CN101952457A - 流体样品分析的微生物系统和方法 - Google Patents

流体样品分析的微生物系统和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101952457A
CN101952457A CN2008801266043A CN200880126604A CN101952457A CN 101952457 A CN101952457 A CN 101952457A CN 2008801266043 A CN2008801266043 A CN 2008801266043A CN 200880126604 A CN200880126604 A CN 200880126604A CN 101952457 A CN101952457 A CN 101952457A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture apparatus
target microorganism
water
existence
detects
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2008801266043A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101952457B (zh
Inventor
史蒂芬·B·罗斯科
曼基里·克希尔萨加尔
辛西亚·D·祖克
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
3M Innovative Properties Co
Original Assignee
3M Innovative Properties Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 3M Innovative Properties Co filed Critical 3M Innovative Properties Co
Publication of CN101952457A publication Critical patent/CN101952457A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101952457B publication Critical patent/CN101952457B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/10—Enterobacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/06—Plates; Walls; Drawers; Multilayer plates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
    • C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/06—Quantitative determination
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/24—Methods of sampling, or inoculating or spreading a sample; Methods of physically isolating an intact microorganisms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/24—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • G01N2333/245—Escherichia (G)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

本发明提供了用于检测液体样品中目标微生物存在的方法和系统。所述方法包括以下步骤：使所述液体样品通过表面过滤器，让所述表面过滤器与培养装置接触，将所述培养装置温育一段时间，并检测目标微生物的存在。所述方法可与自动检测系统一起使用。

