CN101953773B - 一种拉米夫定脂质体固体制剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种拉米夫定脂质体固体制剂，还公开了其在治疗慢性乙型肝炎中的应用，所述脂质体固体制剂包括拉米夫定、二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇，该固体制剂可以为片剂、分散片、胶囊等，其具有优点包封率高、稳定性好，并且提高了溶出率等，在治疗慢性乙型肝炎中，该固体制剂显示出良好的安全性、耐药性和更有效的抗病毒作用，较低的耐药率和病毒反跳率。

Description

一种拉米夫定脂质体固体制剂

技术领域

本发明涉及一种拉米夫定脂质体固体制剂及其制法，进一步涉及其在治疗慢性乙型肝炎中的应用，属于医药技术领域。

背景技术

慢性乙型肝炎是我国常见的慢性传染病之一，严重危害人民健康。慢性乙型肝炎的治疗也是一个长期的过程，治疗目标就是最大限度地抑制或消除HBV，减轻肝细胞炎症坏死及干纤维素化，延缓和阻止疾病进展，减少和防止肝脏失代偿、肝硬化、HCC及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。慢性乙型肝炎治疗主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化和对症治疗，其中抗病毒治疗是关键，只要有适应症，且条件允许，就应该进行规范的抗病毒治疗。常用治疗药物包括拉米夫定、阿德福韦酯和恩替卡韦等。

拉米夫定，属于核苷类抗病毒药，对体外及实验性感染动物体内的乙型肝炎病毒(HBV)有较强的抑制作用。拉米夫定可在HBV感染细胞和正常细胞内代谢生成拉米夫定三磷酸盐，它是拉米夫定的活性形式，既是HBV聚合酶的抑制剂，亦是此聚合酶的底物。拉米夫定三磷酸盐渗入到病毒DNA链中、阻断病毒DNA的合成。拉米夫定三磷酸盐不干扰正常细胞脱氧核苷的代谢，它对哺乳动物DNA聚合酶α和β的抑制作用微弱，对哺乳动物细胞DNA含量几乎无影响。拉米夫定对线粒体的结构、DNA含量及功能无明显的毒性。对大多数乙型肝炎患者的血清HBV DNA检测结果表明，拉米夫定能迅速抑制HBV复制，其抑制作用持续于整个治疗过程，同时使血清氨基转移酶降至正常。长期应用可显著改善肝脏坏死炎症性改变，并减轻或阻止肝脏纤维化的进展。

拉米夫定口服后吸收良好，成人口服拉米夫定0.1g约1小时左右达血药峰浓度(C_max)1.1～1.5ug/ml，生物利用度为80％～85％。拉米夫定与食物同时服用可使达峰时间(T_max)延迟0.25～2.5小时、血药峰浓度(C_max)下降10～40％，但生物利用度不变。静脉给药研究结果表明拉米夫定平均分布容积(V_d)为1.3L/kg，平均系统清除率为0.3L/h/kg，拉米夫定主要(＞70％)经有机阳离子转运系统经肾清除，血消除半衰期(t_1/2)为5～7小时。在治疗剂量范围内，拉米夫定的药物代谢动力学呈线性关系，血浆蛋白结合率低。体外研究显示与血清白蛋白结合率＜16％～36％。拉米夫定可通过血-脑脊液屏障进入脑脊液。拉米夫定主要以药物原型经肾脏排泄，肾脏排泄约占总清除量的70％左右，仅5％～10％被代谢成反式硫氧化物的衍生物。

中国专利CN101461790A公开了一种拉米夫定片剂及制备方法，由拉米夫定100份、微晶纤维素90-100份、羧甲淀粉钠15-25份、羟丙甲纤维素1-5份、硬脂酸镁1-5份、50％乙醇90-110份组成。中国专利CN101199491A公开了一种拉米夫定片及其制备方法，由150份的拉米夫定、70-90份的淀粉、5-10份的干淀粉、1-1.5份的硬脂酸镁、15-20份的10％的定粉浆制成。由于拉米夫定的水溶性很差，上述专利制备的产品均存在溶出度低的现象，现上市销售产品同样存在溶出度低的问题，而且稳定性也很差，这也是目前该品种存在的共同的难题。

