CN102014616A - 使用天然害虫控制剂掺合物的害虫控制 - Google Patents

使用天然害虫控制剂掺合物的害虫控制 Download PDF

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Abstract

本发明各实施例涉及控制目标害虫的组合物，其中所述组合物包括至少两种选自由以下组成的群组的活性成份：百里香酚乙酸酯、乙酸里哪酯、丁酸戊酯、八角茴香油、黑种草油、对聚伞花素、香叶醇、肉豆蔻酸异丙酯、d-柠檬烯、里哪醇、丁香花油、水杨酸甲酯、α-蒎烯、胡椒醛、胡椒醇、四氢里哪醇、白色百里香油、红色百里香油、百里香酚、香草醛和冬青油，其中所述组合物引发对目标害虫的协同控制。

Description

使用天然害虫控制剂掺合物的害虫控制
技术领域
本文所揭示本发明大体上涉及控制目标害虫的协同性组合物、和使用所述组合物的方法。此外，本发明各实施例涉及制备和设计控制目标害虫的改良药剂的方法。
背景技术
多年来业内已研究了多种化学物质和混合物的杀虫活性，以获得对诸如昆虫等无脊椎动物具有选择性、并且对诸如哺乳动物、鱼类、禽类及其它物种等脊椎动物毒性极小或无毒性、并且不会以其它形式留存在环境中并损害环境的产物。
大多数具有足够杀虫活性的先前已知的市售可用产品对并非产品目标的哺乳动物、鱼类、禽类或其它物种也具有毒性或有害效应。例如，有机磷化合物和氨基甲酸酯可抑制昆虫以及所有种类动物中的乙酰胆碱酯酶的活性。已知氯苯脒和相关甲脒可作用于昆虫中的奥克巴胺(octopamine)受体，但由于其在脊椎动物中可能具有心脏毒性并且在动物中具有致癌性以及对不同昆虫的作用不同，故已将其自市场撤除。对哺乳动物和其它非目标物种的毒性可能较低的其它化合物有时难以鉴别。
发明内容
本发明各实施例涉及控制目标害虫的组合物，其中所述组合物包括至少两种选自由以下组成的群组的活性成份：百里香酚乙酸酯、乙酸里哪酯、丁酸戊酯、八角茴香油、黑种草油、对聚伞花素、香叶醇、肉豆蔻酸异丙酯、d-柠檬烯、里哪醇、丁香花油、水杨酸甲酯、α-蒎烯、胡椒醛、胡椒醇、四氢里哪醇、白色百里香油、红色百里香油、百里香酚、香草醛、和冬青油，其中所述组合物引发对所述目标害虫的协同控制。
在某些实施例中，目标害虫是体内寄生虫，并且所述组合物包括至少两种选自由以下组成的群组的活性成份：α-蒎烯、百里香酚、对聚伞花素、里哪醇、百里香酚乙酸酯、和乙酸里哪酯。在某些实施例中，组合物包括至少三种选自所述群组的活性成份。在某些实施例中，组合物包括α-蒎烯、百里香酚、对聚伞花素、和里哪醇。在某些实施例中，组合物包括α-蒎烯、对聚伞花素、百里香酚乙酸酯、和乙酸里哪酯。
在某些实施例中，体内寄生虫是扁虫。在某些实施例中，扁虫是短膜壳绦虫(Hymenolepsis nana)。
在某些实施例中，体内寄生虫是线虫。在某些实施例中，线虫是猪蛔虫(Ascaris suum)或犬弓蛔线虫(Toxocara canis)。
在某些实施例中，如果α-蒎烯以1-10％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在20-75％范围内的百里香酚或百里香酚乙酸酯、含量在2％-50％范围内的对聚伞花素、和含量在3％-40％范围内的里哪醇或乙酸里哪酯。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，如果α-蒎烯以4％-8％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在30-65％范围内的百里香酚或百里香酚乙酸酯、含量在4％-40％范围内的对聚伞花素、和含量在6％-30％范围内的里哪醇或乙酸里哪酯。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，使用囊封剂来囊封活性成份。在某些实施例中，囊封剂选自由玉米醇溶蛋白(zein)和虫胶(shellac)或其组合组成的群组。
在某些实施例中，目标害虫是体外寄生虫，并且所述组合物包括至少两种选自由以下组成的群组的活性成份：丁酸戊酯、八角茴香油、黑种草油、对聚伞花素、香叶醇、肉豆蔻酸异丙酯、d-柠檬烯、里哪醇、丁香花油、水杨酸甲酯、α-蒎烯、胡椒醛、胡椒醇、四氢里哪醇、白色百里香油、红色百里香油、百里香酚、香草醛、和冬青油.
在某些实施例中，体外寄生虫是至少一种选自由以下组成的群组中者：跳蚤、蜱虫、蚊子、蓟马、和苍蝇。在某些实施例中，体外寄生虫是至少一种选自由以下组成的群组中者：猫栉头蚤(Ctenocephalides felis)、落矶山革蜱(Dermacentor andersoni)、血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)、埃及斑蚊(Aedes aegypti)、和厩螯蝇(Stomoxyscalcitrans)。
在某些实施例中，至少两种活性成份选自由以下组成的群组：香叶醇、d-柠檬烯、里哪醇、胡椒醛、四氢里哪醇、和香草醛。在某些实施例中，如果香叶醇以3％-30％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在7％-30％范围内的d-柠檬烯、含量在4％-20％范围内的里哪醇、含量在2％-25％范围内的胡椒醛、含量在6％-22％范围内的四氢里哪醇、和含量在0.3％-1.5％范围内的香草醛。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，至少两种活性成份选自由以下组成的群组：丁酸戊酯、八角茴香油、和白色百里香油。在某些实施例中，如果丁酸戊酯以15％-30％范围内的含量存于组合物中则组合物包括含量在40％-65％范围内的八角茴香油、和含量在15％-30％范围内的白色百里香油。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，至少两种活性成份是白色百里香油和冬青油。在某些实施例中，如果白色百里香油以10-30％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在25％-55％范围内的冬青油。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，至少两种活性成份选自由以下组成的群组：d-柠檬烯、丁香花油、和白色百里香油。在某些实施例中，如果d-柠檬烯以15％-35％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在30％-55％范围内的丁香花油、和含量在20％-40％范围内的白色百里香油。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，至少两种活性成份选自由以下组成的群组：α-蒎烯、百里香酚、对聚伞花素、和里哪醇。在某些实施例中，如果α-蒎烯以1-10％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在25-45％范围内的百里香酚、含量在20％-35％范围内的对聚伞花素、和含量在2％-15％范围内的里哪醇。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，至少两种活性成份选自由以下组成的群组：d-柠檬烯、里哪醇、胡椒醛、胡椒醇、四氢里哪醇、和香草醛。在某些实施例中，如果d-柠檬烯以5％-15％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在10％-25％范围内的里哪醇、含量在15％-30％范围内的胡椒醛、含量在5％-15％范围内的胡椒醇、含量在10％-30％范围内的四氢里哪醇、和含量在0.5％-5％范围内的香草醛。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在本发明各实施例中，提供抗寄生虫调配物，其中所述抗寄生虫调配物包括上述任一组合物，且所述组合物以1％-30％的范围存在，并且调配物中的其余部分为溶剂或表面活性剂。
本发明各实施例还涉及治疗个体寄生虫侵染的方法，其中所述方法包括向所述个体投与有效量的上述组合物中的任一者或含有上述组合物中任一者的抗寄生虫调配物。
本发明各实施例还可涉及上述组合物中任一者的用途，其用于制造治疗或预防寄生虫感染的药物。
在本发明各实施例中，提供医药组合物，其中所述医药组合物含有医药上适宜的载剂或稀释剂以及足量的上述组合物中的任一者。
本发明各实施例涉及制备控制目标害虫的改良药剂的方法，所述方法包括：提供包含多个部分的复合药剂；至少分离药剂的第一部分；使用含有至少一种无脊椎动物受体的筛选系统来筛选第一部分以获得第一筛选结果；比较第一筛选结果与第二筛选结果，其中第二筛选结果包括针对至少一种无脊椎动物受体筛选复合药剂的结果，并且其中第一和第二筛选结果指示针对目标害虫的潜在活性；和改变复合药剂的特征，由此制备改良药剂，其中所述改变是基于自所述筛选步骤和所述比较步骤中的至少一者获得的信息。
在某些实施例中，第一筛选结果包括高于第二筛选结果的数值，并且改变包括提高第一部分的相对含量。
在某些实施例中，第一筛选结果包括低于第二筛选结果的数值，并且改变包括降低第一部分的相对含量。
在某些实施例中，第一部分可包括单一活性成份。
在某些实施例中，改变步骤包括：获得活性成份的化学类似物或衍生物；针对无脊椎动物接受者筛选类似物或衍生物，其中筛选结果指示针对目标害虫的潜在活性，由此鉴别活性成份的活性类似物或衍生物。在某些实施例中，改变步骤可另外包括组合活性类似物或衍生物与复合药剂。
在某些实施例中，化学类似物或衍生物是作为活性成份异构体的化学类似物。在某些实施例中，化学类似物或衍生物是活性成份的化学衍生物。
在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的含有有机基团的衍生物。
在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的烷基化衍生物。在某些实施例中，烷基化衍生物是甲基化、乙基化、丙基化、丁基化、二十六烷基化、癸基化、庚基化、己基化、三十烷基化、肉豆蔻基、壬基化、辛基化、棕榈基化、戊基化、硬脂基化、异丙基化、异丁基化、二十四烷基化、二十五烷基化、二十七烷基化、二十八烷基化、二十九烷基化、戊-2-基化、异戊基化、3-甲基丁-2-基化、叔戊基化、新戊基化、十一烷基化、十三烷基化、十五烷基化、十七烷基化、十九烷基化、二十烷基化、二十一烷基化、二十二烷基化、二十三烷基化、环丁基、或环丙基衍生物。
在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的芳基化衍生物。在某些实施例中，芳基化衍生物是苯基化或联苯基-4-基化衍生物。
在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的卤化衍生物。在某些实施例中，活性成份的卤化衍生物是所述活性成份的氟化、氯化、溴化或碘化衍生物。
在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是烯基化衍生物。在某些实施例中，烯基化衍生物是油基化、烯丙基化、异丙烯基化、乙烯基化、异戊二烯基化、或植基化衍生物。
在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的羟基化衍生物。在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的巯基化衍生物。在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的羧化衍生物。在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的酰胺化衍生物。在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的胺化衍生物。在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的酯化衍生物。在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的酰化衍生物。在某些实施例中，活性成份的化学衍生物是活性成份的磺化衍生物。
在某些实施例中，改变步骤另外包括鉴别活性成份的第二活性类似物或衍生物和组合活性类似物或衍生物与第二活性类似物或衍生物。在某些实施例中，改变步骤另外包括组合活性成份的活性类似物或衍生物与复合药剂的活性成份。在某些实施例中，改变步骤另外包括组合活性成份的活性类似物或衍生物与第二复合药剂。在某些实施例中，改变步骤另外包括组合活性成份的活性类似物或衍生物与在第二复合药剂中鉴别出的活性成份。在某些实施例中，改变步骤另外包括组合活性成份的活性类似物或衍生物与在第二复合药剂中鉴别出的活性成份的活性类似物或衍生物。在某些实施例中，改变步骤另外包括组合活性成份的活性类似物或衍生物与复合药剂中的一部分。
在某些实施例中，第一部分可含有多种成份。
在某些实施例中，所述方法另外包括自所述复合药剂分离第二部分，其中改变复合药剂的特征包括组合第一与第二部分。
在某些实施例中，改变复合药剂的特征包括组合第一部分与第二复合药剂。
在某些实施例中，所述方法另外包括以下步骤：自第一部分至少分离第三部分；在第二筛选步骤中使用所述筛选系统筛选第三部分以获得第三筛选结果；在第二比较步骤中比较第三筛选结果与第四筛选结果，其中第四筛选结果包括针对至少一种无脊椎动物受体筛选改良药剂的结果，并且其中第三和第四筛选结果指示针对目标害虫的潜在活性；和改变改良药剂的特征以制备另一改良药剂，其中所述改变是基于自第二筛选步骤和第二比较步骤中至少一者获得的信息。
在某些实施例中，改变复合药剂的特性包括组合第一部分与第二复合药剂的一部分。
本发明各实施例还涉及对目标害虫具有潜在活性的改良药剂，其中改良药剂与初始药剂相比含有至少一个修改，并且其中所述修改使活性相对于所述初始药剂的活性有所变化，并且其中所述活性包括针对至少一种无脊椎动物受体的活性，并且其中针对所述接受者的活性指示针对目标害虫的潜在活性。
在某些实施例中，初始药剂是复合药剂。在某些实施例中，初始药剂是复合药剂的一部分。
在某些实施例中，活性相对于初始药剂的活性有所升高。
附图说明
所属领域技术人员应理解，下文所述图示仅用于说明性目的。所述图并不欲以任何方式限制本发明教示内容的范围。
图1中的图表展示表达果蝇(Drosophila)酪胺受体的细胞中响应掺合物27处理的Ca2+动员。
图2中的图表展示表达果蝇酪胺受体的细胞中响应掺合物27或掺合物27中个别组份(都以0.5mg/mL投与)的处理的Ca2+动员。
图3展示表达果蝇酪胺受体的细胞中响应掺合物27(“阿莫主要掺合物(Armor leadblend)”)或掺合物27中个别组份(“化学物质A”、“化学物质B”、“化学物质C”、“化学物质D”)的处理的Ca2+动员，其中所述个别组份的投与浓度反映其在掺合物27中的％(v/v)。
图4中的表格展示掺合物27(“B7001”)中个别组份在掺合物中组合时对体内寄生虫猪蛔虫的死亡率的协同效应。
图5是一系列表格，其展示如在体外分析中所测量掺合物27(“B7001”)对控制体内寄生虫猪蛔虫的体外效应。
图6中的柱状图展示组份1-5在掺合物27中组合时对动物中体内寄生虫短膜壳绦虫的治愈率的协同效应。
图7中的简图展示用于研究掺合物27对治疗感染有体内寄生虫短膜壳绦虫的小鼠的效应的实验方案。
图8中的表格展示使用掺合物27来治疗和预防小鼠短膜壳绦虫感染的投与量与治疗持续时间的效应。
图9中的表格展示不同投与剂量的掺合物27囊封调配物治疗小鼠短膜壳绦虫感染的体内治愈率。
图10中的表格展示不同投与剂量的掺合物27(“阿莫掺合物(B7001)”)囊封调配物治疗小鼠短膜壳绦虫感染的体内治疗(虫卵减少方面)。
图11中的表格展示掺合物11A(“25b/4a(B5028)”)和8(“25b/4b”)对体外寄生虫猫栉头蚤(猫蚤)在不同测试表面上的死亡率的效应。
图12中的柱状图展示不同浓度的掺合物75(“F-4002”)与相同比较浓度的市售商品相比在暴露后1、2和4小时对体外寄生虫猫栉头蚤(猫蚤)死亡率的效应。
图13中的柱状图展示不同浓度的掺合物75(“F-4002”)与相同比较浓度的市售商品相比在暴露后1、2和4小时对体外寄生虫落矶山革蜱(林蜱)死亡率的效应。
图14中的柱状图展示2.5％(v/v)的掺合物75(“F-4002”)与相同比较浓度的市售商品相比在暴露后1、2、4和24小时对体外寄生虫落矶山革蜱(林蜱)死亡率的效应。
图15中的柱状图展示不同浓度的掺合物75(“F-4002”)与相同比较浓度的市售商品相比在暴露后72小时对体外寄生虫落矶山革蜱(林蜱)死亡率的残留效应。
图16中的表格展示不同掺合物与相同比较浓度的市售掺合物相比对体外寄生虫猫栉头蚤(猫蚤)和血红扇头蜱(蜱虫)的死亡率的效应。
图17中的柱状图展示掺合物4(“XL101”)的不同调配物与相同比较浓度的市售商品相比在处理后0、1、2、4和6小时对体外寄生虫埃及斑蚊的驱避性。
图18中的柱状图展示掺合物4(“CAR-01”)的不同皮肤乳膏调配物与相同比较浓度的市售商品相比对体外寄生虫埃及斑蚊的驱避性的持续时间。
图19中的柱状图展示不同掺合物(掺合物11B和8)在不同浓度下对蓟马的击倒(knockdown)和死亡率的效应。
图20中的表格展示喷雾调配物中的不同掺合物在暴露后30分钟和4小时对蜱虫的杀灭效能。
图21中的表格展示不同掺合物与市售调配物相比的残留活性。
图22中的示意图展示使用表达目标受体的转染细胞系的筛选方法。
图23中的图表展示3H-酪胺与表达酪胺受体(“TyrR”)的S2细胞中膜部分的饱和结合曲线。
图24中的图表展示3H-酪胺与表达酪胺受体(“TyrR”)的S2细胞中膜部分的抑制结合曲线。
图25中的图表展示酪胺在经编码酪胺受体(“pAC-TyrR”)的质粒或经空载体对照质粒(“pAC”)转染的S2细胞中对细胞内钙水平(“[Ca2+]i”)的效应。
具体实施方式
本发明各实施例提供控制目标害虫的组合物。
本发明各实施例包括可包括一或多种植物精油的控制目标害虫的组合物以及使用这些组合物的方法。植物精油在组合时可具有协同效应。组合物也可包括非挥发油，其通常是非挥发性无味植物油。另外，在某些实施例中，这些组合物可由公认安全(GRAS)的化合物组成。在某些实施例中，组合物含有至少两种选自由以下组成的群组的活性成份：百里香酚乙酸酯、乙酸里哪酯、丁酸戊酯、八角茴香油、黑种草油、对聚伞花素、香叶醇、肉豆蔻酸异丙酯、d-柠檬烯、里哪醇、丁香花油、水杨酸甲酯、α-蒎烯、胡椒醛、胡椒醇、四氢里哪醇、白色百里香油、红色百里香油、百里香酚、香草醛、和冬青油。
目标害虫可选自(例如)由以下组成的群组：真菌、植物、动物、无核原生物、原生生物、和诸如此类。目标害虫可为节肢动物物种，例如昆虫、蜘蛛、或蛛类。目标害虫可为属于动物目的物种，例如蜱螨亚纲(Acari)、虱目(Anoplura)、蜘蛛目(Araneae)、蜚蠊目(Blattodea)、鞘翅目(Coleoptera)、弹尾目(Collembola)、双翅目(Diptera)、直翅目(Grylloptera)、异翅亚目(Heteroptera)、同翅目(Homoptera)、膜翅目(Hymenoptera)、等足目(Isopoda)、等翅目(Isoptera)、鳞翅目(Lepidoptera)、螳螂目(Mantodea)、食毛目(Mallophaga)、脉翅目(Neuroptera)、蜻蜓目(Odonata)、直翅目(Orthoptera)、啮虫目(Psocoptera)、蚤目(Siphonaptera)、综合纲(Symphyla)、缨尾目(Thysanura)、缨翅目(Thysanoptera)、和诸如此类。在本发明优选实施例中，目标害虫是寄生虫。在某些实施例中，目标害虫是体内寄生虫。在某些实施例中，目标害虫是体外寄生虫。
本发明各实施例涉及筛选具有害虫控制潜力的组合物的方法、控制害虫的组合物、以及使用这些组合物的方法。
本文所用“害虫”可意指任何期望控制其存在的有机体。害虫可包括(例如)细菌、绦虫、真菌、昆虫、线虫、寄生虫、植物、和诸如此类。
本文所用“杀虫性”可意指(例如)抗细菌性、抗真菌性、抗寄生虫性、除草性、杀昆虫性、和诸如此类。
出于简化的目的，在本申请案中应使用术语“昆虫”；然而，应理解术语“昆虫”不仅仅是指昆虫，而且意指螨虫、蜘蛛、和其它蜘蛛类、幼虫、和类似无脊椎动物。同样出于本申请案的目的，术语“害虫控制”应意指具有驱避效应、杀虫效应、或同时具有两种效应。“驱避效应”是如下效应：其中自已经组合物处理的宿主或区域驱避驱除的昆虫多于未经所述组合物处理的对照宿主或区域。在某些实施例中，驱避效应是如下效应：其中自已经组合物处理的宿主或区域驱避驱除至少约75％的昆虫。在某些实施例中，驱避效应是如下效应：其中自已经组合物处理的宿主或区域驱避驱除至少约90％的昆虫。“杀虫效应”是如下效应：其中用组合物处理使至少约1％的昆虫死亡。从这一点来说，组合物的LC1至LC100(致死浓度)或LD1至LD100(致死剂量)可引发杀虫效应。在某些实施例中，杀虫效应是如下效应：其中用组合物处理使至少约5％的暴露昆虫死亡。在某些实施例中，目标害虫是非昆虫，例如寄生虫。