Description

流体样品分析的微生物系统和方法
相关专利申请的交叉引用
本专利申请要求于2007年12月21日提交的美国临时申请No.61/016,265的优先权。
背景技术
大肠菌类或其他指示菌的存在是食品和水质量的重要证据。在许多国家和/或自治区都规定了允许存在于饮用水或某些食品(例如乳品)中的大肠菌数量。大肠菌包括来自于大自然的细菌，例如存在于土壤中的那些。大肠菌也包括粪便大肠菌，例如大肠杆菌。样品中存在粪便大肠菌是食品或水最近受到了粪便污染以及可能存在病原生物体的主要指标。
对水样中的微生物计数的方法可见于(例如)美国公共卫生协会(the American Public Health Association)、美国自来水工程协会(the American Water Works Association)和水环境联合会(the Water Environment Federation)联合出版的第21版纲要“Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater”(SMEWW)(水和废水检验标准方法)。SMEWW介绍了一种用以获得水中微生物的直接计数的膜过滤技术。膜过滤技术可用于监测样品的微生物品质，这些样品来自旨在生产饮用水的工艺，以及来自于各种天然的、未处理的水源。
食品样品中的微生物计数的方法通常有所差别，这取决于食品的性质和可能存在于样品中的生物体的类型。若干检验食品样品的方法概要包括：由美国公共卫生协会(Washington，D.C.)公布的第27版“Standard Methods for the Examination of Dairy Products”(乳品检验标准方法)；以及由美国食品药品管理局(the U.S.Food and Drug Administration，Washington，D.C.)公布的“Bacteriological Analytical Manual”(BAM)(细菌学分析手册)。通常将固体食品悬浮在水性介质中，并混合和/或研磨以得到可用在微生物定量分析方法中的食品材料的液态匀浆。
上述各种方法通常都需要非常熟练的技术人员来观察和解释检验结果。需要简单、准确的方法来测定液体样品中微生物的数量。
发明内容
在一个实施例中，本发明包括检测样品中目标微生物存在的方法。该方法可包括提供疑似含有目标微生物的样品、表面过滤器和含有培养基的培养装置。该方法还可包括在过滤器上收集目标微生物、使表面过滤器与培养基接触、将培养装置温育一段时间以及检测目标微生物的存在。目标微生物可任选用自动化检测系统检测。
在另一个实施例中，本发明包括检测液体样品中目标微生物存在的方法。该方法可包括提供疑似含有目标微生物的液体样品、含有培养基的培养装置以及当与培养装置中的水合培养基接触时基本上透明的过滤器。该方法可进一步包括在过滤器上收集目标微生物、让过滤器与培养基接触、将培养装置温育一段时间以及检测目标微生物的存在。目标微生物可任选用自动化检测系统检测。
在另一个实施例中，本发明包括检测产气微生物的方法。该方法可包括提供疑似含有产气微生物的样品、表面过滤器、包括含有能发酵营养物质的培养基的平膜培养装置。该方法还可包括在表面过滤器上收集来自样品的产气微生物、使表面过滤器与培养基接触、将与培养基接触的表面过滤器温育一段时间以及检测产气微生物的存在。目标微生物可任选用自动化检测系统检测。
在另一个实施例中，本发明包括检测产气微生物的方法。该方法包括提供疑似含有产气微生物的样品、包括含有能发酵营养物质的培养基的培养装置，以及当与培养装置中的水合培养基接触时基本上透明的过滤器以及自动检测系统。该方法可进一步包括在过滤器上收集来自样品的产气微生物、让过滤器与培养基接触、将与培养基接触的表面过滤器温育一段时间以及检测产气微生物的存在。目标微生物可任选用自动化检测系统检测。
术语“培养装置”指用于在允许至少一个细胞发生分裂的条件下繁殖微生物的装置。培养装置包括使造成意外污染的可能性降至最低的壳体(如带盖的培养皿)以及支持微生物生长的营养物质源。
术语“过滤器”是指由上下主表面构成的相对平坦的膜式过滤器。膜式过滤器由上下主表面以及由孔、流路或通道构成，流体和颗粒可通过这些孔、流路或通道从过滤器的上表面流向下表面。如本文所用，“上主表面”是指流体样品(如具有悬浮颗粒的液体或气体)透过它进入过滤器的过滤器主表面。术语“下主表面”是指滤液透过它离开过滤器的过滤器主表面。
如本文所用，“表面过滤器”或“表面型过滤器”是指这样的一类过滤器，其中在过滤器表面的各个通道开口的横截面积与过滤器内任何其他点的所述通道的横截面积通常具有大致相同的尺寸。表面过滤器使大于各个通道的开口的粒子无法进入或通过过滤器，因此这些粒子通常保留在过滤器的表面上。
术语“优选的”和“优选地”是指本发明的实施例在某些情况下可提供一定的益处。然而，在相同的或其他情况下，其他实施例也可以是优选的。此外，详述一个或多个优选的实施例并非表明其他实施例不可用，也并非旨在将其他实施例排除在本发明的范围之外。
术语“包含”和其变型形式在说明书和权利要求书中出现时不具有限制性意义。
本文所用的“一种”、“一个”、“所述”“至少一种”、“一种或多种”可交替使用。因此，例如，疑似包含“一种”目标微生物的液体样品可被理解为是指该液体样品可包含“一种或多种”目标微生物。
术语“和/或”意指所列要素的一个或全部，或所列要素的任何两个或更多个的组合。
另外，在本文中，由端点界定的数值范围包括该范围内所含的所有数值(如，1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。
本发明的上述发明内容并非意图描述本发明的每个公开的实施例或每种实施方式。下面的说明书更为具体地举例说明了示例性实施例。在本专利申请中的许多地方，通过实例的列表给出具体指示，其实例可采用各种组合方式来应用。在每个例子中，所引用的列表只是用作代表性的组，并不应该被解释为是排他性的列表。
附图说明
将参照下面列出的附图来进一步说明本发明，其中在全部视图中类似的结构由类似的数字标注。
图1为根据本发明的一个实施例的打开的平膜培养装置的透视图，其中平膜培养装置具有垫片，垫片带有孔，而滤膜插入孔中。
图2为根据本发明的一个实施例的打开的平膜培养装置的透视图，其中平膜培养装置具有插入其中的滤膜。
图3为根据本发明的一个实施例的培养皿的透视图，其中培养皿包含半固体培养基，而滤膜设置在培养基上。
图4为根据本发明的一个实施例的培养皿的透视图，其中培养皿包含多孔载体，而滤膜设置在载体上。
具体实施方式
本发明涉及用于对液体样品中的微生物进行检测和/或计数的方法。本发明还涉及使用膜式过滤器(结合培养装置)对液体样品中的微生物进行检测和/或计数。诸如3M PETRIFILM平板(3M公司，St.Paul，MN)之类的培养装置为可用于微生物繁殖和检测的样品即用型(sample-ready)装置。另外，PETRIFILM平板包含方便某些目标微生物检测和计数的指示剂。
图1示出了可根据本发明使用的平膜培养装置10。培养装置10包括具有自承基底12的主体构件11，自承基底12具有上表面14和下表面16。基底12在其上表面14上涂覆有粘合剂组合物18的层。可冷水复水的干培养基20(含有至少一种选自一种或多种胶凝剂和一种或多种营养物质的成分)以薄的、相对均匀的层粘附至粘合剂组合物18上。垫片23部分地覆盖基底12和干培养基20的表面，并具有暴露干培养基20的一部分的孔24。覆盖片22覆盖垫片23和孔24。如果提起覆盖片22使干培养基20暴露，则可将液体样品已通过其的膜式过滤器26放在孔24中暴露的干培养基20上。膜式过滤器26可以任一取向(即，膜式过滤器26的上主表面朝向干培养基20或膜式过滤器26的上主表面朝向覆盖片22)置于干培养基20上。将膜式过滤器26置于干培养基20上后，可向孔24中加入合适体积的水性溶剂(如无菌水)，然后可放低覆盖片22至膜式过滤器26和/或垫片23上。覆盖片22还可包括粘合剂层和干培养基层，如美国专利No.5,089,413的图2中所示。一旦与可含溶质的水性溶剂(未示出)水合后，可冷水复水的干培养基20层就迅速形成复水的培养基(未示出)，其继而能够使存在于膜式过滤器26表面上的微生物生长。在可供选择的实施例中，在将膜式过滤器26插入培养装置前，干培养基20可用水性溶剂水合，从而形成复水的培养基。
图2示出了可根据本发明使用的平膜培养装置110。培养装置110包括具有自承基底112的主体构件111，自承基底112具有上表面114和下表面116。基底112在其上表面114上涂覆有粘合剂组合物118的层。可冷水复水的干粉121(含有至少一种选自一种或多种胶凝剂和一种或多种营养物质的成分)以薄的、相对均匀的层粘附至粘合剂组合物118上。覆盖片122覆盖干粉121。如果提起覆盖片122，则可将液体样品已通过其的膜式过滤器126置于干粉121上。膜式过滤器126可以任一取向(即，膜式过滤器126的上主表面朝向干粉121或膜式过滤器126的上主表面朝向覆盖片122)置于干粉121上。将膜式过滤器126置于干粉121上后，可向膜式过滤器126上添加合适体积的水性溶剂(如无菌水)，然后可放低覆盖片122至膜式过滤器126上。一旦与水性溶剂(未示出)水合后，可冷水复水的干粉121层就迅速形成复水的培养基(未示出)，其继而能够使存在于膜式过滤器126表面上的微生物生长。在可供选择的实施例中，在将膜式过滤器126插入培养装置之前，干粉121可用水性溶剂水合，从而形成复水的培养基。
图3示出了可根据本发明使用的可供选择的培养装置210。培养装置210由包含半固体培养基230的容器260构成。有许多本领域已知的合适容器260。合适的容器260包括培养皿、烧瓶、瓶、管、烧杯等等。容器优选为无菌的或可进行灭菌，以防止污染样品或培养基230。容器260可用封盖、顶盖等覆盖，以防止污染样品或培养基230和/或防止样品或培养基230变干。可将液体样品已通过其的膜式过滤器226置于培养基230上。膜式过滤器226可以任一取向(即，膜式过滤器226的上主表面朝向培养基230或膜式过滤器226的下主表面朝向培养基230)置于培养基230上。图3示出了在合适的条件下温育后可在膜式过滤器226上观察到的微生物集落250。
