CN102018698A

CN102018698A - 治疗雌激素受体相关疾病的化合物及其方法

Info

Publication number: CN102018698A
Application number: CN2009101804875A
Authority: CN
Inventors: 李靖; 孟坤
Original assignee: SHENOGEN PHARMA GROUP Ltd
Current assignee: Beijing Shengnuoji Pharmaceutical Technology Co Ltd
Priority date: 2008-04-18
Filing date: 2009-10-16
Publication date: 2011-04-20
Anticipated expiration: 2029-10-16
Also published as: US20100016352A1; EP2262366A1; JP2011518174A; EP2262366A4; WO2009129372A1; CN102018698B

Abstract

本发明涉及用于调节雌激素受体hER-α36功能的化合物、药物组合物和方法，用于预防和/或治疗由雌激素受体hER-α36介导的疾病，预防和/或治疗骨质疏松，诱导细胞死亡和/或抑制细胞增殖，并预防和/或治疗有关如癌症等有关细胞异常增殖的疾病。

Description

治疗雌激素受体相关疾病的化合物及其方法

技术领域

本发明涉及预防和/或治疗与雌激素受体相关的疾病的化合物、药物组合物及其使用方法。

技术背景

雌激素是一组涉及人体内许多关键生理功能的激素。雌激素的功能包括促进女性性器官发育、为怀孕时的乳腺与子宫以及分娩后的母乳喂养做好充分准备。雌激素在维持适当的心血管功能及骨密度方面也起着重要的作用。众所周知，雌激素可以刺激细胞增殖，由此可能增加女性患上癌症的危险，特别是乳腺癌与子宫癌。

雌激素通过与靶细胞中的雌激素受体相结合来调节细胞功能。在人体细胞中已发现两种雌激素受体(hERs)，hER-α和hER-β。他们具有相似的蛋白质结构，每种均拥有三个独立却相互作用的功能结构域：N末端结构域(A/B结构域)、中段DNA结合结构域(C结构域)以及C末端配体结合结构域(D/E/F结构域)。N末端结构域具有非配体依赖性激活功能(AF-1)，可与共激活因子相互作用，在缺乏配体情况下转录激活靶基因。DNA结合结构域在受体二聚化以及与特定DNA序列结合方面具有重要作用。C末端配体结合结构域可介导配体结合并具有配体依赖性转录激活功能(AF-2)，可在配体存在时激活基因转录。

全长的hER-α是分子量为66kDa的蛋白，被称为hER-α66。hER-α66包含全部三种功能结构域。后来人们又发现了hER-α66的剪接变异体，将其命名为hER-α46。hER-α46的分子量约为46kDa，其缺少hER-α66的N末端AF-1结构域。最近又发现了一个新的36kDa的hER-α的变异体，hER-α36。它缺少hER-α66的N末端AF-1结构域及C端AF-2结构域(参见Wang等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.336，1023-1027(2005))。

通常认为hER-α66通过转录激活其靶基因来介导雌激素刺激的细胞增殖。雌激素与hER-α66的结合可激活hER-α66的转录激活结构域，从而刺激下游靶基因的表达，并最终导致细胞增殖。hER-α46被证明可介导由膜启动和雌激素刺激的快速NO合成(参见Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 100：4807-4812(2003))。并且也发现了缺失AF-1结构域的hER-α46会抑制hER-α66的AF-1活性(参见Flouriot，G.，EMBO，19，4688-4700，(2000))。由于hER-α36缺失AF-1和AF-2转录激活结构域，可将其作为显性负面抑制剂来抑制hER-α和hER-β的AF-1和AF-2功能。另外，hER-α36主要分布在细胞膜上，介导可刺激细胞增殖的由膜启动的有丝分裂雌激素信号(参见Wang等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.336，1023-1027(2005)；Wang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.103：9063-9068(2006))。

深入研究表明，雌激素信号是通过传统的细胞核转录激活通路与非传统的膜启动的信号传导通路来进行介导。hER-α66和hER-α46似乎主要在细胞核内起作用，而hER-α36主要通过在细胞核外起作用。

研究表明，hER-α36缺失原始hER-α66带有的配体结合结构域的螺旋8-12，这完全改变了hER-α36配体结合的特异性。因此，hER-α36可以结合来自hER-α66和hER-β的不同配体。

由于与雌激素及雌激素受体相关的疾病仍然影响着许多人，目前急需找到一种新型的，用于预防和/或治疗这些疾病的化合物及方法。

发明简介

在某一实施例中，本发明提供了一种化合物及其衍生物、药物组合物与使用方法，用于调节新型雌激素受体变异体ER-α36的功能。在某一实施例中，本发明提供了一种化合物及其衍生物、药物组合物与使用方法，用于预防和/或治疗由ER-α36介导的疾病。在某一实施例中，本发明提供了一种化合物及其衍生物、药物组合物与使用方法，用于诱导细胞死亡和/或抑制细胞增殖，并预防和/或治疗有关细胞异常增殖的疾病，如癌症等。在某一实施例中，本发明进一步提供了一种化合物及其衍生物、药物组合物与使用方法，用于预防和/或治疗骨质疏松、哮喘及其它呼吸道疾病。

在某些实施例中，本发明提供了用于调节ER-α36功能的化合物。在某些实施例中，本发明提供了使用本发明化合物调节ER-α36功能的方法。在某些实施例中，本发明提供了预防和/或治疗由ER-α36的功能或功能障碍导致的疾病的方法。

在某些实施例中，本发明提供了用于诱导细胞死亡的化合物。在某些实施例中，本发明提供了使用本发明所述化合物诱导细胞死亡的方法。

在某些实施例中，本发明提供了用于抑制细胞增殖的化合物。在某些实施例中，本发明提供了使用本发明所述化合物抑制细胞增殖的方法。

在某些实施例中，本发明提供了用于预防和/或治疗有关细胞异常增殖疾病的化合物。在某些实施例中，本发明提供了在一主体中使用本发明所述化合物预防和/或治疗有关细胞异常增殖疾病的方法。

在某些实施例中，本发明提供了用于预防和/或治疗哮喘及其它呼吸道疾病的化合物。在某些实施例中，本发明提供了在一主体中使用本发明所述化合物预防和/或治疗哮喘及其它呼吸道疾病的方法。

在某些实施例中，本发明提供了可预防和/或治疗骨质疏松的化合物。在某些实施例中，本发明提供了在一主体中使用本发明所述化合物预防和/或治疗骨质疏松哮喘的方法。

在某些实施例中，本发明提供了含有本发明所述化合物的药物组合物。

附图说明

图1为人体乳腺癌样品中ER-α66、ER-α46和ER-α36表达的抗体标记(Western blot)检测结果。1道：正常的乳腺组织；2道：浸润性导管癌；3道：浸润性导管癌；4道：侵袭性导管癌；5道：浸润性小叶癌；6道：浸润性小叶癌；7道：非浸润性导管癌。

图2为MDA-MB-231细胞免疫荧光染色结果，该细胞是缺失ER-α66和ER-α46的雌激素受体阴性乳腺癌细胞系，使用能与ER-α36特异性结合的抗体对其进行染色(图中标为“ER-α36”：阳性染色显示为绿色)。用4，6-二脒基-2-苯基吲哚对细胞核进行染色(图中标为“DAPI”：阳性染色显示为蓝色)。合并的染色信号被标为“合并”。当抗体与免疫原性肽预培养结合后，我们发现染色呈阴性。

发明内容

化合物及其衍生物

通过某些实施例，本申请描述了一类化合物及其衍生物，以及药物组合物，用于调节新的雌激素受体ER-α36的功能，预防和/或治疗由ER-α36介导的疾病，诱导细胞死亡，抑制细胞增殖，预防和/或治疗有关细胞异常增殖的疾病，如癌症等，并/或预防和/或治疗骨质疏松、哮喘及其它呼吸道疾病。

在某些实施例中，描述了如式(I)所示化合物：

及其立体异构体或前药，或所述化合物、立体异构体或前药的一种可药用的盐，其中

X＝H、OR¹或NR²R³；Y＝NR、O；R¹、R²、R和R³分别是氢、(C₁-C₆)烷基或R²R³共同为-(CH₂)_n-，n＝2至8；在碳a和b或d和e间可以是单键或双键。R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸分别是氢、卤素、羟基、氨基、(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、(C₁-C₆)烷氧基、(C₁-C₆)烷基-(C＝O)-、甲酰基、甲酰胺基、氰基、硝基、(C₁-C₆)烷氧羰基、氨基羰基、氨基(C₁-C₆)烷基、N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N，N-[(C₁-C₆)烷基]₂氨基羰基、N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、N，N-[(C₆-C₁₀)芳基]₂氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、芳基(包括取代的芳基)、(C₆-C₁₀)芳氧基、杂芳基(包括取代的杂芳基)、(C₅-C₉)杂芳基氧基、吗啉代-羰基、(C₁-C₆)烷氧基氨基羰基、(C₁-C₆)烷基-羰基氨基、(C₃-C₈)环烷基、(C₃-C₈)环烷基-甲基、(C₃-C₈)杂环烷基、(C₃-C₈)杂环烷基-甲基。R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、和R¹³分别是氢、卤素、羟基、(C₁-C₆)烷基。

当R、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³为(C₁-C₆)烷基时，(C₁-C₆)烷基的每个碳原子都可以被一至三个取代基分别取代，取代物可分别选自于羟基、卤素、(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、(C₁-C₆)烷氧基、(C₁-C₆)烷基-(C＝O)-、甲酰基、甲酰胺基、氰基、硝基、HO-(C＝O)-、(C₁-C₆)烷氧羰基、氨基羰基、氨基(C₁-C₆)烷基、N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N，N-[(C₁-C₆)烷基]₂氨基羰基、N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、N，N-[(C₆-C₁₀)芳基]₂氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、(C₆-C₁₀)芳基、(C₆-C₁₀)芳氧基、(C₅-C₉)杂芳基、(C₅-C₉)杂芳基氧基、吗啉代-羰基、(C₁-C₆)烷氧基氨基羰基、(C₁-C₆)烷基-羰基氨基、(C₃-C₈)环烷基、(C₃-C₈)环烷基-甲基、(C₃-C₈)杂环烷基、(C₃-C₈)杂环烷基-甲基。

在某一实施例中，本发明包括一组带式(I)结构的化合物，称为化合物IA1，其中所述化合物的化学式如下所示：

其中：

是(C₆-C₁₀)芳基，(C₅-C₉)杂芳基，X＝H、OR¹或NR²R³；Y＝NR、O；其中R、R¹、R²和R³分别是氢，(C₁-C₆)烷基或R²R³共同为-(CH₂)_n-，n＝2至8；在碳a和b或d和e中间的键可能是单键或双键。R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R¹⁴和R¹⁵分别是氢、卤素、羟基、氨基、(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、(C₁-C₆)烷氧基、(C₁-C₆)烷基-(C＝O)-、甲酰基、甲酰胺基、氰基、硝基、(C₁-C₆)烷氧羰基、氨基羰基、氨基(C₁-C₆)烷基、N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N，N-[(C₁-C₆)烷基]₂氨基羰基、N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、N，N-[(C₆-C₁₀)芳基]₂氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、(C₆-C₁₀)芳基(包括取代的芳基)、(C₆-C₁₀)芳氧基、(C₅-C₉)杂芳基(包括取代的杂芳基)、(C₅-C₉)杂芳基氧基、吗啉代-羰基、(C₁-C₆)烷氧基氨基羰基、(C₁-C₆)烷基-羰基氨基、(C₃-C₈)环烷基、(C₃-C₈)环烷基-甲基、(C₃-C₈)杂环烷基、(C₃-C₈)杂环烷基-甲基。R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³分别是氢、卤、羟基、(C₁-C₆)烷基；

当R、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴和R¹⁵为(C₁-C₆)烷基时，(C₁-C₆)烷基的每个碳原子都可以被一至三个取代基分别取代，取代基可分别选自于羟基、卤素、(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、(C₁-C₆)烷氧基、(C₁-C₆)烷基-(C＝O)-、甲酰基、甲酰胺基、氰基、硝基、HO-(C＝O)-、(C₁-C₆)烷氧羰基、氨基羰基、氨基(C₁-C₆)烷基、N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N，N-[(C₁-C₆)烷基]₂氨基羰基、N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、N，N-[(C₆-C₁₀)芳基]₂氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、(C₆-C₁₀)芳基、(C₆-C₁₀)芳氧基、(C₅-C₉)杂芳基、(C₅-C₉)杂芳基氧基、吗啉代-羰基、(C₁-C₆)烷氧基氨基羰基、(C₁-C₆)烷基-羰基氨基、(C₃-C₈)环烷基、(C₃-C₈)环烷基-甲基、(C₃-C₈)杂环烷基、(C₃-C₈)杂环烷基-甲基。

在某一实施例中，本发明包括一组带式(I)结构的化合物，称为化合物IA2，其中所述化合物的化学式如下所示：

其中R¹⁶、R¹⁷和R¹⁸分别是氢、(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基；在碳a和b或d和e中间的键可能是单键或双键。R⁵、R⁶、R⁷、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和X的定义如前所述。