发明内容

本发明人经过长期认真地研究，发现采用二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇这三种材料按照特定比例的组合，将其与拉米夫定按一定比例制备成脂质体，再将该脂质体制备成固体制剂，解决了脂质体的稳定性和包封率不佳的技术问题，获得了意想不到的制剂效果，从而提供了质量优良的脂质体固体制剂。虽然该脂质体的优良性质的机理还不是特别明确，但是本发明人预期本发明制剂的效果可能是二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇三种材料的共同和/或协同作用的结果。而对于本领域常用的膜材料磷脂和胆固醇，例如天然磷脂和合成磷脂，比如蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、大豆磷脂酰肌醇、二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油等，采用其中任一种或两种，按照本领域常规技术，制备得到的拉米夫定脂质体都会存在稳定性较差、包封率低等问题，尤其在高温40℃、相对湿度75％±5％加速试验下，这些缺点更为明显，既不利于贮存，也不利于临床应用。

因此，本发明的目的在于提供一种拉米夫定脂质体固体制剂，先通过活性成分拉米夫定和二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇的组合制备成脂质体，再和其他可药用赋形剂混合制成固体制剂，极大提高了其在水中的溶解性，有利于药物制剂的溶出，而且拉米夫定被脂质体包裹，制剂的稳定性得到了很大的提高。

本发明提供的拉米夫定脂质体固体制剂，包括拉米夫定、二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇和适于制备固体制剂的其他可药用赋形剂，各组分重量份数比例为：

拉米夫定                1份

二棕榈酰磷脂酰甘油      2.2-13份

脱氧胆酸钠            1.3-7份

胆固醇                0.8-5份

其他可药用赋形剂      40-80份。

在本发明的一个优选实施方案中，所述的拉米夫定脂质体固体制剂中各组分重量份数为：

拉米夫定                 1份

二棕榈酰磷脂酰甘油       3.1-8.8份

脱氧胆酸钠               1.6-4.6份

胆固醇                   1-2.4份

其他可药用赋形剂         50-70份。

在本发明的一个优选实施方案中，所述的拉米夫定脂质体固体制剂由上述列出的组分组成。

在本发明的一个优选实施方案中，所述的拉米夫定脂质体固体制剂包含拉米夫定1份、二棕榈酰磷脂酰甘油3.1份、脱氧胆酸钠1.6份、胆固醇1份。

在本发明的一个优选实施方案中，所述的拉米夫定脂质体固体制剂包含拉米夫定1份、二棕榈酰磷脂酰甘油8.8份、脱氧胆酸钠4.6份、胆固醇2.4份

在本发明的优选实施方案中，所述脂质体固体制剂包括片剂、分散片或胶囊剂。

在本发明中，所述适于制备固体制剂的基他可药用赋形剂选自稀释剂、崩解剂、粘合剂、助流剂、润滑剂及其组合，其用量可以由本领域技术人员根据各赋形剂在固体制剂中的一般用量进行选择。

进一步地，作为优选，稀释剂可以选自预胶化淀粉、甘露醇、山梨醇、糊精、葡萄糖、蔗糖中的一种或多种的组合，优选为预胶化淀粉和甘露醇。其用量可以为所述固体制剂总重量的10％-90％(w/w)，优选为30％-80％(w/w)。

进一步地，作为优选，崩解剂可以选自低取代羟丙纤维素、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠中的一种或多种的组合，优选为交联聚维酮。其用量可以为所述固体制剂总重量的1％-15％(w/w)，优选为5％-10％(w/w)。

进一步地，作为优选，粘合剂可以选自聚维酮K30、羧甲基纤维素钠、黄原胶、阿拉伯胶、甲基纤维素、乙基纤维素中的一种或多种的组合，优选为聚维酮K30。其用量可以为所述固体制剂总重量的0.05％-3％(w/w)，优选为1％-2％(w/w)。

