CN112979725B - 一种从化香果中分离制备1,2,3,4,6-o-五没食子酰葡萄糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从化香果中分离制备1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖的方法，具体是以化香果为原料，经水提取、浓缩、干燥，得到化香果水提取物；水提取物经大孔树脂吸附；依次用不同体积百分比浓度的醇洗脱，收集纯醇洗脱部分，蒸发浓缩除去有机溶剂，经干燥得到1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖，HPLC测定纯度>98％。本方法工艺简单，操作方便，所制备得到1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖纯度高。
Description
技术领域：
本发明涉及一种以化香果为原料提取分离制备1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的方法，属于林产化工领域。
背景技术：
1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-O-pentagalloyl glucose,PGG)是一种天然的单宁多酚类化合物，广泛存在于五倍子、石榴、盐麸子和亚灌木牡丹等药用植物中。1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖属于水解单宁，由葡萄糖与5个没食子酸通过酯键相连形成的没食子酸单宁。药理研究表明，该化合物具有多方面的生理活性，如抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、拮抗内毒素/脂多糖、降糖祛脂等。目前1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖主要从五倍子(Chinese gallnut)和余甘子(Phyllanthus emblica L.)的枝叶中提取分离得到。1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖在中药五倍子中含量较高，由于五倍子中也存在相似的其它化学成分，造成其分离制备困难。化香树果为胡桃科植物化香树(Plotytarya strohilaceaSieb et Zuce)的果序，果序球果状，卵状椭圆形至长椭圆状圆柱形，长2.5-5cm，直径2-3cm，包片宿存，大质，褐色；小坚果扁平，两侧具狭翅。种子卵形，种皮膜质。我国西北、华东、华中、华南等地均出产。化香树在我国民间的应用广且历史悠久，多以叶、果序入药。化香树果具有清热解毒.散风止痛，活血化瘀、通窍排脓的功效，主要用于鼻渊、头痛、内伤胸胀、腹痛、筋骨疼痛、痈肿、疥癣等病症。国内化香树果的研究工作起步晚，对其化学成分研究较少。国外文献中有关化香树树种及生长方面的研究较多，而有关化香树有效成分的研究报道则较少。有关化香树成分提取的研究，多采用醇等有机溶剂从其叶子、木材、树皮中提取，对化香树果化学成分的研究则少见报道。Tanaka等(1993)对化香果果实和树皮中的鞣质成分进行了研究，从化香果果实和树皮中分离得到5个新的鞣花单宁化合物。高蓉(2009)对化香树果中总酚和总黄酮类活性成分进行了提取、分离纯化，得到了一条理想的化香树果序中总酚和总黄酮提取的工艺路线和优化的工艺条件。并通过对几种代表性的鼻窦炎、鼻炎主要感染菌金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌和铜绿假单胞菌的体外抑菌试验表明，化香树果中的总酚和总黄酮是主要的有效成分，二者均具有较强的抑菌作用。冯辉明(1989)等人从化香果丙酮水提取物中分离鉴定了4种化合物，分别为鞣花酸、没食子酸、英国栎鞣花素(pedunculagin)和木麻黄鞣亭(casuarictin)。陈奎(2008)通过萃取、硅胶柱色谱、结晶重结晶等手段从化香树果序中分离鉴定了5个化合物，分别为没食子酸、鞣花酸、槲皮素、3,3′-二甲氧基鞣花酸和3,3′-二甲氧基鞣花酸葡萄糖苷。目前，尚无从化香果中发现1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的报道。本实验室首次从化香果中分离并鉴定了1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖。本发明提供一种以化香果为原料，通过提取、分离、纯化制备得到1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的方法。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种从化香果中分离制备1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的方法，以化香果为原料，经水提取、蒸发浓缩、得到水提取物；水提取物经大孔树脂吸附、不同体积百分比浓度乙醇溶液进行梯度洗脱、收集醇洗脱液，蒸发浓缩除去有机溶剂，经干燥得到淡黄色粉末状1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖产品。本技术方法工艺简单，操作方便，所制备得到1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖纯度高。
本发明的技术方案为：一种从化香果中分离制备1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的方法，以化香果为原料，化香果经水提取得到水提取物，水提取物经大孔树脂吸附；依次用体积百分比浓度为0、20％、40％、60％、80％、100％的醇溶液进行洗脱，收集醇洗脱溶液，其中100％乙醇洗脱部分，蒸发浓缩除去有机溶剂，经干燥得到淡黄色粉末状1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖产品，HPLC测定纯度＞98％。
所述的化香果水提取物按以下方法制备：将化香果粉碎以水为溶剂加热浸提，浸提进行3次，每次的浸提时间1～2h，过滤去渣，真空加热浓缩得化香果水提取物浓缩液直接使用，或是将化香果水提取物浓缩液真空冷冻干燥得到粉状化香果提取物使用。
所述醇溶液可以为乙醇或甲醇溶液，所述大孔树脂型号为D101、HP-20、AB-8、HPD-600中的一种，各体积百分比浓度乙醇洗脱液用量为树脂柱体积的1～1.3倍，减压蒸发温度为40℃～45℃，干燥方法为冷冻干燥、真空干燥、喷雾干燥中的一种。
有益效果：
(1)本发明提出的一种从化香果中分离制备1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的方法，化香果原料采用水提取，蒸发浓缩、大孔树脂纯化、醇溶液梯度洗脱、收集洗脱液、蒸发浓缩、干燥的方法可得到高纯度的1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖产品。
(2)本发明采用的化香果原料，在我国有丰富的资源。本发明将有助于这种天然资源的高效利用。
(3)本发明方法工艺简单，适合大规模生产。以化香果为原料生产价格昂贵的1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖，具有非常广阔的经济前景。
附图说明：
图1 1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖样品的高效液相色谱图，280nm波长下检测。
图2 1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖样品ESI-MS质谱图(负离子模式)。
图3 1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖样品的红外光谱图。
图4 1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖样品的1H NMR谱图。
图5 1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖样品的13C NMR谱图。
图6 1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的制备流程图。
具体实施方式：
一种从化香果中分离制备1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的方法，制备步骤如下：
(1)粉碎：自然风干的的化香果原料用植物粉碎机粉碎；
(2)提取：以水为溶剂，将粉碎好的化香果原料用水罐组加热提取，提取时间为3～6h，过滤得浸提液；
(3)浓缩：提取液在真空下加热浓缩，得到化香果提取物浓缩液；
(4)吸附：化香果提取物浓缩液上大孔树脂柱进行吸附；
(5)洗脱：依次用体积百分比浓度为0、20％、40％、60％、80％、100％的乙醇或甲醇溶液进行洗脱，收集醇洗脱液；
(6)蒸发：其中100％乙醇洗脱部分在40℃～45℃温度下减压蒸发，回收乙醇，加少量水得水溶液；
(7)干燥：水溶液经干燥得到淡黄色1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖产品。
步骤(2)的水提取过程中，提取分3次完成，每次1～2h。
步骤(4)的大孔树脂型号可以为D101、HP-20、AB-8、HPD-600中的一种。
步骤(5)的各体积百分比浓度乙醇洗脱液用量为树脂柱体积的1～1.3倍。
步骤(7)的干燥方法可以为冷冻干燥、真空干燥、喷雾干燥中的一种。
1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖产品的含量大于98％。
实施例1
(1)粉碎：自然风干的的化香果原料用植物粉碎机粉碎，通过Φ2mm筛板。
(2)提取：将粉碎好的1.5kg化香果置于提取罐内，加水15L，加热，控制温度在80℃，提取时间为90min，提取3次，过滤去渣，合并滤液。
(3)浓缩：将提取液浓缩，真空冷冻干燥，获得粉状化香果提取物578g。
(4)吸附：取32g化香果提取物，加入468mL热水溶解，冷却至室温后上D101大孔吸附树脂柱进行吸附。
(5)洗脱：依次用体积百分比浓度为0、20％、40％、60％、80％、100％的乙醇溶液进行洗脱，每次洗脱液用量450mL，收集各个洗脱部分。
(6)蒸发：100％乙醇洗脱部分在40～45℃温度下减压蒸发，回收乙醇，补充水溶液至体积约20mL。
(7)干燥：水溶液冷冻干燥得到淡黄色产品0.1g，用HPLC方法测定1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖纯度为98.8％。
实施例2
(1)吸附：取20g化香果提取物，加入380mL热水溶解，冷却后上HP-20树脂柱进行吸附。
(2)洗脱：依次用体积百分比浓度为0、20％、40％、60％、80％、100％的乙醇溶液进行洗脱，每次洗脱液用量500mL，收集洗脱液。
(3)蒸发：其中100％乙醇洗脱部分在40℃～45℃温度下减压蒸发1h，回收乙醇，补充水溶液至体积约20mL。
(4)干燥：水溶液经冷冻干燥得到淡黄色产品0.15g，用HPLC方法测定1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖纯度为98.2％。
实施例3
(1)吸附：取20g化香果提取物，加入400mL热水溶解，冷却后上D101树脂柱进行吸附。
(2)洗脱：依次用体积百分比浓度为0、20％、40％、60％、80％、100％的甲醇溶液进行洗脱，每次洗脱液用量500mL，收集洗脱液。
(3)蒸发：其中100％甲醇洗脱部分在40℃～45℃温度下减压蒸发1h，回收甲醇，补充水溶液至体积约20mL。
(4)干燥：水溶液经冷冻干燥得到淡黄色产品0.12g，用HPLC方法测定1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖纯度为98.5％。
实施例4：
(1)产品纯度分析—HPLC色谱法
色谱柱BDS Hypersil，C18 5μ，250mm×4.6mm；流动相为60％甲醇(含0.1％三氟乙酸)溶液。进样量10μL；流速1mL/min；柱温23℃；检测波长280nm。定量方法：峰面积归一化法。产品的HPLC色谱图见图1，ESI-MS质谱图(负离子模式)见图2，红外光谱图见图3。
(2)化学结构鉴定—波谱分析
1H-NMR(500MHz,methanol-d4)δ:4.42(2H,m,H-6),4.53(1H,m,H-5),5.62(1H,dd,J＝1.6,8.4Hz,H-2),5.64(1H,t,J＝9.6Hz,H-4),5.93(1H,t,J＝9.6Hz,H-3),6.27(1H,d,J＝8.4Hz,H-1),6.93,6.98,7.01,7.08,7.14(each 2H,s,H-galloyl-2,6)；13C-NMR(100MHz,methanol-d4)δ:61.76(C-6),68.46(C-4),70.83(C-2),72.75(C-3),73.05(C-5),92.46(C-1),109.00,109.04,109.12,109.28(each 2C,C-galloyl-2,6),118.37,118.85,118.89,119.00,119.69(each 1C,C-galloyl-1),138.62,138.74,138.92,138.97,139.38(each1C,C-galloyl-4),144.89,144.98,145.04,145.07,145.16(each 2C,C-galloyl-3,5),164.85,165.55,165.64,165.92,166.56(each 1C,C-galloyl-7)。上述数据与文献报道的结构基本一致，故鉴定为1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖。氢谱见图4，碳谱见图5。
Claims (5)
1.一种从化香果中分离制备1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的方法，以化香果为原料，其特征在于，化香果经水提取得到水提取物，水提取物经大孔树脂吸附；依次用体积百分比浓度为0、20%、40%、60%、80%、100%的醇溶液进行洗脱，收集100%醇洗脱部分，蒸发浓缩除去有机溶剂，经干燥得到淡黄色粉末状1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖产品，HPLC测定纯度>98%；所述醇溶液为乙醇或甲醇溶液；所述大孔树脂型号为D101、HP-20中的一种。
2.按照权利要求1所述的化香果分离制备1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的方法，其特征在于，所述的化香果水提取物按以下方法制备：将化香果粉碎，以水为溶剂加热浸提，浸提进行3次，每次的浸提时间1~2 h，过滤去渣，真空加热浓缩得化香果水提取物浓缩液直接使用，或是将化香果水提取物浓缩液真空冷冻干燥得到粉状化香果提取物使用。
3.按照权利要求1所述的化香果分离制备1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的方法，其特征在于，所述的体积百分比浓度为0、20%、40%、60%、80%、100%的醇溶液用量分别为树脂柱体积的1~1.3倍。
4.按照权利要求1所述的化香果分离制备1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的方法，其特征在于，所述的蒸发为减压蒸发，温度为40ºC~45ºC。
5.按照权利要求1所述的化香果分离制备1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的方法，其特征在于，所述的干燥方法为冷冻干燥、真空干燥、喷雾干燥中的一种。
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| 化香果化学成分的研究;罗庆云等;《南京林产工业学院学报》;19831231;第123-130页 * |
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