在某一实施例中，本发明包括一组带式(I)结构的化合物，称为化合物IA3，其中所述化合物的化学式如下所示：

其中R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸和R²⁰分别是氢、(C₁-C₆)烷基；R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³分别是氢、(C₁-C₆)烷基；X是H、OR¹或NR²R³，R¹、R²和R³分别是氢，(C₁-C₆)烷基或R²R³共同为-(CH₂)_n-，n＝2至8；在碳a和b或d和e中间的键可能是单键或双键。R⁵和R⁶的定义如前所述。

在某一实施例中，本发明包括一组带式(I)结构的化合物，称为化合物IA4，其中所述化合物的化学式如下所示：

其中R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹和R²⁰分别是氢、(C₁-C₆)烷基；X是OR¹或NR²R³，R¹、R²和R³分别是氢、(C₁-C₆)烷基或R²R³共同为-(CH₂)_n-，n＝2至5；

在某一实施例中，本发明包括一组带式(I)结构的化合物，称为化合物IA5，其中所述的化合物的化学式如下所示：

其中R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹和R²⁰分别是氢、(C₁-C₆)烷基；X是OR¹或NR²R³，R¹、R²和R³分别是氢、(C₁-C₆)烷基或R₂R₃共同为-(CH₂)_n-，n＝2至5；

在某一实施例中，本发明包括一组带式(I)结构的化合物，称为化合物IA6，其中所述化合物的化学式如下所示：

其中R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹和R²⁰分别是氢、(C₁-C₆)烷基；X是OH或NH₂。

优选的带式(I)结构的化合物包括但不限于如下所列化合物：

8-(3-氨基-3-甲基丁基)-3，5，7-三羟基-2-(4-羟基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

8-(3-氨基-3-甲基丁基)-3，5，7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5，7-二羟基-3-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-3-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-3-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

5-羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-3，7-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5-羟基-3，7-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

3-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

3-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)-8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5，7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

2-(4-氯苯基)-3，5，7-三羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-4H-苯并吡喃-4-酮

2-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3，5，7-三羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-4H-苯并吡喃-4-酮

8-(3-氨基-3-甲基丁基)-3，5，7-三羟基-2-(吡啶-3-基)-4H-苯并吡喃-4-酮

8-(3-氨基-3-甲基丁基)-3，5，7-三羟基-2-(吡啶-2-基)-4H-苯并吡喃-4-酮

8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5，7-二羟基-3-甲氧基-2-(5-甲氧基吡啶-2-基)-4H-苯并吡喃-4-酮

5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-3-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4H-苯并吡喃-4-酮

5，7-二羟基-3-甲氧基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(吡啶-3-基)-4H-苯并吡喃-4-酮

2-(6-(二甲氨基)吡啶-3-基)-5，7-二羟基-3-甲氧基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

2，3-二氢-5，7-二羟-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)喹啉-4(1H)-酮

2，3-二氢-7-羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)喹啉-4(1H)-酮

7-羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)喹啉-4(1H)-酮

5，7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)喹啉-4(1H)-酮

8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5，7-二羟基-2-(4-羟基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5，7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

8-(3-氨基-3-甲基丁基)-2，3-二氢-5，7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)苯并吡喃-4-酮

5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

5-羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-7-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5-羟基-7-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮

2，3-二氢-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-2-(4-甲氧基苯基)苯并吡喃-4-酮

2-(4-氨基苯基)-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-4H-苯并吡喃-4-酮

2-(4-氯苯基)-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-4H-苯并吡喃-4-酮

2-(4-氯-3-甲氧基苯基)-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-4H-苯并吡喃-4-酮

2-(4-氨基苯基)-2，3-二氢-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)苯并吡喃-4-酮

2-(4-氯苯基)-2，3-二氢-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)苯并吡喃-4-酮

2-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2，3-二氢-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)苯并吡喃-4-酮

7-羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(吡啶-4-基)-4H-苯并吡喃-4-酮

7-羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(吡啶-3-基)-4H-苯并吡喃-4-酮

本申请化合物及其衍生物是按照IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，位于俄亥俄州哥伦布市)命名系统命名的。

碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀(C_a-C_b)烷基表示任何含“a”至“b”个碳原子的烷基。因此，例如，(C₁-C₆)烷基是指包含一至六个碳原子的烷基。

“烷氧基”是指与一氧原子键合的直链或带有支链的，单价的，饱和脂肪链，包括但不限于如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基以及其它类似基团。

“烷基”是指直链或带有支链的，单价的，饱和脂肪链，包括但不限于如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、异戊基、己基以及其它类似基团。

“烯基”是指带有一个或多个双键的直链或支链烃，包括但不限于如乙烯基、丙烯基以及其它类似基团。

“芳基”是指一种环状的芳香烃，包括但不限于如苯基、萘基、蒽基、菲基以及其它类似基团。

“环烷基”是指饱和的单环或多环烷基，可能与一芳烃基团稠合。环烷基包括但不限于如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、茚满基、四氢化萘基以及其它类似基团。

“卤素”是指氯、溴、氟及碘原子或基团。

“杂芳基”是指单环或多环芳香烃，其中的一个或多个碳原子已被如氮、氧或硫等杂原子取代。如果杂芳基含有不止一个杂原子，则这些杂原子可能是相同，也可能是不同的。杂芳基包括但不限于如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并吡喃基、呋喃基、咪唑基、吲唑基、吲嗪基、吲哚基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、萘啶基、噁二唑基、噁嗪基、噁唑基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶[3，4-b]吲哚基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹嗪基、喹啉基、喹喔啉基、噻二唑基、噻三唑基、噻唑基、噻吩基、三嗪基、三唑基、呫吨基以及其它类似基团。

“杂环烷基”是指饱和的单环或多环烷基，可能与一芳烃基团稠合，其中至少有一个碳原子已被如氮、氧或硫等杂原子取替。如果杂环烷基含有不止一个杂原子，则这些杂原子可能是相同，也可能是不同的。杂环烷基包括但不限于如氮杂二环庚烷基、氮杂环丁烷基、二氢吲哚基、吗啉基、派嗪基、哌啶基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢喹啉基、四氢吲唑基、四氢吲哚基、四氢异喹啉基、四氢吡喃基、四氢喹喔啉基、四氢噻喃基、噻唑烷基、硫代吗啉基、噻吨基、噻恶烷基以及其它类似基团。

一个环状基团可通过多种方式与另一基团键合。如果未明确键合方式，则表示包括所有可能的方式。例如，“吡啶基”包括2-、3-、或4-吡啶基，而“噻吩基”包括2-或3-噻吩基。

“oxo”是指通过一(多)个碳原子与一(多)个氧原子结合形成的羰基。

“前药”是指一种作为药物前体的化合物，该化合物可在对主体给药后在体内通过一个化学或生理过程(例如，通过置于生理pH值或通过酶作用)释放活性药物。关于前药的合成与使用的讨论，参见T.Higuchi和W.Stella的文章题为“Prodrugs as Novel Delivery Systems”，the ACS Symposium Series的第14期，还有ed.Edward B.Roche的文章：Bioreversible Carriers in Drug Design，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987，这两篇文章的内容均被引用并入本文中。“前药”也可包括本发明化合物的代谢前体，该类前药在对主体给药时可能不具有活性，但可在体内转化为本发明的化合物。前药可以是自然存在的化合物或合成的化合物。

“可药用的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料和/或盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。

“盐”和“可药用的盐”是指式(I)所示的化合物，或其立体异构体，或其前药的有机盐和无机盐。这些盐可在化合物分离提纯时即时制备，或者通过使用合适的有机或无机酸或碱分别与式(I)所示化合物，或其立体异构体，或其前药反应，然后分离获得盐。常用的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、醋酸盐、草酸盐、苯磺酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和十二烷基磺酸盐以及其它类似盐。这些盐可能也包括碱或碱土金属中的阳离子，例如钠、锂、钾、钙、镁以及其它类似物，以及无毒铵、季铵和铵阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺以及其它类似物。其它的实例请看如Berge等人所写的J.Pharm.Sci.，66，1-19(1977)，该文献的内容被引用入本文中。

式(I)所示化合物的盐可通过将式(I)所示化合物溶液与所需要的酸或碱适当进行混合而制得。盐可能在溶液中形成沉淀，可以通过过滤收集，或在溶剂蒸发后回收。

“取代”是指分子上的氢原子被其它不同的原子或分子替换。替换氢原子的原子或分子被称为“取代基”。

式(I)的化合物可能因包含不对称的结构或带有手性，而以不同的立体异构形式存在。所有式(I)所示化合物的立体异构体及其混合物，包括外消旋混合物都属于本发明的一部分。另外，也包括所有的几何异构体与位置异构体。例如，如果式(I)所示化合物带有双键，那么以顺式和反式存在的化合物及其混合物都包含在本发明的范围内。

非对映异构体的混合物可通过本领域普通技术人员熟知的方法，根据非对映异构体物理和化学上的差异将其分离，例如色谱法和/或分步结晶法。对映异构体可通过将对映异构体混合物与合适的旋光活性化合物(例如醇类)进行反应而转化成非对映异构体混合物，分离出非对映异构体，并将各非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯净对映异构体。同时，式(I)的一些化合物可能是阻转异构体(例如取代的联芳基)，这些也应作为本发明的一部分。

式(I)所示化合物可以非溶剂形式存在，也可以可药用溶剂形式存在，例如水、乙醇以及类似物，本发明应包括溶剂与非溶剂形式。

式(I)所示化合物也可能以互变异构体的形式保持平衡状态，所有这些形式应包含在本发明的范围内。

在某些实施例中，本发明提供了同位素标记的式(I)化合物，其与在此描述的那些化合物一致，但是其中的一个或多个原子被另一个原子取代，该原子的原子质量或质量数不同于大自然中常见的原子质量或质量数。可被纳入式(I)化合物中的同位素包括如氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素如²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F及³⁶Cl。含有前述同位素和/或其它原子同位素的式(I)化合物、立体异构体或其前药，以及该化合物、立体异构体或前药的可药用的盐均应包含在本发明的范围内。

式(I)所示的某些同位素标记的化合物，例如那些被如³H和¹⁴C等放射性同位素标记的化合物，可以用于化合物和/或底物组织分布分析中。由于含氚即³H的同位素和碳-14即¹⁴C同位素相对容易制备与检测，我们优选³H的同位素和¹⁴C同位素。此外，某些更重的同位素如氘即²H具有代谢稳定性，使用该同位素来取代可能具有某些治疗优势，例如，增加在活体中的半衰期或减少给药量，因此在一些情况下会首选该类同位素。同位素标记的式(I)化合物可使用本领域普通技术人员熟知的方法制备，例如用一个同位素标记试剂取代一个非同位素标记试剂。

使用方法

在某些实施例中，本发明的化合物是ER-α36的调节器，用于调节ER-α36在体外和体内细胞中的功能。本组化合物也用于预防和/或治疗与ER-α36的功能或功能障碍相关的疾病。在某些实施例中，本发明的化合物能够诱导细胞死亡和/或抑制细胞增殖，因此可用于预防和/或治疗有关细胞异常增殖的疾病。在某些实施例中，本发明的化合物用于预防和/或治疗骨质疏松、哮喘及其它呼吸道疾病。

在某些实施例中，本发明提供了调节ER-α36在细胞中的功能的方法，该方法包括将式(I)化合物作用于一个表达ER-α36的细胞。ER-α36可由细胞内源性表达或通过基因工程方法外源性的表达。在某一实施例中，细胞内源性的表达ER-α36。在一优选实施例中，内源性表达ER-α36的是癌细胞。表达ER-α36的癌细胞包括但不限于如乳腺癌细胞、白血病细胞、肺癌细胞、骨髓瘤细胞、前列腺癌细胞、卵巢癌细胞、结肠癌细胞和胃癌细胞。在一更优选的实施例中，表达ER-α36的细胞是内源性表达ER-α36的乳腺癌细胞。表达ER-α36的乳腺癌细胞包括如MCF7和MDA-MB-231细胞。内源性ER-α36的表达可通过一种或多种调节剂处理而增加或减少。这些调节剂包括如血清、E2(17-雌二醇)、他莫昔芬和ICI 182，780。

在另一个实施例中，通过基因工程方法改变一细胞使其表达外源性ER-α36。表达外源性ER-α36的细胞可通过本领域普通技术人员熟知的基因工程方法制备(参见Sambrook等人，Molecular Cloning，A Laboratory Manual(2d Ed.1989)(Cold Spring Harbor Laboratory))。简要来说，先准备一个外源性ER-α36基因，将其插入至一个表达载体中，再将表达载体转染至宿主细胞内，然后将宿主细胞放入适合表达外源性ER-α36的培养液中生长。以下文章披露了一人类ER-α36的基因序列：Wang等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.336，1023-1027(2005)(GenBank Accession No.BX640939)。表达外源性ER-α36的细胞也可能带有内源性ER-α36，也可能不带有内源性ER-α36。内源性或外源性ER-α36在细胞中的表达量可能在使用一种或多种调节剂处理后增加或减少。这些试剂包括如血清、E2β(17β-雌二醇)、他莫昔芬和ICI 182，780。

表达ER-α36的细胞可能表达也可能不表达其它雌激素受体，如ER-α66，ER-α46和ER-β。

在某些实施例中，本发明提供了在一主体中预防和/或治疗由ER-α36介导的疾病的方法，该方法包括用一种含有式(I)所示化合物的药物组合物对主体进行给药。由ER-α36介导的疾病包括但不限于老年痴呆症、神经退化、神经老化与损坏、节育、流产、骨质流失、骨折、骨质疏松、恶性骨质疾病、佩吉特病、牙周病、软骨退化、子宫内膜异位、子宫肌瘤、热潮红、LDL胆固醇的增高、心血管疾病、认知功能障碍、大脑退变性混乱、再狭窄、男子乳腺发育、血管平滑肌细胞增殖、肥胖、失禁、焦虑、雌激素不足导致的忧郁、绝经期忧郁、产后忧郁、经前综合症、躁郁症、痴呆、强迫症、注意力缺乏症、失眠、易躁、易冲动、免疫缺陷、自身免疫疾病、愤怒控制训练、多发性硬化和帕金森氏症、炎症、炎性肠病、呼吸道疾病、性功能障碍、高血压、视网膜变性、哮喘和癌症。优选的，由ER-α36介导的疾病包括骨质流失、骨折、骨质疏松、绝经、经前综合征、子宫内膜异位、子宫疾病、阳痿、性功能障碍、LDL胆固醇增高、心血管疾病、血管平滑肌细胞增殖、雌激素不足导致的忧郁、绝经期忧郁、产后忧郁、免疫缺陷、自身免疫疾病、炎症、哮喘和癌症。更优选的，由ER-α36介导的疾病包括骨质流失、骨质疏松、阳痿、心血管疾病、免疫缺陷、炎症、哮喘和癌症。主体可以是任一哺乳动物如狗、猫、牛、羊、马或人，优选为人。治疗方法所需的治疗量因具体疾病的不同而变化，本领域普通技术人员根据本发明内容可以很容易便确定相关治疗量。

在某些实施例中，本发明提供了诱导细胞死亡的方法，该方法包括将有效量的式(I)化合物作用于细胞。此外，本发明的某些实施例提供了抑制细胞增殖的方法，包括将有效量的式(I)化合物作用于细胞。细胞的生长可能正常或异常。异常细胞生长可能是良性或恶性的。在某一实施例中，被作用的细胞是癌细胞。在一优选实施例中，癌细胞来自于肛门癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、肠癌(结肠癌，直肠癌)，脑癌、乳腺癌、类癌、宫颈癌、内分泌相关癌症、子宫内膜癌、眼癌、胆囊癌、头颈癌、卡波西肉瘤癌、肾癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤癌、黑素瘤癌、间皮瘤癌、骨髓瘤癌、神经内分泌癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、阴茎癌、前列腺癌、皮肤癌、软组织肉瘤癌、脊髓癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、阴道癌、外阴癌或子宫癌。优选的，癌细胞来自于乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、白血病、肝癌、肺癌、骨髓瘤、卵巢癌、前列腺癌、胃癌或子宫癌。优选的，癌细胞来自于乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肺癌、子宫癌或前列腺癌。在某些实施例中，细胞可以内源性或外源性表达雌激素受体，特别是ER-α36。在一更优选实施例中，细胞能够内源性表达ER-α36。

用于诱导细胞死亡和/或抑制细胞增殖的式(I)化合物的有效量随着具体细胞类型及治疗情况的不同而变化。本领域普通技术人员根据本申请披露的内容可以很容易确定相关有效量。在某一实施例中，作用于细胞的式(I)化合物的有效浓度至少约为0.1μM。在另一实施例中，作用于细胞的式(I)化合物的浓度约在0.1μM至100μM之间。更优选的，化合物的有效浓度约在5μM至50μM之间或约在5μM至30μM之间或约在5μM至25μM之间或约在5μM至20μM之间或约在5μM至10μM之间。

在某些实施例中，本发明提供了预防和/或治疗一主体中细胞异常增殖相关的疾病方法，该方法包括以有效治疗剂量的含有式(I)所示化合物的药物组合物对被治疗主体给药。

细胞异常增殖可能是良性的细胞生长或癌肿性的。在一个实施例中，有关细胞异常增殖的疾病是癌症。优选的，该癌症是肛门癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、肠癌(结肠癌、直肠癌)、脑癌、乳腺癌、类癌、宫颈癌、内分泌反应癌、子宫内膜癌、眼癌、胆囊癌、头颈癌、卡波西肉瘤癌、肾癌、喉癌、白血病癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤癌、黑素瘤癌、间皮瘤癌、骨髓瘤癌、神经内分泌癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、阴茎癌、前列腺癌、皮肤癌、软组织肉瘤癌、脊髓癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、阴道癌、外阴癌或子宫癌。更优选的，该癌症是乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、白血病、肝癌、肺癌、骨髓瘤、卵巢癌、前列腺癌、胃癌或子宫癌。优选的，该癌症是乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肺癌、子宫癌、或前列腺癌。

在某些实施例中，本发明提供了在一主体中预防和/或治疗哮喘或其它呼吸道疾病的方法，包括以有效治疗剂量的含有式(I)所示化合物的药物组合物对被治疗主体给药。哮喘包括所有可逆式气道阻塞的气道炎性疾病。其它呼吸道疾病包括呼吸道及肺部疾病，例如支气管炎、囊肿性纤维化病、肺气肿、肺炎、鼻粘膜炎和鼻窦炎。

被治疗主体最好是哺乳动物。在某一实施例中，哺乳动物是狗、猫、牛、羊、马或人。哺乳动物优选为人。

式(I)所示化合物可通过任何能将化合物传递至作用部位的方法对被治疗主体给药。这些方法包括但不限于通过口腔、粘膜、舌下、眼睛、局部(例如皮肤)、肠道外(例如静脉、肌肉、皮下、血管或隔合)、直肠、脑池内、阴道、腹膜、膀胱或鼻腔等部位给药。

式(I)的化合物对一主体给药的剂量每天在约0.1mg至约3,000mg之间，优选为每天在约0.1mg至约1,000mg之间，或每天在约1mg至约500mg之间，或每天在约1mg至约300mg之间，或每天在约10mg至约300mg之间，或每天在约10mg至约200mg之间，或每天在约20mg至约200mg之间，或每天在约30mg至约200mg之间，或每天约在40mg至约200mg之间，或每天约在50mg至约200mg之间，或每天在约50mg至约100mg之间。对一个体重约为70kg的普通成年人来说，给予的剂量通常每公斤(Kg)体重在约0.01mg至约100mg之间就已足够，更优选为每公斤体重在约0.1mg至约100mg之间，或每公斤体重在约0.5mg至约100mg之间，或每公斤体重在约1mg至约100mg之间，或每公斤体重在约1mg至约75mg之间，或每公斤体重在约1mg至约50mg之间，或每公斤体重在约1mg至约25mg之间，或每公斤体重在约1mg至约10mg之间，或每公斤体重在约2mg至约5mg之间。但是，根据被治疗主体的年龄与体重的不同，给药途径的不同，以及所给化合物的特殊性及其它类似情况，用药的剂量会在一般的剂量范围内有所变化。本领域普通技术人员在本申请基础上可以确定对某一哺乳类主体用药的剂量范围与最佳剂量。

在某些实施例中，本发明的一个或多个化合物可以相互组合使用。也可选择将本发明的化合物与任何其它的活性试剂结合使用，用于调节细胞功能或治疗疾病。如果使用的是一组化合物，则可将这些化合物同时、分别或有序地对主体进行给药。

在某些实施例中，本发明的化合物可与一个或多个其它的抗癌试剂结合使用。可用的抗癌试剂包括但不限于烷基化剂、氮芥类药物、叶酸拮抗剂、嘌呤拮抗剂、嘧啶拮抗剂、纺锤体毒素、拓朴异构酶抑制剂、凋亡诱导试剂、血管再生抑制剂、鬼臼毒素、亚硝基脲、抗代谢物、蛋白合成抑制剂、激酶抑制剂、抗雌激素药、顺氯氨铂、卡波铂、干扰素、精氨酸酶、亮丙瑞林、氟他胺、甲地孕酮、丝裂霉素、博莱霉素、亚德里亚霉素、依立替康和紫杉醇。在某一实施例中，抗癌试剂是抗雌激素药，例如他莫昔芬和ICI 182，780。

使用表达外源性ER-α36的重组细胞可测试本发明的化合物诱导细胞死亡或抑制细胞增殖的能力。为制备重组细胞，先制备一外源性ER-α36基因，将其插入一表达载体中，再用表达载体转染不表达或表达很少内源性ER-α36的宿主细胞，而后选择被稳定转染的宿主细胞作为测试分析的重组细胞。将部分重组细胞与本发明化合物一起培养，另一部分不与本发明化合物培养。比较在使用本发明的化合物进行治疗和不使用本发明的化合物进行治疗后存活下来的细胞数量。当被测化合物治疗后存活的细胞数量(在统计学意义上)低于未使用被测化合物后存活的细胞数量时，表明被测化合物可以诱导细胞死亡和/或抑制细胞增殖。

上述重组细胞也可用于测试本发明的化合物调节ER-α36功能的能力。在同等条件下，用被测化合物对表达外源性ER-α36的重组细胞和未被转染的宿主细胞进行治疗。使用本领域普通技术人员熟知的方法可观察并分析ER-α36的功能，这些功能包括但不限于ER-α36激活其下游信号转导通路的能力，例如激活有丝分裂原活化蛋白激酶(the MAPK/ERK)通路或Jun氨基末端激酶(JNKs)通路的能力。

药物组合物

在某些实施例中，式(I)所示的化合物、其立体异构体或其前药，或该化合物、立体异构体或前药的一种可药用的盐，可以以药物组合物的形式给药，其中包含可药用的载体、运载物或稀释剂。相应地，式(I)所示化合物、其立体异构体或其前药，或该化合物、立体异构体或前药的一种可药用的盐，可以任何常规制剂形式分别或共同对主体给药，常规的给药方式包括通过口腔、粘膜、舌下、眼睛、皮上、肠道外、直肠、脑池内、阴道、腹膜、膀胱，局部(如药粉、药膏、滴剂)或鼻部给药。

适于非胃肠给药用于注射的药物组合物包括可药用的无菌水或非水溶液、分散液、悬浮液或乳剂，以及可速溶于无菌注射溶液或分散液的无菌药粉。适合的水或非水载体、运载物和稀释剂包括如水、乙醇、多元醇(如丙二醇、聚乙二醇、丙三醇以及类似物)及其合适的混合物，植物油(如橄榄油)以及可注射用的有机酯类，如油酸乙酯。通过某些方法可以维持药物的适当的流动性，例如，通过使用如卵磷脂等覆盖层，通过维持分散液中所需的颗粒大小，以及通过使用表面活性剂的方法。

在某些实施例中，本发明的药物组合物可以进一步包括辅料，例如保鲜剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可利用不同的抗菌剂和抗真菌剂来预防该组合物产生微生物，例如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸以及类似物。本发明的药物组合物也可以包括等渗剂，例如糖、氯化钠以及类似物。如果需要延长药物组合物的吸收时间，则可以使用能够延迟吸收的辅剂，例如单硬脂酸铝和凝胶等。

固体口服制剂包括胶囊、药片、药粉和药粒。在某些实施例中，活性化合物至少与一种常规的惰性药物赋形剂(或载体)相掺合，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，或者(a)填充剂或添加剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇或硅酸；(b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、凝胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖或阿拉伯树胶；(c)保湿剂，例如丙三醇；(d)崩解制剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些复合硅酸盐或碳酸钠；(e)溶液缓凝剂，例如石蜡；(f)加速吸收剂，例如季铵化合物；(g)润湿剂，例如十六烷醇或单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如高岭土或斑脱土；和/或(i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、桂硫酸酯钠或其混合物。就胶囊和药片而言，制剂可能进一步含有缓冲剂。

在某些实施例中，固体制剂可被制备成含有赋形剂的调节释药制剂和脉冲释药制剂，这些赋形剂包括如以上直接释药制剂可用的赋形剂以及其它作为释放速率调节物的赋形剂，这些均被涂在药物上或放入药物内。释放速率调节物包括但不限于，羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、醋酸纤维素、聚环氧乙烷、黄原胶、甲基丙烯酸铵共聚物、氢化蓖麻油、巴西蜡棕蜡、固体石蜡、邻苯二甲酸乙酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基丙烯酸共聚物及其混合物。调节释药制剂和脉冲释药制剂可以包含一种或多种释放速率调节赋形剂。

在某些实施例中，本发明的药物组合物可进一步包括含有下列成份的快速分散或溶解制剂(FDDFs)：阿斯巴甜、乙酰舒泛、柠檬酸、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、二抗坏血酸(diascorbic acid)、丙烯酸乙酯、乙基纤维素、凝胶、羟丙基甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露醇、甲基丙烯酸甲酯、薄荷香料、聚乙二醇、烟雾硅胶、二氧化硅、羟基乙酸淀粉钠、硬脂富马酸钠、山梨醇、木糖醇。在此用于描述FDDFs的词语“分散”或“溶解”是基于所使用药品的溶解度而言的，即当药品不可溶解时，可以制备的是快速分散制剂，而当药品可溶解时，制备的是快速溶解制剂。

在使用如乳糖或奶糖等赋形剂和高分子量聚乙二醇以及类似物的柔软或坚硬的胶囊中，相似类型的固体组合物也可作为填充物。

在某些实施例中，药片、糖衣丸、胶囊和药粒等固体制剂可带有包衣和外壳，此类包衣和外壳可包括肠溶衣以及其它本领域普通技术人员熟知的物质。固体制剂也可包括乳浊剂或者能够以缓释的、持续的、有控制的方式释放活性化合物。可用于嵌入的物质包括如多聚体和蜡等。如果需要，活性化合物也可与一种或多种前述的赋形剂一起被制备成微囊。

在某些实施例中，液体口服制剂包括可药用的乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物，液体制剂还可包括本领域常用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂、促溶剂和/或乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油特别是棉花子油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油或芝麻油、丙三醇、四氢糠醇、聚乙二醇或山梨聚糖的脂肪酸酯，这些物质的混合物，以及其它类似的物质。

除了这些惰性稀释剂以外，药物组合物也可以包括辅料，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、增味剂和芳香剂。药物组合物可进一步包括悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨坦酯、微晶纤维素、氢氧化金属铝(aluminum metahydroxide)、斑脱土、琼脂和黄芪胶，这些物质的混合物，以及其它类似物质。

在某些实施例中，本发明的药物组合物也可用于治疗动物疾病。兽医可根据从业经验将本发明的一种化合物或其可兽用的盐，或可兽用的溶剂或其前药以合适的可接受的制剂形式给药。兽医可决定对某一动物最适合的剂量和给药途径。

如果将多种活性化合物组合起来给药，则这些活性化合物可以被同时、分别或以一定顺序给药。

式(I)的化合物可通过不同的合成方法来制备。典型的制备过程如下所列。除非有其它表示，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰、X和Y的定义如前所述。P表示一个保护基团。在以下所述的反应步骤中，可根据已知的方法对NH或羟基进行保护，再脱去保护基团，该已知方法如T.W.Greene等人在Protective Groups in Organic Synthesis(John Wiley & Sons，1991)中所描述的方法。一般可将单独的羟基团转变成醚、缩醛和酯进行保护。通常来说，苯基类保护基团可通过氢解去除。甲硅烷基醚可以通过与氟离子反应或在微酸性条件下脱去。几种2-取代乙醚可通过β-消去反应去除。应了解，本发明并不限于以下提供的几个具体实例。在下述讨论中，使用了化学上和程序上某些常见的缩写或简写，包括：Me(甲基)；Et(乙基)；EtOAc(乙酸乙酯)；Bn(苯甲基)；THF(四氢呋喃)；DMF(二甲基甲酰胺)；Boc(叔丁氧羰基)；DMAP(1，1’-二甲氨基吡啶)；DIBAL(二异丁基氢化铝)；eq(等量的)；RP(反相)；HPLC(高效液相色谱法)；TLC(薄层分析法)、MOM(甲氧基甲基)；式(I)化合物最方便的合成方法可能是该领域已知的生产类似化合物的相似方法。作为本发明的进一步特征，以上描述的式(I)化合物的生产方法，将通过下列实施例进一步加以阐述，该类生产方法也是本发明的一部分。以下所列的实施方案1、2、3和4以及相关描述仅作为本发明化合物的制备方法的某些实例，并非限制本发明的范围。

实施方案1

根据以上实施方案1，式(I)的化合物可通过几个步骤制备。将式1化合物与式2化合物在惰性溶剂中反应，缩合制备式3化合物。适用于该反应的溶剂包括醚，如DME(1，2-二甲氧基乙烷)和1，2-二乙氧基乙烷；THF、DMF；N，N-甲基乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮。反应溶剂优选为1，2-二甲氧基乙烷和1，2-二乙氧基乙烷。反应时可加入如三乙胺和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺等化学计量或催化量的添加剂。反应进行时的温度通常在约0℃至约140℃之间，反应最好在溶剂回流温度时保持约1至20个小时。

可通过在惰性反应溶剂中用醚来保护化合物3的7-羟基来制备式4化合物。适用于该反应的溶剂包括醚如DME(1，2-二甲氧基乙烷)和1，2-二乙氧基乙烷；THF、DMF；N，N-二甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮。在反应中使用的溶剂优选为DMF。反应时可加入如三乙胺和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺等化学计量或催化量的添加剂。反应温度通常在约0℃至约80℃之间，反应时间约为1至20个小时。

可将式4化合物与溴化物放入惰性溶剂中反应制备式5化合物。适用于该反应的溶剂包括醚如DME(1，2-二甲氧基乙烷)和1，2-二乙氧基乙烷；THF；DMF；N，N-二甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮；二氯甲烷；三氯甲烷。反应溶剂优选为二氯甲烷。反应时可加入如三乙胺、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺和四丁基氢氧化铵等化学计量或催化量的添加剂。在反应中使用的碱优选为四丁基氢氧化铵。反应温度通常在约0℃至约80℃之间，反应时间约为1至20个小时。

可通过在惰性溶剂中加热式5化合物制备式6化合物。适用于该反应的溶剂包括醚如DMF；N，N-二甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮；N，N-二乙基苯胺；N，N-二甲基苯胺。在反应中使用的溶剂优选为N，N-二乙基苯胺。反应温度通常在约50℃至约300℃之间，反应时间约为1至20个小时。反应温度优选为在约200℃至约300℃之间，反应时间约为1至20个小时。

可通过在惰性溶剂中脱去式6化合物的保护基制备式7化合物。适用于该反应的溶剂包括醚如DME(1，2-二甲氧基乙烷)和1，2-二乙氧基乙烷；二氧己环；醇类如甲醇、乙醇和异丙醇；THF；DMF；N，N-二甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮；二氯甲烷；三氯甲烷。反应溶剂优选为异丙醇。反应温度通常在约0℃至约150℃之间，反应时间约为10分钟至20个小时。反应温度优选在约10℃至约80℃之间，反应时间约为30分钟至4个小时。

可将式7化合物在酸性条件下在惰性溶剂中反应制备式8化合物。适用于该反应的溶剂包括醚，如DME和1，2-二乙氧基乙烷；二氧己环；醇类如甲醇、乙醇和异丙醇；丙酮；THF；DMF；N，N-二甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮；或者上述溶剂与水的混合物。在反应中使用的溶剂优选为丙酮-水(1∶1v/v)。反应温度通常在约0℃至约150℃之间，反应时间约为10分钟至20个小时。反应温度优选在约50℃至约100℃之间，反应时间约为2分钟至8个小时。

可将式8化合物与2-氯乙腈反应制备式9化合物。该反应可不使用溶剂，也可使用溶剂，适用的溶剂包括醚如DME和1，2-二乙氧基乙烷；二氧己环；THF；DMF；N，N-甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮。反应温度通常在约-50℃至约50℃之间，反应时间约为1至20个小时。反应温度优选在约-20℃至约50℃之间，反应时间约为2至8个小时。

可将式9化合物与硫脲在酸性条件下在惰性溶剂中反应制备式10化合物。适用于该反应的溶剂包括醚如DME和1，2-二乙氧基乙烷；二氧己环；醇类如甲醇、乙醇和异丙醇；丙酮；THF；DMF；N，N-甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮；反应温度通常在约0℃至约200℃之间，反应时间约为1至100个小时。反应温度优选在约60℃至约150℃之间，反应时间约为30至50个小时。

实施方案2

实施方案2中R⁵，R⁶，R¹⁴，R¹⁵和

的定义如前所述，可通过式11和式12化合物制备式13化合物。通常可将式11化合物与式12化合物混合放入如柠檬酸溶液等酸性水溶液中反应，加热使温度达到约环境温度至约100℃之间，优选在溶剂回流温度下保持约1至约10个小时，优选在4至6个小时。

可通过式13和式14化合物制备式15化合物。可将式13化合物与式14化合物在如含有对甲苯磺酸等酸性条件下在惰性溶剂中反应制备式15化合物。适用于该反应的溶剂包括醚，如甲苯、DME、1，2-二乙氧基乙烷；二氧己环；THF；DMF；N，N-甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮，优选为甲苯；反应温度通常在约60℃至约200℃之间，反应时间约为1至100个小时。反应温度优选在约90℃至约120℃之间，反应时间约为10至30个小时。

可通过在惰性溶剂中加热式15化合物制备式16化合物。适用于该反应的溶剂包括醚，如二苯醚、甲苯、DME、1，2-二乙氧基乙烷；二氧己环；THF；DMF；N，N-甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮；优选为二苯醚。反应温度通常在约60℃至约200℃之间，反应时间约为1至20个小时。反应温度优选在约90℃至约150℃之间，反应时间约为5至15个小时。

可使用制备方案1中所描述的制备式8、9和10化合物的类似方法来制备式17和18化合物。

实施方案3

实施方案3中P和

的定义如前所述，可通过式19和式20化合物制备式21化合物。通常可将式19化合物与式20化合物的混合放在微波反应器中加热到约150℃至200℃之间，反应时间为1至30分钟。

可通过在惰性反应溶剂中用醚来保护化合物21的7-羟基制备式22的化合物。适用于该反应的溶剂包括醚，如DME和1，2-二乙氧基乙烷；THF、DMF；N，N-二甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮。在反应中使用的溶剂优选为DMF。反应时可加入如三乙胺和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺等化学计量或催化量的添加剂。反应温度通常在约0℃至约80℃之间，反应时间约为1至20个小时。

可将式22化合物与溴化物放入惰性溶剂中反应制备式23化合物。适用于该反应的溶剂包括醚，如DME和、1，2-二乙氧基乙烷；THF；DMF；N，N-二甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮；二氯甲烷；三氯甲烷和甲苯或上述溶剂的混合物。反应溶剂优选为二氯甲烷。反应时可加入如三乙胺、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺和四丁基氢氧化铵等化学计量或催化量的添加剂。在反应中使用的碱优选为四丁基氢氧化铵。反应温度通常在约0℃至约80℃之间，反应时间约为1至20个小时。

可通过在反应惰性溶剂中加热式23化合物制备式24化合物。适用于该反应的溶剂包括醚，如DMF；N，N-二甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮；N，N-二乙基苯胺；N，N-甲基苯胺。在反应中使用的溶剂优选为N，N-二乙基苯胺。反应温度通常在约50℃至约300℃之间，反应时间约为1至20个小时。反应温度优选在约200℃至约300℃之间，反应时间约为1至20个小时。

可通过在反应惰性溶剂中脱去式24化合物的保护基制备式25化合物。适用于该反应的溶剂包括醚如DME和1，2-二乙氧基乙烷；二氧己环；醇类如甲醇、乙醇和异丙醇；THF；DMF；N，N-二甲乙酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮；二氯甲烷；三氯甲烷。反应温度通常在约0℃至约150℃之间，反应时间约为10分钟至20个小时。反应温度优选在约10℃至约80℃之间，反应时间约为30分钟至4个小时。

可使用制备方案1中所描述的制备式8、9和10化合物的类似方法来制备式26和27化合物。

实施方案4

实施方案4中R¹⁴，R¹⁵和

的定义如前所述，可通过式28制备式29化合物。通常可将式28化合物在反应惰性溶剂中与异戊烯基溴混合加热到约10℃至100℃之间，反应时间为2至3个小时。适用于该反应的溶剂包括醚，如DME和1，2-二乙氧基乙烷；二氧己环。反应温度优选在约10℃至约80℃之间，反应时间约为5至20个小时。

可通过式29和式30化合物制备式31化合物。通常可将式29化合物与式30化合物混合放入微波反应器中加热到约150℃至300℃之间，反应时间为1至60分钟。

可使用实施方案1中描述的制备式8、9和10化合物的类似方法来制备式32和33的化合物。

实施例和制备方法

通过以下非限制性的实施例对本发明进行阐述，除非另有所述，否则：室内温度或环境温度是指18-25℃范围内；溶剂是在减压条件下使用旋转式汽化器来进行蒸发的；反应过程是通过薄层分析法(TLC)进行监测的。反应时间仅用于阐述说明；所示熔点(m.p.)并未经过校正(多态性可能产生不同的熔点)；通过至少以下一种技术确认分离得到的化合物的结构和纯度：TLC、质谱、核磁共振(NMR)、高效液相色谱(HPLC)。所述产率仅用于阐述说明。

制备5，7-二羟基-3-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物1)。

将3，4-二甲氧基苯甲酸酐(26.0g，75mmol)，1-(2，4，6-三羟基苯基)-2-甲氧基乙酮(5.0g，25mmol)，NEt₃(10mL)，4AMS(10.0g)和DME(40mL)混合回流10个小时。待其冷却至室温后，加入150mL含有9.2g氢氧化钾的甲醇，再将得到的混合物回流2个小时，在反应混合液中加入水，用盐酸(6N)将得到的混合物中和至pH值约为8。用100mL EtOAc萃取反应混合液3次。收集有机溶剂萃取物并用硫酸钠干燥。去除溶剂后，用硅胶色谱法对残余物进行纯化得到目标化合物(6.5g，0.19mol，产率74％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝12.64(s，1H)，10.86(s，1H)，7.69(m，2H)，7.62(d，1H，J＝1.6Hz)，7.15(d，1H，J＝12.8Hz)，6.49(d，1H，J＝2.0Hz)，6.22(d，1H，J＝2.0Hz)，3.86(s，6H)，3.81(s，3H)。

制备5-羟基-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物2)

在含有5，7-二羟基-3-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(17.0g，50mmol)及干燥DMF(140mL)的溶液中搅拌加入N，N-二异丙基乙胺(7.6g，59mmol)，再将氯甲基甲醚(4.8g，60mmol)加入至混合物中。将反应混合液在室内温度的条件下搅拌4个小时。用水稀释反应混合液，将pH值调整至1左右(1N盐酸)。用EtOAc萃取反应混合液。收集EtOAc萃取物，用水冲洗，在减压条件下使其浓缩。在去除溶剂后得到半成品，再通过硅胶色谱法对残余物进行纯化得到目标化合物(7.0g，36％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝12.60(brs，1H)，7.75(dd，1H，J₁＝2.0Hz，J₂＝8.4Hz)，7.70(d，1H，J＝2.0Hz)，7.00(d，1H，J＝8.8Hz)，6.63(d，1H，J＝2.4Hz)，6.47(d，1H，J＝2.0Hz)，5.25(s，2H)，3.98(s，3H)，3.97(s，3H)，3.87(s，3H)，3.51(s，3H)；LCMS(ESI)m/z 389[M+H]⁺。

制备5-(3-甲基丁-2-烯基氧基)-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物3)。在含有5-羟基-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(5.0g，13mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中搅拌加入四丁基氢氧化铵(100g，33mmol，水中浓度10％)，再将异戊烯基溴(8.0g，53mmol)加入至上述混合物中，将反应混合液在室温条件下搅拌3个小时。用水稀释反应混合液。用EtOAc萃取反应混合液，收集EtOAc萃取物，用水冲洗，在减压条件下使其浓缩。在去除溶剂后得到半成品，再通过硅胶色谱法对残余物进行纯化得到目标化合物(5.5g，93％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝7.71(m，2H)，6.97(d，1H，J＝9.2Hz)，6.71(d，1H，J＝2.0Hz)，6.44(d，1H，J＝2.4Hz)，5.60(t，1H，J＝6.4Hz)，5.26(s，1H)，4.70(d，1H，J＝6.0Hz)，3.97(s，3H)，3.96(s，3H)，3.87(s，3H)，3.52(s，3H)，1.77(d，6H，J＝10.8Hz)；LCMS(ESI)m/z 457[M+H]⁺。

制备5-羟基-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(3，4-二甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物4)。

将5-(3-甲基丁-2-烯基氧基)-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(2.3g，5.0mmol)和N，N-二乙苯胺(100mL)在217℃条件下混合加热，搅拌3个小时。待其冷却至室温后，用水稀释反应混合液并将其酸化(pH 1，1N盐酸)。用EtOAc萃取，收集有机萃取物并用水冲洗。在减压条件下将溶剂蒸发，再通过硅胶色谱法对残余物进行纯化得到目标化合物(1.75g，76％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ＝12.61(s，1H)，7.71(dd，1H，J₁＝2.0Hz，J₂＝8.6Hz)，7.66(d，1H，J＝2.0Hz)，7.19(d，1H，J＝8.6Hz)，6.58(s，1H)，5.36(s，2H)，5.22(t，1H，J＝7.0Hz)，3.87(s，3H)，3.84(s，3H)，3.83(s，3H)，3.49(d，2H，J＝6.8Hz)，3.40(s，3H)，1.77(d，6H，J＝5.6Hz)；LCMS(ESI)m/z 457[M+H]⁺。

制备5，7-二羟基-3-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物5)。

将5-羟基-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(3，4-二甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(0.91g，2.0mmol)、4N盐酸(10mL)和异丙醇(30mL)在65℃条件下混合加热，持续1个小时。待其冷却至室温后，用EtOAc萃取反应混合液。用水冲洗EtOAc萃取物，用硫化钠进行干燥，并在减压条件下将溶剂蒸发。再通过硅胶色谱法对得到的残余物进行纯化得到目标化合物(0.72g，87％)。¹H NMR(400MHz，丙酮-d₆)δ＝12.69(s，1H)，9.59(s，1H)，7.78(dd，1H，J₁＝2.0Hz，J₂＝8.5Hz)，7.74(d，1H，J＝2.0Hz)，7.13(d，1H，J＝8.5Hz)，6.33(s，1H)，5.30(t，1H，J＝6.8Hz)，3.91(s，3H)，3.90(s，6H)，3.52(d，1H，J＝6.8Hz)，1.60(d，6H，J＝48Hz)；LCMS(ESI)m/z 413[M+H]⁺。

制备5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-3-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物6)。

将5，7-二羟基-3-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(91mg，0.2mmol)、5％的硫酸(5mL)和丙酮(20mL)在65℃条件下混合加热，持续5个小时。待其冷却至室温后，用EtOAc萃取反应混合液。收集EtOAc萃取物并用水冲洗，用硫化钠进行干燥，并在减压条件下将溶剂蒸发。再通过硅胶色谱法对得到的残余物进行纯化得到目标化合物(10mg，12％).¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ＝12.57(s，1H)，10.71(s，1H)，7.74(d，1H，J＝8.4Hz)，7.67(s，1H)，7.11(d，1H，J＝8.4Hz)，6.29(s，1H)，4.27(brs，1H)，3.84(s，6H)，3.80(s，3H)，2.76(m，2H)，1.54(m，2H)，1.15(s，6H)；LCMS(ESI)m/z 431[M+H]⁺。

制备2-氯-N-(4-(3，5，7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-4-氧基-4H-苯并吡喃-8-基)-2-甲基丁-2-基)乙酰胺(化合物7)。在含有3，5，7-三羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-2-(4-甲氧苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(0.94g，2.4mmol)的2-氯乙腈(49mL，780mmol)溶液中逐滴加入冰醋酸(1.7mL，29mmol)。将该合成溶液冷却至-15℃，再逐滴加入浓缩的硫磺酸(1.7mL，31mmol)。在20℃条件下将反应混合液搅拌4个小时。再将该反应混合液倒入冰中，用饱和碳酸氢钠水溶液碱化得到混合物，再用EtOAc进行萃取。用硫酸钠干燥有机质层，在减压条件下浓缩成半成品，通过硅柱色谱法(c-己烷/EtOAc，3∶1)将其纯化，得到目标化合物(650mg，58％)，一种黄色固体。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.35(6H，s)，1.86-1.89(2H，m)，2.68-2.71(2H，m)，3.85(3H，s)，4.02(2H，s)，6.29(1H，s)，7.12-7.15(2H，m)，7.73(1H，s)，8.17-8.19(2H，m)，9.47(1H，s)，10.68(1H，s)，12.38(1H，s)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)δ17.12，26.22(2)，42.57，43.44，53.22，55.36，97.79，102.99，106.22，114.08(2C)，123.56，129.31(2)，135.85，146.13，153.43，158.24，160.46，161.36，165.02，176.27；ESIMS 462[M+H]⁺。

制备8-(3-氨基-3-甲基丁基)-3，5，7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物8)。

将2-氯-N-(4-(3，5，7-三羟基-2-(4-甲氧苯基)-4-羰基-4H-苯并吡喃-8-基)-2-甲基丁-2-基)乙酰胺(650mg，1.41mmol)、硫脲(130mg，1.69mmol)、冰醋酸(1.4mL)和EtOH(100mL)混合溶液加热回流50个小时。再将反应化合物冷却至室温并将其过滤。将滤液进行浓缩，用饱和碳酸氢钠水溶液进行碱化，再用EtOAc进行萃取。用浓盐水洗涤收集的有机溶液，用硫酸钠干燥有机质层，将其浓缩为半成品，通过硅胶色谱法(二氯甲烷/乙醇，4∶1)进行纯化得到目标化合物(210mg，37％)，一种黄色固体。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.37(6H，s)，1.73-1.77(2H，m)，2.75-2.78(2H，m)，3.85(3H，s)，6.39(1H，s)，7.12-7.13(2H，m)，8.14-8.16(2H，m)，9.51(1H，s)，10.97(1H，s)，12.38(1H，s)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)δ16.76，24.43(2)，53.50，55.41，55.99，97.97，102.92，105.08，114.05(2)，123.56，129.27(2)，135.99，146.08，153.43，158.48，160.46，161.77，176.26；ESIMS 386[M+H]⁺。

制备8-(3-氨基-3-甲基丁基)-3，5，7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮的盐酸盐(化合物9)。

在含有8-(3-氨基-3-甲基丁基)-3，5，7-三羟基-2-(4-甲氧苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(210mg，0.55mmol)的无水乙醇(20mL)悬浮液中逐滴加入含有浓缩盐酸(0.8mL，9.6mmol)的无水乙醇(5mL)溶液。将反应混合液搅拌30分钟，在减压条件下浓缩得到目标化合物，一种黄色固体。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.37(6H，s)，1.72-1.75(2H，m)，2.76-2.79(2H，m)，3.86(3H，s)，6.35(1H，s)，7.12-7.13(2H，m)，7.90(3H，brs)，8.14-8.16(2H，m)，9.54(1H，s)，10.89(1H，s)，12.38(1H，s)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)δ16.71，24.41(2)，53.61，55.42，97.81，103.06，105.01，114.06(2)，123.51，129.27(2)，135.95，146.16，153.44，158.54，160.51，161.37，176.26；ESIMS 386[M-盐酸+H]⁺。

制备2-(4-氯苯基)-5，7-二羟基-3-甲氧基-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物10)

将4-氯苯酸酐(31.3g，106mmol)、1-(2，4，6-三羟基苯基)-2-甲氧基乙酮(7.0g，35mmol)，NEt₃(10mL)、4AMS(10.0g)和DME(70mL)的混合物回流10个小时。冷却至室温后，将含有氢氧化钾(9.2g)的甲醇(150mL)加入至该混合物中，使该混合物回流2个小时。冷却至室温后，再加入水，用盐酸(6N)将混合物中和至pH值为8。再用100mLEtOAc萃取混合物3次，使其干燥并蒸发。通过硅胶色谱法纯化半成品得到目标化合物(4.3g，38％).LCMS(ESI)m/z319.7(M+H)⁺。

制备2-(4-氯苯基)-5-羟基-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物11)

在含有2-(4-氯苯基)-5，7-二羟基-3-甲氧基-4H-苯并吡喃-4-酮(4.3g，13.3mmol，)的干燥DMF(40mL)的溶液中搅拌加入N，N-二异丙基乙胺(2.1g，16mmol)，再加入氯甲基甲醚(1.3g，15.8mmol)。将反应混合液在室内温度下搅拌4个小时。用水稀释反应混合液，使pH值调为1(1N盐酸)，并用EtOAc进行萃取。用水冲洗萃取物，在减压条件下将其浓缩。通过硅胶色谱法纯化半成品得到目标化合物(3.80g，79％)。LCMS(ESI)m/z 363.8[M+H]⁺。

制备5-(3-甲基丁-2-烯基氧基)-2-(4-氯苯基)-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物12)

在含有2-(4-氯苯基)-5-羟基-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(3.80g，10.5mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中搅拌加入四丁基氢氧化铵(80.0g，26.0mmol，水中浓度10％)，再加入异戊烯基溴(6.3g，42mmol)。将反应混合液在室温下搅拌3个小时。用水稀释混合物，并用EtOAc进行萃取。收集萃取物并干燥。通过硅胶色谱法纯化半成品得到目标化合物(3.83g，85％)。LCMS(ESI)m/z 431.4[M+H]⁺。

制备2-(4-氯苯基)-5-羟基-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物13)

将5-(3-甲基丁-2-烯基氧基)-2-(4-氯苯基)-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(1.60g，3.7mmol)和N，N-二乙苯胺(70mL)缓慢加热至217℃，搅拌3个小时。冷却至室内温度后，将反应混合液用水稀释并酸化(pH 1，1N盐酸)，再用EtOAc进行萃取。收集EtOAc萃取物，用水冲洗，并在减压条件下蒸发，通过硅胶色谱法将残余物纯化得到目标化合物目标化合物(0.80g，50％)。¹H NMR(400MHz，丙酮-d₆)δ＝12.61(s，1H)，8.15(d，2H，J＝8.8Hz)，7.65(d，2H，J＝8.8Hz)，6.61(s，1H)，5.40(s，2H)，5.22(t，1H，J＝6.8Hz)，3.93(s，3H)，3.55(d，2H，J＝6.8Hz)，3.49(s，3H)，1.79(s，3H)，1.66(s，3H)；LCMS(ESI)m/z 431.8[M+H]⁺。

制备2-(4-氯苯基)-5，7-二羟基-3-甲氧基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物14)

将2-(4-氯苯基)-5-羟基-3-甲氧基-7-(甲氧基甲氧基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(0.80g，1.85mmol)、4N盐酸(5mL)和异丙醇(30mL)在50℃条件下混合加热2个小时。冷却至室温后，用EtOAc萃取反应混合液。用水冲洗EtOAc萃取物，用硫酸钠进行干燥，并在减压条件下蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物得到目标化合物目标化合物(0.58g，81％)。¹H NMR(400MHz，丙酮-d₆)δ＝12.59(s，1H)，9.69(s，1H)，8.15(d，2H，J＝8.8Hz)，7.65(d，2H，J＝8.8Hz)，6.38(s，1H)，5.25(t，1H，J＝6.8Hz)，3.93(s，3H)，3.52(d，2H，J＝6.8Hz)，1.77(s，3H)，1.66(s，3H)；LCMS(ESI)m/z 384.9[M-H]^-。

