CN102042979B - 一种淀粉发酵液中葡萄糖含量的快速检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种淀粉发酵液中葡萄糖含量的快速检测方法，其特征在于：样品经前处理后，取100μL检测试样与2400μL自制的葡萄糖光学检测试剂混合，样品中葡萄糖与检测试剂起显色反应，反应产物在380nm处有最大吸收峰，通过比较不同浓度葡萄糖标准样品的Abs380(吸光度)值，制定标准曲线，根据待测样品的Abs380值，获取待测物中葡萄糖的含量。该检测方法具有检测准确度高、测试方便、应用范围广等优点，可以用于淀粉发酵液中葡萄糖的快速检测。
Description
技术领域
本发明涉及一种快速测定淀粉发酵液中葡萄糖含量的检测技术，属于粮食加工检测领域。
背景技术
葡萄糖是最普通的、被人们所熟悉的单糖，又称右旋糖，属醇醛类。葡萄糖是生物体内新陈代谢不可缺少的营养物质，是人类生命活动所需能量的重要来源。在食品、医药工业上葡萄糖可直接使用，在印染制革工业中作还原剂，在制镜工业和热水瓶胆镀银工艺中常用葡萄糖作还原剂，工业上还用大量用葡萄糖为原料合成维生素C。微生物发酵生产中常以淀粉为基本原料，经水解生成还原糖或葡萄糖，供发酵使用，因此葡萄糖的检测是淀粉发酵生产过程控制的常规生化指标。而目前的葡萄糖检测现行国家专业标准及AOAC推荐方法中，均采用容量分析法，即斐林试剂滴定法和铁氰化钾滴定法。其中斐林试剂滴定法是利用斐林甲液、乙液混合时，生成的天蓝色氢氧化铜沉淀立即与酒石酸钾钠起反应，生成深蓝色的氢氧化铜和酒石酸钾钠的络合物——酒石酸钾钠铜，酒石酸钾钠铜被葡萄糖还原，生成红色的氧化亚铜沉淀，然后加入硫酸铁，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量，计算氧化亚铜含量，即可算出葡萄糖含量。虽然斐林试剂法沿用已久，但测定结果只是近似值，且操作过程异常复杂。和铁氰化钾滴定法一样，这两种方法都要求溶液在微沸状态下滴定，滴定操作在电炉上进行，反应温度不易控制，操作者对滴定终点的判断带有经验性，干扰因素多，人为误差较大，对葡萄糖的评价不够准确，主观影响因素较大，再者使用斐林溶液滴定葡萄糖时，其他具有还原能力的单糖会干扰检测结果，造成较大的系统误差。上述方法只适用于实验室操作，检测速度慢，难以满足实际生产操作的需求。
发明内容
本发明的目的，就是针对上述测试方法的不足，向粮食加工行业提供一种具有检测速度快、准确度高、抗干扰能力强、操作简便等特点，且适用于现场应用的葡萄糖检测技术，从而建立一种方便快捷的淀粉发酵液中葡萄糖含量的检测方法。
为了达到上述目的，本发明是这样实现的：取100μL检测试样与2400μL自制的葡萄糖光学检测试剂混合，样品中葡萄糖与检测试剂起显色反应，反应产物在380nm处有最大吸收峰，通过比较不同浓度葡萄糖标准样品的Abs380值，制定标准曲线，根据待测样品的Abs380值，获取待测物中葡萄糖的含量，从而实现本发明的目的。
自制的葡萄糖光学检测试剂由转化酶、还原型染料、卤化物盐组合而成。转化酶由过氧化氢酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖淀粉酶和β-葡萄糖苷酶中的至少一种或一种以上组成，过氧化氢酶、己糖激酶、葡萄糖氧化酶和葡萄糖淀粉酶是转化酶的优选，过氧化氢酶、己糖激酶和葡萄糖氧化酶是转化酶的最优选，转化酶待加入量的优选为10～100U。
还原型染料由淀粉、碘化钾、4-氨基替吡啉、草酸钛钾、苯酚、N，N二甲基苯胺和甲基酚中一种或一种以上组成，淀粉、碘化钾、4-氨基替吡啉、草酸钛钾、苯酚和N，N二甲基苯胺是还原型染料的优选，淀粉、碘化钾、4-氨基替吡啉和草酸钛钾是还原型染料的最优选，还原型染料待加入量的优选为100～200mM。
卤化物盐由氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾、碘化钠和碘化钾中一种或一种以上组成，氯化钠、氯化钾、溴化钠和溴化钾是卤化物盐的优选，氯化钠和氯化钾是卤化物盐的最优选，卤化物盐待加入量的优选为150～200mM。
该检测方法具有特异性强、灵敏度高、易于操作、准确度高等特点，可以用于淀粉发酵液中葡萄糖的快速检测。
附图说明
图1为与标准曲线比较判断淀粉发酵液样品中葡萄糖的含量的示意图；
具体实施方式
本发明提供一种淀粉发酵液中葡萄糖含量的快速检测方法，具体实施过程是：取100μL检测试样与2400μL自制的葡萄糖光学检测试剂混合，样品中葡萄糖与检测试剂起显色反应，反应产物在380nm处有最大吸收峰，通过比较不同浓度葡萄糖标准样品的Abs380值，制定标准曲线，根据待测样品的Abs380值，获取待测物中葡萄糖的含量。
在本发明的自制葡萄糖光学检测试剂中，所述检测试剂是由转化酶、还原型染料、卤化物盐组合而成。
所述转化酶由过氧化氢酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖淀粉酶和β-葡萄糖苷酶中的至少一种或一种以上组成，过氧化氢酶、己糖激酶、葡萄糖氧化酶和葡萄糖淀粉酶是转化酶的优选，过氧化氢酶、己糖激酶和葡萄糖氧化酶是转化酶的最优选。转化酶加入量的优选为10～100U。
所述还原型染料由淀粉、碘化钾、4-氨基替吡啉、草酸钛钾、苯酚、N，N二甲基苯胺和甲基酚中一种或一种以上组成，淀粉、碘化钾、4-氨基替吡啉、草酸钛钾、苯酚和N，N二甲基苯胺是还原型染料的优选，淀粉、碘化钾、4-氨基替吡啉和草酸钛钾是还原型染料的最优选。还原型染料加入量的优选为100～200mM。
所述卤化物盐由氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾、碘化钠和碘化钾中一种或一种以上组成，氯化钠、氯化钾、溴化钠和溴化钾是卤化物盐的优选，氯化钠和氯化钾是卤化物盐的最优选。卤化物盐加入量的优选为150～200mM。下面结合具体实施例对本发明进行描述：
实施例1：葡萄糖标准样品Abs380值——浓度标准曲线
1、取石英比色皿；
2、用移液器准确移取100μL标准葡萄糖样品至比色皿中；
3、用移液器准确移取2400μL自制的葡萄糖光学检测试剂至比色皿中，混合均匀，室温下反应1.5分钟；
4、在紫外分光光度计下测定380nm下的吸光值(Abs值)；
5、绘制葡萄糖标准样品Abs380值——浓度标准曲线。
实施例2：淀粉发酵液样品的快速检测方法
1、准确量取1mL淀粉发酵液样品，离心；
2、用移液器准确移取100μL上清液至比色皿中；
3、用移液器准确移取2400μL自制的葡萄糖光学检测试剂至比色皿中，混合均匀，室温下反应1.5分钟；
4、在紫外分光光度计下测定380nm下的吸光值(Abs值)；
5、与标准曲线比较，判断淀粉发酵液样品中葡萄糖的含量。
以上实施例只是为了说明本发明，而不是对本发明的限制。在上述说明的基础上，可以对本发明作许多改进和改变。在所附权利要求书的范围内，本发明可以有不同于上述的其它实现方式，选用其它试剂、改变试剂浓度等方法均在本发明专利要求范围之内。
Claims (1)
1.一种淀粉发酵液中葡萄糖含量的快速检测方法，其特征在于：取100μL检测试样与2400μL自制的葡萄糖光学检测试剂混合，样品中葡萄糖与检测试剂起显色反应，反应产物在380nm处有最大吸收峰，通过比较不同浓度葡萄糖标准样品的Abs380值，制定标准曲线，根据待测样品的Abs380值，获取待测物中葡萄糖的含量；所述自制的葡萄糖光学检测试剂是由转化酶、还原型染料、卤化物盐组合而成；所述的转化酶由己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、葡萄糖淀粉酶和β-葡萄糖苷酶中的至少一种组成，转化酶待加入量为10～100U；所述的还原型染料由淀粉、碘化钾、草酸钛钾、苯酚、N,N二甲基苯胺和甲基酚中的一种以上组成，还原型染料待加入量为100～200 mM；所述的卤化物盐由氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾中一种以上组成，卤化物盐待加入量为150～200 mM。
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