CN101955954A - 微孔草△-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-△6-FAD)及用途 - Google Patents
微孔草△-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-△6-FAD)及用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101955954A CN101955954A CN2010102845748A CN201010284574A CN101955954A CN 101955954 A CN101955954 A CN 101955954A CN 2010102845748 A CN2010102845748 A CN 2010102845748A CN 201010284574 A CN201010284574 A CN 201010284574A CN 101955954 A CN101955954 A CN 101955954A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fatty acid
- acid dehydrogenase
- dehydrogenase gene
- grass
- primer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶(Ms-Δ6-FAD)基因的序列，以及这种基因序列的制备方法和用途。微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶(Ms-Δ6-FAD)基因的制备是用微孔草基因的RNA反转录为cDNA，再根据其它植物的(Ms-Δ6-FAD)基因保守区设计相应的简并引物与巢式引物进行扩增得到微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶(Ms-Δ6-FAD)基因的全长翻译区核苷酸序列；本发明的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶(Ms-Δ6-FAD)基因可用在油料作物、牧草作物以及其它的植物或非植物的转基因工作中。
Description
技术领域
本发明涉及一种新的基因序列，以及这种基因序列的制备方法和用途，确切讲本发明涉及微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶(Ms-Δ6-FAD)基因及其制备与用途。
背景技术
γ-亚麻酸(γ-linolenic acid，GLA)是一种多功能油脂成分。许多研究表明GLA具有多种重要的生理活性作用，它在机体的物质代谢和生理调控上发挥着十分重要的作用：降血脂、抗血栓性心脑血管、预防和治疗高血压、动脉粥样硬化、增强人体的免疫功能，G L A还具有抗革兰氏阴性菌和阳性菌、抗HIV感染、抗肿瘤、抗多种炎症、抗脂质过氧化、抑制溃疡和增强胰岛素和减肥等方面的作用，参见董杰明等“γ-亚麻酸的保健作用”《卫生研究》2003，32(3)：299-301。Δ6-脂肪酸脱氢酶(Δ6-FAD)基因是介导GLA合成的关键酶基因。
发明内容
本发明提供一种取自我国特有物种-微孔草的Δ-6脂肪酸脱氢酶基因，以及这种基因的制备方法及用途。
微孔草(Microula sikkimensis Hemsl.)系紫草科微孔草属，为二年生草本植物，主要分布于陕西西南部、甘肃、青海、四川西部、云南西北部、西藏藏东和南部，参见：中国科学院中国植物志编辑委员会《中国植物志》北京：科学出版社，1990 151-175。
本发明所涉及的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因制备方法是：首先提取微孔草的RNA，再反转录为cDNA；利用GenBank中已公布的其它植物的Δ-6脂肪酸脱氢酶基因的核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性分析，根据保守区设计合成一对简并引物P1、P2；以得到的微孔草cDNA为模板扩增得到微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因核心片段核苷酸序列；根据测序得到的Ms-Δ6-FAD基因核心片段序列分别设计微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因特异引物5’端外侧引物P3和巢式引物P4，分别与GeneRacerTM试剂盒中自带的5’P和5’NP配对，以微孔草cDNA为模板，进行5’外侧和巢式PCR扩增反应，得到5’末端核苷酸序列；同样根据测序得到的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因核心片段序列分别设计微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因特异引物3’端外侧引物P5和巢式引物P6，分别与GeneRacerTM试剂盒中自带的3’P和3’NP配对，以微孔草cDNA为模板，进行3’外侧和巢式PCR扩增，得到3’末端核苷酸序列；根据已克隆到的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因5’和3’末端核苷酸序列，设计与该基因编码区两端特异的引物P7、P8，扩增得到微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因的全长翻译区核苷酸序列。
在P7、P8引物的5’端分别加入NcoⅠ和Bste Ⅱ酶切位点序列，便于后期的基因编码区与植物表达载体重组。
采用的相关引物均由大连宝生物合成(宝生物工程有限公司，辽宁省大连市经济技术开发区东北二街19号，邮编116600)，序列如下：
P1：5’-TAYAGSAAGCTTGTGTTTGAG-3’
P2：5’-ARTTCTTSGGGAGCGGCTTGG-3’
P3：5’-CGGAAAGACAATTTGCAAACAGAATACC-3’
P4：5’-TACCCAAACAGACTCAAAAAACAAAACC-3’