进一步地，作为优选，助流剂或润滑剂可以选自滑石粉、微粉硅胶、硬脂酸锌、聚乙二醇4000、硬脂酸中的一种或多种的组合，优选为滑石粉和微粉硅胶。其用量可以为所述固体制剂总重量的0.5％-8％(w/w)，优选为1％-5％(w/w)。

在本发明中，拉米夫定(Lamivudine)的化学名为：(2R-顺式)-4-氨基-1-(2-羟甲基-1，3-氧硫杂环戊-5-基)-1H-嘧啶-2-酮，分子式：C₈H₁₁N₃O₃S，分子量：229.26，结构式为：

规格用量为50-200mg，优选为80-150mg，更优选100mg。

本发明还提供了一种本发明所述拉米夫定脂质体固体制剂的制备方法，步骤包括：

(1)脂质体的制备：将拉米夫定和二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇一起制备成脂质体固体；

(2)固体制剂的制备：将脂质体固体和其他可药用赋形剂混合制备拉米夫定固体制剂，其中所述可药用其他赋形剂选自稀释剂、崩解剂、粘合剂、助流剂、润滑剂及其组合。

在本发明的制备方法中，步骤(1)脂质体的制备包括如下具体步骤：

(a)将二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到磷脂膜；

(b)加入缓冲溶液，用pH调节剂调pH为5.5-6.6，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(c)将拉米夫定分散于水中，再加入空白脂质体混悬液中，保温60-70℃搅拌60-90分钟，喷雾干燥，制得脂质体固体。

在本发明的制备方法中，步骤(2)固体制剂的制备包括如下步骤：

(d)将拉米夫定脂质体固体和稀释剂、崩解剂混合，过筛混合均匀，加入粘合剂溶液制备软材，过筛制粒，干燥；

(e)将干颗粒和助流剂或润滑剂混合均匀，过筛整粒；

(f)压片或填充胶囊，制得拉米夫定脂质体固体制剂。

其中，步骤(b)中可以用0.3μm-0.45μm微孔滤膜过滤；步骤(d)中过筛混合，优选地过60-80目筛混合，其中粘合剂溶液指代的是一定浓度的乙醇水溶液，乙醇的浓度根据粘合剂的不同用量也不相同，这可以由本领域技术人员确定，一般采用的乙醇浓度为20％-95％；步骤(d)中的过筛制粒优选过20目筛；步骤(e)中的过筛整粒优选过18目筛。

其中，步骤(b)中振摇，搅拌的程度为使磷脂膜完全水化即可，高速匀质乳化采用高速组织捣碎机，转速为2000-5000r/min，比如3000r/min，匀质乳化次数可以为5次，每次3-5min。

本发明制备方法中所述的缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的一种，优选pH值为5.8的磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液，更优选磷酸-磷酸氢二钾缓冲溶液，更优选pH值为5.8的磷酸-磷酸氢二钾缓冲溶液。

本发明制备方法中所述的pH调节剂选自氢氧化钾、碳酸氢钠、碳酸钠、枸橼酸钠、盐酸、枸橼酸、磷酸中的一种或两种，优选为磷酸和氢氧化钾。

本发明制备方法中所述的有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、乙腈、苯甲醇、正己烷中的一种或几种，优选为甲醇和乙腈体积比为1∶4的混合溶剂、异丙醇和丙酮体积比为2∶1的混合溶剂、二氯甲烷和正丁醇体积比为1∶1的混合溶剂。其中有机溶剂的用量没有具体要求，以能够完全溶解二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇为宜，本领域技术人员根据常规技术和本发明的教导可以确定适宜用量。

发明所述的拉米夫定脂质体固体制剂的制备方法还可包括片剂包薄膜衣步骤，即，在步骤(f)得到素片后，将所得素片包胃溶薄膜衣(可以是本领域已知的任何包衣剂)，增重2-4％(重量)，制得薄膜衣片。

