CN102043031A - 蜂胶超临界co2萃取物gc-ms指纹图谱及构建方法 - Google Patents
蜂胶超临界co2萃取物gc-ms指纹图谱及构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102043031A CN102043031A CN 201010548519 CN201010548519A CN102043031A CN 102043031 A CN102043031 A CN 102043031A CN 201010548519 CN201010548519 CN 201010548519 CN 201010548519 A CN201010548519 A CN 201010548519A CN 102043031 A CN102043031 A CN 102043031A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- propolis
- extract
- supercritical
- sample
- finger
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Jellies, Jams, And Syrups (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
Abstract
本发明涉及功能食品活性成分检测方法领域，公开了一种蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS指纹图谱及构建方法。该蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS指纹图谱，其共有峰有8个，图谱总长度为60min。按照下述步骤构建得到；将蜂胶样品置于超临界CO2萃取釜中萃取后得到蜂胶的超临界CO2萃取物；称取蜂胶样品置于样品瓶中进行固相微萃取；再进行GC-MS分析；最后将不同地区蜂胶超临界CO2萃取物的GC-MS图谱进行比对，提取其共有峰，组成蜂胶超临界CO2萃取物的GC-MS指纹图谱。本发明具有方便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握等优点。检测样品时间短，所得蜂胶超临界CO2萃取物挥发性成分达120余种。
Description
技术领域
本发明涉及保健食品活性成分检测方法领域，尤其涉及利用固相微萃取及GC-MS联用技术构建蜂胶超临界CO2萃取物指纹图谱信息及构建方法。
背景技术
蜂胶中含有丰富的黄酮类和萜烯类等活性物质，具有独特的保健功能和医学价值。一般一群5万~6万只的蜜蜂，一年大约只能生产蜂胶100~150g，我国年产蜂胶仅仅300吨左右，因此蜂胶是一种稀缺资源。大量的研究表明，超临界CO2萃取技术是获取蜂胶中高活性组分的重要手段，已经被应用于生产实际。与传统的乙醇萃取物相比，蜂胶的超临界CO2萃取物组分种类更为丰富，尤其是含有大量具有抗癌效果的萜烯类、酯类物质，其免疫活性更为显著。通过GC-MS分析证明，蜂胶超临界CO2萃取物中含有120多种组分。但是目前有关蜂胶超临界CO2萃取物真伪鉴别技术的研究相对滞后，难以遏制市场上以次充好的现象。如何建立一种相对简便且科学的分析方法，是识别是否为蜂胶超临界CO2萃取物的重要依据，对于促进蜂胶超临界CO2萃取物制品的规范化生产有着重要的意义。
目前用于鉴别蜂胶真伪的有效方法很少。对于蜂胶原料而言，有两个标准可以用于对原料对鉴别：一个是商业部颁发的标准代号为SB/T10096-92的蜂胶，另一个是国家农业部颁发的标准代号为NY/T5136-2002的无公害食品蜂胶。对于蜂胶有机溶剂萃取物而言，有人建立了液相色谱（HPLC）指纹图谱（周萍等，不同产地蜂胶HPLC指纹图谱测定及真伪判定，中国蜂业，2009，60(10):5-8；朱恩圆等，蜂胶HPLC指纹图谱及质量控制，中国中药杂志，2005，30(18):1423-1425）。蜂胶超临界CO2萃取物的主要成分是挥发性较强的萜烯类和酯类物质，有人探讨过蜂胶超临界CO2萃取物气相色谱（GC）指纹图谱的建立（马海乐等，蜂胶超临界CO2萃取物的GC指纹图谱研究，养蜂科技2005.（1），36-38），但是由于GC分析中，采用氯仿溶解、离心并对上清液用微孔滤膜过滤的方法对样品进行提取，这种样品处理方法对蜂胶超临界CO2萃取物中最具活性的萜烯类物质难以提取出来，导致采用GC指纹图谱甄别蜂胶超临界CO2萃取物的真伪有一定的局限性。
针对上述现状，本发明选用固相微萃取（SPME）对蜂胶超临界CO2萃取物中的主要易挥发性活性成分进行高效富集，采用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）测定其化学组成。以我国9个蜂胶主要产地的11个蜂胶样品为研究对象，建立国产蜂胶超临界CO2萃取物的GC-MS指纹图谱。