5’P为：5’-CGACTGGAGCACGAGGACACTGA-3’，
5’NP为：5’-GGACACTGACATGGACTGAAGGAGTA-3’；
P5：5’-TGGTACCCATTGCTTCTTTCTTATTTGC-3’
P6：5’-AATATAATTGTGCATCATTCTCTAAGGC-3’
3’P为：5’-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACG-3’，
3’NP为：5’-CGCTACGTAACGGCATGACAGTG-3’
P7：5’-CTCCCATGGATGGCTGCTAAAATC-3’
P8：5’-GGCGGTCACCTCAGCTAATCTTAACCA-3’
其中：R＝A or G；Y＝C or T；S＝C or G。
本发明所涉及的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-Δ6-FAD)可在油料作物的转基因工作中应用，也可在牧草等作物的转基因工作中应用，也可在除油料作物和牧草等作物外的其它植物的转基因工作中应用，可在除植物外的其它生物的转基因工作中应用。
微孔草富含γ-亚麻酸(表1)，参见：高有为，樊铁“微孔草-一种待开发的富含γ-亚麻酸的新油源”。《中国粮油学报》199813(2)：22-24。
表1微孔草和其它植物油的γ-亚麻酸的含量比较
| 油品 | 月见草油 | 琉璃苣油 | 黑穗醋栗油 | 微孔草油 |
| 种子含油率％ | 20 | 30 | 30 | 40-45 |
| γ-亚麻酸含量％ | 8-10 | 19-25 | 11-138 | 8.1 |
由表可以看出，微孔草种子油中γ-亚麻酸的百分含量与月见草相近，但因其种子含油率高，所以单位公斤种子产γ-亚麻酸高于月见草。微孔草是我国特有的珍稀油料植物，对其加以开发和利用，获得拥有自主知识产权的Δ-6脂肪酸脱氢酶基因，有着重要的理论和实践意义；其次，由于微孔草具有耐寒，耐旱，喜强光照的特性，使微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-Δ6-FAD)的转基因工程中有极佳的应用前景，而且是一种很好的转基因材料。
具体实施方式
以下提供具体实施方式及相关实验数据：
一、以微孔草为材料提取RNA，反转录为cDNA
微孔草(Microula sikkimensis Hemsl.)块根采自甘南天祝，在人工气候箱中培养，长出植株后取其新鲜叶片作为实验材料。按上海生工(上海生工生物工程技术服务有限公司，上海市松江区车墩工业区香闵路698号，邮编201611)UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒说明书进行RNA提取。按照宝生物(宝生物工程有限公司，辽宁省大连市经济技术开发区东北二街19号，邮编116600)PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis Kit说明书进行反转录，得到cDNA。
本发明经相关实验表明，采用微孔草的叶片提取其RNA较采用其它组织提取RNA更为方便，并且本发明提取的Δ6-FAD基因在叶片中表达，因此在植物抗逆过程中保持膜脂流动性，发挥着更重要的作用。
二、微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因核心片段RT-PCR扩增
利用GenBank中已公布的琉璃苣，蓝蓟，月见草和黑穗醋栗等植物Δ-6脂肪酸脱氢酶基因的核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性分析，根据保守区设计一对简并引物P1、P2。
在200μl PCR管中依次加入下列组分配置PCR反应液：
Total 25μl
轻轻混匀，PCR反应条件为：
94℃ 预变性5min
72℃ 延伸10min
4℃ ∞
反应结束后用1％的琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测。
将目的片段与克隆载体的连接，转化至E.coli DH5α感受态细胞，经菌落PCR鉴定后选取阳性克隆由上海生工进行测序，得到微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因核心片段，长度为1027bp。
三、微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因5’和3’末端的克隆(5’-RACE和3’-RACE)
3.1微孔草总RNA反转录前处理(按照Invitrogen RACE试剂盒操作指南进行)3.1.1微孔草总RNA脱磷酸基团
脱磷酸基团反应：
(1)取1.5ml离心管置于冰上，依次加入下列试剂：
Total Volume 10μl
(2)轻轻混匀，短暂离心收集液体。
(3)50℃温育1h，短暂离心后置于冰上。
RNA沉淀反应：
(1)加入90μl DEPC水、100μl酚∶氯仿(25∶24)，漩涡震荡30s。
(2)20℃下12000rpm离心5min，吸取上清(约100μ1)转移至新的离心管中。
(3)依次加入2μl l0mg·ml-1Mussel Glycogen、10μl 3mol·L-1NaAc(pH5.2)
和220μl 95％乙醇，颠倒混匀，冰浴10min。
(4)4℃、12000rpm离心20min，弃上清，小心不要弃掉沉淀，加入500μl 70％
乙醇，颠倒混匀。
(5)4℃、12000rpm离心20min，小心吸去乙醇，再次离心弃去残留乙醇。
(6)20℃下干燥沉淀1-2min，加入7μl DEPC水溶解，为下步去帽反应备用。
3.1.2mRNA去除帽子结构
去帽反应：
(1)取1.5ml离心管置于冰上，依次加入下列试剂：
Total Volume 10μl
(2)轻轻混匀，短暂离心收集液体。
(3)37℃温育1h，短暂离心后置于冰上
RNA沉淀反应：方法同3.1.1。
3.1.3去帽后的mRNA和RNA oligo连接
连接反应：
(1)在含有0.25μg GeneRacerTM RNA Oligo的离心管中加入7μl上述反应液，轻轻混匀，短暂离心收集液体。
(2)65℃温育5min，消除RNA二级结构。
(3)冰浴2min，短暂离心。