本发明还提供了所述拉米夫定脂质体固体制剂在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用。通过和上市的拉米夫定片临床病例疗效观察对比，充分显示了本发明的拉米夫定脂质体固体制剂在治疗慢性乙型肝炎中相比同类治疗药物的显著优越性。

本发明先通过活性成分拉米夫定和二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇的特定的组合制备成脂质体，再和可药用其他赋形剂混合制成固体制剂，极大提高了其稳定性和溶出度，副作用更小，疗效更显著；所用辅料简单廉价，利用度高，污染小，经济价值高，并且制备方法的设备简单，易于操作，极其有利于工业化大生产。

在本文中，如果没有特别地说明，含量或用量都以重量份计；如果没有特别地说明，所采用的装置、仪器、原料、物质、用量、方法、时间、温度及其它条件等都为本领域众所周知的，或者是本领域技术人员根据本申请的描述结合现有技术可以获得的。

具体实施方式

本发明将采用如下具体实施例进行详细描述，应当理解，这些实施例仅仅是用于阐述的目的，而并不以任何方式限制本发明的保护范围。本领域技术人员在本说明书的教导下，可以在不违背本发明的精神和主旨下，对本发明的实施方案作出多种修饰或改变，这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1拉米夫定片的制备

处方：(1000片)

组分                      用量

拉米夫定                  100g

二棕榈酰磷脂酰甘油        310g

脱氧胆酸钠                160g

胆固醇                    100g

预胶化淀粉                260g

甘露醇                    120g

交联聚维酮                60g

聚维酮K30                 25g

滑石粉                    20g

微粉硅胶                  15g

制备工艺：

(a)将310g二棕榈酰磷脂酰甘油、160g脱氧胆酸钠、100g胆固醇溶于4000ml甲醇和乙腈体积比为1∶4的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去混合溶剂，得到磷脂膜；

(b)加入pH值5.8磷酸-磷酸氢二钾缓冲溶液2000ml，用10％磷酸溶液调pH为5.5，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速匀质乳化5次，每次3min，转速5000r/min，0.45μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(c)将100g拉米夫定分散于1000ml水中，再加入空白脂质体混悬液中，保温60℃搅拌90分钟，喷雾干燥，制得脂质体固体；

(d)将上述得到脂质体固体和260g预胶化淀粉、120g甘露醇、60g交联聚维酮混合，过60目筛混合均匀，加入5％聚维酮K30的80％乙醇溶液制备软材，过20目筛制粒，60℃干燥；

(e)将干颗粒和20g滑石粉、15g微粉硅胶混合均匀，过18目筛整粒；

(f)压片，制得拉米夫定脂质体片，为类白色片。

实施例2拉米夫定片的制备

处方：(1000片)

组分         用量

拉米夫定     100g

二棕榈酰磷脂酰甘油        880g

脱氧胆酸钠                460g

胆固醇                    240g

预胶化淀粉                320g

糊精                      150g

交联聚维酮                60g

低取代羟丙纤维素          80g

羧甲基纤维素钠            20g

微粉硅胶v                 70g

制备工艺：

(a)将880g二棕榈酰磷脂酰甘油、460g脱氧胆酸钠、240g胆固醇溶于9000ml甲醇和乙腈体积比为1∶4的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去混合溶剂，得到磷脂膜；

(b)加入pH值5.8的磷酸-磷酸氢二钾缓冲溶液5000ml，用10％氢氧化钾溶液调pH为6.6，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速匀质乳化5次，每次5min，转速2000r/min，0.45μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(c)将100g拉米夫定分散于1000ml水中，再加入空白脂质体混悬液中，保温70℃搅拌60分钟，喷雾干燥，制得脂质体固体；

(d)将上述得到脂质体固体和320g预胶化淀粉、150g糊精、60g交联聚维酮、80g低取代羟丙纤维素混合，过80目筛混合均匀，加入2％羧甲基纤维素钠的50％乙醇溶液制备软材，过20目筛制粒，60℃干燥；

