CN101977605A - 雷诺嗪治疗疼痛的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于治疗患有实质上可以是机械、内脏、和/或炎症性的神经性疼痛或伤害性疼痛的患者的方法，包括向需要其的患者给予治疗有效量的雷诺嗪。

Description

雷诺嗪治疗疼痛的用途

本申请要求享有2008年2月6日提交的美国临时专利申请序列号60/026,699和2008年5月30日提交的美国临时专利申请序列号61/057,437的优先权，其全部内容结合于本文中作为参考。

技术领域

本发明涉及治疗患有可以是机械、内脏、和/或炎症性的神经性或伤害性疼痛的患者的方法，包括向需要其的患者给予治疗有效量的雷诺嗪。

背景技术

美国专利号4,567,264，其说明书以其全文结合于本文中作为参考，公开了雷诺嗪，(±)-N-(2，6-二甲基苯基)-4-[2-羟基-3-(2-甲氧基苯氧基)-丙基]-1-哌嗪乙酰胺、及其药用盐，及其治疗心血管疾病、包括心律失常、变异和运动诱导型心绞痛和心肌梗死的用途。以其二盐酸盐的形式，雷诺嗪由下式表示：

该专利也公开了进一步含有丙二醇、聚乙二醇400、吐温80和0.9％盐水的二盐酸雷诺嗪的静脉注射(IV)制剂(剂型，formulation)。

美国专利号5,506,229，以其全文结合于本文中作为参考，公开了雷诺嗪及其药用盐和酯在治疗经受物理或化学损害(包括心麻痹，心脏或骨骼肌或脑组织的缺氧或再灌注损伤)的组织、以及用于移植中的用途。公开的口服和非肠道制剂包括控释制剂。具体而言，美国专利号5,506,229的实施例7D描述了含有用控释聚合物涂层的微球雷诺嗪和微晶纤维素的胶囊形式的控释制剂。该专利也公开了低端(low end)为每毫升的含有约5wt％葡萄糖的IV溶液中含有5mg雷诺嗪的IV雷诺嗪制剂。高端下，公开了一种每毫升的含有约4wt％葡萄糖的IV溶液中含有200mg雷诺嗪的IV溶液。

对于雷诺嗪及其药用盐和酯目前优选的给予途径是口服。典型的口服剂量形式是压缩片剂、填充粉末混合物或颗粒的硬凝胶胶囊、或填充溶液或悬浮液的软凝胶胶囊(软凝胶)。美国专利号5,472,707，其说明书以其全文结合于本文中作为参考，公开了一种采用超冷液体雷诺嗪作为硬凝胶胶囊或软凝胶填充溶液的高剂量口服制剂。

美国专利号6,503,911，其说明书以其全文结合于本文中作为参考，公开了持续释放制剂，该持续释放制剂攻克了在制剂行进通过胃中酸性环境和通过肠道较为碱性的环境时提供雷诺嗪满意的血浆浓度的难题，并证实了其对于提供治疗心绞痛和其它心血管疾病所必需的血浆水平是非常有效的。

美国专利号6,852,724，其说明书以其全文结合于本文中作为参考，公开了治疗心血管疾病，包括心律失常、变异和运动诱导型心绞痛和心肌梗死的方法。

美国专利申请公开号2006/0177502，其说明书以其全文结合于本文中作为参考，公开了口服持续释放剂量形式，其中雷诺嗪以35％～50％、优选40％～45％的雷诺嗪存在。在一个实施方式中，该发明的雷诺嗪持续释放制剂包含pH依赖性粘合剂、非pH依赖性粘合剂和一种或多种药用赋形剂。合适的pH依赖性粘合剂包括但不限于，甲基丙烯酸共聚物，例如

(

L100-55，

L100-55的假乳胶等)，其用足以中和甲基丙烯酸共聚物至约1％～20％，例如约3％～6％程度的强碱如氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化铵而中和。合适的非pH依赖性粘合剂包括但不限于，羟丙基甲基纤维素(HPMC)，例如

E10M Premium CR级HPMC或

E4M Premium HPMC。合适的药用赋形剂包括硬脂酸镁和微晶纤维素(

pH101)。

背景

生理疼痛可以按照许多方式定义，但一般划分为两种类型，伤害性的和神经性的。伤害性疼痛是由于贯穿整个身体位于各个组织如皮肤、角膜、粘膜、肌肉和关节中并且称为伤害感受器的感觉接受神经末梢受到刺激所引起的疼痛。伤害感受器的基本功能包括向触发动作电位的去极化作用传导有害刺激，向中枢神经系统的突触传导来自主感觉位点的动作电位，和将动作电位在突触前端末梢转化成神经传递物质释放。典型地由于扭伤、骨裂、烧伤、撞击、瘀伤和发炎(由感染或关节炎障碍所致)，即导致感受器活化的任何组织损伤而造成的任何损害而经受伤害性疼痛。

伤害感受器的数量和类型高度依赖于其在身体中的位置。位于皮肤中的皮肤伤害感受器高度集中而导致明确界定的局部化疼痛。在身体的韧带、结缔组织和骨头中的肉体伤害感受器要少得多，导致较弱的局部化疼痛，但其或许经受较长的持续期。甚至更少的是位于身体器官和内脏内的内脏伤害感受器。因此，内脏疼痛源经常极难识别。

相比之下，神经性疼痛是由神经系统自身的原发性病变或功能障碍所引发或导致的疼痛。神经性疼痛通常感受为稳定的烧灼和/或“发麻”和/或“电击”感觉和/或发痒。差异是由于以下事实所致：“普通”疼痛仅仅刺激疼痛神经，而神经病变经常在相同的区域产生疼痛和非疼痛(触觉、温暖、冷却)感觉神经的烧炙感觉，产生脊髓和大脑通常并不会预期接受的信号。神经性疼痛也可以由伤害感受器自身的过度活性所致。这种过度活性可以是由于细胞膜通道自身的数目、位置或功能增加或减少所致。

神经损伤的四个主要类型是多神经病变、自主神经病变、单神经病变和多发性单神经炎。这类型的疼痛具有许多表象和原因并且可以是急性的或慢性的(持久的)，而慢性疼痛经常在临床实践中见到。据有人估计，在美国，神经性疼痛影响着患有神经性后背和腿部疼痛以及发病率最高的糖尿病神经病变的人群的至少1.5％。8％～50％糖尿病患者估计具有糖尿病神经病变的症状，而10％～19％后背疼痛患者估计患有神经性疼痛。(参见，Taylor RS(2006)PainPractice；6：22-26)。

出于许多原因，神经性疼痛的实际犯病率是很难确定的。例如，有多少常见的下背疼痛病例是源自神经性疼痛，仍不清楚。这种困难由于神经疼痛经常是另一潜在慢性疾病的症状或结果这一事实而变得复杂。通常，医师们致力于原发性疾病的诊断和治疗而经常导致神经性疼痛诊断不足和治疗不足。

目前对于疼痛的治疗包括镇痛剂，如醋氨酚和抗炎药，包括糖皮质激素如氢化可的松、强的松和地塞米松，以及非甾族抗炎药物(NSAID)如布洛芬、阿司匹林、萘普生和塞来昔布(Celebrex)。更强的药物包括鸦片类吗啡、可待因、羟可酮、海洛因、芬酞尼和氢可酮。神经性疼痛的其它治疗包括三环抗抑郁药，如阿密曲替林

抗痉挛药如2-丙基戊酸钠、卡马西平

和辣椒素。

遗憾的是，前述药物类别中的每一类都具有若干缺点而限制了其功用和效能。镇痛剂具有有限的功效。糖皮质激素导致免疫系统变化、延迟伤口愈合、抑制骨形成、并阻碍钙吸收，同时NSAID具有胃肠副作用以及其它有关心血管影响的问题。鸦片类药物人所共知具有成瘾性，并具有其它副作用，如恶心、呕吐、呼吸压抑和便秘。三环抗抑郁药物和抗痉挛药物也具有显著缺陷。显然，仍需要更安全有效的药物。

现在据发现，治疗性药物浓缩物雷诺嗪阻滞稳定表达hNay1.7的HEK293细胞和稳定表达rNav1.8的ND-7-23细胞中的Na_v1.7和Nav1.8钠电流(I_Na)。初步发现雷诺嗪是峰值和窗口(window)Na_v1.7和Na_v1.8电流的相对选择性阻滞剂，已证实该药物在人体中的安全性，这对雷诺嗪用于治疗伤害性疼痛和神经性疼痛提供了强有力的支持。

发明内容

本发明的目的是提供用于治疗或预防疼痛的方法，包括向需要其的患者给予治疗有效量或预防有效量的雷诺嗪、或其药用盐。

本发明的某些方面，给予雷诺嗪用于治疗或预防神经性或伤害性疼痛。当待治疗的是伤害性疼痛时，其本质上可以是机械、化学、和/或炎症性的。当给予雷诺嗪用于治疗或预防神经性疼痛时，该疼痛可以相关于钠通道病变(sodium channelopathy)、多神经病变、自主神经病变、单神经病变、和/或多发性单神经炎。可治疗的通道病变包括但不限于，红斑性肢痛病和阵发性极度疼痛障碍(paroxysmal extreme pain disorder)。与钠通道病变有关的可治疗病症包括但不限于，肌强直和肌肉麻痹。

本发明的其他方面，这种疼痛可以是由于慢性的，内脏、机械、发炎性的和/或神经性疼痛综合症所引起的。这种疼痛也可以源自于或相关于外伤性神经损伤、神经压迫或神经卡压(nerveentrapment)、疱疹后遗神经痛、三叉神经痛、糖尿病神经病变、癌症和化疗。用于采用本发明方法的其它指征也是可以使用的，包括但不限于，慢性下背痛、HIV-和HIV治疗诱导的神经病变、癌症治疗诱导，即化疗-诱导的神经病变、慢性骨盆疼痛、神经瘤疼痛、复杂区域疼痛综合症(complex regional pain syndrom)、慢性关节炎疼痛和相关神经痛。

附图说明

图1描述了按照实施例1中描述的雷诺嗪，R-雷诺嗪和S-雷诺嗪对Na_v1.7峰值I_Na的浓度依赖性阻滞。数据采用希尔(Hill)方程拟合。

图2表示按照实施例1中描述的在不存在雷诺嗪(开放符号)和存在100μM雷诺嗪(填充符号)情况下标准化成响应第一去极化步骤中记录的值并采用2，5，20和200ms持续时间的重复脉冲的峰值I_Na值的绘图。阻滞对于短至2ms的脉冲持续期达到相同水平。

图3A、3B和3C图示说明了在稳定表达hNa_v1.7+β1亚基(A)的HEK293细胞中和在未转染的ND7-23细胞(B)或ND7-23/rNa_v1.8Na⁺通道(C)中300nM TTX降低I_Na的效应，正如在实施例2中讨论的。在-20(hNa_v1.7或未转染的ND7-23细胞)或+20(rNa_v1.8)mV的50-ms测试脉冲期间以10s的间隔记录整个细胞电流。加入300nMTTX完全阻滞了hNa_v1.7I_Na(A)。然而，300nM TTX导致了rNa_v1.8I_Na(C)的最低阻滞，表明和确证了所报道的该通道亚型(channelisoform)对TTX的耐受性。

图4A表示如实施例2中所讨论的由稳定表达hNa_v1.7+β1亚基的HEK293细胞和稳定表达rNav1.8Na⁺通道的ND7-23细胞在不存在和存在30μM雷诺嗪情况下记录的代表性I_Na记录。在从-120～-20(hNa_v1.7)或-100mV～+20(rNa_v1.8)mV的50-ms测试脉冲期间按照10s的间隔记录整个细胞电流。图4B显示了雷诺嗪降低hNa_v1.7(■，n＝4-6个细胞，每一个)和rNa_v1.8(●，n＝4-6个细胞，每一个)Na⁺通道的I_Na的浓度-响应关系。数据表示平均值±SEM。在非活化状态下hNa_v1.7或rNa_v1.8Na⁺通道对雷诺嗪的敏感度，对于hNa_v1.7(□，n＝4个细胞，每一个)采用-70mV或对于rNa_v1.8(○，n＝4-6个细胞，每一脉冲)采用-40mV进行5-s预脉冲，接着是保持电位(-120或-100mV)的20-ms步骤，然后是-20或+20mV的50-ms去极化步骤，由此而进行测定。之所以选择将20-ms步骤保持较短，是为了允许从阻滞通道以最低药物解离使通道从失活中还原。

