CN106361801A - 一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法 - Google Patents

一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：a、将鹰嘴豆用水浸泡，发芽处理，分离出胚芽，烘干，粉碎，加入乙醇水溶液，混合，超声提取，在水浴温度60～80℃，加热1～2h，分离，提取1～6次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；b、将粗提液装入大孔树脂柱，静置，洗去杂质，再用体积浓度为60％～90％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮。经检测，本发明的方法分离条件简单、能耗低，获得鹰嘴豆异黄酮，纯度高、杂质较少，收率高。

Description

一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法
技术领域
本发明涉及鹰嘴豆异黄酮的制备技术领域，具体涉及一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法。
背景技术
鹰嘴豆属豆科野豌豆族鹰嘴豆属(Cicer arietinum L.)，是世界第二大消费豆类，世界上有50多个国家种植鹰嘴豆。鹰嘴豆具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗肿瘤、保护心血管等多种药理活性，与其活性成分异黄酮有关。鹰嘴豆中异黄酮主要为鹰嘴豆芽素A、刺芒柄花素、大豆苷元和染料木素等。
异黄酮类化合物是广泛存在于大豆、鹰嘴豆等豆科植物中的一类生物活性物质，在植物中主要以糖苷形式存在，其分子结构跟动物雌性激素比较相似，故被称作植物雌激素。膳食中的异黄酮以糖苷的形式存在，在体内可转化为具有生物活性的代谢物质。异黄酮的抗氧化性与免疫调节、降血压、降胆固醇、抗肿瘤等都有一定的联系，它通过减少氧自由基、轻自由基，从而达到抗衰老的功能。
目前从鹰嘴豆中提取分离鹰嘴豆异黄酮主要采取溶剂萃取的方法，通过乙醇等有机溶剂加热回流提取异黄酮。由于加热回流提取鹰嘴豆粉或豆芽中异黄酮时间较长一般为1～3小时，加热温度一般在60～90℃，温度较高，溶剂易挥发，成本较高，提取效率有限。在从鹰嘴豆提取异黄酮过程中往往忽略了鹰嘴豆发芽处理，提取出的异黄酮含量较少，纯度较低。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：
a、将鹰嘴豆用水浸泡，在10～20℃下发芽处理3～5天，分离出胚芽，在40～50℃烘干，粉碎，加入20～50质量倍的体积浓度为55％～85％的乙醇水溶液，混合，在超声功率200～500W条件下，超声10～30min，在水浴温度60～80℃，加热1～2h提取，分离，提取1～6次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；
b、将粗提液装入大孔树脂柱，静置1-3h，先用体积浓度为10％～20％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为60％～90％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为0.5-2mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮。
步骤a中的乙醇水溶液的体积浓度优选为65％～75％。
步骤a中超声功率优选为300～400W。
大孔树脂的型号优选为AB-8、DM-130、DM301、D101、HP-100、XAD-2或HP-20型。
步骤b中洗脱用乙醇水溶液的体积浓度优选为65％～85％。
本发明的优点在于：鹰嘴豆进行发芽，促进鹰嘴豆异黄酮合成，利用超声波空化作用辅助异黄酮提取，通过大孔树脂吸附富集，获得纯度较高的鹰嘴豆异黄酮，分离条件简单、样品提取率高、能耗低。利用HCLP进行检测，本发明的方法得到鹰嘴豆异黄酮含量高，纯度为42.4～58.3％，收率高、杂质较少。
附图说明
图1为鹰嘴豆中异黄酮对照品的液相色谱图。
图2为本发明从鹰嘴豆中提取异黄酮的液相色谱图。
具体实施方式
本发明的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明，并不能对本发明作任何限制。
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：
a、将鹰嘴豆筛选清洗，用水浸泡2h，在15℃下发芽4天，分离出胚芽，将胚芽在45℃烘干，粉碎，过60目筛，加入40质量倍的体积浓度为75％的乙醇水溶液，混合，在超声功率300W条件下，超声15min，在超声15min中采用超声10s，间歇5s进行，在水浴温度70℃，加热1.5h提取，分离，提取6次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；
b、将粗提液装入型号为AB-8大孔树脂柱，静置2h，先用体积浓度为15％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为65％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为0.5mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮，纯度为58.3％。
实施例2
一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：
a、将鹰嘴豆筛选清洗，用水浸泡2h，在15℃下发芽处理4天，分离出胚芽，在45℃烘干，粉碎，加入40质量倍的体积浓度为65％的乙醇水溶液，混合，在超声功率400W条件下，超声20min，在超声25min中采用超声10s，间歇5s进行，在水浴温度70℃，加热1.5h提取，分离，提取5次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；
b、将粗提液装入型号为DM-130大孔树脂柱，静置2h，先用体积浓度为15％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为85％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为1mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮，纯度为51.6％。
实施例3
一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：
a、将鹰嘴豆筛选清洗，用水浸泡2h，在10℃下发芽处理5天，分离出胚芽，在40℃烘干，粉碎，加入20质量倍的体积浓度为85％的乙醇水溶液，混合，在超声功率500W条件下，超声10min，在超声10min中采用超声10s，间歇5s进行，在水浴温度60℃，加热2h提取，分离，提取3次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；
b、将粗提液装入型号为DM301大孔树脂柱，静置1h，先用体积浓度为10％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为60％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为1mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮，纯度为47.3％。
实施例4
一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：
a、将鹰嘴豆筛选清洗，用水浸泡2h，在20℃下发芽处理3天，分离出胚芽，在50℃烘干，粉碎，加入50质量倍的体积浓度为55％的乙醇水溶液，混合，在超声功率200W条件下，超声30min，在超声30min中采用超声10s，间歇5s进行，在水浴温度80℃，加热1h提取，分离，提取1次，提取液过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；
b、将粗提液装入型号D101为大孔树脂柱，静置3h，先用体积浓度为20％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为90％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为2mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮，纯度为42.4％。
实验证明，型号为HP-100、XAD-2或HP-20的大孔树脂替代本实施例的型号为D101大孔树脂，其它同本实施例，制备出纯度相似的黄色粉末鹰嘴豆异黄酮。
用HPLC进行检测各实施例产物中鹰嘴豆芽素A、刺芒柄花素和大豆苷元的含量。
表1鹰嘴豆中主要异黄酮的含量
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4
大豆苷元(mg/g) 14.91±0.02 12.56±0.03 8.59±0.11 7.32±0.16
刺芒柄花素(mg/g) 239.05±34.2 201.48±12.5 151.2±18.7 138.5±22.3
鹰嘴豆芽素A(mg/g) 19.38±0.04 17.68±0.07 11.3±0.09 10.3±0.05

Claims (5)

1.一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，其特征是包括如下步骤：
a、将鹰嘴豆用水浸泡，在10～20℃下发芽处理3～5天，分离出胚芽，在40～50℃烘干，粉碎，加入20～50质量倍的体积浓度为55％～85％的乙醇水溶液，混合，在超声功率200～500W条件下，超声10～30min，在水浴温度60～80℃，加热1～2h提取，分离，提取1～6次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；
b、将粗提液装入大孔树脂柱，静置1-3h，先用体积浓度为10％～20％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为60％～90％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为0.5-2mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a中的乙醇水溶液的体积浓度为65％～75％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a中超声功率为300～400W。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述大孔树脂的型号为AB-8、DM-130、DM301、D101、HP-100、XAD-2或HP-20型。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b中洗脱用乙醇水溶液的体积浓度为65％～85％。
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