发明内容
本发明的目的是提供一种用GC-MS指纹图谱鉴别蜂胶超临界CO2萃取物的方法，并可将蜂胶超临界CO2萃取物指纹图谱作为其质量控制及真伪鉴别的指标之一，本发明通过比较全国9个蜂胶主要产地的11个蜂胶超临界CO2萃取物样品建立指纹图谱，用以进行国内不同产地蜂胶超临界CO2萃取物的质量真伪的鉴别。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下，
所述蜂胶超临界CO 2 萃取物标准图谱，其共有峰有8个，图谱总长度为60min，具体如下：
1号峰，苯甲酰基乙烯二乙酸，平均保留时间RT为9.56min，相对峰面积为2.04%~16.48%；
2号峰，苯甲醇，平均保留时间RT为13.34min，相对峰面积为13.97%~59.59%；
3号峰，1-十一炔，平均保留时间RT为16.38min，相对峰面积为0.44%~1.98%；
4号峰，苯乙醇，平均保留时间RT为16.81min，相对峰面积为2.64%~26.79%；
5号峰，乙酸苯甲酯，平均保留时间RT为19.32min，相对峰面积为0.44%~3.58%；
6号峰，3-苯基-2-丙烯醛，平均保留时间RT为24.24min，相对峰面积为0.09%~0.96%；
7号峰，á-荜澄茄油烯，平均保留时间RT为28.90min，相对峰面积为0.11%~0.96%；
8号峰，苯甲酸苯甲酯，平均保留时间RT为43.97min，相对峰面积为0.03%~0.42%。
所述蜂胶超临界CO 2 萃取物标准图谱的构建方法，按照下述步骤进行：
（1）供试品的制备；（2）固相微萃取方法；（3）气相色谱-质谱分析；（4）建立指纹图谱。
其中所述供试品的制备过程如下：即将蜂胶样品置于-20℃的冰箱内冷冻过夜，将冷冻过后的蜂胶样品用高速粉碎机粉碎过20目筛网；称取粉碎过后的蜂胶样品置于超临界CO2 萃取釜中萃取4 h后得到蜂胶的超临界CO2萃取物（每个样品进行3次平行萃取，将萃取物混合均匀）。
其中所述的蜂胶超临界CO2萃取的条件：萃取釜温度35 ℃、压力25 MPa，分离釜温度40 ℃、压力6~8 MPa，CO2流量20~30 L·h-1。上样量根据超临界萃取装置的萃取釜的不同而定。
其中所述的固相微萃取方法如下：蜂胶超临界CO2萃取物用砚钵砚碎，称取样品置于样品瓶中封口，60℃平衡10min。然后插入装有萃取头的手动进样器，60℃下顶空吸附30min，270℃下解吸10min。
其中所述的气相色谱-质谱分析，气相色谱条件：毛细管柱：HP 5MS柱(60m×0.25mm i.d.，膜厚0.32μm)；柱温升温程序：起始温度40 ℃，20℃/min升至60℃，保持5min，然后以3 ℃/min升至280 ℃，保持10min。进样口270 ℃；载气He，流速1.0 mL/min；不分流进样。质谱分析条件：电子轰击离子源(EI)；电子能量70eV；灯丝发射电流200μA；离子源温度230 ℃；接口温度280 ℃；扫描质量范围20~510amu。各组分经过NIST标准谱库检索和Wiley谱库相匹配，按面积归一化法计算含量。
其中所述的指纹图谱建立，将不同地区蜂胶超临界CO2萃取物的GC-MS图谱进行比对，提取其共有峰，组成蜂胶超临界CO2萃取物的GC-MS指纹图谱。
本发明的优点如下：
1、固相微萃取（SPME）是一种蜂胶挥发性萜烯类物质高效富集方法，且具有无需有机溶剂、简单、快速、分析样品量少等特点，能够尽可能减少被分析挥发性成分的损失。
2、以蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS分析结果建立起来的指纹图谱，代表着蜂胶超临界CO2萃取物主要活性物质，能有效地表征蜂胶超临界CO2萃取物的质量。
3、本发明具有方便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握等优点。检测一个样品所需时间仅需一个半小时，所得蜂胶超临界CO2萃取物挥发性成分达120余种。
附图说明
图1为黑龙江1号样品总离子流色谱图，
图2为黑龙江2号样品总离子流色谱图，
图3为黑龙江3号样品总离子流色谱图，
图4为河北样品总离子流色谱图，
图5为山东样品总离子流色谱图，
图6为河南1号样品总离子流色谱图，
图7为湖北2号样品总离子流色谱图，
图8为湖南2号样品总离子流色谱图，
图9为四川2号样品总离子流色谱图，
图10为云南2号样品总离子流色谱图，
图11为海南样品总离子色谱流图。
具体实施方式
本发明所使用的手动固相微萃取(SPME)装置（美国Supelco公司）萃取纤维头为75μm碳分子筛/聚二甲基硅氧烷(CAR/PDMS)萃取头，使用前先将萃取头在气相色谱仪进样口270℃老化30min；Thermo ITQ1100气相色谱-质谱联用仪为美国Thermo Fisher公司生产；超临界CO2提取设备为南通华安超临界萃取有限公司生产。
本发明所使用的蜂胶样品由河南省维康蜂业有限公司、三门峡黄河蜂业公司、黑龙江神顶峰黑蜂产品有限公司、云南白塔蜂业有限公司和海南卓津蜂业有限公司提供。