图5显示了如实施例2中讨论的雷诺嗪对hNa_v1.7和rNa_v1.8Na⁺通道电流的活化和失活(或钝化，inactivation)的影响的电流-电压关系。图5A是来自表达hNa_v1.7+β1亚基的HEK293细胞和表达rNav1.8Na⁺通道的ND7-23细胞的代表性I_Na记录。图5B表示hNa_v1.7+β1亚基和rNav1.8Na⁺通道在不存在(■，●)和存在(□，○)10μM雷诺嗪情况下的活化曲线。平滑曲线是图表5中给出的具有中点(V_1/2)和斜度因子(k)的波尔兹曼拟合。图5C显示了在不存在和存在10μM雷诺嗪情况下拟合成单个指数方程的相对于电压而绘出的hNa_v1.7(左侧图)和rNa_v1.8(右侧图)I_Na(图3B中描述的电流)的失活时间常数。数据表示平均值±SEM。

图6A～C描述了按照实施例3讨论的在不存在(填充符号)和存在10μM雷诺嗪(开放符号)情况下hNa_v1.7(左侧图)和rNa_v1.8(右侧图)Na⁺通道电流稳态失活的电压依赖性。采用了100ms(图6A)，1s(图6B)和10s(图6C)的调节预脉冲。插图：电压钳方案。图6A：雷诺嗪10μM导致中点(V_1/2)最低漂移而未影响hNa_v1.7(n＝4个细胞)和rNa_v1.8(n＝4个细胞)的稳态快速失活的斜度因子(k)。对于hNa_v1.7在不存在(■)和存在(□)雷诺嗪情况下估计V_1/2和k值分别为-74.49±2.79；6.01±0.3和-86.15±3.62(p＜0.05)；7.55±0.82(p＝0.14)，而对于rNa_v1.8在不存在(●)和存在(○)雷诺嗪情况下估计V_1/2和k值分别为-33.12±1.10；9.69±1.10和-40.66±3.23(p＝0.15)；11.45±1.21(p＜0.02)。图6B：雷诺嗪导致稳态中速失活的V_1/2浓度依赖性(1-30μM)漂移，而对于hNa_v1.7和rNa_v1.8都未影响k值(表5)。图6C：雷诺嗪(10μM)导致稳态慢速失活的V_1/2显著左漂移，而未影响hNa_v1.7(n＝4个细胞)和rNa_v1.8(n＝6个细胞)的k值。对于hNa_v1.7在不存在(■)和存在(□)雷诺嗪情况下估计V_1/2和k值分别为-37.22±4.21；13.52±0.93和-61.39±3.54(p＜0.05)；14.22±2.14(p＝0.80)，而对于rNa_v1.8在不存在(●)和存在(○)雷诺嗪情况下估计V_1/2和k值分别为-37.13±2.42；7.31±0.81和-54.57±3.69(p＜0.05)；8.38±0.76(p＝0.23)。数据表示平均值±SEM。

图7绘出了在不存在和存在30μM雷诺嗪情况下慢速失活作用的发展(插图：电压钳方案)。数据表示平均值±SEM。平滑曲线是采用两个(图7A；hNa_v1.7，n＝3-5个细胞，每一个)或三个(图7B；rNav1.8，n＝3-5个细胞，每一个)分量(要素，component)的指数方程的数据拟合(参见表6的单个参数的值)。图7C和图7D是不存在和存在30μM雷诺嗪情况下从失活中还原的绘图(插图：电压钳方案)。数据表示平均值±SEM。平滑曲线是采用两个(图7C；hNa_v1.7，n＝5个细胞，每一个)或三个(图7D；rNav1.8，n＝5个细胞，每一个)分量的指数方程的数据拟合(参见表6的单个参数的值)。

图8绘出了按照实施例2中讨论的30μM雷诺嗪对hNa_v1.7(图8A)、rNa_v1.8(图8B)和TTX-S I_Na(C)的使用-依赖性(use-dependent)阻滞。每一方案包括在不存在(对照；填充符号)或存在(开放符号)30μM雷诺嗪时1，5和10Hz频率下-120～-20mV(Na_v1.7+β1或内源TTX-S I_Na)或-100～+50mV(rNav1.8)的一串脉冲(40个)。由第n个脉冲(第40个)引起的电流振幅标准化成由第一脉冲引起的电流的振幅并相对于各个脉冲编号绘图。

图9显示了按照实施例2讨论的延长脉冲持续期对于雷诺嗪对rNa_v1.8I_Na的使用-依赖性阻滞的影响。在存在100μM雷诺嗪下描绘连续记录的rNa_v1.8I_Na曲线。持续期5(图9A)或200ms(图9B)的+50mV总计40个脉冲(p)在5Hz频率下施用；脉冲编号(脉冲数，pulse number)如所示。图9C示出在存在100μM雷诺嗪下+50mV时采用3

5(△)，20(o)或200(□)ms持续期的脉冲而测定的rNa_v1.8I_Na的绘图。通过每一脉冲引起的电流振幅标准化成由第一脉冲引起的电流峰值振幅(1P)。

图10描述了按照实施例3中讨论的在腹膜内给予之后雷诺嗪治疗CFA-诱导的热和机械痛觉过敏的结果。图10A描述了治疗对于脚掌从热刺激撤回没有显著效应。相比之下，图10B描述了机械异常性疼痛的剂量依赖性降低。

图11描述了口服给予之后雷诺嗪治疗CFA-诱导的热和机械痛觉过敏的结果。如图10A相同，图11A描述了治疗对于脚掌从热刺激撤回没有显著效应。然而，图11B描述了机械异常性疼痛的剂量依赖性降低。最佳口服剂量在50mg/kg时实现。在较高剂量下没有观察到额外受益。

具体实施方式

定义

在该说明书中和在以下权利要求中，将涉及许多术语，这些术语应该定义为具有以下意义。

“雷诺嗪”，当称之为

时，是指化合物(±)-N-(2，6-二甲基苯基)-4-[2-羟基-3-(2-甲氧基苯氧基)丙基]-1-哌嗪-乙酰胺。雷诺嗪也能够作为其对映体(R)-(+)-N-(2，6-二甲基苯基)-4-[2-羟基-3-(2-甲氧基苯氧基)-丙基]-1-哌嗪乙酰胺(也称之为R-雷诺嗪)和(S)-(-)-N-(2，6-二甲基苯基)-4-[2-羟基-3-(2-甲氧基苯氧基)-丙基]-1-哌嗪乙酰胺(也称之为S-雷诺嗪)、和其药用盐、及其混合物存在。除非另外指出，在说明书和实施例中所用的雷诺嗪血浆浓度是指雷诺嗪游离碱。在水溶液中用盐酸滴定，在pH～4时，雷诺嗪将大部分以其二盐酸盐存在。

“生理可接受的pH”是指对于递送进入人患者体内是相容的静脉注射溶液的pH。优选生理可接受pH范围为约4～约8.5，而优选约4～7。无需受限于任何理论，采用pH为约4～6的静脉注射溶液被认为是生理可接受的，因为体内大体积的血液有效缓冲这些静脉注射溶液。

“心血管疾病”或“心血管症状”是指：例如，心力衰竭，包括充血性心力衰竭、急性心力衰竭、局部缺血、复发性局部缺血、心肌梗死、STEMI和NSTEMI等、心律失常；心绞痛，包括运动诱导型心绞痛、变异诱导性心绞痛、稳定心绞痛、不稳定心绞痛、急性冠脉综合症、NSTEACS等；糖尿病；和间歇性跛行表现出的疾病或症状。这些疾病状态的治疗公开于多个美国专利和专利申请中，包括美国专利号6,503,911和6,528,511，美国专利申请号2003/0220344和2004/0063717，其全部公开内容结合于本文中作为参考。

“抑制剂”是指“延缓”底物的代谢的化合物。抑制剂可以分类成强、中和弱类型。强抑制剂，例如包括安非拉酮、氟西汀、帕络西汀和奎尼定，能够导致血浆AUC值增加＞5-倍或清除率降低超过80％。中抑制剂，例如包括度洛西汀和特比萘酚，能够导致血浆AUC值增加＞2-倍或清除率降低50％～80％。弱抑制剂，例如包括乙胺碘呋酮和甲氰咪胺，能够导致血浆AUC值增加＞1.25倍而＜2-倍或清除率降低20％～50％。

“可选的”和“可选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或可以不发生，并且该描述包括其中事件或情况发生的实例和不发生的实例。例如，“可选的药用赋形剂”是指这样描述的制剂可以包含或可以不包含除了明确陈述存在的那些之外的药用赋形剂，并且如此描述的制剂包括其中可选的赋形剂存在的实例和其中它们不存在的实例。

“治疗”是指患者体内疾病的任何治疗，包括：防止易患该疾病但还没有诊断出患有该疾病的对象发生疾病；抑制疾病，即，阻止其进一步发展；抑制疾病的症状；减轻疾病，即，导致疾病的消退、或减轻疾病的症状。“患者”是哺乳动物类，优选人类。

术语“治疗有效量”是指，式I的化合物当向需要这种治疗的哺乳动物给予时，按照以下的定义足以实施治疗的用量。治疗有效量将根据所用的治疗药剂的具体活性，以及患者的年龄、身体条件、其它疾病状态的存在和营养状况而变化。另外，患者可能正在接受的其它药物将会影响给予的治疗药剂的治疗有效量的确定。

本文中所用的“药用载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、涂层、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。用于药物活性物质的介质和药剂的使用在本领域内是众所周知的。除非任何传统介质或试剂与活性成分不相容，其在治疗组合物中的使用都是可设想的。补充活性成分也能够引入到组合物中。

雷诺嗪，命名为N-(2，6-二甲基苯基)-4-[2-羟基-3-(2-甲氧基苯氧基)丙基]-1-哌嗪乙酰胺(也称为1-[3-(2-甲氧基苯氧基)-2-羟基丙基]-4-[(2，6-二甲基苯基)-氨基羰基甲基]-哌嗪)，能够作为外消旋混合物、或其对映体、或其对映体的混合物、或其药用盐而存在。雷诺嗪能够按照美国专利号4,567,264中的描述进行制备，其说明书结合于本文中作为参考。

“立即释放”(“IR”)是指在体内迅速溶解并预想在胃或上消化道中完全溶解和吸收的制剂或剂量单位。传统上，这种制剂在给予30min内将释放至少90％的活性成分。

“持续释放(或缓释，sustained release)”(“SR”)是指在约6h或更长的时间内本文中所用的制剂或剂量单位在胃和消化道中缓慢和连续地溶解和吸收。优选的持续释放制剂，如下所描述的，是指那些表现为适合于每日给予两次且每剂量为两片以下的雷诺嗪血浆浓度的制剂。

“异构体”是具有相同分子式的不同化合物。

“立体异构体”是仅仅原子空间排列方式不同的异构体。

“对映体”是相互为不可重叠镜像的一对立体异构体。一对对映体的1∶1混合物是“外消旋”混合物。术语“(±)”在合适的情况下用于表示外消旋混合物。

“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子但是相互不为镜像的立体异构体。

绝对立体化学根据Cahn-Ingold-Prelog R-S系统进行指定。当化合物是纯对映体时，在每一手性碳上的立体化学可以通过R或S指定。绝对构型未知的拆分化合物根据其在钠D线波长处旋转偏振光平面的方向(右旋或左旋)指定为(+)或(-)。

“多神经病变”定义为当整个身体的许多外周神经同时功能障碍时发生的神经功能障碍。其可以是急性或慢性的。

本文中所用的“自主神经病变”是指调节血压、心律、肠和膀胱倒空、消化和其它身体机能的神经损伤所致的一组病状。

“单神经病变”定义为仅仅影响单一外周或脑神经的一类神经病变。单神经病变的常见类型包括但不限于，胸廓出口综合症、腕管综合症、桡骨神经病变(radial neuropathy)、翼状肩胛、感觉异常性股痛、跗管综合症、动眼神经瘫痪、第四神经瘫痪、第六神经瘫痪和面瘫(Bell’s palsy)。

“多发性单神经炎”定义为涉及至少两个单独神经区域损伤的神经功能紊乱。这是外周神经病变的一种形式(脑和脊髓之外的神经损伤)。常见原因包括由血流减少或血管发炎所致的缺氧。对于约三分之一的病例还未确证原因。多发性单神经炎的其它病因包括但不限于糖尿病、血管疾病如结节性多动脉炎、以及结缔组织疾病如风湿性关节炎或全身性红斑狼疮。

“通道病变”是指与离子通道变形有关的疾病或病状。钠通道病变的实例包括但不限于红斑性肢痛病和阵发性极度疼痛障碍。

雷诺嗪由于存在氨基和/或羧基或其类似基团而能够形成酸和/或碱盐。术语“药用盐”是指保留雷诺嗪生物有效性和性质的盐并且不是生物活性或以其它方式不期望的盐。药用的碱加成盐能够由无机和有机碱制备。衍生于无机碱的盐，仅以举例的方式包括：钠、钾、锂、铵、钙和镁盐。衍生于有机碱的盐包括但不限于：伯、仲和叔胺的盐，所述胺例如为烷基胺、二烷基胺、三烷基胺、取代烷基胺、二(取代烷基)胺、三(取代烷基)胺、烯胺、二烯胺、三烯胺、取代烯胺、二(取代烯)胺、三(取代烯)胺、环烷基胺、二(环烷基)胺、三(环烷基)胺、取代环烷基胺、二取代环烷基胺、三取代环烷基胺、环烯胺、二(环烯)胺、三(环烯)胺、取代环烯胺、二取代环烯胺、三取代环烯胺、芳基胺、二芳基胺、三芳基胺、杂芳基胺、二杂芳基胺、三杂芳基胺、杂环胺、二杂环胺、三杂环胺、混合的二-和三-胺，其中胺上的至少两个取代基不同并且选自由烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、环烷基、取代环烷基、环烯基、取代环烯基、芳基、杂芳基、杂环等构成的组。也包括其中两个或三个取代基连同氨基氮一起形成杂环或杂芳基的胺。

合适的胺的具体实例仅仅以举例的方式包括：异丙胺、三甲胺、二乙胺、三(异丙)胺、三(正丙)胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、缓血酸胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、N-烷基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、吗啉、N-乙基哌啶等。

药用的酸加成盐可以由无机和有机酸制备。衍生于无机酸的盐包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。衍生于有机酸的盐包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。

正如本文中所用，“药用载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、涂层、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。这些用于药物活性物质的介质和试剂在本领域内是众所周知的。除非任何传统介质或试剂与活性成分不相容，其在治疗组合物中的使用都是可设想的。补充活性成分也能够引入到组合物中。

本发明的方法

本发明的方法是基于雷诺嗪以治疗药物浓度阻滞Na_v1.7和Na_v1.8电流的惊人发现。雷诺嗪抑制峰值和“窗口”Na_v1.7和Na_v1.8电流。在另一方面，雷诺嗪相对于峰值Na_v1.5电流而选择性地滞后抑制，并且以治疗浓度似乎并不阻滞Na_v1.1、Na_v1.4和Na_v1.6的峰值电流。据发现雷诺嗪是峰值和窗口Na_v1.7和Na_v1.8电流的相对选择性阻滞剂，并且证实该药物在人体中的安全性，这些对于使用雷诺嗪来治疗由遗传或后天的钠通道病变所致的伤害性疼痛和神经性疼痛提供了强有力的支持。

神经性疼痛的病理学机制已经由动物模型的实验工作和由疼痛刺激的变化敏感性遗传性原因的阐明而提出。对于小背根神经节(DRG)细胞(其是突出到脊髓背角的原发性传入伤害感受器(primary afferent nociceptors))的研究，尤其提供了相关信息。脊髓背根(spinal dorsal root)神经节不受血液-脑屏障的保护而可以获得全身药物疗法。这些细胞表达几种电压门控(voltage-gated)钠通道(例如Na_v1.3、1.6、1.7、1.8、1.9)的α-(成孔的)亚基的亚型(或同种型，isoform)。

这些各种Na⁺通道亚型已知在DRG功能中具有不同性能和作用。通过给予链脲霉素，Na⁺通道亚型Na_v1.7高度表达于DRG神经元中并且患有糖尿病的大鼠的DRG神经元中表达进一步增加(参见Hong et al.(2004)J Biol Chem 279：29341-29350)。大鼠DRG神经元中Na_v1.7表达增加与Na⁺电流密度和痛觉过敏(对正常疼痛刺激的响应增加)和痛觉异常(由并非正常唤起疼痛的刺激引发的疼痛)的发生相关(Hong et al.(2004))。

来自对人的研究的证据也涉及疼痛感知中的Na_v1.7。先天性的疼痛不敏感存在于在编码Na_v1.7基因中具有无意义“功能丧失”突变的人群中，(参见，Cox et al(2006)Nature AAA：894-898)而慢性疼痛和痛觉过敏存在于具有Na_v1.7中“功能增益”错义突变的人群中，如导致红斑性肢痛病的那些突变，Cummings et al，(2007)Pain131：243-257。这些发现暗示了，采用改变Na⁺通道特定亚型(例如，Na_v1.7)功能的药物治疗神经性疼痛的机械方法是一种合理的治疗计划。

Na_v1.8是一种发现于DRG细胞和小伤害性C-型疼痛纤维中的缓慢失活TTX-R Na⁺通道(Akopian et al，1996；Sangameswaran et al，1996)。基因SCN10A编码Na_v1.8的α多肽((Akopian et al，1996；Sangameswaran et al，1996)。

对于治疗疼痛的新药具有大量的需求(Markman and Dworkin，2006；Flugsrud-Breckenridge et al，2007)。因为许多研究的证据表明，Na_v1.7和Na_v1.8在外周疼痛感觉中发挥关键作用，阻滞这些Na⁺通道亚型中的两个或任一个是一种缓解疼痛的潜在重要的治疗。Na⁺通道阻滞剂利多卡因(一种局部麻醉剂)和美西律(一种利多卡因类似物)已经在神经性疼痛动物模型中和人体中证实能够削弱痛觉过敏(Jarvis and Coukell，1998；Jett et al.，1997)。近来，据报道，雷诺嗪以状态和使用依赖性模式阻滞神经(neuronal)Na_v1.7 Na⁺电流(I_Na)(Wang et al.，2008)。雷诺嗪降低了心脏中持久(滞后)Na⁺电流(后I_Na)(Belardinelli et al，2006)，而该药物证实降低了慢性心绞痛，并证实是安全的(Scirica et al.，2007)。

起到钠通道阻滞剂作用的几种类型的药物用于治疗神经性疼痛。这些包括局部麻醉药(例如，利多卡因)，抗心律失常药(例如，美西律)，和抗癫痫药(例如，苯妥英、卡巴咪嗪)。这些药物没有一种是Na_v1.7或任何其它Na⁺通道亚型(subtype)的选择性阻滞剂。它们可以用于稳定Na⁺通道的失活状态并导致通道活性的使用依赖性阻滞，由此降低神经放电(neuronal firing)的最大速率。它们报道的效能仅仅只是部分的，Drenth et al.(2007)J Clin Invest，117：3603-3609，而其用途相关于CNS(例如，战栗，发作)或心脏(心律失常)毒性。Na⁺通道亚型(subtype)-选择性阻滞剂是治疗学的当前焦点。

效用测试和给予

一般效用

本发明的方法适用于治疗由于各种病因引起的疼痛。尽管并不期望受限于理论，据信雷诺嗪治疗疼痛源的能力是由于其用作峰值和窗口Na_v1.7和Na_v1.8电流的选择性阻滞剂的惊人能力。

药物组合物和给予

雷诺嗪通常是以其药物组合物的形式给予。因此本发明提供了药物组合物，含有作为活性成分的雷诺嗪或其药用盐或酯，和一种或多种药用赋形剂、载体，包括惰性固体稀释剂和填料(填充剂，fillers)，稀释剂，包括无菌水溶液和各种有机溶剂，增溶剂和佐剂。雷诺嗪可以单独给予或与其它治疗药剂组合给予。这种组合物以制药领域内众所周知的方式(参见，例如，Remington′s PharmaceuticalSciences，Mace Publishing Co.，Philadelphia，PA 17^th Ed.(1985)和“Modern Pharmaceutics”，Marcel Dekker，Inc.3^rd Ed.(G.S.Banker &CT.Rhodes，Eds.)制备。

雷诺嗪可以以单剂量或多剂量通过任何具有类似效用的可接受的给予模式给予，例如，按照引入参考的那些专利和专利申请中的描述，包括直肠、口腔、鼻内和经皮路径，通过动脉注射、静脉注射、腹膜内注射、非肠道、肌肉内、皮下、口服、局部施用，作为吸入剂，或经由灌输或涂层装置，如支架，例如，或插入动脉的圆柱形聚合物而进行给予。

合适的赋形剂的一些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露糖、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄芪胶、白明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、无菌水、糖浆和甲基纤维素。制剂可以另外包括：润滑剂如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化和悬浮剂；防腐剂如甲基-和丙基羟基-苯甲酸；甜味剂和芳香剂。

口服给予是雷诺嗪给予的优选路径。给予可以经由胶囊或肠衣涂层的片剂等进行实施。在包含雷诺嗪的药物组合物的制备中，活性成分通常通过赋形剂稀释和/或包封于可以是胶袭、药囊、纸或其它容器形式的载体中。当赋形剂是作为稀释剂时，其可以是固体、半固体或液体物质(如上)，起到活性成分的媒介物、载体、或介质的作用。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉末、锭剂、药囊、扁囊、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气溶胶(作为固体或在液体介质中)、含有例如高达50wt％的活性化合物的软膏、软和硬凝胶胶囊、消毒可注射溶液和无菌包装粉末的形式。

本发明的组合物能够进行配制从而在通过采用本领域内已知的方法向患者给予之后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。对于口服给予的控释药物递送系统包括等渗泵系统和含有聚合物涂层的储库或药物-聚合物基质制剂的崩解系统(dissolutionalsystem)。控释系统的实例在美国专利号3,845,770；4,326,525；4,902,514和5,616,345中给出。适用于本发明方法中的另一制剂采用经皮递送装置(“贴片”)。这种经皮贴片可以用于以受控量提供本发明化合物的连续或不连续输注。用于递送药物制剂的经皮贴片的构建和使用在本领域内是众所周知的。参见，例如，美国专利号5,023,252，4,992,445和5,001,139。这类贴片可以构建用于连续地、脉动地或按需地递送药物制剂。

雷诺嗪在较宽的剂量范围内都是有效的，但一般以药物有效量进行给予。典型地，对于口服给予，每一剂量单位含有1mg～2g雷诺嗪，更常见的是1～700mg，而对于非肠道给予，为1～700mg雷诺嗪，更常见的是约2～200mg。然而，应该理解到，实际给予的雷诺嗪的量将由医师根据相关情形，包括待治疗的病症、所选给予路径、给予的实际化合物和其相对活性、个别患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重度等进行确定。

对于制备固体组合物如片剂，主要活性成分与药物赋形剂混合而形成含有本发明化合物的均质混合物的固体预制剂组合物。当称这些预制剂组合物为均质时，其意指活性成分均一地分散于整个组合物中而使组合物易于再分为等效的单位剂量形式如片剂、丸剂和胶囊。

本发明的片剂或丸剂可以进行涂层或另外复合以提供获得延长作用优点的剂量形式，或保护免受胃里酸性条件的影响。例如，片剂或丸剂可以包含内部剂量和外部剂量组分，后者是遍及前者的包封形式。两种组分能够通过肠衣层分隔开，肠衣层起到在胃中抵御分解的作用从而允许内部组分完好无损地穿过而进入十二指肠或得以延迟释放。各种物质都能够用于这类肠衣层或涂层，这类物质包括多种聚合酸、以及聚合酸与诸如虫胶、十六醇和醋酸纤维素一类物质的混合物。

用于吸入或喷洒的组合物包括在药用的水性或有机溶剂，或其混合物中的溶液和悬浮液、以及粉末。液体或固体组合物可以含有合适的药用赋形剂，如上文所述。优选组合物通过口腔或鼻内呼吸路径给予而发挥局部或全身效用。在优选为药用溶剂中的组合物可以通过使用惰性气体进行雾化。雾化的溶液可以直接从雾化装置吸入或者雾化装置可以附连到面罩(face mask tent)、或间歇正压呼吸机上。溶液、悬浮液或粉末组合物可以从递送制剂的装置以合适的方式，优选口腔或鼻内进行给予。

给予的一种模式是非肠道，尤其是通过注射给予。本发明的新型组合物可以引入其中通过注射给予的形式包括采用芝麻油、玉米油、棉籽油、或花生油的水性或油性悬浮液、或乳液以及酏剂、甘露醇、葡萄糖、或无菌水溶液、以及类似的药物媒介物。盐水中的水溶液传统上也使用于注射，但是在本发明的上下文中是不太优选的。乙醇、甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等(和其合适的混合物)、环糊精衍生物、以及植物油，也可以采用。例如，通过使用涂层，如卵磷脂，在分散体的情况下通过维持所需的粒径和通过使用表面活性剂而能够维持合适的流度。微生物行为的预防能够通过各种抗细菌剂和抗真菌剂产生，例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。

无菌可注射溶液通过将本发明的化合物按照所需剂量，根据需要与各种以上列举的其它成分引入合适溶剂中，接着进行过滤和灭菌而进行制备。一般而言，分散体通过将各种灭菌活性成分引入到含有基础分散介质和以上列出的那些所需其它成分的无菌载体中而进行制备。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冻干技术，这些技术获得活性成分加上先前其无菌过滤溶液的任何其它所需成分的粉末。

雷诺嗪的静脉注射制剂经由以下无菌填充方法进行生产。在合适的容器中，将所需用量的葡萄糖一水合物以约78％的最终批料重量溶解于注射用水(WFI)中。随着连续搅拌，将所需用量的雷诺嗪游离碱加入到葡萄糖溶液中。为了方便雷诺嗪的溶解，溶液pH用0.1N或1N的盐酸溶液调节至3.88～3.92的目标pH。另外，0.1NHCl或1.0N NaOH可以用于将溶液最终调节至3.88-3.92的目标pH。在雷诺嗪溶解之后，批料用WFI调节至最终重量。一旦确证已经满足工艺过程规格(in-process specification)，则雷诺嗪本体溶液通过穿过两个0.2μm的无菌过滤器进行无菌过滤而灭菌。随后，无菌雷诺嗪本体溶液被无菌填充到无菌玻璃小瓶中并采用无菌塞子进行无菌封盖。封盖的小瓶随后用干净的翻盖(flip-top)铝封条密封。

雷诺嗪例如，可以通过扩散灌注到支架中，或如以凝胶的形式涂覆到支架上，例如采用本领域那些技术人员已知的工艺方法按照本发明公开的内容进行。

组合物优选按照单位剂量形式进行配制。术语“单位剂量形式”是指适合作为用于人类对象和其它哺乳动物的单位剂量的物理离散单位，每一单位，相对于合适的药用赋形剂(例如，片剂、胶囊、安瓿瓶)，含有经计算而产生所需疗效的预定量的活性物质。雷诺嗪在较宽剂量范围内都是有效的而一般按照药物有效量进行给予。优选地，对于口服给予，每一剂量单位含有10mg～2g化合物雷诺嗪，更优选10～1500mg，更优选10～1000mg，更优选500～1000mg。然而，应该理解到，实际给予的雷诺嗪的量将由医师根据相关情形，包括待治疗的病症、所选的给予路径、给予的实际化合物和其相对活性、个别患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重度等进行确定。

在一个实施方式中，雷诺嗪经过配制而在向患者给予之后提供活性成分的快速、持续或延迟释放，尤其是持续释放制剂。除非另外指出，在说明书和实施例中所用的雷诺嗪血浆浓度是指雷诺嗪游离碱。

本发明优选的持续释放制剂优选为含有化合物和部分中和的pH依赖性粘合剂(控制在介于胃内(典型地约2)和肠(典型地大致约5.5)pH范围的水性介质中的溶解速率)的紧密混合物的压缩片形式。持续释放制剂的实例公开于美国专利6,303,607；6,479,496；6,369,062和6,525,057中，其全部公开内容结合于本文中作为参考。

为了提供持续释放雷诺嗪，要选择一种或多种pH依赖性的粘合剂用于控制化合物的溶解分布而使制剂在制剂穿过胃和消化道时缓慢而连续地释放药物。pH依赖性粘合剂的溶解控制能力在持续释放制剂中尤为重要，因为含有每日两次给予的足量化合物的持续释放制剂，如果该化合物释放太快(“剂量倾卸”)，或许导致不良副作用。

因此，适用于本发明中的pH依赖性粘合剂是那些在药物滞留于胃(其中pH低于约4.5)中时抑制药物快速地从片剂中释放并在下部消化道(其中pH通常高于约4.5)中时促进治疗量的化合物从该剂量形式中释放的粘合剂。在制药领域中被称为“肠衣”粘合剂和涂层剂(coating agents)的许多物质都具有所需的pH溶解性能。这些包括酞酸衍生物如乙烯基聚合物和共聚物的酞酸衍生物、羟烷基纤维素、烷基纤维素、醋酸纤维素、羟烷基醋酸纤维素、纤维素醚、烷基醋酸纤维素、及其偏酯、以及低级烷基丙烯酸和低级烷基丙烯酸酯的聚合物和共聚物、及其偏酯。

能够结合该化合物使用而生产持续释放制剂的优选pH-依赖性粘合剂物质有甲基丙烯酸共聚物。甲基丙烯酸共聚物是甲基丙烯酸与中性丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯如丙烯酸乙酯或甲基丙烯酸甲酯的共聚物。最优选的共聚物是甲基丙烯酸共聚物，C型，USP(其是具有46.0％～50.6％的甲基丙烯酸单元的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物)。这种共聚物可以从Rohm Pharma作为

L100-55(粉末)或L30D-55(作为30％的水中分散体)商购获得。其它可以单独或组合使用的持续释放制剂剂量形式的pH依赖性粘合剂物质包括羟丙基纤维素酞酸酯、羟丙基甲基纤维素酞酸酯、醋酸纤维素酞酸酯、聚醋酸乙烯酞酸酯、聚乙烯吡咯烷酮酞酸酯等。

一种或多种非pH依赖性粘合剂可以用于口服剂量形式的持续释放制剂中。应该注意到，pH依赖性粘合剂和粘度增强剂如羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、中性聚(甲基)丙烯酸酯等，自身可以不提供由鉴别为pH依赖性粘合剂提供的所需溶解控制。非pH依赖性粘合剂可以存在于本发明制剂中的用量范围为约1wt％～约10wt％，优选的用量为约1wt％～约3wt％而最优选约2.0wt％。

正如表1中所示，雷诺嗪在pH高于约6.5的水溶液中是相对不溶性的，而当低于约pH 6时溶解度开始急剧增加。

表1

溶液pH	溶解度(mg/mL)	USP溶解度分类
			4.81	161	任意可溶
4.89	73.8	可溶
			4.90	76.4	可溶
5.04	49.4	可溶
			5.35	16.7	略溶
5.82	5.48	微溶
			6.46	1.63	微溶
6.73	0.83	极微溶
			7.08	0.39	极微溶
7.59(未缓冲水)	0.24	极微溶

7.79	0.17	极微溶
			12.66	0.18	极微溶

在制剂中pH-依赖性粘合剂含量增加就会降低化合物的持续释放形式从制剂中在pH低于胃环境中的典型pH 4.5下的释放速率。由于粘合剂形成的肠衣涂层溶解性较差而增加了高于pH 4.5的相对释放速率，在pH高于4.5时化合物溶解度较低。合适选择的pH-依赖性粘合剂允许化合物在高于pH 4.5时从制剂中以较快速率释放，而同时大大地影响低pH下的释放速率。部分中和粘合剂有助于粘合剂转化成类膜乳胶而形成于单个颗粒周围。因此，pH依赖性粘合剂的类型和数量以及部分中和组合物的量经选择而密切控制化合物从制剂中溶解的速率。

本发明的剂量形式应该具有足量的pH依赖性粘合剂以产生持续释放制剂，化合物从该制剂中的释放速率得到控制使得在低pH下(低于约4.5)溶解速率显著减慢。在甲基丙烯酸共聚物，C型，USP(

L 100-55)的情况下，pH依赖性粘合剂的合适量为5％～15％。pH依赖性粘合剂将典型地含有约1％～约20％的甲基丙烯酸羧基中和的粘合剂。然而，优选中和度范围为约3％～6％。持续释放制剂也可以含有与化合物和pH依赖性粘合剂紧密掺混的药物赋形剂。药用赋形剂可以包括，例如，非pH依赖性粘合剂或成膜剂如羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、中性聚(甲基)丙烯酸酯(例如，甲基丙烯酸甲酯/丙烯酸乙酯共聚物，以商标

NE由Rohm Pharma销售)、淀粉、明胶、蔗糖、羧甲基纤维素等。其它有用的药物赋形剂包括稀释剂如乳糖、甘露醇、干淀粉、微晶纤维素等；表面活性剂如聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、山梨糖醇酯等；以及着色剂和芳香剂。润滑剂(如滑石和硬脂酸镁)和其它成片助剂也可选地存在。

本发明的持续释放制剂含有含量为超过约50wt％至约95wt％以上，更优选约70wt％～约90wt％而最优选约70wt％～约80wt％的活性化合物；含量为5wt％～40wt％，优选5wt％～25wt％而更优选5wt％～15wt％的pH依赖性粘合剂；以及含有非pH依赖性粘合剂、填料和其它可选赋形剂的其余剂量形式。

本发明一个尤其优选的持续释放制剂如下表2所示。

表2

成分	重量范围(％)	优选范围(％)	最优选
				活性成分	50-95	70-90	75
微晶纤维素(填料)	1-35	5-15	10.6
				甲基丙烯酸共聚物	1-35	5-12.5	10.0
氢氧化钠	0.1-1.0	0.2-0.6	0.4
				羟丙基甲基纤维素	0.5-5.0	1-3	2.0

硬脂酸镁

0.5-5.0

1-3

2.0

本发明的持续释放制剂如下制备：化合物和pH依赖性粘合剂和任何可选的赋形剂紧密混合(干混)。干混的混合物随后在喷雾到掺混粉末中的强碱水溶液的存在下进行造粒。颗粒经干燥、筛分、与可选的润滑剂(如滑石或硬脂酸镁)混合、并压制成片。优选的强碱水溶液是碱金属氢氧化物的溶液，如氢氧化钠或氢氧化钾，优选氢氧化钠，在水(可选地含有高达25％的水混溶性溶剂如低级醇)中的溶液。

所得的片剂可以用可选的成膜剂进行涂层，其出于鉴别、掩蔽味道的目的并为了改进溶胀的容易度。成膜剂将典型地按照2％～4％的片剂重量的含量范围存在。合适的成膜剂在本领域内是众所周知的，包括羟丙基甲基纤维素、阳离子甲基丙烯酸酯共聚物(二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯/甲基-丁基甲基丙烯酸酯共聚物-

E-Rohm.Pharma)等。这些成膜剂可以可选地含有着色剂、增塑剂和其它补充成分。

压制片剂优选具有足够的硬度而抵御8Kp压缩。片剂尺寸将主要取决于片剂中化合物的用量。片剂将包含300～1100mg的化合物游离碱。优选片剂将包含400～600mg，650～850mg和900～1100mg用量范围的化合物游离碱。

为了影响溶解速率，含化合物粉末的湿混过程的时间要进行控制。优选总粉末混合时间，即粉末暴露于氢氧化钠溶液的时间，将为1～10min，而优选2～5min。造粒之后，将颗粒从造粒机中移出而放置于流体床干燥器中在约60℃下进行干燥。

据发现，这些方法所生产的持续释放制剂，当化合物作为其游离碱，而不是作为在药学上更加常见的二盐酸盐或作为另一种盐或酯使用时，在给予之后提供化合物较低的峰值血浆水平但却有效的血浆浓度达12小时以上。游离碱的使用提供了至少一个优点。片剂中的化合物比例能够增加，因为游离碱的分子量仅仅是二盐酸盐的85％。按照这种方式，实现有效量的化合物递送的同时限制了剂量单位的物理尺寸。

本发明的口服持续释放雷诺嗪剂量制剂在24h的时间内给予1次，2次或3次，以便在患者体内维持超过阈值治疗水平而低于最大耐受水平的血浆雷诺嗪水平，其优选为约550～7500ng碱/mL的血浆水平。在优选的实施方式中，雷诺嗪的血浆水平为约1500～3500ng碱/mL。

为了实现优选的血浆雷诺嗪水平，优选本文中描述的口服雷诺嗪剂量形式每日给予1次或两次。如果这种剂量形式每日给予2次，则优选口服雷诺嗪剂量形式以约12h的间隔时间进行给予。

