KR101211652B1 - 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물로, 피부 미백 효과, 피부 탄력 개선 효과가 우수하고, 피부 보습효과, 세포활성화 효과가 우수하여 피부 재생 및 상처 치유 효능이 뛰어나며 자극완화 효과가 있는 다기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing the smashed material or extract of fish eyeball}
본 발명은 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 함유한 다기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.
최근에는 천연물을 소재로 한 화장품이 인체안정성, 피부자극완화 등의 이유로 소비자에게 각광을 받고 있으며, 이에 따라 화장품 원료로서 천연물에 대한 다양한 연구가 이루어지고 있는 실정이다.
이에 따라 어류를 화장품 원료로 이용하려는 연구가 이루어지고 있는데, 이와 관련하여 대한민국 공개특허 제10-1999-0033721호(어류로부터의 수용성 COLLAGEN 추출방법 및 기능성 COLLAGEN 화장품과 COLLAGEN 발효 음료의 제조 방법)에 어류 껍질, 머리 부분, 뼈, 내장 등에서 콜라겐을 추출, 분리하는 방법이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제10-0760875호(멜라닌 생성 억제 피부미백용 화장품 조성물)에 어피로부터 젤라틴을 추출하는 방법이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제10-0986603호(어류 정액 또는 알로부터 분리된 ＤＮＡ 중합체 단편복합체 및 그의 제조방법)에는 어류 정액 또는 알로부터 분리된 DNA 단편 혼합물을 포함하는 화장료 조성물이 개시되어 있다.
한편, 참다랑어(Thunnus thynnus(Linnaeus))는 농어목 고등어과의 바닷물고기이다. 강원도에서는 참치라고 불린다. 북대서양에 서식하는 종의 경우 최대 몸길이 3m, 몸무게 560kg 정도까지 성장한다. 몸은 뚱뚱하고 방추형에 가까우며 몸높이는 약간 높은 편이다. 주둥이는 길고 끝이 뾰족하며 입은 크다. 몸 등 쪽은 짙은 푸른색을 띠며 몸쪽의 중앙과 배 쪽은 은회색 바탕에 여러 개의 폭이 좁은 가느다란 흰색 가로띠와 둥근 무늬가 나타난다. 어릴 때에는 폭이 좁은 가로띠와 둥근 무늬가 희미하게 있다가, 자라면서 점차 없어진다. 작은 둥근 비늘이 몸 전체를 덮고 있다. 백다랑어와 생김새가 비슷하지만, 가슴지느러미가 짧은 것이 참다랑어이다. 해수면 바로 아래에서 헤엄치며, 때때로 연안 가까이에 나타나기도 한다. 봄, 여름에는 북쪽으로 이동하고, 가을에는 남쪽으로 이동한다. 무리지어 다니는 멸치, 꽁치, 청어 등을 주로 먹으며, 새우류, 게류, 오징어류, 해파리류 등을 먹기도 한다. 산란기는 대만 근해에서는 4~6월, 우리나라 동해에서는 8월이며, 주 산란장은 우리나라 동해 남부 해역과 대만 북부 해역이다. 참다랑어에는 단백질과 아미노산이 풍부하고, 불포화 지방산인 오메가-3가 풍부하며 비타민과 셀레늄 등의 미량원소 등도 다량 함유하고 있으며 참다랑어의 눈에도 오메가-3와 단백질, 수분 등이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다.
고등어(Scomber japonicus)는 농어목의 고등어과의 바닷물고기로 등 쪽은 암청색을 띠고 배 쪽은 은백색을 띠고 있다. 몸은 길고 방추형으로 약간 측편되어 있다. 눈은 크며 기름 눈까풀이 잘 발달되어 있으며 동공부위는 노출되어 있다. 두 눈 사이는 편평하다. 위턱의 뒤끝은 동공 중앙 아래에 달한다. 등지느러미는 2개로 멀리 떨어져 있고, 기저 길이는 비슷하지만 높이는 제1 등지느러미가 더 높다. 가슴지느러미는 체측의 중앙에 위치하며 비교적 작다. 뒷지느러미는 제2 등지느러미와 대칭적인 위치에 있다. 등지느러미와 뒷지느러미 후방으로 5개씩의 토막 지느러미가 있고, 꼬리자루는 매우 잘록하다. 꼬리지느러미는 잘 발달된 가랑이형이다. 제1 등지느러미는 제2가시가 가장 길다. 몸 등 쪽은 암청색을 띠며 중앙에서부터 배쪽으로는 은백색을 띤다. 몸 등 쪽에는 청흑색의 물결무늬가 측선에까지 분포한다. 등지느러미는 투명하지만 흑색소포가 산재하여 어둡게 보이며, 가슴지느러미 기저부는 희지만 기저부의 상반부 윗 가장자리 및 후반부는 검다. 배지느러미와 뒷지느러미는 무색 투명하며, 꼬리지느러미는 회색을 띠지만 바깥쪽 가장자리가 검다. 최대 체장 50cm 까지 성장하나, 일반적으로 30cm 범위이다.
한국에는 고등어속 어류 2종이 알려져 있는데 고등어와 유사종으로 망치고등어가 있다. 망치고등어는 체측의 중앙을 따라 둥근 암청색의 무늬가 산재하여 잘 구별되지만 고등어와 망치고등어의 중간 형태를 띈 개체변이가 관찰되어 자세한 연구가 요망된다. 한편 망치고등어는 1번째 등지느러미의 3～4번째 가시가 가장 길어 고등어와 잘 구별된다. 서식 수심은 0~300 m이다. 부어성 어종으로 표층 또는 표층으로부터 300m 이내의 중층에 서식한다. 3cm 이상 성장하면 크기별로 군집을 이루어 생활한다. 북동태평양에서는 다른 어종들과 함께 군집을 이루어 이동하기도 한다. 한국, 전 대양의 열대, 온대 해역 등에 분포한다. 동중국해 등에서 채집된다. 산란은 수온 15～20℃에서 이루어지며, 지역에 따라 약간의 차이를 보인다. 계절회유를 하며, 북반구에 서식하는 종은 수온이 상승하는 여름철에 북쪽으로 이동을 하고 겨울철에는 남쪽으로 이동하여 산란한다. 먹이는 요각류, 갑각류, 어류, 오징어류 등을 먹으며, 군집을 이루어 사는 다른 어종과 먹이 경쟁을 한다. 고등어에는 오메가-3의 일종인 DHA와 EPA가 풍부하며, 칼슘, 철분, 칼륨, 비타민 B2, 비타민 D 등이 다량 함유되어 있고 단백질과 아미노산이 풍부한 것으로 알려져 있다.
이와 같이 참다랑어 또는 고등어는 각종 영양이 풍부하지만, 아직까지 이러한 참다랑어 또는 고등어, 특히 참다랑어 또는 고등어의 눈(안구)를 화장료 원료로 이용한 예는 전혀 없는 실정이다.
본 발명은 피부 화장료에 적용이 가능하고 인체에 무해하여 안전성이 우수한 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 이용하여 피부 미백 효과, 피부 보습 효과, 피부 탄력 개선 효과가 매우 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 이용하여 세포활성화 효과가 우수하여 피부 재생 및 상처 치유 효능이 뛰어나고 자극완화 효과도 매우 뛰어난 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.
이하에서는 본 발명의 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물, 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 대하여 자세히 설명하겠다.
본 발명은 화장료 조성물의 유효성분으로서 어류의 눈, 즉, 안구를 사용하는 것을 특징으로 한다. 이와 같이 본 발명은 효율적으로 활용되지 못하고 폐기물로 버려지는 참다랑어 또는 고등어의 눈을 이용하기 때문에 폐자원을 활용할 뿐만 아니라 2차적인 환경문제를 예방할 수 있다는 이점이 있다.
여기서, 어류의 눈은 참다랑어 또는 고등어 중 1종 이상의 어류의 눈(안구)을 사용하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 신선한 참다랑어 또는 고등어를 급냉한 후 육질과 분리하여 얻어진 냉동된 어류 눈(안구)을 사용한다.
본 발명은 상기 어류 눈의 파쇄물을 유효성분으로 함유하는데, 여기서 어류 눈의 파쇄물을 얻는 방법은 특별히 한정되는 것은 아니며 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상 사용되는 방법을 사용할 수 있다. 예를 들면, 상기 냉동된 어류 눈을 파쇄기, 예를 들면 믹서나 호모게나이져를 이용하여 파쇄시킨 것을 사용할 수 있는데, 바람직하게는 인체 내부에 흡수가 용이한 1㎛ 내지 5㎜크기로 균질하게 처리되는 것이 좋다.
또한, 본 발명은 상기 어류 눈의 추출물을 유효성분으로 함유하는데, 여기서 어류 눈의 추출물을 얻는 방법은 특별히 한정되는 것은 아니며 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 다양한 추출 방법을 이용할 수 있다. 예를 들면, 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 헥산의 용매를 각각 단독으로 또는 이들을 2종 이상 혼합한 용매를 추출 용매로 이용하여 추출할 수 있다.
또한, 본 발명의 어류 눈의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라 다른 방법으로 추출된 추출물도 포함한다. 예컨대, 초고압 추출법에 의한 추출; 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리; 다양한 크로마토그래피, 예를 들어 크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 크로마토그래피에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 어류 눈의 추출물에 포함되는 것이다.
본 발명은 어류의 눈을 초고압 추출법을 이용하여 초고압 추출하는 경우, 바람직하게는 압력 100～3000MPa, 온도 40～90℃에서 5～60분간 처리하며, 더욱 바람직하게는 압력 500～1000MPa, 온도 40~60℃에서 10～30분간 처리하는 것이 좋다. 또한, 초고압 추출시 pH는 특정 pH에 한정하는 것은 아니나, 바람직하게는 초고압기 내부 물의 pH를 1～6으로 낮춰 처리하는 것이 좋다. 또한, 본 발명은 이와 같이 초고압 처리한 참다랑어 또는 고등어의 눈 추출물을 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 헥산 및 그의 혼합물로부터 선택된 추출용매를 이용하여 환류 추출하고 냉침한 후, 여과시킨 여과액을 농축조로 이송하여 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하는 것이 바람직하다. 본 발명은 이렇게 얻어진 감압농축물 및 동결건조물이 0.001 ~ 70.0 중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출물을 제조할 수 있다.
또한, 본 발명의 어류 눈의 추출물은 상기 추출물을 일부 또는 전부 농축하여 얻은 농축물, 또는 다시 그 농축물을 건조시켜 제조한 추출 엑기스 및 추출물 중에 함유되고 있는 주 효과를 발휘하는 화학물질 그 자체를 포함한다.
이와 같이 얻어진 본 발명의 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물은 멜라닌 생성 억제 효과, 항콜라게나제/젤라티나제 활성효과, 자외선 조사 후 MMP-1 발현억제효과, 자외선 조사에 의한 세포독성 완화효과, 피부 보습효과, 피부탄력효과, 자극완화효과, 상처치유효과가 매우 뛰어나 피부 미백, 피부 탄력강화 또는 피부 보습효과를 복합적으로 나타내는 다기능성 화장료 조성물로 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 조성물 총중량에 대해 0.0001 ~ 90중량% 함유하는 것이 좋은데, 0.0001중량% 미만으로 첨가하는 경우에는 그 효과를 기대하기 힘들고, 90중량%를 초과하여 첨가되는 경우에는 뚜렷한 효능 효과의 상승이 보이지 않는다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다. 예를 들면, 노화방지 성분, 주름개선 성분, 미백 성분, 보습 성분 및 항균 성분 등을 더욱 함유할 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제 예컨대 친수성 또는 친유성 겔화제, 친수성 또는 친유성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제, 염료 등을 함유할 수 있다. 이들 다양한 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예컨대 조성물 총중량에 대해 0.0001 내지 30중량%이다. 다만, 어떠한 경우라도 보조제 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 것이다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물의 제형은 특정의 종류에 한정되는 것은 아니나, 일예로 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초 화장료 제형과 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조 화장료 제형 중에서 선택되는 어느 하나의 외관을 가질 수 있다. 또한, 이는 선택적으로 에어로졸 형태로 피부에 적용될 수도 있고, 고체 형태 예컨대, 스틱의 형태일 수도 있다. 이는 피부용 케어 제품 및/또는 메이크업 제품으로서 사용될 수도 있다.
이와 같이 제조된 본 발명의 화장료 조성물은 피부 미백 효과, 피부 탄력 개선 효과, 피부 보습효과가 매우 우수하고, 세포활성화 효과가 우수하여 피부 재생 및 상처 치유 효능이 뛰어나며 자극완화 효과가 있어 다기능성 화장료 조성물로 이용될 수 있다.
본 발명에 의하면 피부 화장료에 적용이 가능하고 인체에 무해하여 안전성이 우수한 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 제공할 수 있다.
또한, 본 발명은 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 이용하여 피부 미백 효과, 피부 보습 효과, 피부 탄력 개선 효과가 매우 우수한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.
또한, 본 발명은 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 이용하여 세포활성화 효과가 우수하여 피부 재생 및 상처 치유 효능이 뛰어나고 자극완화 효과도 매우 뛰어난 화장료 조성물을 제공할 수 있다.
이하, 본 발명에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지 모두 포함한다.
실시예 1, 6 : 참다랑어 또는 고등어 눈의 파쇄물 제조
신선한 참다랑어 또는 다랑어를 급냉한 후 육질과 분리하여 안구를 얻은 후 냉동시켰다. 냉동된 참다랑어 눈을 호모게나이져를 이용하여 균질하게 파쇄하였다.
실시예 2, 7 : 참다랑어 또는 고등어 눈의 추출물 제조
신선한 참다랑어 또는 고등어를 급냉한 후 육질과 분리하여 얻어진 냉동된 눈을 70% 에탄올 수용액을 이용하여 100 ~ 120℃에서 약 2 ~ 3시간 동안 추출하였다.
실시예 3, 8 : 참다랑어 또는 고등어 눈의 추출물 제조
신선한 참다랑어 또는 고등어를 급냉한 후 육질과 분리하여 얻어진 냉동된 눈에 초고압처리기를 이용하여 압력 1000MPa 하에서 온도를 50℃로 승온시키고 30분간 처리한 후 실온으로 냉각시켰다. 초고압 처리한 참다랑어 눈 추출물을 정제수를 이용하여 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #10 여과지로 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 0.25uM의 여과기를 이용하여 최종 여과하였다. 여과가 완료되면 얻어진 여과액을 농축조로 이송하여 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 얻어진 감압농축물 및 동결건조물이 0.001~70.0 중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중 1종 이상의 용매를 사용하여 최종 추출물을 제조하였다.
실시예 4, 9 : 참다랑어 또는 고등어 눈의 추출물 제조
초고압 처리한 참다랑어 눈 추출물을 70%(v/v) 에탄올 수용액으로 환류 추출하는 것을 제외하고는 상기 실시예 3, 8과 동일하게 참다랑어 눈의 추출물을 제조하였다.
실시예 5, 10 : 참다랑어 또는 고등어 눈의 추출물 제조
초고압 처리한 참다랑어 눈 추출물을 30%(v/v) 부틸렌글리콜로 환류 추출하는 것을 제외하고는 상기 실시예 3, 8과 동일하게 참다랑어 눈의 추출물을 제조하였다.
비교예 1 : 소 눈의 파쇄물의 제조
참다랑어 또는 고등어 대신에 소 눈을 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일하게 소 눈의 파쇄물을 제조하였다.
비교예 2 : 소 눈의 추출물의 제조
참다랑어 또는 고등어 대신에 소 눈을 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 소 눈의 추출물을 제조하였다.
비교예 3 : 소 눈의 추출물의 제조
참다랑어 또는 고등어 대신에 소 눈을 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 3과 동일하게 소 눈의 파쇄물을 제조하였다.
비교예 4 : 소 눈의 추출물의 제조
참다랑어 또는 고등어 대신에 소 눈을 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 4과 동일하게 소 눈의 파쇄물을 제조하였다.
비교예 5 : 소 눈의 추출물의 제조
참다랑어 또는 고등어 대신에 소 눈을 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 5와 동일하게 소 눈의 파쇄물을 제조하였다.
시험예 1 : B16F1 멜라노싸이트를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정
본 시험예는 상기 실시예 1 내지 10 및 비교예 1 내지 5에서 수득한 파쇄물 또는 추출물들의 미백효과를 확인하기 위해, B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 측정하였다.
본 시험예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 시험예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC (American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다.
B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 6-웰 플레이트에 각 웰당 2 x 106 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 trypsin-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다.
세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan : Cancer Res ., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1 ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH (10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 수학식 1에 의하여 계산하였으며, IC50값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.
Figure 112012039257610-pat00001
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양
B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양
B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제효과를 시험한 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
멜라닌 생성 억제효과(IC50)
실시예 1(참다랑어 눈의 파쇄물) 0.30
실시예 2(참다랑어 눈의 추출물) 0.31
실시예 3(참다랑어 눈의 추출물) 0.38
실시예 4(참다랑어 눈의 추출물) 0.25
실시예 5(참다랑어 눈의 추출물) 0.32
실시예 6(고등어 눈의 파쇄물) 0.35
실시예 7(고등어 눈의 추출물) 0.34
실시예 8(고등어 눈의 추출물) 0.40
실시예 9(고등어 눈의 추출물) 0.33
실시예 10(고등어 눈의 추출물) 0.36
비교예 1(소 눈의 파쇄물) 0.51
비교예 2(소 눈의 추출물) 0.50
비교예 3(소 눈의 추출물) 0.75
비교예 4(소 눈의 추출물) 0.42
비교예 5(소 눈의 추출물) 0.55
알부틴 0.33
상기 표 1에 나타나는 바와 같이, 참다랑어 또는 고등어 눈의 파쇄물 또는 추출물은 소 눈의 파쇄물 또는 추출물에 비해 월등하게 높은 멜라닌 생성 억제효과를 나타냈으며, 기존의 미백제인 알부틴과 동등 이상의 멜라닌 생성 억제효과를 나타내었다.
시험예 2 : in vitro MMP -1 inhibition assay
본 시험예에서는 상기 실시예 1 내지 10, 비교예 1 내지 5의 파쇄물 또는 추출물에 대하여 기질 금속단백질분해효소(MMP-1) 저해 활성을 생화학적 모델에서 측정하였는데, 이는 정제된 콜라게나제 및 이의 기질인 플루오레세인에 접합된 콜라겐과 젤라틴의 이용을 기초로 한다(EnzChek(상표명) 젤라티나제/콜라게나제 키트, 몰큘라 프루브).
클로스트리디움 히스토리티컴으로부터 정제된 콜라게나제를 상기 EnzChek(상표명) 젤라티나제/콜라게나제 키트내에 공급하였다. 돼지 피부로부터 정제하고 플로오레세인에 접합된 DQ-콜라겐과 0.05M 트리스-HCl, 0.15M NaCl, 5mM CaCl2 및 0.2mM 나트륨 아지드(pH 7.6)로 이루어지는 반응 완충액은 EnzChek(상표명) 젤라티나제/콜라게나제 키트(몰큘라 프로브스)를 이용하였다. 상기 실시예 1 내지 10, 비교예 1 내지 5의 파쇄물 또는 추출물들은 상기 반응 완충액 내에 용해시켰다. 이를 0.02; 0.04%(w/v)에서 테스트하였다. 테스트의 희석액은 25ug/ml의 DQ-콜라겐 및 0.1U/ml의 콜라게나제와 함께 실온에서 15분, 45분, 120분 동안 항온처리하였다.
각각의 실험조건에서 콜라게나제와 DQ-콜라겐 혼합물에 상응하는 대조용 혼합물(control)도 동일하게 항온처리하였다.
또한 각각의 실험 조건에서 Blank, 이하 '효소 비함유 blank'이라 칭하는 샘플은 DQ-콜라겐의 존재 및 콜라게나제의 부재하에서 항온처리하였다. 각각의 실험은 3회 수행하였다.
15분, 45분, 120분 경과 후 DQ-콜라겐의 분해에 상응하는 신호는 형광측정기 (여기:485nm, 방출 505nm)로 측정하였다.
‘효소 비함유 blank' 형광값을 기준으로 하여 각각의 샘플의 형광값을 측정하였다. 결과는 샘플당 형광 단위 및 대조군에 대한 변이율(%)로 나타냈다.
저해율(%)
처리농도 0.02%		 저해율(%)
처리농도 0.04%
실시예 1(참다랑어 눈의 파쇄물) 50 60
실시예 2(참다랑어 눈의 추출물) 53 62
실시예 3(참다랑어 눈의 추출물) 42 51
실시예 4(참다랑어 눈의 추출물) 60 68
실시예 5(참다랑어 눈의 추출물) 54 61
실시예 6(고등어 눈의 파쇄물) 50 58
실시예 7(고등어 눈의 추출물) 51 59
실시예 8(고등어 눈의 추출물) 44 52
실시예 9(고등어 눈의 추출물) 58 65
실시예 10(고등어 눈의 추출물) 51 60
비교예 1(소 눈의 파쇄물) 37 43
비교예 2(소 눈의 추출물) 38 44
비교예 3(소 눈의 추출물) 34 40
비교예 4(소 눈의 추출물) 41 47
비교예 5(소 눈의 추출물) 38 44
레티놀 0 5
녹차 추출물 46 55
상기 표 2에 의하면, 0.02, 0.04%(v/v)에서 테스트된 눈의 파쇄물 또는 추출물들은 투여량 의존성으로 항콜라게나제/젤라티나제 활성을 보유하였다. 또한, 참다랑어 또는 고등어 눈의 파쇄물 또는 추출물은 0.04% 처리 시 각각 클로스트리디움 콜라게나제의 콜라겐 분해활성의 약 52% ~ 68%를 억제하였으며 이는 녹차추출물의 저해 효과보다 매우 우수한 것으로 확인되었다.
시험예 3 : 자외선 조사 후 MMP -1 발현억제 평가
본 시험예에서는 상기 실시예 1 내지 10 및 비교예 1 내지 5의 파쇄물 또는 추출물들의 UV 조사 및 시료 첨가 후 MMP-1 농도를 측정하기 위해서 ELISA를 실시하였다.
UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 5J/㎠의 에너지로 조사하였다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비 실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간 유지하였다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이고 UVA를 조사한 후 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양 후 배지를 회수하여 96-웰 플레이트에 코팅하였다. 일차항체(MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체와 MMP-2(Ab-3) 단일클론항체)를 처리하고 37℃ 에서 60분 반응시켰다. 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질 용액(1mg/mlρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 리더로 405nm 에서 흡광도를 측정한다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용하였다.
처리농도(%) MMP-1 발현 억제율(%)
실시예 1(참다랑어 눈의 파쇄물) 0.1 20
실시예 2(참다랑어 눈의 추출물) 0.1 21
실시예 3(참다랑어 눈의 추출물) 0.1 18
실시예 4(참다랑어 눈의 추출물) 0.1 24
실시예 5(참다랑어 눈의 추출물) 0.1 21
실시예 6(고등어 눈의 파쇄물) 0.1 20
실시예 7(고등어 눈의 추출물) 0.1 21
실시예 8(고등어 눈의 추출물) 0.1 16
실시예 9(고등어 눈의 추출물) 0.1 23
실시예 10(고등어 눈의 추출물) 0.1 20
비교예 1(소 눈의 파쇄물) 0.1 13
비교예 2(소 눈의 추출물) 0.1 14
비교예 3(소 눈의 추출물) 0.1 11
비교예 4(소 눈의 추출물) 0.1 16
비교예 5(소 눈의 추출물) 0.1 14
레티놀 0.1 21
대조군 - -
상기 표 3에 나타난 바와 같이, 자외선 조사시에 발현이 유도되는 MMP-1에 대하여 시료를 처리하지 않은 대조군에 비하여 참다랑어 또는 고등어 눈의 파쇄물또는 추출물은 높은 억제율을 보였으며 이는 양성 대조군으로 사용한 레티놀의 억제율과 동등 이상의 결과였다.
시험예 4 : 자외선조사에 의한 세포독성 완화 효과
본 시험예는 상기 실시예 1 내지 10, 비교예 1 내지 5의 파쇄물 또는 추출물의 자외선 조사에 의한 세포독성의 완화효과를 평가하기 위하여 실시되었다.
섬유아세포(fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 1x105개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500ul의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 10% FBS가 첨가된 것) 1㎖을 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 눈 초고압 추출물을 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰 당 세포배양 배지 500㎕배지와 MTT 용액(2.5㎎/㎖) 60㎕를 넣은 후 2시간 동안 37℃ CO2 배양기에서 배양하였다. 배지를 제거하고 이소프로판올-HCl(0.04 N)을 500㎕씩 넣어주었다. 5분간 진탕하여 세포를 용해시키고 상등액 100㎕씩을 96-웰 시험 플레이트에 옮긴 후, 마이크로플레이트 판독기에서 565nm 흡광도를 측정하였다. 수학식 2에 의해 세포생존율(%)을 측정하고 자외선에 의한 세포독성 완화율은 수학식 3에 의하여 계산하였다.
Figure 112012039257610-pat00002
Bo : 세포배양배지만을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
Bt : 시료를 처리하지 않은 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
St : 시료를 처리한 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
Figure 112012039257610-pat00003
Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 세포 생존율
Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 세포생존율
St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 세포생존율
처리농도(%) 세포독성 완화율(%)
실시예 1(참다랑어 눈의 파쇄물) 0.01 38
0.02 60
실시예 2(참다랑어 눈의 추출물)
 0.01 39
0.02 61
실시예 3(참다랑어 눈의 추출물)
 0.01 33
0.02 54
실시예 4(참다랑어 눈의 추출물)
 0.01 41
0.02 63
실시예 5(참다랑어 눈의 추출물)
 0.01 38
0.02 60
실시예 6(고등어 눈의 파쇄물)
 0.01 37
0.02 60
실시예 7(고등어 눈의 추출물)
 0.01 37
0.02 60
실시예 8(고등어 눈의 추출물)
 0.01 31
0.02 50
실시예 9(고등어 눈의 추출물)
 0.01 39
0.02 62
실시예 10(고등어 눈의 추출물)
 0.01 36
0.02 59
비교예 1(소 눈의 파쇄물)
 0.01 29
0.02 45
비교예 2(소 눈의 추출물)
 0.01 29
0.02 46
비교예 3(소 눈의 추출물)
 0.01 22
0.02 38
비교예 4(소 눈의 추출물)
 0.01 31
0.02 47
비교예 5(소 눈의 추출물)
 0.01 30
0.02 45
상기 표 4에 나타난 바와 같이, 참다랑어 또는 고등어 눈의 파쇄물 또는 추출물은 자외선에 의한 세포 독성을 0.02% 농도에서 50 ~ 62% 정도 완화하여 자외선에 의한 세포독성을 낮은 농도에서도 효과적으로 방어함을 알 수 있었다.
시험예 5 : 세포 배양기술을 이용한 자극완화 효과 평가
본 시험예는 상기 실시예 1 내지 10, 비교예 1 내지 5의 파쇄물 또는 추출물의 피부 자극완화 효과를 평가하기 위하여 세포배양 기술을 이용하여 피부자극을 유발하는 물질인 소듐라우릴설페이트(Sodium Lauryl Sulfate; SLS)에 의한 세포사멸을 저해시키는 정도로 자극완화 효과를 평가하였다.
SLS는 화장품 기재의 피부자극 평가의 기준이 되는 물질로 세포막에 결합되어 세포대사 억제와 세포막을 파괴하여 피부자극을 유발하는 물질이다.
본 시험예는 사람 섬유아세포에 SLS와 초고압 눈 추출물들을 동시에 첨가하였을 때 SLS에 의한 세포사멸을 감소시키는 효과를 평가한 것이다.
본 시험예에 사용된 Hs68 섬유아세포는 사람의 피부 진피세포로 ATCC (American Type Culture Collection, 기탁번호 : 1635)에서 분양받아 사용하였다.
세포배양기술을 이용한 자극완화 평가실험은 다음과 같이 행하였다.
사람 유래의 섬유아세포를 96공 평판 배양기에 각 웰당 1 X 105농도로 분주하고, 24시간 동안 배양한 후 0.002% SLS 단독, 0.002% SLS와 상기 실시예 1 내지 10, 비교예 1 내지 5의 파쇄물 또는 추출물을 0.1% 동시에 처리하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 배양 후 MTT(Sigma) 시약을 첨가하고 4시간 동안 배양한 후, 배양액을 제거하고 1N NaOH/이소프로판올용액을 첨가하여 20분간 교반한 후 흡광광도계로 565㎚에서 흡광도를 측정하여 초고압 눈 추출물들이 SLS에 의한 세포사멸을 저해하는 효과를 측정하여 표 5에 나타내었다.
시료명 섬유아세포 생존율(%)
0.002% SLS 41
0.002% SLS + 실시예 1(참다랑어 눈의 파쇄물) 76
0.002% SLS + 실시예 2(참다랑어 눈의 추출물) 77
0.002% SLS + 실시예 3(참다랑어 눈의 추출물) 74
0.002% SLS + 실시예 4(참다랑어 눈의 추출물) 80
0.002% SLS + 실시예 5(참다랑어 눈의 추출물) 77
0.002% SLS + 실시예 6(고등어 눈의 파쇄물) 75
0.002% SLS + 실시예 7(고등어 눈의 추출물) 75
0.002% SLS + 실시예 8(고등어 눈의 추출물) 72
0.002% SLS + 실시예 9(고등어 눈의 추출물) 78
0.002% SLS + 실시예 10(고등어 눈의 추출물) 75
0.002% SLS + 비교예 1(소 눈의 파쇄물) 69
0.002% SLS + 비교예 2(소 눈의 추출물) 70
0.002% SLS + 비교예 3(소 눈의 추출물) 66
0.002% SLS + 비교예 4(소 눈의 추출물) 73
0.002% SLS + 비교예 5(소 눈의 추출물) 70
상기 표 5에 나타나는 바와 같이, 참다랑어 또는 고등어 눈의 파쇄물 또는 추출물은 SLS에 의해서 유발되는 세포사멸을 효과적으로 억제시킴으로써 화장료 기재와 함께 처방하였을 때 화장료 기재로 일어날 수 있는 피부 자극을 감소시키는 자극완화 물질임을 알 수 있었다.
실시예 11, 12 및 비교예 6 : 화장료 제조
본 실시예에서는 상기 실시예 4, 9 및 비교예 4에서 수득한 추출물을 이용하여 화장료를 제조하였다. 제조된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 6에 나타낸 바와 같다.
표 6에 기록되어 있는 '나'상을 가열하여 70℃ 에 보존하였고, 보존된 '나'상에 '가'상을 가하여 예비 유화를 시킨 후, 호모믹서로 균일하게 유화한 다음 서서히 냉각하여 각각의 크림(실시예 11, 12 및 비교예 6)을 제조하였다.
원료 실시예 11 실시예 12 비교예 6 참조예



가


 스테아릴알콜 8 8 8 8
스테아린산 2 2 2 2
스테아린산콜레스테롤 2 2 2 2
스쿠알란 4 4 4 4
2-옥틸도데실알콜 6 6 6 6
폴리옥시에틸렌(25몰부가) 알콜에스테르 3 3 3 3
글리세릴모노스테아린산에스테르 2 2 2 2

나
 실시예 4(참다랑어 눈의 추출물) 5 - - -
실시예 9(고등어 눈의 추출물) - 5 - -
비교예 4(소 눈의 추출물) - - 5 -
Na-히알루론산염 - - - 5
프로필렌글리콜 5 5 5 5
정제수 100에 대한 나머지 100에 대한 나머지 100에 대
한 나머지		 100에 대
한 나머지
단위 : 중량%
시험예 6 : 피부 보습 효과 측정
본 시험예는 상기 실시예 11, 12, 비교예 6, 참조예에서 제조한 화장료에 대하여 사람을 대상으로 피부 보습 효과를 비교실험을 행하여 평가하였다.
실험자(30대-40대의 여성) 30명을 대상으로 이중 10명의 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 11에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 6에서 제조된 크림을, 다른 10명의 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 12에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 6에서 제조된 크림을 바르고 나머지 10명의 얼굴 오른쪽 부위에는 참조예에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 6에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 4주간 도포하였다. 제품 도포 전(0주), 제품 도포 2주, 4주 후에 피험자의 시험 부위의 보습을 Corneometer를 이용하여 측정하였다. 4주간 시험에 참여한 모든 피험자들에게서 이상반응은 없었다.
Corneometer는 피부 표면에 Probe를 접촉 시 probe의 head에 내재된 센서에 전도되는 미미한 전류의 용량(Capacitance)을 계측하여 수분 함유량의 수치를 나타내며, 수치가 높게 측정될수록 피부의 수분 함유량이 많은 것을 의미한다.
표 7는 실시예 11, 12 비교예 6 및 참조예에서 제조된 크림을 사용한 피험자의 피부보습 결과이다.
시료명
 제품 도포 기간(주)
0 2 4
실시예 11 64.17 73.54 77.65
실시예 12 63.94 72.25 76.88
비교예 6 63.96 70.12 73.78
참조예 63.84 68.96 72.60
n=30, p＜0.05
피부보습 개선율은 수학식 4에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 8과 같다.
Figure 112012039257610-pat00004
A : 0일 보습 측정결과
B : 2, 4주 보습 측정결과
시료명
 제품 도포 기간(주)
2 4
실시예 11 14.60 21.01
실시예 12 13.00 20.24
비교예 6 9.63 15.35
참조예 8.02 13.72
n=30, p＜0.05
상기 표 8에 의하면, 참다랑어 또는 고등어 눈의 추출물은 소 눈의 추출물보다 우수한 피부 보습 효과를 가짐을 알 수 있었다.
시험예 7 : 피부탄력 개선 효과의 평가
본 시험예에서는 상기 실시예 11, 12 및 비교예 6의 크림에 대하여 인체에서의 피부탄력 개선 효과를 다음과 같이 평가하였다.
실험자(30대-40대의 여성) 30명을 대상으로 이중 15명의 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 11에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 6에서 제조된 크림을, 나머지 15명의 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 12에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 6에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.
실험완료 후 피부 탄력 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 피부탄력측정기(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 측정하였다. 실험결과는 하기 표 9에 Cutometer SEM 575의 ΔR8값으로 기재하였는데 R8값은 피부의 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다.
시료명 피부탄력효과(ΔR8)
실시예 11 0.37
실시예 12 0.35
비교예 6 0.23
n=30, p＜0.05
상기 표 9에서 나타난 바와 같이, 참다랑어 또는 고등어 눈의 추출물이 소 눈의 추출물에 비하여 피부 탄력개선 효과가 훨씬 우수함을 알 수 있었다.
시험예 8 : 피부 전층 결손 모델에서의 상처치유 효과
본 시험예에서는 실시예 11, 12 및 비교예 6의 크림에 대하여 실험용 쥐를 대상으로 피부 전층 결손 모델에서의 상처 치유 효과를 비교실험을 행하여 평가하였다.
각 날짜별로 5 마리로 무작위 체중에 의해 군 분리 한 후 시험 1일째에 전층결손창상 모델을 제작하였다. 창상 유발은 시험동물의 배부에 술자시선에 따라 왼쪽 위부터 아래 순으로 창상 1, 2를 지정하고 오른쪽 위부터 아래 순으로 창상 3, 4로 지정하였다.
실험용 쥐 배부에 가로, 세로 10mm의 피부 전층 결손창을 만든 후 시험물질 Patch를 붙이고 1, 3, 7, 9, 14일 각각의 창상수축율을 시행하여 피부 전층 결손창상 모델에서의 치유효과를 평가하였다.
표 10과 같이 군 분리 하고 시료를 투여하였다.
시료명 투여용량 동물별적용부위
대조군 blank patch full-thickness wound 1
양성대조군 (마데카솔) 500 mg/cm2 full-thickness wound 2
실시예 11 500 mg/cm2 full-thickness wound 3
실시예 12 500 mg/cm2 full-thickness wound 4
비교예 6 500 mg/cm2 full-thickness wound 5
창상치유 효과를 정량하기 위해 초기 창상면적을 100으로 하여 14일 부검군에서 1일 후, 3, 7, 9, 11, 14일째의 창상면적을 디지털 이미지화하여 창면수축율을 구하였다. 창상 수축률은 수학식 5에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 12에 나타내었다.
1 일 4 일 7 일 9 일 11 일 14 일
대조군 1.05 0.77 0.59 0.44 0.21 0.15
양성대조군 (마데카솔) 1.06 0.90 0.73 0.59 0.33 0.15
실시예 11 1.02 0.72 0.42 0.20 0.10 0.03
실시예 12 1.02 0.75 0.45 0.23 0.12 0.08
비교예 6 1.05 0.76 0.52 0.36 0.18 0.10
단위 : cm2, n=5, p＜0.05
Figure 112012039257610-pat00005
A : 1일 창상면 측정결과
B : 4, 7, 9, 11, 14일 창상면 측정결과
4 일 7 일 9 일 11 일 14 일
대조군 26.67 43.81 58.10 80.00 90.48
양성대조군 (마데카솔) 15.09 31.13 44.34 68.87 85.85
실시예 11 29.41 58.82 80.39 90.20 97.06
실시예 12 26.47 55.88 77.45 88.24 92.16
비교예 6 27.62 50.47 65.71 82.86 90.48
n=5, p＜0.05
상기 표 11, 12에 나타나는 바와 같이, 창상 유발 후 14일 동안의 창상 수축률을 측정함에 있어 모든 창상은 시험기간(14일) 동안 점차적으로 창면 수축에 의해 창면이 점차적으로 감소하였으며, 실시예 11, 12의 참다랑어 또는 고등어 눈의 추출물을 함유하는 크림은 소 눈의 추출물을 함유하는 크림과 양성대조군에 비하여 탁월하게 창면이 감소하였음을 알 수 있었다.

Claims (7)

  1. 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 어류 눈은,
    참다랑어 또는 고등어 중 1종 이상의 어류의 눈인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 어류 눈의 파쇄물 또는 추출물을 조성물 전체에 대하여 동결건조중량 기준으로 0.0001 내지 90.0 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    피부 미백용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    피부탄력 강화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    피부 보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초화장료 제형과 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형 중에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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WO2014178500A1 (ko) * 2013-05-01 2014-11-06 (주)청룡수산 옥돔 비늘의 효소적 가수분해물을 포함하는 기능성 화장품 조성물
KR20170003242A (ko) 2015-06-30 2017-01-09 부경대학교 산학협력단 민태 뼈 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물

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