8]的药物组合物，用于抑制β-位点淀粉样蛋白-β前体蛋白裂解酶1(BACE1)；

[11]上述[8]-[10]中任意一项的药物组合物，用于治疗神经变性疾病；和

[12]上述[11]的药物组合物，其中所述的神经变性疾病是阿尔茨海默型痴呆或唐氏综合征。

下面解释本说明书中使用的符号、术语等的含义，并且对本发明作详细描述。

在本说明书中，为方便起见，化合物的结构式可以表示一些异构体。然而，本发明包括所有异构体和异构体混合物例如可以由化合物结构生成的几何异构体、基于不对称碳的旋光异构体、立体异构体和互变体。本发明并不限于为方便起见而描述的化学式，并且可以包括任何一种异构体或其混合物。因此，本发明的化合物可以在分子上具有不对称碳原子并且可以作为旋光活性化合物或外消旋物存在，而且本发明包括各种旋光活性化合物和外消旋物，不受任何限制。尽管化合物的多晶型可以存在，但是所述化合物同样不限于此，而且可以单一晶型或单一晶型的混合物形式存在。化合物可以是无水物或水合物。这些形式中的任何一种都包括在本申请的权利要求中。

本文的“卤素原子”指氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等且优选氟原子或氯原子。

“C_1-6烷基”指具有1-6个碳原子的烷基。该基团的优选实例包括直链或支链烷基，例如甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、叔丁基、正-戊基、异戊基、新戊基、正-己基、1-甲基丙基、1，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、1-甲基-2-乙基丙基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、1，1-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、2-乙基丁基、1，3-二甲基丁基、2-甲基戊基和3-甲基戊基。该基团更优选甲基、乙基或正-丙基。

“C_2-6链烯基”指具有2-6个碳原子的链烯基。该基团的优选实例包括直链或支链链烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯-1-基、1-丁烯-2-基、1-丁烯-3-基、2-丁烯-1-基和2-丁烯-2-基。

“C_2-6炔基”指具有2-6个碳原子的炔基。该基团的优选实例包括直链或支链炔基，例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。

“C_1-6亚烷基”指通过从如上述定义的”C_1-6烷基”上除去任意一个氢原子衍生的二价基团。该基团的实例包括亚甲基、1，2-亚乙基、1，1-亚乙基、1，3-亚丙基、亚丁基、亚戊基和亚己基。

“C_2-6亚链烯基”指通过从如上述定义的“C_2-6链烯基”上除去任意一个氢原子衍生的二价基团。该基团的实例包括1，2-亚乙烯基(亚乙烯基)、亚丙烯基、亚丁烯基、亚戊烯基和亚己烯基。

“C_2-6亚炔基”指通过从如上述定义的“C_2-6炔基”上除去任意一个氢原子衍生的二价基团。该基团的实例包括亚乙炔基、亚丙炔基、亚丁炔基、亚戊炔基和亚己炔基。

“C_1-6烷氧基”指其中一个氢原子被氧原子替代的具有1-6个碳原子的烷基。该基团的实例包括甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异丙氧基、正-丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正-戊氧基、异戊氧基、仲-戊氧基、叔-戊氧基、正-己氧基、异己氧基、1，2-二甲基丙氧基、2-乙基丙氧基、1-甲基-2-乙基丙氧基、1-乙基-2-甲基丙氧基、1，1，2-三甲基丙氧基、1，1，2-三甲基丙氧基、1，1-二甲基丁氧基、2，2-二甲基丁氧基、2-乙基丁氧基、1，3-二甲基丁氧基、2-甲基戊氧基、3-甲基戊氧基和己氧基。

“C_1-6烷基磺酰基”指其中一个氢原子被磺酰基替代的具有1-6个碳原子的烷基。该基团的实例包括甲基磺酰基、乙基磺酰基、正-丙基磺酰基、异丙基磺酰基、正-丁基磺酰基、异丁基磺酰基、叔丁基磺酰基、正-戊基磺酰基、异戊基磺酰基、新戊基磺酰基、正-己基磺酰基和1-甲基丙基磺酰基。

“C_1-6烷基羰基”指其中一个氢原子被羰基替代的具有1-6个碳原子的烷基。该基团的优选实例包括乙酰基、丙酰基和丁酰基。

“C_6-10芳基”指具有6-10个碳原子的芳族烃环基。该基团的实例包括苯基和萘基。特别优选苯基。

“C_6-10芳基羰基”指这样的基团，其中羰基与具有6-10个碳原子的芳族烃环基键合。该基团的优选实例包括苯甲酰基和萘甲酰基。更优选苯甲酰基。

“C_6-10芳基磺酰基”指这样的基团，其中磺酰基与具有6-10个碳原子的芳族烃环基键合。该基团的优选实例包括苯基磺酰基和萘基磺酰基。更优选苯基磺酰基。

“C_3-8环烷基”指具有3-8个碳原子的环烷基。该基团的优选实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。

“C_3-8环烷氧基”指其中一个氢原子被氧原子替代的具有3-8个碳原子的环烷基。该基团的优选实例包括环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基、环庚氧基和环辛氧基。

“C_3-8环烷基羰基”指其中一个氢原子被羰基替代的具有3-8个碳原子的环烷基。该基团的优选实例包括环丙基羰基、环丁基羰基、环戊基羰基、环己基羰基、环庚基羰基和环辛基羰基。

“5-到10-元杂环基”指包含杂原子的总计具有5-10个环原子的环状基团。该基团的优选实例包括哌啶基、吡咯烷基、氮杂

基、氮杂环辛烷基(azocanyl)、哌嗪基、1，4-二氮杂环庚烷基、吗啉基、硫代吗啉基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三唑基、三嗪基、四唑基、异

唑基、

唑基、

二唑基、异噻唑基、噻唑基、噻二唑基、呋喃基、噻吩基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并咪唑基、苯并三唑基、苯并异噻唑基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、苯并二氢吡喃基、异苯并二氢吡喃基、1，3-二氧杂茚满基和1，4-二氧杂四氢化萘基。

“5-到6-元杂芳基”指本身为包含杂原子的总计具有5-6个环原子的芳族环基的“5-到10-元杂环基”。该基团的实例包括吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三唑基、三嗪基、四唑基、异

唑基、

唑基、

二唑基、异噻唑基、噻唑基、噻二唑基、呋喃基和噻吩基。

“C_1-3亚烷基”的实例包括亚甲基、亚乙基和亚丙基。

“C_2-3亚链烯基”的实例包括亚乙烯基和亚丙烯基。

“取代基组α”指氢原子、卤素原子、羟基、氧代、氰基、C_1-6烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、C_1-6烷氧基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷氧基、C_6-10芳基和5-到10-元杂环基。

本发明的式(I)螺氨基二氢噻嗪衍生物可以是药学可接受的盐。所述药学可接受盐的具体实例包括无机酸盐(例如硫酸盐、硝酸盐、高氯酸盐、磷酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐和氢碘酸盐)、有机羧酸盐(例如乙酸盐、草酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、富马酸盐和柠檬酸盐)、有机磺酸盐(例如甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐和樟脑磺酸盐)、氨基酸盐(例如天冬氨酸盐和谷氨酸盐)、季胺盐、碱金属盐(例如钠盐和钾盐)和碱土金属盐(例如镁盐和钙盐)。

本发明的式(I)螺氨基二氢噻嗪衍生物或其药学可接受的盐可以是它们的溶剂化物。溶剂化物的实例包括水合物。化合物(I)并不限于具体异构体，而是包括所有可能的异构体(例如酮-烯醇异构体、亚胺-烯胺异构体、非对映异构体、旋光异构体和旋转异构体)和外消旋物。例如，化合物(I)包括下列互变异构体。

[式2]

本发明的式(I)螺氨基二氢噻嗪衍生物优选为下述式(I)化合物：其中X为可具有1-3个选自取代基组α的取代基的C1-3亚烷基，特别是具有1-3个选自取代基组α的取代基的亚甲基或亚乙基。

本发明螺氨基二氢噻嗪衍生物还优选是下述式(I)化合物：其中Y为氧原子、硫原子、砜基或式-NR^Y-(其中R^Y如上文定义)表示的基团。

本发明螺氨基二氢噻嗪衍生物还优选是下述式(I)化合物：其中L为式-C(＝O)NR^L-(其中R^L如上文定义)表示的基团。

本发明螺氨基二氢噻嗪衍生物特别优选为下述式(I)化合物：其中Y为氧原子且Z为单键；其中Y为氧原子且Z为可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-3亚烷基；或其中Y为硫原子或砜基且Z为单键。

本发明的优选化合物包括下列化合物：

4)N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-5-氟吡啶-2-甲酰胺，

5)N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-5-溴嘧啶-2-甲酰胺，

6)N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-5-溴吡啶-2-甲酰胺，

7)N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺，

8)N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-3，5-二氯吡啶-2-甲酰胺，

9)N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-3-氟吡啶-2-甲酰胺，

10)6-(5-甲氧基吡啶-3-基)-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺，

11)6-(3，5-二氯苯基)-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺，

12)6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺，

13)6-(2-氟吡啶-3-基)-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺，

14)6-[(2-氨基吡啶-3-基)乙炔基]-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺和

15)7-氟-6-(2-氟吡啶-3-基)-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺。

更优选的化合物包括下列化合物：

6)N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-3，5-二氯吡啶-2-甲酰胺。

下面将要描述本发明的式(I)化合物[下文称作化合物(I)；类似地描述另一个结构式表示的化合物]或其药学可接受的盐的制备方法。

用于制备本发明式(I)化合物的原料化合物中的“离去基团”可以是用于亲核取代反应的任意离去基团。离去基团的优选实例包括卤素原子、可以被1-3个选自上述取代基组α的取代基取代的C_1-6烷基磺酰氧基、可以被1-3个选自上述取代基组α的取代基取代的C_1-6烷基羰基氧基和可以被1-3个选自上述取代基组α的取代基取代的芳基磺酰氧基。离去基团的具体实例包括氯原子、溴原子、碘原子、甲磺酰氧基、三氟碳酰氧基、三氟甲磺酰氧基和对-甲苯磺酰氧基。

一般制备方法1：

[式3]

在式中，环A、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、X、Y和Z如上文定义。

该步骤是通过用酸环化化合物(a-1)获得化合物(II)的方法。

对于该反应没有特殊限制，前提条件是不抑制反应而且允许起始材料在其中溶解到一定程度。例如，可以使1当量到明显过量的合适酸在有或没有溶剂如苯、甲苯或二氯甲烷存在下对化合物(a-1)起作用来进行所述反应。而且，酸也可用作溶剂。所用酸的实例包括硫酸、三氟乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸和他们的混合物。反应时间没有特殊限制，一般为1-72小时，优选为1-48小时。反应温度通常为从冰冷温度到溶剂回流温度。

合成化合物(II)的方法

用于一般制备方法1的化合物(a-1)可由化合物(a-2)通过方法1或方法2合成。

方法1：

[式4]

式中，每个符号代表的意义与上述相同。

方法1是一种以化合物(a-2)为起始材料两步制备化合物(a-1)的方法。化合物(a-2)可作为商购产品使用，也可以由商购产品通过本领域技术人员公知的方法制备，而且可通过实施例中制备例描述的方法制备。

步骤1：

该步骤为通过乙烯基锂试剂或乙烯基格氏试剂(可商业获得或通过已知方法制备)与化合物(a-2)的加成反应获得化合物(a-3)的步骤。该方法可在与例如文献J.Am.Chem.Soc.2006，128，9998-9999和J.HeterocyclicChem.1982，19，1041-1044所述相同的条件下进行。反应中使用的溶剂根据起始材料和试剂变化，没有特殊限制，但前提条件是所用溶剂不抑制反应、允许起始材料在其中溶解到一定程度而且在反应过程中永远保持惰性。溶剂的优选实例包括有机溶剂，例如乙醚、四氢呋喃、1，4-二