下面结合实施例和附图对本发明的具体实施作进一步说明，但本发明的实施不限于此。
实施例1 蜂胶超临界CO
2
萃取物GC-MS标准指纹图谱的建立方法
1、供试品的制备
蜂胶样品置于-20℃的冰箱内冷冻过夜，将冷冻过后的蜂胶样品用高速粉碎机粉碎过20目筛网，称取粉碎过后的蜂胶样品200 g置于超临界CO2 萃取釜中萃取4 h后得到蜂胶的超临界CO2萃取物（每个样品进行3次平行萃取，将萃取物混合均匀）。
蜂胶超临界CO2萃取的条件：萃取釜温度35 ℃、压力25 MPa，分离釜温度40 ℃、压力6~8 MPa，CO2流量20~30 L·h-1。
、固相微萃取方法
蜂胶超临界CO2萃取物用砚钵砚碎，称取1.000g样品置于15mL样品瓶中封口，60℃平衡10min。然后插入装有萃取头的手动进样器，60℃下顶空吸附30min，270℃下解吸10min。
、GC-MS分析与指纹图谱的建立方法
气相色谱条件：毛细管柱：HP 5MS柱(60m×0.25mm i.d.，膜厚0.32μm)。
柱温升温程序：起始温度40℃，20℃/min升至60℃，保持5min，然后以3℃/min升至280℃，保持10min。进样口270℃；载气He，流速1.0 mL/min；不分流进样。
质谱条件：电子轰击离子源(EI)；电子能量70eV；灯丝发射电流200μA；离子源温度230℃；接口温度280℃；扫描质量范围20~510amu。各组分经过NIST标准谱库检索和Wiley谱库相匹配，按面积归一化法计算含量。
将不同地区蜂胶超临界CO2萃取物的GC图谱进行比对，提取其共有峰，组成蜂胶超临界CO2萃取物的GC指纹图谱。
实施例2 检测11批次蜂胶超临界CO
2
萃取物的指纹图谱
取蜂胶超临界CO2萃取物11批次，按实施例1的方法进行检测，得11批样品的GC-MS图谱，如图1至图11所示。通过11批次GC-MS图谱的比较，提取共有峰，确定其特征共有峰。
建立的蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS指纹图谱中共有8个特征共有峰，现将其中1批次黑龙江2号样品图谱的化合物成分分析，保留时间、峰面积以及相对峰面积列出，具体如下：
1号峰，苯甲酰基乙烯二乙酸，保留时间RT为9.60min，相对峰面积为16.84%；
2号峰，苯甲醇，保留时间RT为13.64min，相对峰面积为58.59%；
3号峰，1-十一炔，保留时间RT为16.4min，相对峰面积0.85%；
4号峰，苯乙醇，保留时间RT为16.93min，相对峰面积3.43%；
5号峰，乙酸苯甲酯，保留时间RT为19.31min，相对峰面积1.13%；
6号峰，3-苯基-2-丙烯醛，保留时间RT为24.26min，相对峰面积0.09%；
7号峰，á-荜澄茄油烯，保留时间RT为28.90min，相对峰面积为0.72%；
8号峰，苯甲酸苯甲酯，保留时间RT为43.97min，相对峰面积为0.4%。
本发明的原理是根据蜂胶超临界CO2萃取物挥发性成分，建立起GC-MS指纹图谱，从色谱的整体面貌特征上把握蜂胶的品种和质量情况。
依据国家药品监督管理局对建立指纹图谱的技术要求，经分析表明11种样品的GC-MS图谱的差异较小，达到建立指纹图谱的技术要求。
Claims (7)
1.蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS指纹图谱，其共有峰有8个，图谱总长度为60min，具体如下：
1号峰，苯甲酰基乙烯二乙酸，平均保留时间RT为9.56min，相对峰面积为2.04%~16.48%；
2号峰，苯甲醇，平均保留时间RT为13.34min，相对峰面积为13.97%~59.59%；
3号峰，1-十一炔，平均保留时间RT为16.38min，相对峰面积为0.44%~1.98%；
4号峰，苯乙醇，平均保留时间RT为16.81min，相对峰面积为2.64%~26.79%；
5号峰，乙酸苯甲酯，平均保留时间RT为19.32min，相对峰面积为0.44%~3.58%；
6号峰，3-苯基-2-丙烯醛，平均保留时间RT为24.24min，相对峰面积为0.09%~0.96%；
7号峰，á-荜澄茄油烯，平均保留时间RT为28.90min，相对峰面积为0.11%~0.96%；
8号峰，苯甲酸苯甲酯，平均保留时间RT为43.97min，相对峰面积为0.03%~0.42%。
2.权利要求1所述的蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS指纹图谱的构建方法，按照下述步骤进行：供试品的制备、固相微萃取方法、气相色谱-质谱分析、建立指纹图谱。
3.权利要求2所述的蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS指纹图谱的构建方法，其中所述供试品的制备过程如下：即将蜂胶样品置于-20℃的冰箱内冷冻过夜，将冷冻过后的蜂胶样品用高速粉碎机粉碎过20目筛网；称取粉碎过后的蜂胶样品置于超临界CO2 萃取釜中萃取4 h后得到蜂胶的超临界CO2萃取物；其中每个样品进行3次平行萃取，将萃取物混合均匀。