图4示出了可根据本发明使用的培养装置310。培养装置310由容器360和过滤器载体340构成。有许多本领域已知的合适容器360。合适的容器360包括培养皿、烧瓶、瓶、管、烧杯等等。容器优选为无菌的或可进行灭菌，以防止污染样品或多孔载体340。容器360优选可用封盖、顶盖等覆盖(未示出)，以防止污染样品或多孔载体340和/或防止样品或多孔载体340变干。多孔载体340可由能够支承膜式过滤器326的材料制成，使得当多孔载体340用水性溶剂饱和时，多孔载体340在膜式过滤器326下表面的至少一部分与水性溶剂之间提供接触。在一些实施例中，多孔载体340在膜式过滤器326的整个下表面与水性溶剂之间提供接触。水性溶剂可包含含有营养物质的溶液以支持目标微生物的生长和/或可包含含有试剂的溶液以检测目标微生物。作为另外一种选择，多孔载体可包括含有营养物质的粉末以支持目标微生物的生长和/或包括含有试剂的粉末以检测目标微生物的存在。本领域的普通技术人员熟悉培养和/或检测目标微生物的合适营养物质和试剂。适用于多孔载体340的材料的非限制性例子包括纤维素材料，例如滤纸；泡沫，例如聚氨酯泡沫；水凝胶；烧结玻璃；等等。在液体样品已通过膜式过滤器326后，可将膜式过滤器326以任一取向置于多孔载体340上。优选地，以膜式过滤器326的上主表面朝向多孔载体将膜式过滤器326置于多孔载体340上。
样品和目标微生物
本发明方法中所用的样品可以是液体样品或悬浮在液态介质中的固体样品。优选地，可以物理(如匀化)和/或化学(如通过与表面活性剂混合)方法处理固体样品，使目标微生物悬浮在液态介质中。液体样品可包含悬浮的固体，前提条件是悬浮固体的浓度或粒度不会有碍样品滤过表面型膜式过滤器。在过滤前可在合适的溶剂(如无菌水或缓冲溶液)中稀释液态或悬浮固体样品。
含水样品可适用于本发明的方法，前提条件是含水样品不会降解膜式过滤器或不会在过滤器上留下会干扰目标微生物检测(如抑制微生物生长)的残余物。也可使用无水样品，前提条件是无水样品不会防止膜式过滤器在与培养装置接触时变成透明的，不会降解膜式过滤器，或不会在过滤器上留下会干扰目标微生物检测的残余物(如，残余物不会干扰微生物的生长或干扰可用于检测微生物的酶活性)。可适用于本发明方法的液体样品的非限制性例子包括但不限于：地表水、人或动物用水、生物药物制剂用水、悬浮在水性溶剂中的食品或乳品、饮料、果汁、工业用水、冷却水、循环水、锅炉水、锅炉补给水、地下水、娱乐用水、经处理的水和废水。
本发明的方法适用于检测或鉴定多种目标微生物。该方法适用于可在培养装置中生长和/或繁殖的目标微生物。目标微生物可以为细菌、酵母、霉菌或病毒。该方法可用于检测好氧菌或厌氧菌。示例性目标微生物包括来自肠杆菌属(Enterobacter)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)、耶尔森氏菌属(Yersinia)、埃希氏杆菌属(Escherichia)、哈夫尼菌属(Hafnia)、沙门氏菌属(Salmonella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、李斯特菌属(Listeria)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠球菌属(Enterococcus)和硫螺旋菌属(Thiospirillum)的物种；来自肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的物种；大肠菌类；粪便大肠菌；粪便链球菌属(Streptococcus)物种；大肠杆菌(Escherichia coli)；蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)；河生肠杆菌(Enterobacter amnigenus)；环孢子虫(Cylospora)或隐孢子虫属(Cryptosporidium)物种；轮状病毒；和甲型肝炎病毒。
膜式过滤器和过滤单元
通过将液态或固体样品转到过滤器表面上或让液体样品滤过膜式过滤器，可在膜式过滤器上收集目标微生物。在膜式过滤器上收集样品后，可将过滤器转移至培养装置。膜式过滤器可为不会抑制目标微生物的生长或代谢活性的表面型微孔膜式过滤器。膜式过滤器可由例如陶瓷氧化铝、径迹刻蚀聚碳酸酯或径迹刻蚀聚酯制成。合适的膜式过滤器也包括当与水合培养基(例如培养装置中的水合培养基)接触时基本上透明的过滤器。如本文所用，“基本上透明的”膜式过滤器是指不会使培养装置中的微生物生长标记(如集落、pH指示剂、气泡、酶反应的产物或中间体)明显失真或有碍对其进行观察或成像的膜式过滤器。合适的膜式过滤器的非限制性例子包括：Whatman Inc.(Florham Park，NJ)以商品名ANOPORE销售的陶瓷膜式过滤器，其厚度为约60μm，孔隙度为约25-50％，折射指数为约1.6；以及Whatman Inc.以商品名NUCLEOPORE销售的径迹刻蚀聚碳酸酯过滤器，其厚度为约10-20μm，孔隙度为约15％，折射指数为约1.6。
通常对膜式过滤器的孔径进行选择，使得目标微生物不会通过孔，从而确保样品中基本上所有的目标微生物都被收集到过滤器上。典型的细菌长度为约0.5到5.0μm。某些较小的细菌(例如支原体)直径大约为0.3μm。酵母细胞一般比细菌大。典型的酵母细胞直径为约3-4μm，但某些直径大至约40μm。霉菌可以单个细胞、孢子或菌丝存在。虽然通常比细菌大，但霉菌细胞的平均大小会因物种而变化。病毒通常比细菌小。例如，轮状病毒直径为约0.07μm，甲型肝炎病毒直径为约0.027μm，杯状病毒(如诺如病毒)直径为约0.027-0.040μm，细小核糖核酸病毒(如脊髓灰质炎病毒)直径为约0.03μm，肠腺病毒直径为约0.07μm。因此，可根据目标微生物选择具有合适孔径的膜式过滤器。例如，孔径为1.0μm或更小、0.8μm或更小、0.6μm或更小、0.4μm或更小、0.2μm或更小、0.1μm或更小、0.05μm或更小、0.03μm或更小、0.02μm或更小或0.01μm或更小的膜式过滤器可适用于捕集和检测目标细菌。对于捕集和检测目标酵母或霉菌而言，孔径为12μm或更小、8μm或更小、5μm或更小、3μm或更小、2μm或更小、1μm或更小、0.8μm或更小、0.6μm或更小、0.4μm或更小、0.2μm或更小或0.1μm或更小的膜式过滤器可能是合适的。对于捕集和检测目标病毒而言，孔径为0.05μm或更小、0.03μm或更小、0.02μm或更小或0.01μm或更小的膜式过滤器可能是合适的。
膜式过滤器可由合适的过滤介质手工制备，或可按照预切的尺寸和形状购买。膜式过滤器的尺寸和形状可根据样品体积和样品中颗粒材料的预期负荷进行选择。通常，较大表面积的膜式过滤器比较小表面积的膜式过滤器允许更高的过滤速率。直径为13mm、25mm或47mm的圆形膜式过滤器可从许多商业渠道容易地获得，并尤其适于与相应的过滤装置一起使用。膜式过滤器可与其他过滤介质(如预过滤器，以捕集样品中的较大碎片)或其他膜式过滤器联合使用。例如，可以孔径依次减小的顺序叠放膜式过滤器，以便将较大的微生物(如酵母和霉菌)与较小的微生物(如细菌或病毒)分开，从而使得能单独地分析膜式过滤器以检测不同的微生物。
膜式过滤器可结合过滤单元使用。在液体样品通过膜式过滤器时，过滤单元可用于保持膜式过滤器。液体样品通过膜式过滤器后，可从过滤单元移除膜式过滤器，并转移到培养装置。优选的过滤单元包括被构造为易于移除膜式过滤器并将膜式过滤器布置到培养装置中的那些。
可将过滤装置设计用于连接到注射器上或与注射器一起使用，例如由Millipore Corporation以商品名SWINNEX销售的过滤器固定器。或者，对于较大的体积，可将过滤装置设计用于连接到烧瓶上。优选地，在样品通过过滤器前，可对膜式过滤器和过滤装置进行灭菌。
其中可结合本文所公开的膜式过滤器和方法的示例性系统包括以下专利中所述的那些：提交于2007年5月31日、名称为“Devices and Processes for Collecting and Concentrating Samples for Microbiological Analysis”(收集和浓缩用于微生物分析的样品的装置和方法)的美国专利申请No.60/941,145；提交于2007年11月20日、名称为“System and Method for Preparing and Analyzing Samples”(制备和分析样品的系统和方法)的美国专利申请No.60/989,180；提交于2007年11月20日、名称为“System and Method for Preparing and Delivering Samples”(制备和输送样品的系统和方法)美国专利申请No.60/989,175；提交于2007年11月20日、名称为“System and Method for Preparing and Collecting Samples”(制备和收集样品的系统和方法)的美国专利申请No.60/989,170；以及提交于2007年11月20日、名称为“System and Method for Environmental Sampling”(用于环境取样的系统和方法)的美国专利申请No.60/989,180。
培养装置
多种培养装置均可用于本发明的方法。在一些实施例中，培养装置可检测细菌的存在。在可供选择的实施例中，培养装置可检测酵母和/或霉菌的存在。在某些实施例中，培养装置可检测病毒的存在。
在一些用于检测细菌、酵母或霉菌的实施例中，培养装置可包括预成形的水凝胶基质(如琼脂、琼脂糖、果胶钙)，水凝胶基质包含营养物质以支持目标微生物的生长以及任选的至少一种指示剂以方便目标微生物的检测。在一些实施例中，水凝胶还包含至少一种选择试剂(例如盐、表面活性剂或抗生素)以提供一种环境，该环境相对于可能存在于样品中的非目标微生物而言更有利于目标微生物的生长或检测。可将预成形的水凝胶基质置于任何合适的容器中，例如培养皿、烧杯或烧瓶。优选地，在膜式过滤器与水凝胶接触前，可对水凝胶和容器灭菌。
