CN109431962B

CN109431962B - 一种浮游生物代谢物和浮游生物发酵液及其应用

Info

Publication number: CN109431962B
Application number: CN201811562221.2A
Authority: CN
Inventors: 蒲思凯; 周雯; 彭熙春; 符毅敏
Original assignee: Xianting Guangzhou Technology R & D Co ltd
Current assignee: Xianting (Guangzhou) technology R & D Co.,Ltd.
Priority date: 2018-12-19
Filing date: 2018-12-19
Publication date: 2021-10-29
Anticipated expiration: 2038-12-19
Also published as: CN109431962A

Abstract

本发明提供了一种浮游生物代谢物，所述浮游生物代谢物是以水生黄杆菌、根单胞菌和弯曲杆菌的混合菌体为发酵菌，以海藻多糖的水溶液为培养基进行发酵后得到的。本发明还提供了一种含有上述浮游生物代谢物的浮游生物发酵液，该浮游生物代谢物和浮游生物发酵液具有抗炎症，增肌降脂，重塑脸型和紧实肌肤的功效。

Description

一种浮游生物代谢物和浮游生物发酵液及其应用

技术领域

本发明具体涉及一种浮游生物代谢物和浮游生物发酵液及其应用。

背景技术

随着年龄的增加，尤其是30岁过后，人们的脸型会发生变化。这些变化除了和脂肪的重量增加，皮肤的纤维蛋白衰减相关。因此，与抗衰，提拉紧致以及V脸相关的产品需求也越来越多。使用了含浮游生物提取物作为活性成分的配方专利也有不少，大多与溶脂，提拉紧致功效相关。

浮游生物指的是在海洋、湖泊及河川等水域的生物中，自身完全没有移动能力，或者有也非常弱，因而不能逆水流而动，而是浮在水面生活的动物或是植物。浮游生物多种多样，特别是动物，几乎可以见到全部动物类群：体型微小的原生动物、藻类、细菌，也包括某些甲壳类、软体动物和某些动物的幼体。因此，浮游生物提取物的活性成分以及对应功效也应该是多种多样的。

在配方中添加了浮游生物提取物的发明专利较多：

一种减少体脂率及体脂反弹的组合物及其制备方法和应用，CN201810195182.0，组合物包括浮游生物提取物，鸢尾素，咖啡因，莲叶提取物，水解红藻提取物及寡肽-1。其中浮游生物提取物是萃取自黄体定鞭金藻富含不饱和脂肪酸，作用于白色脂肪细胞，诱导脂肪细胞表达UCP1，激活脂肪细胞褐色化，使脂肪逐步分解。

一种减肥霜，CN201711441977.7，公开了一种含有浮游生物提取物的减肥霜，效果显著，减少了肝肾压力，减肥后不易反弹。其中浮游生物提取物为百慕大的海绵中分离出芽孢杆菌属微生物，该生物含有肽类中含有肽类和糖类小分子物质，能够促进脂肪细胞分泌脂联素。

皮肤紧致组合物及其应用，CN201710442863.8，发明涉及一种皮肤紧致组合物包括透明质酸，水解胶原蛋白，肽及氨基酸类，浮游生物提取物等，针对皮肤松弛出现的皱纹和细纹进行全方位的修复，提升皮肤紧致和弹性，恢复年轻肌肤。浮游生物提取物来自于珊藻这种单细胞藻，具有均匀肤色，增强线粒体活性，平滑肌肤的功能。

一种含有浮游生物的精华素及其在化妆品中的应用-CN201610036894.9，精华素含有浮游生物提取物，毛果一枝黄花提取物，啤酒花提取物，小米椒果提取物，假叶树根提取物，精华素可以作用于脂肪细胞，促进脂肪分解，改善局部微循环障碍，用于消除水肿到达瘦身的效果。其中浮游生物提取物可通过促进解耦联蛋白的表达，刺激白色脂肪褐变，加速机体生热过程，促进脂肪分解。

一种活性生物酶调理原液，CN201510942356.1，公开了多种乳杆菌及双歧杆菌复配，加上浮游生物提取物，白芨根，黄芩，积雪草，甘草，虎杖，母菊等制作的原液，用于痘痘肌与敏感肌，改善肌肤敏感，粗糙与淡化痘印。

化妆品组合物，CN201510882539.9，公开了用于去角质、减少或消除由于去角质引起的刺激，增加皮肤光泽、舒缓皮肤或增加皮肤光滑度的成分组合。包含水，4-叔丁基环己醇，浮游生物提取物，芦苇提取物，茯苓提取物和西葫芦籽提取物。其中浮游生物提取物是来源于溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和属于海洋浮游生物(Thalassoplankto)家族的微生物合成的表多糖或胞外多糖。对皮肤提供脂肪酸，抗氧化剂和锌，减少皮肤的炎症和保护皮肤以防止晒伤。

但是脸型变化还有一个重要因素是：与肌肉衰减综合征(sarcopenia)有关，脸部的相关肌肉功能减弱会引起脸型的变化及衰老，即：颧大肌，咬肌，笑肌，降口角肌。

肌肉衰减综合征是与增龄相关的进行性骨骼肌量减少、伴有肌肉力量和(或)肌肉功能减退的综合征。通常为了缓解肌肉衰减症，一是需要加强营养补充蛋白质，二是需要加强运动锻炼增强肌肉功能。

为了在缓解肌肉衰减症方面有突破性的发现。我们从海洋出发来进行探索。一些深海物种，比如水母和海星，在受伤后会难以置信地自我再生。有些种类的海星有能力再生失去的触角组织，并能在一定时间内再生一个全新的触角组织。

研究人员通过一种叫做抑制PCR-增强型减色杂交的方法，筛选了几十个基因，对再生海星基因表达的进一步研究，9个新的cDNAs在海星再生过程中差异表达。并且发现了这9个cDNAs，这些基因或基因片段存在于再生的海星中，而不是完整无损的海星中。其中一种基因叫做海星再生相关蛋白酶(SRAP)，它的DNA序列与人体中发现的纤溶酶(PLASMIN)的基因类似，纤溶酶(PLASMIN)是人体内发现的一种蛋白质。纤溶酶(PLASMIN)在胚胎发育过程中起到塑造身体形状、创伤修复、再生等重要作用。

我们通过推测，得到一个假设：海星的修复能力与其进食浮游生物的代谢产物有关。我们运用海洋仿生学原理进行模拟浮游生物的代谢物的生成，并进行了相应体内体外测试验证，证实其具有促进人体纤溶酶的合成的作用。

同时，氧化应激，慢性炎症和线粒体功能障碍加速肌减少症的发生。炎症通路FOX-O1，MAPK p38，NF-κB和ERK是肌减少症的主要原因，我们的发酵代谢产物可以抑制3个主要涉及肌减少症形成的炎症介质基因的表达。

我们筛选使用三种来自冲绳海的独特浮游细菌：水生黄杆菌属(Flavobacteriumaquatile)，根单胞菌属(Rhizomonas suberifaciens)，弯杆菌属(Flectobacillus sp.)，通过发酵得到富含维生素，矿物质及氨基酸等代谢物的浮游生物发酵液。该浮游生物发酵液具有抗炎症，增肌降脂，重塑脸型，紧实肌肤的功效。

上述提及的现有浮游生物提取物均未涉及到仿生发酵技术，和本发明无论从技术以及功效上面均不同。具体来说：

一种减少体脂率及体脂反弹的组合物及其制备方法和应用，CN201810195182.0，一种减肥霜，CN201711441977.7，一种含有浮游生物的精华素及其在化妆品中的应用-CN201610036894.9，其中浮游生物提取物具有分解脂肪的作用。

皮肤紧致组合物及其应用，CN201710442863.8，浮游生物提取物具有均匀肤色，增强线粒体活性，平滑肌肤的功能。

一种活性生物酶调理原液，CN201510942356.1，未提及浮游生物提取物的实际作用。

化妆品组合物，CN201510882539.9，涉及的浮游生物提取物对皮肤提供脂肪酸，抗氧化剂和锌，减少皮肤的炎症和保护皮肤以防止晒伤。

发明内容

本发明提供了一种浮游生物代谢物，本发明还提供了含有该浮游生物代谢物的浮游生物发酵液，并使用浮游生物发酵液应用在配方中，实现了重塑脸部轮廓，提拉紧致肌肤的作用。

为实现上述目的，所采取的技术方案：一种浮游生物代谢物，所述浮游生物代谢物是以水生黄杆菌、根单胞菌和弯曲杆菌的混合菌体为发酵菌，以海藻多糖的水溶液为培养基进行发酵后得到的。

本发明提供了一种浮游生物发酵液，所述浮游生物发酵液是以水生黄杆菌属、根单胞菌属细菌和弯杆菌属细菌的混合菌体为发酵菌，以海藻多糖的水溶液为培养基进行发酵后灭菌、过滤得到的滤液。

本发明选择的三种细菌是从深海浮游生物中发现的，通过基因表达平台筛选了100多种细菌后最后得到的。将三种细菌进行复配要优于其中的一种或两种复配，这三种细菌复配后产生的代谢产物具有最强的活性，即可以最大化地激活细胞再生基因的表达。

优选地，所述海藻多糖为紫球藻多糖。优选地，所述发酵温度为35-40℃，发酵时间为1天至7天。更优选地，所述发酵温度为37℃，发酵时间为5天。

本发明提供了一种具有抗炎症、增肌降脂、重塑脸型或紧实肌肤功效的液体，所述液体包括以下组分：上述所述浮游生物发酵液和溶剂。

优选地，所述液体包括以下重量百分比的组分：90％的上述所述浮游生物发酵液，10％的溶剂。上述重量百分比为最佳重量百分比，根据上述重量百分比配置的液体在抗炎症、增肌降脂、重塑脸型或紧实肌肤方面最具活性以及稳定性最佳。

优选地，所述溶剂为1,3-丁二醇。本发明测试了超过20种溶剂，其中在抗炎症、增肌降脂、重塑脸型或紧实肌肤方面选择1,3-丁二醇作为溶剂显示出最好的活性。

本发明提供了一种具有抗炎症、增肌降脂、重塑脸型或紧实肌肤功效的化妆品，所述化妆品含有上述所述的浮游生物代谢物、上述所述的浮游生物发酵液或者上述所述的液体。

优选地，所述液体在所述化妆品中的重量百分比为2％。

优选地，所述化妆品为膏霜、乳液、化妆水或面膜。

本发明提供了上述所述的浮游生物代谢物、上述所述的浮游生物发酵液或上述所述的液体在制备化妆品中的应用。

有益效果：本发明提供了一种浮游生物代谢物，本发明还提供了一种含有该浮游生物代谢物的浮游生物发酵液，该浮游生物发酵液具有抗炎症，增肌降脂，重塑脸型和紧实肌肤的功效。

附图说明

图1为本发明浮游生物发酵液对炎症细胞的信号强度变化。

图2为本发明浮游生物发酵液对脂肪细胞脂质积累的影响。

图3为本发明浮游生物发酵液对面部肌肉的影响。

图4为本发明浮游生物发酵液对胶原密度的影响。

图5为本发明浮游生物发酵液对胶原碎片的影响。

图6为本发明浮游生物发酵液对下颌弯曲角度变化的影响。

图7为本发明浮游生物发酵液对下巴表面积变化的影响。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

本发明通过观察推断海星受伤后的再生机制，发现其再生关键可能来源于它的食物，即浮游生物的代谢物。故我们运用海洋仿生学原理进行模拟浮游生物的代谢物的生成。筛选使用三种来自冲绳海的独特浮游细菌：水生黄杆菌属(Flavobacterium aquatile)，根单胞菌属(Rhizomonassu berifaciens)，弯杆菌属(Flectobacillus sp.)，优化发酵条件后以紫球藻多糖的水溶液为培养基，通过在37摄氏度下，9升容器中经过5天发酵后，将发酵液灭菌、过滤，得到滤液，即为富含维生素，矿物质及氨基酸等代谢物的浮游生物发酵液。该浮游生物发酵液具有抗炎症，增肌降脂，重塑脸型，紧实肌肤的功效。

用于发酵过程的细菌是从与冲绳海中的浮游生物共生的浮游细菌中提取筛选的。这些浮游细菌生活在深海水域，其多样性是根据海洋的深度和位置而变化的，它们会分泌特殊的活性代谢物。

使用了3种来自冲绳海的独特浮游细菌：

水生黄杆菌(Flavobacterium aquatile)

根单胞菌(Rhizomonas suberifaciens)

弯曲杆菌(Flectobacillus sp.)

将浮游生物发酵液制成液体AQUAFORTE V：

成分：90wt％浮游生物发酵液，10wt％1,3-丁二醇

外观：透明的淡黄色液体

pH：2.0-3.0；它是一种非常浓缩的产品，含有发酵过程中自然产生的天然酸。

实施例2

本发明通过浮游生物发酵液与不同溶剂复配组合以优选出在不含防腐剂时浮游生物溶液的防腐性、功效性、稳定性及温和性的最佳溶剂比例。

测试过程如下表1：

表1复配方案

稳定性测试：

测试组1：浮游生物发酵液：1,3-丁二醇为(90：10)时承载的浮游生物提取物浓度最高，且防腐测试，稳定性测试都能通过。

测试组2：浮游生物发酵液：1,2-丙二醇为(92：8)时承载的浮游生物提取物浓度最高，且防腐测试，稳定性测试都能通过。

测试组3：浮游生物发酵液：甘油为(80：20)时承载的浮游生物提取物浓度最高，且防腐测试，稳定性测试都能通过。

测试组4：浮游生物发酵液：二丙二醇为(85：15)时承载的浮游生物提取物浓度最高，且防腐测试，稳定性测试都能通过。

测试组5：浮游生物发酵液：1,2-戊二醇为(90：10)时承载的浮游生物提取物浓度最高，且防腐测试，稳定性测试都能通过。

测试组6：浮游生物发酵液：酒精为(92：8)时承载的浮游生物提取物浓度最高，且防腐测试，稳定性测试都能通过。

从以上测试中将承载浮游生物发酵液浓度较高的测试组1、测试组2、测试组5和测试6的优选比例组再进行皮肤刺激性测试：

测试方法：鸡胚实验

测试浓度：将测试组稀释成含10wt％浮游生物发酵液的溶液。

测试结果按过敏严重程度分级：Ⅰ级(严重过敏)Ⅱ级(明显过敏)Ⅲ级(中度过敏)Ⅳ级(轻微过敏)Ⅴ(无过敏)。

测试结果如下表：

以上测试优选得到最佳溶剂组为：90wt％浮游生物发酵液：10wt％1,3-丁二醇。

功效验证测试：

体外测试：

1.炎症细胞的信号强度

通过western plot方法测量激酶和转录因子细胞信号强度，并与β-肌动蛋白作为缓冲液比较。将巨噬细胞和成纤维细胞培养24h，结果如图1所示：

第1组：安慰剂vs第2组：AQUAFORTE V(90wt％的浮游生物发酵液，10wt％的1,3-丁二醇)溶液，含10wt％浮游生物发酵液。

图1中细胞信号强度变化如下：

-MAPK p38：25％

-NF-κB转录因子：50％

-ERK细胞外信号调节激酶：33％

从图1可知，本发明浮游生物发酵液有效降低了细胞信号强度。

2.降脂

将3T3-L1成熟的脂肪细胞与AQUAFORTE V(90wt％的浮游生物发酵液，10wt％的1,3-丁二醇)(10^-9M)培养48小时。同时，在缺乏AQUAFORTE V(90wt％的浮游生物发酵液，10wt％的1,3-丁二醇)脂质的情况下对成熟脂肪细胞中进行培养。通过使用ORO工作液进行染色，并测定510nm的吸光度，结果如图2所示。

从图2可知，本发明浮游生物发酵液明显降低了成熟3T3-L1脂肪细胞中的细胞内甘油三酯含量，显着降低35％。

体内测试：

方案：

-8周双盲临床试验，安慰剂对照

-40名志愿者，25至50岁的女性

-参与者随机分为2组

·第1组：安慰剂

·含2wt％AQUAFORTE V(90wt％的浮游生物发酵液，10wt％的1,3-丁二醇)的膏霜每天一次

在这项研究中控制的参数：

机制演示

-在第0、4和8周时胶原密度和胶原蛋白断裂

-和8周时面部肌肉的体积

脸部轮廓测量

-在第0、2、4和8周测量下巴的倾斜角度

-在第0、2、4和8周测量下巴表面积

-观察2周后皮肤形状和结构的变化

1、增加面部肌肉体积

通过MRI(核磁共振)定量分析4块肌肉的体积：颧大肌、咬肌、笑肌、降口角肌。

在8周后，AQUAFORTE V(90wt％的浮游生物发酵液，10wt％的1,3-丁二醇)有效地增加了颧大肌、咬肌、笑肌和降口角肌的体积，分别为4.2％，3.1％，3.4％和2.9％，而安慰剂组则没有显著的变化，如图3所示。

2、对皮肤深层胶原密度的影响(体内)

使用超声波检查评估胶原密度,使用RCM(反射共聚焦显微镜)评估胶原碎片。

结果如图4和图5：

-胶原密度增加9.1％

-8周后胶原碎片减少19.6％

-安慰剂组无明显变化

3.改善下巴的倾斜角度

结果如图6和图7：

与安慰剂相比，下巴倾斜角度明显提高了1.9％。

与安慰剂相比，下巴的表面积明显减少了9.9％。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.一种具有抗炎症、增肌降脂或紧实肌肤功效的液体，其特征在于，所述液体包括以下组分：浮游生物发酵液和溶剂；

所述浮游生物发酵液是以水生黄杆菌Flavobacterium aquatile、根单胞菌Rhizomonas suberifaciens和弯曲杆菌Flectobacillus sp.的混合菌体为发酵菌，以海藻多糖的水溶液为培养基进行发酵后灭菌、过滤得到的滤液；

所述海藻多糖为紫球藻多糖，所述发酵的发酵温度为35-40℃，发酵时间为1天至7天。

2.根据权利要求1所述的液体，其特征在于，所述液体包括以下重量百分比的组分：90%的所述浮游生物发酵液，10%的溶剂。

3.根据权利要求1所述的液体，其特征在于，所述溶剂为1,3-丁二醇。

4.如权利要求1-3任一项所述的液体在制备化妆品中的应用。

5.一种具有抗炎症、增肌降脂或紧实肌肤功效的化妆品，其特征在于，含有如权利要求1-3任一项所述的液体。

6.根据权利要求5所述的化妆品，其特征在于，所述液体在所述化妆品中的重量百分比为2%。

7.根据权利要求5所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品为膏霜、乳液、化妆水或面膜。