烷、1，2-二甲氧基乙烷、苯、甲苯和它们的混合溶剂。反应时间没有特殊限制，通常为0.1-48小时，优选0.1-12小时。反应温度根据所用的起始材料、试剂等变化，并且优选保持在低温，例如-78℃至室温以便将副产物的形成降至最少。

通过加入添加剂例如路易斯酸如氯化锌，或者TMEDA(四甲基乙二胺)或HMPA(六甲基磷酰胺)可以达到有利的结果，例如改善收率和缩短反应时间。

步骤2：

该步骤为通过在酸存在条件下使化合物(a-3)与硫脲或N-取代硫脲反应获得化合物(a-1)的步骤。

该步骤的反应可以在与例如文献Russ.J.Org.Chem.，2006，42(1)，42-47所述相同的条件下进行。

用于该反应的酸的实例包括乙酸、三氟乙酸、盐酸、硫酸和它们的混合物。所述反应可以通过使1当量到更多当量的硫脲衍生物对化合物(a-3)在没有溶剂条件下或在有机溶剂如甲苯中起作用进行。反应时间没有特殊限制，通常为5分钟-24小时，优选为5分钟-12小时。反应温度通常为0℃-150℃，更优选为0℃-100℃。

方法2：

[式5]

在式中，环A、R¹、R²、R³、R⁴、X、Y和Z如上述定义，LV代表离去基团，R¹⁰代表C_1-6烷基。

方法2是一种以化合物(a-2)为原料四步制备化合物(a-1)的方法。

步骤1：

该步骤通过Peterson试剂或Horner-Wadsworth-Emmons试剂与化合物(a-2)在与本领域公知方法相同的条件下进行加成反应获得化合物(a-4)的步骤。

Peterson试剂或Horner-Wadsworth-Emmons试剂可作为商购产品直接使用，或者可利用本领域技术人员公知的方法制备。具体地，这样的试剂可通过下述反应制备：三烷基甲硅烷基乙酸烷基酯化合物或三烷基膦酰基乙酸酯化合物与商购的有机金属试剂，例如烷基锂试剂如丁基锂，或者与烷氧基钾或烷氧基钠试剂如叔丁氧基钾，或者与相应的烷基氨基锂试剂或烷基氨基镁试剂，使用例如金属镁或金属锂通过质子-金属交换进行反应。

用于该步骤的溶剂根据所用的起始材料和试剂变化，没有特殊限制，但前提条件是所用溶剂不抑制反应、允许起始材料在其中溶解到一定程度而且在反应过程中永远保持惰性。溶剂的优选实例包括有机溶剂，例如乙醚、四氢呋喃、1，4-二

烷、1，2-二甲氧基乙烷、苯、甲苯、甲醇、乙醇和它们的混合溶剂。反应时间没有特殊限制，通常为0.1-48小时，优选0.1-12小时。反应温度根据所用的起始材料、试剂等变化，并且优选保持在低温，例如-78℃至室温以便将副产物的形成降至最少。

步骤2：

该步骤为通过使酯化合物(a-4)进行还原反应获得醇化合物(a-5)的步骤。

用于该反应的还原剂的实例包括氢化锂铝、硼氢化锂和二异丁基氢化铝。反应温度没有特殊限制，通常为从-78℃到溶剂回流温度，且优选从-78℃到室温。用于该反应的溶剂没有特殊限制，条件是所用溶剂不抑制反应并且允许起始材料在其中溶解到一定程度。优选的溶剂包括四氢呋喃、乙醚、甲苯和二氯甲烷。

步骤3：

该步骤为通过将化合物(a-5)的羟基转化为离去基团获得化合物(a-6)的步骤。

离去基团的实例包括上述离去基团。所述反应可以在与那些通常用于将羟基转化为此类离去基团反应相同的条件下进行。当离去基团为例如卤素原子时，化合物(a-6)可通过，例如化合物(a-5)与盐酸、氢溴酸、亚硫酰氯、亚硫酰溴、三溴化磷或四卤代甲烷-三苯基膦反应制备。用于该反应的溶剂没有特殊限制，但前提条件是所用溶剂不抑制反应、允许起始材料在其中溶解到一定程度。溶剂的优选实例包括苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷和氯仿。反应温度通常为从-78℃到溶剂回流温度，而且优选为从冰冷温度到溶剂回流温度。反应时间没有特殊限制，通常为5分钟-48小时，且优选为5分钟-12小时。

当离去基团为C1-6烷基羰基氧基时，化合物(a-6)可通过例如化合物(a-5)与三氟乙酰氯或三氟乙酸酐反应制备。

当离去基团为C1-6烷基磺酰氧基基团或芳基磺酰氧基团时，化合物(a-6)可通过，例如化合物(a-5)与甲磺酰氯、对-甲苯磺酰氯或三氟甲磺酸酐反应制备。

用于该反应的溶剂没有特殊限制，但前提条件是所用溶剂不抑制反应、允许起始材料在其中溶解到一定程度。溶剂的优选实例包括四氢呋喃、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、氯仿和N，N-二甲基甲酰胺。反应温度通常为从-78℃到溶剂回流温度，优选从-78℃到室温。加入碱可获得有利的结果，例如收率提高。所用碱没有特殊限制，只要不抑制反应就可以使用。碱的优选实例包括碳酸钠、碳酸钾、三乙胺、吡啶和二异丙基乙胺。

步骤4：

该步骤为通过化合物(a-6)与硫脲或N-取代硫脲反应获得化合物(a-1)的步骤。

具体地，该反应可通过下述方式进行：使1当量或更多当量硫脲或N-甲基硫脲在有机溶剂如甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、四氢呋喃、1，4-二

烷或N，N-二甲基甲酰胺中或在无机酸如氢溴酸中作用于化合物(a-6)。反应时间没有特殊限制，通常为5分钟-24小时，优选5分钟-12小时。反应温度通常为0℃-150℃，更优选为室温到100℃。

2.一般制备方法2：

[式6]

在式中，环A、环B、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、X、Y和Z如上述定义。

一般制备方法2是一种制备其中L为-NHCO-的本发明式(I)化合物的方法，该方法以一般制备方法1获得的化合物(II)为原料分6步骤进行。

化合物(II)可以从商购产品为原料通过上述一般制备方法1制备，也可以通过实施例中的制备例描述的方法制备。化合物(b-5)和(b-6)都可以用商购产品使用，也可以商购产品为原料通过本领域技术人员公知的方法制备，而且还可以通过实施例中的制备例描述的方法制备。

步骤1：

该步骤为由化合物(II)制备化合物(b-1)的步骤。

该反应可通过下述公知方法1或方法2进行。

方法1：在系统中同时进行化合物(II)的乙酰化和硝化反应的方法

该反应可通过本领域技术人员公知的方法进行。用于该反应的条件的实例包括浓硝酸/乙酸酐和发烟硝酸/乙酸酐。反应温度没有特殊限制，通常为从-20℃到50℃，优选从-20℃到室温。

方法2：分离化合物(II)的乙酰化化合物然后进行硝化的方法

步骤2-1：该步骤为化合物(II)的乙酰化反应获得相应的乙酰基化合物的步骤。所述反应可以在与通常用于氨基化合物的乙酰化反应相同的条件下进行，例如下述文献描述的条件：T.W.Green和P.G.M.Wuts，″Protective Groups in Organic Chemistry，第2版″，John Wiley&Sons(1991)，p.351-352。用于该反应的乙酰化试剂的实例包括乙酰氯和乙酸酐。反应温度没有特殊限制，通常为从-20℃到150℃。

步骤2-2：该步骤为通过使上述步骤2-1合成的乙酰基化合物硝化获得化合物(b-1)的步骤。所述的硝化反应可以在与通常用于硝化反应相同的条件下进行，例如下述文献描述的条件：Jikken Kagaku Koza(Courses inExperimental Chemistry)第4版，卷20，日本化学学会主编，p.394-404(1992)。用于该反应的硝化试剂的实例包括浓硝酸、浓硝酸/乙酸、浓硝酸/浓硫酸、硝酸钾/浓硫酸和发烟硝酸/乙酸酐。反应温度没有特殊限制，通常为从-20℃到70℃。

步骤2：

该步骤为通过化合物(b-1)的脱乙酰反应获得化合物(b-2)的步骤。该反应可以在与通常用于乙酰基脱保护反应的相同条件下进行，例如下述文献描述的条件：T.W.Green和P.G.M.Wuts，″Protective Groups in OrganicChemistry，第2版″，John Wiley&Sons(1991)，p.351-352。反应可以在酸如盐酸、硫酸或氢溴酸存在下进行。反应溶剂为甲醇、乙醇、甲苯、丙醇等。反应温度没有特殊限制，通常为从-20℃到150℃，且优选从室温到溶剂的回流温度。

步骤3：

该步骤为通过使化合物(b-2)的氨基进行叔-丁氧羰基化获得化合物(b-3)的步骤。

该反应可以在与通常用于使氨基化合物进行叔-丁氧基羰基化相同的条件下进行，例如下述文献描述的条件：T.W.Green和P.G.M.Wuts，″Protective Groups in Organic Chemistry，第2版″，John Wiley&Sons(1991)，p.327-330。例如，通过使用三乙胺作为碱，在溶剂如四氢呋喃中使化合物(b-2)与二碳酸二叔丁酯反应可获得化合物(b-3)。

步骤4：

该步骤为通过化合物(b-3)还原获得化合物(b-4)的方法。

该反应可以在与硝基化合物还原反应通常采用的相同条件下进行。反应的实例包括通过使用贵金属催化剂如阮内镍、钯、钌、铑或铂的催化氢化的还原反应；通过金属如铁的还原反应；和使用通过连二亚硫酸钠的还原反应。在这种情况下，优选的是，例如在中性条件下使用氯化铵的与铁的还原反应。

步骤5：

该步骤为由化合物(b-4)获得化合物(b-7)的步骤。

该反应可以通过本领域公知的方法进行，例如(1)使用缩合剂使化合物(b-4)与化合物(b-5)直接缩合的方法(方法(1))，(2)使化合物(b-5)的混合酸酐与化合物(b-4)反应的方法(方法(2))，(3)使化合物(b-5)的活化酯与化合物(b-4)反应的方法(方法(3))，或(4)使酰氯化合物(b-6)与化合物(b-4)反应的方法(方法(4))。

用于这些反应的化合物(b-4)可以是游离形式或盐。

方法(1)：

化合物(b-7)可通过使用缩合剂使化合物(b-4)与化合物(b-5)直接缩合获得。

该方法可通过本领域公知的方法进行。缩合剂的实例包括CDI(N，N′-羰基二咪唑)、Bop(1H-1，2，3-苯并三唑-1-基氧基(三(二甲基氨基))磷

六氟磷酸盐)、WSC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)、DCC(N，N-二环己基碳二亚胺)、二乙基磷酰基氰化物、PyBOP(苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷子基)磷六氟磷酸盐)和EDC·HCl(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)。

用于该反应的溶剂没有特殊限制，只要不抑制反应就可以使用。溶剂的实例包括四氢呋喃、1，4-二

烷、乙酸乙酯、乙酸甲酯、二氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺、甲苯和二甲苯。

相对于化合物(b-4)，使用1当量或更多过量的化合物(b-5)。在必要时，可加入1当量或更多过量的有机碱，例如三乙胺。

反应时间没有特殊限制，通常为0.5-48小时，且优选0.5-24小时。反应温度根据使用的原料变化，对于溶剂等没有特殊限制。优选从冰冷温度到溶剂回流温度。

方法(2)：

化合物(b-7)可通过下述过程获得：将化合物(b-5)转化为混合酸酐，然后使混合酸酐与化合物(b-4)反应。所述的混合酸酐可通过本领域公知的方法合成。合成通过化合物(b-5)与氯甲酸酯如氯甲酸乙酯在碱如三乙胺的存在下反应进行。相对于化合物(b-5)使用1-2个当量的氯甲酸酯和碱。反应温度为从-30℃到室温，且优选从-20℃到室温。

混合酸酐与化合物(b-4)缩合的步骤通过混合酸酐与化合物(b-4)在溶剂例如二氯甲烷、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺中反应进行。相对于混合酸酐使用1当量到更多过量的化合物(b-4)。

反应时间没有特殊限制，通常为0.5-48小时，且优选0.5-12小时。反应温度为从-20℃到50℃，且优选从-20℃到室温。

方法(3)：

化合物(b-7)可通过将化合物(b-5)转化为活化酯，然后使活化酯与化合物(b-4)反应获得。获得活化酯的步骤通过使化合物(b-5)与活化酯合成试剂在缩合剂如DCC存在下，于溶剂如1，4-二

烷、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺中反应进行。活化酯合成试剂的实例包括N-羟基琥珀酰亚胺。相对于化合物(b-5)，使用1-1.5当量的活化酯合成试剂和缩合剂。反应时间没有特殊限制，通常为0.5-48小时，且优选为0.5-24小时。

反应温度为从-20℃到50℃，且优选从-20℃到室温。

活化酯与化合物(b-4)的缩合步骤通过例如活化酯与化合物(b-4)在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺中反应进行。相对于活化酯，使用1当量-更多过量的化合物(b-4)。反应时间没有特殊限制，通常为0.5-48小时，且优选为0.5-24小时。反应温度为从-20℃到50℃，且优选从-20℃到室温。

方法(4)：

由化合物(b-4)和化合物(b-6)获得化合物(b-7)的酰化反应可以在与本领域普遍公知的条件相同的条件下进行。

用于该反应的碱的实例包括三乙胺、吡啶、碳酸钾和二异丙基乙胺。反应温度没有特殊限制，通常为从-78℃到溶剂的回流温度，且优选从-20℃到室温。对于该反应使用的溶剂没有特殊限制，前提条件是不抑制反应，而且允许起始材料在其中一定程度的溶解。溶剂的优选实例包括四氢呋喃、乙醚、甲苯和二氯甲烷。

步骤6：

该步骤为通过化合物(b-7)的叔丁氧羰基的脱保护反应获得化合物(I-a)的步骤。

可以在与通常用于叔丁氧羰基脱保护反应的相同条件下，例如参考文献T.W.Green和P.G.M.Wuts，“Protective Groups in OrganicChemistry，第2版”，John Wiley&Sons(1991)，p.327-330中所述的条件进行该反应。例如，可以通过使三氟乙酸与化合物(b-7)在溶剂例如二氯甲烷中反应得到化合物(I-a)。

由此获得的其中L为-C(＝O)NH-的本发明通式(I)化合物按照普通方法进一步与相应的C1-6烷基卤化物反应可以获得其中L为-C(＝O)NR^L-(其中R^L为可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C1-6烷基)的本发明通式(I)的化合物。

当通式(I)的R³为氢原子时，其中R³为可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C1-6烷基、可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C1-6烷基羰基、可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C6-10芳基羰基、可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C1-6烷基磺酰基、可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C6-10芳基磺酰基、可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C3-10碳环基、可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的5-到10-元杂环基的本发明式(I)化合物可通过下述方法获得：将按照一般制备方法2获得的化合物(I-a)与相应的卤化物如C1-6烷基卤、C1-6烷基羰基卤、C6-10芳基羰基卤、C1-6烷基磺酰基卤、C6-10芳基磺酰基卤、C3-10碳环卤化物或5-到10-元杂环卤化物进一步反应。

3.一般制备方法3：

[式7]

在式中，L₁在化合物(c-4)、(c-5)和(c-6)中代表单键或C1-6亚烷基，在化合物(c-8)和(c-9)中代表单键或C1-4亚烷基；L代表单键、氧原子、C1-6亚烷基、C2-6亚链烯基或C2-6亚炔基；而且环A、环B、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、X、Y和Z如上文定义。

一般制备方法3是一种由化合物(II)经三步骤制备其中L为单键、双键或三键的通式(I)化合物(I-b)的方法。

化合物(II)可由商购产品通过上述一般制备方法1制备，也可以依照实施例中的制备例描述的方法制备。化合物(c-4)、(c-5)、(c-6)、(c-7)和(c-8)各自可以是可直接使用的商购产品，也可以通过本领域公知的方法由商购产品制备，还可以通过实施例中的制备例描述的方法制备。

步骤1：

该步骤为通过化合物(II)的系统内溴化反应获得化合物(c-1)的步骤。该反应可依照与参考文献如Holmberg，P.；Tedenborg，P.；Rosquvist，S.；Hohansson，A.M.，Bioorg.Med.Chem.Lett.；15(3)，747-750(2005)所述相同的方法进行。用于所述反应的条件的实例包括溴/乙酸、溴/碳酸钠/己烷和N-溴代琥珀酰亚胺/二氯甲烷。反应温度没有特殊限制，通常为从-20℃到50℃，且优选从-20℃到室温。

步骤2：

该步骤为通过化合物(c-1)的叔-丁氧羰基化反应获得化合物(c-2)或其中R³为氢原子的化合物(c-3)的步骤。在该反应中，化合物(c-2)或(c-3)可通过下述方法获得：化合物(c-1)与二碳酸二叔丁酯在通常用于酰胺化合物的叔-丁氧羰基化反应的条件下，例如使用4-二甲氨基吡啶作为碱在溶剂如THF中反应。

用于该反应的溶剂没有特殊限制，只要不抑制反应就可以。溶剂的优选实例包括有机溶剂如四氢呋喃、1，4-二

烷、1，2-二甲氧基乙烷、二氯甲烷、DMF、乙腈和它们的混合溶剂。所用碱的实例包括三乙胺、4-二甲氨基吡啶、DBU和它们的混合物。碱的使用量为相对于化合物(c-1)为催化量到过量，更优选为0.1-5当量。二碳酸二叔丁酯的使用量为相对于化合物(c-1)为2当量到过量，更优选为2-10当量。反应时间没有特殊限制，通常为5分钟-24小时，优选为5分钟-12小时。反应温度通常为从-20℃到溶剂回流温度，更优选为从0℃到溶剂回流温度。

步骤3：

该步骤为通过化合物(c-2)或(c-3)与化合物(c-4)、(c-5)、(c-6)、(c-7)、(c-8)或(c-9)使用过渡金属进行偶联反应获得叔-丁氧羰基脱保护的化合物(I-b)的步骤。该反应可以在普遍用于使用过渡金属的偶联反应的条件下进行(例如Suzuki-Miyaura反应、Stille反应、Sonogashira反应、Heck反应或参考文献Buckwald，S.L.等人，J Am Chem Soc(1999)121(18)，4369-4378中描述的方法)。

用于该反应的有机金属催化剂没有特殊限制。有机金属催化剂的优选实例包括金属催化剂，例如四(三苯膦)钯(0)、二氯双(三苯膦)钯(II)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯化物、双(叔丁基膦)钯(0)、乙酸钯(II)、[1，3-双(二苯基膦基)丙烷]镍(II)和这些金属催化剂的混合物。所用有机金属催化剂的量相对于原料约为0.001-0.5当量。所用化合物(c-4)、(c-5)、(c-6)、(c-7)、(c-8)的量没有特殊限制，通常为相对于化合物(c-2)或(c-3)的1-6个当量。用于该反应的溶剂没有特殊限制，只要不抑制反应就可以使用。溶剂的优选实例包括苯、甲苯、二甲苯、N，N-二甲基甲酰胺、1-甲基-2-吡咯烷酮、四氢呋喃、1，2-二甲氧基乙烷、1，4-二

烷、乙腈和丙腈。反应温度没有特殊限制，通常为例如从冰冷温度到溶剂的回流温度，且优选从室温到溶剂回流温度。反应时间没有特殊限制，通常为0.5-48小时，且优选0.5-24小时。

通过在碱或盐存在下实施该反应可以获得更有利的结果，例如收率提高。对于这样的碱或盐没有特殊限制。碱或盐的优选实例包括碱或盐，例如碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钡、碳酸铯、磷酸钾、氟化钾和它们的溶液，以及三乙胺、N，N-二异丙基乙胺、氯化锂和碘化亚铜(I)。

在步骤3中，当化合物(c-1)中的R³为氢原子时，化合物(I-b)可通过化合物(c-1)与没有用叔丁氧羰基等进行保护氨基的化合物(c-7)的偶联反应合成。

当通式(I)中的R³为氢原子时，其中R³为可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C1-6烷基、可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C1-6烷基羰基、可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C6-10芳基羰基、可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C1-6烷基磺酰基、可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C6-10芳基磺酰基、可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的C3-10碳环基或可以具有1-3个选自取代基组α的取代基的5-到10-元杂环基的本发明式(I)化合物可通过下述方法获得：将按照一般制备方法3获得的化合物(I-b)与相应的卤化物如C1-6烷基卤、C1-6烷基羰基卤、C6-10芳基羰基卤、C1-6烷基磺酰基卤、C6-10芳基磺酰基卤、C3-10碳环卤化物或5-到10-元杂环卤化物反应。

按照一般制备方法3获得的其中L为C1-6亚烷基的化合物(I-b)可通过下述方法制备：化合物(c-2)或(c-3)与化合物(c-8)或(c-9)使用过渡金属进行偶联反应，生成其中L为C2-6亚链烯基或C2-6亚炔基的化合物(I-b)，然后使化合物在通常用于还原反应的条件下，例如使用催化剂如钯进行反应。

如果必要，可以通过常规方法将依照该方式获得的本发明式(I)化合物转化成药学可接受的盐。可以通过其中适当合并有机合成化学等领域典型使用的方法的方法制备盐。方法的具体实例包括用酸溶液中和滴定本发明化合物的游离溶液。如果必要，可以通过使化合物进行本身已知的形成溶剂化物的反应，将本发明式(I)的化合物转化成溶剂化物。

本发明的螺氨基二氢噻嗪衍生物或其药学可接受的盐具有极佳的对Aβ产生的抑制作用或BACE1抑制作用，非常适合用作Aβ导致的、且以阿尔茨海默型痴呆为典型的神经变性疾病的预防或治疗剂。

可以通过常规方法配制本发明螺氨基二氢噻嗪衍生物或其药学可接受的盐。剂型的优选实例包括片剂、包衣片例如薄膜包衣片和糖包衣片、细颗粒、颗粒、粉末、胶囊、糖浆剂、含片、吸入剂、栓剂、注射剂、软膏剂、滴眼液、滴鼻剂、滴耳液、糊剂和洗剂。

这些固体制剂例如片剂、胶囊、颗粒和粉末一般可以包含0.01-100重量％、优选0.1-100重量％的本发明的螺氨基二氢噻嗪衍生物或其药学可接受的盐作为活性成分。

例如，可以通过使用常规方法混合通常用作药物制剂材料的成分并且添加典型使用的赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、着色剂和矫味剂并且添加稳定剂、乳化剂、吸收促进剂、表面活性剂、pH调节剂、防腐剂和抗氧化剂(如果必要时)来配制活性成分。所述成分的实例包括动物和植物油，例如大豆油、牛油和合成甘油酯；烃类例如液体石蜡、角鲨烷和固体石蜡；酯油例如肉豆蔻酸辛基十二烷基酯和肉豆蔻酸异丙酯；高级醇类例如十八醇十六醇混合物和山萮醇；硅氧烷树脂；硅油；表面活性剂例如聚氧乙烯脂肪酸酯、失水山梨醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油和聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；水溶性聚合物例如羟乙基纤维素、聚丙烯酸、羧乙烯基聚合物、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮和甲基纤维素；低级醇类例如乙醇和异丙醇；多元醇类例如甘油、丙二醇、二丙二醇和山梨醇；糖类例如葡萄糖和蔗糖；无机粉末例如硅酸酐、硅酸镁铝和硅酸铝；和纯水。所用赋形剂的实例包括乳糖、玉米淀粉、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、结晶纤维素和二氧化硅。所用粘合剂的实例包括聚乙烯醇、聚乙烯基醚、甲基纤维素、乙基纤维素、阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、虫胶、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙二醇-聚氧乙烯嵌段共聚物和葡甲胺。所用崩解剂的实例包括淀粉、琼脂、明胶粉、结晶纤维素、碳酸钙、碳酸氢钠、柠檬酸钙、糊精、果胶和羧甲基纤维素钙。所用润滑剂的实例包括硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇、二氧化硅和氢化植物油。所用着色剂的实例包括允许加入到药物中的那些着色剂。所用矫味剂的实例包括可可粉、薄荷醇、Empasm、薄荷油、冰片和桂皮粉。显然，所述成分并不限于上述添加成分。

例如，通过常规方法加入作为活性成分的本发明螺氨基二氢噻嗪衍生物或其药学可接受的盐、赋形剂和(如果必要的话)粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味剂等，然后使该混合物形成粉末、细颗粒、颗粒、片剂、包衣片、胶囊等来制备口服制剂。显然，如果必要，可以对片剂或颗粒进行适当包衣，例如包糖衣。

例如，可以通过常规方法添加pH调节剂、增溶剂、等渗剂等和增溶剂、稳定剂等(如果必要)来制备糖浆剂或注射剂。注射剂可以是预先制备的溶液，或可以是在使用前溶解的粉末本身或包含适宜添加剂的粉末。注射剂通常可以包含0.01-100重量％、优选0.1-100重量％的活性成分。此外，用于口服给药的液体制剂例如混悬液或糖浆剂通常可以包含0.01-100重量％、优选0.1-100重量％的活性成分。

例如，可以通过任意常规方法制备外用制剂，没有具体限制。作为基质材料，可以使用常用于药物、准标准药物、化妆品等的任意各种材料。基质材料的实例包括下面列举材料：动物和植物油、矿物油、酯油、蜡、高级醇类、脂肪酸、硅油、表面活性剂、磷脂类、醇类、多元醇类、水溶性聚合物、粘土矿物和纯水。如果必要，可以加入pH调节剂、抗氧化剂、螯合剂、防腐剂和杀真菌剂、着色剂、矫味剂等。此外，如果必要，可以掺入其它成分，例如具有分化诱导作用的成分、血流促进剂、杀菌剂、消炎剂、细胞激活物、维生素、氨基酸、保湿剂和角质层分离剂。

本发明的螺氨基二氢噻嗪衍生物或其药学可接受盐的剂量根据例如症状程度、年龄、性别、体重、给药方式、盐类型和疾病具体类型的不同而改变。通常而言，对成人口服给药的活性成分在约30μg-10g、优选100μg-5g且更优选100μg-1g/天或通过注射以约30μg-1g、优选100μg-500mg且更优选100μg-300mg/天对成人给药，相应地分成一次或几次剂量给予。

本发明化合物可以转化为用于捕捉生物活性的低分子量化合物中的靶蛋白的化学探针。具体地，通过利用例如文献J.Mass Spectrum.Soc.Jpn.Vol.51，No.5，2003，p.492-498或WO 2007/139149中描述的技术，在并非化合物表达活性所必需的结构部分的部分中引入标签基团、连接基团等，本发明化合物可被转化为亲和色谱探针、光亲和探针等。

用于化学探针的标签基团、连接基团等的实例包括下述(1)-(5)类基团所示的基团：

(1)蛋白标签基团，例如光亲和标记基团(例如苯甲酰基、二苯甲酮基、叠氮基、羰基叠氮基、二氮丙啶基、烯醇基、重氮基和硝基)和化学亲和基团(例如α-碳上被卤素原子取代的酮基、氨基甲酰基、酯基、烷硫基、迈克尔反应受体如α，β-不饱和酮和酯以及环氧乙烷基团)；

(2)可裂解键，例如-S-S-、-O-Si-O-、单糖(例如葡萄糖基团和半乳糖基团)和二糖(例如乳糖)和可被酶裂解的低聚肽连接基团，

(3)荧光原位杂交(fishing)标记基团，例如生物素和3-(4，4-二氟-5，7-二甲基-4H-3a，4a-二氮杂-4-硼杂-s-引达省-3-基)丙酰基，

(4)可探测标记，例如放射性标记基团如¹²⁵I、³²P、³H和¹⁴C；荧光标记基团如荧光素、罗丹明、丹酰、伞形酮、7-硝基呋咱基和3-(4，4-二氟-5，7-二甲基-4H-3a，4a-二氮杂-4-硼杂-s-引达省-3-基)丙酰基；化学发光基团如萤光素和鲁米诺；和重金属离子如镧系金属离子和镭离子；和

(5)连接到固相载体上的基团，所述固相载体如玻璃珠、玻璃床、微量滴定板、琼脂糖珠、琼脂糖床、聚苯乙烯珠、聚苯乙烯床、尼龙珠和尼龙床。

例如，当通过利用上述文献等描述的方法将选自上述(1)-(5)中的基团引入本发明化合物来制备探针时，这种探针可用作确认用于搜寻新药物靶点的标记蛋白的化学探针。

实施本发明的方式

下面将参照实施例、制备例和试验例更具体地描述本发明。然而，本发明不限于此。制备例和实施例中所用的缩写是本领域技术人员公知的常规缩写。一些缩写如下所示。

THF：四氢呋喃

DMF：N，N-二甲基甲酰胺

TFA：三氟乙酸

EDC·HCl：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐

pTLC：制备型薄层色谱法

LC-MS：液相色谱-质谱法

PyBOP：苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷子基)磷

六氟磷酸盐

相对于四甲基硅烷以δ单位(ppm)记录质子核磁共振谱中的化学位移并以赫兹(Hz)记录偶合常数。将模式命名为s：单峰，d：双峰，t；三重峰，br；宽峰。

在下列实施例和制备例中，“室温”通常指约10℃-约35℃。“％”表示重量％，另有规定的除外。

制备例1

合成8-氟苯并二氢吡喃-4-酮(化合物1-3)

[式8]

(1)合成3-(2-氟苯氧基)丙酸(化合物1-2)

(1-1)在氮气氛、冰浴冷却下将2-氟苯酚(化合物1-1，3.0g)于N，N-二甲基甲酰胺(7.0ml)中的溶液加入到氢化钠(3.22g)于N，N-二甲基甲酰胺(100ml)的50％溶液中。在相同温度下搅拌30分钟后，加入3-溴-丙酸(4.91g)于N，N-二甲基甲酰胺(8.0ml)的溶液。使混合物恢复到室温并在相同温度下搅拌24小时。用1N的盐酸(100ml)将pH调整到1-2以终止反应。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。通过加入20％乙酸乙酯-己烷混合溶剂使剩余物结晶，获得标题化合物(1.53g)。

(1-2)通过下述可选择方法合成标题化合物。

在室温下将叔丁醇钾(2.42g)加入化合物1-1(2.20g)于四氢呋喃(100ml)的溶液中。在相同温度下搅拌5分钟，然后加入β-丙内酯(2.71ml)。由于放热，将该混合物移入冰浴并且在相同温度下搅拌1小时。在室温下再搅拌4小时，然后用1N盐酸将混合物调节为酸性以终止反应。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。通过加入20％乙酸乙酯-己烷混合溶剂使剩余物结晶，获得标题化合物(1.44g)。

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)(ppm)：2.73(t，J＝6.0Hz，2H)，4.24(t，J＝6.0Hz，2H)，6.90-7.00(m，1H)，7.09-7.24(m，3H)，12.41(b r.s.，1H)。

(2)合成化合物1-3

将聚磷酸(7.0g)加入化合物1-2(450mg)中，并且在100℃下搅拌混合物3.5小时。关闭热源，使温度降至75℃。同时，在剧烈搅拌下在反应混合物中逐渐加入碎冰。当温度回到室温，将反应混合物加入到冰水中。用乙醚萃取水层，并且依次用碳酸氢钠水溶液和盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。用硅胶柱色谱提纯剩余物，获得标题化合物(273mg)。

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：2.89(t，J＝6.4Hz，2H)，4.66(t，J＝6.4Hz，2H)，6.98(td，J＝4.4，8.0Hz，1H)，7.29-7.34(m，1H)，7.71(dt，J＝1.5，8.0Hz，1H)。

表1中描述的化合物用类似方法合成。结构式和1H-NMR数据示于表1。

[表1]

制备例2

合成2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺(化合物1)

[式9]

(1)合成4-乙烯基-苯并二氢吡喃-4-醇(化合物2-2)

将氯化锌(461mg)加入乙烯基氯化镁(在四氢呋喃中的1.48M溶液；29.7ml)中，并且在室温下搅拌混合物1小时。将反应溶液冷却到0℃，接着滴加化合物2-1(5.00g)在四氢呋喃中的溶液(20.0ml)。在相同温度下搅拌该反应溶液5小时。在确认原料消失后，在反应混合物中加入氯化铵溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物通过硅胶柱色谱提纯，获得标题化合物(5.37g)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.99(ddd，J＝2.4，4.8，13.6Hz，1H)，2.12(m，1H)，4.26(ddd，J＝4.0，4.8，8.8Hz，1H)，4.35(dt，J＝2.8，10.8Hz，1H)，5.31(dd，J＝1.6，10.6Hz，1H)，5.47(dd，J＝1.6，16.8Hz，1H)，6.01(dd，10.6，16.8Hz，1H)，6.85(dd，J＝1.2，8.4Hz，1H)，6.90(dt，J＝1.2，7.6Hz，1H)，7.20(ddd，J＝1.6，7.6，8.4Hz，1H)，7.28(dd，J＝1.6，7.6Hz，1H)。

(2)合成2-[2-苯并二氢吡喃-(4E)-亚基乙基]-异硫脲(化合物2-3)

将硫脲(2.75g)加入化合物2-2(5.30g)于乙酸(28.0ml)的溶液中。在室温下搅拌4小时后，通过棉塞过滤除去不溶物，并且将滤液滴入乙醚(200ml)中。将混合物冷却到0℃并且搅拌4小时。静置固体过夜。通过玻璃滤器除去所产生的固体，并且减压蒸发滤液中的溶剂。将乙酸乙酯加入剩余的油中，接着用碳酸氢钠水溶液中和。然后，通过玻璃滤器收集所产生的白色固体并用水清洗。干燥所获得的固体以得到标题化合物(3.10g)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)：2.74(m，2H)，3.74(m，2H)，4.17(m，2H)，6.18(m，1H)，6.83(m，1H)，6.90(m，1H)，7.16(m，1H)，7.59(m，1H)。

(3)合成化合物1

将三氟甲磺酸(1.00ml)滴入在冰浴中的化合物2-3(1.00g)于三氟乙酸(5.00ml)的溶液中。将混合物升温至室温并搅拌2小时。将该反应混合物滴入冰浴中的碳酸氢钠水溶液中以中和反应。用乙酸乙酯萃取水层，用碳酸氢钠水溶液和盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。剩余物通过NH-硅胶柱色谱提纯，获得标题化合物(300mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.92(ddd，J＝3.0，4.8，14.0Hz，1H)，1.95(ddd，J＝4.0，6.6，14.0Hz，1H)，2.07(ddd，J＝4.2，9.6，14.0Hz，1H)，2.23(ddd，J＝4.2，10.8，14.0Hz，1H)，3.04(ddd，J＝4.2，6.6，12.8Hz，1H)，3.11(ddd，J＝4.0，9.6，12.8Hz，1H)，4.24(ddd，J＝3.0，10.8，11.6Hz，1H)，4.33(ddd，J＝4.2，4.8，11.6Hz，1H)，6.81(dd，J＝1.4，8.1Hz，1H)，6.89(dt，J＝1.4，7.2Hz，1H)，7.12(ddd，J＝1.6，7.2，8.1Hz，1H)，7.15(dd，J＝1.6，7.6Hz，1H)。

制备例3

合成N-(2′-氨基(6-硝基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基) 三氟乙酰胺(化合物2)

[式10]

(1)合成2，2，2-三氟-N-(4-氧代苯并二氢吡喃-6-基)乙酰胺(化合物3-3)

将化合物3-1(1.0g)溶于丙酮(50ml)。加入二水合氯化锡(3.66g)并且在回流下加热混合物一夜。在确认反应完成后，将反应混合物冷却到室温。在减压下蒸发溶剂，并且将碳酸氢钠水溶液加入反应混合物，接着用二氯甲烷萃取。用乙酸乙酯反萃取水层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。剩余物通过硅胶柱色谱提纯。将获得的产物(464mg)溶于二氯甲烷(14ml)。在冰浴冷却下向其中加入三乙胺(0.57ml)和三氟乙酸酐(0.57ml)，并且在相同温度下搅拌混合物20分钟。加入三乙胺(0.595ml)并且在冰浴中进一步搅拌混合物40分钟。在确认原料消失后，将氯化铵溶液加入反应混合物以终止反应。用二氯甲烷萃取水层。用乙酸乙酯进一步萃取水层，并且通过无水硫酸镁干燥合并的有机层。用桐山漏斗(Kiriyama漏斗)收集通过减压蒸发溶剂产生的浅黄色固体。粗产物通过硅胶柱色谱提纯，获得标题化合物(644mg)。

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)(ppm)：2.82(t，J＝6.5Hz，2H)，4.55(t，J＝6.5Hz，2H)，7.11(d，J＝9.0Hz，1H)，7.79(dd，J＝9.0，2.8Hz，1H)，8.10(d，J＝2.8Hz，1H)，11.30(s，1H)。

(2)合成N-{4-[2-甲脒基硫基-乙-(E)-亚基]-苯并二氢吡喃-6-基}2，2，2- 三氟乙酰胺(化合物3-5)

将化合物3-3(150mg)于四氢呋喃(10.0ml)的溶液冷却到-78℃，并且滴加乙烯基氯化镁(溶在四氢呋喃中的1.6M溶液；1.09ml)。混合物在相同温度下搅拌1小时，然后在室温下搅拌5小时。在确认原料消失后，将氯化铵溶液加入反应混合物以终止反应。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。获得的粗产物3-4(178mg)不经进一步提纯直接用于下一步反应。

将硫脲(66mg)加入化合物3-4(178mg)于乙酸(2.0ml)的溶液中。在50℃下搅拌该混合物5小时，然后在室温下搅拌一夜。在减压下蒸发溶剂，然后将乙酸乙酯加入剩余的油中，接着用碳酸氢钠水溶液中和。水层用乙酸乙酯萃取，有机层用碳酸氢钠水溶液和盐水清洗。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。将乙酸乙酯和乙醚加入剩余物中。用桐山漏斗收集所产生的浅黄色固体并且用乙酸乙酯和乙醚混合溶剂清洗。干燥所获得的固体，得到标题化合物(26mg)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)(ppm)：2.74(m，2H)，4.11(d，J＝7.7Hz，2H)，4.18(m，，2H)，6.07(t，J＝7.7Hz，1H)，6.89(d，J＝8.8Hz，1H)，7.45(dd，J＝2.4，8.8Hz，1H)，7.92(d，J＝2.4Hz，1H)

(3)合成化合物2

在冰浴中，将三氟甲磺酸(0.0459ml)加入化合物(3-5)(25.0mg)于三氟乙酸(0.459ml)的溶液中。该混合物在相同温度下搅拌1.5小时，然后在室温下搅拌1.5小时。在确认原料消失后，通过将反应混合物加入冰浴冷却下的碳酸氢钠水溶液中使其中和。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。有机层通过无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。获得的粗产物从二氯甲烷溶液中结晶，获得标题化合物(6.6mg)。

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：2.07-2.14(m，1H)，2.26(ddd，J＝3.9，7.9，14.4Hz，1H)，2.42-2.53(m，2H)，3.14-3.29(m，2H)，4.23-4.32(m，1H)，4.34-4.46(m，1H)，6.87(d，J＝8.9Hz，1H)，7.35(d，J＝2.6Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.9，2.6Hz，1H)。

制备例4

合成8-氟-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺(化合物3)

[式11]

(1)合成(8-氟苯并二氢吡喃-4-亚基)乙酸乙酯(化合物4-2)

将N-丁基锂于己烷的溶液(1.6N，1.88ml)加入二环己基胺(545.7mg)于四氢呋喃(13.0ml)的溶液中，在干冰-丙酮浴中冷却到-78℃。在相同温度下搅拌10分钟，然后加入(三甲基甲硅烷基)乙酸乙酯(482.3mg)于四氢呋喃(2.5ml)的溶液。在-78℃下搅拌10分钟后，加入化合物4-1(250.0mg)于四氢呋喃(2.5ml)的溶液。在-78℃下搅拌该混合物1小时，然后恢复到室温，并且再搅拌3小时。在确认原料消失后，将反应混合物加入到盐水中。用乙酸乙酯萃取水层。有机层通过无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物通过硅胶柱色谱提纯，获得标题化合物(162mg)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：1.29(t，J＝7.1Hz，3H)，2.67(td，J＝1.3，5.9Hz，2H)，4.22(q，J＝7.1Hz，2H)，4.44-4.49(m，2H)，5.76(s，1H)，6.78(td，J＝5.1，8.1Hz，1H)，7.06(ddd，J＝1.5，8.1，10.9Hz，1H)，7.57(dt，J＝1.5，8.1Hz，1H)。

(2)合成(8-氟苯并二氢吡喃-4-亚基)乙醇(化合物4-3)

在氮气氛、冰浴冷却下，在两分钟内将化合物4-2(162mg)于乙醚(4.0ml)的溶液滴入氢化锂铝(52.1mg)于乙醚(8.0ml)的溶液中。在相同温度下搅拌两小时后，将乙酸乙酯缓慢地加入反应混合物中。然后，加水并且搅拌混合物1小时。水层用乙酸乙酯萃取，有机层依次用碳酸氢钠水溶液和盐水清洗。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物不经提纯直接用于下一步反应。

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：2.61-2.65(m，2H)，4.43(brt，J＝5.2Hz，2H)，4.52(d，J＝6.4Hz，2H)，5.65(t，J＝6.4Hz，1H)，6.78-6.85(m，1H)，6.94(brd，J＝7.6Hz，1H)，7.02(brt，J＝9.5Hz，1H)。

(3)合成化合物3

在室温下将硫脲(7.7mg)加入化合物4-3(19.6mg)于48％溴化氢(2.0ml)的溶液中，并且在50℃下搅拌该混合物2小时。在确认原料消失后，通过将反应混合物加入冰浴冷却下的碳酸氢钠水溶使其中和。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。有机层通过无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。将获得的剩余物溶于三氟乙酸(0.49ml)，然后在冰浴中向其中加入三氟甲磺酸(0.1ml)。在相同温度下搅拌混合物1.5小时，然后在室温搅拌1.5小时。在确认原料消失后，通过将反应混合物加入冰浴冷却下的碳酸氢钠水溶液使其中和。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。有机层通过无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。剩余物通过NH-硅胶柱色谱提纯获得标题化合物(58.5mg)。

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：1.93-2.01(m，2H)，2.05-2.14(m，1H)，2.28(ddd，J＝4.2，10.5，14.2Hz，1H)，3.02-3.09(m，1H)，3.09-3.17(m，1H)，4.32(td，J＝2.9，11.0Hz，1H)，4.45(td，J＝4.5，11.0Hz，1H)，6.79-6.86(m，1H)，6.92-6.99(m，2H)。

制备例5

合成N-{4-[7-氟苯并二氢吡喃-(4E)-亚基]乙基}异硫脲(化合物5-3)

[式12]

(1)合成4-氯-7-氟-4-乙烯基苯并二氢吡喃(化合物5-2)

在冰浴冷却下，将三乙胺(0.19ml)加入依照实施例4由7-氟苯并二氢吡喃-4-酮合成的化合物5-1(200mg)于四氢呋喃(3.0ml)的溶液中。在相同温度下滴加甲磺酰氯(177mg)于四氢呋喃(2.0ml)的溶液，接着搅拌1.5小时。在确认原料消失后，将反应混合物加入碳酸氢钠水溶液中以终止反应。用乙酸乙酯萃取水层。水层进一步用乙酸乙酯萃取，合并的有机层通过无水硫酸镁干燥。在减压下蒸发溶剂以获得标题化合物(214mg)，后者以粗产物的形式用于下一步反应。

(2)合成2-{2-[7-氟苯并二氢吡喃-(4E)-亚基]乙基}-异硫脲(化合物 5-3)

(2-1)将化合物5-2(214mg)溶于乙醇(6.0ml)。加入硫脲(153mg)并且在回流下加热混合物10小时。在确认原料消失后，在减压下蒸发溶剂。剩余物通过LCMS提纯以获得标题化合物(33mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：2.74(m，2H)，4.05(d，J＝7.9Hz，2H)，4.20(t，J＝5.8Hz，2H)，6.13(t，J＝7.9Hz，1H)，6.72(dd，J＝2.7，10.3Hz，1H)，6.78(ddd，J＝2.7，8.6，9.0Hz，1H)，7.67(dd，J＝6.7，8.9Hz，1H)。

(2-2)化合物5-3还可通过下述备选方法合成。

[式13]

(2)合成2，2，2-三氟乙酸2-(7-氟苯并二氢吡喃-4-亚基)乙基酯(化合物 5-4)

在冰浴冷却下，将三乙胺(1.15ml)加入化合物5-1(1.0g)于四氢呋喃(20ml)的溶液中。滴加三氟乙酸酐(1.62g)于四氢呋喃(2.5ml)的溶液，并且在相同温度下搅拌混合物1小时。在确认原料消失后，将反应混合物加入碳酸氢钠水溶液中以终止反应。用乙酸乙酯萃取水层。水层进一步用乙酸乙酯萃取，合并的有机层通过无水硫酸镁干燥。在减压下蒸发溶剂获得标题化合物(1.42g)，后者不经纯化直接用于下一步反应。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：2.64(m，2H)，4.36(m，2H)，5.15(d，J＝7.1Hz，2H)，5.55(t，J＝7.1Hz，1H)，5.60(dd，J＝2，7，10.1Hz，1H)，6.66(ddd，J＝2.6，8.3，8.7Hz，1H)，7.08(dd，J＝6.4，8.7Hz，1H)。

(4)合成化合物5-3

将化合物5-4(1.41g)溶于乙醇(20ml)。加入硫脲(0.92g)并且在回流下加热混合物1小时。在确认原料消失后，在减压下蒸发溶剂。剩余物通过LCMS提纯，获得化合物5-3(0.96g)，其为与化合物5-5的混合物(9∶1)。

表2所描述的化合物通过与制备例2-4描述的相同方法合成。结构式和1H-NMR数据示于表2。

[表2]

表2

实施例1

合成(±)-N-[2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基]-5- 氯吡啶-2-甲酰胺(化合物8)

[式14]

(1-1)6-硝基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺(化合物 6-2)

在冰浴中将发烟硝酸(比重：1.53，49.5μl)滴入化合物1(280mg)于乙酸酐(10.0ml)的溶液中。在相同温度下搅拌该反应溶液1小时，然后升温到室温并且搅拌3小时。在反应溶液中加入乙酸酐(10.0ml)，接着加入发烟硝酸(比重：1.53，400μl)。在确认反应完成后，用乙醚稀释反应溶液并且加入碳酸氢钠水溶液，之后搅拌1小时。水层用乙酸乙酯萃取，有机层用碳酸氢钠水溶液和盐水清洗。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。剩余物通过硅胶柱色谱提纯，获得作为与8-硝基化合物的混合物的化合物6-1(360mg)。

将乙醇(10.0ml)和浓硫酸(330μl)加入所获得的硝基化合物混合物(330mg)中，并且在回流下加热混合物8小时。在确认反应完成后，将反应混合物冷却到室温。用碳酸氢钠水溶液中和反应混合物，接着用乙酸乙酯萃取。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。剩余物通过NH-硅胶柱色谱提纯获得标题化合物(82.0mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：2.02(m，3H)，2.22(m，1H)，3.05(m，1H)，3.15(m，1H)，4.32(m，1H)，4.45(m，1H)，6.89(d，J＝9.0Hz，1H)，8.03(d，J＝9.0Hz，1H)，8.13(s，1H)。

(1-2)化合物6-1还可以通过下述可选择方法合成。

在室温下将乙酸酐(0.886ml)加入化合物1(1.1g)于吡啶(6ml)的溶液中，并且在室温下搅拌混合物12小时。将反应溶液倒入碳酸氢钠冰水溶液中，之后用乙酸乙酯萃取。萃取物通过无水硫酸镁干燥。通过过滤除去干燥剂，并且在减压下浓缩滤液。所获得的粗产物通过NH-硅胶柱色谱提纯，获得化合物1(N-(2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-基)乙酰胺)的N-乙酰基化合物(1.1g)。

在室温下将硝酸(比重：1.42，1.0ml)加入上述获得的N-乙酰基化合物(1.3g)于乙酸(0.2ml)的溶液中。在50℃下搅拌该混合物30分钟。在50℃下将硝酸(3.0ml)加入所述溶液，并且在50℃下搅拌混合物30分钟。在50℃下再加入硝酸(2.0ml)，并且在50℃下搅拌混合物30分钟。将反应溶液缓慢地倒入碳酸氢钠冰水溶液中，之后用乙酸乙酯萃取。萃取物通过无水硫酸镁干燥。通过过滤除去干燥剂，并且在减压下浓缩滤液。所获得的粗产物通过NH-硅胶柱色谱提纯，获得作为与8-硝基化合物的混合物的化合物6-1(0.93g)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.00-2.40(m，4H)，2.03(s，3H，8-异构体)，2.06(s，3H，6-异构体)，2.95-3.10(m，2H)，4.13-4.60(m，2H)，6.90-6.95(m，1H，6-异构体)，6.99(t，J＝8.0Hz，1H，8-异构体)，7.36(dd，J＝1.6，8.0Hz，1H，8-异构体)，7.74(dd，J＝1.6，8.0Hz，1H，8-异构体)，8.03-8.10(m，2H，6-异构体)。

(2)(6-硝基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6-3)

将化合物6-2(82.0mg)溶于四氢呋喃(5.00ml)，加入三乙胺(631μl)。然后，将二碳酸二叔丁酯(192mg)加入该反应溶液，并且在室温下搅拌混合物4天。在确认反应完成后，在减压下蒸发反应溶液。剩余物通过NH-硅胶柱色谱提纯获得标题化合物(110mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.48(s，9H)，2.00-2.30(m，4H)，3.02(m，1H)，3.14(m，1H)，4.39(m，2H)，6.93(d，J＝9.2Hz，1H)，8.08(dd，J＝2.8，9.2Hz，1H)，8.14(m，1H)。

(3-1)(±)-(6-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6-4)

将化合物6-3(110mg)溶于乙醇(20.0ml)，并且在室温下滴加连二亚硫酸钠(253mg)的水溶液。在反应溶液中再次加入连二亚硫酸钠(253mg)水溶液，并且在室温下搅拌该混合物。再加入N，N-二甲基甲酰胺(20.0ml)。在确认反应完成后，在减压下蒸发过量乙醇。将水加入剩余物中，并且用乙酸乙酯萃取水层。有机层用水和盐水清洗并且通过无水硫酸镁干燥。在减压下蒸发溶剂，剩余物通过NH-硅胶柱色谱提纯获得标题化合物(10.0mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.46(s，9H)，2.05(m，1H)，2.15(ddd，J＝4.0，6.4，14.0Hz，1H)，2.26(m，1H)，2.38(ddd，J＝4.0，10.0，14.0Hz，1H)，3.10(m，2H)，4.20(m，2H)，6.59(m，2H)，6.68(m，1H)。

(3-2)化合物6-4还可以通过下述可选择方法合成。

将铁(1.05g)加入化合物6-3(510mg)于乙醇(18mD-氯化铵水溶液(1.8ml)中的溶液中，并且在搅拌下于87℃下加热该混合物0.5小时。使反应溶液恢复到室温并将其倒入乙酸乙酯中，通过过滤除去不溶物。在减压下浓缩滤液。在剩余物中加入水，接着用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水清洗并通过无水硫酸镁干燥。通过过滤除去干燥剂并且在减压下浓缩滤液，获得标题化合物(0.40g)。

(4)合成化合物8

将甲苯(3.00ml)加入5-氯吡啶-2-甲酸(5.86mg)以形成混悬液。在加入1滴N，N-二甲基甲酰胺后，加入亚硫酰氯(1.00ml)。将反应混合物加热到120℃，并且在同一温度下搅拌1小时。冷却到室温后，在减压下蒸发溶剂以获得5-氯吡啶-2-甲酰氯。将获得的酰氯悬浮于四氢呋喃(1.00ml)，并且在冰浴中将该混悬液滴入化合物6-4(10.0mg)于四氢呋喃(2.00ml)的溶液中。在相同温度下滴加吡啶(11.3μl)，然后将混合物升温到室温并且搅拌30分钟。在确认反应完成后，加入碳酸氢钠水溶液以终止反应。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。将获得的剩余物溶于二氯甲烷(2.00ml)。加入三氟乙酸(0.40ml)并且在室温下搅拌混合物3小时。在确认反应完成后，用乙醚稀释反应混合物。加入碳酸氢钠水溶液以终止反应。水层用乙酸乙酯萃取，有机层用无水硫酸镁干燥。在减压下蒸发溶剂，剩余物通过NH-硅胶柱色谱提纯获得标题化合物(7.8mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.95(ddd，J＝2.8，5.2，14.0Hz，1H)，2.02(ddd，J＝4.4，6.2，14.0Hz，1H)，2.11(ddd，J＝4.4，9.6，14.0Hz，1H)，2.24(ddd，J＝4.0，10.0，14.0Hz，1H)，3.08-3.20(m，2H)，4.24(dt，J＝2.8，11.2Hz，1H)，4.34(dt，J＝4.8，10.8Hz，1H)，6.85(d，J＝8.8Hz，1H)，7.50(d，J＝2.4Hz，1H)，7.57(dd，J＝2.4，8.8Hz，1H)，7.86(dd，J＝2.0，8.4Hz，1H)，8.24(dd，J＝0.8，8.4Hz，1H)，8.55(dd，J＝0.8，2.0Hz，1H)，9.70(s，1H)。

实施例2

合成(-)-N-[2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基]-5- 氯吡啶-2-甲酰胺(化合物9)

[式15]

利用Daicel Chemical Industries有限公司制造的CHIRALPAK^TMOD-H(2cm×25cm，流动相：己烷∶乙醇＝8∶2，流速：20ml/min)分离化合物8(6mg)。收集保留时间为22.5-25.0分钟的组分，然后通过NH-硅胶柱色谱提纯获得标题化合物(2.0mg；＞99％ee)。

ESI-MS；m/z 389[M⁺+H]。

实施例3

合成(-)-(6-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物10)

[式16]

利用Daicel Chemical Industries有限公司制造的CHIRALPAK^TMOD-H(2cm×25cm，流动相：己烷∶乙醇＝6∶4，流速：10ml/min)分离实施例1-(3)中获得的化合物6-4(0.57g)。收集具有28-34分钟保留时间的组分，获得标题化合物(0.22g，97％ee)。

实施例4

合成(-)-N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[13]噻嗪]-6-基)-5- 氰基吡啶-2-甲酰胺(化合物11)

[式17]

(1)合成5-氰基吡啶-2-甲酸甲酯(化合物9-2)

在搅拌下，在170℃下加热化合物9-1(2.8g)和氰化铜(3.6g)于NMP(30ml)的混合物1.5小时。室温下将水加入该反应溶液中，通过过滤除去不溶物。滤液用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水清洗，然后通过无水硫酸镁干燥。通过过滤除去干燥剂，并且在减压下浓缩滤液。所获得的粗产物通过硅胶柱色谱提纯，获得标题化合物(920mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：4.06(s，3H)，8.16(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，8.27(d，J＝8.0Hz，1H)，9.01(d，J＝2.0Hz，1H)。

(2)合成5-氰基吡啶-2-甲酸(化合物9-3)

在室温下搅拌化合物9-2(920mg)和5N氢氧化钠溶液(2.26ml)于乙醇(30ml)的溶液10分钟。在室温下将5N盐酸(5.2ml)加入该反应溶液，之后用乙酸乙酯萃取。萃取物通过无水硫酸镁干燥。通过过滤除去干燥剂，并且在减压下浓缩滤液，获得标题化合物(800mg)。

¹H-NMR(400MHz，DMSOd₆)δ(ppm)：8.18(d，J＝8.0Hz，1H)，8.51(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，9.12-9.18(m，1H)。

(3)合成{6-[(5-氰基吡啶-2-羰基)氨基]-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃 -4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-基}氨基甲酸叔丁酯(化合物9-4)

室温下，将PyBOP(74.5mg)加入到实施例3获得的化合物10(25.0mg)、N，N-二异丙基乙胺(0.0624ml)和5-氰基吡啶-2-甲酸(化合物9-3)(16.9mg)于二氯甲烷(5.0ml)的溶液中。该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应溶液倒入碳酸氢钠水溶液中，之后用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水清洗并且通过无水硫酸镁干燥。通过过滤除去干燥剂，并且在减压下浓缩滤液。粗产物通过硅胶柱色谱提纯获得标题化合物(35mg)。

ESI-MS；m/z 480[M⁺+H]。

(4)合成化合物11

将三氟乙酸(1.0ml)加入化合物9-4(35mg)于二氯甲烷(3.0ml)的溶液中，并且在室温下搅拌该反应溶液1.5小时。将该反应溶液倒入碳酸氢钠水溶液中，之后用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水清洗并且通过无水硫酸镁干燥。通过过滤除去干燥剂，并且在减压下浓缩滤液。粗产物通过NH-硅胶柱色谱提纯获得标题化合物(26.1mg)。

ESI-MS；m/z 380[M⁺+H]。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.90-2.15(m，3H)，2.24(ddd，J＝4.0，10.4，14.0Hz，1H)，3.05-3.2(m，2H)，4.25(dt，J＝3.2，10.8Hz，1H)，4.35(dt，J＝4.8，10.8Hz，1H)，6.86(d，J＝8.8Hz，1H)，7.50(d，J＝2.8Hz，1H)，7.58(dd，J＝2.8，8.8Hz，1H)，8.19(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，8.42(d，J＝8.0Hz，1H)，8.88(d，J＝2.0Hz，1H)，9.74(s，1H)。

实施例5

合成N-(2′-氨基-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-6-基)-5-三氟甲基吡啶-2-甲酰胺(化合物12)

[式18]

(1)合成{6-[(5-三氟甲基吡啶-2-羰基)氨基]-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃 -4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-基}氨基甲酸叔丁酯(化合物10-1)

室温下，将PyBOP(59.6mg)加入化合物10(20.0mg)、N，N-二异丙基乙胺(0.0499ml)和5-三氟甲基吡啶-2-甲酸(13.5mg)于二氯甲烷(3.0ml)的溶液中。在室温下搅拌该混合物1小时。将该反应溶液倒入碳酸氢钠水溶液中，之后用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水清洗并且通过无水硫酸镁干燥。通过过滤除去干燥剂，并且在减压下浓缩滤液。粗产物通过硅胶柱色谱提纯获得标题化合物(30mg)。

ESI-MS；m/z 523[M⁺+H]。

(2)合成化合物12

将三氟乙酸(0.857ml)加入化合物10-1(30mg)于二氯甲烷(3.0ml)的溶液中，并且在室温下搅拌该反应溶液1.5小时。将反应溶液倒入碳酸氢钠水溶液中，之后用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水清洗并且通过无水硫酸镁干燥。通过过滤除去干燥剂，并且在减压下浓缩滤液。粗产物通过NH-硅胶柱色谱提纯获得标题化合物(13.0mg)。

ESI-MS；m/z 423[M⁺+H]。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.90-2.16(m，3H)，2.24(ddd，J＝4.4，10.4，14.0Hz，1H)，3.06-3.22(m，2H)，4.25(dt，J＝2.8，11.2Hz，1H)，4.35(dt，J＝4.8，11.2Hz，1H)，6.86(d，J＝8.8Hz，1H)，7.53(d，J＝2.4Hz，1H)，7.58(dd，J＝2.4，8.8Hz，1H)，8.15(dd，J＝1.6，8.0Hz，1H)，8.42(d，J＝8.0Hz，1H)，8.87(s，1H)，9.80(s，1H)。

表3中描述的化合物依照与实施例5相同的方式合成。结构式和1H-NMR数据示于表3。

[表3]

表3

实施例6

合成6-(5-甲氧基吡啶-3-基)-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺(化合物21)

[式19]

(1)合成6-溴-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺(化合物 20)

室温下将溴(382mg)加入化合物1(560mg)于乙酸(12.0ml)的溶液中，接着搅拌30分钟。在确认原料消失后，通过将反应混合物加入到冰浴冷却下的10％氢氧化钠溶液中使其中和。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物通过硅胶柱色谱提纯，获得标题化合物(580mg)。

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：1.93(ddd，J＝3.0，5.0，14.1Hz，1H)，2.00-2.05(m，2H)，2.22(ddd，J＝4.1，10.3，14.1Hz，1H)，3.02-3.09(m，1H)，3.10-3.18(m，1H)，4.18-4.25(m，1H)，4.33(ddd，J＝4.4，4.7，11.3Hz，1H)，6.70(d，J＝8.6Hz，1H)，7.20-7.24(m，1H)，7.25(d，J＝2.4Hz，1H)。

(2)合成(6-溴-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-基)咪唑二碳酸二叔丁酯(化合物11-1)和(6-溴-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3] 噻嗪]-2′-基)碳酸叔丁酯(化合物11-2)

将化合物20(139mg)溶于二氯甲烷(15ml)中，并且加入二碳酸二叔丁酯(387mg)。然后，加入N，N-二甲基氨基吡啶(217mg)并且在室温下搅拌混合物3.5小时。在确认原料消失后，将反应混合物加入饱和氯化铵溶液中。用二氯甲烷萃取水层，用无水硫酸镁干燥有机层。在减压下蒸发溶剂，剩余物通过硅胶柱色谱提纯获得化合物11-1和11-2[(11-1)144mg，(11-2)52.3mg]。

化合物11-1

1H NMR(400MHz，甲醇-d4)(ppm)：1.59(s，18H)，1.87-1.98(m，2H)，2.06-2.17(m，2H)，2.37(td，J＝4.0，14.6Hz，1H)，3.21(td，J＝4.2，12.9Hz，1H)，3.45(dt，J＝3.6，12.9Hz，1H)，4.28-4.37(m，1H)，6.80(d，J＝8.7Hz，1H)，7.28(d，J＝2.4Hz，1H)，7.26(dd，J＝2.4，8.7Hz，1H)。

化合物11-2

1H NMR(400MHz，甲醇-d4)(ppm)：1.60(s，9H)，2.03-2.12(m，1H)，2.18-2.29(m，1H)，3.16-3.23(m，1H)，3.36-3.43(m，1H)，4.31-4.37(m，2H)，6.80(d，J＝8.7Hz，1H)，7.26(d，J＝2.4Hz，1H)，7.32(dd，J＝2.4，8.7Hz，1H)。

(3)合成化合物21

将3-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(14.9mg)加入化合物11-1(25mg)于N，N-二甲基甲醛(2ml)的溶液中。接着，加入1M碳酸氢钠溶液(0.12ml)和钯-三苯基膦(2.8mg)，并且在氮气氛、100℃下搅拌混合物12小时。在确认原料消失后，将水加入反应混合物。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物通过硅胶柱色谱提纯，获得标题化合物(8.6mg)。

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：2.11-2.26(m，2H)，2.37-2.53(m，2H)，3.13-3.29(m，2H)，3.92(s，3H)，4.27-4.36(m，1H)，4.40-4.47(m，1H)，6.93-6.98(m，1H)，7.36-7.44(m，3H)，8.23(b r.s.，1H)，8.37(b r.s.，1H)。

表4描述的化合物依照与实施例6-(3)相同的方式合成。结构式和1H-NMR数据示于表4。

[表4]

表4

实施例7

合成6-(2-氟吡啶-3-基)-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′- 胺(化合物24)

[式20]

将2-氟吡啶-3-硼酸(14.9mg)加入化合物11-2(26.3mg)于N，N-二甲基甲醛(0.95ml)的溶液中。接着，加入1M碳酸氢钠水溶液(0.14ml)和钯-三苯基膦(7.8mg)，并且在氮气氛、100℃下搅拌混合物12小时。在确认原料消失后，将水加入反应混合物中。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物通过硅胶柱色谱提纯，获得标题化合物(13.0mg)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：2.04-2.18(m，2H)，2.29-2.37(m，1H)，2.46(ddd，J＝4.0，10.7，14.4Hz，1H)，3.18-3.24(m，2H)，4.31(dt，J＝2.8，11.4Hz，1H)，4.44-4.47(m，1H)，6.95(d，J＝8.6Hz，1H)，7.24-7.26(m，1H)，7.36-7.42(m，2H)，7.88(ddd，J＝1.7，7.6，9.9Hz，1H)，8.15(dt，J＝1.7，4.6Hz，1H)。

实施例8

合成7-氟-6-(2-氟吡啶-3-基)-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪|-2′-胺(化合物26)

[式21]

(1)合成6-溴-7-氟-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3]噻嗪]-2′-胺(化合物25)

在室温下将溴(12.7mg)加入化合物6(20mg)于乙酸(1.0ml)的溶液中，接着搅拌30分钟。在确认原料消失后，通过将反应混合物加入碳酸氢钠水溶液中使其中和。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物25(14.4mg)不经进一步提纯直接用于下一步反应。

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：1.87-1.99(m，2H)，1.99-2.28(m，2H)，2.97-3.08(m，1H)，3.08-3.17(m，1H)，4.16-4.28(m，1H)，4.30-4.39(m，1H)，6.62(d，J＝9.7Hz，1H)，7.29(d，J＝7.8Hz，1H)。

(2)合成化合物26

将化合物25(14.4mg)溶于二氯甲烷(3.0ml)，并且加入二碳酸二叔丁酯(47.5mg)。然后，加入N，N-二甲基氨基吡啶(26.5mg)，并且在室温下搅拌混合物6小时。在确认原料消失后，将反应混合物加入饱和氯化铵溶液中。用二氯甲烷萃取水层，用无水硫酸镁干燥有机层。在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物13-1(17mg)不经进一步提纯直接用于下一步反应。

将2-氟吡啶-3-硼酸(7.2mg)加入在上述反应中获得的粗产物13-1(17mg)于N，N-二甲基甲醛(0.5ml)的溶液中。接着，加入1M碳酸氢钠溶液(0.05ml)和钯-三苯基膦(3.8mg)，并且在氮气氛、100℃下搅拌该混合物一夜。在确认原料消失后，将水加入反应混合物中。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物通过硅胶柱色谱提纯，获得标题化合物(1.7mg)。

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：2.00-2.18(m，2H)，2.26-2.51(m，2H)，3.14-3.25(m，2H)，4.27-4.36(m，1H)，4.42-4.48(m，1H)，6.70(d，J＝11.1Hz，1H)，7.22(d，J＝9.1Hz，1H)，7.25-7.34(m，1H)，7.86-7.92(m，1H)，8.21(brd，J＝4.9Hz，1H)。

实施例9

合成6-[(2-氨基吡啶-3-基)乙炔基]-2，3，5′，6′-四氢螺[苯并吡喃-4，4′-[1，3] 噻嗪]-2′-胺(化合物27)

[式22]

(1)合成3-[(三甲基甲硅烷基)乙炔基]吡啶-2-胺(化合物14-2)

将化合物14-1(200mg)溶于四氢呋喃(1.2ml)和三乙胺(7ml)的混合溶剂中。加入乙炔基(三甲基)硅烷(227mg)、碘化亚铜(I)(8.8mg)和二氯钯-三苯基膦(32.5mg)，并且将混合物密封在管内。该混合物在90℃下搅拌22小时后，将反应混合物加入水中以终止反应。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物通过硅胶柱色谱提纯，获得标题化合物(244mg)。

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：0.26(s，9H)，5.08(b r.s.，2H)，6.62(br.s.，1H)，7.54d，J＝7.2Hz，1H)，8.05(b r.s.，1H)。

(2)合成3-乙炔基吡啶-2-胺(化合物14-3)

将化合物14-2(244mg)溶于甲醇(15.0ml)中。加入碳酸钾(212.6mg)并且在室温下搅拌混合物2小时。将反应混合物加入水中。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物通过硅胶柱色谱提纯，获得标题化合物(93.5mg)。

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：3.42(s，1H)，5.08(b r.s.，2H)，6.63(dd，J＝5.2，7.4Hz，1H)，7.58(dd，J＝7.4，1.6Hz，1H)，8.08(br.s.，1H)。

(3)合成化合物27

将化合物14-3(30mg)和实施例11-1中获得的化合物20(40mg)溶于四氢呋喃(2ml)和三乙胺(2ml)的混合溶剂中。加入碘化亚铜(I)(1.2mg)和二氯钯-三苯基膦(4.5mg)，将混合物密封在管内并且在90℃下搅拌22小时。将反应混合物加入水中以终止反应。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂。所获得的粗产物通过NH-硅胶柱色谱和NH-硅胶薄层色谱(TLC)提纯获得标题化合物(12.5mg)。

ESI-MS；m/z 351[M⁺+H]

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：1.92-2.12(m，3H)，2.25(ddd，J＝4.0，10.5，14.2Hz，1H)，3.02-3.10(m，1H)，3.11-3.20(m，1H)，4.26(td，J＝2.9，11.2Hz，1H)，4.38(dt，J＝4.6，11.2Hz，1H)，5.05(br.s.，2H)，6.63(dd，J＝5.0，7.5Hz，1H)，6.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.29(dd，J＝2.0，8.4Hz，1H)，7.34(d，J＝2.0Hz，1H)，7.57(dd，J＝1.6，7.5Hz，1H)，7.97-8.05(m，1H)。

实施例10

合成2，3，5′，6′-四氢螺[1，3-噻嗪-4，4′-硫代苯并吡喃]-2-胺(化合物28)

[式23]

(1)合成(2E)-2-(2，3-二氢-4H-硫代苯并吡喃-4-亚基)乙基异硫脲 (carbamimidothioate)(化合物15-3)

将氯化锌(46.1mg)加入乙烯基氯化镁(在四氢呋喃中的1.6M溶液；2.75ml)中，并且在室温下搅拌混合物1小时。将混合物冷却到0℃，滴加化合物15-1(555mg)于四氢呋喃(2.0ml)的溶液。在相同温度下搅拌该混合物5小时。在确认原料消失后，将氯化铵溶液加入反应混合物以终止反应。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，并且在减压下蒸发溶剂获得粗产物(665mg)。将粗产物溶于乙酸(5.0ml)，然后加入硫脲(334mg)。在室温下搅拌一夜后，通过用棉塞过滤除去不溶物，并且将滤液滴入乙醚中。将混合物冷却到0℃并且搅拌。用玻璃滤器除去固体，并且在减压下蒸发滤液中的溶剂。将乙酸乙酯加入剩余油中，接着用碳酸氢钠水溶液中和。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥有机层。在减压下蒸发溶剂的过程中产生固体。停止浓缩，并且加入己烷与乙醚的混合溶剂。所产生的固体通过桐山漏斗收集并且用乙醚清洗。获得的固体经干燥得到标题化合物(66.5mg)。

¹H NMR(400MHz，MeOD)(ppm)：2.96-3.01(m，2H)，3.05-3.10(m，2H)，4.08(d，J＝8.0Hz，2H)，6.09(t，J＝8.0Hz，1H)，7.07-7.20(m，3H)，7.50(dd，J＝1.3，7.9Hz，1H)。

(2)合成化合物28

在冰浴中，将化合物15-3(50mg)溶于三氟乙酸(0.46ml)，然后向其中加入三氟甲磺酸(0.1ml)。混合物在相同温度下搅拌0.5小时，然后在室温下搅拌3.0小时。在确认原料消失后，通过将反应混合物加入冰浴中冷却的碳酸氢钠水溶液使其中和。用乙酸乙酯萃取水层，并且用盐水清洗有机层。有机层通过无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。剩余物先后通过NH-硅胶柱色谱和硅胶薄层色谱提纯，获得标题化合物(1.6mg)。

ESI-MS；m/z 251[M⁺+H]

1H NMR(400MHz，CDCl₃)(ppm)：1.87-1.95(m，1H)，2.24-2.35(m，3H)，2.92-2.98(m，2H)，3.07-3.13(m，1H)，3.14-3.24(m，1H)，7.07-7.12(m，1H)，7.13-7.15(m，2H)，7.19(brd，J＝1.3Hz，1H)。

试验例1

来自大鼠胎脑的神经元培养物中Aβ肽的定量

(1)大鼠初级神经元培养物

由胚胎18日龄Wistar大鼠(Charles River Japan，横滨，日本)的大脑皮层制备初级神经元培养物。具体而言，以无菌方式从乙醚麻醉的妊娠大鼠中取胚胎。从胚胎中分离脑并且浸入冰冷的L-15培养基(例如Invitrogen公司Cat#11415-064，Carlsbad，CA，美国或SIGMA L1518)中。在立体显微镜下从分离的脑中采集大脑皮层。在37℃，用包含0.25％胰蛋白酶(Invitrogen公司Cat#15050-065，Carlsbad，CA，美国)和0.01％DNase(Sigma D5025，St.Louis，MO，美国)的酶溶液将采集的大脑皮层碎片物进行酶处理30分钟，以分散细胞。此处通过将灭活的马血清加入到该溶液中终止酶反应。将酶处理的溶液以1,500rpm离心5分钟，以除去上清液。将5-10mL培养基加入到得到的细胞团中。使用补充了2％B27补充物(Invitrogen公司Cat#17504-044，Carlsbad，CA，美国)、25μM 2-巯基乙醇(2-ME，WAKO Cat#139-06861，Osaka，日本)、0.5mM L-谷氨酰胺(Invitrogen公司Cat#25030-081，Carlsbad，CA，美国)和抗生素-抗真菌剂(Invitrogen公司Cat#15240-062，Carlsbad，CA，美国)的Neurobasal培养基(Invitrogen公司Cat#21103-049，Carlsbad，CA，美国)作为培养基(Neurobasal/B27/2-ME)。然而，未补充2-ME(Neurobasal/B27)的上述Neurobasal培养基用于测定。通过向细胞团中加入培养基并温和抽吸而再分散细胞。通过40-μm尼龙滤网(Cell Strainer，Cat#35-2340，BectonDickinson Labware，Franklin Lakes，NJ，美国)过滤细胞分散液，以除去剩余的细胞团，由此得到神经元细胞混悬液。用培养基稀释神经元细胞混悬液，然后以100μL/孔的体积、以5×10⁵个细胞/cm²的初始细胞密度在预包被了聚-L或D-赖氨酸(Falcon Cat#35-3075，Becton DickinsonLabware，Franklin Lakes，NJ，美国，用聚-L-赖氨酸使用如下所述的方法包被，或BIOCOAT^TM细胞环境聚-D-赖氨酸96-孔培养板，Cat#35-6461，Becton Dickinson Labware，Franklin Lakes，NJ，美国)的96-孔聚苯乙烯培养板上铺板。如下进行聚-L-赖氨酸包被。以无菌方式用0.15M硼酸盐缓冲液(pH 8.5)制备100μg/mL聚-L-赖氨酸(SIGMA P2636，St.Louis，MO，美国)溶液。将100μg/孔的该溶液加入到96-孔聚苯乙烯培养板上，在室温孵育一个或多个小时或在4℃孵育过夜或更长时间。然后用无菌水将包被的96-孔聚苯乙烯培养板清洗4次或更多次，然后干燥或用例如无菌PBS或培养基冲洗，用于细胞铺板。在37℃下、在5％CO₂-95％空气中将铺板的细胞在培养箱中培养1天。然后用新鲜的Neurobasal/B27/2-ME培养基替换全部培养基，然后将细胞再培养3天。

(2)添加化合物

按照下述在培养的第4天将药物加入到培养板中。从各孔中除去全部培养基，向其中加入180μL/孔的不含2-ME但含2％B-27(Neurobasal/B27)的Neurobasal培养基。用Neurobasal/B27将测试化合物在二甲亚砜(下文缩写为DMSO)中的溶液稀释至高于终浓度10-倍的浓度。向孔中加入20μL/孔的稀释液，与培养基充分混合。最终的DMSO浓度是1％或更低。对照组中仅加入DMSO。

(3)取样

在添加化合物后将细胞培养3天，收集全部培养基。将得到的培养基用作ELISA样品。用于Aβx-42的ELISA测定的样品不稀释，用于Aβx-40的ELISA测定的样品用ELISA试剂盒提供的稀释剂稀释5倍。

(4)细胞存活率评价

通过MTT测定法、根据下列操作评价细胞存活率。在收集培养基后，将100μL/孔的预温热培养基加入到各孔中。此外，将8μL/孔的8mg/mLMTT(SIGMA M2128，St.Louis，MO，美国)在D-PBS(-)(达尔贝科磷酸缓冲盐水，SIGMA D8537，St.Louis，MO，美国)中的溶液加入到各孔中。将96-孔聚苯乙烯培养板在培养箱中在37℃、在5％CO₂-95％空气中孵育20分钟。向其中加入100μL/孔的MTT裂解缓冲液，在培养箱中在37℃、在5％CO₂-95％空气中将MTT甲

晶体充分溶于缓冲液。然后测定各孔中在550nm的吸光度。如下制备MTT裂解缓冲液。将100g SDS(十二烷基硫酸钠(月桂硫酸钠)、WAKO 191-07145，Osaka，日本)溶于250mL N，N-二甲基甲酰胺(WAKO 045-02916，Osaka，日本)与250mL蒸馏水的混合溶液。再将各350μL的浓盐酸和乙酸加入到该溶液中，以使该溶液的最终pH约4.7。

在测定时，将不含铺板细胞和仅含有培养基和MTT溶液的孔设定为背景(bkg)。分别将测定值应用于下式，包括从其中扣除bkg值。因此，计算与对照组(不用药物处理的组，CTRL)的比例(％CTRL)，以比较和评价细胞存活活性。

％CTRL＝(A550_样品-A550_bkg)/(A550_CTRL-bkg)×100

(A550_样品：样品孔在550nm的吸光度，A550_bkg：背景孔在550nm的吸光度，A550_CTRL：对照组孔在550nm的吸光度)

(5)AβELISA

来自Wako Pure Chemical Industries有限公司的人/大鼠β淀粉样蛋白(42)ELISA试剂盒Wako(#290-62601)和人/大鼠β淀粉样蛋白(40)ELISA试剂盒Wako(#294-62501)用于AβELISA。根据制造商建议的方案进行AβELISA(方法如相关参考文献所述)。然而，使用大鼠β-淀粉样蛋白肽1-42和大鼠β-淀粉样蛋白肽1-40(Calbiochem，#171596[Aβ₄₂]，#171593[Aβ₄₀])生成Aβ校正曲线。结果以培养基中Aβ42浓度下降的IC50值(μM)在下表5中给出。

[表5]

从表5的结果明显看出，本发明的化合物证明具有减少Aβ42产生的效果。

[工业实用性]

本发明的通式(I)的化合物或其药学可接受的盐具有减少Aβ42产生的效果。因此，本发明可以特别提供用于Aβ导致的神经变性疾病例如阿尔茨海默型痴呆或唐氏综合征的预防或治疗剂。

Claims

1.式(I)表示的化合物:

或其药学可接受的盐，其中

环A为苯基；

L为单键、式-C(=O)NR^L-表示的基团，其中R^L为氢原子；

环B为C_6-10芳基或5-到6-元杂芳基；

X为亚乙基；

Y为氧原子或硫原子；

Z为单键；

R¹和R²各自独立地为氢原子或卤素原子；

R³为氢原子；

R⁴和R⁵为氢原子；

R⁶、R⁷和R⁸各自独立地为氢原子、卤素原子或氰基，或各自可具有1-3个选自取代基组α的取代基的C_1-6烷基或C_1-6烷氧基；并且

n为2；

取代基组α：氢原子和卤素原子。

2.如权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Y为氧原子。

3.如权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Y为硫原子。

4.如权利要求1-3中任意一项所述的化合物或其药学可接受的盐，其中L为式-C(=O)NR^L-表示的基团，其中R^L为氢原子。

5.如权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐，其中所述化合物选自下列化合物：

1)(-)-N-(2′-氨基-2,3,5′,6′-四氢螺[苯并吡喃-4,4′-[1,3]噻嗪]-6-基)-5-氰基吡啶-2-甲酰胺，

2)N-(2′-氨基-2,3,5′,6′-四氢螺[苯并吡喃-4,4′-[1,3]噻嗪]-6-基)-5-三氟甲基吡啶-2-甲酰胺，

3)N-(2′-氨基-2,3,5′,6′-四氢螺[苯并吡喃-4,4′-[1,3]噻嗪]-6-基)-3,5-二氟吡啶-2-甲酰胺，

4)N-(2’-氨基-2,3,5’,6’-四氢螺[苯并吡喃-4,4’-[1,3]噻嗪]-6-基)-5-溴嘧啶-2-甲酰胺，

5)N-(2’-氨基-2,3,5’,6’-四氢螺[苯并吡喃-4,4’-[1,3]噻嗪]-6-基)-5-溴吡啶-2-甲酰胺。

6.药物组合物，其包含权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐作为活性成分。

7.如权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐在制备用于抑制淀粉样蛋白-β蛋白的产生的药物组合物中的用途。

8.如权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐在制备用于抑制β-位点淀粉样蛋白-β前体蛋白裂解酶1的药物组合物中的用途。

9.如权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐在制备用于治疗神经变性疾病的药物组合物中的用途。

10.如权利要求9所述的用途，其中所述的神经变性疾病是阿尔茨海默型痴呆或唐氏综合征。