在其他实施例中，培养装置可包括包含营养物质以支持目标微生物生长和任选的至少一种指示剂以方便目标微生物检测的干燥、可再水合培养装置。此类装置的非限制性例子在美国专利No.4,476,226、5,089,413、5,232,838、6,331,429和6,638,755中有所描述。干燥的可再水合培养装置可包括胶凝剂。合适的胶凝剂包括可溶于冷水的天然和合成胶凝剂。此类胶凝剂的非限制性例子包括瓜耳胶、黄原胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、聚丙烯酰胺、刺槐豆胶、褐藻胶以及它们中的两种或更多种的组合。此类装置也包括支持微生物生长或代谢的营养物质。支持多种微生物生长的营养物质的非限制性例子包括蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖等等。培养和/或鉴定某些生物体或生物体群落所需的具体营养物质或营养物质组合在本领域中是已知的。在一些实施例中，干燥的可再水合培养装置还包括至少一种选择试剂(例如盐、表面活性剂或抗生素)以提供一种环境，该环境相对于可能存在于样品中的非目标微生物而言更有利于目标微生物的生长或检测。
在其他实施例中，培养装置可包括多孔载体，多孔载体与包含支持目标微生物生长的营养物质和任选的至少一种方便目标微生物检测的指示剂的水性混合物流体连通。在一些实施例中，水性混合物还包含至少一种选择试剂(例如盐、表面活性剂或抗生素)以提供一种环境，该环境相对于可能存在于样品中的非目标微生物而言更有利于目标微生物的生长或检测。
优选的是，多孔载体不含可通过水性溶剂运输并抑制目标微生物检测的材料。多孔载体可以为多种物理形式之一，例如织物、无纺布、凝胶、泡沫、网片、稀松布、釉料、微复制膜等等。某些多孔载体由亲水材料构造，例如滤纸或玻璃纤维过滤器。作为另外一种选择，载体可由经处理以赋予材料亲水性的疏水材料或能够通过(例如)毛细管作用运输水性溶剂或溶液的疏水材料构造。
可将多孔载体置于任何合适的容器中，例如培养皿、烧杯或烧瓶。优选地，在布置膜式过滤器与多孔载体接触前，对多孔载体和容器进行灭菌。
在某些实施例中，培养装置包括具有容纳在其中的宿主细胞系的壳体。当病毒粒子感染培养的细胞系(组织培养)时，通过观察它们引起的细胞病变效应(CPE)可在培养装置中对某些病毒进行检测。组织培养技术及其相应的培养装置在本领域中是已知的。在这些实施例中，可将液体样品已通过其的膜式过滤器转移到含细胞系的培养装置中。作为另外一种选择，可将病毒从过滤器洗涤到小体积的无菌水、缓冲液或组织培养基中，然后可将所得的悬液加到培养装置中。在温育一段合适的时间后，可观察组织培养物的CPE指示，例如噬菌斑形成。或在视觉上或借助显微镜和/或成像系统观察斑块。使用染料可改善对斑块的视觉检测，例如结晶紫或免疫试剂(如荧光标记抗体)。
样品制备系统
表面过滤器、过滤单元和培养装置可用包装材料组合在一起，并作为样品制备系统(试剂盒)销售，以用于检测样品中的微生物。例如，样品制备系统可具有包装在一起的两个或更多个组件(如表面过滤器和培养装置)或三个或更多个组件(如表面过滤器、过滤单元和培养装置)。在某些实施例中，可构造过滤单元构造以方便移除表面过滤器。
样品制备系统还可以包括取样和检验附件，例如悬浮样品的介质(如水、缓冲液、生长培养基)、试剂(如染料、指示剂、酶、酶底物、裂解剂、方便洗脱的试剂)、移液管、标签、镊子、样品容器和/或手套。在某些实施例中，可对样品制备系统的各个组件灭菌。在某些实施例中，样品制备系统的组件可在单独包裹的原始包装中。
自动检测系统
用于对培养装置中的微生物集落计数的自动系统在本领域中是已知的。此类自动系统通常包括：成像系统、确定集落计数的图像分析算法以及显示和任选储存和操作集落计数数据和图像的数据管理系统。用于对琼脂平板上的菌落计数的示例性系统由Synbiosis (Cambridge，UK)以商品名PROTOCOL销售并在美国专利No.6,002,789中有所描述。用于对PETRIFILM平板上的菌落计数的系统在美国专利No.5,403,722、7,298,885和7,298,886中有所描述。
通常，用于对微生物集落计数的自动系统通过集落或其产生的代谢物吸收、反射、发射或散射光线的能力来检测目标微生物的存在。因此，可通过例如比色、荧光或发光(如化学发光或生物发光)等方法检测集落。
在某些检测中，例如大肠菌检测，希望确定微生物是否通过乳糖产气(即二氧化碳)。3M PETRIFILM大肠菌计数板和大肠杆菌计数板将乳糖掺入营养物质生长培养基中。在这些检测中，可通过生长培养基中pH指示剂的颜色变化而试验性地鉴定大肠菌菌落。pH值变化表明菌落已通过乳糖产生了酸性终产物，并可推测菌落为大肠菌菌落。通过观察靠近菌落的一个或多个气泡的存在，可确定推测的大肠菌菌落为大肠菌微生物。可通过目测方法或自动系统(如美国专利No.7,298,886中所述的自动集落计数系统)观察气泡。在水合和封闭时包括半固体生长培养基(与生长培养基一侧上的自承基底连续接触)和覆盖片(位于生长培养基的另一侧上)(参见图1和图2)的平膜培养装置(如PETRIFILM大肠杆菌/大肠菌群计数板)特别适合于捕集由乳糖发酵型大肠菌微生物产生的气泡。
验证性鉴定检测
本发明的某些培养装置提供了用于确切鉴定存在于培养装置中的微生物的手段，例如选择试剂和/或差异性试剂。其他培养装置可提供对存在于培养装置中的微生物的临时鉴定。当进行这种临时鉴定时，有时希望通过进行额外的检测以对微生物的种类进行确认。本发明的方法提供了验证性检测。
在已对培养装置进行温育并已观察(经目测方法或通过自动检测系统)了生物体的存在后，可从培养装置上移除目标微生物以用于进一步的分析，或就某些遗传或免疫检测而言，可在培养装置中(即原位)进行该分析。进一步分析可包括化学分析(如色谱法、谱学法、光谱测定法)、遗传分析(如杂交、核酸扩增)和免疫分析(如ELISA、免疫色谱法、凝集反应、放射免疫测定法)。
可通过(例如)从整个膜式过滤器和培养基中移除或提取微生物或其组分利用培养装置中的整个样品进行分析。作为另外一种选择，可分离和/或提取培养装置的较小区域或单独的菌落进行分析。在一些实施例中，硝化纤维或尼龙膜可用于“提起”微生物或其组分，随后进行遗传、生物化学或免疫测试。具体的分析方法可见于“Molecular Cloning，A Laboratory Manual”(分子克隆实验指南)第3版(Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY)，将其以引用方式全文并入本文。
实例
实例1
Petrifilm大肠杆菌/大肠菌群计数板中大肠菌的视觉检测。
Petrifilm大肠杆菌/大肠菌群计数板得自3M公司(St.Paul，MN)。混合纤维素酯(MCE)膜式过滤器(47mm的直径，0.45μm的标称孔径)得自Millipore Corporation(Billerica，MA)。氧化铝基质陶瓷膜式过滤器(47mm的直径，0.2μm的标称孔径)得自Whatman(Florham Park，NJ)。河生肠杆菌ATCC 51818得自American Type Culture Collection(Manassas，VA)。
让细菌培养物在35℃下于胰酪胨大豆肉汤中过夜生长。将过夜培养物在1.5升未处理的(如未氯化、氟化或软化的水)井水中稀释，至最终浓度为约0.5至1.0菌落形成单位/毫升(CFU/mL)。将100毫升体积的该稀释培养物滤过无菌过滤设备(Microfil V；Millipore Corporation，Billerica，MA)中的膜式过滤器。在无菌操作下用无菌镊子从过滤设备上移除膜，然后置于Petrifilm EC平板中的干燥圆形培养基上。根据制造商的说明书，将取1毫升无菌Butterfield氏磷酸盐稀释液分散到膜上，封闭Petrifilm平板，稀释剂均匀分布在平板上。小心操作该步骤，以避免接种期间将气泡引入平板中。在35℃下将平板温育24±2小时。根据制造商手动对平板进行计数。结果如表1所示。
表1.视觉检测Petrifilm平板中膜式过滤器上的河生肠杆菌。
Figure BPA00001197136600161
实例2
Petrifilm大肠杆菌/大肠菌群计数板中大肠菌的自动检测。
如实例1中所述，培养河生肠杆菌的过夜培养物、稀释并过滤。如实例1中所述，将过滤器置于Petrifilm EC平板中并进行温育。将温育过的平板放入Petrifilm酶标仪(3M公司，St.Paul，MN)中，根据制造商说明书由酶标仪测定大肠菌菌落的数目。结果如表2所示。
表2.自动检测检测Petrifilm平板中膜式过滤器上的河生肠杆菌。
酶标仪在MCE滤膜上仅检测到一个菌落。该菌落伴随有气泡，因此被计为大肠菌。该平板的视觉检测表明至少有数十个小的、扩散的、红色菌落未被酶标仪检测到。相比之下，酶标仪在陶瓷滤膜上检测到51个菌落。在那些菌落中，酶标仪检测到四个伴随有气泡。
本发明现已结合本发明人可预见的可给出实施性描述的几个具体实施例，对本发明进行了描述。但本发明的非实质性的修改形式(包括目前没有预见的修改形式)可构成本发明的等价形式。因而，本发明的范围不应受限于本文所述的细节和结构，而是仅受下面的权利要求书以及其等价形式限制。
实例3
使用Petrifilm大肠杆菌/大肠菌群计数板自动检测和鉴定混合的细 菌悬液。
如实例1所述制备细菌培养物。在该实例中所用的细菌为蜂房哈夫尼菌ATCC 51815(大肠菌的一种菌种)和大肠杆菌ATCC 11229，二者均得自美国典型菌种保藏中心(American Type Culture Collection)。如实例1所述稀释培养物，并混合以得到每100毫升水每种生物体大约50-100CFU的悬液。如实例1所述，过滤100mL该悬液，然后放入Petrifilm大肠杆菌/大肠菌群计数板。在35℃下将平板温育24小时。让温育后的平板通过Petrifilm酶标仪，针对各板中菌落的存在及类型对图像进行分析。数据在表3中示出。在实验中使用陶瓷膜式过滤器通过未改进的扫描酶标仪和软件系统检测大肠菌和大肠杆菌菌落。在MCE膜式过滤器上生长的某些蓝色菌落未被自动酶标仪识别和计数。
表3.生长在Petrifilm大肠杆菌/大肠菌群计数板中的混合培养物 的酶标仪菌落计数.在该测试中，典型的蜂房哈夫尼菌菌落应表现为带 气泡的红色菌落，典型的大肠杆菌菌落应表现为带气泡的蓝色菌落。 最后一列示出了在平板和平板图像上清晰可见但未被自动酶标仪的图 像分析软件识别和计数的菌落数目。
本发明现已结合本发明人可预见的可给出实施性描述的几个具体实施例，对本发明进行了描述。但本发明的非实质性的修改形式(包括目前没有预见的修改形式)可构成本发明的等价形式。因而，本发明的范围不应受限于本文所述的细节和结构，而是仅受下面的权利要求书以及其等价形式限制。