(4)依次加入以下试剂：
Total Volume 10μl
(5)轻轻混匀，短暂离心。
(6)37℃温育1h，短暂离心后置于冰上。
RNA沉淀反应：方法同3.1.1。沉淀用10μl DEPC水溶解。
3.2第一链cDNA的合成
(1)在上述获得的10μl ligated RNA中加入下列试剂：
(2)轻轻混匀，短暂离心收集液体。
(3)65℃温育5min以除去RNA二级结构，冰浴1min，短暂离心收集液体。
(4)于冰上依次加入下列试剂：
Total Volume 20μl
(5)轻轻混匀，短暂离心收集液体。
(6)25℃温育5min，50℃温育1h，70℃温育5min，冰浴2min，短暂离心收集液体。
(7)加入1μl RNase H(2U·μl-1)，37℃温育20min，短暂离心收集液体。
(8)-20℃保存备用或即可进行5’和3’外侧PCR扩增反应。
3.3 5’末端PCR扩增
根据已测序得到的Δ-6脂肪酸脱氢酶基因核心片段序列分别设计5’端外侧引物P3和巢式引物P4，分别与GeneRacerTM试剂盒中自带的5’P和5’NP配对。以3.2中所述获得的微孔草cDNA为模板进行5’外侧和巢式PCR扩增反应。
5’外侧PCR扩增
在200μl PCR管中按下列组分配置PCR反应液：
Total 25μl
轻轻混匀，短暂离心，PCR反应体系如下：
94℃ 预变性5min
72℃ 延伸10min
4℃ ∞
取5μl PCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测目的片段。
5’巢式PCR扩增
在200μl PCR管中按下列组分配置PCR反应液：
Total 25μl
轻轻混匀，短暂离心，PCR反应体系如下：
94℃ 预变性5min
72℃ 延伸10min
4℃ ∞
取5μl PCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测目的片段。
胶纯化和回收获得的目的基因5’端PCR产物，连接到克隆载体，转化至E.coli DH5α感受态细胞，经菌落PCR鉴定后选取阳性克隆由上海生工进行测序。
3.4 3’末端PCR扩增
根据已测序得到的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因核心片段序列分别设计3’端外侧引物P5和巢式引物P6，分别与GeneRacerTM试剂盒中自带的3’P和3’NP配对。以3.2中所述获得的微孔草cDNA为模板进行5’外侧和巢式PCR扩增。
3’外侧PCR扩增
在200μl PCR管中依次配置下列PCR反应液：
Total 25μl
轻轻混匀后短暂离心，PCR反应条件如下：
94℃ 预变性5min
72℃ 延伸10min
4℃ ∞
取5μ1PCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测目的片段。
3’巢式PCR扩增
在200μl PCR管中依次配置下列PCR反应液：
Total 25μl
轻轻混匀后短暂离心，PCR反应条件如下：
94℃ 预变性5min
72℃ 延伸10min
4℃ ∞
取5μl PCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测目的片段。
胶纯化和回收获得的目的基因3’端PCR产物，连接到克隆载体，转化至E.coli DH5α感受态细胞，经菌落PCR鉴定后选取阳性克隆由上海生工进行测序。
经过测序，5’和3’RACE巢式PCR扩增产物分别为533bp和437bp，与前述所得到的微孔草Δ6-脂肪酸脱氢酶核心片段都有部分核苷酸重叠，并且在与GeneBank中比对发现扩增出来的片段与其他植物Δ6-脂肪酸脱氢酶基因5’和3’端具有同源性。因此，扩增得到的5’和3’RACE-PCR产物分别为同一cDNA的5’和3’端。
四、PCR扩增翻译区全长序列
根据已克隆到的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因的5’和3’末端核苷酸序列，设计与该基因编码区两端特异的引物P7、P8，扩增得到微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因的全长翻译区核苷酸序列。在引物的5’端分别加入NcoⅠ和BsteⅡ酶切位点序列，便于后期的基因编码区与植物表达载体重组。
在200μl PCR管中依次配置下列PCR反应液：
Total 25μl
轻轻混匀后短暂离心，PCR反应条件如下：
98℃ 预变性5min
72℃ 延伸10min
4℃ ∞
取5μl PCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测目的片段。
胶纯化和回收获得的目的基因PCR产物，连接到克隆载体，转化至E.coliDH5α感受态细胞，经菌落PCR鉴定后选取阳性克隆由上海生工进行测序。得到全长为1351bp的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因cDNA序列。
Claims (7)
1.微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因，其特征是SEQ No：1。
2.权利要求1所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因制备方法，其特征是将提取的微孔草RNA反转录为cDNA；利用GenBank中已公布的其它植物的Δ-6脂肪酸脱氢酶基因的核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性分析，根据保守区设计合成一对简并引物P1、P2；以得到的微孔草cDNA为模板扩增得到微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因核心片段核苷酸序列；根据测序得到的HPT基因核心片段序列分别设计微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因特异引物5’端外侧引物P3和巢式引物P4，分别与GeneRacerTM试剂盒中自带的5’P和5’NP配对，以微孔草cDNA为模板，进行5’外侧和巢式PCR扩增反应，得到5’末端核苷酸序列；同样根据测序得到的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因核心片段序列分别设计微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因特异引物3’端外侧引物P5和巢式引物P6，分别与GeneRacerTM试剂盒中自带的3’P和3’NP配对，以微孔草cDNA为模板，进行3’外侧和巢式PCR扩增，得到3’末端核苷酸序列；根据已克隆到的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因5’和3’末端核苷酸序列，设计与该基因编码区两端特异的引物P7、P8，扩增得到微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因的全长翻译区核苷酸序列。
