CN101999076B - 免疫分析装置和免疫分析方法 - Google Patents

免疫分析装置和免疫分析方法 Download PDF

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Abstract

提供一种免疫分析装置，该装置能够在待测物分析用具的测定区域中，区别由于特异性免疫反应所引起的正常的着色和由于特异性免疫反应以外所引起的异常的着色。本发明的免疫分析装置(1)具有光学检测单元(4)和判断单元(5)；所述光学检测单元(4)包括测定两个以上波长的各光学信号的光学信号测定单元，所述两个以上波长包括用于检测由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化的主波长、和所述主波长以外的副波长；所述判断单元(5)包括区别单元，该区别单元对所述两个以上波长的各光学信号进行比较，并基于预先制定的比较基准，区别由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和所述特异性免疫反应以外的颜色变化。

Description

免疫分析装置和免疫分析方法
技术领域
本发明涉及免疫分析装置和免疫分析方法。
背景技术
近年来，在感染症的诊断中，检测细菌或病毒等病原体的诊断试剂盒正在普及。在所述诊断试剂盒中，利用免疫色谱法的诊断试剂盒由于能够简便且迅速地测定，因此被广泛使用。使用所述诊断试剂盒的所述免疫色谱法的测定原理如下所述。即，首先，准备由多孔膜所形成的、在所述多孔膜的测定区域固定有抗体的待测物分析用具(试验片)。向其中加入试样(待测物)和用着色颗粒标记的标记化抗体。在所述试样中存在作为检测对象的抗原时，则通过所述抗原，所述标记化抗体和所述固定化抗体形成复合物，通过所述着色颗粒，例如，多孔膜上的测定区域发生着色。作为所述标记，除了着色颗粒以外，还有酶和通过酶反应而着色的底物的组合。所述测定区域通常为线状。确认到着色的情况下，则视为试样中存在检测对象而判断为阳性，没有着色时，则视为试样中不存在检测对象而判断为阴性。该判断虽然通过目视也能够进行，但从判断的客观性和高效化等观点出发，对待测物分析用具的测定区域的着色进行光学检测而判断的免疫分析装置正在实用化(例如，专利文献1等)。然而，在利用免疫色谱法的诊断试剂盒中，由于非特异性反应所引起的着色、由于试剂的经时劣化所引起的变色或由于杂质等的附着等免疫反应以外所引起的着色等异常的着色有时也会出现。通过目视观察的话，虽然也能够区别这些异常的着色，但在免疫分析装置的情况下，异常的着色有时也会被错误地检测出来。
[现有技术文献]
[专利文献]
专利文献1：日本特开2005-24323号公报
发明内容
发明要解决的问题
因此，本发明的目的在于提供一种免疫分析装置和免疫分析方法，其能够在待测物分析用具的测定区域中，区别由于特异性免疫反应所引起的正常的着色和由于特异性免疫反应以外所引起的异常的着色。
用于解决问题的方案
本发明的免疫分析装置的特征在于，其为检测待测物分析用具中由于特异性免疫反应所引起的颜色变化、并判断试样中是否存在检测对象的免疫分析装置，
该免疫分析装置包括用于检测所述待测物分析用具的颜色变化的光学检测单元、和
基于来自所述光学检测单元的信息，判断是否存在所述检测对象的判断单元，
所述光学检测单元包括测定两个以上波长的各光学信号的光学信号测定单元，所述两个以上波长包括用于检测由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化的主波长、和所述主波长以外的副波长，
所述判断单元包括区别单元，该区别单元对包括所述主波长的光学信号在内的所述两个以上波长的各光学信号进行比较，并基于预先制定的比较基准，区别由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和所述特异性免疫反应以外的颜色变化，
所述判断单元中，
未检测出所述待测物分析用具的颜色变化的情况下，则视为所述检测对象不存在而判断为阴性，
检测出所述待测物分析用具的颜色变化的情况下，通过所述区别单元，在区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化时，则视为所述检测对象存在而判断为阳性，在区别为由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化时，则判断为判断无效。
本发明的免疫分析方法的特征在于，其为检测待测物分析用具中由于特异性免疫反应所引起的颜色变化、并判断试样中是否存在检测对象的免疫分析方法，
该免疫分析方法包括检测所述待测物分析用具的颜色变化的光学检测工序、和
基于所述光学检测工序中得到的信息，判断是否存在所述检测对象的判断工序，
所述光学检测工序包括测定两个以上波长的各光学信号的光学信号测定工序，所述两个以上波长包括用于检测由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化的主波长、和所述主波长以外的副波长，
所述判断工序包括区别工序，该区别工序对包括所述主波长的光学信号在内的所述两个以上波长的各光学信号进行比较，并基于预先制定的比较基准，区别由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和所述特异性免疫反应以外的颜色变化，
所述判断工序中，
未检测出所述待测物分析用具的颜色变化的情况下，则视为所述检测对象不存在而判断为阴性，
检测出所述待测物分析用具的所述颜色变化的情况下，通过所述区别单元，在区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化时，则视为所述检测对象存在而判断为阳性，在区别为所述特异性免疫反应以外的颜色变化时，则判断为判断无效。
发明的效果
本发明中，通过测定用于检测由于特异性免疫反应所引起的颜色变化的主波长的吸光度以及所述主波长以外的副波长的吸光度，并基于比较基准进行判断，从而能够简单地区别由于特异性免疫反应所引起的正常的着色和由于特异性免疫反应以外所引起的异常的着色。因此，本发明能够避免例如由于非特异性反应所引起的着色和由于杂质的附着等、免疫反应以外所引起的着色等那样的异常着色所导致的错误判断，因此分析精度高。另外，由于两个以上波长的吸光度测定以及基于其结果的判断能够简单地实施，因此装置的结构也不会特别复杂。
附图说明
图1：图1的(A)为示出了本发明的免疫分析装置的一个例子和用于所述免疫分析装置的待测物分析用具的一个例子的立体图。图1的(B)为图1的(A)所示的免疫分析装置的内部结构的示意图。
图2：图2的(A)为示出了本发明所使用的试验片的一个例子的立体图。图2的(B)为图2的(A)所示的试验片的平面图。图2的(C)为图2的(B)所示的试验片的由I-I方向观察的截面图。
图3为示出了本发明的免疫分析装置中测定单元与测定区域的关系的一个例子的示意图。
图4：图4的(A)为示出了本发明所使用的试验片的其他例子的平面图。图4的(B)为图4的(A)所示的试验片的由I-I方向观察的截面图。图4的(C)为示出了封装有图4的(A)和(B)所示的试验片的待测物分析用具的平面图。
图5：图5的(A)、图5的(B)和图5的(C)为示出了本发明的分析方法中的显色反应过程的一个例子的示意图。
图6：图6的(A)和图6的(B)为示出了本发明所使用的渗滤式(flow through type)试验片的检测工序的一个例子的示意图。
附图标记说明
1 免疫分析装置
11 插入口
2 待测物分析用具
21 壳体
22 试样孔
23 测量窗
3 试验片
31 支撑体
32 多孔膜、抗体固定化膜
33 标记化抗体浸渍衬垫
34 样品衬垫
35 吸收衬垫
36、36a、36b、36c 测定区域
4 测定单元、光学检测单元
41 光源部
42 光接收部
43 照射光
44 反射光
45 X方向
5 控制分析部、判断单元
6 固定化抗体
7 标记化抗体
71 抗体
72 标记
8 抗原
9 抗原-标记化抗体结合体
10 复合物
具体实施方式
如前所述，本发明可以从待测物分析用具中的颜色变化的检测中判断阴性、阳性和判断无效任一者。所述阴性是指，例如，所述试样中不存在所述检测对象的判断结果。所述阳性是指，例如，所述试样中存在所述检测对象的判断结果。所述判断无效是指，例如，检测出所述检测对象的由于特异性免疫反应以外所引起的颜色变化因此判断为无效的判断结果。本发明中，所述阳性的判断例如可以通过所述颜色变化的程度(例如，显色强度等)而进行例如1+、2+、3+等这样的分级。作为所述分级的标识，不限于所述1+等，例如，可以为其他表示定量性或半定量性判断的标识等，没有特别限定。本发明中，由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化是指，例如，与目标检测对象的特异性免疫反应所引起的颜色变化。
<免疫分析装置>
