CN110240587A - 一类芳基二氟苄基醚类化合物、制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一类芳基二氟苄基醚类化合物、制备方法及用途，具体地，本发明提供了一种如下式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐，其外消旋体、R‑异构体、S‑异构体、可药用盐或它们的混合物。所述的化合物在PD‑1/PD‑L1竞争抑制实验中表现出比现有的PD‑1抑制化合物更好的结合抑制效果，因此可以用于制备治疗与PD‑1/PD‑L1结合通路相关的疾病的药物组合物。

Description

一类芳基二氟苄基醚类化合物、制备方法及用途

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体地，本发明提供了一类可以用作为PD-1抑制剂的芳基二氟苄基醚类化合物，其制备方法及用途。

背景技术

程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1，PD-1)，是一种免疫共抑制分子，属于CD28家族成员，由268个氨基酸组成的I型跨膜糖蛋白，与同属的CD28和CTLA分子有明显的不同，其仅特异性表达在T细胞上。在正常机体中，PD-1作为一种T细胞增殖的负调节分子，对维持机体的免疫耐受有重要作用。程序性死亡受体1配体1(PD-L1，又名CD274)也是I型跨膜蛋白，属于B7家族跨膜分子，在肿瘤中高度选择性表达。当T细胞受体激活后，PD-1与PD-L1结合，在效应阶段的肿瘤浸润淋巴细胞中呈高表达，并用于慢性抗原暴露时抑制T淋巴细胞活性。与此同时，其可激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)后进一步激活蛋白激酶B(AKT)和其他刺激性T细胞信号通路，通过增加新陈代谢使T淋巴细胞得以分裂和分泌细胞因子。PD-1和PD-L1相互作用不仅可调节T细胞，而且可影响其他相关配体细胞的信号表达的传导，如树突状细胞和自然杀伤细胞。在肿瘤发生时，PD1/PD-L1信号通路能抑制T细胞的免疫反应而促进肿瘤免疫逃逸的发生。临床前研究表明，阻断PD1/PD-L1相互作用能够增强效应T淋巴细胞的数量，增强肿瘤特异性T淋巴细胞的细胞毒性，提高促炎症细胞因子的产生，使得效应T淋巴细胞到达肿瘤部位，减少肿瘤部位调节性T淋巴细胞的抑制，增强机体内源性抗肿瘤免疫效应。PD1/PD-L1作为负性协同刺激信号，在机体免疫应答中扮演重要角色，在免疫耐受和免疫损伤方面发挥无可替代的作用。因此，PD1/PD-L1已成为肿瘤免疫治疗重要的药物靶标。

自2014年全球首个PD-1抑制剂Nivolumab获批上市以来，相继5个类似药物上市，与此同时还有多个抑制剂进入临床实验，然而该类药物均为单抗，迄今为止尚无小分子抑制剂成功研发。小分子药物与单抗药物相比体内暴露量更高，可通过口服给药，半衰期较短且无免疫排斥反应，临床运用时可随时根据患者反应调整用药。单抗药物所固有的缺点如生产成本过大导致药物价格昂贵，药物的稳定性及免疫原性等均致使靶向PD1/PD-L1小分子抑制剂的研发迫在眉睫。

由Aurigene公司开发的CA-170是作用于PD-L1/L2的小分子抑制剂，于2016年6月分别在印度和美国进入临床I期研究。AbbVie公司开发的ABBV-368是作用于PD-1/PD-L1的小分子抑制剂，于2017年5月在美国进入临床I期研究。由此可见，靶向PD1/PD-L1小分子抑制剂已经受到全球各大公司青睐。遗憾的是，这两个临床在研的小分子抑制剂结构尚未公开，其精确结构信息尚不清楚。

百时美施贵宝是率先进行靶向PD1/PD-L1非肽类小分子抑制剂研发的公司，其2015年专利WO 2015/034820 A1公开一类包含三个芳香环结构(如下式)，该类化合物具有抑制PD1与其配体结合的能力(部分化合物能达到<10nM抑制活性)。其中，Krzysztof M.Zak等人在2016年发表了BMS-202/PD-L1晶体结构，但该类化合物迄今为止仅有PD1/PD-L1bingding抑制活性报道，并无深入的细胞等体外及体内报道。

综上所述，本领域迫切需要提供能够用作为PD-1抑制剂的小分子化合物。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够用作为PD-1抑制剂的小分子化合物。

本发明的第一方面，提供了一种如下式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐，其外消旋体、R-异构体、S-异构体、可药用盐或它们的混合物：

其中：

R₁和R₂各自独立地选自下组：H、卤素、腈基、取代或未取代的C1-C3烷基、取代或未取代的C1-C3烷氧基；

R₃选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环基，或C(R)₃；其中，所述的R选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷基羟基、羧基(-COOH)、取代或未取代的C2-C8酰基、取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环基；

R₄各自独立地选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环基；或所述的R₃和R₄与相连的氮原子共同构成取代或未取代的4-6元杂环基；

或R₁与R₃，以及相邻的碳原子共同构成选自下组的结构：5-7元碳环、5-7元杂环；

A为取代或未取代的6-10元芳环、取代或未取代的5-7元芳杂单环、取代或未取代的8-10元芳杂并环；其中，所述的取代可选自氰基、三氟甲基、二氟甲基、C1-C3烷基酰基、C1-C3烷基磺酰基；

X可选自NH、O、S，优选O；

Y可选自NH、O、S，优选O；

除非特别说明，所述的取代是指基团上的氢原子被选自下组的一个或多个取代基取代：羟基、卤素、氨基、羧基、羰基、氰基、C1-C3酰胺基、C1-C3磺酰胺基、4-6元杂环基；

所述的杂环指成环原子中包括至少一个选自下组的杂原子：N、O或S。

在另一优选例中，所述的A环选自下组：取代或未取代的6元芳基、取代或未取代的6元杂芳基、取代或未取代的5元并6元杂芳基。

在另一优选例中，所述的A环选自下组：取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的苯并[1,2,5]二唑。

在另一优选例中，所述的R₃选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环基，或C(R)₃；其中，所述的R选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷基羟基、羧基(-COOH)、取代或未取代的C2-C8酰基；

R₄各自独立地选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基。

在另一优选例中，所述的化合物选自S1-S22。

在另一优选例中，所述的方法包括步骤：

在惰性溶剂中，用式I-1化合物与式I-2化合物反应，得到式I化合物。

本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括：治疗有效量的如本发明第一方面所述的式I化合物，或其药学上可接受的盐、外消旋体、R-异构体、S-异构体或它们的混合物中的一种或多种，以及任选的药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料和/或稀释剂。

在另一优选例中，所述的药物组合物是用于治疗选自下组的疾病：病毒感染、或癌症。

在另一优选例中，所述的癌症选自下组：恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、头颈部肿瘤、霍奇金淋巴瘤、Merkel细胞癌、结直肠癌、食管癌、三阴性乳腺癌、鼻咽癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、子宫内膜癌、胶质瘤、神经内分泌肿瘤、恶性间皮瘤、非霍奇金淋巴瘤。

在另一优选例中，所述的癌症选自下组：骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、何杰金病、非何杰金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病包括急性髓细胞样白血病、慢性髓细胞样白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、儿童期实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或尿道癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性中枢神经的淋巴瘤、肿瘤血管发生、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌症、T细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症、转移性癌症(特别是表达PD-L1的转移性癌症)。

本发明的第三方面，提供了一种PD-1抑制剂，其特征在于，所述的PD-1抑制剂包括：抑制有效量的如本发明第一方面所述的式I化合物，或其药学上可接受的盐、外消旋体、R-异构体、S-异构体，或其混合物中，以及任选的药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料和/或稀释剂。

本发明的第四方面，提供了一种如本发明第一方面所述的式I化合物用于选自下组的一个或多个用途：(i)治疗或预防与PD-1活性相关的疾病；(ii)抑制PD-1的活性，或降低PD-1的表达量；(iii)制备治疗或预防与PD-1活性相关的疾病的药物组合物；(iv)制备PD-1抑制剂。

在另一优选例中，所述的疾病为肿瘤，优选为选自下组的肿瘤：恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、头颈部肿瘤、霍奇金淋巴瘤、Merkel细胞癌、结直肠癌、食管癌、三阴性乳腺癌、鼻咽癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、子宫内膜癌、胶质瘤、神经内分泌肿瘤、恶性间皮瘤、非霍奇金淋巴瘤等。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

具体实施方式

本发明人经过长期而深入的研究，基于现有的靶向PD1/PD-L1小分子抑制剂与PD-L1晶体结构，在苄醚结构位置引入二氟取代，从而提高了与PD-L1的亲和力及代谢稳定性，基于上述发现，发明人完成了本发明。

术语

如本文所用，术语“C1-C8烷基”指具有1～8个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，或类似基团。

如本文所用，术语“C2-C8酰基”指形如“具有1～8个碳原子的直链或支链烷基-羰基”结构的取代基，如乙酰基、丙酰基、丁酰基，或类似基团。

术语“6元芳基”指苯基。

术语“5～7元杂芳基”指具有5-8元的环系上具有一个或多个选自O、S、N或P的杂原子的非饱和环系取代基，如吡啶基、噻吩基，或类似基团。

术语“5～7元碳环”指具有5-7个碳原子的饱和碳环，例如环己基，或类似基团。

术语“5～7元杂环”指具有5-7元的环系上具有一个或多个选自O、S、N的杂原子的饱和环系取代基，如哌啶基，吡咯基，或类似基团。

术语“卤素”指F、Cl、Br和I。

本发明中，术语“含有”、“包含”或“包括”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。

本发明中，术语“药学上可接受的”成分是指适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)，即有合理的效益/风险比的物质。

本发明中，术语“有效量”指治疗剂治疗、缓解或预防目标疾病或状况的量，或是表现出可检测的治疗或预防效果的量。对于某一对象的精确有效量取决于该对象的体型和健康状况、病症的性质和程度、以及选择给予的治疗剂和/或治疗剂的组合。因此，预先指定准确的有效量是没用的。然而，对于某给定的状况而言，可以用常规实验来确定该有效量，临床医师是能够判断出来的。

在本文中，除特别说明之处，术语“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：羟基、卤素、氨基、羧基、羰基、氰基、C1-C3酰胺基、C1-C3磺酰胺基、4-6元杂环基、未取代或卤代的C1-C6烷基、未取代或卤代的C2-C6酰基、未取代或卤代的C1-C6烷基-羟基。

除非特别说明，本发明中，所有出现的化合物均意在包括所有可能的光学异构体，如单一手性的化合物，或各种不同手性化合物的混合物(即外消旋体)。本发明的所有化合物之中，各手性碳原子可以任选地为R构型或S构型，或R构型和S构型的混合物。

如本文所用，术语“本发明化合物”指式I所示的化合物。该术语还包括及式I化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。

式I化合物

其中：

R₁和R₂各自独立地选自下组：H、卤素、腈基、取代或未取代的C1-C3烷基、取代或未取代的C1-C3烷氧基；

R₃选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环基，或C(R)₃；其中，所述的R选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷基羟基、羧基(-COOH)、取代或未取代的C2-C8酰基、取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环基；

R₄各自独立地选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环基；或所述的R₃和R₄与相连的氮原子共同构成取代或未取代的4-6元杂环基；

或R₁与R₃，以及相邻的碳原子共同构成选自下组的结构：5-7元碳环、5-7元杂环；

A为取代或未取代的6-10元芳环、取代或未取代的5-7元芳杂单环、取代或未取代的8-10元芳杂并环；其中，所述的取代可选自氰基、三氟甲基、二氟甲基、C1-C3烷基酰基、C1-C3烷基磺酰基；

X可选自NH、O、S，优选O；

Y可选自NH、O、S，优选O；

除非特别说明，所述的取代是指基团上的氢原子被选自下组的一个或多个取代基取代：羟基、卤素、氨基、羧基、羰基、氰基、C1-C3酰胺基、C1-C3磺酰胺基、4-6元杂环基；

所述的杂环指成环原子中包括至少一个选自下组的杂原子：N、O或S。本发明的典型化合物包括但不限于表一所示的化合物：

表一：

药物组合物和施用方法

由于本发明化合物具有优异的对程序性死亡受体1(PD-1)的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解由与PD-1活性或表达量相关的疾病。根据现有技术，本发明化合物可用于治疗以下疾病：病毒感染、或癌症。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有5-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。

“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选5～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

制备实施例

化合物S1的合成：

化合物1-3的合成：

将1,4-苯并二噁烷-6-硼酸频那醇酯1-1(3.8g,14.5mmol)及3-溴-2-甲基苯甲酸1-2(3.12g,14.5mmol)溶解于50ml 1,4-二氧六环中，氮气保护下加入四三苯基膦钯(Pd(PPh₃)₄,3.35g,2.9mmol)及25ml 2M碳酸钠溶液(Na₂CO₃)，加热至100℃直至反应完全。减压蒸除大部分l1,4-二氧六环后，加入乙酸乙酯及水萃取，水相用2N盐酸溶液调节PH值至酸性，再用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩，加入少量乙醇打浆后过滤，得粗品2.38g。

化合物1-4的合成：

将4.7g化合物1-3(18.0mmol)溶于甲基叔丁基醚与甲苯的混合溶剂(2:1,100ml)中，氮气保护，加热至60℃并在此温度下缓慢滴加1,3-丙二硫醇2.65g(24.5mmol)，加毕在此温度下搅拌90min，再缓慢滴加三氟甲磺酸，加毕在此温度下搅拌60min后升温至110℃，大约两小时反应能完成。减压蒸除反应溶剂，用甲基叔丁基醚打浆，抽滤得黄色固体8.1g备用。

化合物1-6的合成：

将2,4-二羟基-6-甲基苯甲醛1-5(2.3g,15mmol)溶于干燥的DCM(二氯甲烷)中，加入三乙胺(2.1ml,15mmol)后氮气保护，至于-70℃搅拌。缓慢加入化合物1-4的DCM溶液，加毕在此温度下反应60min后，再缓慢滴加三乙胺三氢氟酸盐(5.64g,35mmol)的DCM溶液，加毕在此温度下再反应30min后，再缓慢滴加Br₂(6.72g,42mmol)的DCM溶液，继续在-70℃搅拌60min反应完全。用碳酸氢钠溶液在冰浴下中和反应液，乙酸乙酯萃取两遍，饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥后浓缩上柱，PE:EA＝8:1得产物1.8g。

化合物1-8的合成：

将化合物1-6(167mg,0.39mmol)与3-(溴甲基)苯腈1-7(153mg，0.78mmol)溶于干燥的DMF(N,N-二甲基甲酰胺)中，加入碳酸铯(254mg,0.78mmol)于室温搅拌约两小时反应完全。反应液用水及乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂后用乙醇打浆得粗品165mg备用。

化合物S1的合成：

将化合物1-8(30mg,0.055mmol)及化合物1-9(17mg,0.166mmol)溶于DMF中，搅拌过夜后，加入氰基硼氢化钠(10mg,0.166mmol)及1滴醋酸，大约3小时反应完全。将反应液直接旋干后硅胶拌样上柱，DCM:MeOH＝30:1得化合物S1。¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.75-7.60(m,3H),7.52(d,J＝7.4Hz,1H),7.48–7.40(m,1H),7.33(m,1H),7.23(m,1H),7.16(s,1H),6.90(d,J＝8.2Hz,0.5H),6.82–6.68(m,2.5H),6.65(s,1H),5.02(q,J＝12.4,11.8Hz,2H),4.4-4.2(m,6H),4.00(br,1H),3.79(br,1H),3.46(s,1H),2.36(s,1.5H),2.31(s,3H),2.24(s,1.5H).

化合物S2的合成：

化合物S2的合成：

除了用化合物2-1替换1-9外，化合物S2的合成与化合物S1的合成相同。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.77–7.65(m,3H),7.60(d,J＝7.6Hz,1H),7.51(d,J＝7.8Hz,1H),7.36(dd,J＝7.7,1.5Hz,0.5H),7.30(m,0.5H),7.27(d,J＝7.7Hz,0.5H),7.18(d,J＝0.7Hz,0.5H),6.93(d,J＝8.3Hz,0.5H),6.83–6.76(m,2H),6.75(d,J＝1.4Hz,0.5H),6.71(s,1H),5.10(s,2H),4.31(d,J＝6.4Hz,6H),3.93(s,1H),3.11(d,J＝8.0Hz,1H),2.38(s,1.5H),2.28(s,3H),2.26(s,1.5H),1.28(s,3H).

化合物S3的合成：

化合物S3的合成：

除了用化合物3-1替换1-9外，化合物S3的合成与化合物S1的合成相同。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.81(s,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,1H),7.73(ddd,J＝11.3,7.9,1.6Hz,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.55(t,J＝7.8Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,0.5H),7.34–7.28(m,1H),7.27(dd,J＝8.0Hz,J＝1.6Hz,0.5H),7.19(s,1H),6.93(d,J＝8.2Hz,0.5H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.81-6.82(m,1.5H),6.78-6.75(m,1H),5.19(d,J＝4.3Hz,2H),4.32(d,J＝5.6Hz,4H),4.20(d,J＝3.7Hz,2H),3.79–3.54(m,4H),2.45(d,J＝5.1Hz,3H),2.43(s,1.5H),2.31(s,1.5H),1.11(s,3H).

化合物S4的合成：

化合物S4的合成：

除了用化合物4-1替换1-9外，化合物S4的合成与化合物S1的合成相同。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.81(s,1H),7.74–7.63(m,2H),7.58(d,J＝7.6Hz,1H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.35–7.29(m,1H),7.28–7.20(m,1.5H),7.15(s,0.5H),6.89(d,J＝8.3Hz,0.5H),6.82(d,J＝8.9Hz,1H),6.79–6.69(m,2.5H),5.13(s,2H),4.32-4.28(M,6H),3.69(br,6H),2.40(s,1.5H),2.39(s,3H),2.27(s,1.5H).

化合物S5的合成：

化合物S5的合成：

除了用化合物5-1替换1-9外，化合物S5的合成与化合物S1的合成相同。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.72(s,1H),7.67(d,J＝7.9Hz,2H),7.56(d,J＝8.1Hz,1H),7.52(s,1H),7.45(d,J＝7.7Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,0.5H),7.35(d,J＝7.0Hz,0.5H),7.27–7.22(m,0.5H),7.19(s,0.5H),6.93(d,J＝8.3Hz,0.5H),6.84–6.73(m,2.5H),6.70(s,1H),5.11(s,2H),4.33(d,J＝6.2Hz,4H),4.06(s,1H),3.78(d,J＝15.2Hz,2H),3.68(d,J＝4.7Hz,1H),3.53(d,J＝10.9Hz,1H),2.49(m,2H),2.31(s,6H).

化合物S6的合成：

化合物6-2的合成：

将化合物1-6(85.2mg,0.2mmol)与5-(氯甲基)-3-腈基吡啶6-1(46mg，0.3mmol)溶于干燥的DMF(N,N-二甲基甲酰胺)中，加入碳酸铯(130mg,0.4mmol)于室温搅拌约五小时反应完全。反应液用水及乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂后用乙醇打浆得粗品138mg备用。

化合物S6的合成：

将化合物6-2(28mg,0.05mmol)及化合物6-3(15mg,0.15mmol)溶于DMF中，搅拌过夜后，加入氰基硼氢化钠(10mg,0.3mmol)及1滴醋酸，大约3小时反应完全。将反应液直接旋干后硅胶拌样上柱，DCM:MeOH＝30:1得化合物S6。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.98(d,J＝2.1Hz,1H),8.90(d,J＝2.0Hz,1H),8.22(t,J＝2.2Hz,1H),7.71(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.37(dd,J＝7.6,1.5Hz,1H),7.32(d,J＝7.7Hz,1H),6.94(d,J＝8.2Hz,1H),6.87(s,1H),6.83(d,J＝2.1Hz,1H),6.79(d,J＝2.1Hz,1H),6.76(dd,J＝2.7,1.9Hz,1H),5.22(s,2H),4.34(s,4H),3.98(s,2H),3.37(dd,J＝5.5Hz,2H),2.91(t,J＝5.3Hz,2H),2.48(s,3H),2.43(s,3H),1.95(s,3H).

化合物S7的合成：

化合物7-2的合成：

将2,4-二羟基-5-甲基苯甲醛7-1(228mg,1.5mmol)溶于干燥的DCM中，加入三乙胺(0.21ml,1.5mmol)后氮气保护，至于-70℃搅拌。缓慢加入化合物1-4的DCM溶液，加毕在此温度下反应60min后，再缓慢滴加三乙胺三氢氟酸盐(0.56ml,3.5mmol)的DCM溶液，加毕在此温度下再反应30min后，再缓慢滴加Br₂(672mg,4.2mmol)的DCM溶液，继续在-70℃搅拌60min反应完全。用碳酸氢钠溶液在冰浴下中和反应液，乙酸乙酯萃取两遍，饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥后浓缩上柱，PE:EA＝8:1得产物126mg。

化合物7-3的合成：

将化合物7-2(85.mg,0.2mmol)与5-(氯甲基)-3-腈基吡啶6-1(46mg，0.3mmol)溶于干燥的DMF(N,N-二甲基甲酰胺)中，加入碳酸铯(130mg,0.4mmol)于室温搅拌约五小时反应完全。反应液用水及乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂后用乙醇打浆得粗品138mg备用。

化合物S7的合成：

将化合物7-3(42mg,0.078mmol)及化合物4-1(28mg,0.24mmol)溶于DMF中，搅拌过夜后，加入氰基硼氢化钠(15mg,0.24mmol)及1滴醋酸，大约3小时反应完全。将反应液直接旋干后硅胶拌样上柱，DCM:MeOH＝30:1得化合物S1。¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ8.90(s,1H),8.76(s,1H),8.19(s,1H),7.78(d,J＝7.7Hz,1H),7.38–7.18(m,3H),7.16(s,1H),6.97(s,1H),6.90(m,0.5H),6.81(m,0.5H),6.74(s,1H),5.16(s,2H),4.28(d,J＝2.9Hz,4H),4.04(s,2H),3.56(br,6H),2.29(s,3H),2.21(s,3H).

化合物S8的合成：

化合物S8的合成：

除了用化合物3-1替换4-1外，化合物S8的合成与化合物S7的合成相同。

¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ8.92(s,1H),8.79(s,1H),8.25(s,1H),7.79(d,J＝7.7Hz,1H),7.38–7.20(m,3H),7.17(s,1H),6.92(m,1.5H),6.75(m,1.5H),5.13(s,2H),4.30(s,4H),3.90(s,2H),3.59(br,4H),2.31(s,3H),2.22(s,3H),1.25(s,3H).

化合物S9的合成：

化合物9-2的合成：

将2,4-二羟基-5-氯苯甲醛7-1(1.22mg,7.09mmol)溶于干燥的DCM中，加入三乙胺(716mg,7.09mmol)后氮气保护，至于-70℃搅拌。缓慢加入化合物1-4(2.33g,4.73mmol)的DCM溶液，加毕在此温度下反应60min后，再缓慢滴加三乙胺三氢氟酸盐(2.67mg,16.56mmol)的DCM溶液，加毕在此温度下再反应30min后，再缓慢滴加Br₂(3.18g,19.87mmol)的DCM溶液，继续在-70℃搅拌60min反应完全。用碳酸氢钠溶液在冰浴下中和反应液，乙酸乙酯萃取两遍，饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥后浓缩上柱，PE:EA＝8:1得产物1.24g。

化合物9-3的合成：

将化合物9-3(125mg,0.28mmol)与5-(氯甲基)-3-腈基吡啶6-1(83mg，0.55mmol)溶于干燥的DMF中，加入碳酸铯(179mg,0.55mmol)于室温搅拌约五小时反应完全。反应液用水及乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂后用乙醇打浆得粗品179mg备用。

化合物S9的合成：

将化合物9-3(25mg,0.044mmol)及化合物3-1(14mg,0.13mmol)溶于DMF中，搅拌过夜后，加入氰基硼氢化钠(8.4mg,0.13mmol)及1滴醋酸，大约3小时反应完全。将反应液直接旋干后硅胶拌样上柱，DCM:MeOH＝30:1得化合物S9。¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ8.92(s,1H),8.86(s,1H),8.22(s,1H),7.81(d,J＝7.7Hz,1H),7.47(s,1H),7.37(d,J＝7.6Hz,1H),7.31(d,J＝7.6Hz,1H),7.11(s,1H),6.92(d,J＝8.3Hz,1H),6.81(d,J＝2.1Hz,1H),6.79–6.71(m,1H),5.19(s,2H),4.31(s,4H),3.84(s,2H),3.57(m,4H),2.46(s,3H),1.08(s,3H).

化合物S10的合成：

化合物10-1的合成：

将化合物9-2(125mg,0.28mmol)与3-(溴甲基)-苯腈5-1(108mg，0.55mmol)溶于干燥的DMF中，加入碳酸铯(179mg,0.55mmol)于室温搅拌约五小时反应完全。反应液用水及乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂后用乙醇打浆得粗品179mg备用。

化合物S10的合成：

将化合物10-1(25mg,0.044mmol)及化合物1-9(17mg,0.166mmol)溶于DMF中，搅拌过夜后，加入氰基硼氢化钠(10mg,0.166mmol)及1滴醋酸，大约2小时反应完全。将反应液直接旋干后硅胶拌样上柱，DCM:MeOH＝30:1得化合物S10。¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.74(d,J＝8.4Hz,2H),7.69–7.59(m,2H),7.49(d,J＝7.7Hz,1H),7.40(t,J＝7.8Hz,1H),7.28–7.21(m,3H),7.14(s,1H),6.98(s,1H),6.70(s,1H),5.08(s,2H),4.27(br,6H),3.95(s,2H),3.48(s,1H),2.24(s,3H).

化合物S11的合成：

化合物S11的合成：

除了用化合物4-1替换1-9外，化合物S11的合成与化合物S10的合成相同。¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.83(s,1H),7.75(d,J＝7.7Hz,1H),7.68(d,J＝7.9Hz,1H),7.59(d,J＝7.7Hz,1H),7.49(m,2H),7.34(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(m,1H),7.09(s,1H),6.89(d,J＝8.2Hz,1H),6.78(d,J＝2.0Hz,1H),6.72(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),5.14(s,2H),4.29(s,3H),4.07(s,2H),3.64(s,5H),2.41(s,3H).

化合物S12的合成：

化合物S12的合成：

除了用化合物3-1替换1-9外，化合物S12的合成与化合物S10的合成相同。¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.85–7.70(m,3H),7.63(dt,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.56–7.46(m,2H),7.35(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.30(d,J＝7.6Hz,1H),7.11(s,1H),6.91(d,J＝8.2Hz,1H),6.79(d,J＝2.0Hz,1H),6.74(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),5.91(br,3H),5.16(s,2H),4.30(s,4H),4.01(s,2H),3.57(q,J＝12.3Hz,4H),2.43(d,J＝2.1Hz,3H),1.02(s,3H).

化合物S13的合成：

化合物S13的合成：

除了用化合物4-1替换3-1外，化合物S13的合成与化合物S9的合成相同。

¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ8.93(d,J＝2.0Hz,1H),8.86(d,J＝2.0Hz,1H),8.25(s,1H),7.82(d,J＝7.8Hz,1H),7.46(s,1H),7.37(d,J＝7.6Hz,1H),7.32(d,J＝7.7Hz,1H),7.09(s,1H),6.92(d,J＝8.2Hz,1H),6.82(d,J＝2.1Hz,1H),6.76(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),5.19(s,2H),4.31(s,4H),3.81(s,2H),3.62(s,6H),2.46(s,3H).

化合物S14的合成：

化合物14-2的合成：

将化合物9-2(44.5mg,0.1mmol)与4-(溴甲基)苯并[c][1,2,5]氧二唑14-1(32mg，0.15mmol)溶于干燥的DMF中，加入碳酸铯(65.2mg,0.2mmol)于室温搅拌约两小时反应完全。反应液用水及乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂后硅胶拌样上柱，PE:EA＝5:1得化合物14-220mg。

化合物S14的合成：

将化合物14-2(20mg,0.034mmol)及化合物4-1(8mg,0.068mmol)溶于DMF中，搅拌过夜后，加入氰基硼氢化钠(5mg,0.068mmol)及1滴醋酸，大约3小时反应完全。将反应液直接旋干后硅胶拌样上柱，DCM:MeOH＝30:1得化合物S14。¹HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.71(d,J＝8.0Hz,2H),7.58–7.46(m,2H),7.40(s,1H),7.31(d,J＝7.6Hz,1H),7.22(t,J＝7.8Hz,1H),7.14(s,1H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H),6.77(d,J＝2.0Hz,1H),6.71(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),5.54(s,2H),4.28(s,6H),3.88(br,6H),2.38(s,3H).

化合物S15的合成：

化合物S15的合成：

除了用化合物3-1替换4-1外，化合物S15的合成与化合物S4的合成相同。

¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.86-7.78(m,2H),7.55(d,J＝6.7Hz,1H),7.48–7.39(m,2H),7.38–7.32(m,1H),7.29(d,J＝7.6Hz,1H),7.14(s,1H),6.91(d,J＝8.2Hz,1H),6.81(d,J＝2.0Hz,1H),6.76(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),5.49(s,2H),4.31(s,4H),3.76(s,2H),3.51(s,4H),2.75(s,2H),2.44(d,J＝2.0Hz,3H),1.02(s,3H).

化合物S16的合成：

化合物16-2的合成：

将化合物9-2(89mg,0.2mmol)与5-(溴甲基)苯并[c][1,2,5]氧二唑16-1(64mg，0.3mmol)溶于干燥的DMF中，加入碳酸铯(130mg,0.4mmol)于室温搅拌约两小时反应完全。反应液用水及乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂后硅胶拌样上柱，PE:EA＝5:1得化合物16-253mg。

化合物S15的合成：

将化合物16-2(20mg,0.034mmol)及化合物4-1(8mg,0.068mmol)溶于DMF中，搅拌过夜后，加入氰基硼氢化钠(5mg,0.068mmol)及1滴醋酸，大约3小时反应完全。将反应液直接旋干后硅胶拌样上柱，DCM:MeOH＝30:1得化合物S16。¹HNMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.88-7.79(m,2H),7.54(d,J＝6.7Hz,1H),7.47–7.35(m,3H),7.27(d,J＝7.6Hz,1H),7.12(s,1H),6.90(d,J＝8.2Hz,1H),6.80(d,J＝2.0Hz,1H),6.74(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),5.56(s,2H),4.29(s,6H),3.89(br,6H),2.39(s,3H).

化合物S17的合成：

化合物S17的合成：

除了用化合物17-1替换1-9外，化合物S17的合成与化合物S10的合成相同。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.84–7.79(m,1H),7.76(d,J＝2.3Hz,1H),7.70–7.60(m,2H),7.52(t,J＝7.7Hz,1H),7.40–7.34(m,2H),7.31(d,J＝7.7Hz,1H),7.05(s,1H),6.93(d,J＝8.2Hz,1H),6.82(d,J＝2.0Hz,1H),6.77(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),5.10(s,2H),4.32(s,4H),3.99–3.76(m,6H),3.73s,2H),3.69(m,2H),3.53(d,J＝13.2Hz,1H),2.82(t,J＝11.0Hz,1H),2.56(dd,J＝12.7,3.7Hz,1H),2.46(d,J＝2.0Hz,3H),2.27(s,3H).

化合物S18的合成：

化合物S18的合成：

除了用化合物18-1替换1-9外，化合物S18的合成与化合物S10的合成相同。¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.73(s,1H),7.60(d,J＝7.7Hz,1H),7.54(d,J＝7.7Hz,1H),7.44(t,J＝7.7Hz,1H),7.35–7.26(m,2H),7.22(d,J＝7.6Hz,1H),6.97(s,1H),6.89(d,J＝8.2Hz,1H),6.77(d,J＝2.0Hz,1H),6.71(d,J＝8.7Hz,1H),5.03(s,2H),4.28(s,4H),3.97–3.59(m,9H),2.84(d,J＝10.2Hz,1H),2.74(d,J＝10.2Hz,1H),2.41(s,3H).

化合物S19的合成：

化合物S19的合成：

除了用化合物19-1替换1-9外，化合物S19的合成与化合物S10的合成相同。¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.71(s,2H),7.62(d,J＝7.2Hz,1H),7.49(s,1H),7.43(s,2H),7.30(d,J＝7.6Hz,1H),7.22(m,1H),6.97(s,1H),6.87(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),6.79–6.73(m,1H),6.70(d,J＝8.5Hz,1H),5.35–4.84(m,4H),4.27(s,4H),3.94(d,J＝14.3Hz,2H),3.82(s,2H),3.72(s,2H),3.52(m,1H),3.24(m,1H),2.38(s,3H).

化合物S20的合成：

化合物20-2的合成：

将2,4-二羟基-5-氟苯甲醛20-1(234mg,1.5mmol)溶于干燥的DCM中，加入三乙胺(0.21ml,1.5mmol)后氮气保护，至于-70℃搅拌。缓慢加入化合物1-4的DCM溶液，加毕在此温度下反应60min后，再缓慢滴加三乙胺三氢氟酸盐(0.56ml,3.5mmol)的DCM溶液，加毕在此温度下再反应30min后，再缓慢滴加Br₂(672mg,4.2mmol)的DCM溶液，继续在-70℃搅拌60min反应完全。用碳酸氢钠溶液在冰浴下中和反应液，乙酸乙酯萃取两遍，饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥后浓缩上柱，PE:EA＝8:1得产物108mg。

化合物20-3的合成：

将化合物20-2(86mg,0.2mmol)与3-溴甲基苯腈1-7(58mg，0.3mmol)溶于干燥的DMF(N,N-二甲基甲酰胺)中，加入碳酸铯(130mg,0.4mmol)于室温搅拌约两小时反应完全。反应液用水及乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂后用乙醇打浆得粗品98mg备用。

化合物S20的合成：

将化合物20-3(42mg,0.078mmol)及化合物4-1(28mg,0.24mmol)溶于DMF中，搅拌过夜后，加入氰基硼氢化钠(15mg,0.24mmol)及1滴醋酸，大约3小时反应完全。将反应液直接旋干后硅胶拌样上柱，DCM:MeOH＝30:1得化合物S20。¹HNMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.83–7.69(m,3H),7.64(dt,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.57–7.45(m,2H),7.35(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.10(s,1H),6.90(d,J＝8.2Hz,1H),6.78(d,J＝2.0Hz,1H),6.71-6.65(m,1H),6.62-6.55(m,1H),5.16(s,2H),4.30(s,4H),4.01(s,2H),3.57(q,J＝12.3Hz,4H),2.43(d,J＝2.1Hz,3H),1.02(s,3H).

化合物S21的合成：

化合物21-2的合成：

将化合物9-2(446mg,1mmol)及二甲氨基甲硫酰氯(370mg,3mmol)溶于30ml DCM中，加入三乙胺(303mg,3mmol)室温反应过夜。蒸除溶剂，用EA和水萃取两遍，合并有机相并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩上柱，PE:EA＝5:1洗脱得到389mg花儿会晤21-2。

化合物21-3的合成：

将389mg化合物21-2溶解于正十四烷(3ml)中，加热至250℃，1h后反应液直接上柱，PE:EA＝3:1洗脱得到136mg化合物21-3。

化合物21-4的合成：

将化合物21-3(136mg，0.25mmol)溶解于乙醇与水的混合溶剂中(EtOH:H2O＝2.5:1,5ml)中回流2h后，将PH调节成中性后用EA和水萃取两遍，合并有机相并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩上柱，PE:EA＝3:1洗脱得到86mg花儿会晤21-24。

化合物21-5的合成：

除了用化合物21-4替换9-2外，化合物21-5的合成与化合物9-3的合成相同。

化合物S21的合成：

除了用化合物21-5替换9-3外，化合物S21的合成与化合物S9的合成相同。¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.83–7.68(m,3H),7.62(dt,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.55–7.44(m,2H),7.33(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.28(d,J＝7.6Hz,1H),7.10(s,1H),6.90(d,J＝8.2Hz,1H),6.77(d,J＝2.0Hz,1H),6.72(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),5.90(br,3H),4.35(s,2H),4.28(s,4H),4.00(s,2H),3.55(q,J＝12.3Hz,4H),2.42(d,J＝2.1Hz,3H),1.01(s,3H).

化合物S22的合成：

化合物22-1的合成：

除了用化合物9-1替换9-2外，化合物22-1的合成与化合物21-2的合成相同。

化合物22-2的合成：

除了用化合物22-1替换21-4外，化合物22-2的合成与化合物21-5的合成相同。

化合物22-3的合成：

除了用化合物22-2替换21-2外，化合物22-3的合成与化合物21-3的合成相同。

化合物22-4的合成：

除了用化合物22-3替换21-3外，化合物22-4的合成与化合物21-4的合成相同。

化合物22-5的合成：

除了用化合物22-4替换9-1外，化合物22-5的合成与化合物9-2的合成相同。

化合物S22的合成：

除了用化合物22-5替换9-3外，化合物S22的合成与化合物S9的合成相同。¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.85–7.70(m,3H),7.58(dt,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.56–7.48(m,2H),7.36(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.30(d,J＝7.6Hz,1H),7.11(s,1H),6.92(d,J＝8.2Hz,1H),6.79(d,J＝2.0Hz,1H),6.64(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),5.90(br,3H),5.15(s,2H),4.31(s,4H),4.02(s,2H),3.56(q,J＝12.3Hz,4H),2.42(d,J＝2.1Hz,3H),1.01(s,3H).

实验实施例：化合物对PD-L1/PD1结合影响评价

1.评价化合物对PD-L1/PD1结合的测试方法

利用FRET原理，若PD-L1与PD1的结合被阻断，650nm与620nm荧光强度会发生相应变化，根据两者的比值，可推断测试化合物是否能够阻断PD-L1与PD1的结合。按照试剂盒说明条件(CISBIO，货号：63ADK000CPAPEG)，配置所需各试剂。按照下表条件依次加入相应浓度测试化合物与相应试剂。

2.化合物对PD-L1/PD1结合影响活性

(其中，～100nM表示IC₅₀值约为100nM)

本发明基于百时美施贵宝靶向PD1/PD-L1小分子抑制剂与PD-L1晶体结构，在结构中心苄醚结构引入二氟结构，使得苄醚结构单键旋转受限，固定小分子与PD-L1结合的优势构象，拟提高与PD-L1的亲和力及代谢稳定性。从上表可见，本发明含二氟苄基化合物的活性普遍高于施贵宝的BMS1002。

为凸显我们化合物的活性，我们对百时美施贵宝公司靶向PD1/PD-L1高活性化合物1002号与我们的二氟苄醚化合物进行活性对比，百时美施贵1002号化合物虽然在酶水平下有较好的抑制活性，但在生物活性测试条件下，在100nM对PD1/PD-L1结合抑制仅为51.9％；浓度降低至10nM情况下则完全没有抑制活性(-3.1％)。而本发明合成的二氟取代的苄醚化合物S1，在100nM对PD1/PD-L1的结合抑制率为86.1％；而在浓度降低至10nM水平下依然具有25.2％的结合抑制率。

进一步，我们将中心苯环上5位甲基取代替换为4位氯取代时，得到化合物S11，在10nM测试浓度下依然有56.1％的抑制活性。

由此可见，在苄醚结构中引入二氟取代，不仅可以封堵苄基在体内可能发生的代谢氧化，而且也有利于抑制PD1/PD-L1的结合(见下式)。

二氟苄醚类PD1/PD-L1小分子抑制剂活性与BMS 1002活性对比

因此，本发明的含二氟苄醚的PD1/PD-L1抑制剂对于免疫耐受和免疫损伤相关疾病均具有应用潜力。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种如下式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐，其外消旋体、R-异构体、S-异构体、可药用盐或它们的混合物：

其中：

R₁和R₂各自独立地选自下组：H、卤素、腈基、取代或未取代的C1-C3烷基、取代或未取代的C1-C3烷氧基；

R₃选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环基，或C(R)₃；其中，所述的R选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷基羟基、羧基(-COOH)、取代或未取代的C2-C8酰基、取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环基；

R₄各自独立地选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环基；或所述的R₃和R₄与相连的氮原子共同构成取代或未取代的4-6元杂环基；

或R₁与R₃，以及相邻的碳原子共同构成选自下组的结构：5-7元碳环、5-7元杂环；

A为取代或未取代的6-10元芳环、取代或未取代的5-7元芳杂单环、取代或未取代的8-10元芳杂并环；其中，所述的取代可选自氰基、三氟甲基、二氟甲基、C1-C3烷基酰基、C1-C3烷基磺酰基；

X可选自NH、O、S，优选O；

Y可选自NH、O、S，优选O；

除非特别说明，所述的取代是指基团上的氢原子被选自下组的一个或多个取代基取代：羟基、卤素、氨基、羧基、羰基、氰基、C1-C3酰胺基、C1-C3磺酰胺基、4-6元杂环基；

所述的杂环指成环原子中包括至少一个选自下组的杂原子：N、O或S。

2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的A环选自下组：取代或未取代的6元芳基、取代或未取代的6元杂芳基、取代或未取代的5元并6元杂芳基。

3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的A环选自下组：取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的苯并[1,2,5]二唑。

4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的R₃选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环基，或C(R)₃；其中，所述的R选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷基羟基、羧基(-COOH)、取代或未取代的C2-C8酰基；

R₄各自独立地选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基。

5.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物选自下组：

6.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

在惰性溶剂中，用式I-1化合物与式I-2化合物反应，得到式I化合物。

7.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括：治疗有效量的如权利要求1所述的式I化合物，或其药学上可接受的盐、外消旋体、R-异构体、S-异构体或它们的混合物中的一种或多种，以及任选的药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料和/或稀释剂。

8.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物是用于治疗选自下组的疾病：病毒感染、或癌症。

9.一种PD-1抑制剂，其特征在于，所述的PD-1抑制剂包括：抑制有效量的如权利要求1所述的式I化合物，或其药学上可接受的盐、外消旋体、R-异构体、S-异构体，或其混合物中，以及任选的药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料和/或稀释剂。

10.如权利要求1所述的式I化合物的用途，其特征在于，用于选自下组的一个或多个用途：(i)治疗或预防与PD-1活性相关的疾病；(ii)抑制PD-1的活性，或降低PD-1的表达量；(iii)制备治疗或预防与PD-1活性相关的疾病的药物组合物；(iv)制备PD-1抑制剂。