(e)将干颗粒和70g微粉硅胶混合均匀，过18目筛整粒；

(f)压片，制得拉米夫定脂质体片，为类白色片。

(g)包薄膜衣，将所压素片包胃溶薄膜衣，包衣增重2.2％，干燥，制得拉米夫定薄膜衣片。

实施例3拉米夫定分散片的制备

处方：(1000片)

组分                    含量

拉米夫定                100g

二棕榈酰磷脂酰甘油      1300g

脱氧胆酸钠              700g

胆固醇                500g

预胶化淀粉            340g

交联羧甲基纤维素钠    150g

低取代羟丙纤维素      90g

聚维酮K30             100g

微粉硅胶              50g

滑石粉                70g

制备工艺：

(a)将1300g二棕榈酰磷脂酰甘油、700g脱氧胆酸钠、500g胆固醇溶于15000ml异丙醇和丙酮体积比为2∶1的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去混合溶剂，得到磷脂膜；

(b)加入pH值5.6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液8000ml，用10％枸橼酸钠溶液调pH为6.0，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速匀质乳化5次，每次3min，转速3000r/min，0.3μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(c)将100g拉米夫定分散于1000ml水中，再加入空白脂质体混悬液中，保温65℃搅拌80分钟，喷雾干燥，制得脂质体固体；

(d)将上述得到脂质体固体和340g预胶化淀粉、150g交联羧甲基纤维素钠、90g低取代羟丙纤维素混合，过60目筛混合均匀，加入5％聚维酮K30的60％乙醇溶液制备软材，过20目筛制粒，55℃干燥；

(e)将干颗粒和50g微粉硅胶、70g滑石粉混合均匀，过18目筛整粒；

(f)压片，制得拉米夫定脂质体分散片，为类白色片。

实施例4拉米夫定胶囊的制备

处方：(1000粒)

组分                       含量

拉米夫定                   100g

二棕榈酰磷脂酰甘油         220g

脱氧胆酸钠                 130g

胆固醇                     80g

预胶化淀粉                 300g

低取代羟丙纤维素           57g

聚维酮K30                  15g

滑石粉                28g

制备工艺：

(a)将220g二棕榈酰磷脂酰甘油、130g脱氧胆酸钠、80g胆固醇溶于5000ml二氯甲烷和正丁醇体积比为1∶1的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去混合溶剂，得到磷脂膜；

(b)加入pH值6.0的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲溶液2000ml，用5％枸橼酸溶液调pH为5.6，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速匀质乳化5次，每次4min，转速4000r/min，0.3μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(c)将100g拉米夫定分散于1000ml水中，再加入空白脂质体混悬液中，保温60℃搅拌70分钟，喷雾干燥，制得脂质体固体；

(d)将上述得到脂质体固体和300g预胶化淀粉、57g低取代羟丙纤维素混合，过80目筛混合均匀，加入5％聚维酮K30的60％乙醇溶液制备软材，过20目筛制粒，65℃干燥；

(e)将干颗粒和28g滑石粉混合均匀，过18目筛整粒；

(f)填充胶囊，将所得的颗粒分装入胶囊，制得拉米夫定脂质体胶囊。

试验例1脂质体的考察

将实施例1-4中所制备的样品进行质量考察，主要进行脂质体形态观察、粒径测定和脂质体包封率测定。

其中脂质体形态和粒径测定采用光学显微镜法和statistica5.0统计软件运算观察约2000粒求平均值。包封率测定采用柱层析分离结合分光光度法测定，该方法操作步骤为：用柱层析分离将药物溶液中的脂质体分离出来，利用表面活性剂破坏脂质体双分子层，使药物释放出来后再以HPLC法与标准品对照计算出包封率，由公式Q_渗％＝(W_包-W_贮)/W_包×100％计算渗漏率。

各项结果统计如下表1：

表1脂质体的考察

	脂质体形态	平均粒径(nm)	包封率(％)	渗漏率(％)
					实施例1	球形或椭圆形实体	280	87.1	0.61
实施例2	球形或椭圆形实体	330	86.4	0.65
					实施例3	球形或椭圆形实体	360	85.7	0.73
实施例4	球形或椭圆形实体	350	86.6	0.69

以上结果充分说明了本发明实施例1-4制备的脂质体效果很好，形态规则，粒径大小均一，包封率较高，渗漏率很低，证明了本发明的实际可行性。

试验例2稳定性和溶出度考察

将以上实施例1-4制备的样品与上市的拉米夫定片(葛兰素史克制药(苏州)有限公司生产，批号20091204)在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察，结果见表2。

表2加速试验结果

由以上结果发现，上市的拉米夫定片溶出度低，加速6月时含量降低明显，有关物质升高；而本发明实施例制备的样品溶出度高，加速6个月后含量和有关物质均无显著变化。充分说明了本发明在提高稳定性和溶出度方面的优越性。

试验例3临床疗效试验比较

1、研究对象选择

研究对象为慢性乙型肝炎患者，年龄16-65岁，其诊断符合中华医学会传染病与寄生虫病学会修订的慢性病毒性肝炎诊断标准。入选标准：HBeAg阳性/阴性代偿期慢性乙型肝炎患者，血清HBV DNA≥10⁴copies/ml，ALT≥1.3×ULN～＜10×ULN。排除标准为：排除重叠或协同HAV、HCV、HDV、HIV、HEV感染者，排除合并自身免疫性疾病或HCC等，排除既往使用核苷或核苷酸类似物抗病毒药以及入选前12个月接受干扰素和以及免疫调节药物治疗者。

将选择的研究对象240例分成HBeAg阳性和阴性两组，将这两组再随机分为上市拉米夫定组和本发明拉米夫定组，每组各60例。各组性别、年龄、病程经统计学处理差别无显著性。

2、研究方法

本发明拉米夫定组：给药本发明实施例1制备的拉米夫定脂质体片，100mg/天；

上市拉米夫定组：给药拉米夫定片(葛兰素史克制药(苏州)有限公司生产，批号20091204)，100mg/天；于52周时进行意向治疗人群分析(ITT)。

3、观察项目

筛选及基线评估的项目包括病史询问、体格检查、血清HBV标志物、HBVDNA、血清免疫学指标、肝脏生物化学指标、血清学指标。治疗期间的评估项目包括治疗前和治疗开始后第1、3、6、12个月HBV DNA，HBsAg、抗-HBe和HBeAg/抗-HBe血清免疫学指标、肝脏生物化学指标、血液学指标，记录不良事件和合并用药。HBV DNA检测下限为≤500copies/ml。

4、乙型肝炎生化指标、免疫学和病毒载量指标的检测

使用全自动生化分析仪按标准操作规程检测ALT、AST、Alb，使用全自动免疫分析仪HBV Markers检测HBV血清学指标(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)，使用BIO-RAD荧光定量检测仪进行HBV DNA病毒定量检测。