如前所述，本发明的免疫分析装置的特征在于，其为检测待测物分析用具中由于特异性免疫反应所引起的颜色变化、并判断试样中是否存在检测对象的免疫分析装置，该免疫分析装置包括用于检测所述待测物分析用具的颜色变化的光学检测单元、和基于来自所述光学检测单元的信息而判断是否存在所述检测对象的判断单元，所述光学检测单元包括测定两个以上波长的各光学信号的光学信号测定单元，所述两个以上波长包括用于检测由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化的主波长、和所述主波长以外的副波长，所述判断单元包括区别单元，该区别单元对包括所述主波长的光学信号在内的所述两个以上波长的各光学信号进行比较，并基于预先制定的比较基准，区别由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和所述特异性免疫反应以外的颜色变化，所述判断单元中，未检测出所述待测物分析用具的颜色变化的情况下，则视为所述检测对象不存在而判断为阴性，检测出所述待测物分析用具的颜色变化的情况下，通过所述区别单元，在区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化时，则视为所述检测对象存在而判断为阳性，在区别为由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化时，判断为判断无效。
本发明中，例如，能够用1个待测物分析用具分析的检测对象可以是一种，也可以是两种以上。后者的情况下，例如，对于各检测对象，分别设定用于检测由于特异性免疫反应所引起的颜色变化的主波长。
对于所述一个主波长，所述副波长例如可以是一个波长，也可以是两个以上波长，没有特别限定。前者的情况下，为两个波长分析的形态，在所述判断单元中，比较主波长的光学信号与副波长的光学信号。后者的情况下，例如，为三个以上波长分析的形态，可以比较主波长的光学信号与任一种副波长的光学信号，也可以比较主波长与各副波长的光学信号。如前所述，检测对象为两种以上的情况下，对于各主波长，如前所述副波长例如可以是一个波长，也可以是两个以上波长。另外，对于各主波长，例如，可以设定相同的副波长，也可以设定不同的副波长。另外，例如，可以将各检测对象的各主波长分别作为其他检测对象的副波长。尤其是，例如，在判断试样中含有哪一种检测对象的情况下，优选这样将各主波长设定为其他检测对象的副波长。由此，能够更精确地判断含有多种检测对象中的哪一种检测对象。
所述光学信号的种类没有特别限定，可以列举例如吸光度、反射率、透射率等。另外，通常可以由吸光度计算反射率，由吸光度计算透射率，由反射率计算吸光度，由透射率计算吸光度。因此可以说，本发明中，例如，无论测定哪一种光学信号，都可以间接地测定其他的光学信号。
本发明的免疫分析装置可以为如下形态：在所述区别单元中，所述比较基准为所述主波长的光学信号与所述副波长的光学信号的大小关系的基准值，基于所述大小关系的基准值，比较所述主波长的光学信号与所述副波长的光学信号，由所述比较结果，区别由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和所述特异性免疫反应以外的颜色变化。例如，对于一个主波长，设定两个以上波长的副波长的情况下，可以使用表示所述主波长的光学信号与各副波长的光学信号的大小关系的两种以上的基准值。
所述主波长的光学信号与所述副波长的光学信号的比较，例如有使用比的比较、和使用差的比较。
首先，对所述光学信号为吸光度的情况下的所述比较的例子进行说明。在所述使用比的比较中，例如，在所述区别单元中，所述主波长的吸光度与所述副波长的吸光度的比较为由下式(1)定义的、所述主波长的吸光度(A)与所述副波长的吸光度(B)的比(R)，所述大小关系的基准值为所述比的基准值(Rs)，所述比的计算值(R)在所述比的基准值(Rs)以上的情况下，判断为阳性，所述比的计算值(R)小于所述比的基准值(Rs)的情况下，为判断无效。另外，也可以是：所述比的计算值(R)超过所述比的基准值(Rs)的情况下，判断为阳性，所述比的计算值(R)在所述比的基准值(Rs)以下的情况下，为判断无效。
R＝A/B      (1)
在所述使用比的比较中，例如，所述比为由下式(1’)定义的比的计算值(R’)，所述大小关系的基准值可以为所述比的基准值(Rs’)。此时，所述比的计算值(R’)在所述比的基准值(Rs’)以下的情况下，判断为阳性，所述比的计算值(R’)超过所述比的基准值(Rs’)的情况下，为判断无效。另外，也可以是：所述比的计算值(R’)小于所述比的基准值(Rs’)的情况下，判断为阳性，所述比(R’)在所述基准值(Rs’)以上的情况下，为判断无效。
R’＝B/A      (1’)
在所述使用差的比较中，例如，在所述区别单元中，所述主波长的吸光度与所述副波长的吸光度的比较为由下式(2)定义的、所述主波长的吸光度(A)与所述副波长的吸光度(B)的差(D)，所述大小关系的基准值为所述差的基准值(Ds)，所述差的计算值(D)在所述差的基准值(Ds)以上的情况下，判断为阳性，所述差的计算值(D)小于所述差的基准值(Ds)的情况下，为判断无效。另外，也可以是：所述差(D)超过所述基准值(Ds)的情况下，判断为阳性，所述差(D)在所述基准值(Ds)以下的情况下，为判断无效。
D＝A-B     (2)
在所述使用差的比较中，例如，所述差为由下式(2’)定义的差的计算值(D’)，所述大小关系的基准值可以为所述差的基准值(Ds’)。此时，所述差的计算值(D’)在所述差的基准值(Ds’)以下的情况下，判断为阳性，所述差的计算值(D’)超过所述差的基准值(Ds’)的情况下，为判断无效。另外，可以是：所述差(D’)小于所述基准值(Ds’)的情况下，判断为阳性，所述差(D’)在所述基准值(Ds’)以上的情况下，为判断无效。
D’＝B-A     (2’)
接着，对所述光学信号为反射率的情况下的所述比较的例子进行说明。在所述使用比的比较中，例如，在所述区别单元中，所述主波长的反射率与所述副波长的反射率的比较为由下式(3)定义的、所述主波长的反射率(P)与所述副波长的反射率(Q)的比(Rr)，所述大小关系的基准值为比的基准值(Rrs)，所述比的计算值(Rr)在所述比的基准值(Rrs)以下的情况下，判断为阳性，所述比的计算值(Rr)超过所述比的基准值(Rrs)的情况下，为判断无效。另外，也可以是：所述比的计算值(Rr)小于所述比的基准值(Rrs)的情况下，判断为阳性，所述比的计算值(Rr)在所述比的基准值(Rrs)以上的情况下，为判断无效。
Rr＝P/Q      (3)
在所述使用比的比较中，例如，所述比为由下式(3’)定义的、所述主波长的反射率(P)与所述副波长的反射率(Q)的比的计算值(Rr’)，所述大小关系的基准值可以为所述比的基准值(Rrs’)。此时，所述比的计算值(Rr’)在所述比的基准值(Rrs’)以上的情况下，判断为阳性，所述比的计算值(Rr’)小于所述比的基准值(Rrs’)的情况下，为判断无效。另外，也可以是：所述比的计算值(Rr’)超过所述比的基准值(Rrs’)的情况下，判断为阳性，所述比的计算值(Rr’)在所述比的基准值(Rrs’)以下的情况下，为判断无效。
Rr’＝Q/P     (3’)
在所述使用差的比较中，在所述区别单元中，所述主波长的反射率与所述副波长的反射率的比较为由下式(4)定义的、所述主波长的反射率(P)与所述副波长的反射率(Q)的差(Dr)，所述大小关系的基准值为所述差的基准值(Drs)，所述差的计算值(Dr)在所述差的基准值(Drs)以下的情况下，判断为阳性，所述差的计算值(Dr)超过所述差的基准值(Drs)的情况下，为判断无效。另外，也可以是：所述差的计算值(Dr)小于所述差的基准值(Drs)的情况下，判断为阳性，所述差的计算值(Dr)在所述差的基准值(Drs)以上的情况下，为判断无效。
Dr＝P-Q      (4)
在所述使用差的比较中，例如，所述差为由下式(4’)定义的、所述主波长的反射率(P)与所述副波长的反射率(Q)的差(Dr’)，所述大小关系的基准值可以为所述差的基准值(Drs’)。此时，所述差的计算值(Dr’)在所述差的基准值(Drs’)以上的情况下，判断为阳性，所述差的计算值(Dr’)小于所述差的基准值(Drs’)的情况下，为判断无效。另外，也可以是：所述差的计算值(Dr’)超过所述差的基准值(Drs’)的情况下，判断为阳性，所述差的计算值(Dr’)在所述差的基准值(Drs’)以下的情况下，为判断无效。另外，关于所述透射率，例如，可以使用与所述反射率相同的公式和判断方法。
Dr’＝Q-P     (4’)
关于所述比和差的基准值的设定，没有特别限定，例如，可以事先收集由于所述特异性免疫反应所引起的正常的着色的情况和由于所述特异性免疫反应以外所引起的异常的着色的情况下的、主波长的光学信号和副波长的光学信号的数据，并根据所述数据设定基准值。
所述判断单元中，未检测出所述待测物分析用具的颜色变化的情况，可以列举例如无法检测出所述主波长的光学信号的情况(例如，小于检测限)。另外，在所述判断单元中，将所述主波长的光学信号基于预先制定的基准，作为未检测出所述待测物分析用具的颜色变化而判断为阴性，并通过所述区别单元，区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化。
关于所述后者，例示如下。在所述光学信号为吸光度的情况下，优选的是：例如，在所述判断单元中，所述主波长的吸光度小于预先制定的基准值(或基准值以下)的情况下，判断为阴性，所述主波长的吸光度在所述基准值以上(或超过所述基准值)的情况下，通过所述区别单元，区别为由于特异性免疫反应所引起的颜色变化和由于特异性免疫反应以外所引起的颜色变化。另外，在所述光学信号为反射率或透射率的情况下，优选的是：例如，在所述判断单元中，所述主波长的反射率或透射率超过预先制定的基准值(或基准值以上的)的情况下，判断为阴性，所述主波长的反射率或透射率在所述基准值以下(或小于所述基准值)的情况下，通过所述区别单元，区别为由于特异性免疫反应所引起的颜色变化和由于特异性免疫反应以外所引起的颜色变化。所述基准值的设定没有特别限定，例如，事先收集由于所述特异性免疫反应所引起的正常的着色的情况和未着色的情况下的、主波长的光学信号的数据，并根据所述数据设定基准值。具体而言，例如，通过目视，对正常着色的待测物分析用具和未着色的待测物分析用具同样地收集所述主波长的光学信号的数据，并根据所述数据设定基准值。另外，例如，制备目标检测对象的标准液，使其达到检测限浓度，使用待测物分析用具进行免疫反应，收集所述主波长的光学信号的数据，并根据所述数据设定基准值。