在本发明的另一实施方式中，雷诺嗪可以引入到局部给予的药物制剂中。这种类型的制剂典型地含有一般适用于局部药物给予并含有本领域内已知的任何这类物质的药用载体。合适的载体在本领域内对于那些技术人员是众所周知的，而载体的选择将取决于预期药物制剂的形式，例如，作为油膏、洗剂、乳霜、泡沫、微乳液、凝胶、油、溶液、喷雾、软膏等，并可以含有天然存在的或合成的物质。应该理解到，所选的载体不应负面影响雷诺嗪或药物制剂的其它组分。

对于这些类型制剂的合适载体包括但不限于，包括Shephard′s^TM Cream，Aquaphor^TM和Cetaphil^TM洗剂的赋形剂。其它优选的载体包括软膏基质，例如，聚乙二醇-1000(PEG-1000)，传统的霜剂如HEBrew乳霜、凝胶、以及矿脂等。适用于本文中的合适载体的实例包括水、醇和其它无毒有机溶剂、甘油、矿物油、硅酮、矿脂、羊毛脂、脂肪酸、植物油、对羟苯甲酸酯、石蜡等。在本文中尤其优选的制剂是无色无味的油膏、洗剂、乳霜、微乳液和凝胶。

油膏是半固体制剂，其典型地基于矿脂或其它石油衍生物。本领域技术人员应明了，所使用的具体油膏基质，是将提供最佳药物递送而优选也将提供其它所需特性，例如软化性等的油膏基质。如同其它载体或媒介物一样，油膏基质应该是惰性的、稳定的、无刺激性和非过敏性的。正如在Remington′s Pharmaceutical Sciences，20^th Ed.(Easton，Pa.：Mack Publishing Company，2000)中的解释，油膏基质可以分成四类：油质基质；可乳化基质；乳液基质；和水溶性基质。油质油膏基质包括，例如，植物油；获自动物的脂肪、和获自石油的半固体烃。可乳化油膏基质，也称为吸收油膏基质，含有极少的水或不含水，包括例如羟基硬脂硫酸酯、无水羊毛脂和亲水性矿脂。乳液油膏基质是油包水(W/O)乳液或水包油(O/W)乳液，包括例如十六醇、单硬脂酸甘油酯、羊毛脂和硬脂酸。优选的水溶性油膏基质由变化分子量的聚乙二醇(PEG)制备；可以再次参考前述Remington′s获取进一步的信息。

洗剂是无摩擦地施用于皮肤表面的制剂，典型地是液体或半液体制剂，其中固体颗粒，包括活性剂，存在于水或醇基质中。洗剂通常是固体悬浮液，而对于本发明的目的，优选含有水包油型的液体油性乳液。在本文中洗剂是处理身体中较大面积的优选制剂，因为其易于施用较多的流体组合物。在洗剂中不溶性物质进行细分，一般是必要的。洗剂将典型地含有悬浮剂以产生更好的分散作用以及含有用于使活性剂局部化和保持活性剂接触皮肤的化合物，如甲基纤维素、羧甲基纤维素钠，等等。适用于结合本发明使用的尤其优选的洗剂制剂含有与亲水性矿脂混合的丙二醇，如可以以商标Aquaphor^TM，从Beiersdorf，Inc.(Norwalk，Conn.)获得的那些。

含有活性剂的霜剂，在本领域内是已知的，属于粘性液体或半固体乳液，要么是水包油，要么是油包水。霜剂基质是可水洗的，含有油相、乳化剂和水相。油相一般由矿脂和脂肪醇如十六醇或硬脂醇组成；水相，尽管是非必要的，通常体积上超过油相，而一般含有保湿剂。在霜剂制剂中的乳化剂，正如在前述Remington′s所解释的那样，一般是非离子、阴离子、阳离子或两性表面活性剂。

微乳液是两种不混溶液体如油和水的热动力学稳定的各向同性澄清分散体，通过表面活性剂分子的界面膜进行稳定(Encylopediaof Pharmaceutical Technology(New York：Marcel Dekker，1992)，volume 9)。对于微乳液的制备，表面活性剂(乳化剂)、助表面活性剂(乳化助剂)、油相和水相是必需的。合适的表面活性剂包括任何适用于乳液制备中的表面活性剂，例如，典型地用于霜剂制备中的乳化剂。助表面活性剂(或“乳化助剂”)一般选自由聚甘油衍生物、甘油衍生物和脂肪醇构成的组。优选的乳化剂/乳化助剂组合，尽管是非必要的，一般选自由以下物质构成的组：单硬脂酸甘油酯和聚氧乙烯硬脂酸酯；聚乙二醇和棕榈酰硬脂酸乙二酯；以及辛酸三甘油酯和癸酸三甘油酯和油酸聚乙二醇甘油酯(oleoylmacrogolglycerides)。水相不仅包括水，典型地还包括缓冲液、葡萄糖、丙二醇、聚乙二醇，优选低分子量的聚乙二醇(例如，PEG300和PEG400)、和/或甘油等，而油相将一般包含，例如，脂肪酸酯、改性植物油、硅油、单-、二-和三-甘油酯的混合物、PEG的单-和二-酯(例如，油酸聚乙二醇甘油酯)等。

凝胶制剂是由小无机颗粒悬浮液(两相体系)或基本均匀分布在整个载体液体中的大有机分子(单相凝胶)构成的半固体体系。单相凝胶能够通过，例如将活性剂、载体液体和适合的胶凝剂如黄芪胶(以2％～5％)、海藻酸钠(以2％～10％)、白明胶(以2％～15％)，甲基纤维素(以3％～5％)、羧甲基纤维素钠(以2％～5％)、卡波姆(以0.3％～5％)或聚乙烯醇(以10％～20％)结合在一起并混合直至生成特性半固体产品而进行制备。其它合适的胶凝剂包括甲基羟基纤维素、聚氧乙烯-聚氧丙烯、羟乙基纤维素和白明胶。尽管凝胶通常采用水性载体液体，但是醇和油也能够用作载体液体。

本领域技术人员已知，各种添加剂都可以包含在本发明的局部制剂中。添加剂的实例包括但不限于，增溶剂、皮肤渗透增强剂、遮光剂、防腐剂(例如，抗氧化剂)、胶凝剂、缓冲剂、表面活性剂(尤其是非离子和两性表面活性剂)、乳化剂、润肤剂、增稠剂、稳定剂、湿润剂、着色剂、香味剂等。尤其优选连同乳化剂、保湿剂和防腐剂而包含稳定剂和/或皮肤渗透增强剂。

增溶剂的实例包括但不限于以下物质：亲水性醚如二乙二醇单乙醚(乙氧基二甘醇，可以作为Transcutol^TM商购获得)和二乙二醇单乙醚油酸酯(可以作为Softcutol^TM商购获得)；聚乙烯蓖麻油衍生物如聚氧35蓖麻油、聚氧40氢化蓖麻油等；聚乙二醇，尤其是低分子量聚乙二醇如PEG 300和PEG 400，以及聚乙二醇衍生物如PEG-8辛酸/癸酸甘油酯(作为Labrasol^TM商购获得)；烷基甲基亚砜如DMSO；吡咯烷酮如2-吡咯烷酮和N-甲基-2-吡咯烷酮；和DMA。许多增溶剂也能够起到吸收增强剂的作用。单个增溶剂可以引入到制剂中，或增溶剂混合物也可以引入其中。

合适的乳化剂和乳化助剂包括但不限于，那些有关微乳液制剂描述的乳化剂和乳化助剂。润肤剂包括，例如丙二醇、甘油、豆蔻酸异丙酯、聚丙二醇-2(PPG-2)十四烷基醚丙酸酯等。

其它活性成分也可以包含在制剂中，例如，抗炎剂、其它镇痛剂、抗微生物剂、抗真菌剂、抗生素、维生素、抗氧化剂和通常在防晒制剂中发现的防晒霜剂，其包括但不限于邻氨基苯甲酸盐、二苯甲酮(尤其是二苯甲酮-3)、樟脑衍生物、肉桂酸盐(例如，甲氧基肉桂酸辛酯、二苯甲酰甲烷(例如，丁基甲氧基二苯甲酰甲烷)、对氨基苯甲酸(PABA)及其衍生物、和水杨酸酯(例如，水杨酸辛酯)。

在本发明优选的局部制剂中，雷诺嗪存在量的范围为制剂的约0.25wt.％～75wt.％，优选范围为制剂的约0.25wt.％～30wt.％，更优选范围为制剂的约0.5wt.％～15wt.％，而最优选范围为制剂的约1.0wt.％～10wt.％。

而且，药物制剂可以是灭菌的或与佐剂，例如，防腐剂、稳定剂、润湿剂、缓冲剂或影响渗透压的盐等混合。

无菌可注射溶液通过将雷诺嗪以所需量引入根据需要含有各种以上所列举的其它成分的溶剂中，随后过滤灭菌而制备。一般而言，分散体通过将各种灭菌活性成分引入到含有基本分散介质和以上列举的所需其它成分的无菌媒介物中而制备。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冻干技术，其获得活性成分加上任何来自其先前无菌过滤溶液的另外所需成分的粉末。

将以下实施例包含在内是为了举例说明本发明的优选实施方式。本领域内技术人员应当明了，以下实施例中公开的技术代表本发明人开发的技术，在本发明的实践中运作良好，由此能够认为其构成本发明实践的优选模式。然而，根据本发明公开的内容，技术人员应当明了，在所公开的具体实施方式中可以进行多种变化但仍然能够获得相同或类似的结果，而不会偏离本发明的精神和范围。

实施例1

雷诺嗪阻滞Na _v 1.7离子通道

物质和方法

异源表达：DNA构建和转染SCN9A Na⁺通道

用编码SCN9A Na⁺通道α-和β1亚基的cDNA稳定转染的人体胚肾(HEK293)细胞购自Scottish Biomedical，Glasgow，英国。HEK293细胞培养于含有10％胎牛血清和1％青霉素和1％链霉素的Dulbecco′s改性Eagle′s介质(DMEM)中。

膜片钳记录技术

膜电流采用全细胞膜片钳技术(18±1℃)进行记录。pCLAMP10.0软件(Axon Instruments，Sunnyvale，CA)用于产生电压钳方案并获取数据，数据采用pCLAMP 10.0和Microcal Origin(MicroCal，Northampton，MA)软件进行分析。在记录Na_v1.7峰值钠电流(I_Na)期间，胞外浴溶液(bath solution)内容物有(以mM计)：NaCl 140、KCl 4、CaCl₂ 1.8、MgCl₂ 0.75、HEPES 5(采用NaOH滴定之后pH7.4)。胞内吸管溶液(pipette solution)内容物有(以mM计)：CsF120、CsCl 20、EGTA 2、HEPES 5(采用CsOH滴定之后pH 7.4)。Axopatch-200B膜片钳放大器(Axon Instruments Inc.，Sunnyvale，CA)用于记录I_Na并测定细胞电容。数据在20kHz下采样并在5kHz下过滤(8-极Bessel)。串联电阻(R_s)补偿为70-80％而未采用漏减(leaksubtraction)。

药物来源和给予

研究级雷诺嗪(外消旋混合物)，R-雷诺嗪和S-雷诺嗪由CVTherapeutics，Inc(Palo Alto，CA)的生物有机化学部合成并溶解于0.1N HCl中而获得10mM浓度的原液。进一步的稀释物在实验当天于Tyrode溶液中新鲜配制。

统计分析

数据表示为平均值±SEM。浓度-响应关系采用希尔方程，I_药物/I_对照＝1/[1+(D/IC₅₀)ⁿ]进行拟合，其中I_药物/I_对照是阻滞分数(fractionalblock)，D是药物浓度，IC₅₀是导致50％阻滞的药物浓度而n_H是希尔系数。差异的统计学显著性采用学生氏配对t检验确定而p值＜0.05被认为是显著的。

结果

稳定表达Na_v1.7的HEK293细胞中钠通道电导的表征

Na⁺电流基于其对TTX的不同敏感性而区分。Na_v1.7峰值I_Na据报道对于IC₅₀为～3nM的TTX是敏感的(Zhou et al，JPET，306：498-504)。为了在我们的实验室中证实对TTX敏感的Na_v1.7峰值I_Na，将细胞每10s(0.1Hz)从保持电位-100mV至0mV去极化50ms。在研究的每一细胞中，在获得无药品存在下记录的基线电流之后，继续采用含有300nM TTX的Tyrode溶液进行实验腔室的灌注。在暴露于TTX期间，Na_v1.7峰值I_Na完全被阻滞。在3个不同的细胞中观察到类似的效应(数据未显示)。

雷诺嗪(外消旋混合物)及其对映体(R-雷诺嗪和S-雷诺嗪)阻滞Na_v1.7峰值I_Na

为了测定雷诺嗪抑制Na_v1.7峰值I_Na的浓度-响应关系，将表达SCN9A(Na_v1.7)基因的单个细胞每10s(0.1Hz)从保持电位(holdingpotential)-100mV至0mV去极化50ms。在浓度提高的雷诺嗪(■，1～30μM)或R-雷诺嗪(▲，1～100μM)和S-雷诺嗪(●，1～100μM)的存在下峰值I_Na振幅标准化成无药物存在下的各个对照值并作为相对电流绘图(图1)。对于雷诺嗪、R-雷诺嗪和S-雷诺嗪阻滞Na_v1.7峰值I_Na的IC₅₀和n_H值在表3中给出。

表3雷诺嗪对Na_v1.7峰值I_Na的影响

^*I_Na的振幅-对照的分数

雷诺嗪对Na_v1.7的开放状态阻滞

为了理解雷诺嗪是否优先结合至Nav1.7I_Na的开放或失活状态，单个HEK293细胞采用一串40个脉冲从保持电位-100mV至0mV以每200ms(即，以5Hz的速率)施加相同脉冲去极化2、5、20、或200ms的时间段。在不存在雷诺嗪(对照)或存在100μM雷诺嗪情况下峰值I_Na的振幅标准化成响应第一去极化步骤(脉冲1)记录的峰值I_Na值。未使用药物，重复脉冲产生极少地(～1％～8％)或未产生峰值电流降低(图2，开放符号)。如果雷诺嗪优先结合至开放状态，不管去极化步骤持续期多长(2、5、20或200ms)都将观察到峰值I_Na的显著阻滞。2或5ms持续时间的去极化电压步骤过于简短而不允许通道从开放至失活状态转变，而200ms持续时间的去极化电压步步骤将允许通道从开放至失活状态转变。

如图2中所示(封闭符号)，在100μM雷诺嗪存在下，表达Na_v1.7的HEK293细胞去极化至0mV 2、5、20或200ms的时间段，导致在脉冲串末尾(图2，填充符号；脉冲40)峰值I_Na被显著阻滞(～82.72±0.71％)。由100μM雷诺嗪产生的峰值I_Na阻滞百分数与去极化步骤的持续时间(2、5、20或200ms)无关。100μM雷诺嗪降低峰值I_Na与去极化步骤的持续时间无关，这一发现表明了药物与Na⁺通道Na_v1.7开放状态相互作用。

实施例2

雷诺嗪对Na _v 1.7和Na _v 1.8钠电流的阻滞

在该研究中，我们证实了雷诺嗪抑制Na_v1.7和Na_v1.8Na⁺通道。这些通道存在于外周感受疼痛的神经元中，据报道其在神经性疼痛的病因学中发挥重要作用。雷诺嗪以电压和使用(频率)依赖性模式抑制hNa_v1.7和rNa_v1.8Na⁺通道。雷诺嗪不改变Na_v1.7和Na_v1.8I_Na的活化电压范围，或电流半最大活化(half-maximal activation)出现的电压(V_1/2)。然而，雷诺嗪导致了两种电流的失活电压的浓度依赖性超极化漂移。

方法

钠通道的表达

稳定表达hNa_v1.7(α-亚基)连同人β1亚基的HEK293细胞购自Scottish-Biomedical，Glasgow，UK。细胞采用补充有10％热失活的胎牛血清，1％青霉素-链霉素，600μg/mL遗传霉素(Gibco-Invitrogen)，2μg/mL灭瘟素(blastocydin)(Calbiochem，NJ，USA)的MEM(Gibco-Invitrogen，Carlsbad，CA)进行连续维持，并在37℃下于5％CO₂的空气气氛中温育。

在异源表达体系中Na_v1.8I_Na的短暂(瞬时)或稳定表达已经证明是有问题的(John et al，2004a)。因此，在本研究中，稳定表达rNav1.8的重组ND7-23(大鼠DRG/小鼠神经母细胞瘤杂合体)细胞购自Millipore(UK)Limited，Cambridge，UK。据报道，ND7-23细胞也表达具有快速动力学的TTX-S I_Na，但是这些Na⁺通道的分子识别仍不清楚(Dunn et al，1991；John et al，2004b)。细胞采用补充有10％胎牛血清、1％L-谷氨酸、1％非必需氨基酸、1％青霉素-链霉素、400μg/mL遗传霉素(Gibco-Invitrogen)的DMEM(Gibco-Invitrogen)维持，并在37℃下于5％CO₂的空气气氛中温育。

溶液和化学品

为了记录hNa_v1.7 I_Na，HEK293细胞采用含以下物质(以mM计)的胞外溶液倾注(superfuse)：140NaCl、3KCl、10HEPES、10葡萄糖、1MgCl₂、1CaCl₂，pH 7.4(用NaOH)。膜片移液管用含有(以mM计)以下物质的内溶液填充：140CsF、10NaCl、1EGTA、10HEPES，pH 7.3(用CsOH)。为了记录ND7-23细胞中的内源I_Na或rNa_v1.8I_Na，细胞采用含以下物质(以mM计)的胞外溶液倾注：140NaCl、5HEPES-Na、1.3MgCl₂、1CaCl₂、11葡萄糖、4.7KCl，pH 7.4。膜片吸管(patch pipette)用含有(以mM计)以下物质的内溶液填充：120CsF、10HEPES、10EGTA、15NaCl，pH 7.25。为了测定药物对rNav1.8阻滞的使用依赖性，采用+50mV的测试电压(在此电压下Na⁺电流是向外的)和含有以下物质(以mM计)的胞外溶液实施实验：65NaCl、85胆碱Cl、2CaCl₂、10HEPES，pH 7.4(用氢氧化四甲铵)。膜片移液管用含有(以mM计)以下物质的内溶液填充：100NaF、30NaCl、10EGTA、10HEPES，pH 7.2(用CsOH)。反向Na⁺梯度用于最小化串联人为电阻(seriesresistant artifacts)，采用向外I_Na流比采用向内I_Na流其严重程度较低。

除非另外指出，采用ND7-23细胞的膜片钳研究在连续存在300nM TTX下实施而阻滞内源TTX-S I_Na(Ogata and Tatebayashi，1993；Roy and Narahashi，1992)。研究级雷诺嗪通过CV Therapeutics，Inc(Palo Alto，CA)的生物有机化学部合成而TTX购自Sigma(St.Louis，MO)。将雷诺嗪溶解于0.1N HCl中而获得10mM的原液，而进一步的稀释物在实验当天于Tyrode溶液中新鲜配制。TTX溶解于蒸馏水中。

电生理技术和数据采集

全细胞I_Na按照(Hamill et al，1981)的描述采用Axopatch 200B放大器(Molecular Devices，Sunnyvale，USA)进行记录。信号在5kHz过滤而在20kHz取样。膜片移液管由硼硅玻璃(World PrecisionInstruments，Sarasota，USA)采用微量吸管拉长器(micropipetterpuller)(Dagan Corporation，Minneapolis，USA)形成。偏置电位(offsetpotential)在移液器连接至细胞之前归零而电压对于液体接点电位并未进行校正。在所有的记录中，实现了75％～80％串联电阻补偿，由此产生了～5mV的最大电压误差，而通过P/-4扣除(subtraction)抵消漏电流。pCLAMP 10.0软件(Molecular Devices)用于产生电压钳方案并获取数据。将细胞保持在-100或-120mV的膜电位而采用移液器溶液在记录电流之前透析(dialyze)5～7min，以在膜片破裂之后开始的几分钟内避免Na⁺通道门控(channel gating)中的时间依赖性漂移。在所有实验中，实验溶液的温度采用CL-100两极温度控制器(Warner Instruments，Hamden，USA)维持在20±1℃。

数据采用Clampfit and Microcal Origin(MicroCal，Northampton，USA)软件进行分析。结果表示为平均值±S.E.M.，而n是指细胞数。所有实验都在至少2个不同的实验日重复。在不存在和存在药物下细胞响应之间差异的统计显著性采用学生氏t检验进行测定，P＜0.05表明为统计显著性。

浓度-向应关系采用希尔方程进行拟合，

I_drug/I_control＝1/[1+(D/IC₅₀)ⁿ _H]，

其中I_drug/I_control是阻滞分数，D是药物浓度，IC₅₀是导致50％阻滞的药物浓度而n_H是希尔系数。

采用50-ms去极化脉冲从保持电位-120或-100mV至测试电位范围-80～+40mV，以5mV增量测定活化的电压依赖性。为了测定通道活化的电压依赖性，Na⁺电导(G_Na)由峰值电流(I_Na)采用以下方程进行计算：

G_Na＝I_Na/(V-Vrev)，

其中V是测试脉冲电位而V_rev是计算的反向电位。标准化Na⁺电导相对于测试脉冲电位绘图并拟合于波尔兹曼方程：

G/G_max＝1/[1+exp(V_1/2-V/k)]，

其中G是测定的电导，G_max是最大电导，V_1/2是半最大通道开放可能性发生的膜电位而k是曲线斜率。为了评价稳态失活的电压依赖性，将-120～0mV(对于hNa_v1.7I_Na)或-100～+20mV(对于rNa_v1.8I_Na)范围的预脉冲施用1s的时间段，接着进行50-ms去极化步骤以至0mV(对于hNav1.7I_Na)或至+20mV(rNav1.8I_Na)。

峰值电流(I)相对于在保持电位-100或-120mV获得的最大值(I_max)标准化并对于调节脉冲电位进行绘图。数据拟合于波尔兹曼方程：

I/I_max＝1/[1+(exp(V-V_1/2/k)]，

其中V是预脉冲期间的膜电位，V_1/2是半最大通道失活发生的电位而k是斜率因子。为了评价稳态缓慢失活的电压依赖性，将-120～-10mV(对于hNa_v1.7I_Na)或-100～-10mV(对于rNa_v1.8I_Na)范围的预脉冲施用10ms的时间段，接着进行100-ms超极化步骤至-160mV(对于hNav1.7I_Na)或至-140mV(rNav1.8I_Na)并随后经50-ms时间步调(step)至0(对于hNav1.7I_Na)或至+20mV(rNav1.8I_Na)而测定可利用的电流。采用简短的100-m超极化步骤以允许通道(经和未经药物结合)从快速而非缓慢失活中还原。稳态缓慢失活的电压依赖性数据采用修改的波尔兹曼方程拟合(Carr et al.(2003)Neuron；39：793-806 and Vilin et al.(2001)Cell Biochem Biophys，35：171-190.)。

I/I_max＝(1-I_resid)/[1+exp(-(V-V_1/2)/k)]，

其中I_resid是电流的剩余(未失活)分数。

为了估计雷诺嗪对失活通道的阻滞程度，采用了基于稳态失活曲线漂移的浓度依赖性的间接方法((Bean et al，1983)，参见以下方程)。

ΔV_1/2＝kIn[(1+(D/IC_50R))/(1+([D/K₁))]

其中ΔV_1/2是稳态失活曲线中点的漂移，k是衍生于波尔兹曼拟合的稳态失活曲线的斜率因子，[D]是使用的雷诺嗪的浓度，IC_50R是对于休眠通道(resting channel)的IC₅₀值，K₁是对于由雷诺嗪阻滞失活通道的解离常数。

从失活中还原采用50-ms标准双脉冲方案在两脉冲之间以1ms～8ms的增量时间延迟进行测定(保持电位＝-100mV；测试电位＝-20mV(hNa_v1.7I_Na)或+20mV(rNa_v1.8I_Na)。通过第二脉冲引起的峰值电流(I)相对于由第一脉冲引起的电流(I₀)进行标准化。双脉冲方案的每一循环的持续期为20s。I/I₀相对于两脉冲之间的时间延迟绘图并拟合于双或三指数函数，

I/I₀＝[A_F*exp(-t/τ_F)]+[A_S*exp(-t/τ_S)]+A_∞，

其中t＝还原时间间隔，τ_F和τ_s＝快和慢时间常数，A_F和As＝快和慢还原分量(recovery component)的相对振幅，而A∞是稳态分量的相对振幅，或

I/I₀＝[A_F*exp(-t/τ_F)]+[A_I*exp(-t/τ_I)]+[A_S*exp(-t/τ_S)]+A_∞，

其中t＝还原时间间隔，τ_F，τ_I和τ_s＝快，中等和慢时间常数，A_F，A_I和As＝快，中和慢还原分量的相对振幅，而A∞是稳态分量的相对振幅。

结果

图3显示了300nM TTX对稳定表达hNa_v1.7+β1亚基的HEK293细胞(图3A)和未转染ND7-23细胞(图3B)或稳定表达rNa_v1.8Na⁺通道的ND7-23细胞(ND7-23/rNa_v1.8；图3C)的影响。TTX(300nM)完全阻滞HEK293的hNa+1.7I_Na和ND7-23细胞内的内源I_Na。相比而言，300nM TTX导致rNav1.8I_Na的最低阻滞，证实了先前rNav1.8对于毒素耐性的报道(Ogata and Tatebayashi，1993；Roy andNarahashi，1992)。

雷诺嗪阻滞重组人和天然大鼠Na_v1.7和Na_v1.8电流

30μM雷诺嗪施用于稳定表达hNa_v1.7的HEK293细胞或稳定表达rNa_v1.8Na⁺通道的ND7-23细胞，产生了峰值电流的显著降低(图4A)而间接表明失活速率的明显加速(从开放至失活状态的转换)。为了量化I_Na衰减速率的变化(在不存在和存在30μM雷诺嗪的情况下)，电流曲线(hNav1.7和rNav1.8)采用单指数进行拟合。在-20mV下，对于对照条件和存在30μM雷诺嗪的情况下hNa_v1.7电流的衰减分别具有时间常数1.51±0.31和0.68±0.15ms(n＝4个细胞，p＜0.05)。类似地，在+20mV下，对于对照条件和存在30μM雷诺嗪的情况下rNa_v1.8电流的衰减分别具有时间常数3.40±0.13和1.60±0.04ms(n＝4个细胞，p＜0.05)。

雷诺嗪分别在保持电位-120或-100mV时导致hNa_v1.7和rNa_v1.8的浓度依赖性阻滞(图4B，表4，V₀)。当实验中保持电位对于每一通道(对于Na_v1.7为-70mV，对于Na_v1.8为-40mV)设定为接近电压依赖性稳态失活关系的中点(通道50％失活的电压，V0.5)的电压时，对于雷诺嗪阻滞I_Na的浓度-响应关系漂移至左边(即，至低雷诺嗪浓度)(图4B，表V_0.5)。雷诺嗪也以浓度依赖性模式阻滞ND7-23细胞中内源TTX-S I_Na(IC₅₀值参见表4)。

表4.雷诺嗪对hNa_v1.7，rNa_v1.8和TTX-S的阻滞

V₀，-120mV(Na_v1.7)或-100mV(Na_v1.8)的保持电位

V₀₅，-70mV(Na_v1.7)或-40mV(Na_v1.8)的保持电位

对于这些实验，内源I_Na在不存在300nM TTX时进行记录。由伴随峰值I_Na关于药物(雷诺嗪)浓度相对降低而绘制的数据拟合(图4)推导的半最大抑制浓度(IC₅₀值)总结于表4中。雷诺嗪浓度和峰值I_Na降低之间的关系的希尔系数接近1(图4B)，表明药物和N⁺通道相互作用的1∶1化学计量关系。

在雷诺嗪存在下活化的电压依赖性

对于hNa_v1.7和rNa_v1.8的电流-电压(I-V)关系采用一系列的50-ms去极化步骤从-120mV(对于hNa_v1.7)或-100mV(对于rNa_v1.8)的保持电位以10s的脉冲间间隔在不存在雷诺嗪和存在10μM雷诺嗪下进行测定。图5A显示了分别由稳定表达hNa_v1.7(左侧图)的HEK293细胞和ND7-23/rNa_v1.8I_Na(右侧图，在300nM TTX存在下记录)记录的电压钳方案和代表性的电流曲线。由所测定的I_Na的峰值振幅，计算钠电导(G_Na)(详细描述参见“方法”)并在不存在(■，hNav1.7；●，rNav1.8，图5B)雷诺嗪和存在(□，hNa_v1.7；○，rNa_v1.8，图5B)10μM雷诺嗪下绘出G_Na的电压依赖性。

在不存在雷诺嗪(对照)和存在雷诺嗪下活化的平均半最大电压值(V_1/2)和该关系的斜率(k)因子如表5中所示。雷诺嗪并未显著使通道活化发生的电压范围发生漂移(图5，表5，活化)。图5C显示了在不存在雷诺嗪(●)和存在10μM雷诺嗪(○)下hNa_v1.7(左侧图)和rNa_v1.8(右侧图)I_Na的衰减(在图5C中描述的电流曲线)拟合于单指数方程。雷诺嗪对于降低在hNa_v1.7的-40～+5mV电压和rNa_v1.8的-35～+30mV的电压之间电流衰减的时间常数分别产生了显著影响。(表5，失活)

表5不存在雷诺嗪(对照)和存在10μM雷诺嗪的情况下hNa_v1.7和rNa_v1.8的活化和失活参数的比较。

在雷诺嗪存在下稳态快速、中速和慢速失活的电压依赖性

测定hNa_v1.7(左侧图)和rNa_v1.8(右侧图)I_Na的稳态快速、中速和慢速失活的电压依赖性的实验结果如图6所示。图6A显示了在不存在雷诺嗪(■，hNa_v1.7；●，rNa_v1.8)和存在10μM雷诺嗪(□，hNa_v1.7；○，rNa_v1.8)下hNa_v1.7和rNa_v1.8稳态快速失活(100ms的失活预脉冲)实验的电压钳方案和结果概要。雷诺嗪导致hNa_v1.7快速失活的V_1/2显著(p＜0.05)左漂移而没有影响其斜率(k)因子，而rNa_v1.8I_Na快速失活的V_1/2最小(p＝0.15)左漂移而没有影响其斜率(k)因子(各值参见图例)。图6B显示了在不存在雷诺嗪(■，●)和存在10μM雷诺嗪(□，○)下hNa_v1.7和rNa_v1.8稳态中速失活(1s的失活预脉冲)实验的电压钳方案和结果概要。

雷诺嗪导致了对于hNa_v1.7(在每一浓度下n＝4个细胞)和rNa_v1.8(在每一浓度下n＝4～5个细胞)I_Na(表5，失活)的中速失活的V_1/2的浓度依赖性(1-30μM)左漂移而没有影响斜率(k)因子。在本研究中对于对照条件(hNa_v1.7和rNa_v1.8)的活化和稳态失活的中点的数据相当于在DRG神经元中对于ND7-23/rNa_v1.8和天然TTX-S和TTX-R电流先前所发现的值。Cummins et al(1997)JNeurosci，17：3503-14 and John et al.(2004)Neuropharmacology46：425-38。

为了测试稳态慢速失活过程的电压依赖性，将图6C中所示的脉冲方案应用于hNa_v1.7和rNa_v1.8。采用该方案，慢速失活(生理上)对于hNa_v1.7和rNa_v1.8分别在-80mV和-75mV电位下变得明显。然而，慢速失活在-10mV的最大调节测试脉冲下仅仅完成50％和70％。图6C显示了在不存在雷诺嗪(■，●)和存在10μM雷诺嗪(□，○)下hNa_v1.7和rNa_v1.8稳态慢速失活(10s的失活预脉冲)实验的电压钳方案和结果概要。雷诺嗪导致hNa_v1.7和rNa_v1.8I_Na(各值参见图例)慢速失活的V_1/2显著左漂移(p＜0.05)而没有影响斜率(k)因子。

雷诺嗪诱导的失活中点(V_1/2)漂移(图6)和hNa_v1.7和rNa_v1.8的电压依赖性阻滞(图4，表4，在V_1/2保持电位下IC₅₀值)间接表明雷诺嗪或许与这些失活状态的通道相互作用。为了评估雷诺嗪对失活通道的阻滞程度，采用了基于稳态失活作用曲线²⁸漂移的浓度依赖性的间接方法(K_dr和K_di值，按照“方法”中的描述进行计算)。雷诺嗪结合至hNa_v1.7和rNa_v1.8通道的休眠(K_dr)和失活(K_di)状态的解离常数的估计据发现分别为12.12和22.84μM与0.47和0.64μM。

雷诺嗪存在下失活的发展

雷诺嗪导致Na_v1.7和1.8I_Na可用性的电压依赖性的超极化漂移(图6，表5和采用Bean方程估计的K_di值)，间接表明该药物与这些Na⁺通道的失活状态相互作用。为了更好地理解雷诺嗪与Na_v1.7和Na_v1.8通道的相互作用，通过去极化细胞至-40和-20(hNav1.7)或-20和+20mV一段可变的间隔时间(0.1～10-s)以允许阻滞发展而测定慢速失活的发展速率。插入20-ms超极化步骤而允许未结合通道在标准测试脉冲之前从快速失活还原而评价通道可用性。

在不存在雷诺嗪(■)和存在30μM雷诺嗪(□)下hNa_v1.7(-20mV，图7A，n＝4-5个细胞)和rNa_v1.8(+20mV，图7B，n＝4-5个细胞)I_Na的失活发展的时间依赖性如图7所示。对于对照条件，电流随着调节脉冲持续期增加而逐步衰减反映了通道进入了失活状态。hNa_v1.7+β1和rNa_v1.8通道的缓慢失活的发展可分别采用双和三指数函数进行拟合(参见表6，对照，缓慢失活的发展)。

正如先前所示，(Vijayaragavan et al(2001)J.Neurosci21：7909-18)Na_v1.8通道慢速失活的发生相比于Nav1.7通道是迅速的(～4倍，参见表6，对照，对于Nav1.7和Na_v1.8通道分别为τ_F＝10.78和43.97ms)。在雷诺嗪(30μM)存在下慢速失活发展的速率快2-5倍(参见表6，雷诺嗪，失活的发展)。在不存在雷诺嗪和存在30μM雷诺嗪下采用至-40mV(hNa_v1.7)或-20mV(rNa_v1.8)的去极化预脉冲对于hNa_v1.7(n＝4个细胞)和rNa_v1.8(n＝5个细胞)I_Na失活发展的时间常数在表6中给出。在存在雷诺嗪(30μM)下慢速失活的发展速率快4～10倍(参见表6，雷诺嗪，分别在-40(hNa_v1.7)和-20mV(rNa_v1.8)下失活的发展)。

从雷诺嗪阻滞中还原

雷诺嗪对从Nav1.7和Na_v1.8失活中还原的影响采用在“方法”中描述的标准双脉冲方案进行评估。在不存在雷诺嗪(□)和存在30μM雷诺嗪(■)下从hNa_v1.7(n＝5个细胞)和rNa_v1.8(n＝5个细胞)I_Na失活中还原的时间依赖性如图7所示。对于对照条件，从hNa_v1.7I_Na失活中还原(图7C，再极化电位＝-100mV)可采用双指数方程分别以快(τ_F)和慢(τ_S)时间常数进行拟合。相比而言，从rNa_v1.8I_Na失活中还原是较慢的(图7D)，并且可采用三指数更好地拟合。从rNa_v1.8I_Na失活中还原的时间进程(图7D，再极化电位＝-100mV)具有快速(τ_F)，中速(τ_I)和慢速(τ_S)时间常数。

正如在表6中(在-100mV下从失活中还原)所总结的，hNa_v1.7I_Na从失活中还原的快速分量(τ_F)在不存在雷诺嗪和存在30μM雷诺嗪下并无差异，而在存在30μM雷诺嗪下慢速分量(τ_S)显著(p＜0.05)减慢(参见表6，hNa_v1.7，从失活中还原)。rNa_v1.8I_Na从失活中还原的快速(τ_F)、中速(τ_I)和慢速(τ_S)分量在存在30μM雷诺嗪下显著(p＜0.05)减慢(参见表6，rNa_v1.8，从失活中还原)。

在不存在雷诺嗪和存在30μM雷诺嗪下采用至-40mV(hNa_v1.7)或-20mV(rNa_v1.8)的去极化预脉冲从hNa_v1.7(n＝5个细胞)和rNa_v1.8(n＝4细胞)I_Na失活中还原的时间依赖性在表6中示出。正如表6中的总结(在-80mV下从失活中还原)，hNa_v1.7I_Na从失活中还原的快速分量(τ_F)和慢速(τ_S)分量在存在30μM雷诺嗪下显著(p＜0.05)减慢。类似地，雷诺嗪(30μM)导致rNa_v1.8I_Na从失活中还原的快速分量(τ_F)、中速(τ_I)和慢速(τ_S)分量显著(p＜0.05)减慢(参见表6，rNa_v1.8，在-80mV下从失活中还原)。

