CN113318149A - 一种素馨花提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种素馨花提取物及其制备方法和应用，具体公开了一种素馨花水提物，所述的素馨花水提物通过以下方法获得，素馨花药材粉碎后采用水回流提取，过滤回流液后去除溶剂获得素馨花水提物。还公开了上述素馨花水提物在制备嗜麦芽窄食单胞菌抑制剂、抗嗜麦芽窄食单胞菌消毒剂或抗嗜麦芽窄食单胞菌的药物或者对抗嗜麦芽窄食单胞菌的抗生素增敏中的用途。本发明制备得到的产品制备方法简单，不需要有机溶剂，绿色环保，可以应用于食品和药物领域。
Description
技术领域
本发明属于药物技术领域，具体地，涉及素馨花(Jasminum grandiflorum L.)水提取物的新用途。
背景技术
嗜麦芽窄食单胞菌是一类专性需氧、不发酵糖类的非发酵革兰氏阴性杆菌。近年来，由于广谱抗生素的广泛使用和各种有创性操作导致机体微生态失衡，嗜麦芽窄食单胞菌成为院内感染重要病原菌之一，且与血液感染、脑膜炎、肺炎、尿路感染和手术部位感染等密切相关。据报道，2010年-2019年间，一医院临床标本中共检出非发酵革兰氏阴性杆菌4077株，嗜麦芽窄食单胞菌检出率高达10.96％。由于抗生素不合理使用，嗜麦芽窄食单胞菌对β-内酰胺酶类抗生素亦具有很高耐药性，2013年-2019年，该医院检出的嗜麦芽窄食单胞菌对头孢他啶高达74.10％，对喹诺酮类左氧氟沙星的耐药率亦在20％上下波动。同时嗜麦芽窄食单胞菌对多种抗菌药物天然耐药，如亚胺培南、美罗培南等碳青霉烯类抗生素。因此，积极探索抗嗜麦芽窄食单胞菌的药物制剂及相应抗菌药物增敏剂，具有重要意义。
素馨花为木犀科茉莉属植物素馨(Jasminum grandiflorum L.)的干燥花蕾，味微苦，性平，归肝经，具有疏肝解郁，行气止痛的功效。其药理作用广泛，如抗氧化，抗炎，抗病毒，抗惊厥，抗溃疡、体外抗菌等。目前，对素馨花的抗炎、抗病毒作用研究较多，但未有对素馨花抗嗜麦芽窄食单胞菌活性的报道。
根据医院来源的嗜麦芽窄食单胞菌的药敏报告、以及抗嗜麦芽窄食单胞菌的临床常用抗菌药物，选择左氧氟沙星(喹诺酮类)、四环素(四环素类)、头孢他啶(β-内酰胺类)作为实验用抗菌药物。探究素馨花提取物的抑菌作用，及其对抗菌药物抗嗜麦芽窄食单胞菌的增敏作用，以期为抗嗜麦芽窄食单胞菌提供新的抗菌药物以及相关抗菌药物的增敏剂，以应对细菌耐药的巨大挑战。
发明内容
本发明目的在于开发素馨花在制药领域上的新用途。
目的之一是，将素馨花水提取物用于制备抗嗜麦芽窄食单胞菌药物。
目的之二是，公开上述提取物的制备方法。
本发明一个方面提供了一种素馨花水提物，所述的素馨花水提物通过以下方法获得，素馨花药材粉碎后采用水回流提取，过滤回流液后去除溶剂获得素馨花水提物。
本发明另一个方面提供了一种素馨花水提物的制备方法，其包括以下步骤：
1)将素馨花药材粉碎后以水进行浸泡；
2)加热回流提取；
3)提取液过滤后去除溶剂，获得素馨花水提物。
在本发明的技术方案中，在制备方法步骤1)中浸泡时间为0.5-5小时。
在本发明的技术方案中，在制备方法步骤2)中加热回流的次数为1-3次，例如为2次。
在本发明的技术方案中，在制备方法步骤2)中加热回流的时间为1-4小时，优选为加热回流2次，第一次为2-4小时，第二次为2小时。
在本发明的技术方案中，在制备方法步骤2)中素馨花药材与回流溶剂的配比为1质量份的素馨花药材加入5-10质量份的水。
在本发明的技术方案中，在制备方法步骤3)中去除溶剂的方法为减压浓缩和或冷冻干燥。
本发明再一个方面提供了一种嗜麦芽窄食单胞菌抑制剂，其包括上述素馨花水提物。
在本发明的技术方案中，嗜麦芽窄食单胞菌抑制剂为液体制剂、固体制剂。
在本发明的技术方案中，在嗜麦芽窄食单胞菌抑制剂中，素馨花水提物的浓度为0.5mg/mL以上。优选为0.5-4mg/mL，例如0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5 mg/mL、3mg/mL、3.5mg/mL。
