CN102068492A - 抗病毒中草药组合物、中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种抗病毒中药组合物,其制备原料主要为金银花/山银花、黄芪、和黄芩,并可选地包含四种或四种以下的佐药和/或使药。一种典型方式是,其制备原料包含4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根和2~4份紫苏叶。本发明的抗病毒中药组合物具有清热解毒、益气扶正、祛邪解表等作用,临床用于风热阻肺兼气虚型急性上呼吸道感染、流行性感冒的预防与治疗,疗效显著。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,具体涉及一种抗病毒的中药组合物及其制备方法。
背景技术
大多数病毒对抗生素等西药不敏感。人们较难找到一种对细胞毒性较低而抗病毒活性较高的药物以对付这种原始的或与人类起源以来就与之共生存的微生物。虽然目前国内外研究的抗病毒药物已接近50种,但真正应用于临床的只有阿昔洛韦、拉米夫定等少数几类核苷类药物。而且,这类药物通常只能延缓病毒生长或减轻疾病症状,共同缺点是易产生耐药毒株,抗病毒谱窄,毒副作用大,价格高昂或药理特性不理想。
经历了2002年的非典型肺炎,使国人们认识到中医药在抗病毒方面的强大优势,其独特的疗效也引起世界的关注,并得到世界卫生组织(WHO)专家的肯定。迄今为止,已有70多种中药组方被公诸于世。但是,这些组方大都成分复杂,例如CN200810102746.8披露一种防治畜禽病毒性疾病的复方药物组合物,其由连翘、板蓝根、竹叶、黄芩、金银花/山银花、大青叶、黄芪、淫羊霍、女贞子、生地、丹参、川芎、乌梅、葶苈子、川贝、陈皮、麦冬、甘草、氟苯尼考等制成。CN200710071952.2披露一种抗禽流感病毒的中药,其由贯众8~10份、板蓝根8~10份、黄芪15~20份、柴胡8~10份、连翘5~8份、黄连8~10份、金银花/山银花8~10份、黄芩8~10份和甘草4~6份制成。
发明内容
本发明的目的是提出一种新的组方简单却药效显著的中药组合物。
本发明的抗病毒中药组合物的制备原料主要为金银花/山银花、黄芪和黄芩,并可选地包含四种或四种以下的佐药和/或使药。
进一步地,该中药组合物的制备原料为金银花/山银花、黄芩和黄芪,可选地包含板蓝根及三种或三种以下的其他佐药和/或使药。
进一步地,佐药和使药的总量小于金银花/山银花、黄芪、黄芩和板蓝根的总量。
进一步地,制备原料以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩和3~5份板蓝根组成。
进一步地,制备原料以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、和2~4份紫苏叶组成。
进一步地,制备原料以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、3~5份防风和2~4份紫苏叶组成。
进一步地,制备原料以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、3~5份荆芥和2~4份紫苏叶组成。
本发明的另一目的在于提供一种抗病毒中草药组合物,其以金银花/山银花、黄芪、黄芩为主要成分,并且包含四种或四种以下的佐药和/或使药组成。
进一步地,该中草药组合物的佐药和使药的总量小于主要成分的总量。
进一步地,该中草药组合物以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩和3~5份板蓝根组成。
进一步地,该中草药组合物以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、和2~4份紫苏叶组成。
进一步地,该中草药组合物以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、3~5份防风和2~4份紫苏叶组成。
进一步地,该中草药组合物以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、3~5份荆芥和2~4份紫苏叶组成。
本发明的另一目的在于提供一种用于制备上述中药组合物的方法。该方法包括将金银花/山银花与可选的含挥发油的中草药用6~9倍量的水浸泡,蒸馏提取挥发油,收集的挥发油用合适的辅料包合,得包合物;经提取挥发油后的药渣与黄芪、其余的可选成分药材合并加6~9倍量的水煎煮;滤液加入4~6%的壳聚糖搅拌,滤过,滤液减压浓缩成浸膏,真空干燥;黄芩加8~12倍量的水提取,煎煮后趁热过滤,调pH值至1.0~2.0,静置,分离出沉淀,将沉淀水洗至中性,干燥得黄芩提取物;将所得的包合物、真空干燥后的浸膏和黄芩提取物合并,并与辅料混合。
本制剂处方系从历代治疗瘟疫的经典名方中进行筛选,经现代多位临床名医提炼组方,本发明的药物组合物经过体外、体内抗病毒试验及临床验证,具有清热解毒、益气扶正、祛邪解表的功能,可用于风热犯肺兼气虚型急性上呼吸道感染、流行性感冒。
具体实施方式
定义:
术语“中药组合物”既可以指直接由各中草药混合组成的中草药组合物,也可以指由配方中各种成分中草药经过加工而获得的有效成分的混合物,也可以指该有效成分混合物与若干药用辅料的混合物。
术语“中草药”是指从种植地收获后或者从自然生长地采集后经过干燥处理以便长期贮存的入药部位,也包括经过炮制而可以在药店出售的入药部位。另外,下文中提及各种中草药名称时,皆是指中药学通常所采用的入药部位,而不是指整个植株,除非该整个植株皆可以入药,并且具有相同的中药学名称。
在本发明的一般方面,中药组合物包括金银花、黄芪、和黄芩,其中,金银花为君药,用于清热解毒,凉散风热,宣肺透表;黄芪补益肺气、益气升阳以扶正祛邪,黄芩清热燥湿,泻火解毒以治肺热咳嗽,二者同为臣药。
发明人经过研究发现,本发明所有实施方式中的金银花可以用山银花来代替,而且显示出基本相同的药物活性。在本文的其他地方,用“金银花/山银花”来表示既可以用金银花,也可以用山银花。
本领域人员容易理解,在本文给出上述三种成分作为君药和臣药后,较容易在此基础上添加若干佐药和使药而得到其他的药物组合物。在本发明的优选方面,药物组合物中包含板蓝根作为佐药;在本发明的优选方面,排除那些佐药和使药的种类总数超过4种的技术方案。在本发明的另一种优选方面,排除那些佐药和使药的投入质量数总数超过君药和臣药的质量总数的技术方案。更佳的技术方案是这两种优选方案的结合。
因此,本发明包括下面的具体实施方式:
一种中药组合物,其由金银花/山银花、黄芪、黄芩和板蓝根组成,或者该组合物活性成分来自于它们。
一种中药组合物,其由金银花/山银花、黄芪、黄芩、板蓝根和三种或三种以下的佐药和/或使药组成,或者该组合物的活性成分来自于它们。
一种中药组合物,其由金银花/山银花、黄芪、黄芩、板蓝根、和若干种总质量不超过前述四种成分的佐药和/或使药组成,或者该组合物的活性成分来自于它们。可用于本发明的其他使药或佐药包括但不限于紫苏叶、防风、荆芥和薄荷。
通常,金银花/山银花、黄芪、黄芩和板蓝根可以以基本相同的质量复配,或者金银花/山银花和黄芪的重量略多于黄芩和板蓝根。本发明的一种典型重量比为金银花/山银花4~6份、、黄芪4~6份、黄芩3~5份和板蓝根3~5份。
作为本发明的一种优选具体实施方式,该中药组合物由金银花/山银花4~6份、黄芪4~6份、黄芩3~5份、板蓝根3~5份、紫苏叶2~4份组成。其中,板蓝根清热、解毒、凉血、利咽,紫苏叶宣肺发表、理气、和营,防风祛风解表、胜湿止痛,与板蓝根共为佐药。诸药合用,共奏清热解毒、益气扶正、祛邪解表之功。
作为另一种优选实施方式,该中药组合物由金银花/山银花4~6份、黄芪4~6份、黄芩3~5份、板蓝根3~5份、紫苏叶2~4份、荆芥3~5份组成,其中,荆芥善散风邪,为发表散风通用药,具有发表散风、透疹疗疮兼解痉之功,为佐药。
作为又一种优选实施方式,该中药组合物由金银花/山银花4~6份、黄芪4~6份、黄芩3~5份、板蓝根3~5份、紫苏叶2~4份、薄荷3~5份组成,其中,薄荷疏散风热,清利头目,利咽透疹,为佐药。
作为再一种优选实施方式,该中药组合物由金银花/山银花4~6份、黄芪4~6份、黄芩3~5份、板蓝根3~5份、紫苏叶2~4份、防风3~5份、薄荷3~5份组成,其中,防风祛风解表、胜湿止痛,为佐药。
作为再一种优选实施方式,该中药组合物由金银花/山银花4~6份、黄芩3~5份、黄芪4~6份、板蓝根3~5份、防风3~5份、紫苏叶2~4份组成。
作为另一种实施方式,该中药组合物由金银花/山银花4~6份、黄芪4~6份、黄芩3~5份、紫苏叶2~4份、防风3~5份组成。
在列举前述具体实施方式时虽然给出了质量配比,但是这些数值并不能限制本发明。本领域人员容易理解,将上述给定的数值作小幅的上、下浮动,也可以实现本发明的目的,只是治疗效果会不及上述列出的实施方式。因此,对这些数值的修改没有偏离本发明的精神。
本发明的中药组合物可以以上述比例复配的中草药形式复配。在这种情况下,各种成分需要经过炮制,以致可以在药店或者医院出售。在中药组合物是中成药的情况下,各种中草药经过水煎煮、浓缩、干燥后,再制成各种便于服用的制剂。
可以将各种中草药分开煎煮,也可以合并在一起煎煮。其中一部分成分,例如金银花/山银花、可选的防风、紫苏叶、薄荷等需要在水煎煮之前先提取出挥发油。
在一种具体方式中,将金银花/山银花与可选的含挥发油的中草药用6~9倍量的水浸泡,然后蒸馏提取挥发油,收集的挥发油用合适的辅料包合,得包合物;经提取挥发油后的药渣与黄芪、其余的可选成分(例如板蓝根)药材合并加6~9倍量的水煎煮两次,一般第二次煎煮的水量小于第一次。滤液加入4~6%的壳聚糖搅拌,滤过,滤液减压浓缩成浸膏,真空干燥;黄芩加8~12倍量的水提取两次,第一次加10~12倍的水,第二次加8-9倍的水,煎煮后趁热过滤,滤液用盐酸溶液调pH值至1.0~2.0,在60-90℃保温1小时,然后静置,分离出沉淀,将沉淀水洗至中性,干燥得黄芩提取物。将所得的包合物和提取物合并,并与辅料混合,制成合适的剂型。
本发明的中药组合物可以制成多种剂型,其可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、糊剂、悬浮剂、丸剂等。例如,为了制备胶囊剂,将提取物粉碎,加入淀粉(或糊精)30%,混匀,用90%乙醇制软材,用14目筛制粒,50~60℃干燥,20~65目筛整粒,加入β-环糊精包合物细粉,混匀,灌装胶囊。为了制备片剂,将提取物分别粉碎,加入淀粉、微晶纤维素(或羟丙基甲基纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁等)20%,混匀,用90%乙醇制软材,14目筛制粒,50~60℃干燥,20~65目筛整粒,加入β-环糊精包合物细粉,混匀,压片,包薄膜衣。为了制成颗粒剂,将黄芪、黄芩等提取物分别粉碎,加入淀粉、蔗糖(或糊精、乳糖、可溶性淀粉、甘露醇、木糖醇等)40%,混匀,用85%乙醇制软材,14目筛制粒,50~60℃干燥,16目筛整粒,加入β-环糊精包合物,混匀,最后包装。
对于采用上述三个例举的剂型的情况下,优选设计药物计量,使得制剂中总多糖以葡萄糖(C6H12O6)计,不少于8.0mg/粒(或8mg/片,或32mg/袋),黄芩苷(C21H18O11)计,不少于4.0mg/粒(或4.0mg/片,或16mg/袋),绿原酸(C16H18O9)不少于5.2mg/粒(或5.2mg/片,或21mg/袋)。
本发明的中药组合物用于主治风热感冒,流行性感冒。临床表现为:发热或高热、恶寒、头痛、鼻塞流涕、咽喉红肿疼痛、咳嗽、身痛、乏力等证属风热犯肺证者。对于药物用量,在该药物组合物为中成药的情况下,以生药量计算,一般成人的日用药量为28-32g,可以分两次或三次服用;在该药物组合物为中草药的情况下,可以取黄芪8-12g、金银花/山银花8-12g份、黄芩6-10g、可选的板蓝根6-10g、可选的紫苏叶6-8g、可选的防风6-10g以及其他可选的成分为一剂,早晚各煎煮一次后服用。
实施例1
取黄芪4份、金银花4份、黄芩3份、板蓝根3份。将金银花加8倍水,浸泡0.5小时,蒸馏提取时间4小时,收集挥发油,挥发油加6倍量的β-环糊精,3倍量于β-环糊精的水,研磨包合3小时,得包合物备用;经提取挥发油后的药渣与黄芪、板蓝根药材合并,加水煎煮2次,第一次加8倍量水,煎煮2小时,第二次加6倍量水,煎煮1.5小时,滤液加入4%壳聚糖,搅拌0.5小时,滤过,于70~90℃、-0.06~-0.08Mpa下减压浓缩至相对密度约1.30的浸膏(60℃),真空干燥。黄芩加水提取两次,第一次加10倍量水,煎煮2小时,第二次加8倍量水,煎煮1.5小时,趁热滤过,滤液于40℃温度下加2mol/L盐酸溶液调pH值至1.0~2.0,80℃保温1小时,静置4小时,离心得沉淀,经水洗至PH值至中性,干燥得黄芩提取物。取黄芪等干膏、黄芩粗提取物粉碎,β-环糊精包合物研细,混匀,得样品I。
实施例2
取黄芪6份、金银花4份、黄芩5份、板蓝根3份,防风5份,紫苏叶4份。将金银花、防风、紫苏叶加8倍水,浸泡0.5小时,蒸馏提取时间4小时,收集挥发油,挥发油加6倍量的β-环糊精,3倍量于β-环糊精的水,研磨包合3小时,得包合物备用;经提取挥发油后的药渣与黄芪、板蓝根药材合并加水煎煮2次,第一次加8倍量的水,煎煮2小时,第二次加6倍量的水,煎煮1.5小时,滤液加入4%壳聚糖,搅拌0.5小时,滤过,于70~90℃、-0.06~-0.08Mpa减压浓缩至相对密度约1.30的浸膏(60℃),真空干燥。黄芩加水提取两次,第一次加10倍量水,煎煮2小时,第二次加8倍量水,煎煮1.5小时,趁热滤过,滤液于40℃温度下加2mol/L盐酸溶液调pH值至1.0~2.0,80℃保温1小时,静置4小时,离心得沉淀,经水洗至PH值至中性,干燥得黄芩提取物。取黄芪等干膏、黄芩粗提取物粉碎,β-环糊精包合物研细,混匀,得样品II。
实施例3
取黄芪6份、金银花4份、黄芩5份、板蓝根3份,紫苏叶4份,荆芥3份。将金银花、紫苏叶加8倍水,浸泡0.5小时,蒸馏提取时间4小时,收集挥发油,挥发油加6倍量的β-环糊精,3倍量于β-环糊精的水,研磨包合3小时,得包合物备用;经提取挥发油后的药渣与黄芪、板蓝根、荆芥药材合并加水煎煮2次,第一次加8倍量的水煎煮2小时,第二次加6倍量水煎煮1.5小时,滤液加入4%絮凝澄清剂,搅拌0.5小时,滤过,于70~90℃、-0.06~-0.08Mpa减压浓缩至相对密度约1.30的浸膏(60℃),真空干燥。黄芩加水提取两次,第一次加10倍量水,煎煮2小时,第二次加8倍量水,煎煮1.5小时,趁热滤过。滤液于40℃温度下加2mol/L盐酸溶液调pH值至1.0~2.0,80℃保温1小时,静置4小时,离心得沉淀,经水洗至PH值至中性,干燥得黄芩提取物。取黄芪等干膏、黄芩粗提取物粉碎,β-环糊精包合物研细,混匀,得样品III。
实施例4
取黄芪6份、金银花4份、黄芩5份、板蓝根3份,紫苏叶4份。将金银花、紫苏叶加8倍水,浸泡0.5小时,蒸馏提取时间4小时,收集挥发油,挥发油加6倍量的β-环糊精,3倍量于β-环糊精的水,研磨包合3小时,得包合物备用;经提取挥发油后的药渣与黄芪、板蓝根合并加水煎煮2次,第一次加8倍量的水煎煮2小时,第二次加6倍量水煎煮1.5小时,滤液加入4%絮凝澄清剂,搅拌0.5小时,滤过,于70~90℃、-0.06~-0.08Mpa减压浓缩至相对密度约1.30的浸膏(60℃),真空干燥。黄芩加水提取两次,第一次加10倍量水,煎煮2小时,第二次加8倍量水,煎煮1.5小时,趁热滤过。滤液于40℃温度下加2mol/L盐酸溶液调pH值至1.0~2.0,80℃保温1小时,静置4小时,离心得沉淀,经水洗至PH值至中性,干燥得黄芩提取物。取黄芪等干膏、黄芩粗提取物粉碎,β-环糊精包合物研细,混匀,得样品IV。
实施例5
重复实施例4的操作,唯一区别在于,用等同量的山银花取代金银花,制备得到样品V。
药效学试验
实验材料
1)实验药:实验时各处方药味均用无菌蒸馏水稀释成含生药浓度1g/ml。
2)细胞与病毒:Hela细胞中南大学湘雅医学院细胞供应中心提供。长满单层的细胞用PBS洗涤细胞2次后加入0.5ml 0.25%胰蛋白酶溶液,细胞消化完全后吸去胰蛋白酶溶液,加入含10%小牛血清(中国杭州四季青生物股份有限公司产品)的1640培养液(GBICO U.S.A)反复吹吸混匀,分装入细胞培养瓶中置于37℃,5%CO2培养箱中扩增培养,供实验用。
呼吸道合胞病毒(RSV Long株湖南中医药大学病原生物实验室保存株)、流感病毒(FM1株湖南师范大学生命科学院免疫室提供)。
3)细菌来源:金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、大肠埃希菌(ATCC44155)、甲型溶血性链球菌(ATCC26336)、肺炎链球菌(ATCC 63501)绿脓杆菌(ATCC 27853)痢疾杆菌(ATCC51059)。白色念珠菌系湖南中医药大学病原生物实验室保存菌种。
临床菌株:金黄色葡萄球菌(16株)大肠杆菌(11株)肺炎链球菌(8株)甲型溶血性链球菌(10株)绿脓杆菌(5株)白色念珠菌(5株)痢疾杆菌(8株)共63株分别来自湖南中医药大学病原生物临床检验室与湖南中医药大学附属第一医院检验科细菌室。
4)培养基:普通营养琼脂(肉汤)培养基购于杭州微生物试剂有限公司。用于金黄色葡萄球菌、甲型链球菌、大肠杆菌培养,痢疾杆菌培养,其中甲型链球菌与肺炎链球菌另在培养基中加入8%脱纤维羊血(液体培基加5%的小牛血清);绿脓杆菌培养采用明胶十六烷三甲基溴化胺培养基;白色念珠菌用沙保培养基培养。
药物的抗病毒试验
1)50%组织培养病毒感染剂量(TCID50)的测定:96孔细胞培养板接种5x105个/ml的Hela细胞悬液100μl,培养24h,吸去培养板中的培养液,用Hank液洗涤细胞3次,加入用细胞维持液稀释的病毒液100μl(10-1/ml至10-10/ml),每个稀释度至少6个复孔,37℃,5%CO2培养箱吸附1h,每孔补加细胞维持液100μl,继续培养。逐日在倒置显微镜下观察CPE,并记录出现CPE的孔数,以最高稀释度不再出现病变时为终点,并计算出病毒的半数致细胞病变量(TCID50)。测定结果为,RSV对Hela细胞的半数病毒感染量(TCID50)为10-5.89/0.1ml;Influenza virus FM1对Hela细胞的半数病毒感染量(TCID50)为10-6.00/0.1ml。
2)药物对细胞的半数中毒剂量的测定(MTT法):用细胞维持液将药液连续做几何级稀释为1∶10,1∶100,1∶1,000,1∶10,000,设正常细胞对照组,将不同浓度的各药分别加入已长成单层96孔板中,每个稀释度接种4个复孔,每孔加入100μl,置于37℃二氧化碳培养箱中培养48h,弃培养液,加入5mg/ml MTT和不含血清的1640细胞培养液100μl,继续培养2~3h,取出弃上清,PBS洗3次,每孔加溶解液DMSO 150μl,振荡5~10min,待结晶完全溶解,酶标仪测570nm、630nm的OD值。
计算各药物稀释度的细胞存活率:细胞存活率%=实验孔OD测定值均值/对照孔OD测定值均值X100%,采用概率单位回归法,计算50%细胞中毒时的药物浓度(CC50),选对Hela细胞无毒性的药物最大稀释度(CC0),见表1。
表1MTT法测定各药物对Hela细胞的最大无毒浓度
3)药物抑制呼吸道合胞病毒(RSV)的作用
将最大无毒性浓度药液采用对倍稀释法稀释成5个浓度的含药细胞维持液,4℃保存供抗病毒使用。
不同浓度药物对RSV抑制作用实验长满单层Hela细胞的96孔板分别滴加100TCID50病毒悬液0.1ml,37℃吸附1小时,弃去病毒悬液,用PBS洗去未粘附的病毒,分别加入前述配制的含药细胞维持液1ml,每个浓度4个复孔,同时设细胞对照孔,病毒对照孔,各4个复孔,置37℃,5%CO2培养箱中培养,等到病毒对照孔空斑数不再增加,取出后倒出培养液,用PBS液洗细胞二次,10%中性福尔马林室温固定10min,0.2%结晶紫染液染10min,三蒸水重复洗涤三次,晾干后计数空斑数。实验结果见表2
表2各实施例样品对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用
注:“-”表示药物对病毒完全抑制,细胞生长良好;“+”表示细胞2/3生长良好,细胞病变约占整个单层细胞的25%;“++”表示细胞病变约占整个单层细胞的50%;“+++”表示,细胞病变约占整个单层细胞的75%;“++++”表示,细胞病变约占整个单层细胞的75%以上。
4)药物抑制流感病毒(FM1)的作用长满单层Hela细胞的96孔板分别滴加100TCID50流感病毒悬液0.1ml,37℃吸附1小时,弃去病毒悬液,用PBS洗去未粘附的病毒,分别加入前述配制的含药细胞维持液1ml,每个浓度4个复孔,同时设细胞对照孔,病毒对照孔,各4个复孔,置37℃,5%CO2培养箱中培养,逐日倒置显微镜下观察病变,直到病毒对照孔不再增加病变止。实验结果见表3
表3各实施例样品对流感病毒(FM1)的抑制作用
以上结果表明,各实施例样品对病毒的抑制作用基本相同,但以实施例2的中药组合物对呼吸道病毒的抑制作用其浓度药低于其它样品,说明其抗呼吸道病毒作用优于其他样品组(F检验P<0.05)。
药物的抗菌试验
试管稀释法测定采用连续倍比试管稀释法测定药物的最低抑菌浓度(MIC),在每管1.0ml液体培养基中分别加入不同浓度的试验药1.0ml,使各药物稀释度均分别为1∶4,1∶8,1∶16,1∶32,1∶64,1∶128和1∶256。实验中另设置加等量不含任何药物液体培养基的正常对照,含菌不含药的阳性对照以及药物对照。各实验管分别加入浓度均为2×105CFU/ml的各菌株对数生长期新鲜培养物1ml,37℃培养24小时观察结果:肉眼观察同种细菌菌株生长情况,未见生长的药物最高稀释度为MIC。同时采用点试法检测药物的最低杀菌浓度MBC:接种环粘取MIC以上的培养物,接种琼脂平皿和血琼脂平皿,37℃培养24小时观察有无细菌生长,无菌生长则判为药物的MBC。
琼脂扩散法(牛津杯法)取直径45mm无菌平皿,每皿注入20ml各菌生长所需培养基,培基冷凝后接种1×109/ml菌液0.1mm/皿,置放牛津杯(直径6mm),加入300μl/杯药液原液(每药做9杯),37℃培养24h,用游标卡尺测量抑菌圈的直径。
实验结果列于表4和表5中。
表4各实施例样品对实验室保存细菌的抗菌作用(单位g/ml MIC(MBC))
以上结果表明,实施例2表现出抗菌谱广与作用强的特点。
表5各样品对临床分离细菌的抗菌作用(单位g/ml MIC50~90范围(MBC))
以上结果表明,各实施例样品组对实验室保存菌的抗菌作用其MIC与MBC比较结果相当;药物对临床分离的金黄色葡萄球菌(16株)大肠杆菌(11株)肺炎链球菌(8株)甲型溶血性链球菌(10株)绿脓杆菌(5株)白色念珠菌(5株)痢疾杆菌(8株)共63株菌的抗菌结果显示:大多药物对G+菌的抗菌作用比抗G-菌作用强(F检验P<0.05),与表4结果相同;表5各药物的MIC50~90范围、MBC的浓度较表4高,这可能与临床分离菌的毒作用较实验室保存菌强所致。
金银花与山银花药性的比较
为了考察金银花组合物与山银花组合物的药物活性是否存在差异,发明人将实施例4所得的样品IV与实施例5所得的样品V进行了比较研究。
采用琼脂扩散法,营养肉汤琼脂或沙保琼脂高压灭菌后室温中冷却至50℃左右,分别取15ml倾注于直径10cm灭菌平皿中,待琼脂凝固后37℃培养24h进行无菌检查。取上述各菌株对数生长期菌液配制成1×105CFU/ml的悬液,各取100μl均匀涂布接种于检菌合格的琼脂平板上。用6mm打孔器在平板上打孔,每平板4~5孔,然后分别加入试验药山银花复方提取物(样品V)与金银花复方提取物(样品IV)、头孢氨苄、乳酸左氧氟沙星、氟康唑各300μl/孔,37℃培养24h后用游标卡尺测定各药物抑菌圈直径并进行比较。
实验结果证实,山银花复方提取物、金银花复方提取物对临床菌株和标准菌株均有一定的抗菌作用,两药比较差别无统计学意义(p>0.05),参见表6和表7。
为考察山银花复方提取物和金银花复方提取物对呼吸道合胞病毒的抑制作用,进行了空斑实验,结果见表8。用单因素方差分析中的DUNNETt检验比较山银花复方提取物和金银花复方提取物各剂量组空斑数与病毒对照组空斑数的均数之间的差异有统计学意义(P<0.01)。
本发明重视病毒-机体-中药三者的关系,通过调动机体特异性和非特异性免疫功能来增强抗病毒感染的能力。方中黄芩总黄酮在较低浓度下,对柯萨奇B族病毒(CoxB)、流感病毒和副流感病毒等与上呼吸道感染相关病毒表现了明显的体外抑制作用;经体内给药,对流感病毒所致的小鼠肺部感染表现了一定的治疗作用,对流感病毒感染造成的小鼠死亡表现了明显的保护作用;金银花/山银花有机酸对对小鼠肺内流感病毒增殖有显著抑制作用,能明显对抗小鼠流感病毒性肺炎;黄芪多糖通过调节机体的免疫功能而达到间接抗流感病毒作用。
“*”:与头孢氨苄、左氧氟沙星、氟康唑比较p<0.05(t检验);“/”:未检测。
“*”:与头孢氨苄、左氧氟沙星、氟康唑比较p<0.05(t检验);“/”:未检测
*与利巴韦林比较p<0.05(t检验)
以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (15)
1.一种抗病毒中药组合物,其特征在于,所述抗病毒中药组合物的制备原料为金银花/山银花、黄芩和黄芪,可选地包含四种或四种以下的佐药和/或使药。
2.根据权利要求1所述的抗病毒中药组合物,其中,所述抗病毒中药组合物的制备原料为金银花/山银花、黄芩和黄芪,可选地包含板蓝根及三种或三种以下的其他佐药和/或使药。
3.根据权利要求2所述的中药组合物,其中,所述其他佐药和使药的总量小于金银花/山银花、黄芪、黄芩和板蓝根的总量。
4.根据权利要求1所述的中药组合物,其中,所述制备原料以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩和3~5份板蓝根组成。
5.根据权利要求1所述的中药组合物,其中,所述制备原料以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、和2~4份紫苏叶组成。
6.根据权利要求1所述的中药组合物,其中,所述制备原料以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、3~5份防风和2~4份紫苏叶组成。
7.根据权利要求1所述的中药组合物,其中,所述制备原料以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、3~5份荆芥和2~4份紫苏叶组成。
8.一种抗病毒中草药组合物,其特征在于,所述抗病毒中草药组合物以金银花/山银花、黄芪、黄芩为主要成分,并且包含四种或四种以下的佐药和/或使药组成。
9.根据权利要求8所述的中草药组合物,进一步包含板蓝根作为佐药。
10.根据权利要求8所述的中草药组合物,其中,所述佐药和使药的总量小于所述主要成分的总量。
11.根据权利要求8所述的中草药组合物,其中,所述中草药组合物以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩和3~5份板蓝根组成。
12.根据权利要求8所述的中草药组合物,其中,所述中草药组合物以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、和2~4份紫苏叶组成。
13.根据权利要求8所述的中草药组合物,其中,所述中草药组合物以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、3~5份防风和2~4份紫苏叶组成。
14.根据权利要求8所述的中草药组合物,其中,所述中草药组合物以重量计由4~6份金银花/山银花、4~6份黄芪、3~5份黄芩、3~5份板蓝根、3~5份荆芥和2~4份紫苏叶组成。
15.制备权利要求1至7所述中药组合物的方法,其特征在于,包括以下步骤:
将金银花/山银花与可选的含挥发油的中草药用6~9倍量的水浸泡,蒸馏提取挥发油,收集的挥发油用合适的辅料包合,得包合物;
经提取挥发油后的药渣与黄芪、其余的可选成分药材合并加6~9倍量的水煎煮;
滤液加入4~6%的壳聚糖搅拌,滤过,滤液减压浓缩成浸膏,真空干燥;
黄芩加8~12倍量的水提取,煎煮后趁热过滤,调pH值至1.0~2.0,静置,分离出沉淀,将沉淀水洗至中性,干燥得黄芩提取物;
将所得的包合物、真空干燥后的浸膏和黄芩提取物合并,并与辅料混合。
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