CN101966448A

CN101966448A - 沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法

Info

Publication number: CN101966448A
Application number: CN2010102796120A
Authority: CN
Inventors: 杨敏莉; 沈蕊莲; 储晓刚; 王大宁
Original assignee: Chinese Academy of Inspection and Quarantine CAIQ
Current assignee: Chinese Academy of Inspection and Quarantine CAIQ
Priority date: 2010-09-10
Filing date: 2010-09-10
Publication date: 2011-02-09

Abstract

本发明公开了一种固相萃取柱的制备方法，具体地讲涉及一种沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法。所述制备方法为，以单位重量份、单位体积份为例，将沙丁胺醇分子印迹聚合物100-500mg与5-10ml纯有机溶剂混合均匀，移入固相萃取空柱中，装填均匀后用酸性有机溶剂上柱清洗，然后用纯有机溶剂冲洗，并用惰性气体吹扫除去残余有机溶剂，干燥即得。本发明制备方法简单，具有与沙丁胺醇分子印迹聚合物本身匹配的特殊性，所制的固相萃取柱对沙丁胺醇具有很高的回收率，并且可以明显降低基质效应。

Description

沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法

技术领域

本发明涉及一种固相萃取柱的制备方法，具体地讲，涉及一种沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法。

背景技术

沙丁胺醇(Salbutamol，SAL)由于具有支气管扩张作用，被应用于支气管哮喘治疗。另外，由于该药物还可以促进肌肉组织的生长，也被应用于肉牛产业增加牛体内瘦肉的比例，用以代替常用的盐酸克伦特罗，同时可以作为兴奋剂提高运动员的体能和表现力。但是，长期或过量的服用这些药物是违法的，而且对生理有害，服用药物积累到一定量时会产生严重的毒性反应。因此，这些药物禁止运动员服用和应用于牛肉的生产。通常来说，在停止喂食此类添加物两周后，这些物质在可食用动物组织中的残留量就会降到1.0mg/kg以下。因此，动物组织或体液中这些化合物的痕量检测非常重要。这些方法可以监控β2-受体激动剂在治疗中的使用，并控制非法使用β2-受体激动剂的情况。为了对这些β2-受体激动剂的药用情况进行监控，同时控制它们的非法使用，研究对沙丁胺醇有特异性作用的前处理材料显得至关重要。要彻底避免这种情况的发生，除了从源头上控制兽药的生产和使用之外，及时准确地检测和有效富集畜禽产品中兽药残留一直以来都是研究热点。

分子印迹技术(Molecular Imprinting Technology)的迅速发展始于上世纪90年代，用于制备具有高亲和性和选择性的可以识别和结合目标分子的特定受体，即分子印迹聚合物(Molecularly Imprinted Polymers，MIPs)。由于孔穴对模板分子的记忆功能，MIPs对模板分子的亲和力大大增强，表现出分子识别的能力。MIPs依靠形状、大小和化学功能基的分布对模板分子进行识别，类似于生物体系中酶对底物、抗体对抗原、受体对激素的作用，具有专一选择性。而且分子印迹聚合物具有制备简单、成本低廉、使用寿命长等优点，且比天然的生物分子具有更高的稳定性、更良好的机械性能和高度的交联性。更重要的是，对于那些天然受体不存在或难以得到的目标分子，用这种方法都可以量身定做。到目前为止，有机小分子包括药物分子、杀虫剂、氨基酸、肽、核苷酸碱基、甾族化合物及糖等的印迹已经取得成功；金属和其他离子也可用作模板以使功能基具有特定的排布；而体积较大的分子如蛋白质、细胞等的印迹也已经有报道。可以应用到分子印迹技术中的目标分子非常多，这也是其发展如此迅速的原因之一。分子印迹聚合物以其优越的分子识别性能被广泛应用于分离领域，包括高效液相色谱(HPLC)、毛细管电色谱(CEC)以及生物传感器、模拟抗体、模拟酶等方面，其识别过程具有预定性、特异性和实用性这三大特点。

传统的样品前处理过程通常都使用常规的固相萃取柱如C18、C8、弗罗里硅土、硅胶等来对样品中残留目标物进行富集，这类固相萃取柱的优点是通用性好，适合各种不同的样品基质，但是缺乏特异性，有可能导致回收率低。而按照机理，分子印迹聚合物作为固相萃取剂的优点为：提取快速有效，优良的选择性和亲和力，稳定性高，成本低，能够降低检测限，并使基质影响降至最低。因此可以广泛应用于制药、食品、环境等多种行业中。

目前关于沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法尚未见有报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法，该方法工艺简单，具有与沙丁胺醇分子印迹聚合物本身匹配的特殊性，所制得的固相萃取柱对沙丁胺醇具有很高的回收率，并且可以明显降低基质效应。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：

一种沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法：以单位重量份、单位体积份为例，将沙丁胺醇分子印迹聚合物100-500mg与5-10ml纯有机溶剂混合，振荡10-20min后超声10-20min，直至混合均匀，移入聚丙烯等材质的固相萃取空柱中，两端分别用滤膜垫片堵住，装填均匀后用20-30ml酸性有机溶剂上柱清洗，然后用10-20ml纯有机溶剂冲洗，以除去酸性物质，最后用惰性气体吹扫除去残余有机溶剂，所述惰性气体可以是N₂或Ar；最后干燥即得，优选为真空干燥。