Claims (42)

1.一种检测样品中目标微生物存在的方法，所述方法包括以下步骤：
提供疑似含有目标微生物的样品、表面过滤器和含有培养基的培养装置；
在所述表面过滤器上收集所述目标微生物；
使所述表面过滤器与所述培养基接触；
将所述培养装置温育一段时间；以及
检测所述目标微生物的存在。
2.根据权利要求1所述的方法，其中检测目标微生物的存在包括用自动检测系统检测所述目标微生物的存在。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养装置选自琼脂培养装置、干燥的可再水合培养装置或含有营养物质的多孔基底。
4.根据权利要求1所述的方法，其中在使所述表面过滤器与所述培养装置接触前，将所述培养装置用水性溶剂进行水合。
5.根据权利要求1所述的方法，还包括对所述液体样品中的目标微生物计数的步骤。
6.根据权利要求1所述的方法，其中将所述培养装置温育一段时间包括在提供至少一个细胞发生分裂的条件下温育。
7.根据权利要求1所述的方法，其中检测目标微生物的存在包括经目测检测所述目标微生物。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述液体样品选自地表水、人和动物用水、生物药物制剂用水、饮料、悬浮在水性溶剂中的食品或乳品、果汁、工业用水、冷却水、循环水、锅炉水、锅炉补给水、地下水、娱乐用水、处理过的水和废水。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述目标微生物为细菌、病毒、酵母或霉菌。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述目标微生物选自肠球菌属(Enterococcus)物种、硫螺旋菌属(Thiospirillum)物种、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)物种、大肠菌类、粪链球菌(fecal Streptococcus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)、河生肠杆菌(Enterobacter amnigenus)、隐孢子虫属(Cryptosporidium)物种、环孢子虫属(Cyclospora)、轮状病毒、甲型肝炎病毒。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述表面过滤器包含陶瓷氧化铝、聚碳酸酯或聚酯。
12.根据权利要求1所述的方法，还包括使用验证性测试鉴定所述目标微生物的步骤。
13.一种检测液体样品中目标微生物存在的方法，所述方法包括以下步骤：
提供疑似含有目标微生物的液体样品、含有培养基的培养装置，以及当与所述培养装置中的水合培养基接触时基本上透明的过滤器；
在所述过滤器上收集所述目标微生物；
使所述过滤器与所述培养基接触；
将所述培养装置温育一段时间；以及
检测目标微生物的存在。
14.根据权利要求13所述的方法，其中检测目标微生物的存在包括用自动检测系统检测所述目标微生物的存在。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述培养装置选自琼脂培养装置、干燥的可再水合培养装置或含有营养物质的多孔基底。
16.根据权利要求14所述的方法，其中在使所述表面过滤器与所述培养装置接触前，将所述培养装置用水性溶剂进行水合。
17.根据权利要求14所述的方法，还包括对所述液体样品中的目标微生物计数的步骤。
18.根据权利要求14所述的方法，其中将所述培养装置温育一段时间包括在提供至少一个细胞发生分裂的条件下温育。
19.根据权利要求14所述的方法，其中检测目标微生物的存在包括经目测检测所述目标微生物。
20.根据权利要求14所述的方法，其中所述液体样品选自地表水、人和动物用水、生物药物制剂用水、饮料、悬浮在水性溶剂中的食品或乳品、果汁、工业用水、冷却水、循环水、锅炉水、锅炉补给水、地下水、娱乐用水、处理过的水和废水。
21.根据权利要求14所述的方法，其中所述目标微生物为细菌、病毒、酵母或霉菌。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述目标微生物选自肠球菌属(Enterococcus)物种、硫螺旋菌属(Thiospirillum)物种、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)物种、大肠菌类、粪链球菌(fecal Streptococcus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)、河生肠杆菌(Enterobacter amnigenus)、隐孢子虫属(Cryptosporidium)物种、环孢子虫属(Cyclospora)、轮状病毒、甲型肝炎病毒。
23.根据权利要求14所述的方法，其中所述表面过滤器包含陶瓷氧化铝、聚碳酸酯或聚酯。
24.根据权利要求14所述的方法，还包括使用验证性测试鉴定所述目标微生物的步骤。
25.一种用于检测产气微生物的方法，包括以下步骤：
提供疑似含有产气微生物的样品、表面过滤器和包括含有能发酵营养物质的培养基的平膜培养装置；
在所述表面过滤器上从所述样品收集产气微生物；
使所述表面过滤器与所述培养基接触；
将与所述培养基接触的所述表面过滤器温育一段时间；以及
检测产气微生物的存在。
26.根据权利要求25所述的方法，还包括提供自动检测系统的步骤，其中检测所述产气微生物的存在包括用所述自动检测系统检测所述产气微生物。
27.根据权利要求25或权利要求26所述的方法，其中检测所述产气微生物的存在包括检测菌落。
28.根据权利要求27所述的方法，其中经目测检测所述菌落。
29.根据权利要求28所述的方法，其中检测所述产气微生物的存在还包括检测靠近所述菌落的气泡。
30.根据权利要求29所述的方法，其中经目测检测所述气泡。
31.一种用于检测产气微生物的方法，包括以下步骤：
提供疑似含有产气微生物的样品、包括含有能发酵营养物质的培养基的培养装置，以及当与所述培养装置中的水合培养基接触时基本上透明的过滤器；
在所述过滤器上从所述样品中收集产气微生物；
使所述过滤器与所述培养基接触；
将与所述培养基接触的所述过滤器温育一段时间；以及
检测产气微生物的存在。
32.根据权利要求31所述的方法，还包括提供自动检测系统的步骤，并且其中检测所述产气微生物的存在包括用所述自动检测系统检测所述产气微生物。
33.根据权利要求32所述的方法，其中检测所述产气微生物的存在包括检测菌落。
34.根据权利要求33所述的方法，其中经目测检测所述菌落。
35.根据权利要求34所述的方法，其中检测所述产气微生物的存在还包括检测靠近所述菌落的气泡。
36.根据权利要求35所述的方法，其中经目测检测所述气泡。
37.一种样品制备系统，包括过滤单元和当用水性溶剂水合时基本上透明的过滤器，其中所述过滤单元被构造用于移除所述表面过滤器。
38.根据权利要求37所述的样品制备系统，还包括培养装置。
39.根据权利要求38所述的样品制备系统，其中所述培养装置为平膜培养装置。
40.一种样品检测系统，包括：
当与培养装置中的水合培养基接触时基本上透明的过滤器，和
培养装置。
41.根据权利要求40所述的样品检测系统，还包括样品制备系统。
42.根据权利要求41所述的样品检测系统，还包括自动检测系统。
CN2008801266043A 2007-12-21 2008-12-18 流体样品分析的微生物系统和方法 Expired - Fee Related CN101952457B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1626507P 2007-12-21 2007-12-21
US61/016,265 2007-12-21
PCT/US2008/087399 WO2009082667A1 (en) 2007-12-21 2008-12-18 Microbiological systems and methods of fluid sample analysis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101952457A true CN101952457A (zh) 2011-01-19
CN101952457B CN101952457B (zh) 2013-08-21