所述主波长与所述副波长的波长差例如优选为10nm以上，进一步优选为20nm以上。所述波长差例如在10nm～500nm的范围，更优选为20nm～300nm的范围，进一步优选为50nm～300nm的范围。
在本发明的免疫分析装置中，所述区别单元可以进一步将由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化区别为由于非特异性反应所引起的颜色变化和由于免疫反应以外所引起的颜色变化。所述由于非特异性反应所引起的颜色变化是指，例如，检测对象以外的物质所导致的、非特异性免疫反应所引起的颜色变化。所述由于免疫反应以外所引起的颜色变化为不是起因于免疫反应的颜色变化，可以列举例如由于待测物分析用具的试剂或部件的劣化所引起的颜色变化、由于杂质等异物的附着所引起的颜色变化、由于瑕疵或污垢等所引起的颜色变化等。
本发明的免疫分析装置的所述区别单元中，关于由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化，作为用于区别所述由于非特异性反应所引起的颜色变化和所述由于杂质等所引起的颜色变化的方法，例如可以列举以下方法。该方法为：检测所述试样中含有第1检测对象、和与此不同的第2检测对象中的哪一种的方法的一个例子；使用两种不同的标记物质，在三个测定波长下进行测定。首先，准备用第1标记物质将针对第1检测对象的抗体进行标记的第1标记化抗体、和用第2标记物质将针对第2检测对象的抗体进行标记的第2标记化抗体。另外，所述第1标记物质和所述第2标记物质选择具有不同的吸收峰的物质。接着，在待测物分析用具的多孔膜上各自分别固定所述针对第1检测对象的抗体和所述针对第2检测对象的抗体，形成测定区域。在所述多孔膜上的一端侧配置所述两种标记化抗体，使用试样，利用毛细管现象等，使所述两种标记化抗体和所述试样向所述测定区域移动。然后，使用于检测第1标记物质的主波长、用于检测第2标记物质的主波长以及与所述两种标记物质的各主波长不同的波长(第3波长)的光照射所述测定区域，测定固定有针对第1检测对象的抗体的区域的吸光度、和固定有针对第2检测对象的抗体的区域的吸光度。另外，所述第1标记物质的主波长和所述第2标记物质的主波长分别设定在显示各吸收峰的波长附近。在该形态中，针对所述第1标记物质的副波长为所述第2标记物质的主波长和所述第3波长，针对所述第2标记物质的副波长为所述第1标记物质的主波长和所述第3波长。接着，根据所述各吸光度如下进行判断。所述第1标记物质的主波长的吸光度(吸光度a)、所述第2标记物质的主波长的吸光度(吸光度b)和第3波长的吸光度(吸光度c)的全部吸光度均小的情况下，第1检测对象和第2检测对象均判断为“阴性”。所述吸光度a大、所述吸光度b和所述吸光度c小的情况下，为由于所述特异性免疫反应而与第1检测对象反应所产生的颜色变化，第1检测对象判断为“阳性”，第2检测对象判断为“阴性”。所述吸光度b大、所述吸光度a和所述吸光度c小的情况下，为由于所述特异性免疫反应而与第2检测对象反应所产生的颜色变化，第1检测对象判断为“阴性”，第2检测对象判断为“阳性”。所述吸光度a和所述吸光度b大、所述吸光度c小的情况下，视为第1标记化抗体和第2标记化抗体中的任一者由于所述非特异性反应而与所述测定区域结合所产生的颜色变化而判断为由于非特异性反应的“判断无效”。此外，所述吸光度a、吸光度b和吸光度c的全部吸光度均大的情况下，视为所述由于杂质等所引起的颜色变化而判断为由于杂质等的“判断无效”。这样，所述方法中，通过所述吸光度a、吸光度b和吸光度c的大小关系，能够区别和判断由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化、所述由于非特异性反应所引起的颜色变化、和所述由于杂质等所引起的颜色变化。另外，该方法仅为一个例子，并不限制本发明。而且，根据所述检测对象，例如可以适当使用标记化抗原和固定化抗原来代替所述标记化抗体和固定化抗体。
可以为如下形态：在本发明的免疫分析装置中，所述待测物分析用具包括测定区域和固定于所述测定区域的能够与所述检测对象结合的固定化抗体或固定化抗原(以下，也称为“固定化抗体等”)，将试样、和用通过颜色变化能够识别的标记所标记的、能够与所述检测对象结合的标记化抗体等导入所述待测物分析用具的所述测定区域，所述试样中存在检测对象的情况下，所述标记化抗体等通过所述检测对象而与所述固定化抗体等结合，形成复合物，由此在所述测定区域中产生由所述标记带来的颜色变化，通过所述光学检测单元检测所述测定区域的所述颜色变化。如后所述，本形态可以是使用固定化抗体和标记化抗体这两种抗体的形态，可以是使用固定化抗原和标记化抗体的形态，可以是使用固定化抗体和标记化抗原的形态，可以是使用固定化抗原和标记化抗原这两种抗原的形态。这样，作为使用固定化的抗体或抗原、和标记化的抗体或抗原这样的、使用两种试剂的形态，可以根据待测物分析用具的结构大致分类为例如侧流式(Lateral flow)和渗滤式。另外，例如，由于试样、抗体等试剂能够移动，因此优选具备流路。所述流路例如可以是多孔膜中的孔结构，也可以是设置于基板上的槽。所述待测物分析用具例如优选具备包含所述测定区域的多孔膜。
本发明中，所述标记化抗体和标记化抗原的标记例如为着色不溶性载体颗粒，所述颜色变化可以是由于形成包含所述着色不溶性载体颗粒的所述复合物所引起的所述测定区域的着色。另外，所述标记例如为酶，所述颜色变化可以为由于底物与所述复合物中含有的所述酶的酶反应而被着色所引起的所述测定区域的着色。
本发明中，可以为如下形态：例如，所述检测对象为多种，所述测定区域固定有对应于所述各检测对象的多种固定化抗体等，并将对应于所述各检测对象的多种标记化抗体或标记化抗原导入所述测定区域。
本发明的免疫分析装置中，所述光学信号测定单元没有特别限定，可以根据测定的光学信号的种类而适当决定，例如，所述光学信号为所述吸光度的情况下，优选含有吸光度测定单元，所述光学信号为所述反射率的情况下，优选含有反射率测定单元，所述光学信号为所述透射率的情况下，优选含有透射率测定单元。另外，所述光学信号测定单元例如可以具有选自所述吸光度测定单元、反射率测定单元和透射率测定单元所构成的组中的至少一种，也可以具有任意两种或全部。
接着，举出实例对本发明进行详细说明。
本发明中，所述试样例如只要含有待测物等即可，没有特别限定。所述试样例如可以对所述待测物进行处理而制备。作为所述处理，没有特别限定，可以列举例如提取处理、稀释处理、过滤处理等。所述提取处理的情况下，例如，可以将所述待测物添加到处理液中，提取所述待测物中的抗原或抗体，以此作为试样。所述待测物例如优选液状的物质，但不限于此，例如可以为固体状。所述待测物为固体状的情况下，例如，可以在所述处理液中将所述待测物溶解、悬浮或分散，以获得的液体作为试样，也可以将进一步过滤而获得的液体作为试样。作为用于所述各种处理的处理液，没有特别限定，可以列举例如Tris缓冲液、磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、硼酸缓冲液等缓冲液等。所述各种处理液中例如可以适当添加表面活性剂、稳定化剂、抗菌剂等。所述过滤处理没有特别限定，例如可以使用膜滤器等。作为所述待测物，可以列举例如鼻腔抽吸液、鼻腔清洗液、鼻腔擦拭液、鼻涕、咽部擦拭液、含漱液、唾液、全血、血清、血浆、粪便、尿、髓液等生物试样，动物和植物等食物或加工食品等食品，环境检查中的河川的水等，没有特别限定。
本发明中，作为所述检测对象，可以列举例如甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、腺病毒、RS病毒、冠状病毒、星状病毒、诺如病毒(norovirus)、麻疹病毒、轮状病毒、人类免疫缺陷病毒(HIV)、人T细胞白血病病毒(HTLV-1)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、疱疹病毒、支原体、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、结核菌、大肠杆菌群、A族溶血性链球菌(group A hemolytic streptococcus)、B族溶血性链球菌(group B hemolytic streptococcus)、肺炎球菌、葡萄球菌、MRSA、军团病菌、肠出血性大肠杆菌O157、vero毒素(verotoxin)、沙门氏菌、艰难梭菌、幽门螺杆菌、CRP、HBs抗原、HBs抗体、HBc抗原、HBc抗体、HBe抗原、HBe抗体、前列腺特异性抗原(PSA)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、促黄体激素(LH)、肌钙蛋白T、肌钙蛋白I、肌红蛋白、D-二聚体、便中血红蛋白、血红蛋白A1c、IgE抗体等病原体抗原、抗体、癌症标记、激素等生物体成分等，但不限于此，还可以列举例如残留农药、环境激素、食品中的过敏物质等，没有特别限定。本发明中，所述检测对象可以为一种，也可以将两种以上组合。
本发明中，产生颜色变化的特异性免疫反应的种类没有特别限定，可以采用公知的免疫反应。
具体而言，作为第1个例子，可以列举使用与检测对象特异性反应的抗体作为检测试剂的方法。作为所述抗体，例如，优选使用固定于待测物分析用具的测定区域的固定化抗体、和结合有标记的标记化抗体。如果使用这种抗体，例如，在所述试样中存在检测对象的情况下，所述检测对象与所述固定化抗体和标记化抗体通过免疫反应而结合，在所述待测物分析用具的测定区域上形成复合物。
