CN102028716A

CN102028716A - 大白栓菌或其提取物、3-氢化松苓酸b的新用途

Info

Publication number: CN102028716A
Application number: CN 201010297195
Authority: CN
Inventors: 郭志勇; 邓改改; 汪鋆植; 邹坤; 王星琴; 程凡; 陈剑峰
Original assignee: 郭志勇
Priority date: 2009-09-28
Filing date: 2010-09-20
Publication date: 2011-04-27
Anticipated expiration: 2030-09-20
Also published as: CN102028716B

Abstract

本发明提供了大白栓菌及其提取物、3-氢化松苓酸B的新用途，具体地，是在用于治疗或/和预防糖尿病中的用途。本发明药物的药效明确，安全，为临床提供了一种新的用药选择。

Description

大白栓菌或其提取物、3-氢化松苓酸B的新用途

技术领域

本发明涉及大白栓菌或其提取物、3-氢化松苓酸B的新用途。属药物领域。

背景技术

大白栓菌Trametes lactinea(Berk.)Pat.为多孔菌科真菌，担子果一年生，无柄，木栓质。它生于活叶树木材上，分布于中国、马来西亚、印度尼西亚、菲律宾、巴基斯坦、印度、斯里兰卡、澳大利亚等国家。大白栓菌作为天麻等兰科植物种子萌发菌，具有一定的经济价值，但大白栓菌野生资源较少，不能满足其开发利用的需要。目前已有文献报道大白栓菌的人工培养方法，如：谭梦华，等，大白栓菌的人工培养条件优化，时珍国医国药2008年第19卷第2期；专利申请号：200810046969.7，发明名称：大白栓菌的人工培养方法及用途，公开了一种大白栓菌的人工培养方法及用途，该发明通过菌种的纯化，分别以固体培养基和液体培养基对大白栓菌进行培养，得到人工培养大白栓菌，可实现大白栓菌大规模人工培养；以大白栓菌或其提取物为主的药物具有较好的提高免疫力、并具有抗肿瘤的作用，通过本发明得到的大白栓菌也可作为一种添加剂加入饲料中畜禽生长，增强其免疫力，减少疾病。该专利还报道了大白栓菌主要含有糖类和三萜类化合物，3-氢化松苓酸B是大白栓菌的主要成分，其结构式如下：

目前尚无大白栓菌及其提取物、3-氢化松苓酸B用于治疗糖尿病的相关文献报道。

发明内容

本发明的技术方案是提供了大白栓菌及其提取物、3-氢化松苓酸B的新用途。

本发明提供了大白栓菌或其提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物中的用途。

其中，所述的药物是治疗II型糖尿病的药物。

其中，所述的大白栓菌提取物是大白栓菌的水或有机溶剂提取物。

其中，所述的有机溶剂提取物是60％-95％乙醇提取物。

进一步优选地，所述的有机溶剂提取物是95％乙醇提取物。

其中，所述的大白栓菌中含有3-氢化松苓酸B的重量百分含量为：5.17％-6.12％。

本发明还提供了3-氢化松苓酸B在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物中的用途。

其中，所述的药物是治疗II型糖尿病的药物。

本发明还提供了一种α-葡萄糖苷酶抑制剂，它是由有效量的大白栓菌或其提取物或3-氢化松苓酸B为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。

其中，所述的药剂是口服制剂。

本发明药物大白栓菌及其提取物、3-氢化松苓酸B用于治疗或/和预防糖尿病，药效明确，安全，为临床提供了一种新的用药选择。

附图说明

图1对照品HPLC图谱

图2样品HPLC图谱

具体实施方式

实施例1本发明保健食品制备

固体培养

用玉米粉或大米粉或黄豆粉或小麦粉，粒度：过10-100目筛，加水20％-70％，高压灭菌后接种野生大白栓菌菌丝，20-32℃培养10-20天。干燥供食用或粉碎，装胶囊。

质量控制方法：3-氢化松苓酸B含量大于0.05％

食用方法：煮粥、煮饭。

用量：每次用量10-100g，一日2-3次，胶囊每次用量2-10粒，一日2-3次。

液体培养

用下列培养基之一，高压灭菌后接种，摇床摇速30-250转/分。20-32℃培养5-15天，培养结束后离心，菌丝干燥称量，粉碎，装胶囊。

配方1：葡萄糖1-10％，蛋白胨1-5％石膏0.2g-1％

配方2：玉米浆10-50％，石膏0.2g-1％

配方3：豆浆10-50％，石膏0.2g-1％

质量控制：3-氢化松苓酸B含量大于0.05％

食用方法：煮粥、煮饭。

本发明大白栓菌的制备方法可按专利申请号：200810046969.7公开的方法制备。

实施例2本发明大白栓菌质量控制方法

取样品粉碎后过80目筛，精密称取0.1g加50ml丙酮超声30min。静置1h后继续超声30min。丙酮补齐损失重量。吸取样品溶液用0.45μm膜过滤。乙腈/水(95∶5)为流动相，流速1ml/min，进样量10μl，检测波长214nm，进行高效液相色谱分析。

1、色谱条件

色谱柱YMC-Pack AQ C18，250×4.6mm，5μm，流动相为95％的乙腈-水体系，进样量10μl，柱温25℃，流速1.0ml/min，检测波长214nm，在该基础条件下，待测组分可达基线分离。(色谱图见图1、图2)

2、对照品溶液制备

精密称取3-氢化松苓酸B 2.0mg，置于10ml量瓶中，加入丙酮溶解并稀释至刻度，摇匀备用。

3、取大白栓菌培养物及大白栓菌粉碎，过60目筛，称取大白栓菌培养物粉末1g，大白栓菌粉末0.5g，加甲醇10ml，称重后浸泡4h，40Hz，40℃超声20min，0.45μm滤膜过滤，供测定用。

标准曲线及线性关系考察精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，12，14μl注入液相色谱仪，按色谱条件测得峰面积，以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为：y＝1192330x-112754，R＝0.9999，表明，对照品在20-240mg·L^-1浓度范围内呈良好的线性关系

4、稳定性试验

取样品溶液，间隔3h测1次，共测24h。结果3-氢化松苓酸B峰面积RSD为1.02％(n＝8)，表明供试品溶液室温下放置24h基本稳定。

5、精密度试验

精密吸取3-氢化松苓酸B对照品溶液10μl重复进样5次，测定峰面积的RSD为0.91％。

6、重复性试验

重复取同一样品5份，照“供试品溶液制备”项操作，测得3-氢化松苓酸B平均含量为5.63％，RSD为1.3％。

7、加样回收试验

精密称取已知含量样品5份，加入与样品含量相当的对照品，测定3-氢化松苓酸B含量，计算回收率，结果见表1。

表13-氢化松苓酸B加样回收率(n＝5)

8、样品含量测定

收集培养的3批样品，分别测定大白栓菌菌丝体，大白栓菌培养物中3-氢化松苓酸B含量。按供试样品溶液制备方法制备供试品溶液，准确吸取供试品溶液各10μl，按上述色谱条件测定，结果见表2。

表23-氢化松苓酸B含量

大白栓菌中含有3-氢化松苓酸B的重量百分含量为：5.17％-6.12％。

实施例3本发明不同乙醇浓度提取物大白栓菌中3-氢化松苓酸B的含量测定

将制备的大白栓菌采用不同浓度的乙醇回流提取，并测定其中3-氢化松苓酸B的重量百分含量，结果见表3：

表3

不同浓度乙醇	3-氢化松苓酸B
		60％	0.1％
70％	0.6％
		80％	2％
95％	5.71％

上述试验证明，采用95％的乙醇提取大白栓菌，3-氢化松苓酸B的含量最高。

以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。

实验例1本发明药物降糖作用

一、α-葡萄糖苷酶抑制实验

主要药品与试剂

大白栓菌95％乙醇提取物(大白栓菌醇提物)(按实施例3的方法提取)，3-氢化松苓酸B(Trametenolic acid B)，α-葡萄糖苷酶，对硝基苯酚-α-D吡喃葡萄糖苷(pNPG)，阿卡波糖。

主要仪器

电子天平等；CO₂培养箱；酶标仪。

方法与结果

实验用溶液的配制：

0.5mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)：KH₂PO₄ 13.610g，KOH 3.210g，MgCl₂·6H₂O 0.650g，用蒸馏水定容至200ml，调节pH6.8，使用时用蒸馏水稀释至0.1mol/L；酶溶液：以0.1mol/L PBS配制0.1U/ml α-D葡萄糖苷酶溶液；底物溶液：以0.1mol/L PBS配制2mmol/L对硝基苯酚α-D吡喃葡萄糖苷溶液。样品溶液：取样品用DMSO溶解，稀释至所需浓度。

α-葡萄糖苷酶抑制活性测定：

取96孔细胞培养板，用微量移液器向每孔中准确加入底物溶液40μl，样品溶液5μl，对照孔中加等量DMSO。于405nm测定吸光度A₁(反应前溶液的背景吸收)。于冰浴上各加入酶溶液5μl，混匀后置37℃，反应30min，立即取出，冰浴，于405nm测定吸光度A₂。阿卡波糖为阳性对照。每一样品的吸光度A_sample＝A₂-A₁。计算抑制率，抑制率＝(A_DMSO-A_sample)/A_DMSO*100。结果见表4：

表4大白栓菌提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响

与DMSO组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

结果显示大白栓菌醇提物及主要成分3-氢化松苓酸B对α-葡萄糖苷酶活性有抑制作用。

二、对小鼠血糖的影响

主要药品与试剂

大白栓菌95％乙醇提取物，3-氢化松苓酸B(Trametenolic acid B)，葡萄糖测定试剂盒。

实验动物

昆明小鼠，雌雄各半，体重18-22g，由湖北省实验动物研究中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(鄂)2008-0005。

主要仪器

电子天平等；酶标仪。

方法与结果

随机将小鼠分成6组，分别为空白组，模型组，阳性对照组降糖片，大白栓菌醇提物组，3-氢化松苓酸B低剂量组，3-氢化松苓酸B高剂量组。灌胃给药3d后，第三天给药后禁食24h，皮下注射肾上腺素0.2ml(0.02mg/ml)。90min后取血，3000转速离心10min，取上清液。采用葡萄糖测定试剂盒的测定方法进行测定。于505nm下测定吸光度值。结果见表5：

表5大白栓菌提取物对小鼠血糖的影响

与模型组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

结果显示大白栓菌醇提物及主要成分3-氢化松苓酸B对注射肾上腺素所引起的血糖升高有抑制作用。

三、对小鼠血糖的影响

主要药品与试剂

大白栓菌95％乙醇提取物，3-氢化松苓酸B(Trametenolic acid B)，链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)购自Sigma公司，临用时以0.1mmol·L^-1 pH4.4的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配成2％的溶液。

主要仪器

One Touch II血糖仪(LifeScan公司)；UV-2201型分光光度计(日本岛津)；DK-8型电热恒温水浴槽(上海精宏实验设备有限公司)；BS224S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。胰岛素放射免疫分析药盒(北京北方生物技术研究所)。

方法与结果

将70只C57BL/6小鼠，适应性喂养1周后，随机取出10只作为正常组(Normal)，其余小鼠禁食12h，于左下腹腔注射STZ60mg/kg复制2型糖尿病小鼠模型，STZ由0.1mmol/L柠檬酸缓冲盐临用前配制，同时改喂高脂饲料。5d后，小鼠禁食12h，尾尖采血，并测定空腹血糖(FBG)≥11.1mmol/L者为造模成功，将小鼠随机分为6组，每组10只，分别为模型组，大白栓菌醇提物组，Trametenolic acid B高低剂量组和二甲双胍组。各组动物灌胃给药，1次/d，连续14d，正常对照组与模型组灌服同体积蒸馏水。末次给药后禁食12h，摘眼球采血检测血清空腹血糖、血清胰岛素(放免分析)。结果见表6：

表6大白栓菌提取物对2型糖尿病小鼠血糖、胰岛素的影响

与模型组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

结果显示，大白栓菌醇提物组，Trametenolic acid B高低剂量组及二甲双胍组胰岛素不同程度地高于模型组(P＜0.05或P＜0.01)，血糖与模型组比显著下降，与模型组比有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。

结论：大白栓菌醇提物及主要成分3-氢化松苓酸B有降血糖作用，抑制α-葡萄糖苷酶活性是其机制之一，可用于II型糖尿病防治。

Claims

1.大白栓菌或其提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗II型糖尿病的药物。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述的大白栓菌提取物是大白栓菌的水或有机溶剂提取物。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的有机溶剂提取物是60％-95％乙醇提取物。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述的有机溶剂提取物是95％乙醇提取物。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的大白栓菌中含有3-氢化松苓酸B的重量百分含量为：5.17％-6.12％。

7.3-氢化松苓酸B在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物中的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗II型糖尿病的药物。

9.一种α-葡萄糖苷酶抑制剂，其特征在于：它是由有效量的大白栓菌或其提取物或3-氢化松苓酸B为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。

10.根据权利要求9所述的α-葡萄糖苷酶抑制剂，其特征在于：所述的药剂是口服制剂。