可使用本发明各实施例来控制寄生虫。本文所用术语“寄生虫”包括体内寄生虫和体外寄生虫。体内寄生虫包括(但不限于)原生动物，包括肠内原生动物、组织原生动物、和血内原生动物。体外寄生虫包括(但不限于)线虫、蠕虫、蜱虫、蚤类、虱子和其它在外口上或皮肤表面上或皮肤中发现的有机体。
在某些实施例中，杀虫效应是如下效应：其中用组合物处理使至少约10％的暴露害虫死亡。在某些实施例中，杀虫效应是如下效应：其中用组合物处理使至少约25％的害虫死亡。在某些实施例中，杀虫效应是如下效应：其中用组合物处理使至少约50％的暴露害虫死亡。在某些实施例中，杀虫效应是如下效应：其中用组合物处理使至少约75％的暴露害虫死亡。在某些实施例中，杀虫效应是如下效应：其中用组合物处理使至少约90％的暴露害虫死亡。
在本发明某些实施例中，用本发明组合物可在数秒至数分钟内导致击倒目标害虫。“击倒”是如下效应：其中用组合物处理使至少约1％害虫表现运动性降低。在某些实施例中，击倒是如下效应：其中用组合物处理使至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、或50％的暴露害虫死亡。在某些实施例中，击倒是如下效应：其中用组合物处理使至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、或95％的暴露害虫死亡。
可使用本发明组合物通过直接处理宿主或处理宿主所在区域(例如室内生活空间、室外中庭或花园)来控制目标害虫。出于本申请案的目的，宿主定义为植物、人类或其它动物。在某些实施例中，宿主是昆虫。
处理可包括使用油基调配物、水基调配物、残留调配物、和诸如此类。在某些实施例中，可采用调配物组合来获得不同调配物类型的益处。
本发明各实施例涉及控制昆虫的组合物和使用这些组合物的方法。本发明组合物可包括以下油中的任一者、或其混合物。
本发明各实施例涉及控制昆虫的组合物和使用这些组合物的方法。本发明组合物可包括以下油中的任一者、或其混合物。
实例性活性成份
水杨酸甲酯，也称作桦木油。水杨酸甲酯是冬青油的主要组份并且有时可与冬青油互换使用。其为许多种植物的天然产物，是水杨酸的甲基酯，并且可通过水杨酸与甲醇的缩合反应以化学方式产生。因此把某些产生水杨酸甲酯的植物称作冬青(通用名)。植物可使用水杨酸甲酯作为信息素来向其它植物警告病原体(谢雷夫(Shulaev)等人(1997年2月20日)自然(Nature)385：718-721)。水杨酸甲酯的释放也可在有益昆虫的募集反应中用作外信息素助剂以杀灭食草昆虫(詹姆斯(James)等人(2004年8月)化学生态杂志(J.Chem.Ecol.)30(8)：1613-1628)。多种植物可产生水杨酸甲酯，包括鹿蹄草科(Pyrolaceae)和白珠树属(Gaultheria)与桦木属(Betula)中的物种。应注意，如果本文中所揭示的给定掺合物或调配物或其它组合物含有冬青油，那么本发明也涵盖含有水杨酸甲酯来代替冬青油的替代性实施例。同样，如果掺合物或调配物或其它组合物包括水杨酸甲酯，那么本发明也涵盖含有冬青油的替代性实施例。
百里香油是可自某些植物提取的天然产物，包括唇形科(Labiatae)物种；例如，百里香油可得自百里香(Thymus vulgaris)(也称作伊勒百里香(T.ilerdensis)、艾斯百里香(T aestivus)、和瓦伦百里香(T.velantianus))，其一般是通过蒸馏自植物多叶的顶部和柔嫩的茎部提取。百里香油公认有两种市售种类，即‘红色’(粗馏出液，其呈深橙色)和‘白色’(无色或淡黄色，其是通过再次蒸馏精馏的‘红色’)。百里香油主要含有酚类(百里香酚和香芹酚)、以及冰片、里哪醇、和聚伞花素、和迷迭香酸与熊果酸。如果一实施例阐述使用白色百里香油，则本发明明确涵盖用以下物质来替代白色百里香油的其它实施例：红色百里香油、百里香酚、香芹酚、冰片、里哪醇、聚伞花素、迷迭香酸、熊果酸、或这些物质中任一者彼此的混合物或与白色百里香油的混合物。特别优选者是白色百里香油与红色百里香油的混合物，其含有10％或更低、更优选地5％或更低、并且最优选为1％的红色百里香油。
百里香酚是聚伞花素的单萜酚衍生物(C10H13OH)，其是香芹酚的异构体，在百里香油中发现，并且提取物为白色结晶物质。其也称作羟基聚伞花素和5-甲基-2-(1-甲基乙基)苯酚。如果一实施例阐述使用百里香酚，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代百里香酚的其它实施例：香芹酚、白色百里香油、红色百里香油、或这些物质中任一者彼此的混合物或与白色百里香油的混合物。
黑种草油得自家黑种草(Nigella sativa)的种子。其主要成份是香芹酮、α-蒎烯、桧烯、β-蒎烯、和对聚伞花素、以及脂肪酸(肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、和花生酸)。如果一实施例阐述使用任一形式的黑种草油，那么本发明明确涵盖用以下物质来代替黑种草油的其它实施例：d-香芹酮、1-香芹酮、d-香芹酮与1-香芹酮的外消旋混合物、α-蒎烯、桧烯、β-蒎烯、或对聚伞花素、或这些物质中任一者彼此的混合物、与肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、或花生酸中任一者的混合物、或与任一形式的黑种草油的混合物。
里哪醇是在许多花卉植物和香料植物中发现的天然存在的萜醇化学物质。其也称作3，7-二甲基辛-1，6-二烯-3-醇。其具有两种立体异构形式：(S)-(+)-里哪醇(称作芳樟醇)和(R)-(-)-里哪醇(称作芫荽醇)。里哪醇可以里哪醇混合物(linalool coeur)形式(外消旋混合物，CAS编号78-70-6)获得，或呈优选衍生物形式，例如四氢里哪醇(饱和形式)、乙基里哪醇、乙酸里哪酯、和假性乙酸里哪酯(7-辛烯-2-醇、2-甲基-6-亚甲基：乙酸酯)。如果一实施例阐述使用任一形式的里哪醇，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代里哪醇的其它实施例：芳樟醇、芫荽醇、四氢里哪醇、乙基里哪醇、乙酸里哪酯、假性乙酸里哪酯、或这些物质中任一者彼此的混合物或与任一形式的里哪醇的混合物。类似地，如果一实施例阐述使用四氢里哪醇，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代四氢里哪醇的其它实施例：芳樟醇、芫荽醇、外消旋里哪醇、乙基里哪醇、乙酸里哪酯、假性乙酸里哪酯、或这些物质中任一者彼此的混合物或与四氢里哪醇的混合物。另外，如果一实施例阐述使用乙基里哪醇，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代乙基里哪醇的其它实施例：芳樟醇、芫荽醇、四氢里哪醇、外消旋里哪醇、乙酸里哪酯、假性乙酸里哪酯、或这些物质中任一者彼此的混合物或与乙基里哪醇的混合物。最后，如果一实施例阐述使用乙酸里哪酯，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代乙酸里哪酯的其它实施例：芳樟醇、芫荽醇、四氢里哪醇、外消旋里哪醇、乙基里哪醇、假性乙酸里哪酯、或这些物质中任一者彼此的混合物或与乙酸里哪酯的混合物。
香叶醇也称作香茅醇和3，7-二甲基-2，6-辛二烯-1-醇，其是类单萜和醇。其为玫瑰油和玫瑰草油的主要部分。其用于香水中并用作调味剂。蜜蜂的香腺也可产生香叶醇以帮助其标记具有花蜜的花朵和定位蜂房的入口。香叶醇可以高纯度形式获得，例如精制香叶醇，FCC(食品化学品药典级(Food Chemicals Codex grade))，其是纯度至少为98％的香叶醇和纯度至少为99％的香叶醇和橙花醇。香叶醇还可以(例如)香叶醇60、香叶醇85、和香叶醇95形式来获得。在所获得香叶醇为香叶醇60、香叶醇85、或香叶醇95时，约40％、15％、或5％的油可为橙花醇。橙花醇是单萜(C10H18O)，香叶醇的顺式异构体，其可自玫瑰精油、橙花精油和薰衣草油来提取。柠檬醛(3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛或柠檬醛(lemonal))是橙花醇和香叶醇的醛形式的通用名，并且可得自香柠桃木(lemon myrtle)、山鸡椒(Litsea cubeba)、芸香草(lemongrass)、柠檬马鞭草(Lemon verbena)、柠檬香蜂草(lemon balm)、柠檬、和桔子。柠檬醛的E-异构体称作香叶醛或柠檬醛A。Z-异构体称作橙花醛或柠檬醛B。如果一实施例阐述使用任一形式的香叶醇，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代香叶醇的其它实施例：另一种形式的香叶醇(例如精制香叶醇FCC或任何香叶醇/橙花醇化合物)、橙花醇、香叶醛、橙花醛、柠檬醛、或这些物质中任一者彼此的混合物或与任一形式的香叶醇的混合物。类似地，如果一实施例阐述使用任一形式的柠檬醛，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代柠檬醛的其它实施例：某种形式的香叶醇(例如精制香叶醇FCC或任何香叶醇/橙花醇混合物)、橙花醇、香叶醛、橙花醛、或这些物质中任一者彼此的混合物或与柠檬醛的混合物。
香草醛(也称作甲基香草醛、香荚兰醛、香兰素(vanilin)、和4-羟基-3-甲氧基苯甲醛)是香草豆提取物的主要组份。除香草醛以外，天然香草提取物还含有对羟基苯甲醛、香草酸、胡椒醛、和对羟基苯甲酸。合成香草醛在食品、饮料和药物中用作调味剂。如果一实施例阐述使用香草醛，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代香草醛的其它实施例：天然香草提取物、对羟基苯甲醛、香草酸、胡椒醛、乙基香草醛、或对羟基苯甲酸、或这些物质中任一者彼此的混合物或与香草醛的混合物。
肉豆蔻酸异丙酯是异丙醇与肉豆蔻酸的酯；其也称作1-十四烷酸、甲基乙基酯、肉豆蔻酸异丙基酯、和十四烷酸丙-2-基酯。如果一实施例阐述使用肉豆蔻酸异丙酯，那么本发明明确涵盖可用以下类似化学物质替代肉豆蔻酸异丙酯的其它实施例：例如棕榈酸异丙酯、等温异丙酯(isopropyl isothermal)、油灰硬脂酸酯(putty stearate)、异硬脂醇新戊酸酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、油酸癸酯、硬脂酸辛酯、棕榈酸辛酯、异鲸蜡醇硬脂酸酯、或PPG肉豆蔻醇丙酸酯、或这些物质中任一者彼此的混合物或与肉豆蔻酸异丙酯的混合物。
胡椒醛(天芥菜醛、原儿茶醛亚甲基醚)是呈透明晶体形式的芳香族醛(C8H6O3)，并且具有花香味。其用作调味剂并用于香水中。其可通过氧化胡椒醇来获得。如果一实施例阐述使用胡椒醛，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代胡椒醛的其它实施例：胡椒醇、3，4-亚甲基二氧苄胺、3，4-亚甲基二氧扁桃腈、胡椒基酸、胡椒醇乙酸酯、胡椒基丙酮、亚胡椒基丙酮、异丁酸胡椒酯、胡椒基丁醚、甘氨酸胡椒酯、或原儿茶酸、或这些物质中任一者彼此的混合物或与胡椒醛的混合物。类似地，如果一实施例阐述使用胡椒醇，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代胡椒醇的其它实施例：胡椒醛、3，4-亚甲基二氧苄胺、3，4-亚甲基二氧扁桃腈、胡椒基酸、胡椒醇乙酸酯、胡椒基丙酮、亚胡椒基丙酮、异丁酸胡椒酯、胡椒基丁醚、甘氨酸胡椒酯、或原儿茶酸、或这些物质中任一者彼此的混合物或与胡椒醇的混合物。
蒎烯涵盖异构形式α-蒎烯和β-蒎烯；二者都是松脂的重要成份。重要的蒎烯衍生物包括双环酮马鞭草烯酮和白菊酮。如果一实施例阐述使用α-蒎烯，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代α-蒎烯的其它实施例：β-蒎烯、马鞭草烯酮、或白菊酮、或这些物质中任一者彼此的混合物或与α-蒎烯的混合物。如果一实施例阐述使用β-蒎烯，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代β-蒎烯的其它实施例：α-蒎烯、马鞭草烯酮、或白菊酮、或这些物质中任一者彼此的混合物或与β-蒎烯的混合物。
聚伞花素是单萜相关烃，其是由经甲基和异丙基取代的苯环组成。存在天然的对位取代形式并且是茴香油和百里香油的组份。还存在邻位和间位取代形式，但较不常见。如果一实施例阐述使用对聚伞花素，那么本发明明确涵盖可用以下物质来替代萜品油烯的其它实施例：邻聚伞花素或间聚伞花素、或这些物质中任一者彼此的混合物或与对聚伞花素的混合物。
本发明组合物中也可包括其它成份，包括(但不限于)黑种草油、冰片、樟脑萜、香芹酚、β-石竹烯、柠檬酸三乙酯、对聚伞花素、二氢茉莉酮酸甲酯(hedione)、天芥菜醛、氢化松香酸甲酯(hercolyn D)、丁香花油、酸橙油、柠檬烯、里哪醇、乙基里哪醇、四氢里哪醇、α-蒎烯、β-蒎烯、胡椒醛、胡椒醇、α-萜品烯、叔丁基对苯醌、α-侧柏烯、和柠檬酸三乙酯。
此外，可使用若干种长链醛，例如辛醛、壬醛、癸醛、和月桂醛。如果一实施例阐述使用一种所述醛，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代指定醛的其它实施例：任一其它醛、或这些醛中任一者彼此的混合物或与指定醛的混合物。
生育酚是一类由各种甲基化酚类组成的化学物质，其中某些具有维生素E活性。生育酚包括α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、和δ-生育酚。属于此家族的还有生育三烯酸，包括α-生育三烯酸、β-生育三烯酸、γ-生育三烯酸、和δ-生育三烯酸。在优选实施例中，采用这些组合物的混合物，例如生育酚γ-tenox或Tenox GT。如果一实施例阐述使用一种生育酚，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代指定生育酚的其它实施例：任何其它生育酚、或这些生育酚中任一者彼此的混合物或与指定生育酚的混合物。
在喷雾混合物的实施例中可使用某些液化烃的混合物(例如推进剂A-46、A-70、或142A)作为推进剂。如果一实施例阐述使用一种推进剂，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代指定推进剂的其它实施例：任何其它推进剂、或这些推进剂中任一者彼此的混合物或与指定推进剂的混合物。
在本发明包括丁香花油的某些实例性组合物中，可用以下化合物中的一或多种来代替丁香花油：四氢里哪醇、乙基里哪醇、天芥菜醛、二氢茉莉酮酸甲酯、氢化松香酸甲酯、和柠檬酸三乙酯。在本发明包括黑种草油的某些实例性组合物中，可用以下化合物中的一或多种来代替黑种草油：α-侧柏烯、α-蒎烯、β-蒎烯、对聚伞花素、柠檬烯、和叔丁基对苯醌。在本发明包括百里香油的某些实例性组合物中，可用以下化合物中的一或多种来代替百里香油：百里香酚、α-侧柏酮；α-蒎烯、樟脑萜、β-蒎烯、对聚伞花素、α-萜品烯、里哪醇、冰片、β-石竹烯、和香芹酚。在本发明包括水杨酸甲酯的某些实例性实施例中，可用冬青油来代替水杨酸甲酯。在本发明包括冬青油的某些实例性实施例中，可用水杨酸甲酯来代替冬青油。
D-柠檬烯是柑橘(芸香科(Rutaceae)植物)的主要气味成份，并且发现尤其存于柑橘油、柠檬油、酸橙油和橙油中。如果一实施例阐述使用d-柠檬烯，那么本发明明确涵盖用以下物质来替代d-柠檬烯的其它实施例：柠檬油、橙油、酸橙油、柑橘油、1-柠檬烯、或双戊烯(d-柠檬烯与1-柠檬烯的外消旋混合物)。
用于制备本发明实例性组合物的油可自市场购得。
本发明实例性实施例还可包括肉豆蔻酸异丙酯，其为异丙醇与肉豆蔻酸的酯，用作增稠剂和软化剂。
在所述包括不止一种油的组合物中，每种油可占组合物混合物重量的约0.1％或更低至约99％或更高。例如，本发明一组合物包含约1％的百里香酚和约99％的香叶醇。任选地，组合物可另外包含非挥发油，其为非挥发性无味植物油。可用于本发明调配物中的非挥发油包括(但不限于)蓖麻油、玉米油、茴香油、矿物油、橄榄油、花生油、红花油、芝麻油、和大豆油。
在某些实施例中，害虫控制组合物可包括水杨酸甲酯、百里香油、百里香酚、和/或香叶醇中的至少一者。在其它实例性实施例中，害虫控制组合物包括水杨酸甲酯、百里香油、百里香酚、和/或香叶醇中的至少两者。在其它实例性实施例中，本发明害虫控制组合物包括水杨酸甲酯、百里香酚、和香叶醇。
在某些实施例中，害虫控制组合物可包括至少两种选自由以下组成的群组的活性成份：百里香酚乙酸酯、乙酸里哪酯、丁酸戊酯、八角茴香油、黑种草油、对聚伞花素、香叶醇、肉豆蔻酸异丙酯、d-柠檬烯、里哪醇、丁香花油、水杨酸甲酯、α-蒎烯、胡椒醛、胡椒醇、四氢里哪醇、白色百里香油、红色百里香油、百里香酚、香草醛、和冬青油。
在某些实施例中，害虫控制组合物可包括至少两种选自由以下组成的群组的活性成份：α-蒎烯、百里香酚、对聚伞花素、里哪醇、百里香酚乙酸酯、和乙酸里哪酯。在某些实施例中，害虫控制组合物可包括至少三种选自所述群组的活性成份。在某些实施例中，组合物包括α-蒎烯、百里香酚、对聚伞花素、和里哪醇。在某些实施例中，组合物包括α-蒎烯、对聚伞花素、百里香酚乙酸酯、和乙酸里哪酯。
在某些实施例中，如果α-蒎烯以1-10％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在20-75％范围内的百里香酚或百里香酚乙酸酯、含量在2％-50％范围内的对聚伞花素、和含量在3％-40％范围内的里哪醇或乙酸里哪酯。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，如果α-蒎烯以4％-8％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在30-65％范围内的百里香酚或百里香酚乙酸酯、含量在4％-40％范围内的对聚伞花素、和含量在6％-30％范围内的里哪醇或乙酸里哪酯。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，害虫控制组合物可包括至少两种选自由以下组成的群组的活性成份：丁酸戊酯、八角茴香油、黑种草油、对聚伞花素、香叶醇、肉豆蔻酸异丙酯、d-柠檬烯、里哪醇、丁香花油、水杨酸甲酯、α-蒎烯、胡椒醛、胡椒醇、四氢里哪醇、白色百里香油、红色百里香油、百里香酚、香草醛、和冬青油。
在某些实施例中，至少两种活性成份选自由以下组成的群组：香叶醇、d-柠檬烯、里哪醇、胡椒醛、四氢里哪醇、和香草醛。在某些实施例中，如果香叶醇以3％-30％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在7％-30％范围内的d-柠檬烯、含量在4％-20％范围内的里哪醇、含量在2％-25％范围内的胡椒醛、含量在6％-22％范围内的四氢里哪醇、和含量在0.3％-1.5％范围内的香草醛。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，至少两种活性成份选自由以下组成的群组：丁酸戊酯、八角茴香油、和白色百里香油。在某些实施例中，如果丁酸戊酯以15％-30％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在40％-65％范围内的八角茴香油、和含量在15％-30％范围内的白色百里香油。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，至少两种活性成份是白色百里香油和冬青油。在某些实施例中，如果白色百里香油以10-30％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在25％-55％范围内的冬青油。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，至少两种活性成份选自由以下组成的群组：d-柠檬烯、丁香花油、和白色百里香油。在某些实施例中，如果d-柠檬烯以15％-35％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在30％-55％范围内的丁香花油、和含量在20％-40％范围内的白色百里香油。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，至少两种活性成份选自由以下组成的群组：α-蒎烯、百里香酚、对聚伞花素、和里哪醇。在某些实施例中，如果α-蒎烯以1-10％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在25-45％范围内的百里香酚、含量在20％-35％范围内的对聚伞花素、和含量在2％-15％范围内的里哪醇。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
在某些实施例中，至少两种活性成份选自由以下组成的群组：d-柠檬烯、里哪醇、胡椒醛、胡椒醇、四氢里哪醇、和香草醛。在某些实施例中，如果d-柠檬烯以5％-15％范围内的含量存于组合物中，则组合物包括含量在10％-25％范围内的里哪醇、含量在15％-30％范围内的胡椒醛、含量在5％-15％范围内的胡椒醇、含量在10％-30％范围内的四氢里哪醇、和含量在0.5％-5％范围内的香草醛。这些百分比可为重量百分比或体积百分比。
尽管本发明实施例可包括活性成份、载剂、惰性成份、和其它调配组份，但优选实施例始于初始掺合物。初始掺合物优选地为含有两种或更多种活性成份以及任选地额外成份的协同性组合。随后可使初始掺合物与其它成份组合以产生调配物。因此，如果本文给出浓度、浓度范围或含量，所述量通常以初始掺合物为参照。因此，在通过添加其它成份来进一步修饰初始掺合物以产生调配物时，活性成份的浓度与调配物中其它成份的存在成比例降低。
在优选掺合物中，可以重量计以10％或更低至60％或更高的浓度；以15％-50％的浓度；以20％-45％的浓度；或以约39％的浓度包括水杨酸甲酯。
可以重量计以5％或更低至40％或更高的浓度；以15％-25％的浓度；或以约20％的浓度包括百里香酚。
可以重量计以5％或更低至40％或更高的浓度、以15％-25％的浓度、或以约20％的浓度包括百里香油。可以重量计以5％或更低至40％或更高的浓度、以15％-25％的浓度、或以约20％的浓度包括香叶醇。
在实例性实施例中，害虫控制调配物还以10-30％、更优选15-25％、并且最优选约20％的浓度包括肉豆蔻酸异丙酯。优选地以0.5％至4％、最优选约1％的浓度包括香草醛。
在本发明实例性实施例中，百里香酚以晶体形式存在。通过使用晶体形式可稳定害虫控制组合物中挥发性较强的组份并使其保留在需要较长时间害虫控制的区域中。于2006年5月10日申请的美国临时专利申请案第60/799,434号对此加以阐释，其是全文以引用方式并入本文中。当然，可包括其它组份以稳定害虫控制组合物。稳定剂可为晶体粉末、粉尘、颗粒或可为害虫控制组合物提供吸收表面区域的其它形式。在室温下结晶并且可在本发明调配物中用作稳定剂的其它植物精油包括(但不限于)肉桂醇晶体、水杨酸晶体、柏木脑晶体、胡椒醛晶体、胡椒醇晶体、(s)-顺式马鞭草烯醇晶体和DL-薄荷脑晶体，其在室温下都为晶体。另一可用稳定剂是以下物质的晶体：维森斯(Winsense)WS-3、环己甲酰胺、N-甲基-2-(1-甲基乙基)和维森斯WE-23、(N-2，3-三甲基-2-异丙基丁酰胺)和诸如此类。另一可用稳定剂是滑石粉。
为产生稳定调配物，混合稳定剂与昆虫控制组合物以使得所述组合物可包被稳定剂，如上文所提及的美国临时专利申请案第60/799,434号中所述。
本发明组合物可在与适宜载剂和任选地适宜表面活性剂的混合物中包含植物精油化合物和/或其天然和/或合成衍生物，包括外消旋混合物、对映异构体非对映异构体、水合物、盐、溶剂合物和代谢物等。
适宜载剂可包括业内已知用于植物精油的任何载剂，前提是所述载剂对本发明组合物无有害影响。本文所用术语“载剂”意指惰性或流体材料，其可为无机或有机材料且具有合成或天然来源，将其与活性化合物混合或调配在一起可有助于将所述化合物施加至容器或硬纸盒或其它欲处理物体，或有助于所述化合物的储存、运输和/或操作。一般来说，任何通常用于调配驱避剂、杀虫剂、除草剂或杀真菌剂的材料都适宜。本发明组合物可单独使用；或呈与所述固体和/或液体可分散载剂媒剂和/或其它已知相容活性药剂的混合物形式，所述相容活性药剂是(例如)其它驱避剂、杀虫剂、或杀螨剂、杀线虫剂、杀真菌剂、杀细菌剂、灭鼠剂、除草剂、肥料、生长调节剂等；或者如果需要则呈自其制备的用于特定应用的特定剂量制剂形式，例如可如此即用的溶液、乳液、悬浮液、粉末、糊剂、和颗粒。如果需要，可将本发明组合物与可用于习用害虫控制剂的类型的习用惰性杀虫剂稀释剂或膨胀剂调配或混合在一起，例如习用可分散载剂媒剂，例如气体、溶液、乳液、悬浮液、可乳化浓缩物、喷雾粉末、糊剂、可溶性粉末、粉化剂、颗粒、发泡体、糊剂、锭剂、气溶胶、浸渍有活性化合物的天然和合成材料、囊封剂、微胶囊、用于种子上的涂布组合物、和用于燃烧设备(例如熏蒸药筒、熏蒸罐和熏蒸盘管)的调配物，以及ULV冷雾和暖雾调配物等。
实例性囊封剂可包括(但不限于)阿拉伯胶、糊精、低粘度变性淀粉、阿拉伯半乳聚糖、金合欢树胶、酪蛋白、明胶、羧甲基纤维素、黄蓍胶、刺梧桐胶(karaya)、藻酸钠、单宁(tannin)、纤维素、玉米醇溶蛋白、虫胶、或其混合物。
本发明组合物可另外包含表面活性剂。本发明可用表面活性剂的实例包括乳化剂，例如非离子型和/或阴离子型乳化剂(例如脂肪酸的聚氧化乙烯酯、脂肪醇的聚氧化乙烯醚、烷基硫酸酯、烷基磺酸酯、芳基磺酸酯、白蛋白水解产物等，并且尤其是烷基芳基聚乙二醇醚、硬脂酸镁、油酸钠等)；和/或分散剂，例如木质素、亚硫酸盐废液、甲基纤维素等。
在某些实施例中，优选者为水基调配物。尽管昆虫控制剂的油基调配物一般更有效，但水基调配物的优势在于不会在经处理表面上留下油性残留物。害虫控制用水基调配物的制备揭示于2006年5月18日申请的美国临时专利申请案第60/747,592号中，其是全文以引用方式并入本文中。
在某些实施例中，提供水基调配物，其中水和表面活性剂以重量计占组合物混合物的约1％至约99％。例如，本发明一组合物包含约1％的水与表面活性剂和约99％的组合物，其包括：约39％水杨酸甲酯；约20％百里香酚(晶体)；约20％香叶醇60；和约1％香草醛。在另一实例中，本发明一组合物包含约50％水与表面活性剂和约50％的组合物，其包括：约39％水杨酸甲酯；约20％百里香酚(晶体)；约20％香叶醇60；和约1％香草醛。
提供水基调配物的表面活性剂以促进昆虫控制组合物与水的混合。表面活性剂可包括具有羧基的末端，其面向水分子；以及烃末端，其面向昆虫控制组合物中的油组份。因此，表面活性剂使得水与组合物中的油组份可混合而形成乳液。本发明调配物中可使用各种表面活性剂，例如月桂基硫酸钠(SLS，阴离子型)、氯己定(chlorhexidine)(CLH，阳离子型)、和帕洛沙姆(Poloxamer)407(POL407，非离子型)、十二烷基硫酸钠(SDS)、胆酸钠、脱氧胆酸钠、N-月桂酰肌氨酸、月桂基二甲基氧化胺(LDAO)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸酯、或其混合物。
水基调配物的溶剂用于降低乳液的水-油表面张力。通过降低此表面张力，可使油斑更易于分散于水中，并且使得油-水混合物可在经处理表面上形成薄膜，所述表面可包括室内区域、室外区域、植物和昆虫自身。溶剂也可用作载剂和增效剂。溶剂可帮助快速渗透受控制昆虫的细胞膜，从而确保足量活性成份到达作用位点。可使用各种溶剂，例如合成异构烷油(isopar)M、合成异构烷油C、或其混合物。
为制造水基调配物，将含有一或多种植物精油的昆虫控制组合物与水混合以产生浆液。随后添加表面活性剂以产生水基调配物的某些实施例。为产生水基调配物的其它实施例，随后添加溶剂。昆虫控制组合物在调配物中的最终浓度可为(例如)约10-25％。表面活性剂在调配物中的最终浓度可为(例如)约1-10％。溶剂在调配物中的最终浓度可为(例如)0至约10％。本发明某些实施例的特征在于快速杀灭，例如一触即灭(kill-on-contact)，并且某些实施例的特征在于残留效应，即调配物保留在经处理表面上，从而实现延长时间的害虫控制。如果实施例具有残留效应特征，则应注意，调配物的溶剂-组份并非必需。在本发明所述实施例中，调配物包括：水、昆虫控制组合物、表面活性剂、和稳定剂，例如在2005年5月10日申请的标题为“具有残留活性的昆虫控制组合物调配物和其制造及使用方法(Formulations of Insect-ControlCompositions having Residual Activity and Methods for Production and Use Thereof)”的专利申请案中所述者。所述实施例可任选地包括本文所述溶剂。
在制备水基调配物后，可将其施加至期望区域以在所述区域实现害虫控制。在施加后，其可在经处理表面上形成薄膜，从而粘附至所述表面并提供有效害虫控制。可以业内已知的多种方式将调配物施加至区域，例如可将调配物制备为气溶胶或触发式喷雾剂。
在某些实施例中，提供包括一或多种植物精油以及载剂的害虫控制组合物。例如，本发明各实施例可包括具有表面区域的载剂，所述载剂的表面区域上涂布有昆虫控制组合物。载剂可为(例如)晶体、粉末、粉尘、颗粒或诸如此类，其提供昆虫控制组合物的吸收表面区域。可用于本发明中的载剂的一实例是硅藻土(DE)。DE是天然存在的沉积岩，其易于粉碎成精细粉末。此粉末具有粗糙感，与浮石粉末类似，并且因具有高孔隙度而极轻。硅藻土是硅藻的化石化残留物，硅藻是一类具有硬壳的藻类。
在某些实施例中，混合载剂与昆虫控制组合物以使得组合物可包被载剂。在本发明某些实施例中，在载剂经昆虫控制组合物包被而形成调配物后，可将调配物施加至期望区域以在所述区域实现害虫控制。由于载剂降低了昆虫控制组合物的挥发性，组合物在期望区域保持活性的时间将长于单独使用的组合物(即未经调配的组合物)在期望区域保持的时间。因此，调配物在单独使用的组合物已挥发的时间后仍可继续提供昆虫控制。
在某些实施例中，可将害虫控制组合物与一或多种合成杀虫剂组合，例如拟除虫菊酯(pyrethroid)、氯化烟碱基杀昆虫剂和类新烟碱。例如，可将害虫控制掺合物与溴氰菊酯(deltamethrin)、可尼丁(clothianidin)、或益达胺(imidacloprid)组合。合成杀虫剂可自市场购得。
本发明各实施例可用于通过直接处理区域来控制昆虫。例如，可通过(例如)手动、自动、使用肥料散布机、或类似方式散布调配物来处理区域。
本发明组合物可用于通过直接处理宿主或处理宿主所在区域来控制昆虫。例如，可通过使用乳膏或喷雾调配物直接处理宿主，可将所述调配物以体外或局部方式施加至(例如)人类皮肤上。例如，在宿主为人类的情况下，可使用多种用于皮肤或头发的个人用品或化妆品的调配物来将组合物施加至宿主。例如，可使用以下中的任一种：香味剂、着色剂、颜料、染料、科隆香水(cologne)、皮肤乳膏、皮肤洗剂、除臭药、滑石粉、沐浴油、肥皂、洗发水、护发素和定型剂。
选定数量的本发明明确涵盖的实施例的组合物(包括实例性协同性掺合物)展示于表1中。此表提供本发明可用掺合物中各成份的实例性组合。在许多情况下，根据(例如)一特定成份的CAS编号和/或基本名称的特定修饰来极为明确地列示所述成份。所述具体列表是各类型成份的非限制性实例，并且在本发明某些实施例范围内类似成份(例如具有所述类型成份的不同CAS编号和/或变体形式)是可取代的。
表1还提供各成份含量的实例性范围，其表示为所列示掺合物的重量/重量百分比。通过以下形式来提供各成份在各掺合物中的实例性范围：第四栏中的数字指示所述实例性范围的下限值，并且第五栏中的数字指示所述实例性范围的上限值。所提供的范围是实例性的；还有其它可用范围并且明确包括在本发明某些实施例的范围内。就是说，界定所列示成份的其它可用范围和/或含量的其它上限值和下限值可包括所列示下限含量和/或上限含量的1％、2％、5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、85％、95％、110％、125％、150％、175％、200％、250％、300％、400％、500％、750％、900％、或1000％，条件是任何给定成份的相对百分比都不能超过各成份总掺合物的99.99％。
Figure BPA00001250393400171
  化合物   CAS注册编号   下限％   上限％
 掺合物1   LFO   4   30
  d-柠檬烯   5989-27-5   8   99
  白色百里香油   8007-46-3   0.1   20
  掺合物65   8   99
 掺合物2   d-柠檬烯   5989-27-5   9   99
  白色百里香油   8007-46-3   0.1   20
  里哪醇混合物   78-70-6   0.1   4
  四氢里哪醇   78-69-3   0.1   5
  香草醛   121-33-5   0.06   0.3
  肉豆蔻酸异丙酯   110-27-0   0.1   5
  胡椒醛(醛)[天芥菜醛]   120-57-0   0.1   5
  掺合物66   8   99
  精制香叶醇FCC   106-24-1   0.1   4
  柠檬酸三乙酯   77-93-0   0.1   5
 掺合物3   d-柠檬烯   5989-27-5   45   99
  白色百里香油   8007-46-3   0.1   10
  掺合物66   5   30
  掺合物63   0.1   10
 掺合物4   LFO   30   99
  BSO   977017-84-7   15   99
 掺合物5   BSO   977017-84-7   15   99
  里哪醇混合物   78-70-6   6   40
  四氢里哪醇   78-69-3   8   45
  香草醛   121-33-5   0.1   5
  肉豆蔻酸异丙酯   110-27-0   10   55
  胡椒醛(醛)[天芥菜醛]   120-57-0   0.1   20
  精制香叶醇FCC   106-24-1   0.1   25
Figure BPA00001250393400191
Figure BPA00001250393400201
Figure BPA00001250393400211
Figure BPA00001250393400231
Figure BPA00001250393400241
Figure BPA00001250393400251
Figure BPA00001250393400261
Figure BPA00001250393400271
Figure BPA00001250393400281
Figure BPA00001250393400291
Figure BPA00001250393400301
Figure BPA00001250393400311
Figure BPA00001250393400321
Figure BPA00001250393400331
Figure BPA00001250393400341
Figure BPA00001250393400351
Figure BPA00001250393400361
Figure BPA00001250393400371
Figure BPA00001250393400381
Figure BPA00001250393400391
Figure BPA00001250393400411
Figure BPA00001250393400421
Figure BPA00001250393400431
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Figure BPA00001250393400461
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本发明各实施例涉及控制目标害虫的组合物，其中所述组合物含有至少两种活性成份、和使用这些组合物的方法。所述至少两种活性成份在组合时可具有协同效应。因此，本发明组合物可包括(例如)下文所列示油中的任一种，或其混合物：
丁酸戊酯               里哪醇              四氢里哪醇
八角茴香油             乙酸里哪酯          百里香油(包括
黑种草油(BSO)          水杨酸甲酯          白色百里香油和
对聚伞花素             α-蒎烯(α-蒎烯)    红色百里香油)
香叶醇                 胡椒醛              百里香酚
肉豆蔻酸异丙酯         胡椒基              百里香酚乙酸酯
丁香花油(LFO)          胡椒醇乙酸酯        香草醛
d-柠檬烯               胡椒醇              冬青油
本发明组合物还可包括下文所列示油中的任一种，或其混合物：
烯丙基硫化物               草蒿脑                  壬酮
烯丙基三硫化物             2-乙基-2-己-1-醇        1-辛醇
烯丙基二硫化物             丁香酚                  E-罗勒烯酮(E ocimenone)
茴香脑                     丁香酚乙酸酯            Z-罗勒烯酮
反式茴香脑                 α-金合欢烯             3-辛酮
乙酸蒿属醇酯               (Z，E)-α-金合欢烯      罗勒烯
乙酸苄酯                   E-B-金合欢烯            乙酸辛酯
苯甲醇                     茴香酮                  PD 98059
佛手柑油烯(Bergamotene)    福斯柯林(Forskolin)     薄荷油
β-没药烯                  呋喃二烯                紫苏子醇
没药烯氧化物               呋喃桉-1，3-二烯        扑灭司林(Permethrin)
α-没药醇                  呋喃桉-1，4-二烯        苯乙醛
没药醇氧化物               呋喃大牻牛儿1，10(15)-  苯乙醇
没药醇氧化物B              二烯-6-酮               丙酸苯乙酯
乙酸冰片酯                 呋喃倍半萜              α-水芹烯
β-波旁烯                  香叶醇                  β-水芹烯
α-杜松醇                  乙酸香叶醇              β-蒎烯
樟脑萜                     吉马烯D(Germacrene胡椒胺醌
                           D)
α-龙脑烯                  吉马烯B                 异戊烯醛
α-龙脑烯醛                α-古芸烯               炔螨特(Propargite)
樟脑                       α-蛇麻烯               长叶薄荷酮
胺甲奈(carbaryl)           α-紫罗兰酮             除虫菊(Pyrethrum)
香芹酚                     β-紫罗兰酮             2-叔丁基-对苯醌
d-香芹酮                   异冰片                  桧烯
1-香芹酮                   异呋喃吉马烯            乙酸桧酯
石竹烯氧化物               异薄荷酮                α-檀香烯
母菊兰烯                   柠檬酸异丙酯            檀香醇
菊酸酯                     异长叶薄荷酮            蒜头烯
菊酸                       茉莉酮                  δ-桉叶烯
菊醇                       顺式茉莉酮              β-倍半水芹烯
1，8-桉叶素                薰草菌素A               匙叶桉油烯醇
肉桂醛                     柠檬草油                万寿菊酮
顺式马鞭草烯醇             酸橙油                  他莫昔芬(Tamoxifen)
柠檬醛A                    柠檬烯                  虫酰肼(Tebufenozide)
柠檬醛B                    椴树醇                  α-萜品烯
香茅醛                     香樟烯                  萜品烯900
香草醇                     邻氨基苯甲酸芳樟酯      4-萜品醇
乙酸香茅酯                 甲基-烯丙基-三硫化物    α-萜品醇
甲酸香茅酯                 柠檬酸甲酯              γ-萜品醇
α-胡椒烯                  二氢茉莉酮酸甲酯        α-萜品油烯
亚洲薄荷油                 薄荷脑                  α-萜品乙酸酯
β-木香醇                  2-甲氧基呋喃二烯        四氢糠醇
隐酮                       薄荷酮                  α-侧柏烯
莪术烯酮                   乙酸薄荷酯              α-侧柏酮
印蒿酮                     水杨酸薄荷酯            百里香甲醚
二烯丙基四硫化物           肉桂酸甲酯              反式石竹烯
邻苯二甲酸二乙酯           水杨酸薄荷酯            反式松香芹醇
二氢焦蓬莪术烯酮           香叶烯                  反式马鞭草烯醇
β-榄香烯                  桃金娘烯醛              马鞭草烯酮
γ-榄香烯                  乙酸橙花醛二甲酯        艾醇(Yomogi alcohol)
榄香醇                     橙花叔醇                姜倍半萜
                                                   二氢万寿菊酮
                                                   (Dihydrotagentone)
任选地，组合物可另外包括非挥发油，其为非挥发性无味植物油。例如，组合物可包括下文所列示非挥发油中的一或多种：
蓖麻油    矿物油    红花油
玉米油    橄榄油    芝麻油
茴香油    花生油    大豆油
在组合物的某些实施例中，可期望其包括各自纯度为约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、或95％的化合物。例如，在组合物某些包括香叶醇的实施例中，可期望其所包括香叶醇的纯度至少为约60％、85％或95％。在某些实施例中，可期望包括特定类型的香叶醇。例如，在某些实施例中，组合物可包括：香叶醇60、香叶醇85、或香叶醇95。在所得香叶醇为香叶醇60、香叶醇85、或香叶醇95时，油的40％、15％、或5％可为橙花醇。橙花醇是单萜(C10H18O)，其可自玫瑰精油、橙花精油和薰衣草油提取。
在某些其它实施例中，各化合物以重量计(wt/wt％)或以体积计(vol/vol％)可占组合物的约1％至约99％。本文所用化合物的重量或体积百分比含量应理解为是指化合物的相对含量。因此，例如，组合物包括7％里哪醇、35％百里香酚、4％α-蒎烯、30％对聚伞花素、和24％大豆油(vol/vol％)可理解为以7∶35∶4∶30∶24之比分别包括里哪醇、百里香酚、α-蒎烯、对聚伞花素、和大豆油(以体积计)。因此，如果自组合物移除一种化合物，或向组合物中增加其它化合物或其它成份，则预期可以相同相对含量提供其余化合物。例如，如果自实例性组合物移除大豆油，所得组合物可以7∶35∶4∶40之比分别包括里哪醇、百里香酚、α-蒎烯、和对聚伞花素(以体积计)。所得此组合物可包括9.21％里哪醇、46.05％百里香酚、5.26％α-蒎烯、和39.48％对聚伞花素(vol/vol％)。在另一实例中，如果将红花油添加至初始组合物中而产生含有40％(vol/vol)红花油的最终组合物，则所得组合物可包括4.2％里哪醇、21％百里香酚、2.4％α-蒎烯、18％对聚伞花素、14.4％大豆油、和40％红花油(vol/vol％)。所属领域技术人员可理解，根据物质的已知或测量比重可将体积百分比容易地转化为重量百分比。
在某些实施例中，可期望包括天然存在的形式或合成形式的化合物。例如，在某些实施例中，可期望包括可自市场购得的合成酸橙油。在某些实例性组合物中，可期望其包括标明满足食品化学品法典(FCC)的化合物，例如精制香叶醇FCC或四氢里哪醇FCC，这些混合物可自市场购得。
其它组合物组份
本发明各实施例可包括业内公认的常用于所述调配物中的成份。这些成份可包括(例如)消泡剂、抗微生物剂、抗氧化剂、抗再沉淀剂、漂白剂、着色剂、乳化剂、酶、脂肪、荧光材料、杀真菌剂、助水溶剂、保湿剂、光学光亮剂、香水载剂、香水、防腐剂、蛋白质、硅酮、去污剂、增溶剂、糖衍生物、防晒霜、表面活性剂、维生素、蜡、和诸如此类。
在某些实施例中，组合物还可含有其它佐剂或改性剂，例如一或多种治疗用或化妆用活性成份。可用于本发明组合物的实例性治疗或化妆用活性成份可包括(例如)杀真菌剂、防晒剂、遮光剂、维生素、晒黑剂、植物提取物、消炎药、抗氧化剂、自由基清除剂、类视色素、α-羟酸、软化剂、抗菌药、抗生素、抗细菌剂、抗组胺剂、和诸如此类，并且其以可有效达成期望治疗或化妆效果的量存在。
在某些实施例中，组合物可包括一或多种可用作抗氧化剂的材料，例如还原剂和自由基清除剂。可用作抗氧化剂的适宜材料可包括(例如)：乙酰半胱氨酸、抗坏血酸、叔丁基氢醌、半胱氨酸、二戊基氢醌、异抗坏血酸、阿魏酸(ferulic acid)、氢醌、对羟基苯甲醚、硫酸羟胺、抗坏血酸镁、维生素C磷酸镁、欧托奎雷(octocrylene)、间苯三酚、维生素CE磷酸钾、亚硫酸钾、芦丁(rutin)、抗坏血酸钠、亚硫酸钠、巯基乙酸钠、硫双乙醇、亚硫基二乙酰胺、巯基乙酸、硫代水杨酸、生育酚、乙酸生育酚、生育酚亚油酸酯、三(壬基苯基)亚磷酸盐、和诸如此类。
本发明各实施例还可包括一或多种可用作螯合剂的材料以与金属离子络合。此作用可有助于使金属离子失活，从而防止其对所调配组合物的稳定性或外观产生不良作用。适合用于本发明实施例中的螯合剂可包括(例如)氨基三亚甲基膦酸、β-丙氨酸二乙酸盐、EDTA二钠钙、柠檬酸、环糊精、环己二胺四乙酸、柠檬酸二铵、EDTA二铵、EDTA二钾、氮杂环庚烷二磷酸二钠、EDTA二钠、焦磷酸二钠、EDTA(乙二胺四乙酸)、葡糖酸、HEDTA(羟乙基乙二胺三乙酸)、甲基环糊精、三磷酸五钾、氨基三亚甲基膦酸五钠、三磷酸五钠、三胺五乙酸、植酸、柠檬酸钾、葡萄糖酸钾、柠檬酸钠、二亚乙基三胺五亚甲基磷酸钠、二羟乙基甘氨酸钠、葡萄糖酸钠、偏磷酸钠、偏硅酸钠、植酸钠、三乙醇胺(“TEA”)-EDTA、TEA-聚磷酸盐、四羟丙基乙二胺、焦磷酸四钾、EDTA四钠、焦磷酸四钠、EDTA三钾、EDTA三钠、HEDTA三钠、磷酸三钠、和诸如此类。
本发明各实施例还可包括一或多种可用作湿润剂的材料。向组合物中添加湿润剂以在使用期间减缓水分流失，此作用一般是通过组合物中吸湿性材料的存在来达成。
下表(表2)提供本发明实施例中的实例性组成：
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在本发明包括至少一种植物来源化合物的掺合物的实施例中，可使用(例如)高效液相色谱法(HPLC)、质谱(MS)、气相色谱、或类似方法来测试所述植物来源化合物的确切化学组成。
其它实例性实施例包括于2008年7月24日公开的WIPO公开案WO 2008/088827第71-120页所述的化合物的掺合物。
术语“约”或“大约”意指在如所属领域技术人员所确定的特定数值的可接受误差范围内，此可部分取决于如何测量或测定所述值，即测量系统的限制，即特定目的(例如医药调配物)所需的精确程度。例如，“约”根据业内实践可意指±1个标准偏差。或者，“约”可意指给定数值的最多20％、优选地最多10％、更优选地最多5％、并且更优选地最多1％范围。或者，尤其对于生物系统或过程来说，此术语可意指在数值的一个数量级、优选地5倍、并且更优选地2倍范围内。除非另外说明，否则如果在申请案和权利要求书中阐述特定数值，则应假定术语“约”意指在所述特定数值的可接受误差范围内。
本文所用术语“实质上”意指至少约80％、优选地至少约90％、更优选地至少约99％，例如至少约99.9％。在某些实施例中，术语“实质上”可意指完全地，或约100％。
本发明各实施例可包括至少一种油，例如“高级油”、高度精制油、和诸如此类。
掺合物的协同特性
令人惊讶地，通过以一定相对含量掺合某些化合物，所得组合物显示的驱避或杀虫效应强于组合物中的任何组份。本文所用“组合物的组份”是指组合物中所包括的化合物或化合物亚组，例如除去至少一种化合物的完整组合物。本文所用“驱避效应”是如下效应：其中自已经组合物处理的宿主或区域驱避驱除的昆虫多于未经所述组合物处理的对照宿主或区域。在某些实施例中，驱避效应是如下效应：其中自已经组合物处理的宿主或区域驱避驱除至少约75％的昆虫。在某些实施例中，驱避效应是如下效应：其中自已经组合物处理的宿主或区域驱避驱除至少约90％的昆虫。本文所用“杀虫效应”是如下效应：其中用组合物处理使至少约1％的昆虫死亡。在比较第一效应与第二效应时，如果第一效应在这方面超过第二效应，那么第一效应可指示较强杀虫或驱避效能。例如，在所测量效应为杀灭目标昆虫的％时，较大杀灭％的杀虫效应强于较小杀灭％。可测量的效应包括(但不限于)：杀灭给定百分比的目标昆虫的时间、或对给定百分比的目标昆虫的驱避性。
令人惊讶地，通过组合某些害虫控制化学物质与本发明化合物或掺合物，可增强所得组合物的害虫控制活性，即在组合某种或某些化学物质与某种或某些化合物时，可获得对害虫控制活性的协同效应。换句话说，包括至少一种化学物质与至少一种化合物或至少一种化合物掺合物的某些组合的组合物与所述各种化学物质或化合物单独使用时相比可具有增强的目标害虫控制能力。
在本发明各实施例中，“协同作用”可指至少两种成份的组合中可测量效应与单独一种活性成份的效应相比或与除去至少一种成份的完整组合的效应相比的任何显著增强。协同作用是多种成份组合的特殊特性，并且高于仅由多种成份的任何随机组合的累加效应所产生的任何背景水平的增强。效应包括(但不限于)：组合物的驱避效应；组合物的杀虫效应；细胞信使或细胞信号(例如钙、环-AMP、和诸如此类)的扰动；和分子靶的活性降低或下游效应。
本文所用“协同作用”和“协同效应”可指至少两种化合物的组合物中可测量效应(例如抗寄生虫效应)与组合物中组份(例如单独一种活性化合物，或除去至少一种化合物的完整化合物掺合物)的效应相比的任何显著增强。协同作用是化合物掺合物的特殊特性，并且高于仅由多种成份的任何随机组合的累加效应所产生的任何背景水平的增强。
在某些实施例中，可测量效应的显著增强可用协同作用系数来表示。协同作用系数表现组合物的测量效应与对比组合物的测量效应之间的对比。对比组合物可为所述组合物的组份。在某些实施例中，可根据完整掺合物与对比组合物的浓度差异来调节协同作用系数。
协同作用系数可根据下式来计算。可通过用组合物效应％(AB)除以对比组合物效应％(Xn)来计算活性比(R)，如下所述：
R＝AB/Xn     (式1)
可根据对比组合物在组合物中的浓度(Cn)(即％(wt/wt)或％(vol/vol))来计算浓度调节因子(F)，如下所述：
F＝100/Cn    (式2)
随后可通过用活性比(R)乘以浓度调节因子(F)来计算协同作用系数(S)，如下所述：
S＝(R)(F)    (式3)
因此，还可通过下式来计算协同作用系数(S)：
S＝[(AB/Xn)(100)]/Cn    (式4)
在式4中，AB表示掺合物的效应％，Xn表示对比组合物的效应％(Xn)，并且Cn表示对比组合物在掺合物中的浓度％(wt/wt)或％(vol/vol)。
在某些实施例中，约1.1、1.2、1.3、1.4、或1.5的协同作用系数可具有显著性并且是商业上所需要的。在其它实施例中，协同作用系数可为约1.6至约5，包括(但不限于)约1.8、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、和4.5。在其它实施例中，协同作用系数可为约5至50，包括(但不限于)约10、15、20、25、30、35、40、和45。在其它实施例中，协同作用系数可为约50至约500、或更大、包括(但不限于)约50、75、100、125、150、200、250、300、350、400、和450。组合物的实施例中也涵盖任何高于500的协同作用系数。
考虑到在本文所述各实施例中可发现众多种协同作用，应特别注意，协同作用系数可表述为“大于”给定数值并且因而不一定局限在具有下限数值和上限数值的范围的限值内。同样，在本文所述某些实施例中，明确排除某些较低协同作用系数或范围的下限。因此，在某些实施例中，协同作用可表述为“大于”一给定数值，此数值为此一实施例中协同作用的下限。例如，在某些实施例中，协同作用系数等于或大于25；在此一实施例中，明确排除所有低于25的协同作用系数(即使其具有显著性)。
在某些实施例中，与组合物有关的协同作用或协同效应可使用与科尔比S.R.(Colby，S.R.)，“计算除草剂组合的协同和拮抗反应(Calculating Synergistic andAntagonistic Responses of Herbicide Combinations)”，杂草(Weeds)，1967 15：1，第20-22页(以引用方式并入本文中)中所述类似的计算方法来确定。从这一点来说，可使用下式来表达包括两种化合物的组合物的效应百分比(E)(化合物X和化合物Y)：
E＝X+Y--(X*Y/100)        (式5)
在式5中，X是化合物X在组合物中测量实际效应百分比，并且Y是化合物Y在组合物中所测量的实际效应百分比。随后比较组合物的预期效应百分比(E)与组合物的测量实际效应百分比(A)。如果测量实际效应百分比(A)与根据上式计算的预期效应百分比(E)不同，则差异是由于化合物的相互作用所致。因此，如果A＞E，则组合物具有协同作用(化合物的正相互作用)。另外，如果A＜E，则存在负相互作用(拮抗作用)。
式5可扩展为可计算组合物中任何数量的化合物；然而其会随着扩展而变得更加复杂，如针对包括三种化合物(化合物X、化合物Y、和化合物Z)的组合物的下式所示：
E＝X+Y+Z-((XY+XZ+YZ)/100)+(X*Y*Z/1000)     (式6)
可通过修改式5和式6来提供适用于具有任一数量化合物的组合物的易用公式。现将阐述此一公式修改。在使用式5和式6时，将未处理对照值(未经组合物或化合物处理)设定为100％，例如，如果所测量效应是所杀灭的目标昆虫数量，那么可将对照值设定为目标昆虫100％存活。从这一点来说，如果用化合物A处理可导致杀灭80％的目标昆虫，那么可认为用化合物A处理可得到20％存活，或对照值的20％。表示为效应百分比的数值与表示为对照百分比的数值之间的关系展示于以下各式中，其中E’是组合物的预期对照百分比，Xn是组合物中个别化合物(化合物Xn)的测量实际效应％，Xn’是组合物中个别化合物的对照百分比，并且A’是组合物的测量实际对照百分比。
E＝100--E’      (式7)
Xn＝100--Xn’    (式8)
A＝100--A’      (式9)
通过用对照百分比值取代式5和式6中的效应百分比值，并进行修改以适用于任何化合物数量(n)，提供下式来计算组合物的预期对照％(E’)：
E ′ = ( Π i = 1 n X i ′ ) ÷ 100 n - 1
(式10)
根据式10，组合物的预期对照％(E’)是通过用组合物中各化合物测量实际对照值％(Xn’)的乘积除以100n-1来计算的。然后比较组合物的预期对照％(E’)与组合物的测量实际对照％(A’)。如果所测量的实际对照％(A’)与根据式10计算的预期对照％(E’)不同，那么差异是由于化合物的相互作用所致。因此，如果A’＜E’，则组合物具有协同作用(化合物的正相互作用)。另外，如果A’＞E’，则存在负相互作用(拮抗作用)。
可通过比较化合物特定组合物的杀虫效应与所述组合物中一组份的杀虫效应来测试以一定比率或相对含量含有两种或更多种化合物的组合物的协同效应。关于测定协同作用的其它信息可参见本文件中所述的实例。尽管已从协同作用系数和科尔比协同作用计算角度阐述了协同作用，但应注意，在某些实施例中，本文所述和所主张的协同作用的含义中也涵盖通过业内已知的其它测量或测定方法获得的协同作用。
可用于测定特定组合物的协同效应的实例性方法阐述于以下申请案中，其各自以引用方式全文并入本文中：美国专利申请案第10/832,022号，标题为控制昆虫的组合物与方法(COMPOSITIONS AND METHODS FOR CONTROLLING INSECTS)；美国专利申请案第11/086,615号，标题为控制昆虫的与奥克巴胺受体有关的组合物与方法(COMPOSITIONS AND METHODS FOR CONTROLLING INSECTS RELATED TO THE OCTOPAMINE RECEPTOR)；美国专利申请案第11/365,426号，标题为控制昆虫的涉及酪胺受体的组合物与方法(COMPOSITIONS AND METHODS FOR CONTROLLING INSECTS INVOLVING THE TYRAMINE RECEPTOR)；和美国专利申请案第11/870,385号，标题为控制昆虫的组合物与方法(COMPOSITIONS AND METHODS FOR CONTROLLING INSECTS)。
组合物的筛选
在本发明某些实施例中，害虫控制潜力的筛选方法可以昆虫嗅觉受体蛋白分子为靶。在本发明某些实施例中，害虫控制潜力的筛选方法可以昆虫嗅觉受体蛋白为靶。昆虫嗅觉系统包括超过60种已确定的嗅觉受体。这些受体一般是较大G蛋白偶联受体(GPCR)家族的成员。
本文所用“受体”是细胞膜上或细胞、细胞质或细胞核内可结合特定分子(配体，例如神经递质、激素、或诸如此类)的实体，并且起始针对配体的细胞反应。配体诱导的受体蛋白特性变化可引发生理性变化，从而实现配体的生物作用。
根据本揭示内容，诸如G蛋白偶联受体等受体可根据受体对活性成份的结合亲和性来分类。这也可表述为活性成份对受体的结合亲和性。活性成份对受体的结合亲和性或受体对活性成份的结合亲和性可根据本文所揭示方法或所属领域技术人员已知的方法来测量。本揭示内容中所用“低”亲和性表示需要相对于受体较高浓度的活性成份才能最大程度地占据受体结合位点并触发生理反应，而“高”亲和性表示需要相对于受体较低浓度的活性成份即可最大程度地占据受体结合位点并触发生理反应。例如，“高”亲和性所对应的活性成份浓度可比有效触发生理反应的受体浓度低两个或更多个数量级，而“低”亲和性所对应的活性成份浓度可比有效触发生理反应的受体浓度大一或多个数量级。
筛选分析中可使用任何昆虫细胞或细胞系。实例性昆虫细胞包括(但不限于)SF9、SF21、T.ni、果蝇S2细胞、和诸如此类。培养昆虫细胞的方法为业内已知并且阐述于(例如)林恩(Lynn)等人，昆虫科学杂志(J.Insect Sci.)2002；2：9中，其全文以引用方式并入本文中。自期望昆虫细胞开始新昆虫细胞培养的方法阐述于(例如)林恩等人，细胞学技术(Cytotechnology)，1996；20：3-11中，其全文以引用方式并入本文中。
关于筛选、制备、评估和使用害虫控制调配物的各种方法的其它论述揭示于以下申请案中，其各自以引用方式全文并入本文中：美国专利申请案第10/832,022号，标题为控制昆虫的组合物与方法；美国专利申请案第11/086,615号，标题为控制昆虫的与奥克巴胺受体有关的组合物与方法；美国专利申请案第11/365,426号，标题为控制昆虫的涉及酪胺受体的组合物与方法；美国临时专利申请案第60/807,600号，标题为控制昆虫的组合物与方法；美国临时专利申请案第60/805,963号，标题为治疗寄生虫感染的组合物与其筛选方法(COMPOSITIONS FOR TREATING PARASITIC INFECTIONS AND METHODS OF SCREENING FOR SAME)；美国临时专利申请案第60/718,570号，标题为具有昆虫控制活性的组合物与其使用方法(COMPOSITIONS HAVING INSECT CONTROL ACTIVITY AND METHODS FOR USE THEREOF)。
在本发明各实施例中，用自黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)头部cDNA噬菌体文库扩增的G蛋白偶联受体稳定转染果蝇施耐德(Schneider)2(S2)细胞系。可使用所述细胞系来筛选潜在的活性成份，如下文所述。
受体结合可引发受体下游的细胞变化。后续细胞变化可包括细胞内cAMP水平、该水平或二者发生变化。
在本发明某些实施例中，害虫控制活性的筛选方法可以昆虫嗅觉受体蛋白为靶。昆虫嗅觉系统包括超过60种已确定的嗅觉受体。这些受体一般是较大G蛋白偶联受体(GPCR)家族的成员。
在黑腹果蝇中，嗅觉受体位于苍蝇头部上的两对附肢中。果蝇化学受体家族包括约62种气味受体(Or)蛋白和68种味觉受体(Gr)蛋白，其是由具有约60种Or基因和60种Gr基因的家族通过选择性剪接来编码。这些受体蛋白中某些已进行功能性表征，而其它受体蛋白已通过与其它序列的序列同源性加以确定，但尚未完全表征。其它昆虫具有类似的嗅觉受体蛋白。
在某些实施例中，本发明筛选或害虫控制方法所靶定的是昆虫嗅觉受体蛋白酪胺受体(tyrR)。在其它实施例中，昆虫嗅觉受体蛋白是昆虫嗅觉受体蛋白Or83b或Or43a。例如，受体可为酪胺(TyrR)、Or83b、或Or43a受体中的任一者，参照于2005年1月13日公开并且标题为控制昆虫的组合物与方法的美国专利公开案第2005-0008714号中第20-26页的SEQ ID NO.1-6。在其它实施例中，靶定蛋白可为昆虫嗅觉蛋白受体中的任一者。
另外，可使用本发明方法靶定昆虫嗅觉受体级联中的其它组份，以鉴别可用的害虫控制化合物。可由本发明方法靶定的实例性昆虫嗅觉级联组份包括(但不限于)血清素受体、Or22a、Or22b、Gr5a、Gr21a、Gr61a、β-抑制蛋白受体、GRK2受体、和酪胺β-氢化酶受体、和诸如此类。
参见图22，鉴别有效害虫控制组合物的实例性筛选方法可利用一或多种表达目标受体(例如生物胺受体，例如TyR或奥克巴胺受体)的转染细胞系。
在本发明某些实施例中，可在竞争性结合分析中使用表达目标受体的分离细胞膜。可使用完整细胞来研究受体下游响应测试组合物处理而产生的信号转导变化。
本发明各实施例可采用原核与真核细胞，包括(例如)细菌细胞、酵母细胞、真菌细胞、昆虫细胞、线虫细胞、植物细胞、动物细胞、和诸如此类。适宜动物细胞可包括(例如)HEK细胞、HeLa细胞、COS细胞、U20S细胞、CHO-K1细胞、各种原代哺乳动物细胞、和诸如此类。可使用(例如)在整个组织中、在特定器官或组织类型内、或类似部位表达一或多种抑制蛋白与标记分子偶联物的动物模型。
害虫控制活性的潜力可通过在表达TyrR、Or83b、和/或Or43a的细胞系中测量测试组合物对受体的亲和性来确定。害虫控制活性的潜力也可通过在用测试组合物处理后在表达TyrR、Or83b、和/或Or43a的细胞系中测量细胞内cAMP和/或Ca2+的变化来确定。不同昆虫物种之间的TyrR、Or 83b受体和Or 43a受体的基因序列具有显著相似性。因此，可使用表达这些受体的果蝇施耐德细胞系来筛选在不同昆虫物种中具有害虫控制活性的组合物。
靶定的害虫
可使用本发明各实施例中的方法来控制任何类型的目标害虫。
在某些实施例中，目标害虫是昆虫。可控制的实例性昆虫包括(但不限于)甲虫、蟑螂、苍蝇、蚂蚁、昆虫幼虫、蜂、虱子、蚤类、蚊子、蛾、和诸如此类。实例性昆虫目可包括(但不限于)蜱螨亚纲、虱目、蜘蛛目、蜚蠊目、鞘翅目、弹尾目、双翅目、直翅目(Grylloptera)、异翅亚目、同翅目、膜翅目、等足目、等翅目、鳞翅目、螳螂目、食毛目、脉翅目、蜻蜓目、直翅目(Orthoptera)、啮虫目、蚤目、综合纲、缨尾目、和缨翅目、和诸如此类。本发明各实施例也可用于控制(例如)WIPO公开案第WO 2008/088827号(PCT专利申请公开案第PCT/US2008/000573号，标题为害虫控制组合物和方法(PEST CONTROL COMPOSITIONS AND METHODS)，2008年7月24日公开)中第123-195页表5中所示的昆虫。
在某些实施例中，目标害虫是寄生虫。实例性寄生虫包括(但不限于)原生动物(包括肠内原生动物、组织原生动物、和血内原生动物)、蠕虫和肠寄生虫(包括线虫类(线虫)和扁形虫(扁虫))。肠内原生动物的实例包括(但不限于)：溶组织内阿米巴(Entamoeba hystolytica)、蓝伯贾第虫(Giardia lamblia)、鼠隐孢子虫(Cryptosporidium muris)、和小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)。组织原生动物的实例包括(但不限于)：冈比亚锥虫(Trypanosomatida gambiense)、罗德西亚锥虫(Trypanosomatida rhodesiense)、克鲁斯锥虫(Trypanosomatida crusi)、墨西哥利什曼原虫(Leishmania mexicana)、巴西利什曼原虫(Leishmania braziliensis)、热带利士曼原虫(Leishmania tropica)、杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、鼠弓形虫(Toxoplasma gondii)、和阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)。血内原生动物的实例包括(但不限于)间日疟原虫(Plasmodium vivax)、卵形疟原虫(Plasmodium ovale)、三日疟原虫(Plasmodium malariae)、和恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)。鞭毛组织滴虫(Histomonas meleagridis)是原生动物寄生虫的另一实例。线虫的实例包括(但不限于)：有腺纲(adenophorea)的动物和植物线虫，例如肠道线虫鞭形鞭虫(Trichuris trichiura)(鞭虫)和植物线虫钝突毛刺线虫(Trichodorus obtusus)(残根线虫)；侧尾腺口纲(secementea)的肠道线虫，例如人蛔虫(Ascaris lumbricoides)、蠕形住肠线虫(Enterobius vermicularis)(蛲虫)、十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)(钩虫)、美洲板口线虫(Necator americanus)(钩虫)、和粪类圆线虫(Strongyloides stercoralis)；侧尾腺口纲的组织线虫，例如班氏吴策线虫(Wuchereria bancrofti)(班氏丝虫(Filaria bancrofti))和麦地那龙线虫(Dracunculus medinensis)(几内亚蠕虫)；猪蛔虫；和犬弓蛔线虫。扁形虫的实例包括(但不限于)：吸虫(吸虫(fluke))，包括血吸虫，例如曼森血吸虫(Schistosoma mansoni)(肠血吸虫病)、埃及血吸虫(Schistosoma haematobium)、和日本血吸虫(Schistosoma japonicum)；肝吸虫，例如肝片形吸虫(Fasciola hepatica)、和巨大片形吸虫(Fasciola gigantica)；肠吸虫，例如异形异型吸虫(Heterophyes heterophyes)；和肺吸虫，例如卫氏并殖吸虫(Paragonimus westermani)。扁形虫的实例另外包括(但不限于)：绦虫(绦虫(tapeworm))，包括猪肉绦虫(Taenia solium)、牛肉绦虫(Taenia saginata)、短膜壳绦虫、和犬绦虫(Echinococcus granulosus)。寄生虫还包括体外寄生虫，例如线虫、蠕虫、蜱虫、蚤类、虱子和在外口或皮肤表面上或皮肤中发现的其它有机体。实例性体外寄生虫包括(但不限于)猫栉头蚤、落矶山革蜱、血红扇头蜱、埃及斑蚊、厩螯蝇、和诸如此类。本发明各实施例也可用于控制(例如)于2008年7月24日公开的WIPO公开案第WO 2008/088827号第196-205页(包括表6)中所示的寄生虫，或诸如此类。
本发明各实施例也可用于预防或治疗于2008年7月24日公开的WIPO公开案第WO 2008/088827号第205-232页中表7所示的寄生虫宿主所患的寄生虫病，或诸如此类。
本发明各实施例可用于处理作物以限制或预防害虫侵染。可用本文所揭示组合物和方法处理的作物包括(但不限于)于2008年7月24日公开的WIPO公开案第WO2008/008827号第232-239页表8中所示的作物，或诸如此类。
投与或分配模式
如果宿主是动物(人类或非人类)，可通过使用经口递送的组合物调配物直接对宿主进行处理。例如，可将组合物包封在液体胶囊中来进行摄取。
可通过(例如)使用喷雾调配物(例如气溶胶或泵式喷雾剂)或燃烧调配物(例如含有所述组合物的蜡烛或香)用本发明组合物来处理区域。当然，可使用各种处理方法而不背离本发明的精神和范围。例如，组合物可包括于多种家用产品中，例如：空气清新剂(包括加热的空气清新剂，其中在通过(例如)通电或燃烧加热后释放昆虫驱避性物质)；硬表面清洁剂；或洗衣产品(例如含有组合物的洗衣去污剂、调节剂)。在本发明某些实施例中，可通过空气递送、通过安装在卡车上的设备或类似方式来处理区域。
本发明系统的实例性分配器可经一段时间以连续方式将害虫控制组合物递送至大气中。实例性分配器可包括用于容纳害虫控制组合物的储存器，和用于自储存器吸取组合物并将害虫控制组合物释放至大气中的吸芯。储存器可用不渗透害虫控制组合物的材料来构建，例如可使用适宜玻璃、陶瓷、会聚合材料。储存器可包括根据需要密封或不密封的孔隙。在本发明实例性系统不处于使用状态时，可将孔隙密封以防止害虫控制组合物释放至大气中。例如，在储存或运输实例性系统时，可能需要将孔隙密封。在系统处于使用状态时，孔隙不密封，从而使得吸芯可自储存器吸取害虫控制组合物，并将控制组合物通过孔隙释放至大气中。
在某些实施例中，可通过(例如)调节分配器的吸芯来控制组合物的释放速率。例如，可改变吸芯暴露于大气中的表面积。一般来说，所暴露的表面积越大，害虫控制组合物的释放速率越快。从这一点来说，在某些实施例中，分配器可包括多个吸芯并且储存器可包括多个孔隙，害虫控制组合物可通过这些孔隙释放至大气中。在另一实例中，吸芯可用可自储存器吸取害虫控制组合物并以期望速率将其释放至环境中的材料来构建，例如用木材制得的吸芯、用合成纤维制得的吸芯、或诸如此类。
本发明系统的另一实例性分配器可将害虫控制组合物递送至期望区域。分配器可包括密封囊袋，其可自不渗透害虫控制组合物的材料来构建，例如金属箔、聚合材料、或诸如此类。囊袋可界定容纳害虫控制组合物的体积。可在布置于囊袋体积内的材料中提供组合物，例如饱和有所述材料的海绵、布料或诸如此类。在需要使实例性系统进入使用状态时，可打开囊袋，从而暴露组合物以使其释放至大气中或施加至期望区域。
在某些实施例中，在囊袋内的饱和布料中提供害虫控制组合物，可使用其来将控制组合物施加至期望区域。例如，期望区域可为动物(例如人类、家畜)、住宅内表面、室外生活区域、或诸如此类。
在某些实施例中，分配器可另外包括挂钩，从而使囊袋和暴露的控制组合物可悬挂在期望位置处，例如壁橱或餐具室中。
在某些实施例中，本发明方法可将昆虫控制组合物递送至期望区域。在某些实施例中，所述方法使用的分配器可用基本上为平面的完整材料片来构建，其具有经控制组合物涂布的第一侧面和未经控制组合物涂布的第二侧面。可将完整材料片折叠并密封，从而使得涂布有控制组合物的侧面包含在密封囊袋所界定的体积内侧。在打开囊袋时，涂布有控制组合物的侧面暴露出来。可将基本上为平面的材料片置于期望位置以将控制组合物递送至大气中，或递送至经过材料的爬行昆虫上。
本发明系统的另一实例性分配器可将害虫控制组合物递送至期望区域。可将控制组合物纳入适宜材料中。在某些实施例中，含组合物材料可为能控制控制组合物释放速率的材料，即受控释放材料，从而使得可以期望速率将控制组合物释放至大气中，所述释放速率可通过提供具有适宜规格的受控释放材料来调节。受控释放材料可用适宜聚合物来构建。在其它实施例中，含组合物材料并不容许控制组合物释放至大气中，而是保留控制组合物。可提供不渗透害虫控制组合物的可选外壳以容纳含组合物材料，直至系统做好使用前准备。在系统做好使用准备时，可剥离外壳，暴露含组合物材料。可将含组合物材料置于期望位置以将控制组合物递送至经过所述材料的爬行昆虫，或在使用受控释放材料时将控制组合物递送至大气中，以(例如)控制飞行昆虫。
在某些实施例中，含组合物材料可具有基本为平面的设计，从而适合于毗邻床垫放置，以控制臭虫，例如温带臭虫(Cimex lectularius)。例如，基本上为平面的设计还可用作或用于野餐桌布。在某些实施例中，含组合物材料可用作苗圃(garden bed)的地被物或毗邻作物植物使用以控制杂草。在某些实施例中，含组合物材料可呈袋形，并且可用于垃圾收集，以控制一般可被生活垃圾或其它垃圾吸引的昆虫。
本发明系统的另一实例性分配器可为含有控制组合物的基本上干燥的薄层，其可在布料暴露于水或水性液体(例如出汗)后将所述控制组合物施加至期望位置。在某些实施例中，含有控制组合物的干燥薄层可在暴露于水或水性液体时溶解变成乳膏或凝胶，随后可将其施加至期望区域。例如，期望区域可为动物，例如人类、家畜、或另一动物。
用于制备改良害虫控制剂的组份的鉴别
本发明各实施例还涉及通过以下方式来制备改良害虫控制剂：确定复合药剂中的一或多个部分，使用本文所揭示方法来筛选所述一或多个部分，并且确定所述一或多个部分的特征是对针对目标害虫的潜在活性具有正面还是负面效应。
在某些实施例中，可使用分级分离技术来分离复合药剂(例如精油)中的一或多个部分，所述分级分离技术包括(例如)用不同溶剂萃取、分馏、分级结晶、分步冷冻、干式分提、去污剂分级分离、溶剂萃取、超临界CO2分馏、真空蒸馏、管柱色谱、反相色谱、高压液相色谱、和诸如此类。这些方法为所属领域技术人员已知。优选者为真空蒸馏，因为其操作相对简单并且不需要使用溶剂。
在某些实施例中，复合药剂的一或多个部分可使用二氧化硅或氧化铝固体载体通过管柱色谱来分离。可单独使用有机溶剂，或组合用作管柱溶剂或流动相，所述有机溶剂包括(例如)烷烃(例如己烷和石油醚)、甲苯、二氯甲烷(或其它卤代烃)、二乙醚、乙酸乙酯、丙酮、醇、乙酸、和诸如此类。在某些实施例中，通过管柱色谱使用浓度递增的极性溶剂作为洗脱溶剂来对复合药剂进行分级分离。管柱色谱法和其常用溶剂为业内所熟知。
在某些实施例中，诸如植物精油等复合药剂可通过溶剂萃取来分离。例如，可将精油与有机溶剂组合，包括(例如)有机溶剂，例如乙酸、丙酮、乙腈、苯、1-丁醇、2-丁醇、2-丁酮、叔丁醇、四氯化碳、氯苯、氯仿、环己烷、1，2-二氯乙烷、二乙醚、二乙二醇、二甘醇二甲醚(二乙二醇二甲醚)、1，2-二甲氧基-乙烷(甘醇二甲醚、DME)、二甲醚、二甲基-甲酰胺(DMF)、二甲亚砜(DMSO)、二氧杂环己烷、乙醇、乙酸乙酯、乙二醇、甘油、庚烷、六甲基磷酸酰胺(HMPA)、六甲基亚磷酰三胺(HMPT)、己烷、甲醇、甲基叔丁醚(MTBE)、二氯甲烷、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、硝基甲烷、戊烷、石油醚(石油英)、1-丙醇、2-丙醇、吡啶、四氢呋喃(THF)、甲苯、三乙胺、水、重水、邻二甲苯、间二甲苯、和对二甲苯。也可采用所属领域技术人员已知的其它有机溶剂。随后可将精油与有机溶剂的混合物与在所述有机溶剂中不能混溶的萃取溶剂合并，包括(例如)水、乙醇、和甲醇。将此组合在诸如分液漏斗等玻璃容器中剧烈震荡数分钟，然后经数分钟使其沉降为多个单独相。然后使下层密度较大的相自分液漏斗排出。然后可用萃取溶剂反复地对有机相进行再萃取，以进一步分配可自有机相溶于萃取溶剂中的化合物。然后可使用旋转蒸发法来减小有机相和所萃取相的体积，从而产生植物精油的两个单独部分。
在某些实施例中，制备针对目标害虫的改良药剂的方法可包括以下步骤：分离复合药剂中具有针对目标害虫的部分。将这部分与复合药剂中较小比例体积的其余部分再组合，从而使得所述部分的组份在重组复合药剂中相对于未分级分离的复合药剂发生富集。提供表达果蝇TyrR的细胞并且使其与重组复合药剂接触。测量至少一个选自以下参数的参数：对TyrR结合酪胺的竞争性抑制、细胞内cAMP水平、和细胞内Ca2+水平。同时，在与未分级分离的复合药剂接触的细胞中测量相同参数，所述未分级分离的复合药剂的体积等效于重组复合药剂的测试体积。比较在与重组复合药剂接触的细胞中测量的特定参数量值与在与未分级分离的复合药剂接触的相同细胞中测量的参数量值。如果重组药剂的此参数的量值较高，则比较结果表明，一或多种能调节酪胺受体活性的活性成份在重组药剂中相对于所述活性成份在未分级分离药剂中的浓度发生富集。因此，此对比确定重组药剂是针对目标害虫的改良药剂。如果重组药剂的此参数的量值较低，则对比结果表明，一或多种能调节酪胺受体活性的活性成份在重组药剂中相对于所述活性成份在未分级分离药剂中的浓度发生稀释。在此情况下，对比表明分离部分与较大比例而非较小比例体积的其余部分重组合可获得针对目标害虫的改良药剂。
因此，在某些实施例中，鉴别针对目标害虫的改良药剂的方法可包括分离复合药剂的一部分，之后将这部分与较大比例体积的其余部分重组合，从而使得这部分的组份在重组复合药剂中相对于未分级分离的复合药剂发生稀释。提供表达果蝇TyrR的细胞并使其与重组复合药剂接触。测量至少一个选自以下参数的参数：对TyrR结合酪胺的竞争性抑制、细胞内cAMP水平、和细胞内Ca2+水平。同时，在与未分级分离的复合药剂接触的细胞中测量相同参数，所述未分级分离的复合药剂的体积等效于重组复合药剂的测试体积。比较在与重组复合药剂接触的细胞中测量的特定参数量值与在与未分级分离的复合药剂接触的相同细胞中测量的参数量值。如果重组药剂的此参数的量值较高，则比较结果表明，一或多种能调节酪胺受体活性的活性成份在重组药剂中相对于所述活性成份在未分级分离药剂中的浓度发生富集。在此情况下，通过降低分离部分的相对丰度来产生针对目标害虫的改良药剂。
在某些实施例中，鉴别针对目标害虫的改良药剂的方法可包括鉴别复合药剂或复合药剂的个别分离部分中存在的化合物，以及针对结合或介导昆虫嗅觉受体活性的能力来筛选成份化合物。可通过用高效液相色谱(HPLC)或与质谱(MS)偶联的气相色谱(GC)分析复合药剂或其分离部分来实施对各化合物的鉴别。还可通过以下方式来确定成份化合物：首先使用包括(例如)以下在内的技术将个别成份富集或纯化至同质：用不同溶剂萃取、分馏、真空蒸馏、分级结晶、分步冷冻、干式分提、去污剂分级分离、溶剂萃取、超临界CO2分馏、管柱色谱、反相色谱、高压液相色谱、和诸如此类。可使用波谱技术来鉴别经富集或纯化的组份，包括(例如)红外(IR)光谱法、拉曼光谱法(Raman spectroscopy)、核磁共振波普(NMR)、和诸如此类。
某些实施例涉及使用植物精油中所确定各化学物质的化学衍生物或类似物来产生针对目标害虫的改良药剂。植物精油中所确定化学物质的化学衍生物可包括用无机或有机官能团衍生的化合物。在某些实施例中，化学衍生物是用有机官能团衍生的化合物。在某些实施例中，有机官能团可为烷基。在某些实施例中，有机官能团可为甲基、乙基、丙基、丁基、二十六烷基、癸基、庚基、己基、三十烷基、肉豆蔻基、壬基、辛基、棕榈基、戊基、硬脂基、异丙基、异丁基、二十四烷基、二十五烷基、二十七烷基、二十八烷基、二十九烷基、戊-2-基、异戊基、3-甲基丁-2-基、叔戊基、新戊基、十一烷基、十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基、环丁基、环丙基、或诸如此类。在某些实施例中，有机官能团可为芳基。在某些实施例中，有机官能团可为苯基或联苯基-4-基。
在某些实施例中，针对目标害虫的改良药剂包括化学衍生物，其为植物精油中所确定化合物的卤化衍生物。在某些实施例中，化学衍生物是氟化、氯化、溴化或碘化衍生物。
在某些实施例中，针对目标害虫的改良药剂包括化学衍生物，其为植物精油中所确定化合物的烯基化衍生物。在某些实施例中，化学衍生物是油基化、烯丙基化、异丙烯基化、乙烯基化、异戊二烯基化、或植基化衍生物。
在某些实施例中，针对目标害虫的改良药剂包括化学衍生物，其为植物精油中所确定化合物的羟基化衍生物。
在某些实施例中，针对目标害虫的改良药剂包括化学衍生物，其为植物精油中所确定化合物的巯基化衍生物。
在某些实施例中，针对目标害虫的改良药剂包括化学衍生物，其为植物精油中所确定化合物的羧化衍生物。
在某些实施例中，针对目标害虫的改良药剂包括化学衍生物，其为植物精油中所确定化合物的酰胺化衍生物。
在某些实施例中，针对目标害虫的改良药剂包括化学衍生物，其为植物精油中所确定化合物的酯化衍生物。
在某些实施例中，针对目标害虫的改良药剂包括化学衍生物，其为植物精油中所确定化合物的酰化衍生物。
在某些实施例中，针对目标害虫的改良药剂包括化学衍生物，其为植物精油中所确定化合物的磺化衍生物。
在某些实施例中，针对目标害虫的改良药剂包括植物精油中所确定化合物的化学类似物。化学类似物可使用易于获得的化学数据库来鉴别，例如ChemBioFiner.com(2008年版权归剑桥软件公司(CambridgeSoft Corporation)所有)。
确定为植物精油中成份的化合物或其化学衍生物可自供应商处购得，包括(例如)西格玛奥德里奇(Sigma Aldrich)、弗鲁卡(Fluka)、费希尔(Fisher)、诺瓦生化(Novabiochem)、TCI美国(TCI America)、阿克鲁斯(Acros)、兰卡斯特(Lancaster)、和阿尔法埃萨(Alfa Aesar)。
随后可通过使用本文所揭示方法针对对目标害虫的活性来筛选化合物。例如，可通过以下方式针对对目标害虫的活性来筛选化合物：使表达嗅觉受体的细胞与所述化合物接触，并且测量诸如对受体-配体结合相互作用的竞争性抑制、细胞内cAMP水平、和细胞内Ca2+水平等参数，如本文所揭示筛选方法中所述。在某些实施例中，测量对果蝇酪胺受体(TyrR)结合酪胺的竞争性抑制。在某些实施例中，可测量与靶受体的变构结合。在某些实施例中，可通过分析在微量滴定板(例如386孔或96孔板)中培养的细胞以高通量方式实施对化合物的筛选。筛选方法为业内所熟知。
在本发明某些实施例中，用于测定化合物与目标害虫控制相关的活性的细胞可为任何能经昆虫嗅觉受体(包括(例如)TyrR、Or83b、Or43a、和诸如此类)转染并表达所述受体的细胞。细胞的实例包括(但不限于)：昆虫细胞，例如果蝇施耐德细胞、果蝇施耐德2细胞(S2细胞)、和草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞(例如Sf9或Sf21)；或哺乳动物细胞，例如人胚肾细胞(HEK-293细胞)、非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7细胞)、HeLa细胞、和人类角质形成细胞(HaCaT细胞)。
TyrR可为全长TyrR、TyrR的功能性片段、或TyrR的功能性变体。TyrR的功能性片段是氨基酸残基相对于参照多肽(即全长TyrR)有所缺失但剩余氨基酸序列保留了参照多肽对酪胺的结合亲和性的TyrR。TyrR的功能性变体是具有氨基酸插入、氨基酸缺失、或保守氨基酸取代并且保留了参照多肽对酪胺的结合亲和性的TyrR。“保守氨基酸取代”是指氨基酸残基经功能类似残基取代。保守取代的实例可包括(例如)一个非极性(疏水)残基(例如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸)取代另一个；一个极性(亲水)残基取代另一个，例如精氨酸与赖氨酸之间的取代、谷氨酰胺与天冬酰胺之间的取代、甘氨酸与丝氨酸之间的取代；一个碱性残基(例如赖氨酸、精氨酸或组氨酸)取代另一个；一个酸性残基(例如天冬氨酸或谷氨酸)取代另一个；和诸如此类。保守氨基酸取代还可包括用化学衍生残基替代一残基，前提是所得多肽保留参照多肽对酪胺的结合亲和性。TyrR的实例可包括(例如)：TyrR，例如黑腹果蝇TyrR(基因库(GENBANK)
Figure BPA00001250393400711
登录号(GAN)CAA38565)、飞蝗(Locusta migratoria)TyrR(GAN：Q25321)、其它无脊椎动物的TyrR、线虫的TyrR、和诸如此类。
实例性筛选方法可包括“正”筛选，其中(例如)选择结合目标受体的组合物。实例性筛选方法可包括“负”筛选，其中(例如)排除结合目标受体的组合物。实例性方法可包括：选择结合TyrR的组合物。另一实例性方法可包括：选择结合TyrR但不结合奥克巴胺受体的组合物。
在本发明某些实施例中，可通过用昆虫进行研究来测定测试组合物的效能。例如，测试化合物驱避昆虫的效能可使用受控实验来研究，其中使昆虫暴露于测试组合物中。在某些实施例中，测试组合物针对昆虫的毒性可使用受控实验来研究，其中使昆虫暴露于测试组合物中。
上文已详细阐述本发明，但应了解，可存在各种修改、改变和等效实施例并且不背离随附权利要求书中界定的本发明范围。此外，应了解本发明揭示内容中的所有实例都是作为非限制性实例来提供。
实例
提供以下非限制性实例来进一步阐述本文所揭示本发明的各实施例。所属领域技术人员应了解，以下实例中所揭示的技术代表已发现在本发明的实践中可充分发挥作用的方法，并且因此可认为所述技术构成本发明实践模式的实例。然而，所属领域技术人员根据本揭示内容应了解，在所揭示具体实施例中可作出许多改变并且仍可获得相同或类似的结果，而并不背离本发明的精神和范围。
实例1
含有天然成份的掺合物的体外协同反应
制备表示为掺合物27(在图中也称作“B7001”或“阿莫主要掺合物”)的油掺合物并静置。下表以重量百分比模式提供此掺合物的组成：
表A.油掺合物27
  CAS   说明   Wt/wt
  80-56-8   α-蒎烯，98％   3.78％
  78-70-6   里哪醇混合物   6.63％
  芥花油   24.0％
  99-87-6   对聚伞花素   28.39％
  89-83-8   百里香酚   37.17％
其中也可用大豆油(CAS 8016-70-4)来取代芥花油。
在经编码酪胺受体并且自黑腹果蝇头部cDNA噬菌体文库(“droTyrR”)扩增的DNA稳定转染的果蝇施耐德2(“S2”)细胞系中测试掺合物(终浓度为0.5mg/mL)。然后测量经处理S2细胞中随时间变化的细胞内钙水平(“[Ca2+]i”)。作为对比，在昆虫盐水中单独测试载剂溶液(芥花油，终浓度＝0.12mg/mL)和表面活性剂溶液(糖酯OWA-1570)。结果表明，在果蝇S2细胞中，与单独使用载剂和单独使用表面活性剂相比，用掺合物27处理可使嗅觉受体活化所触发的Ca2+释放得到协同性提高(图1)。
在一单独实验组中，在经droTyrR DNA稳定转染的果蝇施耐德2(“S2”)细胞系中测试掺合物(终浓度为0.5mg/mL)，并且随后在经处理S2细胞中测量随时间而变的细胞内钙水平(“[Ca2+]i”)。作为对比，分别在所述细胞中以与所述掺合物相同的浓度各自测试掺合物中的个别成份(A＝百里香酚，B＝对聚伞花素，C＝里哪醇混合物，D＝α-蒎烯(或“α-蒎烯”))。此外，在昆虫盐水中单独测试表面活性剂溶液(糖酯OWA-1570)。结果表明，在果蝇S2细胞中，与通过单独投与个别成份或单独投与表面活性剂获得的结果相比，用掺合物27处理可使嗅觉受体活化所触发的Ca2+释放得到协同性提高(图2)。
在另一单独实验组中，在经droTyrR DNA稳定转染的果蝇施耐德2(“S2”)细胞系中测试掺合物(终浓度为0.5mg/mL)，并且随后在经处理S2细胞中测量随时间而变的细胞内钙水平(“[Ca2+]i”)。作为对比，分别在所述细胞中以可反映掺合物中％(v/v)的终浓度各自测试掺合物中的个别成份(A＝百里香酚，B＝对聚伞花素，C＝里哪醇混合物，D＝α-蒎烯(或“α-蒎烯”))。此外，在昆虫盐水中单独测试表面活性剂溶液(糖酯OWA-1570)。结果表明，在果蝇S2细胞中，与通过单独投与个别成份或单独投与表面活性剂获得的结果相比，用掺合物27处理可使嗅觉受体活化所触发的Ca2+释放得到协同性提高(图3)。
实例2
含有天然成份的掺合物针对猪蛔虫的协同反应
如上所述(实例1)制备掺合物27(在图中也称作“B7001”或“阿莫主要掺合物”)并静置。将掺合物以及含有构成掺合物的个别成份(A＝百里香酚，B＝对聚伞花素，C＝里哪醇混合物，D＝α-蒎烯(或“α-蒎烯”)，载剂＝芥花油)的溶液投与存于含有抗生素和抗霉菌剂的RPMI 1640培养基中的体内寄生虫猪蛔虫(每次测试使用10只蠕虫)。所测试掺合物的终浓度为10μg/mL，同时个别成份的终浓度反映其在掺合物中的％(v/v)。作为对照，单独测试表面活性剂溶液(糖酯OWA-1570)。结果表明，与单独投与个别成份或载剂时所观察到的结果相比，用掺合物27处理可对体内寄生虫的死亡率产生协同效应(图4)。
实例3
含有天然成份的掺合物针对各种体内寄生虫的协同反应
如上所述(实例1)制备掺合物27(在图中也称作“B7001”或“阿莫主要掺合物”)并静置。制备表示为掺合物58的单独油掺合物并静置。下表以重量百分比模式提供此掺合物的组成：
表B.油掺合物58
  CAS   说明   Wt/wt
  99-87-6   对聚伞花素   1.870％
  80-56-8   α-蒎烯，98％   4.664％
  4180-23-8   反式茴香脑   19.305％
  89-83-8   百里香酚   36.719％
  78-70-6   里哪醇混合物   37.442％
将不同数量的掺合物(以达成0.1μg/mL至10μg/mL的终浓度范围)各自投与存于含有抗生素和抗霉菌剂的RPMI 1640培养基中的体内寄生虫猪蛔虫(每次测试使用3只蠕虫)。然后在投与掺合物后30分钟、120分钟、320分钟和72小时检查蠕虫，以确定通过添加掺合物而杀灭的蠕虫数量。作为对照，单独测试表面活性剂溶液(糖酯OWA 1570)。如图5中所示，结果显示在高掺合物浓度(10μg/mL)下，蠕虫在30分钟内死亡。在中等浓度(1μg/mL、0.5μg/mL)下，在投与6小时内观察到所投与掺合物对蠕虫死亡率的作用，而在最低浓度(0.1μg/mL)下，在3天内观察到对死亡率的作用。
对犬弓蛔线虫(感染犬类的体内寄生虫)进行类似实验。使在培养基中培育的6蠕虫组暴露于10μg/mL或1μg/mL的掺合物58中或10μg/mL的表面活性剂对照中，随后在投与组合物后的不同时间检查蠕虫以确定通过添加掺合物而杀灭的蠕虫数量。暴露于高和低浓度掺合物58中的蠕虫在暴露30分钟内死亡，而投与表面活性剂对照的蠕虫在3天的观察期内始终存活并继续有活力地移动。
因此，这些结果表明，各种含有天然成份的掺合物可有效治疗体内寄生虫。
实例4
含有天然成份的掺合物针对短膜壳绦虫的协同反应
如上所述(实例1)制备掺合物27并静置，但使用大豆油来代替芥花油。将掺合物以及含有构成掺合物的个别成份(1＝百里香酚，2＝对聚伞花素，3＝里哪醇混合物，4＝α-蒎烯(或“α-蒎烯”)，5＝大豆油)的溶液投与感染体内寄生虫短膜壳绦虫的小鼠。每个实验组测试约25个动物，并且在用含有个别成份(终浓度＝100mg/kg体重)的溶液掺合物治疗前向各个动物中注入200个活短膜壳绦虫虫卵。通过用短膜壳绦虫感染约25个动物来建立背景感染数量。根据以下方式来计算所测试掺合物或溶液各自的治愈率(“治愈率％”)：用发现不含短膜壳绦虫虫卵和蠕虫的治疗动物的数量除以背景感染组中所发现经感染动物的总数。结果表明，与单独投与个别成份时所观察到的结果相比，用掺合物27(含有大豆油)治疗可对体内寄生虫的治愈率产生协同效应(图6)。
实例5
使用各种剂量的含有天然成份的掺合物对短膜壳绦虫感染的预防和治疗
如上所述(实例1)制备掺合物27并静置。然后在图7中所示的各种治疗和预防方案中使用掺合物。简单地说，在方案1中，经三周将掺合物27以不同量(在1mg/kg体重至100mg/kg体重范围内)投与小鼠，之后用200个活短膜壳绦虫虫卵感染各个动物并培育2周，在此期间不投与测试组合物。在感染后第三周期间，检查经治疗感染小鼠的粪便，随后在第三周结束时杀死小鼠以确定治愈率。在方案2中，经三周以所述不同量投与掺合物27，之后用200个活短膜壳绦虫虫卵感染各个动物。在感染后的2周培育期间，继续用掺合物组合物以不同测试量治疗动物。在感染后第三周期间，停止投与组合物，并检查经治疗感染小鼠的粪便。然后在第三周结束时杀死小鼠以确定治愈率。在方案3中，经三天以所述不同量投与掺合物27，之后用200个活短膜壳绦虫虫卵感染各个动物。在感染后2周的培育期间，继续以不同测试量用掺合物组合物治疗动物。在感染后第三周期间，停止投与组合物，并检查经治疗感染小鼠的粪便。然后在第三周结束时杀死小鼠以确定治愈率。通过用200个活短膜壳绦虫虫卵感染未经治疗的动物来建立背景感染数量。
结果展示于图8中。发现根据方案2投与的1mg/kg体重的投与剂量可使短膜壳绦虫虫卵减少78％但治愈率(其中动物不含虫卵和蠕虫)为0％。相反，根据方案2投与的10mg/kg体重的剂量可使短膜壳绦虫虫卵减少79％并且治愈率为91％。最后，根据方案3投与的20mg/kg体重和100mg/kg体重的剂量可获得相当的治愈率，但较高剂量达成的虫卵减少百分比大于较低剂量。这些结果表明，含有天然成份的掺合物可同时有效治愈和预防动物中的短膜壳绦虫感染。
实例6
对含有天然成份的掺合物的初始安全性评估
如上所述(实例1)制备掺合物27并静置。经5周时间将掺合物以100mg/kg体重的剂量投与经体内寄生虫短膜壳绦虫感染的动物。对照含有未接受任何治疗的经感染动物。在治疗期间自两组收集数据直至杀死动物。所收集数据和观察包括：血样、粪便物稠度、水摄入的变化、食物摄入的变化、和体重变化。此外，监测动物的内出血。
在5周的投与期间，血液分析结果始终显示，在未经治疗的感染动物与接受治疗的感染动物之间未发现显著生理性差异。此外，相对于对照动物组，经治疗感染动物表现为：(1)粪便物稠度具有正常外观，(2)水摄入具有正常消耗，(3)食物摄入具有正常消耗，并且(4)体重无显著差异。最后，在经治疗感染动物中未观察到内出血。
因此，结果表明，含有天然成份的掺合物安全并且不会引入任何重大医疗风险。
实例7
使用各种剂量的含有天然成份的囊封掺合物对短膜壳绦虫感染的治疗
如上所述(实例1)制备掺合物27(在图中也称作“阿莫掺合物(B7001)”)并静置。然后根据标准方案使用玉米醇溶蛋白、虫胶、或25％玉米醇溶蛋白/75％虫胶的组合囊封掺合物。然后将囊封掺合物以介于1mg/日至5mg/日的不同日剂量投与感染体内寄生虫短膜壳绦虫的小鼠。然后根据在治疗结束时发现不含短膜壳绦虫虫卵和蠕虫的小鼠数量相对于经感染小鼠数量来计算治愈率。此外，还测定经治疗动物的虫卵数量减少％。
结果展示于图9和10中。人们发现，相对于未接受治疗的感染对照组，掺合物的所有三种囊封调配物都可有效治愈短膜壳绦虫感染。此外，发现相对于未经治疗的感染对照组，掺合物的囊封调配物可有效减少短膜壳绦虫虫卵数量。对囊封调配物进行单独分析以确定掺合物中个别成份的体积百分比范围。尽管发现在各囊封调配物中个别成份的体积百分比不同，但结果显示掺合物可保持抗寄生虫活性。简单地说，观察到掺合物中各成份的适宜目标范围如下所述：(“化学物质A”)α-蒎烯：4.2％(v/v)至6.8％(v/v)；(“化学物质B”)对聚伞花素：22.0％(v/v)至38.1％(v/v)；(“化学物质C”)里哪醇：7.8％(v/v)至14.9％(v.v)；和(“化学物质D”)百里香酚：42.8％(v/v)至64.4％(v/v)。
实例8
各种含有天然成份的掺合物针对常见猫蚤的残留活性
测试各种含有天然成份的掺合物的残留效应，即实现延长时间的害虫控制的能力。制备表示为掺合物11A(在图中称作“25b/4a(B5028)”)和掺合物8(在图中称作“25b/4b”)的两种掺合物并静置。下表中以重量百分比模式来提供这些掺合物的组成。
表C.油掺合物11A
  CAS   说明   Wt/wt
  8007-46-3   白色百里香油   20.59％
  110-27-0   肉豆蔻酸异丙酯   34.29％
  68917-75-9   冬青油   45.11％
表D.油掺合物8
  CAS   说明   Wt/wt
  8007-46-3   白色百里香油   12.38％
  68917-75-9   冬青油   31.32％
  5989-27-5   d-柠檬烯   56.30％
将四十(40)只昆虫(猫栉头蚤或常见猫蚤)引入如上所述涂布有调配物(稀释至终浓度为30％(v/v))的各测试表面上。简单地说，首先用移液管以相当于1加仑/1000平方英尺的施加比率将调配物均匀地施加至各测试表面上。在施加掺合物或市售药剂2小时后，将10只昆虫置于各经处理表面上，并在经处理表面上连续暴露约30分钟、1小时、4小时和24小时后测量杀灭效能。通过在板上将顶部有网格的容器罩在昆虫上来将昆虫限制在板表面上。在四(4)个单独板上测试各产物的4个重复，每个重复在各板上测试10只昆虫。
表现为死亡率的残留活性展示于图11中。结果表明，掺合物11A(“25b/4a(B5028)”)可在所有测试表面上暴露30分钟内有效杀灭昆虫。掺合物8(“掺合物25b/4b”)可在不锈钢和胶原膜表面上暴露30分钟内有效杀灭昆虫，但在乙烯树脂测试表面上并不如此有效。两种掺合物可如同市售掺合物(“Sergeant′s Nature′s Guardian Flea and Tick”(一种杀蚤蜱剂))一般在暴露30分钟内有效杀灭昆虫，表明含有天然成份的掺合物可用作含有合成成份的市售掺合物的有效替代品。
实例9
针对常见猫蚤比较含有天然成份的掺合物与市售药剂
比较含有天然成份的掺合物与市售药剂(“Sergeant′s Nature′s Guardian Flea and Tick”)控制猫栉头蚤或常见猫蚤的能力。制备表示为掺合物75(在图中称作“F-4002”)的掺合物并静置。下表以重量百分比模式提供此掺合物的组成：
表E.油掺合物75
Figure BPA00001250393400761
用于制备掺合物75的掺合物(掺合物74)含有以重量百分比模式展示于下表中的组成：
表F.油掺合物74
  CAS 说明   Wt/wt
  8002-43-5 卵磷脂   0.20％
  9007-48-1 聚甘油-4-油酸酯   0.90％
  7732-18-5 水   9.8％
掺合物11A   89.1％
掺合物11A的组成如实例8中所述。
将掺合物或市售药剂(终浓度为5％(v/v)或2.5％(v/v))喷雾至胶原膜表面上并使其干燥。然后将昆虫引入经处理表面上，并在暴露1小时、4小时和24小时后测定死亡率。通过施加含有1％月桂基硫酸钠(SLS)的水来处理对照表面。
结果展示于图12中。如图所示，在经处理表面上暴露1、4和24小时后，两种浓度的掺合物75(“F-4002”)在杀灭昆虫方面都与相同比较浓度的市售药剂同样有效。结果表明，含有天然成份的掺合物可用作含有合成成份的市售掺合物的有效替代品。
实例10
针对林蜱比较含有天然成份的掺合物与市售药剂
比较含有天然成份的掺合物与市售药剂(“Sergeant′s Nature′s Guardian Flea andTick”)控制落矶山革蜱或林蜱的能力。如上所述(实例9)制备掺合物75(在图中称作“F-4002”)。
将掺合物或市售药剂(终浓度为5％(v/v)或2.5％(v/v))喷雾至胶原膜表面上或不锈钢表面上并使其干燥。然后将昆虫引入经处理表面上，并在暴露30分钟、1小时、2小时、4小时和24小时后测定死亡率。通过施加含有1％月桂基硫酸钠(SLS)的水来处理对照表面。
结果展示于图13和14中。如图13中所示，对于胶原膜表面，在经处理表面上暴露1、4和24小时后，在杀灭昆虫方面两种浓度的掺合物75(“F-4002”)都与相同比较浓度的市售药剂同样有效。如图14中所示，对于不锈钢表面，在杀灭昆虫方面，掺合物在所有观察时刻比相同比较浓度的市售药剂更有效。
因此，结果表明，含有天然成份的掺合物可用作含有合成成份的市售掺合物的有效替代品。
实例11
含有天然成份的掺合物针对林蜱的残留活性
比较含有天然成份的掺合物与市售药剂(“Sergeant′s Nature′s Guardian Flea andTick”)控制落矶山革蜱或林蜱的能力。如上所述(实例9)制备掺合物75(在图中称作“F-4002”)。
将掺合物或市售药剂(终浓度为5％(v/v)或2.5％(v/v))喷雾至不锈钢表面上并使其干燥。然后将昆虫引入经处理表面上，并在暴露72小时后测定死亡率。通过施加含有1％月桂基硫酸钠(SLS)的水来处理对照表面。
表现为死亡率的残留活性展示于图15中。结果表明，在5％(v/v)的终浓度下，掺合物75(“F-4002”)在暴露72小时内杀灭昆虫方面与市售药剂同样有效。此外，在2.5％(v/v)的终浓度下，掺合物75在所有测试表面上暴露72小时内杀灭昆虫方面比市售药剂更有效。因此，结果表明，在林蜱控制中，含有天然成份的掺合物可用作含有合成成份的市售掺合物的有效替代品。
实例12
比较含有天然成份的各种掺合物与市售药剂针对各种体外寄生虫的活性
比较各种含有天然成份的掺合物与市售药剂(“Sentry-Natural Defense”(一种害虫防御剂))控制猫栉头蚤或常见猫蚤和血红扇头蜱(蜱虫)的能力。制备表示为掺合物19(在图中称作“HL1”)、掺合物6(在图中称作“HL3”)、掺合物11A(在图中称作“B5028”)、掺合物42(在图中称作“AAT”)和掺合物123(在图中称作“AAT+”)的各种掺合物并静置。下表中以重量百分比模式来提供其余掺合物的组成：
表G.油掺合物19
  CAS  说明   Wt/wt
  5989-27-5  d-柠檬烯   27.35％
  8007-46-3  白色百里香油   30.08％
 丁香花油(LFO)   42.57％
表H.油掺合物6
  CAS   说明   Wt/wt
  121-33-5   香草醛   0.8％
  120-57-0   胡椒醛   3.2％
  106-24-1   香叶醇   4.3％
  78-70-6   里哪醇混合物   6.4％
  78-69-3   四氢里哪醇   7.8％
  5989-27-5   d-柠檬烯   8.8％
  110-27-0   肉豆蔻酸异丙酯   9.5％
  977017-84-7   黑种草油(BSO)   26.2％
  119-36-8   水杨酸甲酯   33％
表I.油掺合物42
  CAS   说明   Wt/wt
  540-18-1   丁酸戊酯   23.04％
  8007-46-3   白色百里香油   24.747％
  八角茴香油   52.213％
表J.油掺合物123
  CAS   说明   Wt/wt
  染料黄木酮   0.01％
  540-18-1   丁酸戊酯   23.04％
  8007-46-3   白色百里香油   24.75％
  八角茴香油   52.2％
掺合物11A的组成如实例8中所述。
在40％(v/v)异丙醇与60％(v/v)肉豆蔻酸异丙酯的稀释溶液中将掺合物或市售药剂各自稀释至终浓度为7.4％(v/v)。在第0天施加时，各药剂的目标剂量比率为3克/kg体重。在处理后约24小时，将100只跳蚤(猫蚤)和50只蜱虫(血红扇头蜱)施加至各实验组的三只犬上。在侵染24小时后通过定时个体计数(body count)来计数昆虫数量，但不移除或销毁害虫。再经过48小时后，再次计数昆虫数量，随后将其移除并销毁。将个别效能值计算为相对于自对照(未经处理组)获得的平均计数的减少百分比。
结果展示于图16中。如图所示，在处理后2天和4天时，含有天然成份的掺合物与市售药剂在杀灭蚤类和蜱虫方面相当。因此，结果表明，在蚤类和蜱虫控制中，含有天然成份的掺合物可用作含有合成成份的市售掺合物的有效替代品。
实例13
比较含有天然成份的掺合物与市售药剂针对蚊子的活性
比较含有天然成份的掺合物的各种调配物与市售药剂(“OffSkintastic”(一种防蚊液))驱避埃及斑蚊(或蚊子)的能力。制备表示为掺合物4(在图中也称作“XL101”)的掺合物并静置。下表以重量百分比模式提供此掺合物的组成：
表K.油掺合物4
  CAS  说明   Wt/wt
  977017-84-7  黑种草油(BSO)   49.87％
 丁香花油(LFO)   50.13％
“XL101Natural(一种天然杀虫剂)”表示在含有水和表面活性剂(1％SLS)的稀释剂中稀释至终浓度为30％(v/v)的掺合物4。“XL101D”表示在变性醇中稀释至终浓度为30％(v/v)的掺合物4。
用刷子将各种调配物或市售药剂以1mL/450cm2的剂量施加至人类皮肤表面上。所提供所有调配物的终浓度都为30％(v/v)。然后在用掺合物或市售药剂处理后0、1、2、4和6小时，使皮肤表面暴露于蚊子中以进行2分钟的叮咬计数。如图17中所示，在驱避蚊子方面，掺合物4(“XL101”)(特别是存于变性醇中的调配物)与市售药剂相当或更有效。因此，结果表明，在驱避蚊子时，含有天然成份的掺合物可用作含有合成成份的市售掺合物的有效替代品。
实例14
比较含有天然成份的掺合物的乳膏调配物与市售药剂的驱避性持续时间
如上所述(实例13)制备掺合物4并静置。将掺合物调配为各种含有25％(v/v)掺合物的皮肤乳膏调配物。
用刷子将掺合物4的各种皮肤乳膏调配物(在图中称作“CAR-01-097”、“CAR-01-163”、和“CAR-01-145”)或市售药剂(“DEET”)以2.2mg乳膏/cm2的剂量施加至人类皮肤表面上。将“CAR-01-145”调配物向人类皮肤表面上施加两次(“2X”)。然后使皮肤表面暴露于蚊子。如图18所示，掺合物4的皮肤乳膏调配物可在2-3小时内有效驱避蚊子。在对蚊子的驱避性持续时间方面，两次施加标记为“CAR-01-145”调配物的掺合物4皮肤乳膏调配物与单次施加市售药剂同样有效。因此，结果表明，在驱避蚊子时，含有天然成份掺合物的皮肤乳膏调配物可用作含有合成成份的市售掺合物的替代品。
实例15
各种含有天然成份的掺合物控制蓟马的应用
研究各种含有天然成份的掺合物控制蓟马的能力。制备表示为掺合物11B和掺合物8的各种掺合物并静置。下表以重量百分比模式提供所述掺合物的组成：
表L.油掺合物11B
  CAS 说明 Wt/wt
  68917-75-9 冬青油 24.82％
  110-27-0 肉豆蔻酸异丙酯 35.94％
  8007-46-3 白色百里香油 39.27％
掺合物8的组成如实例8中所述。
以介于100ppm至10,000ppm的不同剂量将掺合物施加至表面上。然后将蓟马引入经处理表面上，并且根据引入经处理表面后击倒或死亡的昆虫数量来测量害虫控制。结果展示于图19中。如图所示，如根据击倒％和死亡率％来计算，在蓟马控制中剂量较高的掺合物11B显示较高效能。
实例16
含有天然成份掺合物的直接喷雾调配物对蜱虫的效能
研究各种含有天然成份的掺合物控制落矶山革蜱(落矶山林蜱)的能力。制备表示为掺合物1(在图中称作“CLl7”)、掺合物11A(在图中称作“25b/4a”)、掺合物8(在图中称作“25b/4b”)、掺合物DKSH/TT 1(掺合物11A，存于4％(v/v)除虫菊中)、掺合物DKSH/TT 2(掺合物12，存于4％(v/v)除虫菊中)和掺合物DKSH/TT 3(掺合物19，存于4％(v/v)除虫菊中)的各种掺合物并静置。下表以重量百分比模式提供所述掺合物的组成：
表M.油掺合物1
Figure BPA00001250393400801
表N.油掺合物12
 CAS 说明 Wt/wt
香草醛 2.48％
d-柠檬烯 9.90％
胡椒醛(醛) 9.97％
精制香叶醇FCC 10.30％
里哪醇混合物 14.14％
  四氢里哪醇   24.29％
  肉豆蔻酸异丙酯   28.92％
掺合物11A和8的组成阐述于实例8中。掺合物19的组成阐述于实例12中。
将各掺合物直接投与置于表面上的蜱虫，其中自距离表面18英寸的喷嘴施加1mL掺合物。以30％(v/v)的终浓度测试掺合物1、11A和8，同时以4％(v/v)的终浓度测试各“DKSH”掺合物(掺合物11A、12和19)。然后在喷雾后30分钟和4小时评估各掺合物的蜱虫杀灭数量。结果展示于图20中。掺合物1(“CL17”)、DKSH/TT 1和DKSH/TT 3在暴露后30分钟内可有效杀灭蜱虫，而掺合物11A(“25b/4a”)在暴露4小时内表现较高杀灭效能。
实例17
比较各种天然成份掺合物与市售药剂的残留活性
比较各种含有天然成份的掺合物的与市售药剂(“Sergeant′s Nature′s GuardianNatural Flea and Tick”)控制落矶山革蜱(落矶山林蜱)的能力的残留活性。制备两种掺合物，即掺合物11A(在图中称作“25b/4a”)和掺合物8(在图中称作“25b/4b”)，并静置。所述掺合物的组成如实例8中所述。
将掺合物或市售药剂施加至经蜱虫侵染的充血膜上，其中各掺合物含有终浓度为6.1％(v/v)的活性成份。然后在暴露30分钟、1小时、2小时和4小时后评估杀灭计数。结果展示于图21中并且显示，掺合物11A(“25b/4a”)和掺合物8(“25b/4b”)与市售药剂同样有效或更有效。因此，结果表明，在蜱虫控制中，可用本文所揭示含有天然成份的掺合物来替代市售药剂。
实例18
植物精油的分级分离以及根据针对目标害虫的潜在活性筛选各部分
基于昆虫驱避性植物精油的改良杀昆虫剂是通过以下方式来获得：针对果蝇酪胺受体Dro-TyrR筛选植物精油的分离部分，且随后重组合对Dro-TyrR的特异性竞争性结合能力高于植物精油的部分。此方法以以下步骤来实施。
黑腹果蝇酪胺受体基因的PCR扩增和亚克隆
为生成在培养物中表达细胞表面酪胺受体的果蝇细胞以达成筛选植物精油部分的目的，首先自通过伯克利果蝇基因组计划(Berkeley Drosophila Genome Project)(www.fruitfly.org)获得的黑腹果蝇头部cDNA噬菌体文库扩增酪胺受体。自此文库使用液体培养裂解物纯化噬菌体DNA，如以下文献中所述：莱科(Lech)(2001)“自小规模液体裂解物制备DNA(Preparing DNA from small-scale liquid lysates)”，奥斯贝尔J.G.(Ausubel，J.G.)、史密斯J.A.(Smith，J.A.)、史壮K.(Struhl，K.)(编辑)，当前分子生物学方法(Current Protocols in Molecular Biology)，约翰威利父子公司(John Wiley &Sons，Inc)，第1.13.7页。简单地说，用于扩增果蝇酪胺受体(TyrR)的开放式阅读框的基因特异性引物是基于肖东(Saudou)等人公开的dro-TyrR序列(1990，基因库登录号X54794；蛋白质登录号“CAA38565”)来设计的。这些基因特异性引物是由5’寡核苷酸(5’gccgaattcATGCCATCGGCAGATCAGATCCTG3’，SEQ ID NO.1)和3’寡核苷酸(5’taatctagaTCAATTCAGGCCCAGAAGTCGCTTG 3’，SEQ ID NO.2)组成的。大写字母与酪胺受体序列相匹配。5’寡核苷酸还含有EcoR I位点并且3’寡核苷酸含有Xba I限制性位点，其表示为加下划线的核苷酸。PCR是使用温特(Vent)聚合酶(新英格兰生物实验室(New England Biolabs))在以下条件中实施：95℃，5min，1个循环；95℃，30s；和70℃，90s，40个循环；以及70℃，10min，1个循环。用EcoR I和Xba I消化PCR产物，将其亚克隆至pCDNA3中并通过自动化DNA测序法(范德比尔特癌症中心(Vanderbilt Cancer Center))对两条链进行测序。此PCR产物中所含的开放式阅读框编码601个氨基酸的蛋白并且预测分子量为约64KDa。根据使用DNA星式软件程序(DNA Star Software Program)实施的排序对比，dro-TyrR(肖东等人，1990，前述文献)和现有TyrR二者的序列基本相同，但在dro-TyrR序列(登录号CAA38565)中第261位处的残基是半胱氨酸(C)并且在现有TyrR序列中为酪氨酸(Y)。通过凯特(Kyte)和杜丽特(Doolittle)的方法以9个氨基酸的窗口实施的亲水性分析显示7个可能的跨膜结构域。参见凯特和杜丽特(1982)，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)157：105-132。BLAST分析也显示，所克隆的黑腹果蝇TyrR与其它生物胺受体最为类似。
TyrR与tyr-dro受体基本相同，其来自果蝇黑腹果蝇的酪胺受体(肖东等人，1990，前述文献)，并且属于相同系列，也命名为oct/Tyr受体(登录号P22270)，荒川(Arakawa)等人(1990)，神经元(Neuron)2：343-354。蛋白质排序表明，所克隆的TyrR与Amtyrl的一致性为66％(布林诺(Blenau)等人(2000)，神经化学杂志(J.Neurochem.)74：900-908)，与Tyr-Loc1和Tyr-Loc2二者的一致性为48％(凡登布鲁克(Vanden Broeck)等人(1995)，神经化学杂志64：2387-2395)，与秀丽线虫(c.elegans)-Tyr2的一致性为49％(莱克斯(Rex)等人(2002)，神经化学杂志82：1352-1359)，与Tyr-家蚕(Bombyx mori)的一致性为50％(欧塔(Ohta)等人(2003)，昆虫分子生物学(Insect Mol.Biol.)12(3)：217-223)，与酪胺受体冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)的一致性为56％(基因库，2003，登录号EAA07468)，与基因座OAR2的一致性为29％(格哈德(Gerhardt)等人(1997)，分子医药(Mol.Pharmacol.)51：293-300)，与Pa oa1(美洲大蠊(Periplaneta americana)的奥克巴胺受体)的一致性为27％(比斯科夫(Bischof)等人(2004)，昆虫生物化学分子生物学(Insect Biochem.Mol.Biol.)34：511-521)，并且与人类α2B肾上腺素能受体的一致性为32％(劳马斯内(Lomasney)等人(1990)，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)87：5094-5098)。
对于在果蝇施耐德S2细胞中的表达，使用Eco RI和Xba I限制性位点自pCDNA3中切除上述PCR产物中所含的酪胺受体(TyrR)开放式阅读框并将其插入pAc5.1/V5-His B(pAC)中，从而生成表达质粒pAc5.1/V5-His B-酪胺受体(pAC-TyrR)。
细胞培养和转染
在用于自黑腹果蝇头部cDNA噬菌体文库扩增的酪胺受体的稳定转染和表达的现有研究中使用缺少内源酪胺受体的果蝇施耐德2(S2)细胞(凡登布鲁克等人，1995；凡波尔(Van Poyer)等人，2001)。从这一点来说，使细胞在含有10％热灭活胎牛血清(FBS)的施耐德果蝇培养基中生长。培养基补加有50单位/ml的青霉素G(penicillin G)、50μg/ml硫酸链霉素(streptomycin sulfate)。对于稳定转染，使用磷酸钙-DNA共沉淀方案以pAc5.1/V5-His B-酪胺受体(pAC-TyrR)来转染果蝇S2细胞，如英杰(Invitrogen)果蝇表达系统(DES)手册中所述。使细胞在室温(23℃)下于补加有选择剂(25μg杀稻瘟素(blasticidin)/ml培养基)的相同培养基中维持和生长。选择出10克隆的稳定转染细胞并单独进行增殖。选择克隆细胞系并通过将1x106个细胞在23℃下于1ml含有4nM3H-酪胺的昆虫盐水缓冲液(170mM NaCl、6mM KCl、2mM NaHCO3、17mM葡萄糖、6mM NaH2PO4、2mM CaCl2、和4mM MgCl2)中培育20min以完整细胞结合来分析其受体表达。通过离心使细胞沉淀，用昆虫盐水洗涤一次，并且随后将其转移至闪烁瓶中。通过在反应中引入100μM未标记酪胺来测定非特异性结合。经pAC-TyrR稳定转染的细胞纯系显示对3H-酪胺具有最高结合亲和性，对其进行增殖以用于鉴别针对目标害虫的改良药剂。在所有实例性实施例中，同时对经pAc5.1/V5-His B(pAc5.1；缺少酪胺受体基因的亲代载体)转染的S2细胞进行处理作为阴性对照。
对于药理性结合实验，来自稳定转染果蝇S2细胞纯系的膜部分显示对3H-酪胺具有最高结合亲和性，对其进行分离和分析以测定与3H-酪胺的总结合、非特异性结合和特异性结合(图23)。为首先分离膜，通过自培养皿刮擦且随后用PBS冲洗培养皿以相同培养基收获在果蝇培养基中生长的表达Dro-TyrR的S2细胞。将细胞以1000g离心3min，用PBS洗涤一次并如前文所述再次离心。使细胞悬浮于冰冷低渗缓冲液(10mM Tris-Cl，pH 7.4)中，在冰上培育10min，并且使用杜恩斯(dounce)玻璃匀浆器和密封性玻璃杵(康特斯玻璃公司(Kontes Glass Co.)，维尔兰德，NJ)通过10次冲击来进行裂解。通过以600g离心5min来使细胞核沉淀。倾析上清液并以30,000g离心30min以使粗制膜部分沉淀。使沉淀悬浮于结合缓冲液(50mM Tris-Cl，5mM MgCl2，pH 7.4)中。通过布拉德福德分析(Bradford Assay)(伯乐实验室(Bio-Rad Laboratories)，赫尔克里斯，CA)来测定蛋白质浓度。在干冰上冷冻膜，随后以等份试样储存在-75℃下。
为了随后评估与3H-酪胺的总结合、特异性结合、和非特异性结合，在500μl含有10-50μg膜蛋白和4nM3H-酪胺的结合缓冲液中实施放射性配体结合。在23℃下在存在和不存在10μM未标记酪胺时培育结合反应物。在60min后通过添加3ml冰冷结合缓冲液来终止反应，并且经已在0.3％聚乙烯亚胺中浸泡30min的GF/C滤膜过滤。用3ml结合缓冲液将滤膜再冲洗一次。
对于Kd和Bmax的测定，使用0.1nM至30nM范围内的3H-酪胺，并且使用10μM未标记酪胺作为竞争剂来测定非特异性结合。特异性结合的Kd和Bmax分别测定为2.557nM和0.679pmol受体/mg膜蛋白。来自经空pAc5.1稳定转染的果蝇S2细胞的膜部分不显示特异性结合。3H-酪胺与表达TyrR的膜的高亲和性结合表明，其为用于竞争结合实验的适宜配体。
在竞争性结合分析中用3H-酪胺和五种生物胺测定TyrR的潜在天然配体的亲和性(图24和表O)。酪胺(TA)对果蝇TyrR的Ki(1.27μM)最低，其次是对DL-奥克巴胺(OA；28.68μM)。生物胺的亲和性的降序排列为TA＞OA＞多巴胺(DA)≥血清素(SE)＞组胺(His)。这些数值与针对tyr-dro所获得的结果大致相同(肖东等人，1990，前述文献)。TA对TyrR的亲和性是DL-奥克巴胺约22.58倍。因此，这些结果表明，TA是所克隆TyrR的内源配体。测试各种其它生物胺受体拮抗剂的亲和性以确定TyrR的药理学特征。所测试药物显示亲和性递减的效力级序，如下所述：育亨宾(yohimbine)＞酚妥拉明(phentolamine)＞氯丙嗪(chlorpromazine)＞米安色林(mianserine)(表O)。
表O
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测试药物的此效力顺序与肖东等人(1990)在前述文献中所述的效力顺序一致。已确定育亨宾是黑腹果蝇(肖东等人，1990，前述文献；荒川等人，1990，前述文献)和家蚕(可汗(Khan)等人，(2003)昆虫生理生化档案(Arch.Insect Biochem.Physiol.)52：7-16)中酪胺受体的特异性拮抗剂。此受体的药理学特征与自果蝇克隆的或其它昆虫物种中的任何其它生物胺受体都不一致。具体来说，自美洲大蠊克隆的奥克巴胺受体(Pa oa1)或自黑腹果蝇克隆的奥克巴胺受体(OAMB)(比斯科夫和艾娜(Enan)，2004，前述文献)、或各种昆虫制剂中特征性的奥克巴胺受体(埃文斯(Evans)(1981)生理学杂志(J.Physiol.)318：99-122；杜戴(Dudai)等人(1982)，神经化学杂志38：1551-1558；桂林(Guillen)等人(1989)，生命科学(Life Sci.)45(7)：655-662)所显示的亲和性级序与现有数据不同。
昆虫驱避性植物精油的分级分离
为生成昆虫驱避性植物精油中用于针对表达Dro-TyrR的S2细胞筛选的部分，通过管柱色谱对植物精油样品进行分级分离。首先通过以下方式制备含有存于5％乙腈/95％己烷中的90-230目硅胶吸附剂的制备级重力管柱：在5％乙腈/95％己烷中混合硅胶浆液，并且将浆液转移至玻璃色谱柱中。使浆液沉降并使溶剂自管柱排出，直至液面到达硅胶顶部为止。在经封装硅胶的顶部，缓慢添加5ml体积的植物精油。使管柱排液直至所载入植物精油的液面到达硅胶顶部为止。然后将两倍管柱体积的5％乙腈/95％己烷洗脱溶剂载入管柱顶部，并且通过重力流动使管柱排液，同时收集5ml流份。在洗脱溶剂几乎到达硅胶顶部后，用1管柱体积的10％乙腈/90％己烷、20％乙腈/80％己烷、30％乙腈/70％己烷、40％乙腈/60％己烷、和50％乙腈/50％己烷各自对管柱进行逐步洗脱，同时全程收集5ml流份。通过旋转蒸发将所收集流份的体积各自降低至约500μl。
竞争性酪胺受体结合分析
然后使用竞争性酪胺受体结合分析针对果蝇酪胺受体筛选植物精油管柱流份的等份试样。为实施此分析，首先自根据上文所述产生的表达Dro-TyrR的S2细胞分离含有Dro-TyrR的膜。所有步骤都是在4℃下或在冰上进行的。通过自培养皿刮擦且随后用PBS冲洗培养皿以相同培养基来收获在果蝇培养基中生长的表达Dro-TyrR的S2细胞。将细胞以1000g离心3min，用PBS洗涤一次并如前文所述再次离心。使细胞悬浮于冰冷低渗缓冲液(10mM Tris-Cl，pH 7.4)中，在冰上培育10min，并且使用杜恩斯玻璃匀浆器和密封性玻璃杵(康特斯玻璃公司，维尔兰德，NJ)通过10次冲击来进行裂解。通过以600g离心5min来使细胞核沉淀。倾析上清液并以30,000g离心30min以使粗制膜部分沉淀。使沉淀悬浮于结合缓冲液(50mM Tris-Cl，5mM MgCl2，pH 7.4)中。通过布拉德福德分析(伯乐实验室，赫尔克里斯，CA)来测定蛋白质浓度。在干冰上冷冻膜，随后以等份试样储存在-75℃下。
然后通过以下方式来测定植物精油或其部分对酪胺受体结合酪胺的效应：将10-50μg膜蛋白和4nM3H-酪胺与植物精油或其特定部分的各种稀释液一起培育，并重复实施分析中的培育、终止和检测步骤。使用植物精油或特定部分的稀释倍数倒数的对数代替所测试竞争性配体的确切摩尔浓度，通过斯卡恰特作图法(Scatchard plot)使用软件GraphPad Prism(圣地亚哥，CA)来分析结合数据。所有结合分析都实施3次，每次分析中使用一式两份样品。
细胞内钙分析
在配体与生物胺受体结合时，此导致磷脂酶C(PLC)发生G-蛋白介导活化，从而可裂解磷酸肌醇磷酸(PIP2)而形成甘油二酯(DAG)和肌醇三磷酸(IP3)。IP3的细胞质浓度升高诱导自内质网释放Ca2+。诸如溴氰菊酯(DM)等害虫控制化学物质可影响生物胺受体下游的信号转导。为针对激活细胞内钙水平的受体介导升高的能力筛选植物精油中各部分，在将表达Dro-TyrR的S2细胞与各部分一起培育后，在所述细胞样品中测量钙响应性细胞渗透性染料Fura-2AM的荧光。在与Fura-2AM一起预培育的表达Dro-TyrR的S2细胞中，观察到Ca2+结合Fura-2AM荧光在添加1μM酪胺后不久迅速升高(图25)。此反应依赖于TyrR，因为在经缺少TyrR基因的对照质粒pAC转染的细胞中未观察到Ca2+增加。为用植物精油部分实施此分析，使经pAC-TyrR稳定转染的S2细胞在培养皿中生长，用昆虫盐水洗涤一次，通过刮擦进行收集，并使其以1x106细胞/ml悬浮于含有5μM Fura-2AM的昆虫盐水缓冲液中。在23℃和暗环境下将细胞培育1小时，将其离心，使其悬浮于1ml昆虫盐水缓冲液中，并立即对其实施钙测量。在添加特定植物精油部分的样品后，测量Ca2+结合Fura-2AM随时间变化的荧光。同时测试接受相同处理但存在植物精油部分的对照细胞。使用得自国际光子技术公司(Photon Technology International)(劳伦斯维尔，NJ)的具有法利克斯(Felix)软件的荧光分光光度计进行荧光测量和数据收集。还将细胞与植物精油一起培育，同时比较未分级分离油诱导的钙释放与特定部分诱导的钙释放。对每个测试样品实施四次单独试验。通过将各数值除以背景荧光来使数据标准化，所述背景荧光是在分析开始时在添加测试样品之前获得的。
为确定细胞内Ca2+响应植物精油部分对细胞的处理而升高是否是由酪胺受体特异性介导，用如上所述经pAC转染而因此缺少内源酪胺受体的S2细胞重复实施Fura-2AM荧光分析。在表达Dro-TyrR的S2细胞中而非缺少TyrR的细胞中诱导Ca2+结合Fura-2AM升高的植物精油部分含有特异性影响酪胺受体信号转导的成份。
受体介导的cAMP产生分析
还针对调节酪胺受体介导活化cAMP产生的能力来筛选植物精油管柱流份的等份试样。
在细胞处理24小时之前，在12孔培养皿(4.5cm2)中将来自pAC-TyrR稳定转染S2细胞系的300,000个细胞平铺在1ml含有25μg/ml杀稻瘟素的培养基中，所述细胞系显示对3H-酪胺和对照(未转染)细胞具有最高结合亲和性。对于细胞处理，对培养基进行抽气并添加1ml含有300μM IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)的PBS和测试试剂。对于植物精油的各管柱色谱流份，在23℃下于所述部分存在和不存在时培育细胞。同时还将细胞样品与未分级分离的植物精油一起培育。在培育10min后，对PBS进行抽气并且在-20℃下将细胞与70％乙醇一起培育12小时。对细胞碎片进行离心，随后去除上清液并进行冷冻干燥。根据制造商说明书通过3H-cAMP Biotrak分析系统(安玛西亚生物科技公司(Amersham Biosciences)，皮斯卡塔维，NJ)使用cAMP结合蛋白来测定cAMP在提取物中的含量。将细胞处理实施3次，每个浓度重复两次。由于在接受相同处理的对照未转染细胞中缺少cAMP产生，由此表明个别植物精油部分对cAMP产生具有特异性酪胺受体介导活化作用。为测定细胞中独立于细胞内钙增加所产生的cAMP水平，在添加TA前10min时将细胞与20μM BAPTA/AM一起培育以螯合细胞内钙。
实例19
通过植物精油部分的选择性重组合生成针对目标害虫的改良药剂
将植物精油中如实例18中所述针对结合与活化果蝇酪胺受体的能力所筛选的部分根据其特异性活性重组合。将特异性活性高于未分级分离油的部分重组合，而不将特异性活性低于未分级分离油或可忽略不计的部分与其它部分重组合，或将其以比例较小的含量重组合。比较重组合部分与未分级分离油在竞争性抑制酪胺结合分析、细胞内钙释放分析、和cAMP产生分析中的活性(所述分析各自阐述于实例18中)，以确认药剂的特异性活性在分级分离和重组合后有所升高。
实例20
测定针对黑腹果蝇的毒性
昆虫和测试药剂
黑腹果蝇(野生型)购自卡罗莱那生物制品供应公司(Carolina Biological Supply Company)(伯灵顿，NC)。酪胺受体突变体(TyrRneo30)黑腹果蝇得自伯明顿果蝇保存中心(Bloomington Drosophila Stock Center)(储存号BL-10268)。在突变体果蝇的构造中，插入单一P转座因子已在酪胺受体中引发突变；其表型包括嗅觉缺陷。例如，参见库尔利(Cooley)等人，(1988)科学(Science)，239，1121-1128。据报导负责的转座子是P{hsneo}TyrRneo30、BDGP：1(3)neo30，如果蝇数据库(flybase)网站(超文本传送协议，flybase<dot>bio<dot>indiana<dot>edu/<dot>bin/fbidq<dot>htm？FBA10011043)中所述。两种果蝇品系都维持在标准实验室条件下。
针对黑腹果蝇的毒性
为确定pAC-TyrR细胞模型(克隆号2)中响应未经分级分离的或经分级分离和重组合的精油处理产生的细胞变化是否与其杀昆虫活性相关，实施针对野生型黑腹果蝇的毒性生物分析。以不同稀释度在丙酮中制备未经分级分离的或经分级分离和重组合的植物精油溶液并通过局部投与将其施加至果蝇。每个浓度使用三个重复，每个重复使用5只果蝇。用相同体积(0.5μl/苍蝇)的丙酮处理对照果蝇。对数据实施概率分析以确定每种化学物质的LD50值，如法妮(Finney)(1971)概率分析(Probit analysis)，第3版，剑桥大学出版社(Cambridge University Press)，伦敦，333中所述。为确定所测试植物精油的毒性中是否涉及酪胺受体，用等效于野生型品系的已确定LD50的剂量对酪胺受体突变体(TyrRneo30)黑腹果蝇品系进行局部处理。在处理24小时后计算死亡率。每种化学物质的生物分析使用三个重复并且每个重复使用5只昆虫。将此生物分析重复实施五次。
实例21
鉴别并筛选植物精油中的化合物以确定产生针对目标害虫的改良药剂的活性成份
通过与气相色谱管柱直接相连的质谱仪(GC-MS)分析来鉴别植物精油或其特定部分中的化合物。通过特征性质谱来鉴别各化合物，所述特征性质谱与指纹质谱文库中的指纹质谱相匹配，所述文库是质谱仪分析软件中的标准组件。
经鉴别存于植物精油或其部分中的化合物得自化学品供应商，并使用细胞内钙释放分析针对表达酪胺受体的果蝇S2细胞进行筛选，如实例18中所述。在此情况下，在将细胞与这些特定化合物而非植物精油部分一起培育后测量Ca2+结合Fura-2AM在表达Dro-TyrR的S2细胞样品中的荧光。各化合物在细胞样品中的终浓度介于10pM与10μM之间。对同时测试的对照细胞进行相同处理，但并不与测试化合物一起培育。每个测试化合物实施四个单独试验。通过将各数值除以背景荧光来使数据标准化，所述背景荧光是在分析开始时在添加测试化合物之前获得的。
实例22
比较经鉴别存于植物精油中的化合物对酪胺结合酪胺受体的竞争性抑制
通过检验竞争性抑制酪胺受体结合酪胺的能力针对与酪胺受体相互作用的能力来测试触发细胞内Ca2+含量发生特异性酪胺受体介导变化的化合物，如实例18中所述。如上所述自表达Dro-TyrR的S2细胞分离质膜。然后通过将10-50μg膜蛋白和4nM3H-酪胺与个别化合物一起培育且重复实施分析中的培育、终止和检测步骤来测定各特定化合物对酪胺受体结合酪胺的效应。单独使用膜蛋白和4nM3H-酪胺实施对照实验以测定在不添加经鉴别存于植物精油中的化合物时与酪胺受体结合的酪胺部分。通过斯卡恰特作图法使用GraphPad Prism软件(圣地亚哥，CA)来分析结合数据。所有结合分析都实施3次，每次分析使用一式两份样品。个别化合物抑制酪胺结合的程度与化合物对酪胺受体的亲和性有关。
实例23
经鉴别存于植物精油中的特定化合物的昆虫毒性
在黑腹果蝇中使用毒性测试来测试经鉴别存于植物精油中的特定分离化合物的昆虫毒性，如实例20中所述。在丙酮中制备在植物精油中鉴别后获得的个别化合物的溶液，并通过局部投与将其施加至个别果蝇。每个浓度使用三个重复，每个重复使用5只果蝇。用相同体积(0.5μl/苍蝇)的丙酮处理对照果蝇。对数据实施概率分析以确定各化学物质的LD50值，如法妮(1971)概率分析，第3版，剑桥大学出版社，伦敦，333中所述。为确定在所测试化合物的毒性中是否涉及酪胺受体，用等效于野生型品系的所测定LD50的剂量对酪胺受体突变体(TyrRneo30)黑腹果蝇品系实施局部处理。在处理后24小时计算死亡率。每种化学物质的生物分析使用三个重复，并且每个重复使用5只昆虫。将此生物分析重复五次。
实例24
通过组合经鉴别存于植物精油中的个别化合物生成针对目标害虫的改良药剂
组合两种或更多种经鉴别存于植物精油中并且在实例23所述分析中表现针对果蝇的毒性的化合物而形成混合物。使用实例18中所述Ca2+释放分析测试此混合物诱导细胞内Ca2+释放的能力，并与未分级分离的植物精油的活性进行对比。改变化合物的浓度以确定使细胞内Ca2+释放相对于未分级分离植物油得到最大提高的比例。然后在毒性分析中测试这些化合物组合以测定其相对于各单独化合物对果蝇的致死性。
实例25
通过组合经鉴别存于不同植物精油中的个别化合物生成针对目标害虫的改良药剂
组合两种或更多种经鉴别存于不同植物精油中并且在实例23中所述分析中可触发针对果蝇的受体特异性毒性的化合物而形成混合物。使用实例18中所述Ca2+释放分析测试此混合物能触发酪胺受体活化的细胞内Ca2+释放的程度，并与经鉴别含有所述化合物的各未分级分离植物精油的活性进行对比。改变化学衍生物或类似物化合物的浓度以确定可使细胞内Ca2+释放相对于未分级分离植物油得到最大提高的比例。然后在毒性分析中测试这些化合物组合以测定其相对于各单独化合物和相对于未分级分离植物油对果蝇的致死性。
实例26
筛选植物精油中活性成份化合物的化学衍生物或类似物
获得如实例21-23中所述鉴别并测试的化合物的化学衍生物和类似物，并针对其在多孔分析板中介导酪胺受体活化细胞内Ca2+释放的能力进行筛选。在将个别细胞样品与这些特定化合物中的一者一起培育后，测量Ca2+结合Fura-2AM在表达Dro-TyrR的S2细胞样品中的荧光。各化合物在细胞样品中的终浓度介于10pM与10μM之间。对同时测试的对照细胞实施相同处理，但不将其与测试化合物一起培育。对每种测试化合物实施四个单独试验。通过将各数值除以背景荧光来使数据标准化，所述背景荧光是在分析开始时在添加测试化合物之前获得的。同时对不表达酪胺受体的S2对照细胞(经不含Dro-TyrR基因的pAC载体稳定转染)进行测试，以测定测试化合物所触发的细胞内Ca2+升高的酪胺受体特异性。
实例27
通过组合经鉴别存于植物精油中的化合物的化学衍生物或类似物生成针对目标害虫的改良药剂
组合两种或更多种在实例26所述分析中触发针对果蝇的受体特异性毒性的化合物的化学衍生物或类似物而形成混合物。使用Ca2+释放分析实例18中所述分析测定由此混合物触发的酪胺受体活化细胞内Ca2+释放的水平，并与由经鉴别含有亲代化合物的未分级分离植物精油触发的受体活化细胞内Ca2+释放水平进行对比。改变化学衍生物或类似物化合物的浓度以确定可使细胞内Ca2+释放相对于未分级分离植物油得到最大提高的比例。然后在实例23所述毒性分析中测试这些化合物组合以测定其相对于各单独化合物和相对于未分级分离植物油对果蝇的致死性。
实例28
通过组合经鉴别存于不同植物精油中的化合物的化学衍生物或类似物生成针对目标害虫的改良药剂
组合两种或更多种经鉴别存于不同植物精油中并且在实例25所述分析中触发针对果蝇的受体特异性毒性的化合物的化学衍生物或类似物而形成混合物。使用实例18中所述Ca2+释放分析来测试此混合物能触发酪胺受体活化细胞内Ca2+释放的程度，并与经鉴别含有亲代化合物的各未分级分离植物精油的活性进行对比。改变化学衍生物或类似物化合物的浓度以测定可使细胞内Ca2+释放相对于未分级分离植物油得到最大提高的比例。然后在毒性分析中测试这些化合物组合以确定其相对于各单独化合物和相对于各未分级分离植物油对果蝇的致死性。基于昆虫驱避性植物精油的改良杀昆虫剂
上述各种方法及技术提供多种实施本发明的方式。当然，应理解，根据本文所述任一特定实施例并不一定可实现所有目标和优点。因此，例如，所属领域技术人员可了解，可以达成或优化本文所教示的一种或一组优点的方式实施所述方法但不一定达成本文可教示或建议的其它目标或优点。本文提及多种有利和不利的替代形式。应理解，某些优选实施例明确包括一个、另一个、或若干个有利特征，而其它实施例明确排除一个、另一个、或若干个不利特征，还有其它实施例通过引入一个、另一个、或若干个有利特征来明确减轻当前不利特征的影响。
此外，所属领域技术人员可了解不同实施例中各种特征的适用性。类似地，所属领域技术人员可将上文所述的各种要素、特征和步骤以及所述各要素、特征或步骤的其它已知等效形式混合并匹配，以根据本文所述原理实施方法。在各种要素、特征和步骤中，不同实施例可明确包括某些要素、特征和步骤并明确排除其它要素、特征和步骤。
尽管已在某些实施例和实例的上下文中揭示了本发明，但所属领域技术人员应理解，本发明的实施例并不限于明确揭示的实施例，其扩展至其它替代性实施例和/或其应用和修改形式以及等效形式。
本发明各实施例中已揭示多个变化形式和替代性要素。所属领域技术人员可了解其它变化形式和替代性要素。这些变化形式尤其是(不限于)至少两种经选择用于害虫控制组合物的活性成份，目标害虫、和各种成份存于害虫控制组合物中的含量。本发明各实施例可明确包括排除这些变化形式或要素中的任一者。
在某些实施例中，表达成份含量、特性(例如分子量)、反应条件等的用于阐述和主张本发明某些实施例的数值在某些情况中应理解为由术语“约”来修饰。因此，在某些实施例中，在书面说明和随附权利要求书中所述的数值参数是近似值，其可根据欲通过具体实施例获得的期望特性而变。在某些实施例中，应根据所报告有效位的数量并通过运用一般舍入技术来理解数值参数。尽管阐述本发明某些实施例广义范围的数值范围和参数是近似值，但在特定实例中所阐述的数值以尽可能精确的方式报告。本发明某些实施例中所述的数值可含有其相应测试测量中存在的标准偏差必然会引起的必然误差。
在某些实施例中，在阐述本发明具体实施例的上下文中(尤其在以下某些技术方案的上下文中)所用的术语“一”和“所述”以及类似含义可理解为涵盖单数及复数两种意义。本文所列举的数值范围仅意欲用作单独提及此范围内各单独数值时的速记方法。除非本文另外指出，否则各单独数值如同在本文中个别引用一般并入本说明书中。除非本文另有说明或上下文明显矛盾，否则本文所述的所有方法都可以任何适宜顺序来实施。本文中某些实施例提供的任何和所有实例或实例性语言(例如，“例如”)仅欲更好地阐述本发明而非限制以其它方式主张的本发明范围。说明书中的语言均不应理解为表示任何未阐明要素对本发明实践是必不可少的。
本文中所揭示的本发明替代性要素或实施例的分组不应理解为进行限制。各组成员可单独或与所述组的其它成员或本文所述的其它要素以任何组合提及和阐述。出于方便性或专利性原因，组中可包括或去除一或多个组成员。在进行任何所述包括或删除时，在本文中说明书可视为含有所述经修改群组，由此满足随附权利要求书中所用的所有马库西群组(Markush group)的书面说明。
本发明的优选实施例阐述于本文中，包括发明者已知用来实施本发明的最佳模式。所属领域技术人员在阅读以下说明后可了解所述优选实施例的变化形式。预期所属领域技术人员可根据需要采用所述变化形式，并且本发明可以本文未明确阐述的其它方式来实践。因此，如适用法律所允许，本发明许多实施例包括本文随附权利要求书中所述标的物的所有修改形式和等效形式。另外，除非本文另外说明或上下文明显矛盾，否则本发明涵盖上述要素在其所有可能的变化形式中的任一组合。
此外，在本说明书通篇中多次提及专利和印刷出版物。上述所引用参考文献和印刷出版物都是各自以引用方式全文单独并入本文中。
最后，应理解，本文所揭示的本发明实施例阐释本发明的原理。其它可用修改可包含于本发明范围内。因此，例如但不限于，可根据本文教示内容采用本发明的替代性组态。因此，本发明各实施例并不限于明确展示和阐述者。

Claims (38)

1.一种控制目标害虫的组合物，其包含至少两种选自由以下组成的群组的活性成份：百里香酚乙酸酯、乙酸里哪酯、丁酸戊酯、八角茴香油、黑种草油、对聚伞花素、香叶醇、肉豆蔻酸异丙酯、d-柠檬烯、里哪醇、丁香花油、水杨酸甲酯、α-蒎烯、胡椒醛、胡椒醇、四氢里哪醇、白色百里香油、红色百里香油、百里香酚、香草醛、和冬青油，其中所述组合物引发对所述目标害虫的协同控制。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述目标害虫是体内寄生虫，并且其中所述组合物包含至少两种选自由以下组成的群组的活性成份：α-蒎烯、百里香酚、对聚伞花素、里哪醇、百里香酚乙酸酯、和乙酸里哪酯。
3.如权利要求2所述的组合物，其包含至少三种选自所述群组的活性成份。
4.如权利要求2所述的组合物，其包含α-蒎烯、百里香酚、对聚伞花素、和里哪醇。
5.如权利要求2所述的组合物，其包含α-蒎烯、对聚伞花素、百里香酚乙酸酯、和乙酸里哪酯。
6.如权利要求4或5所述的组合物，其中α-蒎烯以1-10％范围内的含量存在，百里香酚或百里香酚乙酸酯以20-75％范围内的含量存在，对聚伞花素以2％-50％的范围存在，并且里哪醇或乙酸里哪酯以3％-40％的范围存在。
7.如权利要求6所述的组合物，其中α-蒎烯以4％-8％范围内的含量存在，百里香酚或百里香酚乙酸酯以30-65％范围内的含量存在，对聚伞花素以4％-40％的范围存在，并且里哪醇或乙酸里哪酯以6％-30％的范围存在。
8.如权利要求2所述的组合物，其中使用囊封剂来囊封所述活性成份。
9.如权利要求2所述的组合物，其中所述体内寄生虫是扁虫。
10.如权利要求9所述的组合物，其中所述扁虫是短膜壳绦虫(Hymenolepsis nana)。
11.如权利要求2所述的组合物，其中所述体内寄生虫是线虫。
12.如权利要求11所述的组合物，其中所述线虫是猪蛔虫(Ascaris suum)或犬弓蛔线虫(Toxocara canis)。
13.如权利要求1所述的组合物，其中所述目标害虫是体外寄生虫，并且其中所述组合物包含至少两种选自由以下组成的群组的活性成份：丁酸戊酯、八角茴香油、黑种草油、对聚伞花素、香叶醇、肉豆蔻酸异丙酯、d-柠檬烯、里哪醇、丁香花油、水杨酸甲酯、α-蒎烯、胡椒醛、胡椒醇、四氢里哪醇、白色百里香油、红色百里香油、百里香酚、香草醛、和冬青油。
14.如权利要求13所述的组合物，其中所述至少两种活性成份选自由以下组成的群组：香叶醇、d-柠檬烯、里哪醇、胡椒醛、四氢里哪醇、和香草醛。
15.如权利要求14所述的组合物，其中香叶醇以3％-30％的范围存在，d-柠檬烯以7％-30％的含量存在，里哪醇以4％-20％的范围存在，胡椒醛以2％-25％的范围存在，四氢里哪醇以6％-22％的范围存在，并且香草醛以0.3％-1.5％的范围存在。
16.如权利要求13所述的组合物，其中所述至少两种活性成份选自由以下组成的群组：丁酸戊酯、八角茴香油、和白色百里香油。
17.如权利要求16所述的组合物，其中丁酸戊酯以15％-30％的范围存在，八角茴香油以40％-65％的范围存在，并且白色百里香油以15％-30％的范围存在。
18.如权利要求13所述的组合物，其中所述至少两种活性成份是白色百里香油和冬青油。
19.如权利要求18所述的组合物，其中白色百里香油以10-30％的范围存在，并且冬青油以25％-55％的范围存在。
20.如权利要求13所述的组合物，其中所述至少两种活性成份选自由以下组成的群组：d-柠檬烯、丁香花油、和白色百里香油。
21.如权利要求20所述的组合物，其中d-柠檬烯以15％-35％的范围存在，丁香花油以30％-55％的范围存在，并且白色百里香油以20％-40％的范围存在。
22.如权利要求13所述的组合物，其中所述至少两种活性成份选自由以下组成的群组：α-蒎烯、百里香酚、对聚伞花素、和里哪醇。
23.如权利要求22所述的组合物，其中α-蒎烯以1-10％范围内的含量存在，百里香酚以25-45％范围内的含量存在，对聚伞花素以20％-35％的范围存在，并且里哪醇以2％-15％的范围存在。
24.如权利要求13所述的组合物，其中所述至少两种活性成份选自由以下组成的群组：d-柠檬烯、里哪醇、胡椒醛、胡椒醇、四氢里哪醇、和香草醛。
25.如权利要求24所述的组合物，其中d-柠檬烯以5％-15％的范围存在，里哪醇以10％-25％的范围存在，胡椒醛以15％-30％的范围存在，胡椒醇以5％-15％的范围存在，四氢里哪醇以10％-30％的范围存在，并且香草醛以0.5％-5％的范围存在。
26.如权利要求13至25中任一权利要求所述的组合物，其中所述体外寄生虫是选自以下群组中的一者：跳蚤、蜱虫、蚊子、蓟马、和苍蝇。
27.如权利要求26所述的组合物，其中所述体外寄生虫选自由以下组成的群组：猫栉头蚤(Ctenocephalides felis)、落矶山革蜱(Dermacentor andersoni)、血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)、埃及斑蚊(Aedes aegypti)、和厩螯蝇(Stomoxys calcitrans)。
28.一种抗寄生虫调配物，其包含如权利要求1至28中任一权利要求所述的组合物，其中所述组合物以1％-30％的范围存在，并且所述调配物中的其余部分是溶剂或表面活性剂。
29.一种治疗个体中的寄生虫侵染的方法，其包含向所述个体投与有效量的如权利要求1至27中任一权利要求所述的组合物或如权利要求28所述的抗寄生虫调配物。
30.一种如权利要求1至27中任一权利要求所述的组合物的用途，其用于制造治疗或预防寄生虫感染的药物。
31.一种医药组合物，其包含医药上适宜的载剂或稀释剂和足量的如权利要求1至27中任一权利要求所述的组合物。
32.一种制备控制目标害虫的改良药剂的方法，其包含：
提供包含多个部分的复合药剂；
至少分离所述药剂的第一部分；
使用包含至少一种无脊椎动物受体的筛选系统来筛选所述第一部分以获得第一筛选结果；
比较所述第一筛选结果与第二筛选结果，其中所述第二筛选结果包含针对所述至少一种无脊椎动物受体筛选所述复合药剂的结果，并且其中所述第一和第二筛选结果指示针对所述目标害虫的潜在活性；和
改变所述复合药剂的特性，由此制备所述改良药剂，其中所述改变基于自所述筛选步骤和所述比较步骤中的至少一者获得的信息。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述第一筛选结果的数值高于所述第二筛选结果的数值，并且其中所述改变包含提高所述第一部分的相对含量。
34.如权利要求32所述的方法，其中所述第一筛选结果的数值低于所述第二筛选结果的数值，并且所述改变包含降低所述第一部分的相对含量。
35.如权利要求32所述的方法，其中所述第一部分包含单一活性成份。
36.如权利要求32所述的方法，其中所述第一部分包含多种成份。
37.如权利要求32所述的方法，其另外包含自所述复合药剂分离第二部分，并且其中所述改变所述复合药剂的特性包含组合所述第一与第二部分。
38.如权利要求32所述的方法，其另外包含以下步骤：
将至少第三部分与所述第一部分分离；
在第二筛选步骤中使用所述筛选系统筛选所述第三部分，以获得第三筛选结果；
在第二比较步骤中比较所述第三筛选结果与第四筛选结果，其中所述第四筛选结果包含针对至少一种无脊椎动物受体筛选所述改良药剂的结果，并且其中所述第三和第四筛选结果指示针对所述目标害虫的潜在活性；和
改变所述改良药剂的特性以制备进一步改良的药剂，其中所述改变基于自所述第二筛选步骤和所述第二比较步骤中至少一者获得的信息。
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