表6不存在雷诺嗪(对照)和存在30μM雷诺嗪下hNa_v1.7和rNa_v1.8的慢速失活发展和从失活中还原的参数

数据采用图5中描述的电压-钳方案记录并用双或三指数方程进行拟合。^*p＜0.05。

雷诺嗪的使用依赖性阻滞

为了研究雷诺嗪对hNa_v1.7、rNa_v1.8和TTX-S I_Na的使用依赖性阻滞，从-100mV的保持电位以1、5和10Hz的速率施加一系列40个至-20mV(对于hNa_v1.7和TTX-S I_Na)或至+50mV(对于rNa_v1.8I_Na)的短重复脉冲(10ms持续期)。由第40个脉冲激起的电流振幅标准化成由第1个脉冲激起的电流的振幅。10ms的短去极化脉冲持续期经选择而近似于C纤维的体细胞动作电位持续期(0.6-7.4ms)；(Harper and Lawson，1985)。对于hNa_v1.7和TTX-S I_Na，脉冲频率高至10Hz对于电流振幅具有较小的影响(图8A和8C，填充符号)，间接表明通道从失活中迅速还原(τ_S＝～50ms，表6)而能够在这些测试频率下快速循环通过开放，封闭和失活验证(HiIIe，1977；Ragsdale et al，1994；Roy and Narahashi，1992；Vijayaragavan et al，2001)。

相比而言，在对照条件下rNa_v1.8显示出依赖于刺激频率的振幅降低(图8，填充符号)。这种I_Na振幅的频率依赖性降低间接表明ND7-23细胞中的rNa_v1.8Na⁺通道从失活中还原较慢(τ_s＝～847ms，表6)。雷诺嗪(30μM)导致hNa_v1.7、rNa_v1.8和TTX-S I_Na振幅的频率依赖性降低(p＜0.05，n＝4-5个细胞，每一个)，这表明了显著的使用依赖性阻滞。在最低刺激频率(1Hz，□)下，可利用通道的～20％～40％(依赖于通道亚型)易于通过药物阻滞。从1Hz至5Hz(○)或10Hz(△)刺激频率的增加揭示了另外的快速平衡通道阻滞，但是阻滞看起来在5Hz或10Hz下饱和(图8)。有意思的是，雷诺嗪仅仅产生很少的rNa_v1.8通道使用依赖性阻滞(在1、5、10Hz下的I_Na阻滞分别为60.20±2.04％，67.96±4.68％和70.16±2.09％(当相比于1Hz时p＜0.05))。一种可能的解释是雷诺嗪从失活的rNa_v1.8通道解离较快，比其从失活的hNa_v1.7通道解离要快得多。

雷诺嗪对开放通道的阻滞

雷诺嗪导致的hNa_v1.7和rNa_v1.8失活的(图5C，表7)电压依赖性阻滞(图3，表4，V_0.5保持电位实验)和中点(V_1/2)浓度依赖性漂移，以及hNa_v1.7和rNa_v1.8的估计(采用Bean方程)K_I值，间接表明雷诺嗪与这些Na⁺通道的失活状态相互作用。然而，采用10ms去极化脉冲在1、5和10Hz下雷诺嗪对hNa_v1.7或rNa_v1.8通道的阻滞是否也涉及除通道失活状态之外的瞬间开放状态，还并不清楚。Wang及其同事(Wang et al，2008)已经证实肌肉Na_v1.4和神经Na_v1.7对雷诺嗪阻滞同样敏感，而他们也证实了该药物优先阻滞这些Na⁺通道的开放状态。

为了研究对hNa_v1.7和rNa_v1.8通道的开放状态的阻滞，研究了脉冲持续期对雷诺嗪使用依赖性阻滞的振幅的影响。图9显示了在100μM雷诺嗪存在下由5(图9A)或200ms(图9B)长的至+50mV的测试脉冲于5Hz频率下引起的rNa_v1.8电流的代表性记录。测定由每一脉冲引起的峰值电流，将其标准化成第一脉冲的电流，并相对图9C中的脉冲编号绘图。该图表明，在100μM雷诺嗪存在下由35(△)、20(○)或200(□)ms-长的测试脉冲激起的rNa_v1.8I_Na的使用依赖性阻滞的发展达到了采用2.34±0.22脉冲时间常数的71.69±0.85％的稳态(n＝4-5个细胞，每一个)。

在不存在药物的情况下，重复脉冲导致随着脉冲持续期从3至5至20至200ms增加而增加的Na_v1.8I_Na振幅以16.89±4.59％(3ms，n＝5个细胞)至24.61±3.34％(5ms，n＝4个细胞)，27.15±3.18％(20ms，n＝4个细胞)和30.43±2.55％(200ms，n＝4个细胞)产生了少量降低。

进行由2

5(△)、20(○)或200(□)ms-长的测试脉冲至-20mV激起的hNa_v1.7I_Na的使用依赖性阻滞的发展。在100μM雷诺嗪存在下，hNa_v1.7使用依赖性阻滞达到了采用5.83±0.19脉冲时间常数的80.92±1.53％(n＝5-6个细胞)的稳态(数据未显示)。在不存在药物的情况下，重复刺激导致了I_Na振幅少量降低或不降低。因此，我们的数据表明，雷诺嗪阻滞hNa_v1.7和rNa_v1.8I_Na的开放状态。

实施例3

CFA诱导的痛觉过敏的雷诺嗪治疗

以下实施例证实了雷诺嗪对于机械的痛觉异常具有选择性的止痛效应，并且如果对热痛觉过敏具有任何效应也是极少量的。

物质和方法

所有的实验都是根据由LSU Medical Center Institutional AnimalCare and Use Committee批准和监控的方案进行实施。雄性SD(Sprague Dawley)大鼠(Harlan Sprague Dawley，Inc.，Indianapolis，IN)体重为300-350g，在一个笼子中喂养1只动物并维持温度25℃，湿度60％，以12h的光/暗循环，并允许随意获取食物和水。使大鼠适应其周围环境，并在1个星期内每天1h适应测试装置。

为了测定热刺激的基线阈值，将各组9只大鼠置于玻璃板上的有机玻璃室中并允许在室中进行自由范围的活动。每一后掌(hindpaw)的无毛表面通过玻璃板采用卤素光源按序刺激(Gould etal.，1997，1998；Hargreaves et al.，1988)。采用IITC无痛觉针(analgesiometer)(IITC Life Science，Inc.，Woodland Hills，CA)测定从刺激开始脚掌撤回的反应时间。刺激物在10.7s之后自动中断而避免阻滞损伤。每一后掌在每一测试期间刺激4次。

在热测试之后，采用IITC型2290electro-von Frey无痛觉针(EVF；HTC Life Sciences，Inc.，USA；Lewin et al.，1993，1994；Gould et al.，2000b)记录从机械刺激撤回的阈值。对此，对大鼠约束松散而使其适应该约束环境。刺激杖的尖端随后在每一后掌的无毛表面4个位点垂直施加至皮肤上。记录下脚掌撤回时刻向脚掌施加的力。将向四个位点中的每一个施加的平均力输入作为该间隔时间对象的反应阈值而用于所有进一步的计算中。施加最大限度为250g的力以防止EVF测试损伤组织。

对于热和机械刺激的基线疼痛阈值在两个时间点下测定之后，向每一后掌皮下注射0.1mL悬浮于油∶盐水(1∶1)乳液中的CFA(结核丝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)，Sigma)(0.5mg分支杆菌/mL乳液)，并向对侧脚掌注射等体积的无菌盐水。CFA-后撤回阈值在接下来的2天每天进行记录。在CFA注射之后第三天，对随后通过腹膜内(i.p.)注射(0，10，20和50mg/kg)或口腔管饲(口腔饲喂，oral gavage)(p.o.；0，20，50，100和200mg/kg)接受随机化和盲性剂量的雷诺嗪(pH3.0下于等渗盐水(0.9％)中重构)的分组9只大鼠记录撤回阈值。为了测定产生痛觉丧失的最佳剂量范围，初始参照剂量10～1000mg/kg通过i.p.注射给予。

热和机械刺激的撤回阈值在i.p.注射给予之后30min和口服管饲之后1h，重新进行评价。行为数据进行重复测定，混合设计误差分析(ANOVA)，以便内部比较实验操作的脚掌和对侧脚掌之间的差异而确定撤回反应时间变化的统计显著性。

结果

单次注射CFA至大鼠后掌脚底表面产生了对热和机械刺激敏感性的显著而持久的增加(Gould et al.，1997，1998，2004)。在图10和11中图形的左侧柱形描述了在2组大鼠中向一只后掌皮下注射CFA之后72h内(相比于接受相同体积标准盐水注射的对侧脚掌)产生脚掌撤回所必需的热和机械刺激的相对水平。在媒介物处理的大鼠(0.9％等渗盐水；pH3.0)中对注射CFA的后掌的刺激，揭示了对任一种刺激形式的反应没有显著性差异。

加入雷诺嗪，明显以剂量依赖性模式降低了脚掌对机械刺激的敏感性，但是对于热刺激没有观察到对脚掌敏感性具有显著影响。仅仅当100mg/kg以上剂量给予时在i.p.给予之后注意到了不良效应。这种效应在逐步更高剂量下倾向于更加显著。不良行为效应包括运动迟缓，由于对刺激的反应缓慢所表现出的行为呆滞(motorsluggishness)和有关rotarod测试的表现受损(Taylor et al.，personalcommunication)、肌肉震颤和抽搐，以及痉挛。用100mg/kg剂量治疗的大鼠50％发生死亡。

类似的止痛效应，特别针对于机械性的痛觉异常，在雷诺嗪口腔管饲给予时被观察到(图11)。然而，与药物通过i.p.注射给予时相比产生痛觉丧失所需的剂量更大。与i.p.给予路径不一样，无痛觉反应的稳定水平(平台期，plateau)在口腔管饲之后被注意到。以100mg/kg的剂量实现了最大反应。在200mg/kg的剂量下观察到痛觉丧失效应降低的非显著性趋势。

仅仅在最高的p.o.剂量下，在药物给予后约1h，雷诺嗪治疗的大鼠才发展出呼吸喘鸣(respiratory strider)的不良事件。在管饲24h内解决了不良肺部效应，而在媒介物治疗的对照中没有观察到这种不良肺部副作用。

Claims (14)

1.一种治疗或预防疼痛的方法，包括向需要其的患者给予治疗有效量或预防有效量的雷诺嗪、或其药用盐的步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中给予雷诺嗪用于治疗或预防神经性或伤害性疼痛。

3.根据权利要求2所述的方法，其中给予雷诺嗪用于治疗或预防伤害性疼痛。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述伤害性疼痛是机械、化学、和/或发炎性的。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述伤害性疼痛是发炎性的。

6.根据权利要求2所述的方法，其中给予雷诺嗪用于治疗或预防神经性疼痛。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述神经性疼痛由钠通道病变、多神经病变、自主神经病变、单神经病变、或多发性单神经炎所致。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述神经性疼痛由通道病变所致。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述疼痛由红斑性肢痛病或阵发性极度疼痛障碍所致。

10.根据权利要求1所述的方法，其中给予雷诺嗪用于治疗或预防源自或相关于外伤性神经损伤、神经压迫或神经卡压、疱疹后遗神经痛、三叉神经痛、糖尿病神经病变、癌症和/或化疗的疼痛。

11.根据权利要求1所述的方法，其中给予雷诺嗪用于治疗或预防慢性下背疼痛。

12.根据权利要求1所述的方法，其中给予雷诺嗪用于治疗或预防HIV诱导的神经病变和HIV治疗诱导的神经病变、慢性骨盆疼痛、神经瘤疼痛、复杂区域疼痛综合症、慢性关节炎疼痛和相关的神经痛。

13.根据权利要求1所述的方法，其中给予雷诺嗪作为局部麻痹。

14.一种用于在中风或神经损伤所致的缺血性条件下进行神经保护的方法，包括向需要其的患者给予治疗有效量或预防有效量的雷诺嗪、或其药用盐的步骤。

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