4.权利要求3所述的蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS指纹图谱的构建方法，其中所述的蜂胶超临界CO2萃取的条件：萃取釜温度35 ℃、压力25 MPa，分离釜温度40 ℃、压力6~8 MPa，CO2流量20~30 L·h-1；上样量根据超临界萃取装置的萃取釜的不同而定。
5.权利要求2所述的蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS指纹图谱的构建方法，其中所述的固相微萃取方法如下：蜂胶超临界CO2萃取物用砚钵砚碎，称取样品置于样品瓶中封口，60℃平衡10min；然后插入装有萃取头的手动进样器，60℃下顶空吸附30min，270℃下解吸10min。
6.权利要求2所述的蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS指纹图谱的构建方法，其中所述的气相色谱-质谱分析的气相色谱条件为：毛细管柱：HP 5MS柱；柱温升温程序：起始温度40 ℃，20℃/min升至60℃，保持5min，然后以3 ℃/min升至280 ℃，保持10min；进样口270 ℃；载气He，流速1.0 mL/min；不分流进样；质谱分析条件：电子轰击离子源；电子能量70eV；灯丝发射电流200μA；离子源温度230 ℃；接口温度280 ℃；扫描质量范围20~510amu；各组分经过NIST标准谱库检索和Wiley谱库相匹配，按面积归一化法计算含量。
7.权利要求2所述的蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS指纹图谱的构建方法，其中所述的指纹图谱建立指将不同地区蜂胶超临界CO2萃取物的GC-MS图谱进行比对，提取其共有峰，组成蜂胶超临界CO2萃取物的GC-MS指纹图谱。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010548519A CN102043031B (zh) | 2010-11-18 | 2010-11-18 | 蜂胶超临界co2萃取物gc-ms指纹图谱及构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010548519A CN102043031B (zh) | 2010-11-18 | 2010-11-18 | 蜂胶超临界co2萃取物gc-ms指纹图谱及构建方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102043031A true CN102043031A (zh) | 2011-05-04 |
| CN102043031B CN102043031B (zh) | 2012-08-29 |
Family
ID=43909373
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201010548519A Expired - Fee Related CN102043031B (zh) | 2010-11-18 | 2010-11-18 | 蜂胶超临界co2萃取物gc-ms指纹图谱及构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102043031B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102441010A (zh) * | 2011-12-12 | 2012-05-09 | 南京中科集团股份有限公司 | 一种脱铅精制蜂胶的制备方法 |
| CN103323546A (zh) * | 2013-06-04 | 2013-09-25 | 浙江工业大学 | 一种裂解气相色谱-质谱法分析蜂胶化学成分的方法 |
| CN106198785A (zh) * | 2016-06-27 | 2016-12-07 | 广州纤维产品检测研究院 | 一种超临界co2快速分离纺织品中阻燃剂的方法 |
-
2010
- 2010-11-18 CN CN201010548519A patent/CN102043031B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 《中国蜂业》 20060831 盛文胜等 超临界CO2萃取蜂胶气相色谱/质谱法分析研究 5-7 2-7 第57卷, 第8期 2 * |
| 《中国蜂业》 20090831 邵兴军等 蜂胶流态化超临界CO2萃取工艺研究及挥发油成分分析 12-14 2-7 第60卷, 第8期 2 * |