Family

ID=40801553

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008801266043A Expired - Fee Related CN101952457B (zh) 2007-12-21 2008-12-18 流体样品分析的微生物系统和方法

Country Status (6)

Country Link
US (2) US9096883B2 (zh)
EP (1) EP2235203B1 (zh)
JP (1) JP5420566B2 (zh)
CN (1) CN101952457B (zh)
BR (1) BRPI0819517B1 (zh)
WO (1) WO2009082667A1 (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104313113A (zh) * 2014-11-13 2015-01-28 云南皇氏来思尔乳业有限公司 一种副干酪乳杆菌直投式菌种中霉菌和酵母的定量检测方法
CN104328162A (zh) * 2014-11-13 2015-02-04 云南皇氏来思尔乳业有限公司 一种副干酪乳杆菌直投式菌种中霉菌和酵母的定性检测方法
CN105899653A (zh) * 2014-01-09 2016-08-24 生物梅里埃公司 在脱水反应培养基干法浸渗的多孔支持物中检测、鉴别和计数微生物的方法
CN108368533A (zh) * 2015-12-07 2018-08-03 3M创新有限公司 统计大肠型菌落的方法
CN108603158A (zh) * 2016-02-08 2018-09-28 贝克顿·迪金森公司 制备型平板培养基产品
CN108949631A (zh) * 2018-07-30 2018-12-07 骆奇 一种核孔膜在肠道内容物分离中的应用
CN109790512A (zh) * 2016-09-28 2019-05-21 捷恩智株式会社 测量微生物计数的方法

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0818959B8 (pt) 2007-11-20 2018-10-30 3M Innovative Properties Co método para detecção de espécies de listeria em uma superfície ambiental
CN102325596B (zh) 2008-12-31 2015-04-29 3M创新有限公司 使用微粒进行的活生物负载检测
US9328325B2 (en) 2008-12-31 2016-05-03 3M Innovative Properties Company Sampling devices and methods for concentrating microorganisms
JP5972174B2 (ja) 2009-12-30 2016-08-17 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 微小粒子を用いた生きた生物負荷の検出法
US20130130270A1 (en) * 2010-06-07 2013-05-23 Raj Rajagopal Filtration methods and devices
CN103261435B (zh) 2010-06-30 2016-08-31 3M创新有限公司 微生物检测系统和方法
US8906645B2 (en) 2010-12-29 2014-12-09 3M Innovative Properties Company Microbial detection article having a water-absorbent filter assembly
HUE036509T2 (hu) 2011-11-07 2018-07-30 Rapid Micro Biosystems Inc Kazetta sterilitási vizsgálathoz
US20150017683A1 (en) 2011-12-19 2015-01-15 Battelle Memorial Institute Stacked Membrane Bioreactor
US9725770B2 (en) 2012-03-06 2017-08-08 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for identification of source of microbial contamination in a sample
MX2014012439A (es) * 2012-04-16 2015-01-16 Rapid Micro Biosystems Inc Dispositivo para cultivar celulas.
US9932620B2 (en) * 2012-05-21 2018-04-03 Celsis Ltd. Methods, devices, and systems of detecting microorganisms
FR2993573B1 (fr) * 2012-07-20 2016-02-26 Biomerieux Sa Procede d'isolement de microorganismes sur un milieu de culture et dispositif associe
BR112015001570A2 (pt) * 2012-07-25 2017-07-04 3M Innovative Properties Co método para fabricar um meio de nutriente, composição, kit e dispositivo de cultura de filme fino
TWI619809B (zh) 2012-08-24 2018-04-01 佐竹股份有限公司 微生物之檢查方法及其裝置
JP6221210B2 (ja) * 2012-09-11 2017-11-01 株式会社サタケ 微生物の検査方法及びその装置
JP6201285B2 (ja) * 2012-08-24 2017-09-27 株式会社サタケ 微生物の検査方法及びその装置
EP2936387A1 (en) * 2012-12-20 2015-10-28 3M Innovative Properties Company Method of detecting gas-producing microbial colonies
BR112015030248A2 (pt) * 2013-06-10 2017-07-25 Astellas Pharma Inc composto de amida heterocíclica aromática contendo nitrogênio bicíclico
US20160017400A1 (en) * 2014-07-15 2016-01-21 Geoffrey N. Roth Method for improved detection of microorganisms and the like
CN106661528A (zh) * 2014-08-14 2017-05-10 默克专利股份公司 用于借助膜过滤进行液体的微生物研究的陪替氏培养皿和方法
JP6920212B2 (ja) * 2015-04-29 2021-08-18 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 嫌気性微生物用培養デバイス
EP3521413A4 (en) * 2016-09-29 2020-06-17 Kaohsiung Medical University DEVICE FOR INSULATING CELLS FROM TISSUE
WO2018125805A1 (en) 2016-12-28 2018-07-05 3M Innovative Properties Company Microbial detection devices including adhesive masked nutrients and methods of using the same
GB201703383D0 (en) 2017-03-02 2017-04-19 Gargle Tech Ltd Testing for particulates
CN108676704A (zh) * 2018-07-30 2018-10-19 骆奇 一种肠道内容物分离回收装置、方法及其产品
US11680877B2 (en) 2018-09-05 2023-06-20 Hero Scientific Ltd. Testing for particulates
WO2021170606A1 (en) * 2020-02-26 2021-09-02 Merck Patent Gmbh Device and method for testing differential growth of microorganisms
WO2022043815A1 (en) * 2020-08-25 2022-03-03 Politecnico Di Milano Device for biological cultures
CN112760215B (zh) * 2020-12-25 2022-12-20 山东省医疗器械产品质量检验中心 透气包装材料干性微生物屏障测试仪及测试方法
WO2022149135A2 (en) 2021-01-06 2022-07-14 Hero Scientific Ltd. Filtration sampling devices
WO2024013652A1 (en) 2022-07-11 2024-01-18 Associação Almascience - Investigação E Desenvolvimento Em Celulose Para Aplicações Inteligentes E Sustentáveis Cellulose-based microbiological culture device