3.权利要求2所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因制备方法中所用的相关引物，其特征是：
上游引物P1为：
P1：5’-TAYAGSAAGCTTGTGTTTGAG-3’
下游引物P2为：
P2：5’-ARTTCTTSGGGAGCGGCTTGG-3’
P3：5’-CGGAAAGACAATTTGCAAACAGAATACC-3’
P4：5’-TACCCAAACAGACTCAAAAAACAAAACC-3’
5’P为：5’-CGACTGGAGCACGAGGACACTGA-3’，
5’NP为：5’-GGACACTGACATGGACTGAAGGAGTA-3’；
P5：5’-TGGTACCCATTGCTTCTTTCTTATTTGC-3’
P6：5’-AATATAATTGTGCATCATTCTCTAAGGC-3’
3’P为：5’-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACG-3’，
3’NP为：5’-CGCTACGTAACGGCATGACAGTG-3’
P7：5’-CTCCCATGGATGGCTGCTAAAATC-3’
P8：5’-GGCGGTCACCTCAGCTAATCTTAACCA-3’
其中：R＝A+G；Y＝C+T；S＝C+G。
4.权利要求1所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因在油料作物的转基因工作中的应用。
5.权利要求1所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因在牧草作物的转基因工作中的应用。
6.权利要求1所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因在除权利要求4或5所述的植物外的植物中的转基因工作中的应用。
7.权利要求1所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因在除植物外的其它生物的转基因工作中的应用。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010102845748A CN101955954A (zh) | 2010-09-10 | 2010-09-10 | 微孔草△-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-△6-FAD)及用途 |
| CN201110281046.1A CN102424827B (zh) | 2010-09-10 | 2011-09-10 | 微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-Δ6-FAD)及用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010102845748A CN101955954A (zh) | 2010-09-10 | 2010-09-10 | 微孔草△-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-△6-FAD)及用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101955954A true CN101955954A (zh) | 2011-01-26 |
Family
ID=43483541
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010102845748A Pending CN101955954A (zh) | 2010-09-10 | 2010-09-10 | 微孔草△-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-△6-FAD)及用途 |
| CN201110281046.1A Expired - Fee Related CN102424827B (zh) | 2010-09-10 | 2011-09-10 | 微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-Δ6-FAD)及用途 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110281046.1A Expired - Fee Related CN102424827B (zh) | 2010-09-10 | 2011-09-10 | 微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-Δ6-FAD)及用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (2) | CN101955954A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105200060A (zh) * | 2015-11-05 | 2015-12-30 | 上海海洋大学 | 缺刻缘绿藻δ6 fad基因启动子及其应用 |