制备3-氨基-2-(3-甲基丁-2-烯基)苯酚(化合物15)

将间氨基苯酚(5.45g，50mmol)、2-甲基丁-3-烯-2-醇(4.30g，50mmol)和柠檬酸水溶液(5％，50mL)在100℃条件下混合加热6个小时，冷却至室温后，用饱和碳酸氢钠溶液冲洗混合物，用硫酸钠进行干燥，在真空中将其浓缩。再通过硅胶色谱法纯化半成品，并用石油醚和乙酸乙酯(v∶v＝3∶1)使其结晶，得到产率为10％的目标化合物(0.87g)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ＝6.89(t，1H，J＝8.0Hz)，6.31(d，1H，J＝8.0Hz)，6.25(d，1H，J＝8.0Hz)，5.16(t，1H，J＝6.8Hz)，4.81(brs，1H)，3.68(brs，2H)，3.31(d，1H，J＝6.8Hz)，1.78(d，6H，J＝32Hz)；LCMS(ESI)m/z178.1(M+H)⁺。

制备(Z)-乙基3-(3-羟基-2-(3-甲基丁-2-烯基)苯胺基)-3-(4-甲氧基苯基)丙烯酸酯(化合物16)

将3-氨基-2-(3-甲基丁-2-烯基)苯酚(0.87g，5.0mmol)、乙基3-(4-甲氧苯基)-3-羰基丙酸酯(0.67g，3.0mmol)和对甲苯磺酸(0.05g，0.3mmol)在甲苯(10mL)中混合加热回流24小时。在冷却至室温后，将二氯甲烷(30mL)加入至反应混合液中。用10mL水冲洗有机质层3次，用硫酸钠进行干燥，使其浓缩。通过硅胶色谱法纯化半成品，使用石油醚和乙酸乙酯(v∶v＝20∶1)得到产率为40％的目标化合物(0.42g)；LCMS(ESI)m/z 382.2(M+H)⁺。

制备7-羟基-2-(4-甲氧苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯)喹啉-4(1H)-酮(化合物17)

将乙基3-(3-羟基-2-(3-甲基丁-2-烯基)苯胺基)-3-苯基丙烯酸酯(0.42g，1.20mmol)溶解于二苯醚中(20mL)中，加热回流5个小时。去除溶剂后，通过硅胶色谱法纯化半成品得到目标化合物(0.20g，54％)。¹H-NMR(CDCl₃)：δ＝8.04(d，1H，J＝8.8Hz)，7.55(d，2H，J＝8.4Hz)，7.04(d，2H，J＝8.4Hz)，6.96(d，1H，J＝8.8Hz)，6.49(s，1H)，5.30(t，1H，J＝6.4Hz)，3.90(s，3H)，3.71(d，2H，J＝6.4Hz)，3.70(brs，1H)，1.82(d，6H，J＝34Hz)；LCMS(ESI)m/z 336.2(M+H)⁺。

制备2-(4-氯苯基)-5，7-二羟基-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物18)

将甲基3-(4-氯苯基)-3-羰基丙酸酯(10.6g，50mmol)和1，3，5-三羟基苯(8.1g，50mmol)在微波反应器(170℃，运行1分钟，停留3分钟)中混合反应3次。将该中间物用EtOAc稀释，过滤得到目标化合物(3.5g，24.2％)。LCMS(ESI)：m/z 289[M+H]⁺。

制备2-(4-氯苯基)-5-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物19)。

在含有2-(4-氯苯基)-5，7-二羟基-4H-苯并吡喃-4-酮(8.8g，30.6mmol)的干燥DMF(80mL)的溶液中搅拌加入N，N-二异丙基乙胺(4.7g，36.7mmol)，再向混合物中加入氯甲基甲醚(2.95g，36.7mmol)。在室温条件下搅拌反应混合液4个小时。再将反应混合液倒入水(400ml)中，过滤得到无需纯化直接可在以后步骤中使用的半成品。¹HNMR(400M，丙酮-d6)δ＝12.78(s，1H)，8.14(d，J＝8.8，2H)，7.65(d，J＝8.8，2H)，6.89(s，1H)，6.82(d，J＝2.0Hz，1H)，6.45(d，J＝2.0Hz，1H)，5.36(s，1H)，3.50(s，3H)；LCMS(ESI)：m/z 332[M+H]⁺。

制备5-(3-甲基丁-2-烯基氧基)-2-(4-氯苯基)-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物20)

在含有2-(4-氯苯基)-5-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(10.0g，30mmol)的DCM(100mL)和甲苯(100mL)的溶液中搅拌加入四丁基氢氧化铵(153g，33mmol，10％的水溶液)，再加入异戊烯基溴(8.74g，60mmol，2eq)，将反应混合液在室内温度条件下搅拌3个小时。用水(100mL)稀释反应混合液，用EtOAc进行萃取。去除溶剂后得到半成品，通过硅胶色谱法纯化得到目标化合物(8.0g，67％)。¹HNMR(400M，丙酮-d6)δ＝8.05(d，J＝8.4，2H)，7.60(d，J＝8.4，2H)，6.87(s，1H)，6.63(s，1H)，6.60(s，1H)，5.53(t，J＝6.8，，1H)，5.35(s，1H)，4.70，(d，J＝6.8，2H)3.50(s，3H)，1.79(s，3H)，1.78(s，3H)；LCMS(ESI)：m/z 401[M+H]⁺。

制备2-(4-氯苯基)-5-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物21)

将5-(3-甲基丁-2-烯基氧基)-2-(4-氯苯基)-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(4.5g，11.2mmol)和N，N-二乙苯胺(400mL)在217℃条件下混合加热搅拌3小时。冷却至室温后，将反应混合液倒入稀释的盐酸溶液中。通过过滤来收集沉淀物，放在EtOAc和石油醚(v/v＝1∶1)中使其结晶得到目标化合物(2.0g，44.6％)。¹HNMR(400M，丙酮-d6)δ＝12.81(s，1H)，8.10(d，J＝8.8，2H)，7.66(d，J＝8.8，2H)，6.85(s，1H)，6.60(s，1H)，5.40(s，2H)，5.27(t，J＝6.8，1H)，3.59，(d，J＝6.8，2H)，3.50(s，3H)，1.84(s，3H)，1.68(s，3H)；LCMS(ESI)：m/z 401[M+H]⁺。

制备2-(4-氯苯基)-5，7-二羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物22)

在20℃条件下，将2-(4-氯苯基)-5-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(0.5g，2.0mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)和乙酸(20mL)的混合物中，再加入7滴浓缩盐酸。将得到的混合物在20℃条件下搅拌18个小时。用饱和碳酸氢钠溶液冲洗过滤后收集固体，得到目标化合物，一种黄色粉末(0.3g，42％)。¹HNMR(400M，DMSO-d6)δ＝12.71(s，1H)，11.04(s，1H)，8.05(d，J＝8.4，2H)，7.66(d，J＝8.4，2H)，6.96(s，1H)，6.37(s，1H)，5.19(t，J＝6.8，1H)，3.44，(d，J＝6.8，2H)，1.76(s，3H)，1.63(s，3H)；LCMS(ESI)：m/z 357[M+H]⁺。

制备2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-5，7-二羟基-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物23)

将乙基3-(3-氯-4-甲氧苯基)-3-羰基丙酸酯(12.2g，50mmol)和1，3，5-三羟基苯(8.1g，50mmol)在微波反应器(160℃，运行1分钟，停留3分钟)中混合反应3次。用EtOAc稀释反应混合液，过滤得到目标化合物(3.2g，20.2％)。¹HNMR(400M，DMSO-d6)δ＝12.84(s，1H)，10.89(brs，1H，8.15(d，J＝2.0Hz，1H)，8.04(dd，J₁＝2.0Hz，J₂＝8.8Hz，1H)，7.30(d，J＝8.8，2H)，6.96(s，1H)，6.53(d，J＝2.0Hz，1H)，6.20(d，J＝2.0Hz，1H)，3.95(s，3H)；LCMS(ESI)：m/z 319[M+H]⁺。

制备2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-5-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物24)。

在含有2-(3-氯-4-甲氧苯基)-5，7-二羟基-4H-苯并吡喃-4-酮(6.8g，21.5mmol)的干燥DMF(80mL)溶液中搅拌加入N，N-二异丙基乙胺(3.3g，25.8mmol)，再将氯甲基甲醚(2.10g，26.0mmol)加入至反应混合液。将反应混合液在室内温度条件下搅拌4个小时。再将反应混合液倒入水(400mL)中，过滤后得到无需纯化可直接在以后步骤中使用的半成品。¹HNMR(400M，DMSO-d6)δ＝12.79(s，1H)，8.15(d，J＝2.0Hz，1H)，8.04(dd，J₁＝2.0Hz，J₂＝8.4Hz，1H)，7.27(d，J＝8.4，1H)，7.00(s，1H)，6.86(d，J＝2.0Hz，1H)，6.41(d，J＝2.0Hz，1H)，5.31(s，2H)，3.95(s，3H)，3.41(s，3H)；LCMS(ESI)：m/z 363[M+H]⁺。

制备5-(3-甲基丁-2-烯基氧基)-2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物25)。

在含有2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-5-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(7.8g，21.5mmol)的DCM(100mL)和甲苯(100mL)的溶液中搅拌加入四丁基氢氧化铵(200g，43mmol，10％水溶液)，再加入异戊烯基溴(12.5g，86mmol，2eq)至上述混合物中。将反应混合液在室温条件下搅拌3个小时。用水(100mL)稀释反应混合液，用EtOAc进行萃取。收集有机质层、干燥并蒸发。通过硅胶色谱法纯化半成品得到目标化合物(4.5g，48％)。¹HNMR(400M，CDCl₃)δ＝7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J₁＝2.4Hz，J₂＝8.8Hz，1H)，7.03(d，J＝8.8Hz，1H)，6.77(d，J＝2.0Hz，1H)，6.57(s，1H)，6.47(d，J＝2.4Hz，1H)，5.58(t，J＝6.4Hz，1H)，5.27(s，2H)，4.67(d，J＝6.4Hz，1H)，3.98(s，3H)，3.54(s，3H)；LCMS(ESI)：m/z 431[M+H]⁺。

制备2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-5-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物26)。

将5-(3-甲基丁-2-烯基氧基)-2-(3-氯-4-甲氧苯基)-7-(甲氧基甲氧基)-4H-苯并吡喃-4-酮(4.5g，10.4mmol)和N，N-二乙苯胺(400mL)在217℃条件下加热，搅拌3个小时。冷却至室内温度后，将反应混合液倒入稀释的盐酸溶液，将沉淀物过滤并用EtOAc和石油醚(v/v＝1∶1)使其结晶得到目标化合物(1.6g，35.6％)。¹HNMR(400M，丙酮-d6)δ＝12.87(s，1H)，8.09(s，1H)，8.04(d，J＝8.8，1H)，7.35(d，J＝8.8，1H)，6.78(s，1H)，6.58(s，1H)，5.39(s，1H)，5.26(t，J＝6.8，1H)，4.04(s，3H)，3.59(d，J＝6.4Hz，2H)，3.49(s，3H)，1.87(s，3H)，1.69(s，3H)；LCMS(ESI)：m/z 431[M+H]⁺。

制备2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-5，7-二羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物27)

在20℃条件下将2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-5-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(0.5g，2.0mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)和乙酸(20mL)的混合物中，再将浓缩盐酸(0.15mL)加入至上述混合物中。将得到的混合物在20℃条件下搅拌18个小时。过滤后收集的固体用饱和碳酸氢钠溶液冲洗得到目标化合物，一种黄色粉末(0.32g，41.5％)。¹HNMR(400M，丙酮-d6)δ＝12.77(s，1H)，10.86(s，1H)，8.06(s，1H)，8.01(d，J＝8.8，1H)，7.33(d，J＝8.8，1H)，6.95(s，1H)，6.31(s，1H)，5.16(t，J＝6.4，1H)，3.95(s，3H)，3.43(d，J＝6.4Hz，2H)，1.78(s，3H)，1.64(s，3H)；LCMS(ESI)：m/z 387[M+H]⁺。

制备2-(3-甲基丁-2-烯基)苯-1，3-二醇(化合物28)

将金属钠(1.04g，45.22mmol)分批加入间苯二酚(1.26g，11.24mmol)的醚性溶液(50mL)中。将混合物搅拌1.5个小时后，逐滴加入异戊烯基溴(1.70g，11.24mmol)，使反应混合液回流10个小时。去除未反应的钠后，用0.1M的盐酸(4mL)使其酸化，并用乙醚萃取。用盐水冲洗有机萃取物，用硫酸钠干燥，在真空中浓缩得到半成品，通过硅柱色谱法(己烷/EtOAc，6∶1)得到目标化合物(200mg，10％)，一种黄色的油。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ1.76(3H，brs)，1.83(3H，brs)，3.42(2H，d，J＝7.0Hz)，5.10(2H，s)，5.27(1H，t，J＝7.0Hz)，6.40(2H，d，J＝8.0Hz)，6.94(1H，t，J＝8.5Hz)；ESIMS 177[M-H]^-。