本发明再一个方面提供了一种抗嗜麦芽窄食单胞菌的食品添加剂，其包括上述素馨花水提物。
本发明再一个方面提供了一种抗嗜麦芽窄食单胞菌抗生素的增敏剂，其包括上述素馨花水提物。
本发明再一个方面提供了一种消毒剂，其包括上述素馨花水提物。
在本发明的技术方案中，在消毒剂中，素馨花水提物的浓度为0.5mg/mL以上。优选为 0.5-4mg/mL，例如0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、3.5mg/mL。
在本发明的技术方案中，所述消毒剂为消毒液或消毒喷雾。
本发明再一个方面提供了一种抗嗜麦芽窄食单胞菌的药物，其包括上述素馨花水提物。
在本发明的技术方案中，所述药物的制剂为片剂、胶囊、缓释剂、注射剂、栓剂、复方制剂。
在本发明的技术方案中，所述的素馨花水提物作为唯一活性成分。
在本发明的技术方案中，所述的嗜麦芽窄食单胞菌抑制剂、消毒剂或药物中还包含其他抗菌成分，优选地，所述抗菌成分为抗生素，更优选为左氧氟沙星、四环素或头孢他啶。
本发明再一个方面提供了上述素馨花水提物在制备嗜麦芽窄食单胞菌抑制剂、抗嗜麦芽窄食单胞菌消毒剂或抗嗜麦芽窄食单胞菌的药物中的用途。
本发明再一个方面提供了上述素馨花水提物作为抗嗜麦芽窄食单胞菌抗生素的增敏剂中的用途。优选地，抗嗜麦芽窄食单胞菌抗生素优选为左氧氟沙星、四环素或头孢他啶。
有益效果
本发明制备得到的产品制备方法简单，不需要有机溶剂，绿色环保，可以应用于食品和药物领域。
本发明的素馨花水提物具有抗嗜麦芽窄食单胞菌(SMA)的作用，可作为天然抗菌剂，应用于食品、药品等行业；同时实现素馨花的综合利用和提高其附加值。
本发明的素馨花水提物可以作为左氧氟沙星、四环素或头孢他啶等抗生素的增敏剂，能够降低抗生素用量。
附图说明
图1素馨花水提取液和培养基的空白阴性对照组，左起1-9分别为浓度32000、16000、 8000、4000、2000-62.5μg/mL的素馨花水提取液；右起1为培养基的空白阴性对照组。
图2素馨花水提取液抗SMA1抑菌实验，左起1-6分别为浓度16000、8000、4000-500μg/mL的素馨花水提取液；右起1为空白阳性对照。
图3素馨花水提取液抗SMA2抑菌实验，左起1-6分别为浓度16000、8000、4000-500μg/mL的素馨花水提取液；右起1为空白阳性对照。
图4素馨花水提取液抗SMA3抑菌实验，左起1-4分别为浓度2000、1000、500、250μg/mL 的素馨花水提取液；右起1为空白阳性对照。
图5素馨花水提取液抗SMA4抑菌实验，左起1-4分别为浓度4000、2000、1000、500μg/mL 的素馨花水提取液；右起1为空白阳性对照。
图6素馨花水提取液抗SMA5抑菌实验，左起1-4分别为浓度2000、1000、500、250μg/mL 的素馨花水提取液；右起1为空白阳性对照。
具体实施方式
为了使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明的具体实施方式做详细的说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明，但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。
实施例1：素馨花水提物制备
取素馨花200g，打成粗粉，加入1000mL蒸馏水，充分摇匀，浸泡1h后，回流2-4h，倒出提取液，再加入1000mL蒸馏水，回流提取2h，合并提取液，抽滤，60℃减压浓缩至 250mL，冷冻干燥，得素馨花水提物。
实施例2：体外抗菌实验
一、实验方法
菌株：嗜麦芽窄食单胞菌(SMA，编号SMA1-SMA5)临床分离5株。
以肉汤二倍稀释法测定素馨花水提取物对嗜麦芽窄食单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。
1.最低抑菌浓度(MIC)测定
(1)菌悬液的制备
分别用无菌棉签蘸取SMA菌株新鲜培养物，用0.9％生理盐水液制成菌悬液，浓度为1×108 cfu/mL。
(2)二倍稀释法