| CN107326018A (zh) * | 2017-08-15 | 2017-11-07 | 南京晓庄学院 | 一种植物耐低温基因和转基因耐低温植物的培育方法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104450748B (zh) * | 2014-11-18 | 2017-07-18 | 西南大学 | 糙草△6‑脂肪酸脱饱和酶ApD6D基因家族及其重组表达载体和应用 |
| CN104357464B (zh) * | 2014-11-18 | 2017-06-16 | 西南大学 | 微孔草Δ6‑脂肪酸脱饱和酶MsD6D基因家族及其重组表达载体和应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101353661B (zh) * | 2007-07-25 | 2012-05-09 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 具有△6脂肪酸脱氢酶功能的基因及其应用 |
-
2010
- 2010-09-10 CN CN2010102845748A patent/CN101955954A/zh active Pending
-
2011
- 2011-09-10 CN CN201110281046.1A patent/CN102424827B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105200060A (zh) * | 2015-11-05 | 2015-12-30 | 上海海洋大学 | 缺刻缘绿藻δ6 fad基因启动子及其应用 |
| CN105200060B (zh) * | 2015-11-05 | 2018-01-19 | 上海海洋大学 | 缺刻缘绿藻δ6 fad基因启动子及其应用 |
| CN107326018A (zh) * | 2017-08-15 | 2017-11-07 | 南京晓庄学院 | 一种植物耐低温基因和转基因耐低温植物的培育方法 |
| CN107326018B (zh) * | 2017-08-15 | 2020-03-10 | 南京晓庄学院 | 一种植物耐低温基因和转基因耐低温植物的培育方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102424827B (zh) | 2015-06-03 |
| CN102424827A (zh) | 2012-04-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101955954A (zh) | 微孔草△-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-△6-FAD)及用途 | |
| CN102220369B (zh) | 里氏木霉β-葡萄糖苷酶基因BGL1的重组载体、重组菌及在重组菌中的表达 | |
| CN101280311B (zh) | 甘蔗蔗糖转运蛋白ShSUT4基因序列 | |
| CN108085323A (zh) | 塞尼卡谷病毒svv/ch/nm/2016的全基因组序列及其扩增引物 | |
| CN103981209A (zh) | 一种牛β-防御素5成熟肽的制备方法及其重组菌和应用 | |
| CN102021188A (zh) | 白沙蒿△12脂肪酸脱氢酶(As FAD2)基因及用途 | |
| CN1962871A (zh) | pET－SOD工程菌的构建及其表达纯化方法 | |
| CN107828808A (zh) | 芍药tdc基因及其植物表达载体和应用 | |
| CN105200057B (zh) | 利用miR397a提高植物中酚类化合物含量的方法 | |
| CN105950644B (zh) | 芦笋查尔酮异构酶基因及其编码的蛋白与应用 | |
| Lei et al. | Molecular cloning and expression profiling of a chalcone synthase gene from hairy root cultures of Scutellaria viscidula Bunge | |
| CN100350046C (zh) | 转外源基因技术提高黄芪甲苷含量 | |
| CN101974542A (zh) | 白沙蒿尿黑酸叶绿基转移酶(AsHPT)基因及用途 | |
| CN103981210A (zh) | 一种牛β-防御素4成熟肽的制备方法及其重组菌和应用 | |
| CN104726556A (zh) | 烟草根黑腐病菌的分子检测引物及其检测方法 | |
| CN110527684A (zh) | 纳米化RNAi制剂在PVY防治中的应用 | |
| CN102010874A (zh) | 白沙蒿γ-生育酚甲基转移酶(As-γ-TMT)基因及用途 | |
| CN103333258B (zh) | 一种信号肽-组蛋白h1融合蛋白及其编码基因与应用 | |
| CN105316325B (zh) | 一种基于HMGR 3’-UTR和rRNA ITS的引物及其应用 | |
| CN113151351B (zh) | 一种提高棉花种子质量和油脂含量的方法 | |
| CN114032177B (zh) | 一种矩孢木霉及其土壤修复菌剂 | |
| Zhou et al. | Food comparison between tadpoles of Rana catesbeiana and R. chaochiaoensis collected from the same habitat | |
| CN102191240A (zh) | 一种苦荞麦胰蛋白酶抑制剂基因tbti的克隆和表达方法 | |
| CN106834279B (zh) | 快速提取冬虫夏草菌基因组dna的方法 | |
| Shu et al. | Morphological observation and pathogen identification of kiwifruit root-knot nematodes. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20110126 |