| 《中草药》 20000331 葛发欢等 超临界CO2从黄山药中萃取薯蓣皂素的工艺研究 181-183 2-7 第31卷, 第3期 2 * |
| 《中药材》 20000930 刘映等 蜂胶挥发性成分的超临界CO2萃取及GC-MS分析 547-549 2-7 第23卷, 第9期 2 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102441010A (zh) * | 2011-12-12 | 2012-05-09 | 南京中科集团股份有限公司 | 一种脱铅精制蜂胶的制备方法 |
| CN103323546A (zh) * | 2013-06-04 | 2013-09-25 | 浙江工业大学 | 一种裂解气相色谱-质谱法分析蜂胶化学成分的方法 |
| CN103323546B (zh) * | 2013-06-04 | 2014-11-12 | 浙江工业大学 | 一种裂解气相色谱-质谱法分析蜂胶化学成分的方法 |
| CN106198785A (zh) * | 2016-06-27 | 2016-12-07 | 广州纤维产品检测研究院 | 一种超临界co2快速分离纺织品中阻燃剂的方法 |
| CN106198785B (zh) * | 2016-06-27 | 2019-12-03 | 广州纤维产品检测研究院 | 一种超临界co2快速分离纺织品中阻燃剂的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102043031B (zh) | 2012-08-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103217487B (zh) | 一种利用双指纹图谱溯源进口梅洛葡萄酒产地的分析方法 | |
| CN102370891A (zh) | 一种用hplc指纹图谱鉴别铁皮石斛真伪的方法 | |
| CN102043031B (zh) | 蜂胶超临界co2萃取物gc-ms指纹图谱及构建方法 | |
| CN102778516B (zh) | 一种大黄蛰虫胶囊指纹图谱鉴别方法 | |
| CN103969360B (zh) | 川芎的检测方法 | |
| CN104297373B (zh) | 一种草果与草豆蔻的指纹图谱鉴别方法 | |
| CN102622532A (zh) | 一种复杂药物体内外物质组关联构建代谢网络的方法 | |
| CN104849363A (zh) | 鱼腥草破壁饮片的指纹图谱构建及其质量检测方法 | |
| CN112114079B (zh) | 一种同时检测使君子中9种化学成分的方法 | |
| CN104181269B (zh) | 基于山奈酚3-O-β-D-葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷鉴别蜂花粉的方法 | |
| CN104820049A (zh) | 淫羊藿破壁饮片的指纹图谱共有模式构建及其质量检测方法 | |
| CN102994216A (zh) | 超临界co2萃取杜仲籽的方法 | |
| CN104849362A (zh) | 灯盏细辛破壁饮片的指纹图谱共有模式构建及其质量检测方法 | |
| CN103710421A (zh) | 一种灵芝子实体hplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN103389354A (zh) | 香荚兰豆药材中挥发性成分的分析方法 | |
| CN105203663A (zh) | 一种紫草素的快速检测方法 | |
| CN102628838B (zh) | 一种药材马蓝的hplc指纹图谱构建方法 | |
| CN102279230A (zh) | 农产品及其加工产品挥发性成分指纹图谱的建立方法 | |
| CN104133028B (zh) | 一种茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法 | |
| CN102854266A (zh) | 分析黄水中组分的方法 | |
| CN103175923B (zh) | 一种巴旦油脂肪酸成分指纹图谱的构建方法 | |
| CN104359987A (zh) | 一种中药材成分的快速高效溶出与溶出成分的分析鉴定方法 | |
| CN105136937A (zh) | 一种厚朴酚与和厚朴酚的快速检测方法 | |
| CN103149292A (zh) | 一种关黄柏中小檗碱和巴马丁的提取及检测方法 | |
| CN104297405B (zh) | 一种蒙药蓝盆花的指纹图谱的建立方法及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120829 Termination date: 20161118 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |