CN102068486A - 鹰嘴豆豆芽有效部位及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种鹰嘴豆豆芽有效部位及其制备方法和应用，利用植物化学提取分离方法和大孔树脂富集工艺得到鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类和总异黄酮类，经过生物活性筛选结果表明，鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类和总异黄酮类可通过诱导细胞凋亡而抑制人结肠腺癌株Caco-2细胞的生长，用于有效诱导人结肠腺癌细胞凋亡，为该有效部位在制备治疗结肠癌的药物或保健品的应用的研发提供一个新的思路。
Description
技术领域
本发明涉及一种鹰嘴豆豆芽有效部位及其制备方法和应用，该有效部位是从鹰嘴豆豆芽或干燥的鹰嘴豆芽粉中提取的有效部位，该有效部位作为制备癌症化学预防的用途，尤其是人结肠腺癌预防的用途。
背景技术
结肠癌是世界癌症死亡的主要原因之一，其发生发展与年龄、家族史和饮食结构密切相关。随着人口的老龄化、生活环境和饮食结构的改变，结肠癌的发病率逐年增加。结肠癌由于具有发展快、病程短、致死率高等特点，使寻找针对结肠癌的发生发展具有预防和治疗作用的药物成为一个迫切的课题。研究显示，摄入高水平的豆类食品可以有效降低结肠癌的发病率，这可能与其皂苷和异黄酮成分的抗肿瘤作用有关。低浓度的大豆皂苷可通过降低蛋白激酶C活性，从而抑制结肠癌细胞生长，促进细胞分化，而高浓度的大豆皂苷使癌细胞发生自噬性死亡。大豆异黄酮可通过增加结肠癌细胞雌激素受体的表达，而抑制癌细胞增殖。这些研究使豆类植物活性成分在结肠癌的化学预防和治疗方面具有广阔的应用前景。
鹰嘴豆(Cicer arietinum Linn.)为豆科草本植物，主要分布在温暖干旱地区，我国的新疆、甘肃等地为鹰嘴豆的主产区。在维吾尔医药中，鹰嘴豆已沿用2500多年，具有很高的营养和药用价值。鹰嘴豆作为传统维药，具有补中益气、消渴、解毒等作用，但其具体作用方式尚不清楚。
近年来研究表明，鹰嘴豆的多种部位提取物对一些肿瘤细胞增殖具有抑制作用，并发现其蛋白成分能有效抑制小鼠结肠癌的癌前病变形成能力。有研究报道，鹰嘴豆芽素A和皂苷成分具有对肿瘤细胞的毒性杀伤作用。但对鹰嘴豆芽在对肿瘤的功效方面的研究相对较少。
本发明通过鹰嘴豆豆芽乙醇提取物对人结肠腺癌细胞的体外实验，结果表明其具有明显的诱导细胞凋亡作用，并呈现良好的浓度依赖性。结果的差异可能与鹰嘴豆种类、处理方式、提取工艺和细胞株等因素相关。通过提取物成分的检测，提示其活性与皂苷和异黄酮有关。
发明内容
本发明目的在于，提供一种鹰嘴豆豆芽有效部位及其制备方法和应用，采用溶剂提取法从新鲜鹰嘴豆豆芽干燥后的鹰嘴豆芽粉中得到总皂苷类和总异黄酮类有效部位，该有效部位经初步的活性筛选试验证明：不同浓度的有效部位对Caco-2细胞均有一定的增殖抑制作用，且呈量效和时效关系；电镜观察到细胞出现染色质边移和凋亡小体；DNA电泳呈现梯度条带，表明有效部位可诱导Caco-2细胞凋亡；3、5、10μg/mL的有效部位作用后，细胞凋亡率分别为32.6％(P＜0.05)、68.8％(P＜0.05)、73.9％(P＜0.05)。
本发明所述的一种采用溶剂提取法制备鹰嘴豆豆芽有效部位，按下列步骤进行：
a、将鹰嘴豆用常规方法发芽并干燥，研磨成粉，过25目筛；
b、将干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积的浓度为10-100％的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物，其中超声波提取温度为20-40℃，回流提取温度为60-80℃；
c、或将新鲜鹰嘴豆豆芽或干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积的纯净水，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次2-4小时，过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物，其中超声波提取温度为20-60℃，回流提取温度为60-100℃；
d、将步骤b醇提物或步骤c水提取物拌入聚酰胺粉末中，用水洗脱，将水洗脱后的聚酰胺置于FL-3大孔树脂上部，再以10％-100％乙醇洗脱，收集洗脱液，合并，浓缩，即可得到鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类和异黄酮类；
e、再将有效部位总皂苷和异黄酮的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
一种鹰嘴豆豆芽有效部位的制备方法，该有效部位采用溶剂提取法即醇提法或水提法，具体操作按下列步骤进行：
a、将鹰嘴豆用常规方法发芽并干燥，研磨成粉，过25目筛；
b、将干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积浓度为10-100％的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物，其中超声波提取温度为20-40℃，回流提取温度为60-80℃；
c、或将新鲜鹰嘴豆豆芽或干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积的纯净水，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次2-4小时，过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物，其中超声波提取温度为20-60℃，回流提取温度为60-100℃；
d、将步骤b的醇提物或步骤c的水提取物用含生药量0.04g/mL，作为上柱供试液，将上柱供试液拌入聚酰胺粉末中，用水洗脱，将水洗脱后的聚酰胺置于FL-3大孔树脂上部，再以浓度10％-100％乙醇洗脱，收集洗脱液，合并，浓缩得到鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类、异黄酮类；
e、再将有效部位总皂苷和异黄酮的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
步骤b中的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇浓度为60-70％。
步骤b中超声波提取温度为30-35℃，回流提取温度为70-80℃。
步骤c中超声波提取温度为30-40℃，回流提取温度为80-96℃。
步骤d中乙醇洗脱浓度为50-70％。
步骤e中有效部位总皂苷和异黄酮的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
所述鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类和总异黄酮类在制备治疗结肠癌的药物的用途。
所述鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类和总异黄酮类在制备抑制结肠癌功能食品的用途。
本发明所述的鹰嘴豆豆芽有效部位及其制备方法和应用，是从新鲜鹰嘴豆豆芽或干燥的鹰嘴豆豆芽粉中提取并大孔树脂富集制备有效部位，包括以下步骤：
鹰嘴豆豆芽的制备
将精选后的豆类原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5-6cm水孔兼通气孔。再加入适量的水进行浸泡，以利于其发芽。通常浸泡2-3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5-6h淋水1次，豆芽长至6-8cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆豆芽醇提物的制备
将鹰嘴豆新鲜的豆芽段(每段长约2毫米)或干燥的豆芽(25目)置于圆底烧瓶中，加入浓度为10-100％的醇，用超声波或加热回流提取1-15次，每次1-3小时，滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提提物；
鹰嘴豆豆芽水提物的制备
将新鲜的豆芽段(每段长约2毫米)或干燥的鹰嘴豆、豆芽(25目)置于圆底烧瓶中，加入纯净水，用超声波或加热回流提取1-15次，每次2-4小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物；
鹰嘴豆有效部位的制备
取干燥的鹰嘴豆豆芽提取物配成含生药量0.04g/mL溶液，作为上柱供试液，将上柱供试液拌入聚酰胺粉末中，用水洗脱。将水洗脱后的聚酰胺置于FL-3大孔树脂上部，再以70％乙醇洗脱，收集洗脱液。
鹰嘴豆豆芽有效部位中皂苷和异黄酮含量测定：
分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，紫外分光光度法测定洗脱液中总皂苷和异黄酮的含量鹰嘴豆芽乙醇提取物成分鉴定。
鹰嘴豆豆芽有效部位Caco-2细胞凋亡的作用：
MTT法观察鹰嘴豆芽有效部位对Caco-2细胞增殖的影响；透射电镜观察细胞超微结构(附图1)；琼脂糖凝胶电泳法进行细胞凋亡的DNA分析(附图2)；流式细胞术检测凋亡情况。结果不同浓度的有效部位对Caco-2细胞均有一定的增殖抑制作用，且呈量效和时效关系；电镜观察到细胞出现染色质边移和凋亡小体；DNA电泳呈现梯度条带，表明有效部位可诱导Caco-2细胞凋亡；3、5、10μg/mL的有效部位作用后，细胞凋亡率分别为32.6％(P＜0.05)、68.8％(P＜0.05)、73.9％(P＜0.05)。
结论：有效部位可通过诱导细胞凋亡而抑制人结肠腺癌株Caco-2细胞的生长。
鹰嘴豆豆芽有效部位包括：总皂苷类、异黄酮类等化合物。
鹰嘴豆豆芽有效部位作为制备诱导人结肠腺癌细胞凋亡的有效部位的应用。可运用鹰嘴豆豆芽水提取物作为药物制剂和食品的原料，对于加工成本的降低，成品质量的提高，疗效的稳定将起着积极的意义，同时还有利于深加工鹰嘴豆豆芽药效物质的基础研究，拓展该药的安全性。
附图说明
图1为本发明有效部位(3μg/ml)诱导的Caco-2的凋亡细胞图。
图2为本发明有效部位对Caco-2细胞染色质结构的影响图。
具体实施方式
实施例1(醇提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡2h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5h淋水1次，豆芽长至6cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆豆芽醇提物的制备：
将干燥的鹰嘴豆豆芽粉过筛25目，取5克置于圆底烧瓶中，加入2倍体积浓度为10％的甲醇，用超声波提取15次，每次1小时，滤纸过滤，合并滤液，超声波控制温度在20℃，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位901mg；
鹰嘴豆豆芽有效部位的富集：
鹰嘴豆提取部配成含生药量0.04g/mL的溶液，作为上柱供试液，将上柱供试液拌入1g聚酰胺粉末中，用8BV水洗脱；将水洗脱后的聚酰胺置于2gFL-3大孔树脂上部，再以浓度70％乙醇洗脱，收集洗脱液并浓缩得到鹰嘴豆有效部位总皂苷类、异黄酮类123mg；
再将有效部位总皂苷和异黄酮的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
实施例2(水提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为6cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔6h淋水1次，豆芽长至7cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆豆芽水提物的制备：
将干燥的鹰嘴豆粉和豆芽粉过筛25目，取5克置于圆底烧瓶中，加入2倍体积的纯净水，用超声波提取15次，每次2小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，超声波控制温度在20℃，减压浓缩得到水提取物部位980mg；
鹰嘴豆豆芽有效部位的富集：
鹰嘴豆提取部配成含生药量0.04g/mL的溶液，作为上柱供试液，将上柱供试液拌入1g聚酰胺粉末中，用8BV水洗脱；将水洗脱后的聚酰胺置于2gFL-3大孔树脂上部，再以70％乙醇洗脱，收集洗脱液并浓缩得到鹰嘴豆有效部位总皂苷类、异黄酮类123mg；
再将有效部位总皂苷和异黄酮的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
实施例3(醇提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔6h淋水1次，豆芽长至6cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆豆芽醇提物的制备：
将干燥的鹰嘴豆豆芽粉过筛25目，取5克置于圆底烧瓶中，加入5倍体积浓度为40％的乙醇，用超声波取10次，每次3小时，滤纸过滤，合并滤液，超声波控制温度在40℃，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位920mg；
鹰嘴豆豆芽有效部位的富集：
鹰嘴豆提取物配制成含生药量0.04g/mL的溶液，作为上柱供试液，将上柱供试液拌入1g聚酰胺粉末中，用8BV水洗脱；将水洗脱后的聚酰胺置于2gFL-3大孔树脂上部，再以60％乙醇洗脱，收集洗脱液并浓缩得到鹰嘴豆有效部位总皂苷类和异黄酮类137mg；
再将有效部位总皂苷和异黄酮类的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
实施例4(水提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为6cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5h淋水1次，豆芽长至7cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆豆芽水提物的制备：
将干燥的鹰嘴豆粉和豆芽粉过筛25目，取5克置于圆底烧瓶中，加入5倍体积的纯净水，用超声波提取10次，每次3小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，超声波控制温度在40℃，减压浓缩得到水提取物部位1.080g。
鹰嘴豆豆芽有效部位的富集：
鹰嘴豆提取部配成含生药量0.04g/mL的溶液，作为上柱供试液。将上柱供试液拌入1g聚酰胺粉末中，用8BV水洗脱；将水洗脱后的聚酰胺置于2gFL-3大孔树脂上部，再以60％乙醇洗脱，收集洗脱液并浓缩得到鹰嘴豆有效部位总皂苷类和异黄酮类137mg；
再将有效部位总皂苷和异黄酮类的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
实施例5(醇提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡2h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5h淋水1次，豆芽长至6cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆豆芽醇提物的制备：
将干燥的鹰嘴豆豆芽粉过筛25目，取5克置于圆底烧瓶中，加入10倍体积浓度为70％的异丙醇，用加热回流5次，每次1小时，滤纸过滤，合并滤液，回流提取控制温度在60℃，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位940mg；
鹰嘴豆豆芽有效部位的富集：
将提取物配成含生药量0.04g/mL的溶液，作为上柱供试液，将上柱供试液拌入1g聚酰胺粉末中，用8BV水洗脱；将水洗脱后的聚酰胺置于2gFL-3大孔树脂上部，再以50％乙醇洗脱，收集洗脱液并浓缩得到鹰嘴豆有效部位总皂苷类和异黄酮类132mg；
再将有效部位总皂苷类和异黄酮类的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
实施例6(水提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为6cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5h淋水1次，豆芽长至7cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆豆芽水提物的制备：
将干燥的鹰嘴豆粉和豆芽粉过筛25目，取5克置于圆底烧瓶中，加入5倍体积的纯净水，用加热回流提取5次，每次1小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，回流提取控制温度在80℃，减压浓缩得到水提取物部位990mg；
鹰嘴豆豆芽有效部位的富集：
将提取物配成含生药量0.04g/mL的溶液，作为上柱供试液，将上柱供试液拌入1g聚酰胺粉末中，用8BV水洗脱；将水洗脱后的聚酰胺置于2gFL-3大孔树脂上部，再以50％乙醇洗脱，收集洗脱液并浓缩得到鹰嘴豆有效部位132mg；
再将有效部位总皂苷类和异黄酮类的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
实施例7(醇提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡2h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5h淋水1次，豆芽长至6cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆豆芽醇提物的制备：
将干燥的鹰嘴豆豆芽粉过筛25目，取5克置于圆底烧瓶中，加入7倍体积浓度为80％的丁醇，冷浸室温提取8次，每次2小时，滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位921mg；
鹰嘴豆豆芽有效部位的富集：
将提取物配成含生药量0.04g/mL的溶液，作为上柱供试液，将上柱供试液拌入1g聚酰胺粉末中，用8BV水洗脱，将水洗脱后的聚酰胺置于2gFL-3大孔树脂上部，再以10％乙醇洗脱，收集洗脱液并浓缩得到鹰嘴豆有效部位总皂苷类和异黄酮类127mg；
再将有效部位总皂苷类和总异黄酮类的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
实施例8(水提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为6cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5h淋水1次，豆芽长至7cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆豆芽水提物的制备：
将干燥的鹰嘴豆粉和豆芽粉过筛25目，取5克置于圆底烧瓶中，加入7倍体积的纯净水，冷浸室温提取8次，每次2小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物部位984mg；
鹰嘴豆豆芽有效部位的富集：
鹰嘴豆提取部配成含生药量0.04g/mL的溶液，作为上柱供试液。将上柱供试液拌入1g聚酰胺粉末中，用8BV水洗脱；将水洗脱后的聚酰胺置于2gFL-3大孔树脂上部，再以10％乙醇洗脱，收集洗脱液并浓缩得到鹰嘴豆有效部位总皂苷类和异黄酮类127mg；
再将有效部位总皂苷和异黄酮的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
实施例9：
皂苷含量的测定方法：
准确称取齐墩果酸10mg，用乙醇定容于50mL容量瓶中，配成浓度为200μg/mL齐墩果酸标准溶液。移取齐墩果酸标准溶液0.40mL于20mL具塞试管中，80℃水浴将溶剂挥干。然后分别加入5％的香草醛一冰醋酸溶液0.40mL(取50mg香草醛用冰醋酸定容于10mL容量瓶中)，再加入高氯酸1.60mL，于70℃水浴中加热振荡15min，取出后迅速用冰水冷却，加入4mL乙酸乙酯稀释，在543nm下测定鹰嘴豆豆芽中总皂苷的含量见表：
异黄酮含量的测定方法：
以鹰嘴豆芽素A为标准品，做标准曲线；将样品溶解在甲醇中，用甲醇做空白，在260.9nm处测定样品中异黄酮的含量见表1：
表1：总皂苷和总异黄酮含量
实施例10：
抗癌活性的筛选方法：
Caco-2细胞培养：Caco-2细胞置于含10％胎牛血清的DMEM培养基，37℃、5％C02、100％湿度孵育箱培养，取对数生长期细胞进行实验。
MTT测定：取对数生长期的Caco-2细胞，用0.25％的胰酶消化后计数，调整细胞密度1×105个/mL，接种于96孔培养板中，每孔100μL，5％CO2、95％湿度、37℃培养24h，药物用二甲基亚砜助溶，分别配制终浓度为250、25、2.5、0.25、0.025μg/mL的受试药物，设立5个剂量组，每组设3个平行孔，每孔分别加入相应浓度受试药物1μL，并设对照组(加入等体积的二甲基亚砜)和本底组，分别培养12h、24h和48h。取出细胞培养板，每孔加入1mg/mL的MTT溶液50μL，37℃孵育4h，吸出上清液，加入150μL的二甲基亚砜，平板摇床震荡10min，使沉淀结晶充分溶解。在570nm处测定各孔的光密度。按以下公式计算增殖抑制率，并用CurveExpert1.4软件拟合并计算IC50。抑制率＝1-(实验组OD值-本底组OD值)/(对照组OD值-本底组OD值)×100％见表2：
表2提取物作用Caco-2细胞24h后的IC50浓度
从表2中可以看出：所述鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类和异黄酮类在制备治疗结肠癌的药物的用途或在制备抑制结肠癌功能食品的用途。
Claims (8)
1.一种采用溶剂提取法制备鹰嘴豆豆芽有效部位，其特征在于按下列步骤进行：
a、将鹰嘴豆用常规方法发芽并干燥，研磨成粉，过25目筛；
b、将干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积的浓度为10-100％的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物，其中超声波提取温度为20-40℃，回流提取温度为60-80℃；
c、或将新鲜鹰嘴豆豆芽或干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积的纯净水，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次2-4小时，过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物，其中超声波提取温度为20-60℃，回流提取温度为60-100℃；
d、将步骤b醇提物或步骤c水提取物拌入聚酰胺粉末中，用水洗脱，将水洗脱后的聚酰胺置于FL-3大孔树脂上部，再以10％-100％乙醇洗脱，收集洗脱液，合并，浓缩，即可得到鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类和异黄酮类；
e、再将有效部位总皂苷和异黄酮的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
2.一种鹰嘴豆豆芽有效部位的制备方法，其特征在于该有效部位采用溶剂提取法即醇提法或水提法制备，具体操作按下列步骤进行：
a、将鹰嘴豆用常规方法发芽并干燥，研磨成粉，过25目筛；
b、将干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积浓度为10-100％的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物，其中超声波提取温度为20-40℃，回流提取温度为60-80℃；
c、或将新鲜鹰嘴豆豆芽或干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积的纯净水，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次2-4小时，过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物，其中超声波提取温度为20-60℃，回流提取温度为60-100℃；
d、将步骤b的醇提物或步骤c的水提取物用含生药量0.04g/mL，作为上柱供试液，将上柱供试液拌入聚酰胺粉末中，用水洗脱，将水洗脱后的聚酰胺置于FL-3大孔树脂上部，再以浓度10％-100％乙醇洗脱，收集洗脱液，合并，浓缩，即可得到鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类、异黄酮类；
e、再将有效部位总皂苷和异黄酮的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤b中的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇浓度为60-70％。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤b中超声波提取温度为30-35℃，回流提取温度为70-80℃。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤c中超声波提取温度为30-40℃，回流提取温度为80-96℃。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤d中乙醇洗脱浓度为50-70％。
7.根据权利要求1所述的鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类和总异黄酮类在制备治疗结肠癌的药物的用途。
8.根据权利要求1所述的鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类和总异黄酮类在制备抑制结肠癌功能食品的用途。
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