Family Cites Families (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1005381B (it) 1974-02-15 1976-08-20 Sclavo Inst Sieroterapeut Attrezzatura per l esecuzione del controllo di qualita nei laboratori di batteriologia clinica e industriale e procedimento per la preparazione di essa
US4279995A (en) 1979-12-03 1981-07-21 Mcdonnell Douglas Corporation Selective salmonella carbohydrate and medium constructed therefrom
JPH0249705B2 (zh) 1981-01-27 1990-10-31 Minnesota Mining & Mfg
US4575783A (en) 1983-09-16 1986-03-11 Manville Service Corporation Reflector for illuminating signs
US4868110A (en) 1986-10-06 1989-09-19 Biocontrol Systems, Inc. Methods and device for detection of microorganisms
US5385826A (en) 1989-04-21 1995-01-31 Gundersen Medical Foundation, Ltd. Diagnostic assay for lyme disease
US5194374A (en) 1989-04-27 1993-03-16 Eurec Isolating medium for identifying the salmonella bacterium
US5089413A (en) 1989-05-19 1992-02-18 Minnesota Mining And Manufacturing Company Method and apparatus for culturing with microbiological dry culture medium
US5118750A (en) 1990-04-20 1992-06-02 Minnesota Mining And Manufacturing Company Pressure-sensitive adhesive comprising solid tacky microspheres and macromonomer-containing binder copolymer
US5096668A (en) 1990-04-26 1992-03-17 Difco Laboratories Diagnostic test slide
JPH053796A (ja) 1990-10-23 1993-01-14 Lonza Ag 低分子揮発性物質交替生成物を生産する微生物を確認するための装置およびスクリーニング方法
JP3099959B2 (ja) 1990-10-30 2000-10-16 ミネソタ マイニング アンド マニュファクチャリング カンパニー 親水性ポリマー外殻を有する製品及びその製造方法
FR2671100B1 (fr) 1990-12-28 1993-03-05 Bio Merieux Procede d'analyse bacteriologique, et milieu de detection des bacteries genre salmonella.
US5232838A (en) 1991-12-09 1993-08-03 Minnesota Mining And Manufacturing Company Culture media device and method of use
WO1994001528A1 (en) 1992-07-13 1994-01-20 Minnesota Mining And Manufacturing Company A technique to count objects in a scanned image
US5364766A (en) 1993-05-14 1994-11-15 Minnesota Mining And Manufacturing Company Culture medium for rapid count of coliform bacteria
US5443963A (en) 1994-01-31 1995-08-22 Minnesota Mining And Manufacturing Company Method for detecting staphylococci
US5629170A (en) 1994-03-25 1997-05-13 General Electric Company Method for detecting dehalogenation of halogenated aromatic compounds
US5462860A (en) 1994-06-06 1995-10-31 Minnesota Mining And Manufacturing Company Conditioned culture medium for rapid growth and detection of microbes
US5601998A (en) 1994-08-18 1997-02-11 Minnesota Mining & Mfg Culture medium and device for detection and enumeration of enterobacteriaceae
FI98379C (fi) 1995-03-24 1997-06-10 Orion Yhtymae Oy Elatusaine ja menetelmä salmonellojen tunnistamiseksi
US5681712A (en) * 1995-06-02 1997-10-28 Minnesota Mining And Manufacturing Company Surface colony counting device and method of use
JPH08336381A (ja) 1995-06-12 1996-12-24 Dainippon Printing Co Ltd 培養装置
TW369562B (en) 1996-07-17 1999-09-11 Chisso Corp Devices for detecting microorganisms and culture media for use in said devices
US6022682A (en) 1996-08-14 2000-02-08 Minnesota Mining And Manufacturing Company Article and method for detection of enterotoxigenic staphylococci
WO1998011252A1 (en) 1996-09-16 1998-03-19 R & F Laboratories, Inc. Method for isolation and identification of escherichia coli 0157:h7 and plating media for said process
US5879951A (en) 1997-01-29 1999-03-09 Smithkline Diagnostics, Inc. Opposable-element assay device employing unidirectional flow
AU7781398A (en) 1997-06-04 1998-12-21 Freeman Group Of Hospitals Nhs Trust Identification of salmonella
US6002789A (en) 1997-06-24 1999-12-14 Pilot Industries, Inc. Bacteria colony counter and classifier
US6984499B2 (en) 1997-10-02 2006-01-10 Idexx Laboratories, Inc. Method and apparatus for concurrently detecting pathogenic organisms and antimicrobial susceptibility
US5976827A (en) 1997-12-12 1999-11-02 Akzo Nobel, N.V. Sensor device for detecting microorganisms and method therefor
US6596532B1 (en) 1997-12-12 2003-07-22 BIOMéRIEUX, INC. Device for isolation and surface culture of microorganisms from bulk fluids
US6174699B1 (en) 1999-03-09 2001-01-16 3M Innovative Properties Company Disc assay device with inoculation pad and methods of use
US6251624B1 (en) * 1999-03-12 2001-06-26 Akzo Nobel N.V. Apparatus and method for detecting, quantifying and characterizing microorganisms
JP4143219B2 (ja) 1999-05-19 2008-09-03 日水製薬株式会社 簡易培地及びその製造方法
CA2379565A1 (en) * 1999-07-21 2001-02-01 Kenneth C. Hou Microorganism filter and method for removing microorganism from water
US6391626B1 (en) * 1999-08-23 2002-05-21 3M Innovative Properties Company Culture medium and device using ballasted pH indicators for detection and enumeration of microorganisms
AU2001255829A1 (en) 2000-04-04 2001-10-15 Home Health Science Inc. Method and kit for detecting microorganisms
JP2001321196A (ja) 2000-05-15 2001-11-20 Chisso Corp サルモネラ菌検出用培地積層物およびシート状培地
US6756225B2 (en) * 2000-12-08 2004-06-29 3M Innovative Properties Company Automated imaging and harvesting of colonies on thin film culture devices
FR2819266B1 (fr) 2001-01-05 2004-01-16 Alain Rambach Milieu de culture pour la detection et/ou la discrimination des bacteries du genre listeria et procede de mise en oeuvre
US7150977B2 (en) 2001-06-20 2006-12-19 R&F Products, Inc. Plating media for the identification of Salmonella
US7703179B2 (en) 2001-11-09 2010-04-27 3M Innovative Properties Company Microreplicated surface
WO2003049840A1 (en) * 2001-12-06 2003-06-19 Purdue Research Foundation Mesoporous membrane collector and separator for airborne pathogen detection
JP4147063B2 (ja) 2002-07-26 2008-09-10 日水製薬株式会社 サルモネラ簡易検出法
US7298885B2 (en) 2002-11-27 2007-11-20 3M Innovative Properties Company Biological growth plate scanner with automated image processing profile selection
US20040101954A1 (en) 2002-11-27 2004-05-27 Graessle Josef A. Back side plate illumination for biological growth plate scanner
US20040102903A1 (en) 2002-11-27 2004-05-27 Graessle Josef A. Biological growth plate scanner
US7296208B2 (en) 2003-07-03 2007-11-13 The Directv Group, Inc. Method and system for generating parallel decodable low density parity check (LDPC) codes
US7496225B2 (en) 2003-09-04 2009-02-24 3M Innovative Properties Company Biological growth plate scanner with automated intake
US7298886B2 (en) 2003-09-05 2007-11-20 3M Innovative Properties Company Counting biological agents on biological growth plates
FR2873714B1 (fr) 2004-07-27 2006-11-17 Rambach Alain Milieu d'enrichissement selectif des salmonelles comprenant du tetrathionate et un sel de magnesium
DE602005010515D1 (de) * 2004-08-06 2008-12-04 Fuji Electric Holdings Nachweisverfahren für lebenfähige Zellen
JP2006230219A (ja) 2005-02-22 2006-09-07 Nitto Denko Corp 微生物の計数検査方法及び該方法に用いる微生物検査用粘着シート
US20090042736A1 (en) * 2005-04-18 2009-02-12 Johan Gerrit Bomer Biochip and process for the production of a biochip
US20060257967A1 (en) 2005-05-13 2006-11-16 Lawrence Restaino Chromogenic plating media for the identification of Enterobacter sakazakii
JP5226513B2 (ja) 2005-08-26 2013-07-03 メルク セローノ ソシエテ アノニム ピラジン誘導体及びその使用
US20070259393A1 (en) 2006-05-02 2007-11-08 Lawrence Restaino Plating media for the presumptive identification of Listeria sp, Listeria monocytogenes and Listeria ivanovii
US20100190204A1 (en) 2007-03-22 2010-07-29 Nanologix, Inc. Detection and Identification of Microorganisms on Transparent Permeable Membranes
CA2688038A1 (en) 2007-05-31 2008-12-11 3M Innovative Properties Company Devices and processes for collecting and concentrating samples for microbiological analysis
JP2011502544A (ja) 2007-11-20 2011-01-27 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 試料の調製容器及び方法
JP2011502545A (ja) 2007-11-20 2011-01-27 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 試料調製容器及び方法
BRPI0818959B8 (pt) 2007-11-20 2018-10-30 3M Innovative Properties Co método para detecção de espécies de listeria em uma superfície ambiental
EP2217378B1 (en) 2007-11-20 2013-02-13 3M Innovative Properties Company Sample preparation container and method
US8563264B2 (en) 2007-11-20 2013-10-22 3M Innovative Properties Company Sample preparation for environmental sampling
MX2011013562A (es) 2009-06-15 2012-01-20 3M Innovative Properties Co Deteccion de bacterias que producen acido.
WO2011082305A1 (en) 2009-12-30 2011-07-07 3M Innovative Properties Company Microbial detection article

