CN102068464A - 六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物及其医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物及其用作抗菌剂、抗病毒剂的医药用途，包括以下步骤制备得到：(1)将六神曲粗粉用低分子醇回流提取，得醇提取物；(2)将醇提取物用乙酸乙酯、正丁醇萃取；将萃取液减压回收溶剂，即得。本发明六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物主要由六神曲发酵后的发酵产物组成；该有效部位提取物具有较强的抗菌、抗病毒活性，尤其对于常见的肠道致病菌和流感病毒作用效果突出，用药安全，无毒副反应。

Description

六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物及其医药用途

技术领域

本发明涉及一种中药有效部位提取物，尤其涉及一种发酵中药六神曲的提取物及其制备方法，本发明还涉及该活性提取物在制备抗菌、抗病毒药物中的用途，属于中药有效部位提取物领域。

背景技术

六神曲是由面粉(和/或麦麸)、杏仁、赤小豆，及鲜青蒿、鲜辣蓼、鲜苍耳草汁(或干品煎汁)，按一定比例经过共同发酵制成的中药材，为传统发酵曲剂中应用最为广泛的一种。六神曲味甘、辛，性温，归脾、胃经，具有健脾开胃，发表散寒，兼有发散功用，用于感冒、食滞、食积不化、肠鸣、食积泄泻，尤以治疗时暑暴泻、饮食所伤见长。传统应用中，六神曲需要经过高温炒制炮制后方可应用。多年以来，关于六神曲药效物质基础研究一直不明确，认为药效物质基础是活性酶、益生菌的观点一直占主导地位，并且据此主张生用为好，这与传统用药习惯和临床效应是不符合的。

六神曲具有悠久、广泛的临床应用历史和确切的疗效，相对于其它临床治疗消化道菌群紊乱及病毒感染性疾病使用的化学合成药、抗生素类等更加安全、可靠。

迄今为止，尚没有六神曲抗菌或抗病毒有效部位提取物的报道，本发明提供一种六神曲抗菌或抗病毒有效部位提取物，可以为临床治疗胃肠感冒、消化道菌群紊乱及病毒感染性疾病提供新方法，对于提升中药的科技含量，实现中药现代化也具有重要意义的。

发明内容

本发明目的之一是提供一种六神曲抗菌、抗病毒活性提取物；

本发明目的之二是提供一种上述六神曲抗菌、抗病毒活性提取物的制备方法；

本发明目的之三是将提供所述六神曲抗菌、抗病毒活性提取物的医药用途，即用于治疗胃肠感冒、食积不化，脘腹胀满、腹泻、肠炎、痢疾等消化道菌群失调及感冒等病毒感染性疾病；

本发明目的之四是提供一种六神曲抗菌、抗病毒活性提取物的液质联用指纹图谱、化学组成特征；

本发明目的之五是提供一种六神曲抗菌、抗病毒活性提取物可以直接制成药物或作为原料药与其他药物配伍制成片剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液、软胶囊剂、胶囊剂或其他剂型的医药用途。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物，包括以下步骤制备得到：

将六神曲粗粉用低分子醇回流提取，得醇提取物；将醇提取物用乙酸乙酯或正丁醇萃取，或者是依次用乙酸乙酯或正丁醇萃取；将萃取液减压回收溶剂，即得。

优选的，一种六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物，包括以下步骤制备得到：

(1)六神曲粗粉用低分子醇回流提取；提取液滤过，滤液减压回收溶剂至稠膏；

(2)稠膏用水稀释，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取至萃取液澄清；

(3)将乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液减压回收溶剂，即得。

本发明中所述的低分子醇可以是甲醇、乙醇等低分子醇，优选为乙醇，更优选为浓度为95％的乙醇；

为了达到更好的提取效果，优选的，步骤(1)中将六神曲粗粉用4-8倍六神曲体积的95％乙醇回流提取3-4次，每次2-4小时，过滤，合并滤液；步骤(2)中优选采用10-20倍稠膏体积的水稀释稠膏，再分别依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，每次萃取液用量为1-3倍体积比的稀释稠膏量，萃取次数需至萃取液澄清。经检测，其中，乙酸乙酯提取组分的出膏率为0.6～0.8％(优选为0.8％)，正丁醇提取组分出膏率为0.8-1.0％(优选为1.0％)。

本发明所述六神曲可以是生六神曲、焦六神曲、麸炒六神曲，原药材包括但不限于自然发酵的六神曲或以纯种发酵方式制备的六神曲，以及在发酵原料上增减作为发酵培养基的组成原料生产的中药发酵曲剂。

本发明六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物，其特征在于：不限于上述的提取或分离方法，其它各种新型分离填料、技术、制备方法的应用，以制备六神曲微生物发酵产物为目的的，均落入本发明。

六神曲、麸炒六神曲和焦六神曲也可参照以下方法制备得到：

(1)六神曲的制备方法：面粉100kg(或面粉40kg，麦麸60kg)、杏仁粉4kg、赤小豆粉4kg、青蒿、苍耳草、辣蓼鲜品各7kg(也可用干品，用量为1/3)。①鲜青蒿、鲜苍耳草、鲜辣蓼榨出鲜汁，残渣加水常规法煎汁，合并药液，若用干品则直接煮汁；②将面粉或麦麸与杏仁、赤小豆混匀；③将药汁与药粉混和，揉搓成握则成团，掷之即散的“软材”；④用模具压制成一定规格的待发酵曲块；⑤将曲块置于30～37℃，相对湿度70～80％，堆置发酵约7天；⑥发酵后，切成小块，干燥。在步骤③中可混入纯种菌种，其余步骤相同，即为进行纯种发酵。

(2)麸炒六神曲：麸炒(每100kg神曲，用麦麸10kg)至六神曲表面呈棕黄色；或用清炒法，炒至六神曲呈棕黄色。

(3)焦六神曲：将六神曲炒至表面呈焦褐色，内部微黄色，有焦香气。

本发明六神曲有效部位提取物可以有效抑制、杀灭各种常见的细菌、病毒，尤其是肠道致病菌、流感病毒。如：痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、白葡萄球菌、柠檬葡萄球菌、伤寒杆菌、乙型溶血性链球菌、乙型副伤寒杆菌等，其中：乙酸乙酯提取组分的最低抑菌浓度为0.64mg/ml，最低杀菌浓度为0.65mg/ml；正丁醇提取组分最低抑菌浓度为1.70mg/ml，最低杀菌浓度为1.70mg/ml。本发明六神曲有效部位提取物具有较强的抗流感病毒A、流感病毒B作用，临床用药安全。

本发明还提供了一种六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物的液质联用指纹图谱，可以阐明其化合物组成、分子量、保留时间、质荷比、离子强度等：

1.六神曲液质联用正离子流指纹图谱：

六神曲乙酸乙酯萃取部位以甲醇∶水＝7∶3溶解，13000rpm离心5min，取上清液经0.22微米滤膜过滤，进样量为3μl；

Waters ACQUITY UPLC液相系统：超高效液相色谱柱HSS T3，2.1×100mm，1.7μm，40℃；流速：0.4ml/min；流动相：水、乙腈，梯度洗脱；

Waters Xevo QTof质谱系统：电喷雾正离子离子化模式；毛细管电压：3000V；锥孔电压：40V；除溶剂温度：450℃；除溶剂气体：800L/Hr；离子源温度：120℃；采集范围：m/z 50-1000；碰撞气体：氩气。所得正离子全成分扫描液质联用指纹图谱见图1，对图1中数据进一步分析，可以得出，六神曲有效部位的化学组成包括由具备以下色谱、质谱特征的化合物共同组成，见表1。

表1  六神曲乙酸乙酯提取部位化学组成列表(ES⁺离子)

2.六神曲液质联用负离子流指纹图谱：

六神曲乙酸乙酯萃取部位以甲醇∶水＝7∶3溶解，13000rpm离心5min，取上清液经0.22微米滤膜过滤，进样量为3μl；

Waters ACQUITY UPLC液相系统：超高效液相色谱柱HSS T3，2.1×100mm，1.7μm，40℃；流速：0.5ml/min；流动相：水、乙腈，梯度洗脱；

Waters Xevo QTof质谱系统：电喷雾负离子离子化模式；毛细管电压：2500V；锥孔电压：40V；除溶剂温度：300℃；除溶剂气体：600L/Hr；离子源温度：120℃；采集范围：m/z 50-1000；碰撞气体：氩气。所得负离子全成分扫描液质联用指纹图谱见图2。

表2  六神曲乙酸乙酯提取部位化学组成列表(ES^-离子)

具有以上53种质谱特征的中药六神曲中化合物的发现与应用，均将落入本发明。

胃肠感冒是典型的消化道菌群失调性疾病，多为肠道的条件致病菌或外来致病菌、病毒所致，此外消化不良、食积不化，腹泻、肠炎、痢疾、食物中毒等皆为消化道菌群失调性疾病。本发明中药六神曲有效部位提取物可以作为抗菌剂用于治疗消化道菌群失调性疾病。感冒多由流感病毒感染所致，六神曲发酵产物具有较强的抗流感病毒活性，这与其传统上治疗外感风寒、解表的作用相一致。

通过药效学实验，本发明确证本发明六神曲有效部位提取物具有强大的抑菌、杀菌、抗病毒活性，尤其对于常见的肠道致病菌和流感病毒作用效果突出。

本发明再一个目的是提供一种抗菌剂、抗病毒剂的药物组合物，该药物组合物由有效量的本发明六神曲有效部位提取物与药学上可接受的载体、赋型剂或稀释剂配合而成，也可作为原料与其他药物进行配伍。根据不同的给药方法，本发明药物组合物可以含有1％-90％重量，优选10-60％重量的六神曲有效部位提取物。

本发明六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物可以加入制备不同剂型时所需的各种辅料和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂后，以常规的中药制剂方法制备成任何一种适宜的临床制剂，例如可以是注射剂(粉针、冻干粉针、水针、输液等)、口服制剂(片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊或滴丸)等；其中，所述的辅料可以是抗氧络合剂、填充剂、骨架材料等；所述的药学上可接受的载体是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖酐、氯化钠、葡萄糖酸钙或磷酸钙中的一种或几种。

附图说明

图1六神曲乙酸乙酯有效部位提取部位液质联用指纹图谱正离子流图。

图2六神曲乙酸乙酯有效部位提取部位液质联用指纹图谱负离子流图。

具体实施方式

下面结合具体实施例、实验例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例、实验例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1

取市售6kg麸炒六神曲干燥粗粉，加入4倍六神曲体积比的95％乙醇，回流提取4次，每次2小时，过滤，合并滤液；减压回收乙醇至稠膏状；将稠膏用20倍稠膏体积的水稀释稠膏，再分别依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，每次萃取液用量为1倍体积的稀释稠膏量，萃取次数需至萃取液澄清；减压回收溶剂得各组分；冷冻干燥得干膏，乙酸乙酯提取组分出膏36g，出膏率为0.6％；正丁醇提取组分出膏48g，出膏率为0.8％。

实施例2

取6kg麸炒六神曲干燥粗粉，加入8倍六神曲体积比的80％乙醇，回流提取4次，每次4小时，过滤，合并滤液；减压回收醇至稠膏状；将稠膏用10倍稠膏体积的水稀释稠膏，再分别依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，每次萃取液用量为3倍体积的稀释稠膏量，萃取次数需至萃取液澄清；减压回收溶剂得各组分；冷冻干燥得干膏，乙酸乙酯提取组分出膏48g，出膏率为0.8％；正丁醇提取组分出膏60g，出膏率为1.0％。

实施例3

取200g焦六神曲干燥粗粉，加入5倍六神曲体积比的95％甲醇，回流提取3次，每次3小时，过滤，合并滤液；减压回收醇至稠膏状；将稠膏用15倍稠膏体积的水稀释稠膏，再分别依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，每次萃取液用量为2倍体积比的稀释稠膏量，萃取次数需至萃取液澄清；减压回收溶剂得各组分；冷冻干燥得干膏，乙酸乙酯提取组分出膏1.3g，出膏率为0.65％；正丁醇提取组分出膏1.8g，出膏率为0.9％。

实施例4制成片剂

取实施例1所制备的六神曲抗菌有效部位提取物适量，加入稀释剂、崩解剂等辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成片，包衣或喷薄膜衣即得。

实施例5制成口服液

取实施例2所制备的六神曲抗菌有效部位提取物适量，加入适量增溶剂，研磨，再加少量水稀释，混匀，然后加入矫味剂及防腐剂，混匀，加水至规定量。混匀，分装，灭菌，即得。

实施例6制成软胶囊剂

取实施例3所制备的六神曲抗菌有效部位提取物适量，加入适量增溶剂，稀释剂研磨均匀，加入少量矫味剂及防腐剂，制成稠厚度适宜的膏状物，选用适宜的囊材，采用塑制法压制成软胶囊剂，适度烘干，放凉后分装即得。

试验例1  六神曲抗菌有效部位提取物体外抑菌、杀菌试验

一、实验材料

1.菌种及培养基

(1)菌种痢疾杆菌，福氏痢疾杆菌，金黄色葡萄球菌，白葡萄球菌，柠檬葡萄球菌，大肠杆菌，乙型溶血性链球菌，乙型副伤寒杆菌由黑龙江中医药大学微生物免疫教研室提供；

菌种的复苏：将供试菌株接于5ml无菌牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于37℃培养18h，再将18h培养的细菌接种于另一5ml无菌牛肉膏蛋白胨液体培养基，再行培养6h作为试验菌液，此时的试验菌对药物较敏感。

(2)牛肉膏蛋白胨液体培养基牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，Nacl 0.5g，加入装有100ml蒸馏水的250ml烧瓶内，加热沸腾使之完全溶解；冷至40-45℃时，以0.1mol/LNaOH溶液矫正pH为7.6，再煮沸10min，用滤纸过滤澄清，补足失水，重新校测pH一次；装于锥形瓶内，瓶口塞紧，于103.4kPa，121.3℃，20-30min高压灭菌。

牛肉膏蛋白胨固体培养基按液体培养基配制方法，校正pH后，加入1.5％的营养琼脂，加热溶解，过滤，装入锥形瓶中，按上法灭菌，在无菌条件下，分装于无菌表面皿中，放凉。

培养基无菌检验：将已灭菌的培养基，放在37℃孵箱中培养24h，如无细菌生长，即可应用。

2.供试药物：实施例1、实施例2所制备的六神曲乙酸乙酯、正丁醇萃取物干膏，干燥至恒重，精密称重，分别加水溶解或制成水混悬液；

二、实验方法

最低抑菌浓度(MIC)的测定：用吸管将牛肉膏蛋白胨液体培养基溶液分装于10只无菌试管内，第一管1.5ml，其余各管1ml；吸取供试药物的水溶解或水混悬液0.5ml加入第一管内，吹吸三次，混匀后吸出1ml至第二管中，混匀后再吸1ml至第三管中，依此类推至第九管时，混匀后吸出1ml弃去，含中药原液稀释倍数分别为1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024，第十管不加药物；高压灭菌；吸取1/1000试验菌液0.05ml，分别加于各试管中(除每组的第九个试管)，并轻轻摇匀；37℃，24h培养并观察。结果判别：无细菌生长的最低药物浓度即为最低抑菌浓度(MIC)，结果见表1。

最低杀菌浓度(M BC)的测定：将上述无细菌生长的试管中菌、药混合液接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上继续培养24h，观察生长情况，没有细菌生长的最低浓度为最低杀菌浓度，结果见表2。

结论：本发明六神曲乙酸乙酯、正丁醇萃取物具有较强的抑菌、杀菌作用，其中：乙酸乙酯提取组分的最低抑菌浓度为0.64mg/ml，最低杀菌浓度为0.65mg/ml；正丁醇提取组分最低抑菌浓度为1.70mg/ml，最低杀菌浓度为1.70mg/ml；乙酸乙酯部位的作用略强于正丁醇部位，两部位的化学成分应有交叉；水层部位作用较弱、石油醚部位无抑菌作用。

表1  六神曲有效部位提取物的抑菌作用

表2  六神曲有效部位提取物的杀菌作用

试验例2  六神曲有效部位提取物抗病毒作用

采用体外实验，以MDCK细胞为模型，研究本发明六神曲有效部位提取物的细胞毒性以及对流感病毒A型和流感病毒B型的抑制活性。

1 材料与方法

1.1 材料

(1)MDCK细胞；流感病毒A、流感病毒B均由黑龙江省疾控中心提供；

(2)培养液 细胞培养液为含10％新生牛血清，0.3mg/ml谷氨酰胺，100IU/ml青霉素，100μg/ml链霉素的Eagles基础培养液(MEM)；维持液为含10％白蛋白，0.3mg/ml谷氨酰胺，100IU/ml青霉素，100μg/ml链霉素的Eagles基础培养液(MEM)；

(3)自制六神曲乙酸乙酯部位提取物；阳性对照药：扎那米韦1.2流感病毒A型、B型病毒毒力测定将A、B型流感病毒倍比稀释10个浓度，在MDCK细胞培养下，镜下观察细胞病变，以测定流感病毒的半数感量TCID₅₀。

1.3 六神曲乙酸乙酯提取物细胞毒性实验

(1)细胞病变法 将生长稳定的MDCK细胞计数，约2.5×10⁵个/ml，接种到96孔培养板中，0.1ml/孔，加培养液，37℃，5％CO2培养箱培养24h；待细胞长成单层后，弃去培养液，加入用维持液倍比稀释的六神曲乙酸乙酯提取物，设细胞对照组、阳性药物组，显微镜下观察细胞病变，测定药物半数毒性浓度TC₅₀和最大无毒浓度TC₀。

(2)MTT法 按上法加入用维持液倍比稀释的本发明六神曲乙酸乙酯提取物后，置37℃，5％CO2培养箱，培养72h，弃上清，加100μL维持液配制的MTT(0.5mg/ml)，37℃继续培养4h每孔加入100μl 50％N，N-二甲基甲酰胺-20％十二烷基磺酸钠脱色液，37℃过夜，在570nm波长处测定OD值；实验设细胞对照、阳性对照药孔，计算TC₅₀和最大无毒浓度TC₀。

1.4 本发明六神曲有效部位提取物体外抗流感病毒活性实验MDCK细胞按上法接种到96孔培养，待细胞长成单层后，弃去培养液，加入10TCID₅₀量的病毒，37℃吸附2h，然后弃病毒液，加无血清MEM培养液洗板；以最大无毒药物浓度TC₀，加维持液倍比稀释后，加入培养板中，平行做3孔，设细胞对照、病毒对照、阳性对照药组，37℃，5％CO2培养3天，待病毒对照组病变为75％以上时，镜下观察各组病变情况；计算半数有效浓度IC₅₀，结果见表3。

表3  六神曲有效部位提取物体外抗流感病毒活性

结果：本发明六神曲有效部位提取物(乙酸乙酯部位)细胞毒性测定半数有毒浓度TC₅₀大于6.5×10⁵mg/L，扎那米韦半数有毒浓度TC₅₀大于3.30×10³mg/L

结论：本发明六神曲有效部位提取物具有较强的抗流感病毒A、B作用，对二种病毒作用相当，其抗病毒作用虽然不及扎那米韦作用强，但是对MDCK细胞毒性远远低于扎那米韦，安全性更好，另外，结合扎那米韦给药方式的局限性，本发明六神曲有效部位提取物可以多途径给药，所以将六神曲提取物进一步开发有重要意义的。

试验例3  六神曲有效部位提取物体内抗感染作用

一、实验材料

1.实验动物 昆明种小白鼠，雌雄各半，体重20±2g，由黑龙江中医药大学安全评价中心提供，动物合格证号为SCXK(黑)2008004；

2.实验菌株 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的临床分离株，由黑龙江中医药大学微生物免疫教研室提供；

实验菌液配制 分别取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃培养16～18h，用比浊法测定菌液浓度；

3.供试药物 实施例1、实施例2所制备的六神曲乙酸乙酯、正丁醇萃取物高、低剂量组溶解或分散于生理盐水中作为供试药品；阿莫西林阳性对照药；

二、实验方法

预实验 取实验菌液用无菌生理盐水，按10倍顺序依次稀释为10¹、10²、10³、...不同浓度的混悬液；分别加入5％干酵母混悬液；给予小鼠腹腔注射，观察动物1周内各组动物的死亡数；确定致90％小鼠死亡的最低菌液浓度。

预实验结果：大肠杆菌最低菌液浓度为1.5×10^-8CFU/ml，金黄色葡萄球菌为1.3×10^-8CFU/ml，小鼠腹腔注射0.5ml/只。

小鼠随机分为模型组、乙酸乙酯高剂量、乙酸乙酯低剂量、正丁醇高剂量、正丁醇低剂量、阿莫西林阳性对照组，每组15只，雌雄近各半；以预实验确定的90％小鼠死亡的最低菌液浓度给予各组小鼠腹腔注射造成感染，每鼠腹腔注射0.5ml，于注射菌液前24h、12h和接菌液后1h、6h注射供试药物一次，给药组组、阳性对照组腹腔注射药液0.2ml/只，模型组给予等量生理盐水，观察并统计7天内各组动物死亡数，计算死亡率。实验结果见表3、4、5、6。

表4  本发明六神曲有效部位提取物对大肠杆菌-酵母菌悬液所致的小鼠全身感染的作用

由表4可知，本发明六神曲正丁醇和乙酸乙酯提取物的高、低剂量组对大肠杆菌-酵母菌混合菌液所致的实验动物全身感染具有较强的保护作用，各给药组与模型组相比具有显著性差异(p＜0.01)。

表5  本发明炒六神曲提取物对金黄色葡萄球菌-酵母菌悬液所致的小鼠全身感染的作用

由表5可知，本发明六神曲正丁醇提取部位高剂量组、乙酸乙酯提取物的高、低剂量组对金黄色葡萄球菌-酵母菌混合菌液所致的实验动物全身感染具有较强的保护作用，与模型组相比具有显著性差异(p＜0.01)，正丁醇提取部位低剂量组有保护作用的趋势。乙酸乙酯高、低剂量组不呈典型量效关系，与实验动物个体差异有关，另外可能与乙酸乙酯部位的溶解、吸收性能有关。

表6  本发明六神曲提取物对大肠杆菌所致的小鼠全身感染的作用

由表6可知，本发明六神曲正丁醇和乙酸乙酯提取物的高、低剂量组对大肠杆菌-酵母菌混合菌液所致的实验动物全身感染具有较强的保护作用，各给药组与模型组相比具有显著性差异(p＜0.01)。

表7  本发明六神曲提取物对金黄色葡萄球菌所致的小鼠全身感染的作用

由表7可知，本发明六神曲正丁醇提取部位高剂量组、乙酸乙酯提取物的高、低剂量组对金黄色葡萄球菌-酵母菌混合菌液所致的实验动物全身感染具有较强的保护作用，与模型组相比具有显著性差异(p＜0.01)，正丁醇提取部位低剂量组有保护作用的趋势。

结论：本发明六神曲正丁醇、乙酸乙酯提取部位具有显著的抗感染作用，其中乙酸乙酯提取部位略强于正丁醇提取部位；虽然乙酸乙酯部位抗感染作用不成量效关系，可能与乙酸乙酯部位的溶解、吸收性能有关；本发明六神曲正丁醇、乙酸乙酯提取部位作用强度虽略低于纯品化学抗生素，但以给药剂量、致死率等综合评价，其抗感染作用仍是显著的。

Claims (10)

1.一种中药六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物，其特征在于：主要由六神曲的以下生产原料：面粉和/或麦麸、杏仁、赤小豆，及鲜青蒿、鲜辣蓼、鲜苍耳草汁或干品煎汁，经过共同发酵后的发酵产物组成。

2.一种六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物，包括以下步骤制备得到：(1)将六神曲粗粉用高浓度的低分子醇回流提取，得醇提取物；(2)将醇提取物用乙酸乙酯或正丁醇萃取，或者是依次用乙酸乙酯或正丁醇萃取；将萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯提取物及正丁醇提取物。

3.一种六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物，包括以下步骤制备得到：

(1)六神曲粗粉用高浓度的低分子醇回流提取；提取液滤过，滤液减压回收溶剂至稠膏；

(2)稠膏用水稀释，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取至萃取液澄清；

(3)将乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯提取物及正丁醇提取物。

4.按照权利要求3所述的六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物，其特征在于：所述的低分子醇包括甲醇或乙醇；优选是浓度为95％的乙醇；步骤(1)中将六神曲粗粉用4-8倍六神曲体积的95％乙醇回流提取3-4次，每次2-4小时；步骤(2)中采用10-20倍稠膏体积的水稀释稠膏，再分别依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取；每次萃取液用量为1-3倍体积比的稀释稠膏量。

5.按照权利要求1或2所述的六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物，其特征在于：所述六神曲是生六神曲、焦六神曲或麸炒六神曲；所述六神曲药材为自然发酵的六神曲或以纯种发酵方式制备的六神曲，以及在发酵原料上增减作为发酵培养基的组成原料生产的发酵曲剂。

6.按照权利要求1或2所述的六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物，其特征在于：其液质联用指纹图谱正离子流图见图1，ES⁺离子图中见如下化合物组成：

7.按照权利要求1或2所述的六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物，其特征在于：其液质联用指纹图谱负离子流图见图2，ES^-离子图中见如下化合物组成：

8.一种抗菌或抗病毒药物组合物，其特征在于：由有效量的权利要求1或2所述的六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物与药学上可接受的载体或辅料组成；还能作为原料药与其它药物及辅料共同组成。

9.权利要求1或2所述的六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物作为抗菌剂、抗病毒剂，用于细菌感染、病毒感染的医药用途。

10.如权利要求1所述的中药六神曲抗菌、抗病毒有效部位提取物，其特征在于：不限于权利要求2、3或4的化学分离技术，其它各种新型分离填料、技术、制备方法的应用，以制备六神曲微生物发酵产物为目的的，均落入本发明。

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