另外，作为第2个例子，可以列举使用与所述检测对象特异性反应的抗原和与所述检测对象特异性反应的抗体作为检测试剂的方法。所述抗原例如优选为固定于待测物分析用具的测定区域的固定化抗原，所述抗体例如优选结合有标记的标记化抗体。如果使用这种检测试剂，例如，在所述试样中存在所述检测对象的情况下，所述检测对象与所述固定化抗原和标记化抗体通过免疫反应而结合，在所述待测物分析用具的测定区域上形成复合物。
另外，作为第3个例子，可以列举使用与所述检测对象特异性反应的抗原作为检测试剂的方法。作为所述抗原，例如，优选使用固定于待测物分析用具的测定区域的固定化抗原、和结合有标记的标记化抗原。如果使用这种检测试剂，例如，在所述试样中存在所述检测对象的情况下，所述检测对象与所述固定化抗原和标记化抗原通过免疫反应而结合，在所述待测物分析用具的测定区域上形成复合物。
关于这样通过免疫反应而形成的复合物，如后所述，只要根据所述标记化抗体或标记化抗原中的标记的种类来测定颜色变化即可。
本发明中，所述标记化抗体或所述标记化抗原没有特别限定，例如，可以是结合了着色不溶性载体颗粒作为标记的抗体或抗原，也可以是结合了酶作为标记的抗体或抗原。
本发明中，作为所述着色不溶性载体颗粒，没有特别限定，可以列举例如着色胶乳颗粒、金属胶体颗粒、着色聚甲基丙烯酸甲酯颗粒、着色聚乳酸颗粒、着色多孔玻璃颗粒、着色硅石颗粒、着色琼脂颗粒、着色葡聚糖颗粒等。作为所述着色胶乳颗粒，没有特别限定，可以列举例如蓝色胶乳颗粒、红色胶乳颗粒等。作为所述金属胶体颗粒，没有特别限定，可以列举例如金胶体颗粒、铂胶体颗粒等。所述着色不溶性载体颗粒的平均粒径没有特别限定，在所述着色胶乳颗粒的情况下，例如，为0.05μm～5μm的范围，优选为0.1μm～1μm的范围，在所述金属胶体颗粒的情况下，例如，为2nm～100nm的范围，优选为10nm～50nm的范围。本发明中，在所述检测对象为两种以上的情况下，作为所述着色不溶性载体颗粒，例如，优选使用着色不同的两种以上所述着色不溶性载体颗粒。在使用所述着色不同的两种以上着色不溶性载体颗粒时，各颗粒的所述吸收峰的波长差例如优选为10nm以上，进一步优选为20nm以上。所述波长差例如为10nm～500nm的范围，更优选为20nm～300nm的范围，进一步优选为50nm～300nm的范围。优选将各着色不溶性载体颗粒的吸收峰的波长或其附近波长分别作为用于检测所述各着色不溶性载体颗粒所引起的颜色变化的主波长。另外，对于某种着色不溶性载体颗粒，如前所述，可以将用于检测与其不同的着色不溶性载体颗粒所引起的颜色变化的主波长设定为其副波长。
本发明中，作为所述酶，只要是通过反应使底物着色的酶即可，没有特别限定，可以列举例如过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-D-半乳糖苷酶等。
本发明中，作为所述底物，只要是与所述酶反应而着色的底物即可，没有特别限定。作为所述底物，可以列举例如2，2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)、3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)、二氨基联苯胺(DAB)、5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸(BCIP)、4-甲基伞形酮基-β-D-半乳糖苷(4MUG)、3-(2’-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3”-β-D-吡喃半乳糖基)苯基-1，2-二氧杂环丁烷(AMGPD)等。
本发明中，所述检测对象为两种以上的情况下，基于所述酶与底物的反应的着色，例如优选为分别不同的着色。此时，针对各检测对象的所述酶与底物，例如，优选为反应时的着色分别不同的组合。各着色的所述吸收峰的波长差例如可以列举前述范围。优选将各着色的吸收峰的波长或其附近波长分别作为用于检测所述着色所引起的颜色变化的主波长。另外，对于某种着色，可以将用于检测与其不同的着色所引起的颜色变化的主波长设定为其副波长。
本发明中，作为所述标记化抗体的抗体，只要是能够与检测对象结合的抗体，则没有特别限定，可以列举例如能够与作为所述检测对象例示的前述各种抗原结合的抗体，和能够与各种抗体结合的抗体。所述抗体的种类没有特别限定，可以列举例如IgG、IgA、IgM、IgD、IgE、和IgY等。所述抗体可以列举例如免疫球蛋白分子、Fab、Fab’、F(ab’)2等抗体片段等，没有特别限定。另外，所述抗体可以通过以往公知的方法从来源于例如小鼠、兔、山羊、绵羊等哺乳类、鸡等鸟类等的血清制作，或者也可以利用市售的各种抗体，没有特别限定。此外，作为所述抗体，例如，可以使用多克隆抗体和单克隆抗体中的任一种，可以根据所述检测对象等适当设定。本发明中，作为所述固定化抗体的抗体，与所述标记化抗体同样地，可以列举例如能够与所述检测对象结合的抗体。所述固定化抗体的种类和制备方法例如与所述标记化抗体同样。
本发明中，作为所述标记化抗原的抗原，只要是能够与检测对象结合的抗原，则没有特别限定，可以列举例如能够与作为所述检测对象例示的前述各种抗体结合的抗原。另外，本发明中，作为所述固定化抗原的抗原，没有特别限定，与所述标记化抗原同样地，可以列举例如能够与所述检测对象结合的抗原。本发明中，所述标记化抗原和所述固定化抗原的制作方法可以列举例如以往公知的方法等，没有特别限定。
本发明中，所述主波长和副波长的范围没有特别限定，例如，可以根据所检测的颜色变化适当决定。作为具体例子，在由于特异性免疫反应所引起的颜色变化为蓝色的着色时，可以将主波长例如设定在600～660nm的范围(例如，610nm)，将副波长例如设定在500～550nm的范围(例如，525nm)。另外，作为具体例子，在由于特异性免疫反应所引起的颜色变化为红色的着色时，可以将主波长例如设定在500～550nm的范围(例如，525nm)，将副波长例如设定在600～660nm的范围(例如，610nm)。
接着，举出测定反射率作为光学信号的例子对本发明的免疫分析装置进行说明。但是，本发明的免疫分析装置不限于以下例子。
图1示出了本例的免疫分析装置。图1的(A)为本例的免疫分析装置和用于所述免疫分析装置的待测物分析用具的立体图，图1的(B)为图1的(A)所示的所述免疫分析装置的内部结构的示意图。两图中，相同部分附有相同附图标记。如图1的(A)所示，本例的免疫分析装置1在箱型的装置主体的正面形成有插入待测物分析用具2的多个插入口11。待测物分析用具2的结构为，在壳体21中收纳有试验片(图1中未图示)。在所述壳体21上表面形成有用于供给试样的试样孔22、和露出试验片的测定区域的测量窗23。关于试验片的结构，如后所述。
如图1的(B)所示，本例的免疫分析装置1包括测定单元4、和控制分析部5，它们为包含光学信号测定单元的光学检测单元和判断单元。所述测定单元4包括光源部41和光接收部42，能够在X方向45上移动。本例中，所述光源部41和所述光接收部42配置于插入在所述免疫分析装置1内的所述待测物分析用具2的上方，能够通过所述光接收部42测定从所述光源部41照射的照射光的反射光。所述光源部41由例如发光二级管(LED)或半导体激光二级管(LD)等构成。所述光接收部42由例如光电二级管、光电倍增管(Photomultiplier Tube)、CCD图像传感器等构成。本例中，所述光接收部42以时间差交互地测定所述两个波长光的照射所产生的反射光。所述控制分析部5包括：控制所述测定单元4的所述光源部41以及所述光接收部42的光照射和光接收的控制单元；和由测得的所述反射光计算反射率、判断阳性或阴性等的判断单元。本例中，所述判断单元由例如CPU、存储器、输入终端和输出终端构成。作为所述输入终端，可以列举例如键盘和触摸面板。所述输出终端可以列举例如显示器和打印机。另外，控制分析部5可以是全部配置于本例的装置主体中，也可以是全部或一部分配置于装置主体外部。例如，可以在个人计算机(PC)内构成控制单元。另外，在CPU中，例如，可以通过所述判断单元执行阳性、阴性和判断无效的判断以及区别。另外，在判断单元中使用的前述各种判断基准值，例如，可以预先存储于存储器中，在判断时参照；也可以通过输入单元输入CPU来参照。
接着，图2示出了本例的所述试验片3。图2的(A)为所述试验片3的立体图，图2的(B)为图2的(A)所示的所述试验片3的平面图(上面图)，图2的(C)为图2的(B)所示的所述试验片3的由I-I方向观察的截面图。所述三图中，相同部分附有相同附图标记。如图所示，本例的试验片3为侧流式。所述试验片3在支撑体31上的中央部配置有多孔膜32。在所述多孔膜32上以线状固定有所述固定化抗体，形成了线状的测定区域36a、36b和36c。本例中，所述测定区域36a为固定有抗甲型流感病毒单克隆抗体的甲型流感病毒检测区域，所述测定区域36b为固定有抗乙型流感病毒单克隆抗体的乙型流感病毒检测区域，所述测定区域36c为固定有抗小鼠IgG多克隆抗体的对照检测区域。在所述多孔膜32的一端侧(图中左侧)的上方，层叠配置有标记化抗体浸渍衬垫33的一部分，此外在其上进一步配置有样品衬垫34。本例中，所述标记化抗体浸渍衬垫33浸渍有蓝色胶乳标记抗甲型流感单克隆抗体和红色胶乳标记抗乙型流感单克隆抗体。在所述多孔膜32的另一端侧(图中右侧)的上方，层叠配置有吸收衬垫35的一部分。如前所述，所述试验片3收纳于所述壳体21内，所述测定区域36a、36b和36c在所述测量窗23的位置露出，样品衬垫34位于所述试样孔22的下方。
本发明中，所述多孔膜没有特别限定，优选可发挥毛细管作用的多孔膜，可以列举例如纤维素膜、醋酸纤维素、硝化纤维素等纤维素衍生物膜，玻璃滤器，滤纸等。本发明中，所述多孔膜的形状没有特别限定，可以列举例如长方形、圆形等。本发明中，所述多孔膜的大小没有特别限定，可以适当设定。
作为所述支撑体的材质，没有特别限定，可以使用由例如聚对苯二甲酸乙二酯、聚乙烯、聚苯乙烯、聚酯、醋酸纤维素等形成的物质，作为其形状，可以为薄膜状、片状、板状中的任一种。所述支撑体的形状和大小没有特别限定，可以根据所述试验片的结构适当设定。
作为所述标记化抗体浸渍衬垫的材质，没有特别限定，可以列举例如聚乙烯、玻璃纤维、人造丝、尼龙、纸、纤维素等。本例中，所述标记化抗体浸渍衬垫33例如可以在含有所述标记化抗体的缓冲液中浸渍并干燥来制作。作为所述缓冲液，没有特别限定，可以列举例如前述缓冲液等。本发明中，所述标记化抗体浸渍衬垫的形状和大小没有特别限定，可以适当设定。
作为所述样品衬垫的材质，没有特别限定，例如可以使用在所述标记化抗体浸渍衬垫中列举的材料等。所述样品衬垫的形状和大小没有特别限定，可以适当设定。并且，作为所述吸收衬垫的材质，同样没有特别限定，可以列举例如所述样品衬垫的材料等。所述吸收衬垫的形状和大小没有特别限定，可以适当设定。
本例的试验片中，虽然测定区域形成为在所述多孔膜32的宽度方向延伸的三根线状，但本发明不限于此，测定区域的个数例如可以在1～10个的范围内自由设定，另外测定区域的形状除了线状以外，还可以列举例如矩形、圆形等。
作为所述壳体的材质，没有特别限定，可以列举例如聚乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯、ABS树脂等。
接着，对于使用本例的免疫分析装置的免疫分析方法的一个例子，基于图1～3进行说明。另外，图3为示出了图1中的测定单元与测定区域的关系的图。另外，本发明的免疫分析装置不限于此。
首先，用棉棒擦拭咽部内壁，采集待测物。然后，将所述棉棒浸渍于所述提取液中，提取所述待测物，制备试样。
接着，在所述试样孔22中滴加所述试样。在所述试样滴加后30秒以内，将所述待测物分析用具2插入所述插入口11。通过所述滴加，所述试样通过所述试样孔22下部的所述样品衬垫34而被供给到所述标记化抗体浸渍衬垫33，进而，将在所述标记化抗体浸渍衬垫33中浸渍的所述标记化抗体溶解。在所述试样含有作为检测对象的抗原的情况下，通过抗原抗体反应，所述标记化抗体与所述抗原结合，形成抗原-标记化抗体结合体。并且，所述抗原-标记化抗体结合体在所述多孔性膜32中展开，与所述测定区域的所述固定化抗体结合，形成复合物。通过所述复合物的形成，测定区域36a～36c显色。关于这一系列的反应，基于图5的(A)、图5的(B)和图5的(C)的示意图具体说明。在所述图5的各图中，与图1～图3相同的部分附有相同附图标记。如图5的(A)所示，准备在测定区域36固定有固定化抗体6的多孔膜32。在所述多孔膜32的与所述测定区域36所在一侧相反侧(图中左侧)的一端，导入含有抗原8的试样和标记化抗体7。该图中，71为抗体，72为标记。如图5的(B)所示，所述标记化抗体7与所述抗原8结合，形成抗原-标记化抗体结合体9，如箭头所示，所述结合体9通过毛细管现象，在所述多孔膜32内在长度方向上移动，到达所述测定区域36。接着，如图5的(C)所示，所述结合体9通过所述抗原8而与所述固定化抗体6结合，形成复合物10，由此所述测定区域36通过所述标记72而着色。所述着色通过照射主波长和副波长的光43来检测。本例中，在所述试样中含有甲型流感抗原的情况下，所述测定区域36a显色为蓝色，在所述试样中含有乙型流感抗原的情况下，所述测定区域36b显色为红色。另外，在所述测定区域36c结合了所述两种标记化抗体时，由于蓝色和红色两种显色，结果显色为紫色，因此能够确认所述各标记化抗体在所述测定区域展开(到达)。所述测定区域36未保持的试样被吸收到所述吸收衬垫35中。
从试样滴加起经过规定时间后，通过所述测定单元4，如下测定所述测定区域的显色。所述规定时间没有特别限定，例如在5～15分钟的范围。并且，所述测定单元4如下测定：通过所述光源部41，在所述试验片3的包括所述测定区域36a、36b和36c的所述多孔膜32上，照射610nm和525nm的两种所述照射光43，通过所述光接收部42，以0.1秒以下的时间差交互地测定各波长的反射光44。使所述测定单元4在所述待测物分析用具2的上方沿X方向45(所述待测物分析用具2的宽度方向)一边重复前述测定，一边移动，由此测定包括全部测定区域在内的区域的所述反射光44。本例中，在所述36a的测定线中，610nm为主波长，525nm为副波长，在所述36b的测定线中，525nm为主波长，610nm为副波长。
接着，在所述控制分析部5中，由反射光的测定值计算反射率。所述反射率例如以所述测定线的反射光的测定值相对于白色的对照片的反射光的测定值的比例来计算。接着，首先，将主波长的反射率与基准值进行比较，在大于基准值的情况下，判断为“阴性”，在为基准值以下的情况下，求出主波长的反射率(P)与副波长的反射率(Q)的比(Rr＝P/Q)。然后，比较预先制定的比的基准值(Rrs)与所述比的计算值(Rr)，所述比的计算值(Rr)在所述比的基准值(Rrs)以下的情况下，为正常的着色，因此判断为“阳性”，所述比的计算值(Rr)超过所述比的基准值(Rrs)的情况下，为异常的着色，因此判断为“判断无效”。并且，将这些判断结果用所述输出终端输出。另外，这些判断结果也可以存储在存储器中。另外，代替所述判断方法，也可以是：所述比的计算值(Rr)小于所述比的基准值(Rrs)的情况下，判断为“阳性”，所述比的计算值(Rr)在所述比的基准值(Rrs)以上的情况下，判断为“判断无效”。另外，本例中，由反射光的测定值计算反射率，但例如也可以在所述控制分析部5中计算透射率或吸光度，并与基准值比较。
本例中，使用侧流式的试验片，但如前所述，也可以使用渗滤式的试验片。图6的(A)和图6的(B)中示意性地示出了渗滤式试验片中的一系列检测工序。所述两图中，与图1～图5相同的部分附有相同附图标记。如图6的(A)所示，在多孔膜32的上面的一部分形成测定区域36，在所述测定区域36将固定化抗体6固定。另外，在多孔膜32的下方以接触状态配置吸收衬垫35。从所述多孔膜32的测定区域36的上方导入含有抗原8的试样和标记化抗体7。如图6的(B)所示，标记化抗体7与抗原8结合，形成抗原-标记化抗体结合体9，且所述结合体9通过所述抗原8而与所述固定化抗体6结合，形成复合物10，由此所述测定区域36通过标记72而着色。另外，试样中的其他液体等，如箭头所示，在所述多孔膜32的厚度方向浸透，被所述吸收衬垫35吸收。并且，通过所述光源部41，照射主波长和副波长的光43，检测所述着色。本例中，所述光接收部42以时间差交互地测定所述两个波长的光的照射所产生的反射光44。另外，本例是以反射率作为光学信号的，但不限于此。光学信号为吸光度或透射率的情况下，例如可以是，将所述测定单元4配置于所述待测物分析用具2的下方，测定透射光，利用所述控制分析部5计算吸光度或透射率。此时，优选的是：在所述待测物分析用具2中，所述测量窗23为光的照射部，在其相反侧形成用于检测透射率的、露出试验片的测定区域36的测量窗。
<免疫分析方法>
接着，如前所述，本发明的免疫分析方法为检测待测物分析用具中由于特异性免疫反应所引起的颜色变化、并判断试样中是否存在检测对象的免疫分析方法，该免疫分析方法包括：检测所述待测物分析用具的所述颜色变化的光学检测工序；和基于所述光学检测工序中得到的信息，判断是否存在所述检测对象的判断工序。只要没有特别说明，可以使用在所述本发明的免疫分析装置中说明的方法。
所述光学检测工序包括测定两个以上波长的各光学信号的光学信号测定工序，所述两个以上波长包括用于检测由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化的主波长、和所述主波长以外的副波长。所述光学检测工序除了所述光学信号测定工序以外，例如还可以包括其他工序。作为所述其他工序，没有特别限定。
所述判断工序包括区别工序，该区别工序对所述两个以上波长的各光学信号进行比较，并基于预先制定的比较基准，区别由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和所述特异性免疫反应以外的颜色变化。所述判断工序除了所述区别工序以外，例如还可以包括其他工序。作为所述其他工序，没有特别限定。
本发明的免疫分析方法中，所述光学信号的种类没有特别限定，可以列举例如吸光度、反射率、透射率等。
可以是如下形态：所述区别工序中，所述比较基准例如为所述主波长的光学信号与所述副波长的光学信号的大小关系的基准值，基于所述大小关系的基准值，比较所述主波长的光学信号与所述副波长的光学信号，由所述比较结果区别由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和所述特异性免疫反应以外的颜色变化。所述副波长，如前所述，例如可以是一个波长，也可以是两个以上波长。本发明的免疫分析方法，例如，可以如前者那样为两个波长分析的形态，也可以如后者那样使用三个以上波长的波长。
本发明的免疫分析方法中，所述主波长的光学信号与所述副波长的光学信号的比较，如前所述，例如有使用比的比较、使用差的比较。
优选的是：所述判断工序中，例如，将所述主波长的光学信号基于预先制定的基准，作为未检测出所述待测物分析用具的颜色变化而判断为阴性，在所述区别工序中，区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化。
优选的是：在所述判断工序中，例如，所述主波长的吸光度小于预先制定的基准值(或基准值以下)的情况下，判断为阴性，所述主波长的吸光度在所述基准值以上(或超过所述基准值)的情况下，在所述区别工序中，区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化。所述基准值设定没有特别限定，例如，如前所述，可以根据事前收集的数据来设定基准值。
所述区别工序中，可以进一步将由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化区别为由于非特异性反应所引起的颜色变化和由于免疫反应以外所引起的颜色变化。所述由于非特异性反应所引起的颜色变化和所述由于免疫反应以外所引起的颜色变化，例如如前所述。将由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化区别为所述2种颜色变化的方法，例如如前所述。
[实施例]
接着，结合比较例对本发明的免疫分析装置的实施例进行说明。但是，本发明不限于下述的实施例和比较例。
(实施例1)
本例中，使用图1所示的免疫分析装置，检测试样中的甲型和乙型流感病毒。本例中，使用图4所示的待测物分析用具。图4的(A)为试验片3的平面图(上面图)，图4的(B)为图4的(A)所示的所述试验片3的由I-I方向观察的截面图，图4的(C)为将图4的(A)和(B)所示的所述试验片3收纳于壳体21中的待测物分析用具2的平面图(上面图)。该图中，与图1～图3相同的部分附有相同附图标记。该待测物分析用具2除了未形成有对照检测区域36c以外，为与图1～图3所示的待测物分析用具相同的结构。
<流感病毒检测用的待测物分析用具的制作>
本例中使用的待测物分析用具如下制作。
(1)蓝色胶乳标记抗甲型流感病毒单克隆抗体液的制备
首先，将蓝色胶乳颗粒(粒径0.3μm，ceradyne公司制)悬浮在20mmol/L的硼酸缓冲液(pH8.2)中。此外，添加抗甲型流感病毒单克隆抗体(Fitzgerald公司制)，在室温下反应60分钟。将所述反应液离心分离，除去上清后，添加含有1w/v％牛血清白蛋白的硼酸缓冲液(pH8.2)，再悬浮。将所述再悬浮液离心分离后，除去上清。将回收的抗体悬浮在下述组成的胶乳分散用缓冲液中，制备蓝色胶乳标记抗甲型流感病毒单克隆抗体液。
(胶乳分散用缓冲液的组成)
成分                      浓度
Tris缓冲液(pH8.4)         25mmol/L
NaCl                      100mmol/L
牛血清白蛋白(BSA)         1w/v％
(2)红色胶乳标记抗乙型流感病毒单克隆抗体液的制备使用红色胶乳颗粒(粒径0.3μm，ceradyne公司制)代替所述蓝色胶乳颗粒，使用抗乙型流感病毒单克隆抗体(Fitzgerald公司制)代替所述抗甲型流感病毒单克隆抗体，除此之外与所述蓝色胶乳标记抗甲型流感病毒单克隆抗体液同样地，制备红色胶乳标记抗乙型流感病毒单克隆抗体液。
(3)构成部件的制作
首先，如下所述，准备试验片的构成部件。
标记化抗体浸渍衬垫的制作
将所述蓝色胶乳标记抗甲型流感病毒单克隆抗体液和所述红色胶乳标记抗乙型流感病毒单克隆抗体液以1∶1(体积比)的比率混合。使所述混合液浸入裁剪为宽度1cm、长度30cm的玻璃滤器(Millipore公司制)，用干燥机在70℃下干燥45分钟，制作标记化抗体浸渍衬垫33。
抗体固定化膜的制作
将硝化纤维素膜(Millipore公司制)裁剪为宽度3cm、长度30cm的带状。将该膜设置于抗体涂布装置(バイオドツト公司制)中，在距离带的长度方向一端11mm的线上涂布抗甲型流感病毒单克隆抗体(Fitzgerald公司制)，作为测定区域36a。另外，在距离带的长度方向一端15mm的线上涂布抗乙型流感病毒单克隆抗体(Fitzgerald公司制)，作为测定区域36b。将涂布了所述抗体的膜用干燥机在40℃下干燥20分钟，制作抗体固定化膜32。
样品衬垫、吸收衬垫和支撑体的制作
将滤纸(Millipore公司制)裁剪为宽度2.6cm、长度30cm，制作样品衬垫34。将滤纸(watt mann公司制)裁剪为宽度2.9cm、长度30cm，制作吸收衬垫35。将附有双面胶带的塑料片裁剪为宽度7.7cm、长度30cm，制作支撑体31。
(4)试验片的制作
如下所述，制作试验片3。另外，图4中，左侧为上游，右侧为下游。首先，在所述支撑体31的中央贴付所述抗体固定化膜32，使所述测定区域36a为上游侧(图中左侧)。从所述抗体固定化膜32的所述测定区域36b侧端部，在下游侧(图中右侧)的所述支撑体31端部上贴付所述吸收衬垫35。并且，从所述抗体固定化膜32的所述测定区域36a侧端部，在上游侧的所述支撑体31端部上贴付所述标记化抗体浸渍衬垫33，使其与所述抗体固定化膜32在长度方向上重叠1mm，并在其上层叠所述样品衬垫34。如前所述层叠各构成部件后，裁剪为4mm宽的长方形，制作宽度4mm、长度77mm的试验片3。
(5)待测物分析用具的制作
将所述试验片3封装入具备试样孔22和测量窗23的壳体21中，制作本例中使用的待测物分析用具2。
<流感病毒的检测>
使用所述待测物分析用具2，如下所述，分析待测物中的流感病毒。作为所述待测物，使用通过附有收集器的气管导管所采集的鼻腔抽吸液。另外，本例中，使用下述(6)所示的RT-PCR法，确认所述待测物中是否存在流感病毒，对于确认了所述病毒是否存在的待测物，通过本例的免疫分析装置和目视，判断所述病毒是否存在。
(6)通过RT-PCR法检测流感病毒
本例中，使用Wangdong Zhang and David.H.Evans的甲型和乙型流感病毒的基质蛋白检测方法(Journal of Virologicalmethods，1991年，33卷，165-189页)，实施所述RT-PCR法。
(7)通过免疫分析装置检测流感病毒
通过所述RT-PCR法，对于4例未检测出流感病毒的阴性待测物、3例检测出甲型流感病毒的甲型阳性待测物和3例检测出乙型流感病毒的乙型阳性待测物，如下所述，使用所述待测物分析用具2进行测定。首先，将所述鼻腔抽吸液悬浮在下述组成的待测物提取液中，向所述试样孔22滴加120μL所述悬浮液。滴加15分钟后，使用本例的免疫分析装置1，对包括所述测定区域36a和36b在内的区域照射不同的两个波长(610nm、525nm)的光，测定所述测定区域的反射率。另外，对于所述甲型流感病毒，以610nm作为主波长，以525nm作为副波长。另外，对于所述乙型流感病毒，以525nm作为主波长，以610nm作为副波长。
(待测物提取液的组成)
成分                    浓度
Tris缓冲液(pH7.5)       50mmol/L
Tween20                 0.5w/v％
NaCl                    0.9w/v％
BSA                     1w/v％
接着，使用所得到的各反射率，与前述同样地判断是否存在所述流感病毒。另外，本例中，用于阴性判断的所述主波长的反射率的基准值为99％。另外，所计算的比为前述的“Rr＝P/Q”，所述比的基准值(Rrs)为0.99。
(8)通过目视检测流感病毒
另外，通过目视确认所述测定区域36a和36b有无着色，判断是否存在所述流感病毒。在所述通过目视的判断中，所述测定区域36a为蓝色的情况下，判断为甲型流感阳性；所述测定区域36b为红色的情况下，判断为乙型流感阳性；各测定区域无着色的情况下，判断为各流感阴性；各测定区域的着色为蓝色或红色以外的情况、杂质附着的情况或者膜有瑕疵的情况下，判断为判断无效。
(比较例1)
本例中，代替所述不同的两个波长的光，在甲型流感病毒的检测中，仅照射610nm的波长的光，在乙型流感病毒的检测中，仅照射525nm的波长的光，除此之外与实施例1同样地测定。另外，本例中，主波长的反射率超过99％的情况下，判断为阴性，所述主波长的反射率在99％以下的情况下，判断为阳性。
下述表1示出了实施例1和比较例1的分析结果。该表中，“-”表示阴性，“+”表示阳性。如该表所示，在10个待测物中，比较例1中3个待测物(待测物No.3、No.4和No.10)与目视判断不一致，与此相对，实施例1中所有待测物均与目视判断一致。根据RT-PCR法，待测物No.3的甲型和乙型均为阴性，但由于来源于待测物的非特异性反应，在目视判断中，在甲型检测用的测定区域36a确认有紫色的显色。关于所述由于非特异性反应所引起的显色，在比较例1的分析方法中，判断为甲型阳性，是错误的结果。另一方面，在实施例1的分析方法中，甲型的分析判断为判断无效，对所述由于非特异性反应所引起的显色进行了正确的判断。另外，根据RT-PCR法，待测物No.4是甲型和乙型均为阴性的待测物，但由于乙型检测用的测定区域36b所附着的污垢，在目视判断中，关于乙型判断为判断无效。关于所述测定区域的污垢，在比较例1的分析方法中，判断为乙型阳性，是错误的结果。另一方面，在实施例1的分析方法中，乙型的分析判断为判断无效，对所述测定区域的污垢进行了正确的判断。此外，根据RT-PCR法，待测物No.10是甲型流感阴性和乙型流感阳性的待测物，但由于来源于待测物的非特异性反应，在目视判断中，在甲型检测用的测定区域36a确认有紫色的显色。关于所述由于非特异性反应所引起的显色，在比较例1的分析方法中，判断为甲型阳性，是错误的结果。另一方面，在实施例1的分析方法中，甲型的分析判断为判断无效，对所述测定区域的污垢进行了正确的判断。另外，关于在乙型检测用的测定区域36b确认到的红色的显色，比较例1和实施例1均为正确的判断。
[表1]
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(实施例2)
本例中，使用图1所示的免疫分析装置1，与实施例1同样地检测待测物中的A族溶血性链球菌(以下，称为A族溶血性链球菌。)。本例中，作为试验片，在所述标记化抗体浸渍衬垫33中，代替抗甲型流感病毒单克隆抗体和抗乙型流感病毒单克隆抗体而含有抗A族溶血性链球菌抗体，并具有一个线状的测定区域36a，如后所述各衬垫和各膜的大小不同，除此之外使用与实施例1同样结构的试验片。
<A族溶血性链球菌检测用试验片的制作>
本例中使用的试验片3如下制作。
(1)蓝色胶乳标记抗A族溶血性链球菌多克隆抗体液的制作
本例中，代替所述抗甲型流感病毒单克隆抗体，使用所述抗A族溶血性链球菌多克隆抗体(山羊，Fitzgerald公司制)，除此之外与实施例1同样地制备蓝色胶乳标记抗A族溶血性链球菌多克隆抗体液。
(2)试验片的制作
如下所述，准备构成试验片的各构成部件。本例的试验片除了使用这些构成部件来代替实施例1的各构成部件之外，与实施例1同样地制作。
标记化抗体浸渍衬垫的制作
本例中，使所述玻璃滤器的长度为25cm来代替长度为30cm，使用所述蓝色胶乳标记抗A族溶血性链球菌多克隆抗体液来代替所述混合液，除此之外与实施例1同样地制作标记化抗体浸渍衬垫33。
抗体固定化膜的制作
本例中，使所述硝化纤维素膜的长度为25cm来代替长度为30cm，使用抗A族溶血性链球菌多克隆抗体(兔，Fitzgerald公司制)来代替所述抗甲型流感病毒单克隆抗体，不在距离硝化纤维素膜端部15mm的线上的测定区域36b涂布抗体，除此之外与实施例1同样地制作抗体固定化膜32。
样品衬垫、吸收衬垫和支撑体的制作
本例中，使所述玻璃滤器、滤纸和塑料片的长度为25cm来代替长度为30cm，除此之外与实施例1同样地制作样品衬垫34、吸收衬垫35和支撑体31。
<A族溶血性链球菌的检测>
使用所述待测物分析用具2，如下所述，分析待测物中的A族溶血性链球菌。作为所述待测物，使用通过棉棒采集的咽部擦拭液。另外，本例中，使用下述(3)所示的培养法，确认所述待测物中是否存在A族溶血性链球菌，对于确认了是否存在所述A族溶血性链球菌的待测物，通过本例的免疫分析装置和目视，判断是否存在所述A族溶血性链球菌。
(3)通过培养法检测A族溶血性链球菌
本例中，如下所述培养待测物。首先，将所述待测物悬浮在生理盐水中，并将所述悬浮液涂抹于绵羊血液琼脂培养基上，在36℃的二氧化碳培养箱内培养1～2天。培养结束后，采集显示乙型溶血的菌落，与前述同样地进行培养。将所获得的菌落用胶乳凝集法试剂盒(Mitsubishi  Chemical MedienceCorporation制)进行分组，确认待测物中是否存在A族溶血性链球菌。
(4)通过免疫分析装置检测A族溶血性链球菌
根据所述培养法，对于4例未检测出A族溶血性链球菌的阴性待测物、4例检测出A族溶血性链球菌的阳性待测物，如下所述，使用本例的待测物分析用具2进行测定。首先，将所述咽部擦拭液悬浮在0.4mL提取液A(0.2mol/L柠檬酸水溶液)和0.2mL提取液B(2mol/L亚硝酸钠水溶液)的混合液中，放置1分钟后进行提取处理。使用0.1mL提取液C(1mol/L三(羟甲基)氨基甲烷)中和所述提取处理液，将所获得的经处理的待测物液作为试样。向所述试样孔22滴加90μL该试样，滴加10分钟后，使用本例的免疫分析装置1，对包含所述测定区域36a在内的区域照射不同的两个波长(610nm、525nm)的光，测定所述测定区域36a的反射率。另外，对于所述A族溶血性链球菌，以610nm作为主波长，以525nm作为副波长。
接着，使用所得到的各反射率，判断是否存在所述A族溶血性链球菌。另外，本例中，使用与实施例1相同的基准值和判断方法来判断。
(5)通过目视检测A族溶血性链球菌
另外，通过目视确认所述测定区域36a有无着色，判断是否存在所述A族溶血性链球菌。在通过所述目视的判断中，所述测定区域36a为蓝色的情况下，判断为阳性；未着色的情况下，判断为阴性；着色为蓝色以外的情况和杂质附着或膜有瑕疵的情况下，判断为判断无效。
(比较例2)
本例中，代替所述不同的两个波长的光，仅照射610nm的波长的光，除此之外与实施例2同样地进行测定。另外，本例中，主波长的反射率超过99％的情况下，判断为阴性，所述主波长的反射率在99％以下的情况下，判断为阳性。
下述表2示出了实施例2和比较例2的分析结果。该表中，“-”表示阴性，“+”表示阳性。如该表所示，在8个待测物中，比较例1中2个待测物(待测物No.3和No.4)与目视判断不一致，与此相对，实施例1中所有待测物均与目视判断一致。根据培养法，待测物No.3为阴性的待测物，在目视判断中，未观察到着色，但由于所述测定区域36a的膜的瑕疵而判断为判断无效。关于所述测定区域的瑕疵，在比较例2的分析方法中，判断为阳性，是错误的结果。另一方面，在实施例2的分析方法中，判断为判断无效，对所述瑕疵进行了正确的判断。另外，根据培养法，待测物No.4是阴性的待测物，但由于附着于所述测定区域36a的杂质(头发)，在目视判断中，判断为判断无效。关于所述测定区域的杂质，在比较例2的分析方法中判断为阳性，是错误的结果。另一方面，在实施例2的分析方法中，判断为判断无效，对所述测定区域的杂质进行了正确的判断。
[表2]
(实施例3)
本例中，使用图1所示的免疫分析装置1，检测待测物中的RS病毒。本例中，作为试验片，含有金胶体颗粒来代替所述蓝色胶乳颗粒，所述标记化抗体浸渍衬垫33含有抗RS病毒抗体来代替抗A族溶血性链球菌抗体，除此之外使用与实施例2相同结构的试验片。
<RS病毒检测用试验片的制作>
本例中使用的试验片如下制作。
(1)金胶体标记抗RS病毒单克隆抗体液的制作
本例中，使用金胶体颗粒(粒径20nm，BBI公司制)来代替所述蓝色胶乳颗粒，使用抗RS病毒单克隆抗体(Fitzgerald公司制)来代替所述抗A族溶血性链球菌多克隆抗体，使用金胶体分散用缓冲液(20mmol/L Tris缓冲液，pH8.0)来代替所述胶乳分散用缓冲液，除此之外与实施例2同样地制备金胶体标记抗RS病毒单克隆抗体液。
(2)试验片的制作
作为所述标记化抗体浸渍衬垫、所述抗体固定化膜和所述样品衬垫，使用以下各构成部件来代替实施例2的各构成部件，除此之外与实施例2同样地制作本例的试验片。
标记化抗体浸渍衬垫的制作
本例中，使用所述金胶体标记抗RS病毒单克隆抗体液来代替所述蓝色胶乳标记抗A族溶血性链球菌多克隆抗体液，除此之外与实施例2同样地制作标记化抗体浸渍衬垫33。
抗体固定化膜的制作
本例中，使用抗RS病毒单克隆抗体(Fitzgerald公司制)来代替抗A族溶血性链球菌多克隆抗体，除此之外与实施例2同样地制作抗体固定化膜32。
样品衬垫的制作
本例中，使用滤纸(Millipore公司制)来代替所述玻璃滤器，除此之外与实施例2同样地制作样品衬垫34。
<RS病毒的检测>
使用所述待测物分析用具2，如下所述，分析待测物中的RS病毒。作为所述待测物，使用所述鼻腔抽吸液。另外，本例中，使用下述(3)所示的RT-PCR法，确认所述待测物中是否存在RS病毒，对于确认了是否存在所述RS病毒的待测物，通过本例的免疫分析装置和目视，判断所述RS病毒是否存在。
(3)通过RT-PCR法检测RS病毒
本例中，使用J.Stockton等的RS病毒的检测方法(Journal ofClinical Microbiology，1998年，36卷，10号，2990-2995页)，实施所述RT-PCR法。
(4)通过免疫分析装置检测RS病毒
通过所述RT-PCR法，对于4例未检测出RS病毒的阴性待测物、4例检测出RS病毒的阳性待测物，使用所述RS病毒检测用试验片来代替所述流感病毒检测用试验片，除此之外与所述实施例2同样地进行测定。另外，对于所述RS病毒，以525nm作为主波长，以610nm作为副波长。
接着，使用所得到的各反射率，判断是否存在所述RS病毒。另外，本例中，使用与实施例2相同的基准值和判断方法。
(5)通过目视检测RS病毒
另外，通过目视确认所述测定区域36a有无着色，判断是否存在所述RS病毒。在所述通过目视的判断中，所述测定区域36a为红色的情况下，判断为阳性；未着色的情况下，判断为阴性；着色为红色以外的情况和杂质附着或膜的瑕疵的情况下，判断为判断无效。
(比较例3)
本例中，代替所述不同的两个波长的光，仅照射525nm的波长的光，除此之外与实施例3同样地进行测定。另外，本例中，使用与比较例2相同的基准值和判断方法，判断待测物中是否存在RS病毒。
下述表3示出了实施例3和比较例3的分析结果。该表中，“-”表示阴性，“+”表示阳性。如该表所示，在8个待测物中，比较例3中2个待测物(待测物No.3和No.4)与目视判断不一致，与此相对，实施例3中所有待测物均与目视判断一致。在RT-PCR法中，待测物No.3为阴性的待测物，在目视判断中，未观察到着色，但由于所述测定区域36a的膜的瑕疵而判断为判断无效。关于所述测定区域的瑕疵，在比较例3的分析方法中，判断为阳性，是错误的结果。另一方面，在实施例3的分析方法中，判断为判断无效，对所述瑕疵进行了正确的判断。另外，在RT-PCR法中，待测物No.4是阴性的待测物，但由于附着于所述测定区域36a的杂质(线头)，在目视判断中判断为判断无效。关于所述测定区域的杂质，在比较例3的分析方法中判断为阳性，是错误的结果。另一方面，在实施例3的分析方法中，判断为判断无效，对所述测定区域的杂质进行了正确的判断。
[表3]
产业上的可利用性
本发明能够区别并判断由于特异性免疫反应所引起的正常的着色、和由于非特异性反应和测定区域上的杂质以及瑕疵等所引起的异常的着色。本发明能够应用于临床检查、生化学检查、医学研究等领域，其用途不受限制，能够在广泛的领域中使用。

Claims (23)

1.一种免疫分析装置，其特征在于，其为检测待测物分析用具中由于特异性免疫反应所引起的颜色变化、并判断试样中是否存在检测对象的免疫分析装置，
该免疫分析装置包括用于检测所述待测物分析用具的颜色变化的光学检测单元、和
基于来自所述光学检测单元的信息，判断是否存在所述检测对象的判断单元，
所述光学检测单元包括测定两个以上波长的各光学信号的光学信号测定单元，所述两个以上波长包括用于检测由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化的主波长、和所述主波长以外的副波长，
所述判断单元包括区别单元，该区别单元对包括所述主波长的光学信号在内的所述两个以上波长的各光学信号进行比较，并基于预先制定的比较基准，区别由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和所述特异性免疫反应以外的颜色变化，
所述判断单元中，
未检测出所述待测物分析用具的颜色变化的情况下，则视为所述检测对象不存在而判断为阴性，
检测出所述待测物分析用具的颜色变化的情况下，通过所述区别单元，在区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化时，则视为所述检测对象存在而判断为阳性，在区别为由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化时，判断为判断无效。
2.根据权利要求1所述的免疫分析装置，所述光学信号为选自吸光度、反射率和透射率所构成的组中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的免疫分析装置，所述区别单元中，所述比较基准为所述主波长的光学信号与所述副波长的光学信 号的大小关系的基准值，
基于所述大小关系的基准值，比较所述主波长的光学信号与所述副波长的光学信号，
由所述比较结果，区别由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和所述特异性免疫反应以外的颜色变化。
4.根据权利要求3所述的免疫分析装置，所述光学信号为吸光度，
所述区别单元中，通过由下式(1)定义的、所述主波长的吸光度(A)与所述副波长的吸光度(B)的比(R)，比较所述主波长的吸光度与所述副波长的吸光度，
所述大小关系的基准值为关于所述比的基准值(Rs)，
所述比(R)在所述基准值(Rs)以上的情况下，判断为阳性，
所述比(R)小于所述基准值(Rs)的情况下，判断为判断无效，
R＝A/B     (1)。
5.根据权利要求3所述的免疫分析装置，所述光学信号为吸光度，
所述区别单元中，通过由下式(2)定义的、所述主波长的吸光度(A)与所述副波长的吸光度(B)的差(D)，比较所述主波长的吸光度与所述副波长的吸光度，
所述大小关系的基准值为关于所述差的基准值(Ds)，
所述差(D)在所述基准值(Ds)以上的情况下，判断为阳性，
所述差(D)小于所述基准值(Ds)的情况下，判断为判断无效，
D＝A-B     (2)。
6.根据权利要求1所述的免疫分析装置，所述判断单元中，将所述主波长的光学信号基于预先制定的基准，作为未检测出所述待测物分析用具的颜色变化而判断为阴性，并通过所述区别单元，区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化。
7.根据权利要求6所述的免疫分析装置，所述光学信号为吸光度，
所述判断单元中，所述主波长的吸光度小于预先制定的基准值的情况下，则视为未检测出所述待测物分析用具的颜色变化而判断为阴性，
所述主波长的吸光度在所述基准值以上的情况下，通过所述区别单元，区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化。
8.根据权利要求1所述的免疫分析装置，所述主波长与所述副波长的波长差为10nm以上。
9.根据权利要求1所述的免疫分析装置，所述区别单元中，进一步将由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化区别为由于非特异性反应所引起的颜色变化和由于免疫反应以外所引起的颜色变化。
10.根据权利要求1所述的免疫分析装置，所述待测物分析用具包括测定区域和固定于所述测定区域的能够与所述检测对象结合的固定化抗体或固定化抗原，
将所述试样、和用通过颜色变化能够识别的标记所标记的、能够与所述检测对象结合的标记化抗体或能够与所述检测对象结合的标记化抗原导入所述待测物分析用具的所述测定区域，
所述试样中存在所述检测对象的情况下，所述标记化抗体或所述标记化抗原通过所述检测对象而与所述固定化抗体或所 述固定化抗原结合，形成复合物，由此在所述测定区域中产生由所述标记带来的颜色变化，
通过所述光学检测单元检测所述测定区域的所述颜色变化。
11.根据权利要求10所述的免疫分析装置，所述标记为着色不溶性载体颗粒，所述颜色变化为由于形成含有所述着色不溶性载体颗粒的所述复合物所引起的所述测定区域的着色。
12.根据权利要求10所述的免疫分析装置，所述标记为酶，所述颜色变化为由于底物与所述复合物中含有的所述酶的酶反应而被着色所引起的所述测定区域的着色。
13.根据权利要求10所述的免疫分析装置，所述检测对象为多种，所述测定区域固定有对应于所述各检测对象的多种固定化抗体或固定化抗原，并将对应于所述各检测对象的多种标记化抗体或标记化抗原导入所述测定区域。
14.根据权利要求1所述的免疫分析装置，所述光学信号测定单元包括选自测定所述两个以上波长的各光学信号的吸光度测定单元、反射率测定单元和透射率测定单元所构成的组中的至少一种单元。
15.一种免疫分析方法，其特征在于，其为检测待测物分析用具中由于特异性免疫反应所引起的颜色变化、并判断试样中是否存在检测对象的免疫分析方法，
该免疫分析方法包括检测所述待测物分析用具的颜色变化的光学检测工序、和
基于所述光学检测工序中得到的信息，判断是否存在所述检测对象的判断工序，
所述光学检测工序包括测定两个以上波长的各光学信号的光学信号测定工序，所述两个以上波长包括用于检测由于所述 特异性免疫反应所引起的颜色变化的主波长、和所述主波长以外的副波长，
所述判断工序包括区别工序，该区别工序对包括所述主波长的光学信号在内的所述两个以上波长的各光学信号进行比较，基于预先制定的比较基准，区别由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和所述特异性免疫反应以外的颜色变化，
所述判断工序中，
未检测出所述待测物分析用具的颜色变化的情况下，则视为所述检测对象不存在而判断为阴性，
检测出所述待测物分析用具的所述颜色变化的情况下，通过所述区别单元，在区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化时，则视为所述检测对象存在而判断为阳性，在区别为所述特异性免疫反应以外的颜色变化时，判断为判断无效。
16.根据权利要求15所述的免疫分析方法，所述光学信号为选自吸光度、反射率和透射率所构成的组中的至少一种。
17.根据权利要求15所述的免疫分析方法，所述区别工序中，所述比较基准为所述主波长的光学信号与所述副波长的光学信号的大小关系的基准值，
基于所述大小关系的基准值，比较所述主波长的光学信号与所述副波长的光学信号，
由所述比较结果，区别由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和所述特异性免疫反应以外的颜色变化。
18.根据权利要求17所述的免疫分析方法，所述光学信号为吸光度，
所述区别工序中，通过由下式(1)定义的、所述主波长的吸光度(A)与所述副波长的吸光度(B)的比(R)，比较所述主波长的吸光度与所述副波长的吸光度， 
所述大小关系的基准值为关于所述比的基准值(Rs)，
所述比(R)在所述基准值(Rs)以上的情况下，判断为阳性，
所述比(R)小于所述基准值(Rs)的情况下，判断为判断无效，
R＝A/B     (1)。
19.根据权利要求17所述的免疫分析方法，所述光学信号为吸光度，
所述区别工序中，通过由下式(2)定义的、所述主波长的吸光度(A)与所述副波长的吸光度(B)的差(D)，比较所述主波长的吸光度与所述副波长的吸光度，
所述大小关系的基准值为关于所述差的基准值(Ds)，
所述差(D)在所述基准值(Ds)以上的情况下，判断为阳性，
所述差(D)小于所述基准值(Ds)的情况下，判断为判断无效，
D＝A-B     (2)。
20.根据权利要求15所述的免疫分析方法，所述判断工序中，将所述主波长的光学信号基于预先制定的基准，作为未检测出所述待测物分析用具的颜色变化而判断为阴性，并通过所述区别单元，区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化。
21.根据权利要求20所述的免疫分析方法，所述光学信号为吸光度，
所述判断工序中，所述主波长的吸光度小于预先制定的基准值的情况下，则视为未检测出所述待测物分析用具的颜色变化而判断为阴性， 
所述主波长的吸光度在所述基准值以上的情况下，在所述区别工序中，区别为由于所述特异性免疫反应所引起的颜色变化和由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化。
22.根据权利要求15所述的免疫分析方法，所述主波长与所述副波长的波长差为10nm以上。
23.根据权利要求15所述的免疫分析方法，所述区别工序中，进一步将由于所述特异性免疫反应以外所引起的颜色变化区别为由于非特异性反应所引起的颜色变化和由于免疫反应以外所引起的颜色变化。 
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