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105899653A (zh) * 2014-01-09 2016-08-24 生物梅里埃公司 在脱水反应培养基干法浸渗的多孔支持物中检测、鉴别和计数微生物的方法
CN105899653B (zh) * 2014-01-09 2019-08-13 生物梅里埃公司 在脱水反应培养基干法浸渗的多孔支持物中检测、鉴别和计数微生物的方法
CN104313113A (zh) * 2014-11-13 2015-01-28 云南皇氏来思尔乳业有限公司 一种副干酪乳杆菌直投式菌种中霉菌和酵母的定量检测方法
CN104328162A (zh) * 2014-11-13 2015-02-04 云南皇氏来思尔乳业有限公司 一种副干酪乳杆菌直投式菌种中霉菌和酵母的定性检测方法
CN108368533A (zh) * 2015-12-07 2018-08-03 3M创新有限公司 统计大肠型菌落的方法
CN108603158A (zh) * 2016-02-08 2018-09-28 贝克顿·迪金森公司 制备型平板培养基产品
CN109790512A (zh) * 2016-09-28 2019-05-21 捷恩智株式会社 测量微生物计数的方法
CN108949631A (zh) * 2018-07-30 2018-12-07 骆奇 一种核孔膜在肠道内容物分离中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2009082667A1 (en) 2009-07-02
BRPI0819517A2 (pt) 2015-05-26
US20110143334A1 (en) 2011-06-16
EP2235203B1 (en) 2014-10-08
US9353397B2 (en) 2016-05-31
CN101952457B (zh) 2013-08-21
EP2235203A1 (en) 2010-10-06
JP2011507524A (ja) 2011-03-10
US20150329894A1 (en) 2015-11-19
EP2235203A4 (en) 2011-02-23
US9096883B2 (en) 2015-08-04
BRPI0819517B1 (pt) 2018-03-20
JP5420566B2 (ja) 2014-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101952457B (zh) 流体样品分析的微生物系统和方法
JP5237305B2 (ja) 透過性を有するメンブレン上の微生物の検知及び識別
CN104379760B (zh) 用于流式细胞术的样品制备
WO1993019199A1 (en) Method and apparatus for the analysis of biological material
EP0944733B1 (en) Rapid microbiological assay
JP3808773B2 (ja) 微生物の計数および同定方法
EP1883694B1 (en) Rapid bacterial quantification
US20100136608A1 (en) Multiple Filter Array Assay
US7588886B2 (en) Process for the enumeration and identification of microorganisms
EP0126019A2 (en) High resolution method of measuring ATP, and concentrating and measuring unicellular organisms
WO2001083810A2 (en) Analytical method and apparatus for monitoring a microbial material in a fluid sample
US20210115367A1 (en) Use of Resorufin for Monitoring Metabolic Activity of Cells under Anaerobic Condition
Fung Rapid methods and automation in food microbiology: 25 years of development and predictions
US20220193666A1 (en) Screening of fluorescent microbes using microfabricated device
JP4740486B2 (ja) 新規の細菌分析方法
Lee 2 Quantitation of
Nurudeen Microbiological examination of table water in Nigeria
Raugel et al. Millipore
Souter et al. Lower Red River and Lake Winnipeg South Basin Pathogen-Parasite Survey Report, Fall 2006

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20130821

Termination date: 20191218

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee