CN102083408A

CN102083408A - 包含源自微生物席的胞外多糖的化妆品组合物及其应用

Info

Publication number: CN102083408A
Application number: CN2009801223837A
Authority: CN
Inventors: E·卢茵; 桑德兰·布里阿特; 凯瑟琳·韦西耶; 马丁·博利厄; 帕特里斯·迪奥内; 洛朗·里歇; 格扎维埃·莫佩
Original assignee: Innovactiv Inc
Current assignee: Lucas Meyer Cosmetics Canada Inc
Priority date: 2008-04-15
Filing date: 2009-04-15
Publication date: 2011-06-01
Also published as: PL2265249T3; US20180256627A1; WO2009127057A1; US11752168B2; KR101537834B1; AU2009238172A1; ES2700986T3; BRPI0910937A2; MX341639B; CA2720542C; MX2010011334A; AU2009238172A2; CA2720542A1; KR20100136537A; US20210330691A1; US11040058B2; JP2011516584A; EP2265249B1; JP5721619B2; EP2265249A1

Abstract

本发明公开了包含源自微生物席的至少一种胞外多糖(EPS)的皮肤护理组合物，其中所述EPS的浓度为所述组合物的约0.001％w/w至约1.5％w/w。优选所述EPS源自从发现于法属波利尼西亚的微生物席分离的微生物。所述组合物可用于通过改变皮肤代谢并改进水合而减少和预防皮肤老化征象和环境损伤。

Description

包含源自微生物席的胞外多糖的化妆品组合物及其应用

相关申请的交叉引用

本申请要求根据美国专利法35 U.S.C.§119(e)的规定、于2008年4月15日提交的美国临时申请No.61/044,992的优先权。上述所有文献通过引用并入本文。

关于联邦资助的研究或开发的声明

无。

技术领域

一般而言，本发明涉及化妆品组合物及其使用方法。

背景技术

皮肤是外界环境的物理屏障。皮肤病症(skin condition)就是由此屏障性质的改变以及对此屏障的实际损害而导致的。

由基底膜分隔的表皮和真皮构成了皮下组织上的皮肤覆盖层。表皮是皮肤的最外层，并且提供了皮肤的抵抗性和不透性。这一层的改变将对皮肤的感知质量产生不利影响，并最终导致皮肤老化。皮肤的中间层，即真皮，是由分散在称为细胞外基质(ECM)的复杂介质中的细胞(主要为成纤维细胞)构成的结缔组织。该基质由胶原和弹性蛋白纤维、糖蛋白(纤连蛋白和层粘连蛋白)和蛋白多糖组成。细胞外基质充当细胞的结构，允许组织和器官附着在多细胞生物体中。

皮肤老化是导致皮肤进行性变化的复杂现象。皮肤老化产生于两个过程：(1)内在过程，相当于年代衰老；和(2)主要由接触环境胁迫的有害作用而引起的外在过程。遗传、UV暴露、气候因素(恶劣气候/风/冷/暖)、污染(化学品、自由基、污染物、氧化氮、金属)、饮酒或吸烟是参与皮肤老化的因素。

尽管不同类型的细胞共存于表皮中，但是角质形成细胞(keratinocyte)构成了该层的大部分，并在由粘膜皮肤屏障提供的抵抗性中发挥作用。其参与极精密的分化和成熟程序，这涉及到表皮层和真皮部分之间的大量相互作用。这些细胞的核心活性是合成角蛋白，角蛋白占表皮中所有蛋白质的接近90％。邻近真皮的底部细胞层是可增殖的基底细胞。随着细胞成熟，它们向皮肤外层迁移，从而导致细胞的终末分化。在成熟过程中，细胞的生理学、化学组成、形状和定位发生变化。当细胞达到皮肤顶层，即角质层时，细胞被称作角质细胞(corneocyte)，并且不再是活细胞。角质细胞没有细胞核和细胞结构。角质细胞是扁平的六角形细胞，其中充满了由蛋白包膜和脂质包围的保水角蛋白。细胞的形状和角蛋白的定位提高了角质层的强度。堆叠的角质细胞有10-30层。这些细胞通过称为桥粒的蛋白质桥保持彼此连接。细胞外间隙中的细胞由堆叠的脂双层包围。所得结构是皮肤的自然物理屏障和保水屏障。

在成熟的过程中，向角质层迁移的活细胞开始将蛋白质团聚(clump)成颗粒。这些颗粒存在于皮肤的颗粒细胞层中，并充满了称为丝聚蛋白(filaggrin)的蛋白质。丝聚蛋白与颗粒细胞内的角蛋白复合。此复合物保护丝聚蛋白免于被蛋白酶降解。随着变性细胞向皮肤外层的迁移，丝聚蛋白-角蛋白复合物被酶降解。丝聚蛋白位于角质细胞外侧，而保水角蛋白保留在角质层的角质细胞内侧。当皮肤含水量下降时，角质层中的特异蛋白酶被激活，从而将丝聚蛋白进一步降解成游离氨基酸。这些游离氨基酸与其他生理化学物质，例如乳酸、尿素和盐一起存在于角质层中。这些化学物质被统称为“天然保湿因子”，并通过吸水性和保水性来负责保持皮肤水分和柔韧性。角质层的含水量通常为约30％。由丝聚蛋白经蛋白酶降解成氨基酸仅发生在皮肤干燥的情况下，以控制皮肤的渗透压和保水量。转谷氨酰胺酶(transglutaminase)是参与角质层形成的酶，并且是角质形成细胞分化成角质细胞的特异标志物。

脱皮(desquamation)是保持皮肤光滑的另一个重要因素。脱皮是溶解角质细胞之间的蛋白质连接，即桥粒，并最终使细胞脱落的酶促过程。与通过丝聚蛋白的蛋白酶降解而产生氨基酸相反，蛋白酶负责在充分水合角质层的存在下的脱皮功能。这些酶位于细胞之间。在没有水的情况下，细胞不会自然脱落，其结果是产生加厚、干燥、粗糙、鳞状的皮肤。

解释天然皮肤屏障如何保持皮肤水分和柔软性所必需的最后一个因素是细胞间脂质的功能。这些脂质形成围绕角质层中角质细胞的堆叠双层(多层)，并将水引入此结构中。所述脂质来自于皮肤颗粒层中细胞的降解(与蛋白颗粒的起源类似)。称为层板颗粒(lamellaer granule)的特殊脂质结构被释放到降解细胞的细胞外间隙中。还从之前的细胞膜释放脂质。所释放的这些脂质包括胆固醇、游离脂肪酸和鞘脂。源自层板颗粒的一种鞘脂，即神经酰胺，是负责产生堆叠脂质结构的主要脂质成分之一。这些脂质将水分子固定在其亲水(吸水)区域中。围绕角质细胞的新形成的堆叠脂质提供了防止角质层外面的水通过以及防止天然保湿因子浸出皮肤表面层的不透性屏障。脂质层保持水分，并包围角质细胞以提供渗透性屏障。细胞间脂质与包含蛋白和天然保湿因子的角质细胞共同作用，以提供对抗水分流失的有效屏障，并保持水分以维持皮肤的弹性。所述保护力保护皮肤免于干燥和环境侵袭。细胞间脂质在40岁后急剧减少，导致对干燥皮肤病症更加敏感。

与刺激物的接触损害了角质层的屏障功能，并降低了其保护皮肤对抗环境胁迫(例如，紫外辐射、传染原等)的能力。反复且长期地接触环境刺激物导致皮肤蛋白变性，脂质片层瓦解，保护性细胞间脂质消除，天然保湿因子损失，以及细胞间粘附下降。这些损伤还造成负责角质细胞脱落的酶的功能损失。由于接触污染、严寒、日晒、风吹、低湿度或化学试剂而使这些问题被强化。刺激物是能够在足够的浓度下接触足够长的时间时，产生细胞损伤的任何物质。损伤的严重性取决于这些刺激因子的类型和接触强度。还存在使受损皮肤对外界因素敏感的内源因素。这些因素包括患有活动性皮肤病，例如银屑病、湿疹，遗传性干性皮肤病症，之前的皮肤病病史，敏感性皮肤和/或较大的年龄。

UV暴露造成表皮和真皮损伤。日光UVB(290-315nm)主要影响表皮，而UVA(315-400nm)主要影响真皮。对UV暴露导致的组织变化的详细研究显示皮肤加厚，弹性损失以及免疫功能下降。慢性UV辐射导致真皮的生物力学性质变化，从而导致出现皱纹。光化学辐射以不同的水平影响表皮和真皮。弹性蛋白酶(elastose)过程的触发对应于真皮上层区域中异常组织的产生，这是UVB慢性作用的明显特征。这种新组织的特征在于：异常弹性纤维的增生，以及受损纤维的出现并伴随弹性蛋白周边微纤维平行结构的损失(KLINGMAN LH，J Invest.Dermatol 1985-84-272-6)。

此过程与纤连蛋白的纤维组成增加，以及不同于弹性蛋白的纤维状化合物的增加相关联。此类组织的形成造成真皮物理化学性质的损失。由UVB改变的胶原纤维表现为可见的密致束。光能被DNA直接吸收的UVB辐射主要导致嘧啶碱基的变化。

因此，需要开发用于预防和/或治疗皮肤老化征象(sign)和其他皮肤病症和障碍(disorder)的新方法。

发明内容

更具体地，本发明提供了包含源自微生物席(microbial mat)的至少一种胞外多糖(EPS)的皮肤护理组合物，其中EPS的浓度为所述组合物的约0.001％至约15％(w/w)。

在具体实施方式中，所述微生物席是海洋微生物席。在另一个具体实施方式中，通过发酵分离自所述微生物席的微生物产生至少一种EPS。在另一个具体实施方式中，所述至少一种EPS包含至少两种EPS，每种EPS源自从微生物席分离的不同微生物。在另一个具体实施方式中，所述至少一种EPS包含至少两种EPS，每种EPS源自不同的微生物席。在另一个具体实施方式中，微生物席来自法属波利尼西亚(French Polynesia)。在另一个具体实施方式中，所述至少一种EPS是经化学或物理修饰的。在另一个具体实施方式中，所述至少一种EPS是经解聚的。在另一个具体实施方式中，所述至少一种EPS是天然EPS。在另一个具体实施方式中，所述至少一种EPS是被硫酸化(sulfated)、乙酸化(acetated)、乳酸化(lactated)、琥珀酸化(succinated)或丙酮酸化(pyruvated)的。

在另一个具体实施方式中，本发明的组合物用于抗老化皮肤护理。在另一个具体实施方式中，本发明的组合物用于日晒后皮肤护理。在另一个具体实施方式中，本发明的组合物用于防晒皮肤护理。在另一个具体实施方式中，本发明的组合物用于预防或减少至少一种皮肤老化征象(skin aging sign)。