制备2-(4-(三氟甲基)苯基)-7-羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物29)。

将乙基4-三氟甲基苯甲酰醋酸酯(420mg，1.46mmol)和2-(3-甲基丁-2-烯基)苯-1，3-二醇(130mg，0.73mmol)的混合物用微波(Biotage，温度控制在240℃)照射30分钟。通过硅柱色谱法(己烷/EtOAc，1∶2)纯化半成品得到目标化合物(90mg，40％)，一种白色固体。¹HNMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.64(3H，brs)，1.79(3H，s)，3.60(2H，d，J＝7.0Hz)，5.25(1H，t，J＝7.0Hz)，7.02(1H，d，J＝9.0Hz)，7.04(1H，s)，7.79(1H，d，J＝9.0Hz)，7.96(2H，d，J＝8.5Hz)，8.26(2H，d，J＝8.0Hz)，10.76(1H，s)；ESIMS 375[M+H]⁺。

制备7-羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(4-甲基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物30)

通过与制备化合物2-(4-(三氟甲基)苯基)-7-羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮的类似方法合成目标化合物，-种白色固体(65mg，28％)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.64(3H，s)，1.79(3H，s)，2.40(3H，s)，3.59(2H，d，J＝6.5Hz)，5.28(1H，m)，6.84(1H，s)，6.99(1H，d，J＝9.0Hz)，7.40(2H，d，J＝8.0Hz)，7.76(1H，d，J＝9.0Hz)，7.94(2H，d，J＝8.5Hz)，10.68(1H，s)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)δ17.9，21.0，21.9，25.4，105.7，114.0，115.1，116.3，121.9，123.4，126.0(2C)，128.8，129.7(2C)，131.5，141.7，155.1，159.8，162.0，176.7；ESIMS 321[M+H]⁺。

制备2-(4-氟苯基)-7-羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物31)通过与制备化合物2-(4-(三氟甲基)苯基)-7-羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮的方法类似的方法合成目标化合物，一种白色固体(68mg，30％)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.64(3H，s)，1.78(3H，s)，3.59(2H，d，J＝7.0Hz)，5.24(1H，m)，6.90(1H，s)，6.99(1H，d，J＝8.5Hz)，7.43-7.46(2H，m)，7.77(1H，d，J＝8.5Hz)，8.09-8.12(2H，m)，10.70(1H，s)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)δ17.9，21.9，25.4，106.3，114.1，115.1，116.2(d，J＝21.5Hz)，121.9，123.5，128.2，128.7(d，J＝8.6Hz)，131.6，155.2，159.9，161.0，163.9(d，J＝248.9Hz)，176.7；ESIMS 325[M+H]⁺。

制备2-(3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)苯氧基)-四氢-2H-吡喃(化合物32)。

将间苯二酚(11g)、DCM(100mL)和PPTS(1g)的混合物搅拌回流10分钟后，缓慢加入3，4-二氢-2H-吡喃(16.8g)，再将混合物在室温条件下搅拌3个小时。将得到的溶液浓缩，通过快速色谱法得到目标化合物(22g，80％)，一种白色固体。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.20(t，1H)，6.85(t，3H)，5.40(s，2H)，3.60-4.00(t，4H)，1.60-2.10(t，12H)；LCMS[M+H]⁺：279；纯度(LCMS)＞95％。

制备2-(2-(3-甲基丁-2-烯基)-3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)苯氧基)-四氢-2H-吡喃(化合物33)在0℃及氮气保护的条件下，在含有2-(3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)苯氧基)-四氢-2H-吡喃(12g)的200mL的环己烷溶液中加入17mL的正丁基锂。使反应化合物回流3个小时，冷却后，加入1-溴-3-甲基-2-丁烯(8g)，将得到的反应物回流3个小时。冷却后，用200mL的水进行稀释，用EtOAc萃取，通过快速色谱法纯化得到目标化合物(10g，60％)，一种油状物质。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ6.70-7.20(t，3H)，5.45(s，2H)，5.25(s，1H)，3.60-4.00(t，4H)，3.45(s，1H)，1.80(s，6H)，1.60-2.10(t，12H)；LCMS[M+H]⁺：347；纯度(LCMS)＞95％。

制备2-(3-甲基丁-2-烯基)苯-1，3-二醇(化合物34)。

将化合物33(10g)、甲醇(250mL)、草酸(15g)和水(40mL)在室温条件下混合搅拌1个小时。将得到的混合物在真空中浓缩，通过快速色谱法纯化得到目标化合物(6g，95％)，一种液体状物质。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ6.98(m，1H)，6.41(d，2H)，5.27(m，1H)，5.10(s，2H)，3.43(d，2H)，1.80(d，6H)，LCMS[M+H]⁺：194；纯度(LCMS)＞93％。

制备乙基3-羰基-3-(吡啶-4-基)丙酸酯(化合物35)。

将乙基异烟酸酯(3.02g)、EtOAc(10mL)和氢化钠(60％，0.53g)混合加热回流3个小时，冷却后用水(20mL)稀释，用柠檬酸(5％)进行酸化。用乙酸乙酯萃取水相，用盐水冲洗有机萃取物，用硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩得到化合物35(3.5g，85％)，一种固体状物质。¹HNMR(300MHz，DMSO)：δ8.40(d，2H)，7.58(d，2H)，5.03(S，2H)，3.93(t，2H)，1.14(t，3H)，LCMS[M+H]⁺：179；纯度(LCMS)＞93％。

制备7-羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(吡啶-4-基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物36)。

将化合物34(3.00g)、化合物35(3.00g)和1-苯氧基苯(30mL)混合加热回流50分钟，冷却后，通过快速色谱法纯化得到化合物36(300mg，6％)，一种固体状物质。¹H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.81(s，1H)，8.82(d，2H)，8.00(d，2H)，7.80(d，2H)，7.13(s，1H)，7.00(d，1H)，5.25(d，1H)，3.61(d，2H)，1.640-1.79(d，6H)，LCMS[M+H]⁺：308；纯度(HPLC)＞97％。

制备乙基3-羰基-3-(吡啶-3-基)丙酸酯(化合物37)。将烟酸乙酯(2.26g)、EtOAc(20mL)和乙醇钠(11.4g)混合加热回流16个小时。在反应混合液中加入水(20mL)。用盐酸将水溶液酸化成pH值为6，用醚萃取。在真空中去除溶剂得到棕色油，通过柱色谱法(2∶1，己烷-EtOAc)纯化得到化合物37(1.01g，52％)。¹H NMR(300MHz，DMSO)：δ8.90-9.10(d，1H)，8.20-8.80(d，1H)，8.00-8.25(d，1H)，7.30-7.40(d，1H)，4.26(s，2H)，1.30(t，3H)，LCMS[M+H]⁺：179；纯度(LCMS)＞93％。

制备7-羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(吡啶-3-基)-4H-苯并吡喃-4-酮(化合物38)。

将化合物34(3.00g)、化合物37(3.00g)和1-苯氧基苯(30mL)混合加热回流30分钟。待反应混合液冷却至室内温度后，通过快速色谱法将其纯化得到化合物38(200mg，4％)，一种黄色固体。¹H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.76(s，1H)，9.21(s，1H)，8.76(d，1H)，8.41(d，2H)，7.76(d，1H)，7.62(d，1H)，7.00(t，2H)，5.24(d，1H)，3.57(d，2H)，1.40-1.70(d，6H)，LCMS[M+H]⁺：308；纯度(HPLC)＞97％.⁺。

测试生物活性的方法

本发明式(I)的化合物的活性可通过下列分析说明。

ER-α变异体在人类乳腺癌样本中的表达

自ProSci Incorporated(Poway，CA)公司处购买了一个预先涂抹了人类乳腺癌细胞组织的薄膜。用可明确识别ER-α36的抗ER-α36抗体和HRP标记的第二抗体检测薄膜，再使用增强化学发光(ECL)检测试剂(Amersham Pharmacia Biotech公司提供)使之显现。洗脱该同一薄膜上的标记，然后用可识别三种类型ER-α，即ER-α66、ER-α46和ER-α36的抗雌激素受体-α抗体H222(Novocastra Laboratories Ltd，UK公司提供)对薄膜进行检测。图1显示ER-α66、ER-α46和ER-α36在普通乳腺组织(1道)中不表达，却在浸润性导管癌的样本(2道)、浸润性小叶癌的样本(5道)和非浸润性导管癌(7道)中表达。此外，ER-α36在侵袭性导管癌(4道)和浸润性导管癌的另一个样本(6道)中表达。位于2和3道的浸润性导管癌分别来自于两个不同的病人。位于5和6道的浸润性导管癌也分别来自于两个不同的病人。此结果表明，ER-α36在普通乳腺组织中不表达，而在不表达ER-α66和ER-α46的ER-阴性乳腺癌样本中表达。

ER-α36在ER-阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中的表达

MDA-MB-231是一种大家熟知的缺失ER-α66和ER-α46的细胞系(参见Relevance of breast cancer cell lines as models for breast tumours：an update.Marc Lacroix，Guy Leclercq，Breast Cancer Research and Treatment 83：249-289(2004))。自美国细胞菌种库(ATCC)处得到MDA-MB-231细胞。将MDA-MB-231细胞放在含Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium(DMEM)和10％的胎牛血清的8孔BIOCOAT腔室玻片(BD Science Discovery Labware公司提供)上，在含5％的二氧化碳和37℃的条件下培养12个小时。然后用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗细胞两次，加入4％的多聚甲醛在PBS(pH 7.4)中固定细胞，并在室温条件下放置30分钟。之后，用PBS冲洗细胞，用0.5％(v/v)Triton X-100通透破膜10分钟。再次用PBS冲洗细胞，加入含3％血清的PBS，并在室温条件下放置1个小时。在玻片上加入ER-α36特异抗体，或者加入预先与可结合ER-α36特异抗体的免疫原肽培养30分钟的相同抗体，在室温条件下培养1个小时，然后用含有0.5％Triton X-100的PBS(PBST)冲洗3次，再用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的第二抗体进行培养。最后，用PBST冲洗玻片3次，用PBS冲洗1次，再加入免疫荧光标记(Molecular Probes，Eugene，OR公司提供)，在尼康E600型号的显微镜下进行观察，通过MRC-1024共聚成像系统(Bio-Rad公司提供)获取图像。图2显示MDA-MB-231细胞被ER-α36抗体染色呈阳性。被免疫原肽预培养过的相同抗体未显示出任何染色，表明该抗体的特异性。

分析对ER-阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的细胞凋亡产生的作用

在37℃和5％二氧化碳条件下将MDA-MB-231细胞置于DMEM和10％的胎牛血清中，细胞密度为每60-mm皿上带有1x10⁵个细胞。用溶于DMSO浓度为0μM、1μM、5μM和10μM的被测化合物处理MDA-MB-231细胞，时间为一星期。在尼康TS100倒置显微镜下观察处理过的细胞，拍摄其形态变化。

分析对ER-阳性乳腺癌MCF7细胞的细胞凋亡产生的作用

MCF7细胞系是一种可高效表达ER-α66、ER-α46和ER-α36的乳腺癌细胞系(参见Relevance of breast cancer cell lines as models for breast tumours：an update.Marc Lacroix，Guy Leclercq，Breast Cancer Research and Treatment(2004)83，249-289；Wang et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.103：9063-9068(2006))。在37℃和5％二氧化碳条件下将自ATCC处得到的MCF7细胞保存在含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养基(Invitrogen公司提供)中。用浓度在1M至25M的受试化合物6，8，14，22，27，29，30，31，36和38处理MCF7细胞，测试这些化合物对MCF7细胞生长的影响，时间为10天。对照组使用MCF7在没有被测化合物加入，其它条件相同的情况下进行分析。在尼康TS100倒置显微镜下观察处理过的细胞，拍摄其形态变化。表1显示了分析测试结果。表1.对ER-阳性乳腺癌MCF7细胞的细胞凋亡分析

对过量表达ER-α36的MCF7细胞和具有他莫昔芬耐药性的MCF7细胞的细胞凋亡检测

过量表达ER-α36的MCF7细胞是由将ER-α36表达载体稳定转染到MCF细胞中而制备得到的。ER-α36表达载体是通过将pBluescript质粒中的1.1-kb ER-α36的cDNA片断克隆到哺乳动物表达载体pCB6+而构建的(参见Wang等人，BBRC，336：1023-1027(2005))。构建的ER-α36表达载体含有巨细胞病毒(CMV)早期启动子。使用FuGene6转染试剂(Roche Molecular Biochemicals公司提供)将ER-α36表达载体转染至MCF7细胞。转染48小时后，重新把细胞放置培养，并用500μg/ml的G418(Invitrogen公司提供)筛选2个星期，直到出现克隆体。将克隆体收集在一起培养，通过抗体标记分析来确认ER-α36的表达。