用5mL EP管，在每个管加入肉汤培养基2mL。素馨花水提液、左氧氟沙星、四环素、头孢他啶在LB肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，调节接种菌为5×105CFU/mL。将各管37℃下培养24h，无沉淀情况出现的最低抗菌药物的浓度即为MIC。
2.最低杀菌浓度(MBC)测定
从2项无菌生长的管中移取100μL至NA培养平板上，均匀涂布，37℃下培养24h，菌落计数，以杀灭99.9％数量级细菌(或活菌数≤5个)的最低浓度即为MBC。
3.实验结果
素馨花水提取物、三种抗菌药物(左氧氟沙星、四环素、头孢他啶)对嗜麦芽窄食单胞菌的体外抑菌试验结果见表1。素馨花水提取物对嗜麦芽窄食单胞菌的体外抑菌结果图可见图1-6。
素馨花水提取物对SMA的体外杀菌试验结果见表2。
经过分析，素馨花水提取物对SMA的体外抑菌和体外杀菌试验的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表3，三种抗菌药物对SMA的体外抑菌试验的MIC50、MIC90见表4。
素馨花水提取液抗SMA的MIC50为1000μg/mL，MBC50为2000μg/mL，MIC90＝MBC90＝8000μg/mL，结果表明素馨花水提取液对SMA有抑菌作用，且最低抑菌浓度和最低杀菌浓度接近。左氧氟沙星、头孢他啶抗SMA的MIC50＞8μg/mL，四环素抗SMA 的MIC90＞8μg/mL，本发明的部分SMA菌株对左氧氟沙星、头孢他啶、四环素耐药。
表1素馨花水提物、抗菌药物对嗜麦芽窄食单胞菌的体外抑菌结果
表2素馨花水提物对嗜麦芽窄食单胞菌的体外杀菌结果
表3素馨花水提物对嗜麦芽窄食单胞菌的体外抑菌和体外杀菌结果汇总
表4三种抗菌药物对嗜麦芽窄食单胞菌的体外抑菌结果汇总(μg/mL)
实施例3：素馨花水提物对左氧氟沙星、四环素、头孢他啶抗嗜麦芽窄食单胞菌的增敏作用考察
1.棋盘稀释法
采用棋盘稀释法，于48孔板内，将素馨花水提物、左氧氟沙星、四环素、头孢他啶分别在LB肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，药物相应配伍后，调节接种菌为5×105CFU/mL。将各孔板37℃下培养24h，观察配伍后药物的MIC。无沉淀出现的最低抗菌药物浓度即为MIC。
通过计算部分抑菌浓度指数(FIC)来评价素馨花水提取物与抗菌药物联用的相互作用(FIC≤0.5，表示两种药呈协同作用；0.5＜FIC≤1，表示两种药呈相加作用；1＜FIC≤2，表示两种药无作用；FIC＞2，表示两种药呈拮抗作用)，并根据素馨花水提取物和抗菌药物的最佳增敏浓度配比，评价素馨花水提取物对抗菌药物的增敏作用。
2.实验结果
素馨花水提取物与抗菌药物联合药敏实验的FIC值见表5。①素馨花水提液联合左氧氟沙星对5株SMA联合用药结果：对抗SMA2无相互作用；对抗SMA3呈相加作用；对抗SMA1、2、4、5均呈协同作用。②素馨花水提液联合四环素对5株SMA联合用药结果：对抗SMA1、 2、3、5均呈相加作用；对抗SMA4均呈协同作用。③素馨花水提液联合头孢他啶对5株SMA 联合用药结果：对抗SMA5无相互作用；对抗SMA1、2、3、4均呈协同作用。
素馨花水提取物对抗菌药物抗SMA的增敏作用见表6。以SMA1为例，250μg/mL素馨花与左氧氟沙星联合给药，可以将左氧氟沙星的MIC由16μg/mL(单独使用时的MIC)降低到0.5μg/mL(联合用药时的MIC)，为单用的1/32。说明素馨花水提取物对抗菌药物抗SMA 具有明显增敏作用。
表5素馨花水提液与抗菌药物联合用药抗嗜麦芽窄食单胞菌的FIC值
表6联合用药后素馨花水提液对抗菌药物抗嗜麦芽窄食单胞菌的增敏作用(μg/mL)
注：①“→”由单用MIC到联用MIC的变化；“()”内数字为联用抗菌药物后的增敏倍数；
②“*”表示对SMA5，该联合用药素馨花提取物与左氧氟沙星无相互作用。
表7联合用药后抗菌药物对嗜麦芽窄食单胞菌的体外抑菌效果变化(μg/mL)
由表4、7可得，素馨花水提取液与左氧氟沙星联用的FIC值均＜2，表明两药无拮抗作用，其中80％FIC值＜0.5呈协同作用；浓度≤MIC的素馨花水提取液，与左氧氟沙星联用，可使其MIC50从8μg/mL降至0.5μg/mL，降低了93.75％；MIC90从16μg/mL降至2μg/mL，降低了87.5％。
素馨花水提取液与四环素联用的FIC值均＜2，表明两药无拮抗作用，其中有20％FIC 值＜0.5呈协同作用，0.5＜80％FIC值＜1呈相加作用；浓度≤MIC的素馨花水提取液，与四环素联用，可使其MIC50从4μg/mL降至1μg/mL，降低了75％；MIC90从256μg/mL降至 128μg/mL，降低了50％。
素馨花水提取液与头孢他啶联用的FIC值均＜2，表明两药无拮抗作用，其中有80％FIC 值≤0.5呈协同作用；浓度≤MIC的素馨花水提取液，与头孢他啶联用，使其MIC50从64μg/mL 降至8μg/mL，降低了87.5％；MIC90从1024μg/mL降至256μg/mL，降低了75％。
综上表明，本发明产品可作为天然抗菌剂或天然抗菌药物增敏剂，应用于食品、药品等行业，如作为抗嗜麦芽窄食单胞菌药物制剂的活性成分，或作为临床抗菌药物抗嗜麦芽窄食单胞菌增敏药物制剂的活性成分，制成片剂、胶囊、缓释剂、注射剂、栓剂、复方制剂等；同时实现素馨花的综合利用和提高其附加值。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种素馨花水提物，其特征在于，所述的素馨花水提物通过以下方法获得，素馨花药材粉碎后采用水回流提取，过滤回流液后去除溶剂获得素馨花水提物。
2.权利要求1所述的素馨花水提物的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：
1)将素馨花药材粉碎后以水进行浸泡；
2)加热回流提取；
3)提取液过滤后去除溶剂，获得素馨花水提物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤2)中，素馨花药材与回流溶剂的配比为1质量份的素馨花药材加入5-10质量份的水。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤2)中加热回流的次数为1-3次，加热回流的时间为1-48小时。
5.一种嗜麦芽窄食单胞菌抑制剂，其特征在于，其包括权利要求1所述的素馨花水提物或者权利要求2-4任一项所述的制备方法制备获得的素馨花水提物；
优选地，嗜麦芽窄食单胞菌抑制剂为液体制剂、固体制剂；
优选地，所述的素馨花水提物作为唯一活性部位，或者还包含其他抗菌成分。
6.一种抗嗜麦芽窄食单胞菌的食品添加剂，其特征在于，其包括权利要求1所述的素馨花水提物或者权利要求2-4任一项所述的制备方法制备获得的素馨花水提物；
优选地，所述的素馨花水提物作为唯一活性部位，或者还包含其他抗菌成分。
7.一种消毒剂，其特征在于，其包括权利要求1所述的素馨花水提物或者权利要求2-4任一项所述的制备方法制备获得的素馨花水提物；
优选地，所述消毒剂为消毒液或消毒喷雾；
优选地，所述的素馨花水提物作为唯一活性部位，或者还包含其他抗菌成分。
8.一种抗嗜麦芽窄食单胞菌的药物，其特征在于，其包括权利要求1所述的素馨花水提物或者权利要求2-4任一项所述的制备方法制备获得的素馨花水提物；
优选地，所述药物的制剂为片剂、胶囊、缓释剂、注射剂、栓剂、复方制剂；
优选地，所述的素馨花水提物作为唯一活性部位，或者所述药物中还包含其他抗菌成分；更优选地，所述其他抗菌成分为抗生素。
9.权利要求1所述的素馨花水提物或者权利要求2-4任一项所述的制备方法制备获得的素馨花水提物作为嗜麦芽窄食单胞菌抑制剂的用途。
10.权利要求1所述的素馨花水提物或者权利要求2-4任一项所述的制备方法制备获得的素馨花水提物在制备嗜麦芽窄食单胞菌抑制剂、抗嗜麦芽窄食单胞菌消毒剂或抗嗜麦芽窄食单胞菌的药物中的用途；或者作为抗嗜麦芽窄食单胞菌抗生素的增敏剂。
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