5、疗效评估

主要疗效评估指标为治疗52周时血清HBV DNA自基线下降的水平。

次要疗效指标包括：

治疗应答，定义是达到血清HBV DNA＜10⁵copies/ml并伴有HBeAg转阴或ALT正常；

病毒学应答，定义为52周时血清HBVDNA＜10⁵copies/ml和HBeAg转阴或HBeAg血清转换等。

原发治疗失败，定义为治疗52周后，HBV DNA没有下降到＜10⁵copies/ml。

病毒耐药是指采用基因测序方法在病毒学反弹患者中，证实HBV聚合酶基因有耐药性变异的存在，于48周时评估。

病毒学反跳是指HBV DNA降低到正常水平后，再次升高到5log₁₀copies/ml以上。

全性分析包括发生不良事件的患者的比例、异常的实验室检查指标等。

6、试验结果

(1)两组患者治疗前基本临床特征和实验室化验指标

表3两组患者的临床和实验室特征

由上述结果可以看出，治疗前两组比较，各项参数差异无显著意义。

(2)第52周结果分析

表4第52周临床疗效分析

由上述两组患者52周临床疗效分析可以看出，本发明拉米夫定组和上市拉米夫定组相比，显示了更有效的抗病毒作用，较低的耐药率和病毒反跳率。

(3)临床不良反应

表5临床不良反应或实验室异常发生率【n(％)】

由以上不良反应分析可以看出，本发明拉米夫定组和上市拉米夫定组相比，不良反应明显更少，显出了良好的安全性。

结论：通过上述结果数据可知，治疗慢性乙型肝炎，本发明拉米夫定组和上市拉米夫定组相比，显示了良好的安全性、耐药性和更有效的抗病毒作用，较低的耐药率和病毒反跳率。充分体现了本发明的优越性。

本发明的上述描述旨在用作说明，而不是限制。对本领域技术人来说，可以进行本文所述实施方案中的多种变化或修改。在没有脱离本发明的范围或精神内可以得到这些变化。

Claims (14)

1.一种拉米夫定脂质体固体制剂，其特征在于包括拉米夫定、二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇和适于制备固体制剂的其他可药用赋形剂，所述组分重量份数比例为：

其中所述脂质体固体制剂的制备方法包括如下步骤：

(1)脂质体的制备：将拉米夫定和二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇一起制备成脂质体固体；

(2)固体制剂的制备：将脂质体固体和其他可药用赋形剂混合制备拉米夫定固体制剂。

2.根据权利要求1所述的脂质体固体制剂，其特征在于所述组分重量份数比例为：

3.根据权利要求1或2所述的脂质体固体制剂，其中其他可药用赋形剂选自稀释剂、崩解剂、粘合剂、助流剂、润滑剂及其组合。

4.一种制备权利要求1-3中任一项所述的脂质体固体制剂的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)脂质体的制备：将拉米夫定和二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇一起制备成脂质体固体；

(2)固体制剂的制备：将脂质体固体和其他可药用赋形剂混合制备拉米夫定固体制剂，其中所述可药用其他赋形剂选自稀释剂、崩解剂、粘合剂、助流剂、润滑剂及其它们的组合。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤(1)脂质体的制备具体包括如下步骤：

(a)将二棕榈酰磷脂酰甘油、脱氧胆酸钠、胆固醇溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到磷脂膜；

(b)加入缓冲溶液，用pH调节剂调pH为5.5-6.6，振摇，搅拌，使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(c)将拉米夫定分散于水中，再加入空白脂质体混悬液中，保温60-70℃搅拌60-90分钟，喷雾干燥，制得脂质体固体。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤(2)固体制剂的制备包括如下步骤：

(d)将拉米夫定脂质体固体和稀释剂、崩解剂混合，过筛混合均匀，加入粘合剂溶液制备软材，过筛制粒，干燥；

(e)将干颗粒和助流剂或润滑剂混合均匀，过筛整粒；

(f)压片或填充胶囊，制得拉米夫定脂质体固体制剂。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的一种。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述缓冲溶液为pH值为5.8的权利要求7中所述缓冲液。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于所述缓冲溶液为pH值为5.8的磷酸-磷酸氢二钾缓冲溶液。

10.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述pH调节剂选自氢氧化钾、碳酸氢钠、碳酸钠、枸橼酸钠、盐酸、枸橼酸、磷酸中的一种或多种。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于所述pH调节剂为磷酸和氢氧化钾。

12.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、乙腈、苯甲醇、正己烷中的一种或几种。

13.根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于所述有机溶剂为甲醇和乙腈体积比为1∶4的混合溶剂、异丙醇和丙酮体积比为2∶1的混合溶剂或二氯甲烷和正丁醇体积比为1∶1的混合溶剂。

14.一种权利要求1-3任一项所述的或根据权利要求4-13中任一项的方法制备得到的拉米夫定脂质体固体制剂在治疗慢性乙型肝炎中的应用。