CN109691674A - 一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法。所述分离纯化方法是以粉碎后的高良姜茎叶为原料，以溶剂提取法或酶法进行功能性成分的提取，利用柱层析法进行功能性成分的分离纯化，最终得到高良姜茎叶提取物。所得到的高良姜茎叶提取物纯度高，具有很好的降血糖效果，对α‑淀粉酶的抑制率可达90.11%，可用于制备降血糖药物或保健品。该方法制备工艺简便，工艺参数容易控制，有效利用了被忽视浪费的高良姜茎叶，生产原料来源广泛，有效填补了高良姜茎叶开发利用的空白，具有很高的社会价值和经济价值。
Description
技术领域
本发明涉及植物活性成分提取技术领域，具体地，涉及一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法。
背景技术
高良姜(Alpinia officinarum Hance)为山姜属植物，别名风姜、小良姜、膏凉姜，是一种热带多年生草本。高良姜主产于广东、广西、云南、海南、台湾等地区，是一种食药兼用的植物资源，具有温胃止吐、散寒止痛、抗腹泻等功效。现代药理学研究表明，高良姜具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、降血糖、降脂等药理作用。
目前高良姜根部的食用药用价值被高度关注，而针对高良姜地上部分的研究非常少，在采集时茎叶直接被丢弃，造成资源的浪费。经实践证明，高良姜茎叶具有非常好的抗氧化、降血糖等生物活性，提取物中含有丰富的黄酮、多糖等活性物质，其中黄酮类化合物的主要成分是高良姜素，具有很高的研究价值和开发利用前景。但是由于目前高良姜茎叶这一原料被忽视，其中的功能性成分没有被提取出来并加以利用，使得在高良姜茎叶活性物质的的加工提取技术方面有所不足。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有高良姜茎叶活性物质的加工提取技术方面的不足，提供一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法，通过该方法能得到高纯度、具有很好降血糖效果的高良姜茎叶提取物。
本发明的另一目的在于提供由上述分离纯化方法制备得到的高良姜茎叶提取物在制备降血糖药物或保健品中的应用。
为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：
一种高良姜茎叶提取物的分离纯化的方法，包括以下步骤：
S1.选择新鲜、无病虫害的高良姜茎叶为原料，挑选除杂后干燥至含水量为10％以下，粉碎备用；
S2.取步骤S1所得高良姜茎叶粉末为原料，采用溶剂提取法或酶法进行提取，得粗提液；
S3.将步骤S2所得粗提液浓缩后离心，取上清液，对上清液中的功能性成分进行分离纯化，得到纯化后的高良姜茎叶提取物。
优选地，所述高良姜茎叶可以是不同品种或不同生长年份的；品种可以是鸡姜、牛姜、或其他品种，也可以是混合的高良姜品种，生长年份可以是1～5年中的一种、两种或两种以上的混合；以生长年份为2年或3年的高良姜茎叶较好。
作为一种可选择的实施方式，步骤S1中所述干燥的方法为热风干燥法，干燥条件为温度35～85℃。优选地，所述干燥条件为温度50℃。
作为第二种可选择的实施方式，步骤S1中所述干燥的方法为热泵干燥法，干燥条件为温度35～75℃，湿度10％～40％。优选地，干燥条件为温度50℃，湿度20％。
作为第三种可选择的实施方式，步骤S1中所述干燥的方法为真空冷冻干燥法，处理条件为预冻温度-60～-80℃，预冻10～12h，真空度为15～45Pa，冷肼温度为-52～-50℃。优选地，处理条件为预冻温-80℃，预冻10h，真空度为30Pa，冷肼温度为-50℃。
本发明可采用溶剂提取法对高良姜茎叶功能性成分进行提取，只需要较少的溶剂，提取效率高，通过探究溶剂提取法的处理条件对高良姜茎叶功能性成分提取量的影响，得到最佳工艺条件。
优选地，步骤S2中所述溶剂提取法所使用的溶剂为乙醇、水、碱性水、碱性稀醇、甲醇、乙酸乙酯中的至少一种。
优选地，步骤S2中所述溶剂提取法的处理条件为：按料液比1g:40～60mL加入水或体积分数为30～80％的乙醇溶液或体积分数为20～70％的甲醇溶液，混合均匀，提取温度为30～60℃，提取时间为0.5～3h。
更优选地，步骤S2中所述溶剂提取法的处理条件为：按料液比1g:56mL加入体积分数为42％的乙醇，混合均匀，提取温度为40℃，提取时间为1.8h。
本发明还可采用酶法对高良姜茎叶功能性成分进行提取，通过选用适当的酶，可通过酶反应较温和地将植物组织分解，加速有效成分的释放提取，来提高有效成分的收率；同时，选用相应的酶可将影响液体制剂的杂质如果胶、淀粉、蛋白质等分解去除，也可促进某些极性低的脂溶性成分转化为糖苷类易溶于水的成分而有利于提取。
优选地，步骤S2中所述酶法的处理条件为：按料液比1:(15～20)加入质量浓度为0.8～1％的酶液，调节pH至5.5～6.5，于30～40℃条件下酶解1～4h。
优选地，步骤S2中所述酶液为纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶中的至少一种。
作为一种可选择的实施方式，步骤S2中所述酶法的处理条件为：按料液比1:15加入质量浓度为0.9％的纤维素酶，调节pH至5.5，于30℃条件下酶解2h。
作为第二种可选择的实施方式，步骤S2中所述酶法的处理条件为：按料液比1:20加入质量浓度为0.8％的果胶酶，调节pH至6.0，于35℃条件下酶解1h。
作为第三种可选择的实施方式，步骤S2中所述酶法的处理条件为：按料液比1:18加入质量浓度为1％的半纤维素酶，调节pH至6.5，于40℃条件下酶解1.5h。
本发明采用柱层析法对步骤S2所得粗提液进行进一步的分离纯化，柱层析法具有理化性质稳定，选择吸附性强，解吸条件温和。易于再生，使用寿命长等优点。但是由于柱层析法中的树脂种类繁多，层析分离的机理各不相同，因此需要针对分离对象选择最合适的树脂，才能达到有效分离的目的。本发明人针对高良姜茎叶提取物，选择了对其具有一定吸附选择性、吸附过程易于进行、吸附容量大且易于解吸的树脂，并摸索得到了最优的柱层析法的处理条件，使得最终制备得到的高良姜茎叶提取物的纯度高，无明显杂质。
优选地，所述柱层析法采用大孔树脂、聚酰胺树脂、离子交换树脂中的至少一类。
更优选地，所述大孔树脂为AB-8、XDA-6、XAD-2、HPD-600、D101、LSA-12、LX-213、S-8中的至少一种；
所述聚酰胺树脂为30～100目的聚酰胺树脂；
所述柱层析法使用的洗脱液为甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的至少一种。
优选地，所述柱层析法包括以下步骤：将树脂按径高比1:(9～15)的比例湿法上柱，上样流速为1～4BV/h，上样浓度为2～6mg/mL；采用质量分数为40～75％的乙醇溶液或35～50％的甲醇溶液或20～60％的乙酸乙酯溶液进行洗脱，洗脱流速为1～6mL/min，收集洗脱液，即得纯化后的高良姜茎叶提取物。
更优选地，所述柱层析法包括以下步骤：采用AB-8树脂，按径高比1:15的比例湿法上柱，上样流速为1.5BV/h，上样浓度为3mg/mL；采用质量分数为55％的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为2.5mL/min。
由上述分离纯化方法制备得到的高良姜茎叶提取物具有很强的降血糖活性，未经纯化的粗提液对α-淀粉酶活性的抑制率为51.93％，纯化后的功能性成分溶液对α-淀粉酶活性的抑制率可达90.11％。
因此，由上述分离纯化方法制备得到的高良姜茎叶提取物在制备降血糖药物或保健品中的应用亦在本发明保护范围之内。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)通过本发明方法制备得到的高良姜茎叶提取物得率高，纯度高，具有很好的降血糖效果，对α-淀粉酶的抑制率可达90.11％，可用于制备降血糖药物或保健品。
(2)本发明提供的方法制备工艺简便，工艺参数容易控制，有效利用了被忽视浪费的高良姜茎叶，生产原料来源广泛，有效填补了高良姜茎叶开发利用的空白，具有很高的社会价值和经济价值。
附图说明
图1为料液比对高良姜茎叶功能性成分提取量的影响。
图2为乙醇体积分数对高良姜茎叶功能性成分提取量的影响。
图3为提取时间对高良姜茎叶功能性成分提取量的影响。
图4为提取温度对高良姜茎叶功能性成分提取量的影响。
图5为不同性质的大孔树脂对高良姜茎叶功能性成分的吸附和解吸效果。
图6为AB-8树脂对高良姜茎叶功能性成分的静态吸附曲线。
图7为上样流速对大孔树脂动态吸附的影响。
图8为上样浓度为大孔树脂动态吸附的影响。
图9为洗脱流速对大孔树脂动态解吸的影响。
图10为高良姜茎叶功能性成分的溶液对α-淀粉酶活性抑制试验结果。
具体实施方式
下面结合说明书附图及具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1
本实施例主要探究了溶剂提取法的处理条件对高良姜茎叶功能性成分提取量的影响，进而得到最佳工艺条件。具体步骤如下：
1、原料选择：选取两年生和三年生的高良姜茎叶，挑选新鲜的、无病虫害的茎叶作为原料；
2、原料干燥及粉碎：将高良姜茎叶采用热风干燥法进行处理，在温度为50℃的条件下干燥后粉碎，得到高良姜茎叶粉末；
3、功能性成分的提取：取步骤2所得的高良姜茎叶粉末，按一定的料液比加入不同体积分数的乙醇溶液，然后放入恒温水浴装置进行提取；
4、离心分离：提取液在5000r/min条件下离心10分钟，取上清液；
5、料液比、乙醇体积分数、提取时间、提取温度4个因素对高良姜茎叶中功能性成分提取量的影响如图1～4所示。在此基础上，采用Box-Behnken试验设计方法，优化提取处理条件，结果如表1所示；
表1 Box-Behnken试验结果
| 试验号 | A料液比(g/mL) | B乙醇体积分数/％ | C提取时间/h | D提取温度/℃ | Y功能性成分提取量(g/mL) |
| 1 | 1:50 | 30 | 1 | 40 | 92.81 |
| 2 | 1:40 | 50 | 1.5 | 40 | 91.86 |
| 3 | 1:50 | 40 | 1.5 | 40 | 99.64 |
| 4 | 1:40 | 40 | 1 | 40 | 87.65 |
| 5 | 1:40 | 40 | 1.5 | 50 | 89.27 |
| 6 | 1:50 | 50 | 2 | 40 | 99.29 |
| 7 | 1:40 | 40 | 2 | 40 | 92.98 |
| 8 | 1:50 | 30 | 1.5 | 50 | 92.77 |
| 9 | 1:50 | 50 | 1.5 | 30 | 96.80 |
| 10 | 1:50 | 50 | 1.5 | 50 | 95.01 |
| 11 | 1:60 | 40 | 2 | 40 | 101.71 |
| 12 | 1:50 | 40 | 1.5 | 40 | 99.66 |
| 13 | 1:50 | 30 | 2 | 40 | 95.15 |
| 14 | 1:50 | 40 | 2 | 30 | 99.49 |
| 15 | 1:40 | 30 | 1.5 | 40 | 88.94 |
| 16 | 1:40 | 40 | 1.5 | 30 | 92.63 |
| 17 | 1:50 | 40 | 1.5 | 40 | 99.58 |
| 18 | 1:50 | 40 | 1.5 | 40 | 99.64 |
| 19 | 1:50 | 40 | 2 | 50 | 96.82 |
| 20 | 1:60 | 40 | 1 | 40 | 97.49 |
| 21 | 1:60 | 50 | 1.5 | 40 | 98.79 |
| 22 | 1:60 | 30 | 1.5 | 40 | 98.78 |
| 23 | 1:60 | 40 | 1.5 | 30 | 96.09 |
| 24 | 1:60 | 40 | 1.5 | 50 | 97.96 |
| 25 | 1:50 | 50 | 1 | 40 | 93.01 |
| 26 | 1:50 | 40 | 1.5 | 40 | 99.67 |
| 27 | 1:50 | 40 | 1 | 50 | 90.61 |
| 28 | 1:50 | 40 | 1 | 30 | 94.63 |
| 29 | 1:50 | 30 | 1.5 | 30 | 96.20 |
采用Design Expert8.0统计软件对表1的数据进行回归拟合，得到功能性成分对上述4个因素的二次多项回归方程：
Y＝99.64+3.96A+0.84B+2.44C-1.12D-0.73AB-0.28AC+1.31AD+0.99BC+0.41BD+0.34CD-2.91A2-2.26B2-1.98C2-2.40D2
拟合得到的功能性成分的最佳提取处理条件为：料液比1:56g/mL、提取时间1.8h、提取温度40℃、乙醇体积分数42％；
6、减压浓缩：将粗提液浓缩后离心，收集上清液得到功能性成分浓度更高的溶液；
7、纯化：采用AB-8树脂按径高比1:10的比例湿法上柱，上样流速为2BV/h，上样浓度为3mg/mL；采用质量分数为60％的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为2mL/min，收集洗脱液，即为纯化后的溶液。
所得纯化后的溶液中功能性成分对α-淀粉酶活性抑制试验结果如图10所示。
本实施例中，当功能性成分的浓度为2.5mg/mL时，纯化后的溶液对α-淀粉酶的活性抑制率达到82.11％，仅次于对照品阿卡波糖(α-葡萄糖苷酶抑制剂)的89.25％。
实施例2
一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法，包括以下步骤：
1、原料选择：选取两年生和三年生的高良姜茎叶，挑选新鲜的、无病虫害的茎叶作为原料；
2、原料干燥及粉碎：将高良姜茎叶采用热泵干燥法进行处理，在温度为50℃、湿度为20％的条件下干燥后粉碎，得到高良姜茎叶粉末；
3、功能性成分的提取：取步骤2所得的高良姜茎叶粉末，采用酶法提取，按料液比1:15加入浓度为0.9％的纤维素酶溶液，将pH调为5.5，于30℃的条件下酶解2h，得到粗提液；
4、灭酶：将酶解液在95℃的条件下处理5min后，以5000r/min的转速离心得到粗提液；
5、减压浓缩：将粗提液浓缩后离心，收集上清液得到功能性成分浓度更高的溶液；
6、纯化：采用AB-8树脂，对浓缩后的溶液进行大孔树脂柱层析法进行纯化，按径高比1:15的比例湿法上柱，上样流速为1.5BV/h，上样浓度为3mg/mL；采用质量分数为55％的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为2.5mL/min，收集洗脱液，即为纯化后的溶液。
本实施例中，当功能性成分的浓度为3.0mg/mL时，纯化后的溶液对α-淀粉酶的活性抑制率达到90.11％，高于对照品阿卡波糖的89.25％。
实施例3
一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法，包括以下步骤：
1、原料选择：选取三年生的高良姜茎叶，挑选新鲜的、无病虫害的茎叶作为原料；
2、原料干燥及粉碎：将高良姜茎叶采用热泵干燥法进行处理，在温度为60℃、湿度为10％的条件下干燥后粉碎，得到高良姜茎叶粉末；
3、功能性成分的提取：取步骤2所得的高良姜茎叶粉末，采用酶法提取，按料液比1:20加入浓度为0.8％的果胶酶溶液，将pH调为6.0，在35℃的条件下酶解1h，得到粗提液；
4、灭酶：将酶解液在95℃的条件下处理5min后，以4000r/min的转速离心得到粗提液；
5、减压浓缩：将粗提液浓缩后离心，收集上清液得到功能性成分浓度更高的溶液；
6、纯化：采用AB-8树脂，对浓缩后的溶液进行大孔树脂柱层析法进行纯化，按径高比1:12的比例湿法上柱，上样流速为1BV/h，上样浓度为3mg/mL；采用质量分数为75％的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为1.5mL/min，收集洗脱液，即为纯化后的溶液。
本实施例中，当功能性成分的浓度为2.0mg/mL时，纯化后的溶液对α-淀粉酶的活性抑制率达到77.11％，与对照品阿卡波糖的77.25％非常接近，表现出较强的降血糖活性。
实施例4
一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法，包括以下步骤：
1、原料选择：选取两年生的高良姜茎叶，挑选新鲜的、无病虫害的茎叶作为原料；
2、原料干燥及粉碎：将高良姜茎叶采用真空冷冻干燥进行处理，在-80℃的冰冻柜中预冻10h，然后放入真空冷冻干燥机中，将真空度设置为30Pa，冷肼温度为-50℃，然后对干燥的高良姜茎叶进行粉碎，得到高良姜茎叶粉末；
3、功能性成分的提取：取步骤2所得的高良姜茎叶粉末，采用酶法提取，按料液比1:18加入浓度为1％的半纤维素酶溶液，将pH调为6.5，在40℃的条件下酶解1.5h，得到粗提液；
4、灭酶：将酶解液在95℃的条件下处理5min后，以4500r/min的转速离心得到粗提液；
5、减压浓缩：将粗提液浓缩后离心，收集上清液得到功能性成分浓度更高的溶液；
6、纯化：采用AB-8树脂，对浓缩后的溶液进行大孔树脂柱层析法进行纯化，按径高比1:9的比例湿法上柱，上样流速为1BV/h，上样浓度为3mg/mL；采用质量分数为55％的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为1mL/min，收集洗脱液，即为纯化后的溶液。
本实施例中，当功能性成分的浓度为2.8mg/mL时，纯化后的溶液对α-淀粉酶的活性抑制率达到89.11％，仅次于对照品阿卡波糖的90.25％，表现出较强的降血糖活性。
实施例5
本实施例探究了不同性质的大孔树脂对高良姜茎叶功能性成分的吸附和解吸效果的影响，具体步骤如下：
准确称取预处理过的8种不同性质的大孔树脂2.000g，分别置于100mL三角瓶中，加入50mL浓度为1.7mg/mL的功能性成分提取液，恒温30℃下震荡24h(120r/min)至吸附平衡，测定吸附后溶液中功能性成分的浓度，然后计算各树脂的平衡吸附率和吸附量；将吸附饱和树脂用去离子水冲洗过后，加入50mL浓度为60％的乙醇溶液，恒温30℃下震荡(120r/min)，静态解吸24h，测定解吸液中功能性成分的含量，计算解吸率。
结果如图5和图6所示，从大孔树脂对功能性成分的吸附率和解吸率的结果来看，非极性树脂AB-8对功能性成分的吸附和解吸的综合结果最好，得率为76.83％。
实施例6
本实施例探究了上样流速、上样浓度、洗脱流速对大孔树脂动态吸附的影响，具体步骤如下：
称取筛选出的预处理后的湿树脂，湿法装入的层析柱中，将功能性成分的浓度分别为1.0、2.0、3.0mg/mL的提取液分别按1.0、2.0、3.0BV/h的流速上样进行吸附，按每10mL一管收集流出液，测定每一管中功能性成分的浓度，计算不同上样流速、上样浓度的条件下，树脂对功能性成分的吸附量，绘制动态吸附曲线；称取吸附饱和的大孔树脂湿法装柱，以体积分数为60％的乙醇溶液为洗脱液，分别按0.5、1.5、2.5mL/min的流速进行动态洗脱，按每2mL一管收集流出液，测定每一管中功能性成分的浓度，绘制洗脱曲线。
结果如图7～9所示，在上样浓度2mg/mL，上样流速2BV/h，洗脱流速1.5mL/min的条件下，提取液的利用率最高，树脂的吸附率最高，纯化效果最好。
实施例7
一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法，包括以下步骤：
1、原料选择：选取三年生的高良姜茎叶，挑选新鲜的、无病虫害的茎叶作为原料；
2、原料干燥及粉碎：将高良姜茎叶采用真空冷冻干燥进行处理，在-70℃的冰冻柜中预冻10h，然后放入真空冷冻干燥机中，将真空度设置为35Pa，冷肼温度为-50℃，然后对干燥的高良姜茎叶进行粉碎，得到高良姜茎叶粉末；
3、功能性成分的提取：取步骤2所得的高良姜茎叶粉末，采用酶法提取，按料液比1:17加入浓度为0.9％的果胶酶溶液，将pH调为5.5，在35℃的条件下酶解2h，得到粗提液；
4、将酶解液在98℃的条件下处理8min后，以4900r/min的转速离心得到粗提液；
5、减压浓缩：将粗提液浓缩后离心，收集上清液得到功能性成分浓度更高的溶液；
6、纯化：采用HPD-600树脂，对浓缩后的溶液进行大孔树脂柱层析法进行纯化，按径高比1:12的比例湿法上柱，上样流速为1.5BV/h，上样浓度为3.5mg/mL；采用质量分数为70％的甲醇溶液进行洗脱，洗脱流速为1mL/min，收集洗脱液，即为纯化后的溶液；
本实施例中，当功能性成分浓度为2.9mg/mL时，纯化后的溶液对α-淀粉酶的活性抑制率达到89.87％，仅次于对照品阿卡波糖的90.01％，表现出较强的降血糖活性。
实施例8
一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法，包括以下步骤：
1、原料选择：选取两年生的高良姜茎叶，挑选新鲜的、无病虫害的茎叶作为原料；
2、原料干燥及粉碎：将高良姜茎叶采用真空冷冻干燥进行处理，在-75℃的冰冻柜中预冻15h，然后放入真空冷冻干燥机中，将真空度设置为40Pa，冷肼温度为-50℃，然后对干燥的高良姜茎叶进行粉碎，得到高良姜茎叶粉末；
3、功能性成分的提取：取步骤2所得的高良姜茎叶粉末，采用酶法提取，按料液比1:18加入浓度为0.8％的半纤维素酶溶液，将pH调为6.0，在32℃的条件下酶解3.5h，得到粗提液；
4、将酶解液在95℃的条件下处理10min后，以4800r/min的转速离心得到粗提液；
5、减压浓缩：将粗提液浓缩后离心，收集上清液得到功能性成分浓度更高的溶液；
6、纯化：采用LX-213树脂，对浓缩后的溶液进行大孔树脂柱层析法进行纯化，按径高比1:15的比例湿法上柱，上样流速为4BV/h，上样浓度为2.2mg/mL；采用质量分数为40％的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为1.4mL/min，收集洗脱液，即为纯化后的溶液。
本实施例中，当功能性成分浓度为2.7mg/mL时，纯化后的溶液对α-淀粉酶的活性抑制率达到86.43％，仅次于对照品阿卡波糖的88.18％，表现出较强的降血糖活性。
实施例9
一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法，包括以下步骤：
1、原料选择：选取三年生的高良姜茎叶，挑选新鲜的、无病虫害的茎叶作为原料；
2、原料干燥及粉碎：将高良姜茎叶采用热泵干燥法进行处理，在温度为65℃、湿度为18％的条件下干燥后粉碎，得到高良姜茎叶粉末；
3、功能性成分的提取：取步骤2所得的高良姜茎叶粉末，采用酶法提取，按料液比1:20加入浓度为0.8％的纤维素酶溶液，将pH调为6.0，在40℃的条件下酶解3h，得到粗提液；
4、将酶解液在98℃的条件下处理8min后，以4800r/min的转速离心得到粗提液；
5、减压浓缩：将粗提液浓缩后离心，收集上清液得到功能性成分浓度更高的溶液；
6、纯化：采用30～60目的聚酰胺树脂，对浓缩后的溶液进行大孔树脂柱层析法进行纯化，按径高比1:9的比例湿法上柱，上样流速为1.5BV/h，上样浓度为4.5mg/mL；采用质量分数为75％的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为1.4mL/min，收集洗脱液，即为纯化后的溶液。
本实施例中，当功能性成分浓度为2.4mg/mL时，纯化后的溶液对α-淀粉酶的活性抑制率达到80.93％，略高于对照品阿卡波糖的80.18％，表现出较强的降血糖活性。
实施例10
一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法，包括以下步骤：
1、原料选择：选取两年和三年生的高良姜茎叶，挑选新鲜的、无病虫害的茎叶作为原料；
2、原料干燥及粉碎：将高良姜茎叶采用热泵干燥法进行处理，在温度为50℃、湿度为16％的条件下干燥后粉碎，得到高良姜茎叶粉末；
3、功能性成分的提取：取步骤2所得的高良姜茎叶粉末，采用酶法提取，按料液比1:15加入浓度为1％的纤维素酶溶液，将pH调为6.0，在38℃的条件下酶解2.7h，得到粗提液；
4、将酶解液在90℃的条件下处理14min后，以5000r/min的转速离心得到粗提液；
5、减压浓缩：将粗提液浓缩后离心，收集上清液得到功能性成分浓度更高的溶液；
6、纯化：采用80～100目的聚酰胺树脂，对浓缩后的溶液进行大孔树脂柱层析法进行纯化，按径高比1:16的比例湿法上柱，上样流速为1.8BV/h，上样浓度为5mg/mL；采用质量分数为35％的甲醇溶液进行洗脱，洗脱流速为1.9mL/min，收集洗脱液，即为纯化后的溶液。
本实施例中，当功能性成分浓度为3.0mg/mL时，纯化后的溶液对α-淀粉酶的活性抑制率达到89.86％，略高于对照品阿卡波糖的89.18％，表现出较强的降血糖活性。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种高良姜茎叶提取物的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.选择新鲜、无病虫害的高良姜茎叶为原料，挑选除杂后干燥至含水量为10%以下，粉碎备用；
S2.取步骤S1所得高良姜茎叶粉末为原料，采用溶剂提取法或酶法进行提取，得粗提液；
S3.将步骤S2所得粗提液浓缩后离心，取上清液，对上清液中的功能性成分进行分离纯化，得到纯化后的高良姜茎叶提取物。
2.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，步骤S1中所述干燥的方法为热风干燥法，干燥条件为温度35～85℃；
或者采用热泵干燥法，干燥条件为温度35～75℃，湿度10%～40%；
或者采用真空冷冻干燥法，处理条件为预冻温度-60～-80℃，预冻10～12h，真空度为15～45Pa，冷肼温度为-52～-50℃。
3.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，步骤S2中所述溶剂提取法所使用的溶剂为乙醇、水、碱性水、碱性稀醇、甲醇、乙酸乙酯中的至少一种。
4.根据权利要求3所述分离纯化方法，其特征在于，步骤S2中所述溶剂提取法的处理条件为：按料液比1g:40～60mL加入水或体积分数为30～80%的乙醇溶液或体积分数为20～70%的甲醇溶液，混合均匀，提取温度为30～60℃，提取时间为0.5～3h。
5.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，步骤S2中所述酶法的处理条件为：按料液比1:（15～20）加入质量浓度为0.8～1%的酶液，调节pH至5.5～6.5，于30～40℃条件下酶解1～4h。
6.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，步骤S3中所述分离纯化的方法为柱层析法。
7.根据权利要求6所述分离纯化方法，其特征在于，所述柱层析法采用大孔树脂、聚酰胺树脂、离子交换树脂中的至少一类。
8.根据权利要求7所述分离纯化方法，其特征在于，所述大孔树脂为AB-8、XDA-6、XAD-2、HPD-600、D101、LSA-12、LX-213、S-8中的至少一种；
所述聚酰胺树脂为30～100目的聚酰胺树脂；
所述柱层析法使用的洗脱液为甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的至少一种。
9.根据权利要求6所述分离纯化方法，其特征在于，所述柱层析法包括以下步骤：将树脂按径高比1:（9～15）的比例湿法上柱，上样流速为1～4BV/h，上样浓度为2～6mg/mL；采用质量分数为40～75%的乙醇溶液或35～50%的甲醇溶液或20～60%的乙酸乙酯溶液进行洗脱，洗脱流速为1～6mL/min，收集洗脱液，即得纯化后的高良姜茎叶提取物。
10.权利要求1至9任一项所述分离纯化方法制备得到的高良姜茎叶提取物在制备降血糖药物或保健品中的应用。
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| CN (1) | CN109691674A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113521220A (zh) * | 2020-04-14 | 2021-10-22 | 广东省禾基生物科技有限公司 | 一种良姜细胞水的制备方法和得到的良姜细胞水的应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH11199891A (ja) * | 1998-01-09 | 1999-07-27 | Manabu Hentona | 月桃の葉のエキスの製造方法 |
| CN107998319A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-05-08 | 华南农业大学 | 高良姜茎叶生物活性提取物的制备方法及含黄酮的提取物和应用 |
| CN108404020A (zh) * | 2018-05-22 | 2018-08-17 | 华南理工大学 | 一种含有高良姜提取物和菊花提取物的具有降尿酸功能的组合物及其应用 |
-
2019
- 2019-01-30 CN CN201910092194.5A patent/CN109691674A/zh active Pending
Patent Citations (3)
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