所述沙丁胺醇分子印迹聚合物优选为粉末状。

所述纯有机溶剂可以是甲醇、乙醇、乙腈或丙酮等中的一种或几种。

所述酸性有机溶剂可以是甲酸、乙酸或三氟乙酸中的一种或几种与甲醇的混合溶液；甲酸、乙酸或三氟乙酸中的一种或几种与甲醇的体积比约为1∶5-1∶20。

沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的评价：通过实际样品的检测来对沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的性能进行评价。首先采用不同比例的甲醇-水溶液及甲醇-乙酸溶液对固相萃取柱进行清洗，对淋洗和洗脱条件进行优化。之后，用所制备的沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱富集实际样品进行评价。同样，用C18柱也对该样品进行富集作对比。

结果表明，分子印迹固相萃取柱使用15次以后，沙丁胺醇的回收率略有下降，但都在90.0％以上。可见，以分子印迹聚合物作为填料制成的MIP-SPE具有较好的稳定性和耐用性能，多次使用后其识别能力仍没有降低。

本发明具有下述优点：制备方法简单，首次以沙丁胺醇分子印迹聚合物作为固定相，具有与其本身匹配的特殊性，所制的固相萃取柱对沙丁胺醇具有很高的回收率，并且可以降低基质效应。

附图说明

图1为沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的洗脱液HPLC谱图。

图2为C18固相萃取柱的洗脱液HPLC谱图。

具体实施方式

通过下述实施例将有助于理解本发明，但不限制本发明的内容。

实施例1

一种沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法：将粉末状的沙丁胺醇分子印迹聚合物100mg与10ml纯甲醇混合，振荡10min后超声20min，混合均匀，移入聚丙烯固相萃取空柱中，两端分别用滤膜垫片堵住，装填均匀后用20ml体积比为1∶9的乙酸与甲醇的混合溶液上柱清洗，然后用10ml纯甲醇冲洗，并用N₂吹扫除去甲醇，真空干燥即得。

对该固相萃取柱进行评价：用5ml甲醇对沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱进行活化，之后将1000ml河水过滤后上样，流速1.0ml/min。用5ml甲醇与水(体积比为1∶10)的混合溶液淋洗，再用10ml甲醇与乙酸(体积比为1∶9)的混合溶液进行洗脱。洗脱液用氮气吹干后，加1ml甲醇溶解，用HPLC进行分析。同时用C18固相萃取柱对整个过程进行重复以作比较。如图1和图2所示，用沙丁胺醇分子印迹聚合物作固相萃取填料，与普通C18固相萃取柱相比，可以有效地降低基质效应，并且提高回收率。另外，分子印迹固相萃取柱使用15次以后，沙丁胺醇的回收率约为96.5％。

实施例2

一种沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法：将粉末状的沙丁胺醇分子印迹聚合物500mg与20ml纯乙醇混合，振荡20min后超声10min，混合均匀，移入聚丙烯固相萃取空柱中，装填均匀后用15ml体积比为1∶5的三氟乙酸与甲醇的混合溶液多次上柱清洗，然后用20ml纯乙醇冲洗，并用Ar吹扫除去乙醇，干燥即得。

分子印迹固相萃取柱使用15次以后，沙丁胺醇的回收率约为92.7％。

实施例3

一种沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法：将粉末状的沙丁胺醇分子印迹聚合物300mg与15ml纯乙腈混合，振荡15min后超声15min，混合均匀，移入聚丙烯固相萃取空柱中，装填均匀后用50ml体积比为1∶20的甲酸与甲醇的混合溶液多次上柱清洗，然后用15ml纯乙腈冲洗，并用N₂吹扫除去乙腈，真空干燥即得。

分子印迹固相萃取柱使用15次以后，沙丁胺醇的回收率约为93.6％。

实施例4

一种沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法：将粉末状的沙丁胺醇分子印迹聚合物250mg与10ml纯丙酮混合，振荡15min后超声15min，混合均匀，移入聚丙烯固相萃取空柱中，装填均匀后用25ml体积比为1∶10的乙酸与甲醇的混合溶液多次上柱清洗，然后用15ml纯丙酮冲洗，并用N₂吹扫除去丙酮，真空干燥即得。

分子印迹固相萃取柱使用15次以后，沙丁胺醇的回收率约为93.9％。

Claims

1.沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法，其特征在于，以单位重量份、单位体积份为例，将沙丁胺醇分子印迹聚合物100-500mg与5-10ml纯有机溶剂混合均匀，移入固相萃取空柱中，装填均匀后用酸性有机溶剂上柱清洗，然后用纯有机溶剂冲洗，最后用惰性气体吹扫，干燥即得。

2.根据权利要求1所述的沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法，其特征在于所述沙丁胺醇分子印迹聚合物为粉末状。

3.根据权利要求1所述的沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法，其特征在于所述沙丁胺醇分子印迹聚合物与纯有机溶剂混合方法为振荡10-20min后超声10-20min。

4.根据权利要求1所述的沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法，其特征在于所述纯有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈或丙酮中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法，其特征在于所述酸性有机溶剂为甲酸、乙酸或三氟乙酸中的一种或几种与甲醇的混合溶液。

6.根据权利要求1所述的沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法，其特征在于所述甲酸、乙酸或三氟乙酸中的一种或几种与甲醇的体积比为1∶5-1∶20。

7.根据权利要求1所述的沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法，其特征在于所述惰性气体为N₂或Ar。

8.根据权利要求1所述的沙丁胺醇分子印迹固相萃取柱的制备方法，其特征在于所述干燥为真空干燥。