具有他莫昔芬耐药性的MCF7细胞是通过将MCF7细胞在含有他莫昔芬的培养基中培养3个月而生成。将3个月后仍然存活的MCF7细胞收集在一起，作为具有他莫昔芬耐药性的MCF7细胞继续培养。然后进行抗体标记分析，以找出高度表达ER-α36的细胞。

在37℃和5％二氧化碳条件下，将细胞系保存在含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养基中。将细胞以每100-mm中有1x10⁵个细胞的密度放入培养皿中，用浓度为0至10μM的被测化合物处理细胞两周。计算两周后存活细胞的数量。每个浓度点都需要计算5个培养皿的细胞数量。

体内分析

抑制裸鼠体内ER-阳性与ER-阴性乳腺癌移植瘤生长的效率

将被测化合物溶于玉米油(20mg/mL)中。溶液在4℃条件下保存，准备用于动物给药。对裸鼠的给药方式为灌食方式。

在6周龄的雌性裸鼠中分析检测肿瘤的形成。将浓度为1×10⁷个MCF7细胞或MDA-MB-231细胞的200μl Matrigel溶液(BD Biosciences公司提供)注射入裸鼠的乳房脂肪垫中。将每种乳腺癌细胞分别注射于同组5只裸鼠体内。在皮下植入1.7mg/60天释放E2β小丸(一种可连续60天每天释放一定量E2β的缓慢释放E2β的小丸)，5天后接种MCF7细胞。使用动物喂食针将溶于玉米油中的被测化合物注入带有直径为0.5cm肿瘤的动物体内。将5mg被测化合物注入每只接种了MCF7细胞的裸鼠，每隔一天注入一次，连续15天。对每只接种MDA-MB-231细胞的裸鼠注入5mg被测化合物，每隔一天注入一次，连续30天。通过触诊法确定肿瘤是否消失，且每隔一天都使用游标卡尺测量并拍摄两个互相垂直的直径大小来监测肿瘤的大小。

抑制裸鼠体内人类乳腺癌BCAP-37细胞移植瘤生长的效率

用被测化合物5，6，8，14，22，36和38治疗带有乳腺癌移植瘤的裸鼠，以测试它们抑制肿瘤生长的效果。从具有BCAP-37细胞的裸鼠体内提取肿瘤组织，切成小片。将几片肿瘤组织植入雌性裸鼠右前肢的腋下。植入后，以每只裸鼠7μg的剂量连续6天每天一次对其注射E2β溶液，以刺激肿瘤在受注鼠体内的生长。从第7天开始，向裸鼠注射35mg/kg被测化合物。使用他莫昔芬作为阳性对照。使用橄榄油作为阴性对照。将被测化合物溶解于橄榄油溶液(20mg/mL)中。连续15天每天向裸鼠给药35mg/kg的被测化合物和他莫昔芬，或橄榄油。裸鼠死亡后，对其解剖并取出肿瘤组织称重。用以下公式百分比计算肿瘤组织的生长抑制率：肿瘤的生长抑制率＝(阴性对照组肿瘤平均重量-被测化合物治疗过的肿瘤的平均重量)/阴性对照组肿瘤的平均重量。以下表2显示了实验结果。表2.被测化合物抑制人类乳腺癌BCAP-37细胞体内生长的效率

化合物	肿瘤的生长抑制率(％)
		阴性对照组	0

他莫昔芬	40-50
		化合物5	26
化合物6	44
		化合物8	62
化合物14	37
		化合物22	66
化合物36	56
		化合物38	24

抑制ICR鼠体内子宫颈癌U14细胞移植瘤生长的效率

从含有子宫颈癌U14细胞系的ICR鼠的下腹腔抽出5ml腹腔液。以1∶5的比率用盐水稀释腹腔液。将0.2ml稀释的腹腔液皮下注入雌性ICR鼠的右前肢的腋下和乳房。植入后，马上分别用被测化合物、他莫昔芬和橄榄油治疗ICR鼠。连续14天每天一次对ICR鼠注入不同剂量的被测化合物、他莫昔芬或橄榄油。鼠死亡后，对其解剖取出肿瘤组织称重。每种被测化合物和剂量的测试均使用10只雌性ICR鼠。计算并比较被测化合物、他莫昔芬和橄榄油处理过的ICR鼠的肿瘤生长抑制率。

Claims

1.具有如下式(I)所示结构的化合物或其可药用的盐在药物制备中的用途，该药物以有效治疗量对主体给药，用于预防或治疗与主体中细胞异常增殖相关的疾病或者由ER-α在主体中介导的疾病，

其中：

X＝H、OR¹或NR²R³；Y＝NR、O；R¹、R²、R和R³分别是氢、(C₁-C₆)烷基或R²R³共同为-(CH₂)_n-，n＝2至8；在碳a和b或d和e间可以是单键或双键。R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸分别是氢、卤素、羟基、氨基、(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、(C₁-C₆)烷氧基、(C₁-C₆)烷基-(C＝O)-、甲酰基、甲酰胺基、氰基、硝基、(C₁-C₆)烷氧羰基、氨基羰基、氨基(C₁-C₆)烷基、N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N，N-[(C₁-C₆)烷基]₂氨基羰基、N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、N，N-[(C₆-C₁₀)芳基]₂氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、芳基(包括取代的芳基)、(C₆-C₁₀)芳氧基、杂芳基(包括取代的杂芳基)、(C₅-C₉)杂芳基氧基、吗啉代-羰基、(C₁-C₆)烷氧基氨基羰基、(C₁-C₆)烷基-羰基氨基、(C₃-C₈)坏烷基、(C₃-C₈)环烷基-甲基、(C₃-C₈)杂环烷基、(C₃-C₈)杂环烷基-甲基。R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、和R¹³分别是氢、卤素、羟基、(C₁-C₆)烷基。

2.如权利要求1所述的用途，其中所述的化合物具有如下式IA1所示结构，

其中：

是(C₆-C₁₀)芳基，(C₅-C₉)杂芳基，X＝H、OR¹或NR²R³；Y＝NR、O；其中R、R¹、R²和R³分别是氢，(C₁-C₆)烷基或R²R³共同为-(CH₂)_n-，n＝2至8；在碳a和b或d和e中间的键可能是单键或双键。R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R¹⁴和R¹⁵分别是氢、卤素、羟基、氨基、(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、(C₁-C₆)烷氧基、(C₁-C₆)烷基-(C＝O)-、甲酰基、甲酰胺基、氰基、硝基、(C₁-C₆)烷氧羰基、氨基羰基、氨基(C₁-C₆)烷基、N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N，N-[(C₁-C₆)烷基]2氨基羰基、N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、N，N-[(C₆-C₁₀)芳基]₂氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、(C₆-C₁₀)芳基(包括取代的芳基)、(C₆-C₁₀)芳氧基、(C₅-C₉)杂芳基(包括取代的杂芳基)、(C₅-C₉)杂芳基氧基、吗啉代-羰基、(C₁-C₆)烷氧基氨基羰基、(C₁-C₆)烷基-羰基氨基、(C₃-C₈)环烷基、(C₃-C₈)环烷基-甲基、(C₃-C₈)杂环烷基、(C₃-C₈)杂环烷基-甲基。R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³分别是氢、卤素、羟基、(C₁-C₆)烷基；

当R、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴和R¹⁵为(C₁-C₆)烷基时，(C₁-C₆)烷基的每个碳原子都可以被一至三个取代基分别取代，取代物可分别选自于羟基、卤素、(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、(C₁-C₆)烷氧基、(C₁-C₆)烷基-(C＝O)-、甲酰基、甲酰胺基、氰基、硝基、HO-(C＝O)-、(C₁-C₆)烷氧羰基、氨基羰基、氨基(C₁-C₆)烷基、N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N，N-[(C₁-C₆)烷基]₂氨基羰基、N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、N，N-[(C₆-C₁₀)芳基]₂氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₁-C₆)烷基氨基羰基、N-(C₁-C₆)烷基-N-(C₆-C₁₀)芳基氨基羰基、(C₆-C₁₀)芳基、(C₆-C₁₀)芳氧基、(C₅-C₉)杂芳基、(C₅-C₉)杂芳基氧基、吗啉代-羰基、(C₁-C₆)烷氧基氨基羰基、(C₁-C₆)烷基-羰基氨基、(C₃-C₈)环烷基、(C₃-C₈)环烷基-甲基、(C₃-C₈)杂环烷基、(C₃-C₈)杂环烷基-甲基。

3.如权利要求2所述的用途，其中所述的化合物具有如下式IA2所示结构，

其中：R¹⁶、R¹⁷和R¹⁸分别是氢、(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基；在碳a和b或d和e中间的键可能是单键或双键。R⁵、R⁶、R⁷、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和X的定义如前所述。

4.如权利要求3所述的用途，其中所述的化合物具有如下式IA3所示结构，

其中：R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸和^R20分别是氢、(C₁-C₆)烷基；R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³分别是氢、(C₁-C₆)烷基；X是H、OR¹或NR²R³，R¹、R²和R³分别是氢，(C₁-C₆)烷基或R²R³共同为-(CH₂)_n-，n＝2至8；在碳a和b或d和e中间的键可能是单键或双键。R⁵和R⁶的定义如前所述。

5.如权利要求4所述的用途，其中所述的化合物具有如下式IA4所示结构，

其中R¹⁶、R¹⁸、R¹⁹、R¹⁹和R²⁰分别是氢、(C₁-C₆)烷基；X是OR¹或NR²R³，R¹、R²和R³分别是氢、(C₁-C₆)烷基或R²R³共同为-(CH₂)_n-，n＝2至5。

6.如权利要求5所述的用途，其中所述的化合物具有如下式IA5所示结构，

其中R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹和R²⁰分别是氢、(C₁-C₆)烷基；X是OR¹或NR²R³，R¹、R²和R³分别是氢、(C₁-C₆)烷基或R₂R₃共同为-(CH₂)_n-，n＝2至5。

7.如权利要求6所述的用途，其中所述的化合物具有如下式IA6所示结构，

8.如权利要求1所述的用途，其中所述的化合物选自以下：8-(3-氨基-3-甲基丁基)-3，5，7-三羟基-2-(4-羟基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，8-(3-氨基-3-甲基丁基)-3，5，7-三羟基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5，7-二羟基-3-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-3-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-3-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，5-羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-3，7-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5-羟基-3，7-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，3-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，3-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)-8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5，7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，2-(4-氯苯基)-3，5，7-三羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-4H-苯并吡喃-4-酮，2-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3，5，7-三羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-4H-苯并吡喃-4-酮，8-(3-氨基-3-甲基丁基)-3，5，7-三羟基-2-(吡啶-3-基)-4H-苯并吡喃-4-酮，8-(3-氨基-3-甲基丁基)-3，5，7-三羟基-2-(吡啶-2-基)-4H-苯并吡喃-4-酮，8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5，7-二羟基-3-甲氧基-2-(5-甲氧基吡啶-2-基)-4H-苯并吡喃-4-酮，5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-3-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4H-苯并吡喃-4-酮，5，7-二羟基-3-甲氧基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(吡啶-3-基)-4H-苯并吡喃-4-酮，2-(6-(二甲氨基)吡啶-3-基)-5，7-二羟基-3-甲氧基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，2，3-二氢-5，7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)喹啉-4(1H)-酮，2，3-二氢-7-羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)喹啉-4(1H)-酮，7-羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)喹啉-4(1H)-酮，5，7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁-2-烯基)喹啉-4(1H)-酮，8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5，7-二羟基-2-(4-羟苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5，7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，8-(3-氨基-3-甲基丁基)-2，3-二氢-5，7-二羟基-2-(4-甲氧基苯基)苯并吡喃-4-酮，5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-2-(4-甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，5-羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-7-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，8-(3-氨基-3-甲基丁基)-5-羟基-7-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，2，3-二氢-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-2-(4-甲氧基苯基)苯并吡喃4-酮，2-(4-氨基苯基)-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-4H-苯并吡喃-4-酮，2-(4-氯苯基)-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-4H-苯并吡喃-4-酮，2-(4-氯-3-甲氧基苯基)-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)-4H-苯并吡喃-4-酮，2-(4-氨基苯基)-2，3-二氢-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)苯并吡喃-4-酮，2-(4-氯苯基)-2，3-二氢-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)苯并吡喃-4-酮，2-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2，3-二氢-5，7-二羟基-8-(3-羟基-3-甲基丁基)苯并吡喃-4-酮，7-羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(吡啶-4-基)-4H-苯并吡喃-4-酮，7-羟基-8-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(吡啶-3-基)-4H-苯并吡喃-4-酮。

9.如权利要求1所述的用途，其中所述的主体是哺乳动物。

10.如权利要求9所述的用途，其中所述的哺乳动物是人。

11.如权利要求10所述的用途，其中的给药方式包括口腔、粘膜、舌下、眼睛、局部、肠道外、直肠、脑池、阴道、腹膜、膀胱或鼻部给药。

12.如权利要求11所述的用途，其中的给药方式是肠道外给药。

13.如权利要求1所述的用途，其中所述的疾病选自以下组：乳腺癌、结肠癌、白血病、肝癌、肺癌、骨髓瘤癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、子宫癌或骨质疏松。

14.如权利要求13所述的用途，其中所述的疾病是乳腺癌。