在具体实施方式中，所述组合物用于改进水合。在另一个具体实施方式中，所述组合物用于改进角质层的形态。在另一个具体实施方式中，所述组合物用于改进皮肤的纹理(microrelief)。在另一个具体实施方式中，所述组合物用于改进脱皮。在另一个具体实施方式中，所述组合物用于改进角质形成细胞的分化。在另一个具体实施方式中，所述组合物用于减少皮肤表面的细菌粘附。在另一个具体实施方式中，所述菌株是表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)或金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。在另一个具体实施方式中，所述组合物用于刺激衰老的人成纤维细胞产生透明质酸。在另一个具体实施方式中，所述组合物用于刺激表皮的总脂质合成。在另一个具体实施方式中，所述组合物用于刺激参与皮肤脱皮的至少一个基因的表达。在另一个具体实施方式中，所述基因是激肽释放酶5、激肽释放酶6(神经脉蛋白，neurosin)或角质层胰凝乳蛋白酶。在另一个具体实施方式中，所述组合物用于刺激参与角质形成细胞分化的至少一个基因的表达。在另一个具体实施方式中，所述基因是丝聚蛋白、兜甲蛋白(loricrin)或总苞蛋白(involucrin)。在另一个具体实施方式中，所述组合物用于刺激转谷氨酰胺酶的表达。在另一个具体实施方式中，所述组合物用于减少受刺激皮肤细胞的胞内脂质过氧化物。

另一方面，本发明提供了源自微生物席的至少一种胞外多糖(EPS)在制造皮肤护理组合物中的应用。在本发明应用的一个具体实施方式中，所述皮肤护理组合物是抗老化皮肤护理组合物、日晒后皮肤护理组合物或防晒皮肤护理组合物。

另一方面，本发明提供了源自微生物席的至少一种胞外多糖(EPS)在预防或减少至少一种皮肤老化征象中的应用。

在具体实施方式中，所述应用是用于改进水合。在另一个具体实施方式中，所述应用是用于改进角质层的形态。在另一个具体实施方式中，所述应用是用于改进皮肤纹理。在另一个具体实施方式中，所述应用是用于改进脱皮。在另一个具体实施方式中，所述应用是用于改进角质形成细胞的分化。在另一个具体实施方式中，所述应用是用于减少皮肤表面的细菌粘附。在另一个具体实施方式中，所述菌株是表皮葡萄球菌或金黄色葡萄球菌。在另一个具体实施方式中，所述应用是用于刺激衰老的人成纤维细胞产生透明质酸。在另一个具体实施方式中，所述应用是用于刺激表皮的总脂质合成。在另一个具体实施方式中，所述应用是用于刺激参与皮肤脱皮的至少一个基因的表达。在另一个具体实施方式中，所述基因是激肽释放酶5、激肽释放酶6或角质层胰凝乳蛋白酶。在另一个具体实施方式中，所述应用是用于刺激参与角质形成细胞分化的至少一个基因的表达。在另一个具体实施方式中，所述基因是丝聚蛋白、兜甲蛋白或总苞蛋白。在另一个具体实施方式中，所述应用是用于刺激转谷氨酰胺酶的表达。在另一个具体实施方式中，所述应用是用于减少受刺激皮肤细胞的胞内脂质过氧化物。

另一方面，本发明提供了用于预防或减少受试者的皮肤老化征象的方法，所述方法包括向所述受试者的皮肤施用包含有效量的源自微生物席的至少一种胞外多糖(EPS)的组合物，从而预防或减少所述皮肤老化征象。

通过阅读下文对特定实施方案以仅仅是举例的方式给出的非限制性描述并参考附图，本发明的其它目的、优点和特征将变得更加清楚。

附图说明

在附图中：

图1是在与污染物接触后第5天时，没有EPS处理(左下图)和经EPS处理(右图)的外植体的图片；

图2显示了在没有处理的情况下，在3小时后，未脱脂外植体(non-delipidated explant)的丝聚蛋白标记；

图3显示了在没有处理的情况下，在3小时后，脱脂外植体(delipidated explant)的丝聚蛋白标记；

图4显示了在EPS处理(Pol-6)3小时后，脱脂外植体的丝聚蛋白标记；

图5显示了在EPS处理(Pol-6和Pol-3)3小时后，脱脂外植体的丝聚蛋白标记；

图6显示了在EPS处理(Pol-6和Pol-8)3小时后，脱脂外植体的丝聚蛋白标记；

图7显示了在没有处理的情况下，在3小时后，未脱脂外植体的转谷氨酰胺酶标记；

图8显示了在没有处理的情况下，在3小时后，脱脂外植体的转谷氨酰胺酶标记；

图9显示了在EPS处理(Pol-6)3小时后，脱脂外植体的转谷氨酰胺酶标记；

图10显示了高水合皮肤(上图)至非常干燥的皮肤(下图)的形态的图片；

图11显示了在EPS处理前后的皮肤表层水合状态的图片；

图12显示了在安慰剂处理前后的皮肤表层水合状态的图片；

图13分别显示了图11和图12的EPS和安慰剂处理之间水合状态的差异；

图14显示了在EPS处理前后的皮肤纹理状态的图片；

图15显示了在安慰剂处理前后的皮肤纹理状态的图片；和

图16分别显示了图14和图15的EPS和安慰剂处理之间水合状态的差异。

具体实施方式

微生物席形成于海岸区发现的多种不同位置，例如沙滩、湿地、三角洲和河口、盐田和环礁湖。这些独特的生态系统通常由不同微生物形成而产生的垂直层叠的粘性层组成。其经历了温度、盐度、酸度和UV照射的极端变化。大多数细菌细胞被主要由多糖构成的粘性外层包围。这些层不同程度地与细胞表面相连。多糖也可存在于培养介质中。这些类型的多糖被称作胞外多糖(EPS)(Gautret P，Trichet J Automicrites in modern cyanobacterial stromatolite deposits of Rangiroa，Tuamotu Archipelago，French Polynesia Biochemical parameters underlaying their formation.2005.Sedimentary Geology178 55-73；Mao Che L，

S，Bothorel V，Guezennec M，Rougeaux H，Guezennec J，Deslandes E，Trichet J，Matheron R，Le Campion T，Payri C，and Caumette P Physical，chemical，and microbiological characteristics of microbial mats(KOPARA)in the South Pacific atolls of French Polynesia.2001.Can.J.Microbiol 47 994-101；Richert L，Golubic S，Le Guédès R，Ratiskol J1 Payri C，Guezennec J.2005.Characterization of Exopolysaccharides Produced by Cyanobacteria Isolated from Polynesian Microbial Mats，Current Microbiology，51：379-384；Richert L，Golubic S，Le Guédès R，HervéA，Payri C Cyanobacterial populations that build′kopara′microbial mats in Rangiroa，Tuamotu Archipelago，French Polynesia European.2006.Journal of Phycology 41(3)：259-279)。

在法属波利尼西亚，微生物席生长在社会群岛(Society Archipelago)中一些高岛的环礁和小岛(motu)的珊瑚礁上。其厚度取决于其位置和环境条件，并可在几毫米到几十厘米的范围。在土阿莫土群岛(Tuamotu Archipelago)，这些微红且凝胶状的微生物席被称作“Kopara”。许多年前，这种资源在食物不足时被食用；在西太平洋中部和北部的一些群岛，其似乎仍被用作饲料。其还被用作创愈贴(healing plaster)。由于其某些性质，特别是营养和医药性质，Kopara可在多个领域引起兴趣，例如医药和与医药相关的领域(抗菌和愈合性质)，食品工业(作为染色剂使用的类胡萝卜素)和土壤学(稳定剂)。

无论发现在何种类型的水池中，Kopara的结构都非常相似；其由垂直层叠的微生物席构成。与大多数微生物席类似，主要由以其官能团为特征的某些微生物构成：蓝细菌(席藻属(Phormidium)，以及双歧藻属(Scytonema)、裂须藻属(Schizothrix)和绿球藻目(Chlorococcales))，光合硫细菌，例如紫硫细菌(Chromatium)和荚硫菌(Thiocapsa)，红色无硫细菌(PNSB，包括红螺菌属(Rhodospirillum)和红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)/红菌属(Rhodobium)/芽绿菌属(Blastochloris))和硫酸盐还原菌(主要为脱硫弧菌属(Desulfovibrio))。

文献中描述了这些物种的一部分，尽管这些物种中的大部分(不是病原体)属于已知的种属，但其中某些物种仍然是新的。现已发现在极端条件下生存并繁殖的某些细菌能够在实验室培养条件下生长，合成多种分子并将其分泌到培养基中。

更确切地，本发明涉及由源自微生物席的细菌分泌的EPS在化妆品和皮肤医学领域中的有利性质。

这些EPS是高分子量(通常100,000道尔顿至大于约5,000,000道尔顿)的聚合物。它们由多种中性或酸性糖链组成。已知某些EPS是分枝的，但其他结构仍不清楚。

以下实例中显示了由微生物席分离的九种EPS(Pol-1、Pol-2至Pol-9)在刺激脱皮和改进皮肤屏障功能，同时保持水合方面的能力。这些EPS在化学方面各不相同，是通过发酵源自法属波利尼西亚的微生物席的九种不同细菌而获得的。下表I中给出了其中每种EPS的特性。

表I

以下表II和表III提供了EPS Pol-3和Pol-6中各种糖的摩尔比例，对于中性糖以葡萄糖＝10.0为基础，对于酸性糖，以葡萄糖醛酸＝10.0为基础。

表II

表III

根据HPLC和Dionex的测定，没有在Pol-5的糖部分上检测到取代基。通过气相色谱测定单糖的比例。D-葡萄糖：17.2％(摩尔比：3.2)；D-半乳糖：15.3％(MR：2.9)；D-甘露糖：2.6％(MR：0.5)；D-葡萄糖醛酸：13.0％(MR：2.0)；D-半乳糖醛酸：6.4％(MR：1.0)。

本发明包括以提供期望结果的有效量施用所述至少一种EPS的方法。在本发明的具体实施方式中，本发明的胞外多糖在皮肤护理组合物中使用浓度在约0.01g/L至约15g/L之间。其包含在组合物中的浓度可以是0.001％至约1.5％(w/w)。

本发明的胞外多糖可以配制在可局部施用的(topically applicable)化妆品组合物(例如局部制剂)中。这类可局部施用的组合物的非限制性实例包括护肤霜、清洁霜、软膏、护肤乳液、护肤凝胶、护肤泡沫、日晒护理组合物、防晒组合物、卸妆霜、卸妆乳液、粉底霜、乳液粉底、沐浴和淋浴制剂、祛臭组合物、止汗组合物、剃须产品组合物、剃须后凝胶或乳液、美容辅助组合物、脱毛霜、肥皂组合物、洗手剂组合物、洁肤块皂(cleansing bar)、婴儿护理用品、护发用品、香波、定型液、处置乳液(treatment lotion)、发乳、发用凝胶、染色组合物、重构组合物(restructuring composition)、持久性组合物(permanent composition)、抗脱发组合物或者适用于局部化妆方案的任意其它组合物。

如药学和药妆制剂领域熟知的乳膏是水包油型或油包水型的粘稠液体或半固体乳剂。乳膏基质是可用水洗的，并且含有油相、乳化剂和水相。也被称为“内”相的油相通常由凡士林和脂肪醇，如鲸蜡醇或硬脂醇组成。水相的体积通常超过油相(尽管不必如此)，并且通常含有湿润剂。乳膏制剂中的乳化剂通常是非离子型、阴离子型、阳离子型或两性表面活性剂。

乳液(lotion)是不经摩擦涂敷于皮肤表面的制剂，通常是液体或半液体制剂，其中，包括活性剂在内的固体颗粒存在于水或醇基质中。乳液通常是固体的混悬剂，对于本发明的目的而言，优选包含水包油型液体油性乳剂。由于乳液容易应用更多的流体组合物，因而对于处置大的机体面积而言是优选的制剂。通常有必要使乳液中的不溶性物质是微细的。乳液通常将含有助悬剂以产生更好的分散和含有可用于使活性剂定位于皮肤和保持与皮肤接触的化合物，例如甲基纤维素或羧甲基纤维素钠等。

溶液是通过将一种或多种化学物质(溶质)溶于液体中使得所溶物质的分子分散在溶剂分子中而制得的均质混合物。溶液可以含有其它药妆可接受的化学品以缓冲溶质或使之稳定或防腐。用于制备溶液的溶剂的常见实例有乙醇、水、丙二醇或任意其它药妆可接受的载体。

凝胶是半固体的混悬剂型体系。单相凝胶含有基本上均匀地分布在整个载液中的有机大分子，载液通常是水性的，但也优选含有醇和任选的油。“有机大分子”，即胶凝剂，是交联的丙烯酸聚合物，例如“卡波姆”家族的聚合物，例如可以以Carbopol^TM自商业途径获得的羧聚亚烷类(carboxypolyalkylenes)。其它实例有亲水性聚合物，例如聚环氧乙烷、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物和聚乙烯醇；纤维素聚合物，例如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素酞酸酯和甲基纤维素；胶，例如黄蓍胶和黄原胶；海藻酸钠；和明胶。为了制备均匀的凝胶，可以加入分散剂如醇或甘油，或者可以通过研磨、机械混合或搅拌或其联合来使凝胶剂分散。

软膏是通常基于凡士林或其它石油衍生物的半固体制剂。如本领域技术人员应理解的，所用的特定软膏基质是将提供大量期望特性如柔润性(emolliency)等的基质。同其它载体或介质一样，软膏基质应当是惰性的、稳定的、无刺激性的和非致敏的。如《雷氏药学科学与实践》(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)，第19版(Easton，Pa.：Mack Publishing Co.，1995)在第1399-1404页中所解释的那样，软膏基质可以分为四类：油脂性基质；可乳化基质；乳剂型基质；和水溶性基质。油脂性软膏基质包括例如植物油、由动物获得的脂肪和由石油获得的半固体烃。可乳化软膏基质也被称为吸收性软膏基质，其不含或几乎不含水，其包括例如硫酸羟基硬脂精、无水羊毛脂和亲水性凡士林。乳剂型软膏基质是油包水(W/O)型乳剂或水包油(O/W)型乳剂，其包括例如鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯、羊毛脂和硬脂酸。优选的水溶性软膏基质是由不同分子量的聚乙二醇制得的；对于进一步的信息，同样参见《雷氏药学科学与实践》。

糊剂是其中活性剂悬浮于适宜基质中的半固体剂型。根据基质的性质，糊剂分为脂肪糊剂或由单相含水凝胶制得的糊剂。脂肪糊剂中的基质通常是凡士林或亲水性凡士林等。由单相含水凝胶制得的糊剂通常掺入羧甲基纤维素等作为基质。

也可以用脂质体、胶束和微球制备制剂。脂质体是具有包含脂双层的脂质壁的微小囊泡，并且在本文中脂质体包封所述抗老化制剂中的一种或多种组分。脂质体制剂在本文中包括阳离子型(带正电荷)、阴离子型(带负电荷)和中性制剂。阳离子型脂质体是可以容易获得的。例如，N[1-2，3-二油氧基]丙基]-N，N，N-三乙基铵(DOTMA)脂质体可以以商品名Lipofectin^TM(GIBCOBRL，Grand Island，N.Y.)得到。类似地，阴离子型和中性脂质体也可以容易地获得，例如从Avanti Polar Lipids(Birmingham，Ala.)得到，或者可以采用容易获得的材料来容易地制得。这类材料包括磷脂酰胆碱、胆固醇、磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、二油酰基磷脂酰甘油(DOPG)和二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)等。这些材料也可以以适当的比例与DOTMA混合。采用这些材料制备脂质体的方法是本领域已知的。

在本领域中已知胶束包含表面活性剂分子，所述表面活性剂分子的排列使其极性头部基团形成外部球壳，而疏水性烃链朝向球心形成核。胶束在含有足够高浓度以便自然形成胶束的表面活性剂的含水溶液中形成。可用于形成胶束的表面活性剂包括但不限于月桂酸钾、辛烷磺酸钠、癸烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠、月桂硫酸钠、多库酯钠、癸基三甲基溴化铵、十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基氯化铵、十二烷基氯化铵、聚氧基-8十二烷基醚(polyoxyl-8-dodecyl ether)、聚氧基-12十二烷基醚(polyoxyl-12-dodecyl ether)、壬基酚聚醚10和壬基酚聚醚30。

类似地，可以将微球加入本发明的制剂中。同脂质体和胶束一样，微球基本上包封本发明的制剂中的一种或多种组分。它们通常由脂质、优选带电荷的脂质如磷脂形成，但并不一定如此。脂质微球的制备是本领域熟知的，并且记载在相关文本和文献中。

在一个实施方式中，本发明的组合物还包含至少一种另外的活性成分/活性剂。在另一个实施方式中，上述的至少一种另外的活性成分调节细胞分化、细胞代谢活性、细胞结构、细胞增殖、细胞外过程和色素沉着中的至少一种。

本发明的组合物还可以包含如下物质中的至少一种：调节细胞分化或增殖的物质、麻醉剂、抗痤疮剂、抗老化剂、抗菌剂、抗脂剂(anticellulite agent)、抗真菌剂、抗炎剂、抗刺激剂、抗氧化剂、抗寄生虫剂、抗污染剂、止痒剂、抗红斑痤疮剂、抗皮脂溢剂、抗应激剂(anti-stress agent)、抗微血管扩张剂、抗病毒剂、抗皱纹剂、婴儿护理剂、沐浴剂(bath and body agent)、安抚剂(calming agent)、清洁剂、胶原合成剂、弹性蛋白酶抑制剂、表皮脱落剂(exfoliant agent)、面部去皮剂(facial peeling agent)、紧肤剂(firming agent)、足部护理剂、自由基清除剂、免疫功能调节剂、角质溶解剂、提升剂(lift agent)、卸妆剂、黑色素生成刺激剂、护发剂、基质金属蛋白酶抑制剂、保湿剂(moisturizing agent)、吸油剂、渗透调节剂、抗光老化剂、防护剂、葆青春剂、再生剂、重构剂、敏感性皮肤用物质、剃须产品用物质、皮肤防御增强剂、净肤产品用物质、皮肤修复剂、减肥剂、柔肤剂(smoothing agent)、软化剂、润肤剂(soothing agent)、防晒剂、无日照晒黑剂、紧致剂(tensing agent)和增白剂，或者适用于包括局部施用所述化妆品组合物在内的化妆方案和补充或补足本发明EPS的作用的任意其它物质。

非限制性地，调节细胞分化或增殖的物质包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物(proteolytic hydrolystate)、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物(animal derivative extracts)和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括视黄酸及其衍生物(视黄醇、视黄醛、棕榈酸视黄酯、反式视黄酸、13-顺式视黄酸、9-顺式视黄酸、视黄酰基葡糖苷酸(retinoyl glucuronoides)、维甲酸、异维甲酸、依曲替酯、阿维A(acitretine)、他扎罗汀、阿达帕林、β-胡萝卜素、视黄酯)、维生素D及其衍生物(胆骨化醇、麦角骨化醇、25-羟基胆骨化醇)、生长因子和雌二醇衍生物。还包括其任意组合。

非限制性地，麻醉剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括盐酸利多卡因及其衍生物。还包括其任意组合。

非限制性地，抗痤疮剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括过氧苯甲酰、视黄酸及其衍生物(视黄醇、视黄醛、棕榈酸视黄酯、反式视黄酸、13-顺式视黄酸、9-顺式视黄酸、视黄酰基葡糖苷酸、维甲酸、异维甲酸、依曲替酯、阿维A、他扎罗汀、阿达帕林、β-胡萝卜素、视黄酯)、水杨酸、硫磺、硫化石灰、醇和丙酮。还包括其任意组合。

非限制性地，抗老化剂/抗皱纹剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括透明质酸、2-吡咯烷酮甲酸钠、糖胺聚糖、激动素、视黄酸及其衍生物(视黄醇、视黄醛、棕榈酸视黄酯、反式视黄酸、13-顺式视黄酸、9-顺式视黄酸、视黄酰基葡糖苷酸、维甲酸、异维甲酸、依曲替酯、阿维A、他扎罗汀、阿达帕林、β-胡萝卜素、视黄酯)、表皮生长因子、神经酰胺、乙基双亚氨基甲基愈创木酚氯化锰、糖化抑制剂、野菊(chrysanthellum indicum)提取物和水华束丝藻(aphanizomenon flos aquae)提取物。还包括其任意组合。

非限制性地，抗菌剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括桉树提取物、克林霉素磷酸酯、香芹酚(cavacrol)、红霉素和四环素类抗生素。还包括其任意组合。

非限制性地，抗真菌剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括益康唑、酮康唑、咪康唑、两性霉素B、特比萘芬和吡啶酮乙醇胺盐(octopirox)。还包括其任意组合。

非限制性地，抗炎剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括尿囊素、维生素E及其衍生物(α-生育酚、δ-生育酚、γ-生育酚)、春黄菊油、银杏(gingko biloba)油和大叶茶(camellia sinensis)提取物。还包括其任意组合。

非限制性地，抗刺激剂/润肤剂/柔肤剂/安抚剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括尿囊素、大叶茶提取物、熏衣草油、芦荟(aloe vera)、椴树提取物、柳兰(epilobium angustifolium)提取物、野菊(chysanthellum indicum)提取物、光亮可乐果(cola nitida)提取物和交替单胞菌(alteromonas)发酵物提取。还包括其任意组合。

非限制性地，抗氧化剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括糠基腺嘌呤、泛醇、硫辛酸、泛醌、烟酰胺、褪黑激素、过氧化氢酶、谷胱甘肽、超氧化物岐化酶、多酚、半胱氨酸、尿囊素、激动素、维生素C及其衍生物(抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸磷酸酯镁盐、抗坏血酸磷酸酯钠盐)、维生素E及其衍生物(α-生育酚、δ-生育酚、γ-生育酚)、葡萄籽提取物和大叶茶提取物。还包括其任意组合。

非限制性地，止痒剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。具体而言，这类物质包括西那利定(thenaldine)、阿利马嗪和赛庚啶。还包括其任意组合。

非限制性地，抗红斑痤疮剂/抗微血管扩张剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括甲硝唑、血管收缩药、过氧化苯甲酰、壬二酸、硫磺、大豆蛋白和糖胺聚糖。还包括其任意组合。

非限制性地，抗皮脂溢剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括孕酮衍生物、isoleutrol和扁柏酚。还包括其任意组合。

非限制性地，敏感性皮肤用物质包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括玫瑰油和茉莉油。还包括其任意组合。

非限制性地，清洁剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括十二烷基硫酸铵、月桂基聚氧乙烯醚硫酸铵、椰油酰胺MEA、十二烷基硫酸三乙醇胺、硬脂酸钠和荨麻叶提取物。还包括其任意组合。

非限制性地，胶原合成剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括视黄酸及其衍生物(视黄醇、视黄醛、棕榈酸视黄酯、反式视黄酸、13-顺式视黄酸、9-顺式视黄酸、视黄酰基葡糖苷酸、维甲酸、异维甲酸、依曲替酯、阿维A、他扎罗汀、阿达帕林、β-胡萝卜素、视黄酯)、维生素C及其衍生物(抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸磷酸酯镁盐、抗坏血酸磷酸酯钠盐)、生长因子及其衍生物。还包括其任意组合。

非限制性地，表皮脱落剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括α/β羟酸、水杨酸、乙醇酸、乳酸、柠檬酸(citrus acid)和胡桃壳粉末。还包括其任意组合。

非限制性地，面部去皮剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括乙醇酸、乳酸、三氯乙酸和苯酚。还包括其任意组合。

非限制性地，紧肤剂/紧致剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括二甲氨基乙醇、神经-化妆用活性物(如Botox^TM)、壳聚糖、山金车菊提取物、甜茴香油(fennel-sweet oil)和番木瓜提取物。还包括其任意组合。

非限制性地，自由基清除剂/抗污染剂/抗应激剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括葡萄籽提取物、α-生育酚及其酯、超氧化物岐化酶、一些金属螯合剂、维生素C及其衍生物(抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸磷酸酯镁盐、抗坏血酸磷酸酯钠盐)。还包括其任意组合。

非限制性地，护发剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括聚-D-葡糖胺、聚-N-乙酰基-D-葡糖胺、硬脂基二甲基苄基氯化铵和十二烷基硫酸三乙醇胺。还包括其任意组合。

非限制性地，基质金属蛋白酶抑制剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括大叶茶提取物、多酚、鸡血藤(spatholobi caulis)提取物、卫矛(euonymus alatus)提取物、羌活(rhizoma notopterygii)提取物、槲皮素、糖胺聚糖、聚甲氧基类黄酮、N-乙酰基-半胱氨酸、2-糠偶酰二肟、异黄酮、维生素C及其衍生物(抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸磷酸酯镁盐、抗坏血酸磷酸酯钠盐)、视黄酸及其衍生物(视黄醇、视黄醛、棕榈酸视黄酯、反式视黄酸、13-顺式视黄酸、9-顺式视黄酸、视黄酰基葡糖苷酸、维甲酸、异维甲酸、依曲替酯、阿维A、他扎罗汀、阿达帕林、β-胡萝卜素、视黄酯)和异羟肟酸衍生物。还包括其任意组合。

非限制性地，保湿剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括黄瓜提取物、2-吡咯烷酮甲酸钠、PCA钠、透明质酸钠、壳多糖及其衍生物、α羟酸、透明质酸和水解小麦蛋白。还包括其任意组合。

非限制性地，渗透调节剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括甘露醇、卫矛醇和甜菜碱。

非限制性地，保护剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括聚-N-乙酰基-D-葡糖胺、聚-D-葡糖胺、烷基醇酰胺(alkyloamides)、壳聚糖、野菊提取物、大叶茶提取物和交替单胞菌发酵物提取物。还包括其任意组合。

非限制性地，葆青春剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括迷迭香提取物、玫瑰木(rosewood)提取物、天竺葵提取物和维生素E及其衍生物(α-生育酚、δ-生育酚、γ-生育酚)。还包括其任意组合。

非限制性地，皮肤修复剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括视黄酸及其衍生物(视黄醇、视黄醛、棕榈酸视黄酯、反式视黄酸、13-顺式视黄酸、9-顺式视黄酸、视黄酰基葡糖苷酸、维甲酸、异维甲酸、依曲替酯、阿维A、他扎罗汀、阿达帕林、β-胡萝卜素、视黄酯)、尿囊素、桉树提取物、熏衣草油、玫瑰油以及胶原合成活化剂和皮肤胞外基质组分的活化剂。还包括其任意组合。

非限制性地，减肥剂/抗脂剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括野菊提取物、二氢杨梅黄酮、可可碱、茶碱、氨茶碱、咖啡因、盐酸异丙基去甲肾上腺素、肾上腺素、α-MSH激动剂、腺苷酸环化酶活化剂和磷酸二酯酶抑制剂。还包括其任意组合。

非限制性地，防晒剂/光老化剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括PABA(对氨基苯甲酸)及衍生物、葡糖酸内酯、水杨酸盐、肉桂酸盐、二苯甲酮、二苯酰甲烷、羟苯甲酮、维生素E及其衍生物(α-生育酚、δ-生育酚、γ-生育酚)、乙基双亚氨基甲基愈创木酚氯化锰、糖胺聚糖、视黄酸及其衍生物(视黄醇、视黄醛、棕榈酸视黄酯、反式视黄酸、13-顺式视黄酸、9-顺式视黄酸、视黄酰基葡糖苷酸、维甲酸、异维甲酸、依曲替酯、阿维A、他扎罗汀、阿达帕林、β-胡萝卜素、视黄酯)、二氧化钛、甲氧肉桂酸辛酯、二苯甲酮、水杨酸辛酯、柳兰提取物、西酸模(rumex occidentalis)提取物、野菊提取物、大叶茶提取物和交替单胞菌发酵物提取物。还包括其任意组合。

非限制性地，无日照晒黑剂/黑色素生成刺激剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括二羟丙酮、α-MSH激动剂、腺苷酸环化酶活化剂和磷酸二酯酶抑制剂。还包括其任意组合。

非限制性地，爽肤剂(toning agent)包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括荨麻提取物、橙花提取物、玫瑰木提取物和金缕梅提取物。还包括其任意组合。

非限制性地，增白剂/色素沉着剂包括植物提取物、藻类提取物、水果提取物、蔬菜提取物、豆科植物提取物、发酵物、蛋白水解物、肽、酵母提取物及其衍生物、微生物提取物、动物来源提取物和合成的化合物。更具体而言，这类物质包括熊果苷、壬二酸(azealeic acid)、维生素C及其衍生物(抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸磷酸酯镁盐、抗坏血酸磷酸酯钠盐)、氢醌、N-乙酰基-4-S-半胱胺基酚(N-acetyl-4-S-cysteanimylphenol)、曲酸、促黑素抑制素(melanostat或melanostatine)、维甲酸、视黄酸及其衍生物(视黄醇、视黄醛、棕榈酸视黄酯、反式视黄酸、13-顺式视黄酸、9-顺式视黄酸、视黄酰基葡糖苷酸、维甲酸、异维甲酸、依曲替酯、阿维A、他扎罗汀、阿达帕林、β-胡萝卜素、视黄酯)、西酸模提取物、甘草、桑属、熊果(arctostaphylos uva-ursi)、酪氨酸酶抑制剂、黑素体转移抑制剂和黑色素清除剂。还包括其任意组合。

在一个实施方式中，本发明的组合物还包含药学上可接受的局部用载体、介质或赋形剂或添加剂(即局部/化妆上可接受的载体、介质、赋形剂或添加剂)。这类载体、介质、赋形剂或添加剂是本领域熟知的，可用于例如在感官性质、皮肤穿透性和活性成分的可达到性方面改善最终制剂。载体、介质或赋形剂的实例包括：缓冲剂、载体剂、螯合剂、调理剂、着色剂、脱粘剂、柔润剂、乳化剂、成膜剂、起泡剂、湿润剂、乳酰乳酸化剂(lactylate agent)、亲脂剂、润滑剂、中和剂、油剂、遮光剂、防腐剂、增溶剂、溶剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘性剂、吸水剂、润湿剂、芳香剂和热水(thermal water)。还包括其任意组合。

可以配制本发明的组合物以提供特定控制的递送系统。这类递送系统的非限制性实例包括缓递送系统、快递送系统、即刻递送系统、延迟递送系统、零级递送系统和双重或多重速率递送系统。可以用特定制剂获得所述控制的递送系统，所述特定制剂包括化学递送系统、多重乳剂、微乳、纳米乳、包囊如脂质体、微球、纳米球、微海绵、珠和环糊精、聚合基质、聚合的化妆品复合物、油体/油质蛋白、油溶性分子膜、皮肤贴剂、单元剂型。

非限制性地，缓冲剂是与皮肤性质或者与其pH相容的碱/酸的盐。乙酸钠是常用缓冲剂的实例。

非限制性地，载体剂是能够帮助活性成分的应用的成分。异十六烷是常用载体的实例。

非限制性地，螯合剂是能够结合一价和二价阳离子的成分，例如EDTA、EDTA三钠、EDTA四钠、EDTA二钠或其组合。

非限制性地，调理剂是具有润滑作用和水合效应的成分，例如西曲氯铵、双十六烷基二甲基氯化铵、十三烷基聚氧乙烯醚-12、季铵盐-Z7、季铵盐-18、聚季铵盐-10、山嵛基三甲基铵甲基硫酸盐、鲸蜡硬脂醇、硬脂酰胺基丙基二甲基胺、三甲基甲硅烷基氨基聚二甲基硅氧烷、异月桂醇聚醚-6、辛基酚聚醚-4、聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、环五聚二甲基硅氧烷(cyclopentasiloxane)、烷醇聚醚-7(pareth-7)、烷醇聚醚-9、亚油酸和甘油或其组合。

非限制性地，脱粘剂是能够吸附到发粘材料上并降低其粘附趋势的成分，例如环五聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷和乙烯基聚二甲基硅氧烷、苯基聚三甲基硅氧烷、异丙酯、异硬脂酸酯、癸二酸二甲酯和癸二酸二丙酯，或其组合。

非限制性地，柔润剂是具有润滑作用和水合效应的成分，例如棕榈酸异丙酯、葵花籽油、矿物油、硬脂醇硬脂酸酯、肉豆蔻酸异丙酯、羊毛脂、辛酸/癸酸甘油三酯、环五聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、乙烯基聚二甲基硅氧烷、双-苯丙基聚二甲基硅氧烷、烷基聚二甲基硅氧烷、脱水山梨糖醇硬脂酸酯、蔗糖二硬脂酸酯、肉豆蔻醇、肉豆蔻醇乳酸酯、鲸蜡醇乙酸酯、二辛基醚、floraester-20、马来酸化大豆油、环聚二甲基硅氧烷、牛油树脂、氢化椰子油、棕榈酸异丙酯、二异硬脂酰基三羟甲基丙烷硅烷氧基硅酸酯和苯甲酸烷基酯或其组合。

非限制性地，乳化剂是能够防止乳剂中的不互溶物质分离，帮助将一种物质均匀地分散在另一种物质中，改善质地、均一性、稠度和稳定性的成分，例如鲸蜡硬脂醇、硬脂酸甘油酯、烷基丙烯酸酯交联聚合物、硬脂酸、乳化蜡、脱水山梨糖醇油酸酯、脱水山梨糖醇硬脂酸酯、聚山梨糖醇酯、聚乙烯甘油聚山梨糖醇酯(polyethylene glycopolysorbate)、三乙醇胺、环五聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷共聚醇(dimethicone copolyol)、PEG-30二聚羟基硬脂酸酯、蔗糖二硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、磺基琥珀酸二辛酯钠、聚丙烯酰胺、异链烷烃、月桂醇聚醚-7、鲸蜡醇磷酸酯、DEA鲸蜡醇磷酸酯、硬脂酸乙二醇酯、硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛基三甲基铵甲基硫酸盐和鲸蜡硬脂醇聚醚-2，或其组合。

非限制性地，成膜剂是能够形成在尺寸上稳定的和连续的膜从而使配方粘性最小的成分，例如小麦蛋白、二十碳烯共聚物、全氟甲基异丙基醚、二异硬脂酰基三羟甲基丙烷硅烷氧基硅酸酯、三甲基硅烷氧基硅酸酯、聚二甲基硅氧烷、乙烯基聚二甲基硅氧烷和环五聚二甲基硅氧烷，或其组合。

非限制性地，起泡剂是能够调节产品中空气量的成分，例如月桂酰胺DEA和椰油酰胺MEA、月桂醇聚醚磺基琥珀酸酯二钠、N-十八烷基磺基琥珀酰胺酸二钠、月桂硫酸铵、月桂硫酸三乙醇胺、月桂硫酸钠和2-乙基己基硫酸钠，或其组合。

非限制性地，湿润剂是能够维持恒定湿度和保持湿润的成分，例如甘油、PEG-8、丁二醇和丙二醇，或其组合。

非限制性地，润滑剂是能够增加滑性和减少摩擦以改善施用的成分，例如聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷共聚多元醇，或其组合。

非限制性地，中和剂是能够改变酸-碱平衡的成分，例如三乙醇胺和氢氧化钠，或其组合。

非限制性地，遮光剂是能够将澄清或半透明产品的外观改变为奶油色或珍珠样产品的成分，例如硬脂酸甘油酯和PEG-100硬脂酸酯，或其组合。

非限制性地，防腐剂是能够延缓或防止微生物腐败或化学腐败和避免变色的成分，例如DMDM乙内酰脲、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、苯氧乙醇、尼泊金乙酯、尼泊金丁酯、咪唑烷基脲、重氮咪唑烷基脲(diazolidinyl urea)、季铵盐-8、季铵盐-14、季铵盐-15、丙二醇、脱氢乙酸、甲基氯异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮和germaben，或其组合。

非限制性地，增溶剂是能够允许不相容的成分变为均质溶液的一部分的成分，例如聚山梨糖醇酯、鲸蜡硬脂醇聚醚、硬脂醇聚醚和PEG，或其组合。

非限制性地，稳定剂是能够在加工期间及加工之后维持物理和化学性质、能够在产品寿命期间防止或限制物质的物理性质变化的成分，例如聚乙烯、氯化钠、硬脂醇、黄原胶、EDTA四钠和聚二甲基硅氧烷共聚多元醇，或其组合。

非限制性地，表面活性剂是能够在溶于水或水溶液时降低表面张力、能够降低两种液体或者液体与固体之间的界面张力的成分，例如磺基琥珀酸二辛酯钠、辛基酚聚醚-40、异月桂醇聚醚-6、月桂硫酸铵、月桂醇、月桂酰胺DEA和椰油酰胺基丙基甜菜碱(cocoamidopropyl betaine)，或其组合。

非限制性地，增稠剂是能够吸收水以赋予机体、改善稠度或质地和使乳剂稳定的成分，例如硬脂酸、硅酸镁铝、卡波姆(包括卡波姆钠和卡波姆钾)、烷基丙烯酸酯交联聚合物、聚丙烯酰胺、异链烷烃、月桂醇聚醚-7、鲸蜡醇、黄原胶、烷基聚二甲基硅氧烷、羟乙基纤维素、硬脂酸甘油酯、季戊四醇四硬脂酸酯、硬脂醇和聚季铵盐-10，或其组合。

非限制性地，粘性剂是能够控制流体所表现出的流动性程度和对抗流动的内阻力的成分，例如硅酸镁铝、辛甘醇和肉豆蔻醇，或其组合。

非限制性地，吸水剂是能够吸收产品的水以保持湿润的成分，例如羧乙烯基聚合物、丙烯酸共聚物、聚丙烯酰胺、多糖、天然树胶、粘土、改性粘土、金属盐和脂肪酸，或其组合。

非限制性地，润湿剂是能够降低水的表面张力从而得到更好的跨表面穿透性或延展性的成分，例如辛酸酯、辛甘醇、癸酸甘油酯、聚甘油-2癸酸酯、聚甘油-6、聚甘油-3月桂酸酯和TEA-月桂醇聚醚硫酸酯，或其组合。

本发明的胞外多糖或组合物可以以任何合适的方式包装，包括但不限于常规方式的罐、瓶、管、棒、走珠涂覆器、气雾喷雾装置等。本发明的胞外多糖或组合物可以被包装成两个或更多个隔室的试剂盒，所述隔室包括含有活性成分的隔室和含有局部(topically)/皮肤病学上(dermatologically)可接受的介质的第二隔室，它们可以在使用前的某个固定时间点混合到一起。例如，乳膏、粉末、片剂、胶囊或液体形式的活性成分可以被包含在单次使用的密封盒中，密封盒可以被打开并与局部可接受的介质混合，也可以以预先测量的形式贮存于单次使用的密封盒中。或者，可以以较大的量提供活性成分和局部可接受的介质，其中采用各种测量装置，例如用于固体的量匙或量杯，或者用于液体的刻度瓶或滴管，从所述的较大量中取出所需要的量。可以将本发明的胞外多糖或组合物涂敷到基底上，然后进行包装。合适的基底包括敷料(dressing)，包括膜敷料和绷带。在一个实施方式中，试剂盒或药包可以包含使用/应用说明书，例如预防、减少、延缓或处置皮肤病症或皮肤老化征象的说明书。

另一方面，本发明提供了胞外多糖在预防或减少受试者皮肤老化征象或另外的皮肤病症中的应用(例如，化妆或治疗应用)。

另一方面，本发明提供了胞外多糖在预防或减少受试者皮肤老化征象中的应用(例如，化妆或治疗应用)。非限制性地，本文所用术语“皮肤老化征象”是指皱纹，细纹，皮肤紧致度和弹性损失，质地损伤，脱水，皮肤抵御机械作用、炎症、日晒损伤(特别是UV辐射诱导的氧化胁迫)的能力减弱，发红，毛细管扩张，皮肤松垂，皮脂过量，毛孔增大，黑眼圈，皮肤紧致度损失，褐斑，老年斑，皮肤色素沉着过量，皮肤增厚，斑点，皮肤弹性和胶原含量损失，皮肤干燥，痣，黄褐斑(melasmas)，肤色暗哑，眼袋，皮脂产生异常，皮肤舒适性损失和皮肤失活(代谢活性下降)，或其任意组合。

在本文表述的“减少皮肤老化征象”或“减少皮肤病症或病变”中使用的术语“减少”分别是指减少原先存在的老化皮肤征象，或皮肤病症或障碍。其分别包括对老化征象或皮肤病症或病变的完全或部分改正/治疗。在本文表述的“预防皮肤老化征象”或“预防皮肤病症或病变”中使用的术语“预防”分别是指延缓老化皮肤征象，或皮肤病症或病变的出现，或完全或部分地防止老化皮肤征象，或皮肤病症或障碍。

本文对EPS使用的术语“源自微生物席”是指分泌EPS的微生物的来源。术语“源自微生物席”还包括由最初从微生物席分离的菌株进行微生物体外培养而分泌的EPS。类似地，术语“从微生物席分离的微生物”包括将最初从微生物席分离的菌株进行体外培养的微生物菌株。其还包括包含编码EPS基因的重组微生物。

在另一方面，本发明涉及胞外多糖用于通过细胞磨损(attrition)、脱皮和改进胶原纤维结构从而改进皮肤坚实性(consistency)的用途。

另一方面，本发明涉及胞外多糖用于改进角质层形态的用途。

另一方面，本发明涉及胞外多糖用于改进脱皮的用途。

另一方面，本发明涉及胞外多糖用于减少皮肤表面上的细菌粘附的用途。

另一方面，本发明涉及胞外多糖用于改进水合的用途。

另一方面，本发明涉及胞外多糖用于改进皮肤纹理的用途。

另一方面，本发明涉及胞外多糖用于刺激衰老的人成纤维细胞产生透明质酸的用途。

另一方面，本发明涉及胞外多糖用于刺激表皮的总脂质合成的用途。

另一方面，本发明涉及胞外多糖用于刺激参与脱皮功能的基因的表达的用途(如化妆用途)。在另一个实施方式中，上述基因编码KLK5(激肽释放酶，角质层酶)、KLK6(激肽释放酶6)和KLK7(角质层胰凝乳蛋白酶)。

另一方面，本发明涉及胞外多糖用于刺激参与角质形成细胞分化的基因的表达的用途(如化妆用途)。在另一个实施方式中，上述基因编码丝聚蛋白和总苞蛋白。

另一方面，本发明涉及胞外多糖用于刺激转谷氨酰胺酶表达的用途(如化妆用途)。

另一方面，本发明提供了胞外多糖在制备用于预防或减少皮肤病症或皮肤老化征象的药物中的应用。

另一方面，本发明提供了胞外多糖在制备通过细胞磨损、脱皮和改进胶原纤维结构而改进皮肤坚实性的药物中的应用。

在更具体的实施方式中，与老化相关的皮肤病症可包括皱纹、细纹、老年斑、日晒损伤(特别是UV辐射诱导的氧化胁迫)、斑点、皮肤色素沉着过量、老年斑、皮肤增厚、皮肤弹性和胶原含量损失、皮肤干燥、痣和/或黄褐斑，或其任意组合。

可改变本发明的胞外多糖或组合物的递送方法，但通常涉及施用于易于皮肤老化征象或受到皮肤老化征象影响的皮肤区域，所述皮肤老化征象例如是与内在老化和/或外在老化相关、由其引起或受其影响的任何皮肤征象。

可以将乳膏、乳液、凝胶、软膏、糊剂等涂覆于受影响的表面上并轻柔擦入。可以以同样的方式施用溶液，但是更通常采用滴管或拭子等施用，并小心地涂覆于受影响的区域。

施用方案将取决于多个可以容易测定的因素，例如病症的严重性和对初始处理的反应，但通常涉及以延续的基础每天应用一次或多次。本领域普通技术人员可以容易地测定所施用制剂的最佳量、施用方法和重复速率。通常认为在每周一次或两次至每天一次或两次的范围内施用本发明的制剂。因此，本文使用的术语“有效量”在涉及本发明的组合物时是指有效预防或减少受试者的皮肤老化征象或皮肤病症或病变的量。其通常由足以覆盖待处理皮肤的量组成。所述有效量可随着组合物的形式(例如凝胶、乳膏、浆液等)以及受试者的皮肤类型而改变。

在另一个实施方式中，上述受试者是哺乳动物。在另一个实施方式中，上述哺乳动物是人。

将通过以下非限制性实施例更详细地解释本发明。

实施例1

EPS对人角质形成细胞(体外存活率)的影响

通过使用MTT测定法对每种EPS进行细胞毒性评估，从而确定对人角质形成细胞(NHEK，第三代)无害的浓度。

MTT细胞增殖测定法测量细胞增殖速率，并且在代谢作用导致凋亡或坏死时，反过来测量细胞存活力的下降速率。此测定法的基础在于线粒体脱氢酶还原黄色四唑MTT(3-(4，5-二甲基噻唑基-2)-2，5-二苯基溴化四唑)，产生还原性等价物，例如NADH和NADPH。可将所得的细胞内紫色甲臜溶解，并通过分光光度法定量。结果显示于下表IV中。

表IV

在本试验中所测试的多糖浓度下没有观察到存活率的变化。

实施例2

EPS对衰老的人成纤维细胞(体外存活率)的影响

通过使用上文实施例1所述的MTT测定法对每种化合物进行细胞毒性评估，从而确定对人成纤维细胞无害的浓度。通过正常真皮成纤维细胞的继代培养获得这些衰老的细胞，并且由第12代获得衰老表型。表V给出了存活率结果。

表V

在本试验中所测试的多糖浓度下没有观察到存活率的变化。

实施例3

EPS对衰老人成纤维细胞的透明质酸合成的影响

进行本试验以评估EPS对衰老人成纤维细胞的透明质酸合成的影响。透明质酸合成是成纤维细胞活性的标志，并且此化合物具有吸湿性，因此是天然的皮肤保湿剂。通过正常真皮成纤维细胞的继代培养获得这些衰老的细胞，并且由第12代获得衰老表型。

对所测试的EPS的基因表达进行分析表明，细胞外基质蛋白的合成减少，对生长因子的敏感性降低，且基质金属蛋白酶的合成增多。一些对细胞生长没有直接影响的化合物被证明在表皮生长因子(EGF)的存在下刺激衰老成纤维细胞的增殖。此作用是由于细胞对EGF的敏感性提高导致的。基于对EGF的此观察结果，象TGFβ的其他因子可能存在类此的情况。TGFβ具有激发HA合成的能力。然而，现已发现较老的细胞对TGFβ的敏感性降低。因此，测试了EPS的两种作用：其对HA生产的直接影响，以及其使细胞恢复对TGFβ敏感性的可能性。

将衰老的成纤维细胞预培养24小时直至汇合。随后弃去培养基，并替换成包含或不含(对照)单独的待测EPS、单独的TGFβ，或待测EPS与TGFβ的混合物的测定培养基。随后，将细胞培养72小时。培养结束时，按照厂商的说明(R&D Systems DY3614)，通过标准ELISA测试评估上清液中的透明质酸浓度，并通过使用标准MTT掺入测定法评估细胞的存活率。结果显示于下表VI中。

表VI

10ng/ml的TGFβ清楚且显著地提高了透明质酸的合成(4倍)。

不含TGFβ的化合物Pol-3以剂量反应的方式显著提高了透明质酸(HA)的产生。化合物Pol-2表现出与Pol-3相同的作用，但活性较弱。

化合物Pol-5、Pol-7、Pol-8和Pol-9对基底HA生产没有任何影响，但显著减少了TGFβ对HA产生的刺激作用。

使用产品Pol-5、Pol-7、Pol-8和Pol-9获得的结果表明与受体的结合，但是是拮抗作用，因为它们降低了对TGFβ的反应。

实施例4

EPS对暴露于UV辐射的人细胞培养物中的脂质过氧化物产生的影响

进行本试验以评估本发明的EPS对暴露或没有暴露于UVA+UVB辐射的人细胞中脂质过氧化物(LP)相对量(皮肤脂质的降解)的影响。通过使用特异荧光探针和荧光流式细胞术分析获得评估结果。因为测量了每个细胞的荧光并评估了大量的细胞(每种试验条件下10,000个细胞)，所以此方法提供了极高的敏感性。

在完全SFM培养基中预培养角质形成细胞直到100％汇合。随后将培养基替换成包含或不含待测EPS或参照物的测定培养基，并将细胞在37℃和5％CO₂的条件下培养24小时。培养后，掺入作为特异探针的脂质荧光类似物(C11-Fluor)，以及待测的EPS或参照物，并将细胞在37℃和5％CO₂的条件下培养45分钟。随后通过使用培养基清洗除去探针。使用包含待测EPS或参照物的培养基代替清洗培养基。制备对应的未处理对照。使用210mJ/cm²UVB照射细胞。制备对应的未照射对照。照射后，将细胞在37℃和5％CO₂的条件下培养1小时，随后用PBS清洗并用胰蛋白酶处理。对10,000个细胞个体(无细胞群选择)，使用受FACSArray^TM系统软件(Becton-Dickinson)驱动的FACSArray^TM细胞计数器，通过流式细胞术测量荧光参数。在此试验中，荧光探针C11-Fluor插入到膜细胞中，在氧化后降解。结果显示于下表VII中。

表VII

辐射显著提高了细胞内脂质过氧化物的量(7倍)。50μM的参照物BHA减少了受辐射细胞的细胞内脂质过氧化物的量(76％的保护率)。此结果是预期的，并证实了所述试验的有效性。

化合物Pol-5具有减少受辐射细胞的细胞内脂质过氧化物的量的趋势。

实施例5

EPS对编码参与脱皮的蛋白酶的基因和编码人角质形成细胞培养物分化标志的基因的表达的影响

进行本试验以测定EPS对编码分化蛋白(丝聚蛋白、兜甲蛋白、总苞蛋白)的mRNA和参与脱皮的角质层胰蛋白酶(激肽释放酶5、6和7)的mRNA的诱导的影响。使用“实时定量聚合酶链反应”技术(RT-QPCR)来分析所选标志的相对表达。

在培养基中预培养角质形成细胞。在汇合后，将培养基替换成包含或不含(对照)测试化合物的测定培养基(不含待测EGF和垂体提取物的SFM)，并将细胞在37℃和5％CO₂的条件下培养24小时。试验结束时，在PBS缓冲剂中清洗细胞，并使用每孔300μl Tri-reagent在-80℃快速冷冻。

使用可以从所选的每个标志扩增出特异性聚合酶链式反应(PCR)产物的引物对。在此试验中，使用肝脏甘油醛3-磷酸酯脱氢酶(G3PDH)作为参照标志。按照操作方案，使用Tri-Reagent^TM进行总RNA提取。使用“无DNA”(DNA-free)系统，通过DNAse处理去除DNA污染物。随后，在寡聚dT和Superscript II逆转录酶的存在下进行mRNA的逆转录。

首先，评估第一浓度下的六种EPS对基因表达的调控(表VIII)。第二步评估三种浓度下的四种EPS(表IX)。

表VIII

表IX

视黄酸显示了逆分化谱(reverse differencing profile)。CaCl₂显示了促分化谱(pro differencing profile)。这些结果是预期的，并证实了所述试验的有效性。

Pol-6显示强效提高了编码用于脱皮和分化的基因。此胞外多糖诱导了角质形成细胞分化成角质细胞(促分化作用)。

第二系列的测试显示Pol-3体现了促分化谱。

实施例6

EPS对表皮脂质合成的影响

评估重建表皮中的磷脂和中性脂质合成

进行本试验以评估本发明的EPS对脂质合成的影响。使用薄层层析分别测量磷脂(细胞膜)和中性脂质(包括表皮特异脂质)。使用SkinEthic^TM重建人表皮作为模型，其组成接近于正常的人表皮。

将表皮组织放置在24孔板中，并在SkinEthic^TM培养基中培养12小时。随后，将培养基替换成新鲜培养基，并以所示浓度向表皮表面涂覆所测试的EPS(局部处理)。三份对照表皮未经处理，并使用培养基中的已知皮肤总脂质刺激剂视黄酸处理三份参照表皮(系统处理)。所有处理进行一式三份，并总计培养72小时。处理24小时后，将培养基替换成标记培养基(0.225μCi[14C]乙酸盐/孔)，并处理表皮。在48小时的培养期进行标记。所使用的放射性标志是[2-14C]-乙酸钠盐，Amersham CFA14(2.04Gbq/mmol，55mCi/mmol)。在PBS溶液中清洗并离解表皮。随后，通过在冰上使用0.5M过氯酸处理来裂解细胞。通过甲醇/氯仿(2∶1)提取脂质，并按照Bligh和Dyer描述的程序，通过在中和后添加PBS和氯仿以进行相分离。通过在氯仿蒸发后掺入带有液体闪烁的有机相(脂质)来量化放射性。在氮气中干燥有机相，并使用两个溶剂系统：用于磷脂的氯仿/甲醇/水(50∶18∶2.6)，或用于中性脂质的己烷/乙醚/乙酸(15∶5.6∶0.19)进行薄层层析(TLC，Merck K60板)。通过使用Phosphorlmager Cyclone^TM和Multigauge软件(Fujifilm)直接计数TLC板上各个点的放射性来量化各种代谢物。结果显示于下表X中。

表X

脂质合成：总脂质(TL)

胆固醇(C)

游离脂肪酸(FFA)

酯化脂肪酸(EFA)

鞘磷脂(SM)

磷脂(PL)

胆固醇硫酸酯(CSO₄)

神经酰胺和脑苷脂(Cera/Cere)

14C-乙酸盐在表皮脂质中的基底掺入是强的，这表明表皮角质形成细胞的代谢是正常。

参照物视黄酸如期地显著提高了总脂质的合成(对照的175％)。

EPS Pol-3、Pol-4、Pol-5、Pol-6、Pol-7和Pol-8显著提高了总脂质的合成(分别为对照的165％、176％、157％、183％、174％和159％)。然而，化合物Pol-1、Pol-2和Pol-9没有显著改变总脂质的合成。

实施例7

EPS对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌在人皮肤表面上粘附的影响

进行本试验以评估EPS对生物素标记的细菌(表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌)在人皮肤表面上粘附的活性。

由健康受试者在整容切除术中取出的腹部活组织制备人皮肤片(4cmx4cm)。

如在生物材料、导管和各种细胞中所证实的，在此试验中使用的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌具有粘附到任何支持物的性质。将细菌接种在LB-琼脂培养基，随后在37℃的LB液体培养基中培养直到半对数期(DO640＝0.4)。随后，在70％乙醇中固定细菌，清洗并用生物素标记。将部分生物素标记的纯化细菌分成等分试样，并在-80℃冷冻，直至使用。

使用皮肤制备一个96孔板。施用所测试的EPS 1小时。培养结束时，除去EPS，并使皮肤接触表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌。在室温下培养2小时并在PBS中清洗3次后，在每个孔中添加4M胍，并在室温下静置40分钟。随后提取上清液，并在-80℃冷冻。

使用MilliBlot dotblot装置(Millipore)，将每种上清液样品和每种细菌样品转移到硝酸纤维素膜(Hybond，ECL，Amersham)上。进行所有的对照以评估最终反应的特异性。通过将培养基或测试化合物转移到此前未接触细菌或皮肤的硝酸纤维膜来进行对检测系统的干扰对照。在此试验中没有观察到干扰。将膜上的非特异位点在37℃的PBS/0.05％、Tween 20/5％、脱脂乳饱和缓冲液(PBSTM)中饱和2小时。在PBSTM中仔细清洗后，使用稀释于PBSTM的链霉亲和素-辣根过氧化酶结合物标记特异性抗原位点。在PBSTM中仔细清洗后，在Kodak^TM MR膜上使用化学荧光ECL法(增强化学荧光，Amersham)检测过氧化物酶活性。结果显示于下表XI中。

表XI

表皮葡萄球菌的细菌粘附

金黄色葡萄球菌的细菌粘附

表皮葡萄球菌的细菌粘附是显著的，且信号幅度令人满意。化合物Pol-1和Pol-5显著降低了表皮葡萄球菌对皮肤的粘附(抑制率分别为38％和65％)。

金黄色葡萄球菌的细菌粘附是显著的，且信号幅度令人满意。化合物Pol-1和Pol-5显著降低了金黄色葡萄球菌对皮肤的粘附(抑制率分别为49％和66％)。

综上所述，化合物Pol-1和Pol-5显示了能够产生防止表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌在人皮肤表面粘附的膜或遮蔽罩(mask)的性质。

实施例8

EPS乳膏制剂对抗污染活性的影响

进行此试验以通过化妆品对抗正常皮肤上自由基的作用来评估其抗污染活性。使用污染物和重金属的混合物来模拟环境污染(如烟气、烟尘等)的有害影响。在此试验中将作为皮肤模型的外植体用作人皮肤的良好模型。

由健康受试者(64岁)在整容切除术中取出的腹部活组织制备人皮肤片(27个外植体)。将其放置在37℃、5％CO₂的BEM培养基中。以所示的浓度(2mg/外植体)将测试EPS涂覆到表皮的表面(局部处理)。在试验首日(第0天)以及一天、两天、三天和四天后(第1天、第2天、第3天和第4天)施用。

在第4天，向纸盘(paper disk)涂覆30μL重金属(表XII)和烃的混合物，并立即放置在上述外植体上。

表XII

混合物中使用的重金属	浓度(mg/L)
		铝	20
砷	20
		铅	20
铬	20
		汞	20

镍	5
		镉	2

在第0天和第5天，从每个批次取出3个外植体，并固定在Bouin氏液中以进行形态学观察。在Bouin介质中放置48小时后，将外植体脱水，包埋在石蜡中，并用Masson三色染色。第3天，在照射24小时后的培养基中进行MDA测定(丙二醛，自由基变化的稳定产物)，以量化产品对抗污染物产生的自由基的功效。结果显示于下表XIII中。

在第5天，未经处理的外植体(T)，其角质层厚、轻微层叠状，表面明显角质化，并且其底部有轻微角质化。中度角化不全。表皮具有形态良好的4-5层细胞。真皮-表皮连接的纹理(relief)是明显的。真皮乳头层(papilary dermis)显示形成不同程度致密的网络的厚胶原纤维。参见图1左上图。

在第5天，带有污染物的外植体(TP)，其角质层厚、轻微层叠状，表面明显角质化。中度角化不全。表皮具有明显变化的4-5层细胞。这些变化表征为在整个表皮中存在很多带有固缩核的细胞。真皮-表皮连接的脱离是明显的。其纹理相当明显。真皮乳头层显示了形成不甚致密的网络的厚胶原纤维。参见图1左下图。

在第5天，经Pol-5处理的带有污染物的外植体(PP)，其角质层厚、轻微层叠状，表面明显角质化。中度角化不全。表皮具有几乎没有变化的4-5层细胞。真皮-表皮连接轻微脱离。真皮-表皮连接的纹理相当明显。真皮乳头层显示了形成不甚致密的网络的厚胶原纤维。参见图1右图。

表XIII

α生育酚对照降低了污染物活性，从而证实了本试验的有效性。Pol-5的结果表明了其抗污染活性的潜能。

实施例9

EPS对人皮肤外植体上皮肤屏障重建的影响

此试验试图证明测试EPS对皮肤屏障构建速度的影响。通过基本形态的组织学专门鉴定以及丝聚蛋白和膜转谷氨酰胺酶的免疫标记来评估生物活性。较高的丝聚蛋白和/或转谷氨酰胺酶表达水平(例如，在更多的细胞层中)是角质形成细胞分化提高的标志。

在48岁妇女的腹部整形手术中获得人皮肤外植体。使用乙醚/丙酮的混合物进行区域脱脂(去除脂质)以提高对测试EPS的敏感性，并且去除可能导致比较结果偏差的外界因素(例如，脂肪厚度和含量可随样品变化并引入导致对照和测试EPS之间结果偏差的参数)。在此脱脂区域上获得24个试验外植体。由未脱脂的部分产生6个试验外植体。将所有30个外植体放入BEM培养基，并贮存在37℃、5％CO₂的温箱中。将此材料分成10个批次，每批3个外植体。

在去除脂质后，立即以4mg/外植体的浓度局部施用测试EPS。接触时间为3小时。在T0和第3小时，将每个批次的3个外植体分别切成两块。将第一块固定在常规Bouin介质中以观察基本形态。将第二块冷冻并保存在-80℃，以对丝聚蛋白和膜转谷氨酰胺酶进行特异标记。

在常规Bouin介质中固定48小时后，将样品切片并浸渍在石蜡中。将冷冻样品在低温保持器中切成厚7μm的切片，随后贴在组织学载玻片上以进行标记。

使用Masson型三色染色完成一般形态学观察。在T0和T3h时间，使用生物素/链霉亲和素系统，用抗丝聚蛋白单克隆OKTB1抗体标记冷冻载玻片上的丝聚蛋白，用FITC显示并使用碘化丙啶染色细胞核。在T0和T3h时间，使用生物素/链霉亲和素系统，用抗转谷氨酰胺酶单克隆BC1抗体标记冷冻载玻片上的转谷氨酰胺酶，用FITC显示并使用碘化丙啶染色细胞核。

丝聚蛋白

在T0，丝聚蛋白轻微表达于未脱脂外植体中具有正常数量细胞层的角质层底部。在脱脂外植体中存在略多的丝聚蛋白。

如图2可见，在第3小时，丝聚蛋白明显表达于未经处理且未脱脂的外植体中。如图3可见，丝聚蛋白轻微表达于未经处理的脱脂外植体中。可观察到中等数量的细胞层。

在脱脂外植体上施用Pol-6(图4)、Pol-3和Pol-8后，丝聚蛋白分别在11/12(Pol-6)和8/9细胞层(pol-3和Pol-8)上强烈表达。

在脱脂外植体上施用Pol-6和Pol-3的混合物后，丝聚蛋白明显表达于8/9细胞层上(图5)。

在脱脂外植体上施用Pol-6和Pol-8的混合物后，丝聚蛋白明显表达于8/9细胞层上(图6)。

膜转谷氨酰胺酶

在T0，转谷氨酰胺酶非常轻微且不规律地表达于未脱脂且未处理的外植体和新脱脂外植体中角质层底部的3/4细胞层上。

在第3小时，转谷氨酰胺酶非常轻微地表达于未脱脂且未经处理的外植体中(图7)。在未经处理的脱脂外植体中没有观察到转谷氨酰胺酶(图8)。

在用Pol-6(图9)和Pol-3处理脱脂外植体后，转谷氨酰胺酶明显表达于5/6细胞层上。

丝聚蛋白和膜转谷氨酰胺酶(TGM)的免疫染色结果显示在下表XIV中。

表XIV

无-；低+；中等++；明显/有效+++；强++++

脱脂外植体显示了非常明显的角质层退化，具有与脱水皮肤相当的形态，且真皮外观大量受损(胶原纤维病变)。

基本形态学观察表明，在接触3小时后，EPS Pol-3改进了真皮层的形态，其可产生真皮层的表面保湿活性。Pol-3和Pol-8的混合物，以及Pol-6和Pol-8的混合物改进了真皮层的形态(保湿作用)。

EPS Pol-6改进了角质层和真皮水平的皮肤结构。特别地，基本形态学显示，在与EPS Pol-6接触3小时后，角质层呈蓬松状，表明细胞新生和脱皮。胶原纤维看起来更致密且更有组织。

丝聚蛋白表达显示施用的所有EPS在接触3小时候均导致细胞层数的净增加(密度和数量)。

膜转谷氨酰胺酶表达显示EPS Pol-6，以及Pol-6和Pol-8的混合物诱导了皮肤屏障的重建活性。

实施例10

含多糖的皮肤护理组合物的水合性质和皮肤屏障重建性质的临床试验

此试验的目的是在20名志愿者的小组中，客观地评估包含EPS的乳膏在使用30天后的保湿活性和脂质屏障重建活性。将此活性与安慰剂进行比较评估。使用半侧脸设计(split-face design)施用两种制剂。从年龄在30-50岁、皮肤偏干燥的受试者人群中招募志愿者。通过来自生理性脱皮的特定标志，用D型Squames

表面取样来定量评估保湿作用。通过分析氰基丙烯酸酯胶上的样品的纹理以及照片评估重建作用。

制备包含Pol-6和Pol-3的皮肤护理制剂。

表XV

使用生理性脱皮，通过特异性标志(Diagnoskin ^TM )对水合进行定量评估

通过生理脱皮的量化，由DIAGNOSKIN^TM系统评估皮肤含水水平。18名志愿者参与活性制剂的评估，安慰剂组有19名志愿者。

在皮肤上施用弹性胶带D-Squam^TM，从而在移开时取得角质细胞上层的样本。使用显微镜(25×物镜，直射光)进行此脱皮评估。基于这些评估结果，将皮肤样品分为1-12级，其中12级是水合的最高可能水平。图10显示了从最高水合到最低水合的皮肤形态的3张照片。

活性组合物：从下表XVI可见，在施用活性乳膏30天后，观察到脱皮性质提高了9.82％。

表XVI

在样品的形态学方面，使用Pol-6和Pol-3的混合物处理30天时，显示出皮肤水合高很多的皮肤质地。实际上，在T0观察到的细胞板和厚区(表明皮肤脱水)在处理30天后几乎消失。随后，观察了单个细胞，与水合更高的皮肤一样。处理前后的照片参见图11。

安慰剂：从下表XVII可见，在施用安慰剂30天后，观察到脱皮性质下降了7.14％。

表XVII

服用安慰剂的自愿者的样品在形态学方面显示出皮肤大量退化和小块细胞板，表明皮肤脱水增大。处理前后的照片参见图12。

安慰剂和活性乳膏之间的差距(17％)显示出与较高分化/脱皮速率相关的皮肤脱皮的明显改进。此差异显示在图13中。观察到皮肤表层更有效地更新，以及导致更细致且均匀皮肤的紧致和重建作用。

重建作用的定量评估

对于活性乳膏和安慰剂，在18名志愿者的颧骨上进行取样。通过在皮肤上直接放置一滴氰基丙烯酸酯胶，并立即涂覆到清洁的组织学载玻片上来制备表面样品。氰基丙烯酸酯胶的快速聚合(30秒)允许无痛地从角质层外部获取厚度均匀的样品(4-6层角质细胞)。使用带有横向直射光的显微镜(2.5×物镜)观察样品，从而参考纹理(初级线(primary lines)、次级线(seconday lines)、多边形等)参数进行评估。

活性组合物：从下表XVIII可见，在施用活性乳膏30天后，观察到纹理改进了9.09％。

表XVIII

未处理和经处理皮肤的显微镜观察表现了纹理参数的明显差异。在使用活性乳膏处理30天期间的志愿者显示了完整的皮肤组织和结构，并带有交叉形成多边形的初级线和次级线。在处理前没有观察到这些相同的参数，说明了脱水皮肤的状态，其代之以显示沿皮肤张力线(皮肤的张力线)方向的初级线和次级线。图14显示了接受处理的志愿者的皮肤在处理后的照片。

安慰剂组合物：从下表XIX可见，在施用安慰剂30天后，观察到纹理性质下降了6.49％。

表XIX

对使用安慰剂处理30天期间的志愿者的皮肤显微镜观察显示了纹理退化，以及沿皮肤张力线方向排列的初级线和次级线，说明皮肤显著脱水。图15显示了安慰剂处理的志愿者的皮肤在处理前后的照片。

此试验显示使用由胞外多糖配制的乳膏使皮肤纹理质量提高了16％。此差异显示在图16中。

此试验证实了本发明胞外多糖的脱皮活性，显示改进的皮肤脱皮，同时改善了皮肤的纹理。皮肤的质地得到明显改善。

实施例11

含EPS的皮肤护理组合物的抗污染性质的临床测试

进行临床研究以确定含Pol-5的抗污染皮肤护理品在正常使用条件下的功效。出于该目的，招募了63名生活在大城市、具有敏感型皮肤，30-50岁的女性志愿者，其中50％为吸烟者。要求这些志愿者在4周内每天两次使用以下实施例12所述的抗污染皮肤护理品，并且不改变其他的化妆习惯。她们在D7和D28完成了两份自填式问卷。通过邮件进行数据收集和材料物流。

具体的评论由57份问卷回复确定：回复发现乳膏易于涂覆，乳膏具有令人愉快的气味，乳膏具有令人愉快的质地，乳膏渗透快速，提供良好的感觉，保护皮肤免受污染，抵抗污染造成的严重影响，提供健康容颜的作用，使皮肤更好，减少暗哑的肤色。

在按照标准使用由Pol-5配制的乳膏4周后，70％以上的表达意见为满意的。大部分志愿者(74.5％)将此产品评为相当好(23.6％)、好(34.5％)或非常好(16.75)。其余志愿者中的大部分对产品给出了中性评价(21.8％)。

实施例12

含EPS的皮肤护理制剂

非限定地，本发明的多糖可包含在包括至少以下成分的制剂中：

水 QS.100％W/W

辛酸/癸酸甘油三酯 5％

甘油硬脂酸酯 4％

丙二醇 3％

肉豆蔻酸肉豆蔻酯 3％

聚山梨糖醇酯60 2％

碳酸二辛酯 2％

牛油树果(Butyrospermum Parkii) 1％

硬脂酸 1％

鲸蜡醇 1％

Phenonip 0.8％

脱水山梨糖醇硬脂酸酯 0.5％

卡波姆 0.15％

三乙醇胺 0.15％

聚二甲基硅氧烷 0.04％

香料 0.01％

多糖Pol-5 0.02％

。

Claims

1.一种皮肤护理组合物，其包含源自微生物席的至少一种胞外多糖(EPS)，所述EPS的浓度为所述组合物的约0.001％w/w至约1.5％w/w。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述微生物席是海洋微生物席。

3.如权利要求1或2所述的组合物，其中所述至少一种EPS是通过发酵分离自所述微生物席的微生物产生的。

4.如权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中所述至少一种EPS包括至少两种EPS，每种EPS源自从所述微生物席分离的不同微生物。

5.如权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中所述至少一种EPS包括至少两种EPS，每种EPS源自不同的微生物席。

6.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述微生物席来自法属波利尼西亚。

7.如权利要求1-6中任一项所述的组合物，其中所述至少一种EPS是经化学或物理修饰的。

8.如权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中所述至少一种EPS是经解聚的。

9.如权利要求1-6中任一项所述的组合物，其中所述至少一种EPS是天然EPS。

10.如权利要求1-9中任一项所述的组合物，其中所述至少一种EPS是被硫酸化、乙酸化、乳酸化、琥珀酸化或丙酮酸化的。

11.如权利要求1-10中任一项所述的组合物，其用于抗老化皮肤护理。

12.如权利要求1-10中任一项所述的组合物，其用于日晒后皮肤护理。

13.如权利要求1-10中任一项所述的组合物，其用于防晒皮肤护理。

14.如权利要求1-10中任一项所述的组合物，其用于预防或减少至少一种皮肤老化征象。

15.如权利要求14所述的组合物，其用于改进水合。

16.如权利要求14所述的组合物，其用于改进角质层的形态。

17.如权利要求14所述的组合物，其用于改进皮肤纹理。

18.如权利要求14所述的组合物，其用于改进脱皮。

19.如权利要求14所述的组合物，其用于改进角质形成细胞分化。

20.如权利要求14所述的组合物，其用于减少皮肤表面上的细菌粘附。

21.如权利要求20所述的组合物，其中细菌菌株是表皮葡萄球菌或金黄色葡萄球菌。

22.如权利要求14所述的组合物，其用于刺激衰老的人成纤维细胞产生透明质酸。

23.如权利要求14所述的组合物，其用于刺激表皮的总脂质合成。

24.如权利要求14所述的组合物，其用于刺激参与皮肤脱皮的至少一个基因的表达。

25.如权利要求25所述的组合物，其中所述基因是激肽释放酶5、激肽释放酶6或角质层胰凝乳蛋白酶。

26.如权利要求14所述的组合物，其用于刺激参与角质形成细胞分化的至少一个基因的表达。

27.如权利要求26所述的组合物，其中所述基因是丝聚蛋白、兜甲蛋白或总苞蛋白。

28.如权利要求14所述的组合物，其用于刺激转谷氨酰胺酶的表达。

29.如权利要求14所述的组合物，其用于减少受辐射的皮肤细胞的胞内脂质过氧化物。

30.源自微生物席的至少一种胞外多糖(EPS)在制备皮肤护理组合物中的应用。

31.如权利要求30所述的应用，其中所述皮肤护理组合物是抗老化皮肤护理组合物、日晒后皮肤护理组合物或防晒皮肤护理组合物。

32.源自微生物席的至少一种胞外多糖(EPS)在预防或减少至少一种皮肤老化征象中的应用。

33.如权利要求32所述的应用，其用于改进水合。

34.如权利要求32所述的应用，其用于改进角质层的形态。

35.如权利要求32所述的应用，其用于改进皮肤纹理。

36.如权利要求32所述的应用，其用于改进脱皮。

37.如权利要求32所述的应用，其用于改进角质形成细胞分化。

38.如权利要求32所述的应用，其用于减少皮肤表面上的细菌粘附。

39.如权利要求38所述的应用，其中细菌菌株是表皮葡萄球菌或金黄色葡萄球菌。

40.如权利要求32所述的应用，其用于刺激衰老的人成纤维细胞产生透明质酸。

41.如权利要求32所述的应用，其用于刺激表皮的总脂质合成。

42.如权利要求32所述的应用，其用于刺激参与皮肤脱皮的至少一个基因的表达。

43.如权利要求42所述的应用，其中所述基因是激肽释放酶5、激肽释放酶6或角质层胰凝乳蛋白酶。

44.如权利要求32所述的应用，其用于刺激参与角质形成细胞分化的至少一个基因的表达。

45.如权利要求44所述的应用，其中所述基因选自丝聚蛋白、兜甲蛋白和总苞蛋白组成的组。

46.如权利要求32所述的应用，其用于刺激转谷氨酰胺酶的表达。

47.如权利要求32所述的应用，其用于减少受辐射的皮肤细胞的胞内脂质过氧化物。

48.一种用于预防或减少受试者的皮肤老化征象的方法，所述方法包括向所述受试者的皮肤施用包含有效量的源自微生物席的至少一种胞外多糖(EPS)的组合物，从而预防或减少所述皮肤老化征象。